本發(fā)明涉及食用菌栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種羊肚菌菌種快速繁育方法。

背景技術(shù)：

羊肚菌（Morchella）屬子囊菌門（Ascomycota）、盤菌綱（Pezizimycetes）、盤菌目（Pezizales）、羊肚菌科（Morchellaceae）。因其表面呈蜂窩狀，外形常為圓頂或尖頂，與羊肚頗為相似，故名為羊肚菌。

羊肚菌肉質(zhì)脆嫩，含有豐富的氨基酸、多糖、脂肪酸，其營養(yǎng)價(jià)值較高，是世界公認(rèn)的珍貴食用真菌。在歐洲各地，羊肚菌以其鮮美的味道被認(rèn)為是僅次于塊菌的美味食用菌，北美人同樣認(rèn)為它是食用菌中的佳品。羊肚菌在我國最早被收載于《本草綱目》，中醫(yī)以其子實(shí)體入藥，因性平味甘，故具有健脾、化痰理氣、益腸消食等功效。

近年來，由于國內(nèi)、國外市場對(duì)羊肚菌的需求日益增加，加之分布區(qū)域特定、出菇期短、天然產(chǎn)量有限以及過度采摘，呈現(xiàn)產(chǎn)量逐年下降趨勢(shì)。市場價(jià)格也因此居高不下。目前我國已實(shí)現(xiàn)部分羊肚菌菌株人工栽培，每畝產(chǎn)量一般在100～200公斤，但是由于菌種的獲取方法極不規(guī)范，菌種生產(chǎn)周期較長，加之對(duì)羊肚菌生活史周期尚未完全明了， 導(dǎo)致菌種產(chǎn)量不穩(wěn)定，甚至有絕收的現(xiàn)象出現(xiàn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種羊肚菌菌種快速繁育方法，該方法能夠顯著縮短羊肚菌菌種的繁育周期，并且能有效提高羊肚菌菌種繁育的產(chǎn)量。

本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種羊肚菌菌種快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）種菇選擇：選取菇柄長1～2厘米、菇帽長3～4厘米、紋路清晰、褶皺緊密的羊肚菌種菇連根拔除，清除雜質(zhì)后攤晾至含水量為60～70%，以提高組織分離可操作性，降低細(xì)菌感染的幾率；

（2）無糖培養(yǎng)基制備：將土豆去皮后切成0.9～1.1cm³的顆粒，稱取200份，加水煮沸18～20分鐘，趁熱過濾后取濾液，向?yàn)V液中補(bǔ)充熱水后加入瓊脂粉，攪拌溶解后趁熱轉(zhuǎn)入三角瓶中滅菌，趁熱取出三角瓶放入超凈工作臺(tái)或者接種箱內(nèi)，消毒后將無糖培養(yǎng)基均勻分裝到平板皿中，冷卻備用；

（3）菌種分離：將步驟（1）中的種菇、無糖培養(yǎng)基和分離器具滅菌后，切開種菇菌蓋，鏟取小塊菌肉，接入平板皿中的無糖培養(yǎng)基內(nèi)，16～18℃培養(yǎng)4～6天后即可看到組織塊周圍長出白色稀疏纖細(xì)的菌絲，7～8天后待菌絲長到直徑1.5～2cm的菌落時(shí)即可提純；

（4）接種：從步驟（3）所得無糖培養(yǎng)基中挑取4～5mm見方大的培養(yǎng)基2塊，放入試管內(nèi)的提純培養(yǎng)基的兩個(gè)三分點(diǎn)上，每個(gè)三角瓶可接20～30支，16～18℃下培養(yǎng)1天后即可看到菌種塊周圍長出白色稀疏的菌絲，9～10天菌絲即可長滿試管；

（5）羊肚菌原種制作：將試管中長滿菌絲的提純培養(yǎng)基切成0.9～1.1cm的片段，每片段接入1瓶滅菌后的原種培養(yǎng)基內(nèi)，一支試管能夠接6～8瓶原種，溫度16～18℃、濕度60%條件下培養(yǎng)，第2天菌絲即可吃料，5～7天菌絲即可封面；

