本發(fā)明適用于日用化學(xué)品領(lǐng)域，具體涉及一種氧化酶及其在染發(fā)過程中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：傳統(tǒng)的化學(xué)法染發(fā)過程，由化學(xué)氧化劑催化前體分子發(fā)生氧化反應(yīng)進(jìn)行染色，最常用的化學(xué)染發(fā)劑為雙氧水和對苯二胺。雙氧水的氧化能力過強(qiáng)，對發(fā)質(zhì)易帶來永久損失；對苯二胺則易引起過敏性皮膚炎，有學(xué)者認(rèn)為其還有致癌作用。近年來氧化酶，特別是漆酶催化的酚類聚合反應(yīng)染色過程則克服了以上問題(式1)。漆酶是一類能夠催化底物單電子氧化的含有銅離子的酶，由于催化的氧化反應(yīng)具有條件溫和，生物相容性高，與生物體內(nèi)染色過程類似等特點(diǎn)，在印染和日用化學(xué)品行業(yè)中得到了擴(kuò)展，具有良好的市場應(yīng)用前景(ProcessBiochemistry47(2012)1295–1307)。目前關(guān)于氧化酶染發(fā)的報(bào)道，如3Biotech(2013)3:267–275報(bào)道了來自于銅綠假單胞菌的漆酶、酪氨酸酶和醇還原酶的染色過程；MicrobialBiotechnology(2010)3(3),324–335報(bào)道了云芝漆酶對不同的前體氧化得到不同顏色；專利CN201280022797和CN2012800622070報(bào)道了膽紅素氧化酶在染發(fā)中的應(yīng)用。以上報(bào)道中，存在前體用量較多，氧化酶的活性不高，酶用量較大等問題，難以廣泛應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種氧化酶，用于制成染色劑應(yīng)用于染發(fā)過程中，其酶的活性高，用量少。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種氧化酶，所述的氧化酶的氨基酸序列與序列2、4、6、8及10中的任一序列具有至少90％的同源性。其中，序列2、4來自Stachybotryschartarum的氧化酶；序列6來自Stachybotryschlorohalonata的氧化酶；序列8來自Gliomastixmurorum的氧化酶；序列10來自Colletotrichumsalicis的氧化酶。發(fā)明提供一種編碼上述氧化酶的多核苷酸。具體的，該多核苷酸具有選自序列1、3、5、7、9中的任一序列。本發(fā)明提供一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含上述多核苷酸。本發(fā)明還提供了一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含上述的表達(dá)載體。具體的，該宿主細(xì)胞為大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢桿(Bacilluslicheniformis)、黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyceslactis)及畢赤酵母(Pichiapastoris)中的一種。優(yōu)選地，該宿主細(xì)胞為大腸桿菌。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種染色劑，包括上述氧化酶，所述染色劑中的氧化染料為對苯二胺、對氨基苯酚、對甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羥基吲哚及5,6-二羥基吲哚中的一種。優(yōu)選地，該氧化染料為5,6-二羥基吲哚。優(yōu)選地，該染色劑用于角蛋白纖維的染色，其中，所述的角蛋白纖維為人毛發(fā)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種染色方法，該方法包含用上述染色劑將角蛋白纖維進(jìn)行染色處理的步驟。優(yōu)選地，在溫度為20～30℃、pH為6.5～7.5的條件下進(jìn)行所述染色處理。由于上述技術(shù)方案的運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供了一種氧化酶及其在染發(fā)過程中的應(yīng)用，在染發(fā)過程中，采用本發(fā)明的氧化酶，可有效降低氧化染料的使用量，該氧化酶的活性高，用量少，對發(fā)質(zhì)無損傷，且不會引起過敏性皮炎，對人體健康無損傷，有利于廣泛使用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體使用的不同要求做進(jìn)一步調(diào)整，未注明的實(shí)施條件為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。實(shí)施例1氧化酶的制備序列表中1、3、5、7、9基因片段是由蘇州金唯智生物科技有限公司合成的，分別與pET30a(Novagen)質(zhì)粒的酶切產(chǎn)物連接，轉(zhuǎn)入感受態(tài)E.coliBL21(DE3)菌株，篩選得到陽性克隆子，接種到含有抗性的液體LB培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)至OD600至0.8，加入誘導(dǎo)劑IPTG，繼續(xù)培養(yǎng)16小時(shí)，離心收集沉淀，加入磷酸鹽緩沖液懸浮，冰水浴中超聲波破碎10分鐘，離心取上清，冷凍得到氧化酶酶粉。實(shí)施例2氧化酶在染發(fā)過程中的應(yīng)用采用5,6-二羥基吲哚0.2g、實(shí)施例1中所制備得到的氧化酶酶粉10μg，表面活性劑AEO-90.3mL溶于10mL0.01MpH7.0的三乙醇胺-HCl緩沖溶液中，加入1g人類頭發(fā)，室溫下進(jìn)行染色反應(yīng)10min，而后將頭發(fā)取出后干燥，利用分光測色儀(上海儀電WSF型)檢查與染色前頭發(fā)的色差值(ΔE*ab)，并用肉眼觀察變黑效果，具體效果見表一。表一酶種類12345ΔE*ab2122202320效果明顯變黑明顯變黑明顯變黑明顯變黑明顯變黑上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3