在不同pH、溫度及鹽濃度環(huán) 境條件下的生長測定
[0037]用lmol/L的鹽酸和lmol/L的氫氧化鈉將MRS培養(yǎng)基的起始pH值分別調(diào)至3.0、3.5、 4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0,37°C恒溫靜置培養(yǎng)植物乳桿LP1 24h，培養(yǎng)過程中不調(diào)酸，用分 光光度計測定600nm處光吸收值(0D600)，結(jié)果如表2所示。結(jié)果顯示，植物乳桿菌LP1能夠在 起始pH3.5-pH8.0的條件下生長。
[0038]將活化的植物乳桿菌LP1接種于MRS液體培養(yǎng)基，分別在溫度為10°C、15°C、20°C、 30°C、40°C和45°C的條件下培養(yǎng)24h，用分光光度計測定600nm處光吸收值(0D600)，結(jié)果如 表2所示。結(jié)果顯示，植物乳桿菌LP1在溫度為10°C的環(huán)境下呈現(xiàn)微弱生長，在15°C_40°C條 件下生長狀況良好。
[0039] 將活化的植物乳桿菌LP1分別接種于含3wt%和6.5wt%NaCl的MRS液體培養(yǎng)基中 培養(yǎng)24h，用分光光度計測定600nm處光吸收值(0D600)，結(jié)果如表2所示。結(jié)果顯示，植物乳 桿菌LP1能夠在含3wt %和6.5wt % NaCl的條件下生長。
[0040]表2:植物乳桿菌LP1在不同環(huán)境條件下的生長情況
[0041]
[0042]
[0043] 注:ATCC 14917'為植物乳桿菌模式菌株，"+"為陽性；為陰性；V'為弱陽性。
[0044] 實施例3:植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)LP1與纖維素酶作為生物添加 劑制備暖季型牧草青貯飼料
[0045] 1.原料準(zhǔn)備：
[0046] (1)牧草的準(zhǔn)備：以象草（Pennisetum purpureum Schum.)和多花黑麥草（Lolium multiflorum Lam.)為例，在拔節(jié)期至抽穗期，將牧草XU割，保證原料清潔、無土、奠等雜質(zhì)， 切短至2_3cm。
[0047] (2)生物添加劑的準(zhǔn)備:將植物乳桿菌LP1和纖維素酶加水(不含消毒液)活化20分 鐘。
[0048] 2.暖季型牧草青貯飼料的調(diào)制
[0049]將活化好的植物乳桿菌LP1與纖維素酶噴灑在處理好的牧草上，植物乳桿菌LP1的 添加量不低于l〇9CFU/kg鮮草，纖維素酶不低于100U/kg鮮草，混合均勻后立即裝填；
[0050]在牧草裝填時，要分層裝填，逐步壓實，壓實過程當(dāng)中應(yīng)特別留意青貯窖(桶）的邊 角及四周，確保充分壓實，壓實后的牧草的密度為500kg/m3;由于暖季型牧草大多莖中空， 所以填裝壓實前將其莖干壓扁青貯效果更佳；
[0051 ]裝滿壓實后，應(yīng)立即在窖上覆蓋塑料膜(桶應(yīng)擰緊桶蓋，用膠帶封口），用重物或泥 土踩實封嚴(yán)，發(fā)酵60d，獲得暖季型牧草青貯飼料。
[0052]為盡量縮短青貯飼料的呼吸過程，確保青貯成功，從牧草刈割到青貯完畢，務(wù)求當(dāng) 日完成。
[0053] 3.暖季型牧草青貯飼料的品質(zhì)檢測
[0054] 青貯飼料發(fā)酵60天發(fā)酵成熟后，取出部分青貯飼料進(jìn)行發(fā)酵品質(zhì)的測定，每個處 理重復(fù)三次，具體測定結(jié)果如表1和表2所示：
[0055] 表1:添加生物添加劑后對象草青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響（％干物質(zhì)）
[00561
[0057] 表2:添加生物添加劑后對多花黑麥草青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響（％干物質(zhì)）
[0058]