（6）搖瓶：菌絲封面后，在培養(yǎng)室內(nèi)，緊握菌種瓶，上下?lián)u動(dòng)8～10次，使長有菌絲的麥粒均勻分布在菌種瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)3～5天，菌種瓶中可見大量黃色菌核產(chǎn)生，即可下地播種，每畝用種量380～410瓶。

其中，步驟（4）中所述提純培養(yǎng)基的制備方法如下：

取20份黃豆打磨成豆?jié){后加入葡萄糖20份、瓊脂粉20份、KH₂P0₄ 1.5份、MgSO₄1.5份、酵母膏1份充分溶解，調(diào)節(jié)PH值為7，采用20mm×200mm的玻璃試管，每個(gè)玻璃試管裝入試管高度1/5的溶液，用試管塞封口，滅菌后擺放傾斜，冷卻后即得提純培養(yǎng)基。

步驟（5）中所述原種培養(yǎng)基的制備方法如下：

1）選用當(dāng)年無蟲優(yōu)質(zhì)麥粒60份，提前48小時(shí)加水浸泡，同時(shí)加入石灰1份，浸泡至無白心時(shí)撈出瀝干水分備用；

2）取木屑30份提前備好用水淋透，自然堆放至棕黃色備用；

3）將上述步驟中制備好的麥粒、木屑以及草炭土8份、石膏1份混合均勻后裝入750ml菌種瓶，裝瓶時(shí)裝至瓶身2/3處即可，種瓶上下松緊一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口。

在原種培養(yǎng)基中，麥粒富含淀粉和灰分營養(yǎng)更易于菌絲吸收，木屑增加培養(yǎng)基透氣性，易于菌絲生長，草炭土含大量腐殖酸和微量元素增加菌絲活力，能夠有效促進(jìn)菌核形成，利于羊肚菌菌絲的快速生長。

羊肚菌屬于子囊菌，其生長過程較為復(fù)雜，且生長過程中，子囊、菌絲體、子實(shí)體形態(tài)大小會(huì)發(fā)生較大變化，其次，不同種的羊肚菌菌種具有不同的培養(yǎng)條件，其生長速度、生長習(xí)性、菌核發(fā)育、菌絲和菌核的顏色等都有明顯的差異。目前羊肚菌菌種的獲取方法各式各樣，如組織分離、孢子分離、菌土分離等導(dǎo)致品種退化非常嚴(yán)重。以上原因?qū)е履壳把蚨蔷N生產(chǎn)的周期長、產(chǎn)量不穩(wěn)定，甚至絕收，難以滿足市場供應(yīng)。

本發(fā)明的菌種生產(chǎn)由傳統(tǒng)的先生產(chǎn)原種再生產(chǎn)栽培種用于播種，改進(jìn)為直接生產(chǎn)原種播種，去掉了原種擴(kuò)繁為栽培種的環(huán)節(jié)，菌種繁育時(shí)間縮短了24～25天，進(jìn)一步地，改進(jìn)接種方式，接種方式由1個(gè)點(diǎn)位接種改進(jìn)為2個(gè)點(diǎn)位接種，將菌種在試管內(nèi)的提純培養(yǎng)基生長的時(shí)間由10天縮短到6天，再通過改變?cè)N培養(yǎng)方式，將傳統(tǒng)的靜置培養(yǎng)改為搖瓶培養(yǎng)，使得原種培養(yǎng)時(shí)間縮短5天以上。因此，本發(fā)明的羊肚菌菌種繁育方法有效將傳統(tǒng)的70天縮短到33～36天，大大提升了菌種制種效率，適合在羊肚菌栽培中推廣。

本發(fā)明直接采用原種播種，由于減少了種子繁殖代數(shù)，避免菌種由于擴(kuò)繁導(dǎo)致的退化和衰弱，保證了種子活性，其適應(yīng)性和抗逆性更強(qiáng)，利于羊肚菌播種后的快速生長發(fā)育，提高產(chǎn)量。

與傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)基相比，本發(fā)明采用了不含葡萄糖的無糖培養(yǎng)基，由于羊肚菌菌絲由組織塊的再生萌發(fā)長成，能夠快速附著在培養(yǎng)基表面，而雜菌菌絲必須由芽孢萌發(fā)長成，芽孢在無糖培養(yǎng)基表面由于養(yǎng)分不夠很難萌發(fā)，減少了雜菌滋生的機(jī)會(huì)，因而無糖培養(yǎng)基能夠避免菌種被雜菌污染，使羊肚菌更易存活生長，提高菌種分離的成活率，提高羊肚菌菌種的產(chǎn)量，為做羊肚菌品種的分類鑒定及品種選育奠定了基礎(chǔ)。

本發(fā)明通過將菌種分離容器由試管改進(jìn)為三角瓶，將菌種繁殖數(shù)量由8～10支增加到25～30支，大大提高了原種的產(chǎn)量，利于大范圍播種。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

（1）本發(fā)明的菌種生產(chǎn)由傳統(tǒng)的先生產(chǎn)原種再生產(chǎn)栽培種用于播種，改進(jìn)為直接生產(chǎn)原種播種，去掉了原種擴(kuò)繁為栽培種的環(huán)節(jié)，大大縮短了菌種制種時(shí)間，同時(shí)由于減少了種子繁殖代數(shù)，保證種子活性，其適應(yīng)性和抗逆性更強(qiáng)；

（2）通過改進(jìn)接種方式、改變?cè)N培養(yǎng)方式有效將菌種培養(yǎng)時(shí)間縮短9天以上，同時(shí)本發(fā)明直接采用原種播種，因而整個(gè)菌種繁育方法由傳統(tǒng)的70天縮短到33～36天；

（3）通過將菌種分離容器由試管改進(jìn)為三角瓶，提純培養(yǎng)時(shí)菌種繁殖數(shù)量由8～10支增加到25～30支，大大提高了繁育出的菌種的產(chǎn)量。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，本發(fā)明的示意性實(shí)施方式及其說明僅用于解釋本發(fā)明，并不作為對(duì)本發(fā)明的限定。

實(shí)施例1

一種羊肚菌菌種快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）種菇選擇：采集當(dāng)?shù)厝斯しN植或野生的羊肚菌，選取菇柄長1～2厘米、菇帽長3～4厘米、紋路清晰、褶皺緊密、菇型勻稱、無蟲無病蟲害的羊肚菌，采菇時(shí)將種菇整連根拔除，去掉多余泥土和雜質(zhì)，用紙質(zhì)采樣袋密封，攤晾至含水量60%備用；

（2）無糖培養(yǎng)基制備：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成0.9cm³的顆粒，稱取200g，加水1000ml放入鍋內(nèi)煮沸20分鐘，趁熱過濾后取濾液，向?yàn)V液中補(bǔ)充熱水至1000ml后加入瓊脂粉，攪拌溶解后趁熱轉(zhuǎn)入三角瓶中滅菌，滅菌方法為，將三角瓶直立放在醫(yī)用高壓鍋內(nèi)密封，通電加熱，打開排氣閥，待鍋內(nèi)水沸騰持續(xù)5分鐘排氣閥均勻排氣時(shí)，表示鍋內(nèi)冷空氣已排盡，關(guān)閉排氣閥待溫度上升至120℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，維持40分鐘后斷電，滅菌完成后，趁熱取出三角瓶放入超凈工作臺(tái)或者接種箱內(nèi)，消毒后將無糖培養(yǎng)基均勻分裝到平板皿中，冷卻備用；

（3）菌種分離：將種菇、無糖培養(yǎng)基和分離器具置于超凈工作臺(tái)中，超凈臺(tái)工作20分鐘達(dá)到無菌要求后用刀片將種菇菌蓋切開，利用接種鏟取小塊菌肉，接入平板皿中的無糖培養(yǎng)基內(nèi)，16℃培養(yǎng)4天后即可看到組織塊周圍長出白色稀疏纖細(xì)的菌絲，8天后待菌絲長到直徑1.5cm的菌落時(shí)即可提純；