[0059] 從表1和表2可知，與對照組相比，接種生物添加劑后暖季型牧草青貯的pH明顯降 低，達(dá)到4.0以下；乳酸含量得到明顯提高，同時氨態(tài)氮含量下降，丁酸含量低于檢測限，明 顯提高了暖季型牧草青貯的發(fā)酵品質(zhì)。
【主權(quán)項】
1. 一種植物乳桿菌，其特征在于，所述的植物乳桿菌菌株為LP1，分類命名為 Lactobacillus pi antarum，在中國普通微生物菌種保藏管理中心的保藏號為CGMCC No.10473。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物乳桿菌，其特征在于，所述植物乳桿菌的16S rDNA基 因序列如SEQ ID No.l所示。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種植物乳桿菌，其特征在于，所述的植物乳桿菌的生物學(xué)特 性為:菌株在固體培養(yǎng)基上30°C培養(yǎng)48h，生長良好，可形成邊緣整齊的乳白色菌落;菌株革 蘭氏染色呈陽性，顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)為短桿狀、無芽孢;氧化酶陰性，具有較強(qiáng)的生長及 產(chǎn)酸性能;在起始pH值為3.5-8.0的培養(yǎng)基上能生長，在10°C條件下呈現(xiàn)微弱生長，在15°C_ 40°C條件下生長狀況良好，在不大于6.5 %NaCl的條件下生長狀況良好。4. 權(quán)利要求1-3任一項所述的植物乳桿菌在制備暖季型牧草青貯飼料中的應(yīng)用。5. -種生物添加劑，其特征在于，所述的生物添加劑包括植物乳桿菌LP1和纖維素酶。6. 權(quán)利要求5所述生物添加劑在制備暖季型牧草青貯飼料中的應(yīng)用。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述暖季型牧草青貯飼料的制備方法為： 將植物乳桿菌LP1與纖維素酶加水活化15-30min后，噴灑在刈割并切短的暖季型牧草上混 合均勻，然后將暖季型牧草壓實密封進(jìn)行發(fā)酵，獲得暖季型牧草青貯飼料。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物乳桿菌LP1的添加量不低于 109CFU/kg暖季型牧草，纖維素酶的添加量不低于100U/kg暖季型牧草;所述暖季型牧草壓 實后的密度為500kg/m 3以上。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度為15-25°C， 發(fā)酵時間為30-60d。10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，獲得的暖季型牧草青貯飼料，其pH小于4， 乳酸含量提高，氨態(tài)氮含量下降，丁酸含量低于檢測限。
【專利摘要】本發(fā)明公開了屬于牧草飼料加工貯藏技術(shù)領(lǐng)域的一種植物乳桿菌及其在暖季型牧草青貯中的應(yīng)用。所述植物乳桿菌的菌株為LP1，分類命名為Lactobacillus？plantarum，在中國普通微生物菌種保藏管理中心的保藏號為CGMCC？No.10473。所述的植物乳桿菌從天然牧草青貯飼料中分離得到，是一株新的植物乳桿菌。所述的植物乳桿菌與纖維素酶制成的生物添加劑能明顯提高暖季型牧草青貯的發(fā)酵品質(zhì)；該生物添加劑不僅效率高，而且對家畜健康無不良影響，對環(huán)境無污染，添加過程易于掌握，可廣泛應(yīng)用于暖季型牧草青貯飼料的制備領(lǐng)域。CGMCC No. 1047320150130
【IPC分類】C12N1/20, A23K10/18, C12R1/25, A23K20/189
【公開號】CN105567594
【申請?zhí)枴緾N201610012145
【發(fā)明人】玉柱, 張慶, 張英俊, 楊富裕
【申請人】中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2016年1月8日