（4）接種：從無糖培養(yǎng)基中挑取4mm見方大的培養(yǎng)基2塊，放入試管內(nèi)的提純培養(yǎng)基的兩個(gè)三分點(diǎn)上，每個(gè)三角瓶可接28支，16℃下培養(yǎng)1天后即可看到菌種塊周圍長出白色稀疏的菌絲，10天菌絲即可長滿試管，其中，所述提純培養(yǎng)基的制備方法如下：

取20g黃豆打磨成1000ml豆?jié){后加入葡萄糖20g、瓊脂粉20g、KH₂P0₄ 1.5g、MgSO₄1.5g、酵母膏1g充分溶解，調(diào)節(jié)PH值為7，采用20mm×200mm的玻璃試管，每個(gè)玻璃試管裝入試管高度1/5的溶液，用試管塞封口，滅菌后擺放傾斜，冷卻后即得提純培養(yǎng)基；

（5）羊肚菌原種制作：將試管中長滿菌絲的提純培養(yǎng)基切成0.9cm的片段，每片段接入1瓶滅菌后的原種培養(yǎng)基內(nèi)，原種培養(yǎng)基溫度降到25℃，接種在接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行，一支試管可接8瓶原種，溫度18℃、濕度60%條件下培養(yǎng)，第2天菌絲即可吃料，6天菌絲即可封面，其中，所述原種培養(yǎng)基的制備方法如下：

選用當(dāng)年無蟲優(yōu)質(zhì)麥粒60g，提前48小時(shí)加水浸泡，同時(shí)加入石灰1g，浸泡至無白心時(shí)撈出瀝干水分備用，取木屑30g提前備好用水淋透，自然堆放至棕黃色備用，將制備好的麥粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均勻后裝入750ml菌種瓶，裝瓶時(shí)裝至瓶身2/3處即可，種瓶上下松緊一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高壓滅菌設(shè)備，壓力0.14MPa下滅菌3小時(shí)；

（6）搖瓶：菌絲封面后，在培養(yǎng)室內(nèi)，緊握菌種瓶，上下?lián)u動(dòng)8～10次，使長有菌絲的麥粒均勻分布在菌種瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)5天，菌種瓶中可見大量黃色菌核產(chǎn)生，即可下地播種，每畝用種量400瓶。

實(shí)施例2

一種羊肚菌菌種快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）種菇選擇：采集當(dāng)?shù)厝斯しN植或野生的羊肚菌，選取菇柄長1～2厘米、菇帽長3～4厘米、紋路清晰、褶皺緊密、菇型勻稱、無蟲無病蟲害的羊肚菌，采菇時(shí)將種菇整連根拔除，去掉多余泥土和雜質(zhì)，用紙質(zhì)采樣袋密封，攤晾至含水量70%備用；

（2）無糖培養(yǎng)基制備：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.1cm³的顆粒，稱取200g，加水1000ml放入鍋內(nèi)煮沸20分鐘，趁熱過濾后取濾液，向?yàn)V液中補(bǔ)充熱水至1000ml后加入瓊脂粉，攪拌溶解后趁熱轉(zhuǎn)入三角瓶中滅菌，滅菌方法為，將三角瓶直立放在醫(yī)用高壓鍋內(nèi)密封，通電加熱，打開排氣閥，待鍋內(nèi)水沸騰持續(xù)5分鐘排氣閥均勻排氣時(shí)，表示鍋內(nèi)冷空氣已排盡，關(guān)閉排氣閥待溫度上升至120℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，維持40分鐘后斷電，滅菌完成后，趁熱取出三角瓶放入超凈工作臺(tái)或者接種箱內(nèi)，消毒后將無糖培養(yǎng)基均勻分裝到平板皿中，冷卻備用；

（3）菌種分離：將種菇、無糖培養(yǎng)基和分離器具置于超凈工作臺(tái)中，超凈臺(tái)工作20分鐘達(dá)到無菌要求后用刀片將種菇菌蓋切開，利用接種鏟取小塊菌肉，接入平板皿中的無糖培養(yǎng)基內(nèi)，18℃培養(yǎng)4天后即可看到組織塊周圍長出白色稀疏纖細(xì)的菌絲，7天后待菌絲長到直徑1.5cm的菌落時(shí)即可提純；

（4）接種：從無糖培養(yǎng)基中挑取5mm見方大的培養(yǎng)基2塊，放入試管內(nèi)的提純培養(yǎng)基的兩個(gè)三分點(diǎn)上，每個(gè)三角瓶可接30支，18℃下培養(yǎng)1天后即可看到菌種塊周圍長出白色稀疏的菌絲，9天菌絲即可長滿試管，其中，所述提純培養(yǎng)基的制備方法如下：

取20g黃豆打磨成1000ml豆?jié){后加入葡萄糖20g、瓊脂粉20g、KH₂P0₄ 1.5g、MgSO₄1.5g、酵母膏1g充分溶解，調(diào)節(jié)PH值為7，采用20mm×200mm的玻璃試管，每個(gè)玻璃試管裝入試管高度1/5的溶液，用試管塞封口，滅菌后擺放傾斜，冷卻后即得提純培養(yǎng)基；

（5）羊肚菌原種制作：將試管中長滿菌絲的提純培養(yǎng)基切成1.1cm的片段，每片段接入1瓶滅菌后的原種培養(yǎng)基內(nèi)，原種培養(yǎng)基溫度降到25℃，接種在接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行，一支試管可接8瓶原種，溫度16℃、濕度60%條件下培養(yǎng)，第2天菌絲即可吃料，5天菌絲即可封面，其中，所述原種培養(yǎng)基的制備方法如下：

選用當(dāng)年無蟲優(yōu)質(zhì)麥粒60g，提前48小時(shí)加水浸泡，同時(shí)加入石灰1g，浸泡至無白心時(shí)撈出瀝干水分備用，取木屑30g提前備好用水淋透，自然堆放至棕黃色備用，將制備好的麥粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均勻后裝入750ml菌種瓶，裝瓶時(shí)裝至瓶身2/3處即可，種瓶上下松緊一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高壓滅菌設(shè)備，壓力0.14MPa下滅菌3小時(shí)；

（6）搖瓶：菌絲封面后，在培養(yǎng)室內(nèi)，緊握菌種瓶，上下?lián)u動(dòng)8～10次，使長有菌絲的麥粒均勻分布在菌種瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)5天，菌種瓶中可見大量黃色菌核產(chǎn)生，即可下地播種，每畝用種量380瓶。

實(shí)施例3

一種羊肚菌菌種快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）種菇選擇：采集當(dāng)?shù)厝斯しN植或野生的羊肚菌，選取菇柄長1～2厘米、菇帽長3～4厘米、紋路清晰、褶皺緊密、菇型勻稱、無蟲無病蟲害的羊肚菌，采菇時(shí)將種菇整連根拔除，去掉多余泥土和雜質(zhì)，用紙質(zhì)采樣袋密封，攤晾至含水量65%備用；

（2）無糖培養(yǎng)基制備：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.0cm³的顆粒，稱取200g，加水1000ml放入鍋內(nèi)煮沸19分鐘，趁熱過濾后取濾液，向?yàn)V液中補(bǔ)充熱水至1000ml后加入瓊脂粉，攪拌溶解后趁熱轉(zhuǎn)入三角瓶中滅菌，滅菌方法為，將三角瓶直立放在醫(yī)用高壓鍋內(nèi)密封，通電加熱，打開排氣閥，待鍋內(nèi)水沸騰持續(xù)5分鐘排氣閥均勻排氣時(shí)，表示鍋內(nèi)冷空氣已排盡，關(guān)閉排氣閥待溫度上升至120℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，維持40分鐘后斷電，滅菌完成后，趁熱取出三角瓶放入超凈工作臺(tái)或者接種箱內(nèi)，消毒后將無糖培養(yǎng)基均勻分裝到平板皿中，冷卻備用；

（3）菌種分離：將種菇、無糖培養(yǎng)基和分離器具置于超凈工作臺(tái)中，超凈臺(tái)工作20分鐘達(dá)到無菌要求后用刀片將種菇菌蓋切開，利用接種鏟取小塊菌肉，接入平板皿中的無糖培養(yǎng)基內(nèi)，17℃培養(yǎng)5天后即可看到組織塊周圍長出白色稀疏纖細(xì)的菌絲，8天后待菌絲長到直徑1.8cm的菌落時(shí)即可提純；

（4）接種：從無糖培養(yǎng)基中挑取5mm見方大的培養(yǎng)基2塊，放入試管內(nèi)的提純培養(yǎng)基的兩個(gè)三分點(diǎn)上，每個(gè)三角瓶可接29支，17℃下培養(yǎng)1天后即可看到菌種塊周圍長出白色稀疏的菌絲，9天菌絲即可長滿試管，其中，所述提純培養(yǎng)基的制備方法如下：

取20g黃豆打磨成1000ml豆?jié){后加入葡萄糖20g、瓊脂粉20g、KH₂P0₄ 1.5g、MgSO₄1.5g、酵母膏1g充分溶解，調(diào)節(jié)PH值為7，采用20mm×200mm的玻璃試管，每個(gè)玻璃試管裝入試管高度1/5的溶液，用試管塞封口，滅菌后擺放傾斜，冷卻后即得提純培養(yǎng)基；

（5）羊肚菌原種制作：將試管中長滿菌絲的提純培養(yǎng)基切成0.9cm的片段，每片段接入1瓶滅菌后的原種培養(yǎng)基內(nèi)，原種培養(yǎng)基溫度降到25℃，接種在接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行，一支試管可接8瓶原種，溫度17℃、濕度60%條件下培養(yǎng)，第2天菌絲即可吃料，7天菌絲即可封面，其中，所述原種培養(yǎng)基的制備方法如下：

選用當(dāng)年無蟲優(yōu)質(zhì)麥粒60g，提前48小時(shí)加水浸泡，同時(shí)加入石灰1g，浸泡至無白心時(shí)撈出瀝干水分備用，取木屑30g提前備好用水淋透，自然堆放至棕黃色備用，將制備好的麥粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均勻后裝入750ml菌種瓶，裝瓶時(shí)裝至瓶身2/3處即可，種瓶上下松緊一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高壓滅菌設(shè)備，壓力0.14MPa下滅菌3小時(shí)；

（6）搖瓶：菌絲封面后，在培養(yǎng)室內(nèi)，緊握菌種瓶，上下?lián)u動(dòng)8～10次，使長有菌絲的麥粒均勻分布在菌種瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)4天，菌種瓶中可見大量黃色菌核產(chǎn)生，即可下地播種，每畝用種量390瓶。

實(shí)施例4

一種羊肚菌菌種快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）種菇選擇：采集當(dāng)?shù)厝斯しN植或野生的羊肚菌，選取菇柄長1～2厘米、菇帽長3～4厘米、紋路清晰、褶皺緊密、菇型勻稱、無蟲無病蟲害的羊肚菌，采菇時(shí)將種菇整連根拔除，去掉多余泥土和雜質(zhì)，用紙質(zhì)采樣袋密封，攤晾至含水量70%備用；

（2）無糖培養(yǎng)基制備：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.1cm³的顆粒，稱取200g，加水1000ml放入鍋內(nèi)煮沸20分鐘，趁熱過濾后取濾液，向?yàn)V液中補(bǔ)充熱水至1000ml后加入瓊脂粉，攪拌溶解后趁熱轉(zhuǎn)入三角瓶中滅菌，滅菌方法為，將三角瓶直立放在醫(yī)用高壓鍋內(nèi)密封，通電加熱，打開排氣閥，待鍋內(nèi)水沸騰持續(xù)5分鐘排氣閥均勻排氣時(shí)，表示鍋內(nèi)冷空氣已排盡，關(guān)閉排氣閥待溫度上升至120℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，維持40分鐘后斷電，滅菌完成后，趁熱取出三角瓶放入超凈工作臺(tái)或者接種箱內(nèi)，消毒后將無糖培養(yǎng)基均勻分裝到平板皿中，冷卻備用；

（3）菌種分離：將種菇、無糖培養(yǎng)基和分離器具置于超凈工作臺(tái)中，超凈臺(tái)工作20分鐘達(dá)到無菌要求后用刀片將種菇菌蓋切開，利用接種鏟取小塊菌肉，接入平板皿中的無糖培養(yǎng)基內(nèi)，18℃培養(yǎng)4天后即可看到組織塊周圍長出白色稀疏纖細(xì)的菌絲，7天后待菌絲長到直徑1.5cm的菌落時(shí)即可提純；

（4）接種：從無糖培養(yǎng)基中挑取5mm見方大的培養(yǎng)基2塊，放入試管內(nèi)的提純培養(yǎng)基的兩個(gè)三分點(diǎn)上，每個(gè)三角瓶可接29支，18℃下培養(yǎng)1天后即可看到菌種塊周圍長出白色稀疏的菌絲，10天菌絲即可長滿試管，其中，所述提純培養(yǎng)基的制備方法如下：

取20g黃豆打磨成1000ml豆?jié){后加入葡萄糖20g、瓊脂粉20g、KH₂P0₄ 1.5g、MgSO₄1.5g、酵母膏1g充分溶解，調(diào)節(jié)PH值為7，采用20mm×200mm的玻璃試管，每個(gè)玻璃試管裝入試管高度1/5的溶液，用試管塞封口，滅菌后擺放傾斜，冷卻后即得提純培養(yǎng)基；

（5）羊肚菌原種制作：將試管中長滿菌絲的提純培養(yǎng)基切成1.1cm的片段，每片段接入1瓶滅菌后的原種培養(yǎng)基內(nèi)，原種培養(yǎng)基溫度降到25℃，接種在接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行，一支試管可接8瓶原種，溫度18℃、濕度60%條件下培養(yǎng)，第2天菌絲即可吃料，5天菌絲即可封面，其中，所述原種培養(yǎng)基的制備方法如下：

選用當(dāng)年無蟲優(yōu)質(zhì)麥粒60g，提前48小時(shí)加水浸泡，同時(shí)加入石灰1g，浸泡至無白心時(shí)撈出瀝干水分備用，取木屑30g提前備好用水淋透，自然堆放至棕黃色備用，將制備好的麥粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均勻后裝入750ml菌種瓶，裝瓶時(shí)裝至瓶身2/3處即可，種瓶上下松緊一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高壓滅菌設(shè)備，壓力0.14MPa下滅菌3小時(shí)；

（6）搖瓶：菌絲封面后，在培養(yǎng)室內(nèi)，緊握菌種瓶，上下?lián)u動(dòng)8～10次，使長有菌絲的麥粒均勻分布在菌種瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)5天，菌種瓶中可見大量黃色菌核產(chǎn)生，即可下地播種，每畝用種量385瓶。

實(shí)施例5

一種羊肚菌菌種快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）種菇選擇：采集當(dāng)?shù)厝斯しN植或野生的羊肚菌，選取菇柄長1～2厘米、菇帽長3～4厘米、紋路清晰、褶皺緊密、菇型勻稱、無蟲無病蟲害的羊肚菌，采菇時(shí)將種菇整連根拔除，去掉多余泥土和雜質(zhì)，用紙質(zhì)采樣袋密封，攤晾至含水量70%備用；

（2）無糖培養(yǎng)基制備：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.1cm³的顆粒，稱取200g，加水1000ml放入鍋內(nèi)煮沸18分鐘，趁熱過濾后取濾液，向?yàn)V液中補(bǔ)充熱水至1000ml后加入瓊脂粉，攪拌溶解后趁熱轉(zhuǎn)入三角瓶中滅菌，滅菌方法為，將三角瓶直立放在醫(yī)用高壓鍋內(nèi)密封，通電加熱，打開排氣閥，待鍋內(nèi)水沸騰持續(xù)5分鐘排氣閥均勻排氣時(shí)，表示鍋內(nèi)冷空氣已排盡，關(guān)閉排氣閥待溫度上升至120℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，維持40分鐘后斷電，滅菌完成后，趁熱取出三角瓶放入超凈工作臺(tái)或者接種箱內(nèi)，消毒后將無糖培養(yǎng)基均勻分裝到平板皿中，冷卻備用；

（3）菌種分離：將種菇、無糖培養(yǎng)基和分離器具置于超凈工作臺(tái)中，超凈臺(tái)工作20分鐘達(dá)到無菌要求后用刀片將種菇菌蓋切開，利用接種鏟取小塊菌肉，接入平板皿中的無糖培養(yǎng)基內(nèi)，16℃培養(yǎng)5天后即可看到組織塊周圍長出白色稀疏纖細(xì)的菌絲，7天后待菌絲長到直徑2cm的菌落時(shí)即可提純；

（4）接種：從無糖培養(yǎng)基中挑取4mm見方大的培養(yǎng)基2塊，放入試管內(nèi)的提純培養(yǎng)基的兩個(gè)三分點(diǎn)上，每個(gè)三角瓶可接30支，18℃下培養(yǎng)1天后即可看到菌種塊周圍長出白色稀疏的菌絲，9天菌絲即可長滿試管，其中，所述提純培養(yǎng)基的制備方法如下：

取20g黃豆打磨成1000ml豆?jié){后加入葡萄糖20g、瓊脂粉20g、KH₂P0₄ 1.5g、MgSO₄1.5g、酵母膏1g充分溶解，調(diào)節(jié)PH值為7，采用20mm×200mm的玻璃試管，每個(gè)玻璃試管裝入試管高度1/5的溶液，用試管塞封口，滅菌后擺放傾斜，冷卻后即得提純培養(yǎng)基；

（5）羊肚菌原種制作：將試管中長滿菌絲的提純培養(yǎng)基切成0.9cm的片段，每片段接入1瓶滅菌后的原種培養(yǎng)基內(nèi)，原種培養(yǎng)基溫度降到25℃，接種在接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行，一支試管可接8瓶原種，溫度17℃、濕度60%條件下培養(yǎng)，第2天菌絲即可吃料，6天菌絲即可封面，其中，所述原種培養(yǎng)基的制備方法如下：

選用當(dāng)年無蟲優(yōu)質(zhì)麥粒60g，提前48小時(shí)加水浸泡，同時(shí)加入石灰1g，浸泡至無白心時(shí)撈出瀝干水分備用，取木屑30g提前備好用水淋透，自然堆放至棕黃色備用，將制備好的麥粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均勻后裝入750ml菌種瓶，裝瓶時(shí)裝至瓶身2/3處即可，種瓶上下松緊一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高壓滅菌設(shè)備，壓力0.14MPa下滅菌3小時(shí)；

（6）搖瓶：菌絲封面后，在培養(yǎng)室內(nèi)，緊握菌種瓶，上下?lián)u動(dòng)8～10次，使長有菌絲的麥粒均勻分布在菌種瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)5天，菌種瓶中可見大量黃色菌核產(chǎn)生，即可下地播種，每畝用種量400瓶。

經(jīng)發(fā)明人大量的試驗(yàn)和探索，最終得出上述羊肚菌菌種快速繁育方法，該方法在保證菌種品質(zhì)、存活率和產(chǎn)量的前提下，大大縮短了羊肚菌菌種繁育周期，滿足市場需求。

以上所述的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì)說明，所應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式而已，并不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。