本發(fā)明涉及一種制備復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的方法。

背景技術(shù)：

海參屬于珍貴海味之一，其體內(nèi)含50多種對(duì)人體生理活動(dòng)有益的營(yíng)養(yǎng)成分，其中蛋白質(zhì)含量較高，微量元素種類豐富，能夠延續(xù)人體衰老，補(bǔ)腎益氣，強(qiáng)精健髓，消除疲勞，更具有抗凝血、抗腫瘤、抗菌、抗病毒及提高免疫力的作用。近年來，加工海參的企業(yè)也越來越多，海參加工過程中的下腳料-海參腸中所含有的營(yíng)養(yǎng)成分，不亞于體壁。其干腸含釩率為百萬份之12份，比其軀體中含釩率約高3倍。其具有溫中補(bǔ)虛止痛之功效，能治療胃及十二指腸潰瘍。

海參腸資源的利用日漸引起了重視，很多企業(yè)將海參腸人工去沙后，清洗，冷風(fēng)干燥或者冷凍干燥，然后打磨或者超微粉碎，制成膠囊產(chǎn)品。但該種膠囊產(chǎn)品未對(duì)海參腸做生物處理，吸收利用率低，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值大打折扣。另外，在原料的處理上還存在：海參腸的人工去沙泥效率低及泥沙不徹底，用水清洗脫鹽不徹底，致使產(chǎn)品中重金屬含量及鹽分超標(biāo)的問題。

氨基酸螯合鐵和鈣是鐵和鈣離子嵌合在兩個(gè)氨基酸分子中間的一種鐵和鈣結(jié)構(gòu)形式。兩個(gè)氨基酸分子像“蟹鉗”一樣鉗著一個(gè)鐵或鈣離子，形成超穩(wěn)定螯合結(jié)構(gòu)，然后通過氨基酸通道把鐵和鈣運(yùn)送到血液中，使鐵、鈣和氨基酸一起被人體吸收，能大大提高吸收率。本發(fā)明提供一種海參腸酶解液制備復(fù)合氨基酸螯合鐵鈣的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種制備復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的方法，該方法制備的復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵營(yíng)養(yǎng)成分豐富，易于吸收利用，雜質(zhì)和重金屬含量低。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的制備方法，所述制備方法包括如下步驟：

(1)海參腸預(yù)處理：收集新鮮的海參腸，采用預(yù)處理劑A和B進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理劑A為質(zhì)量分?jǐn)?shù)8-12％的水不溶性葡聚糖混懸液，所述預(yù)處理劑B為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5-1.5％的還原型谷胱甘肽水溶液，具體預(yù)處理操作為：先采用預(yù)處理劑A于常溫下預(yù)處理1-2h，料液比為1:2-3，再用預(yù)處理劑B于常溫下攪拌預(yù)處理2-3h，然后靜置45min-1h，料液比為1:1-2，或者將預(yù)處理劑A與預(yù)處理劑B以體積比1:1混合均勻，然后加入新鮮的海參腸，于常溫下攪拌處理2-2.5h，然后靜置0.5-1h，料液比1:2，預(yù)處理完畢后固液分離備用；

海參腸中富含泥沙、重金屬、鹽分，要想獲得高品質(zhì)的復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵，需要充分去除上述雜質(zhì)，本發(fā)明的設(shè)計(jì)構(gòu)思如下：(1)水不溶性葡聚糖混懸液是大分子的水混懸液，大分子葡聚糖本身有團(tuán)聚絮凝的效果，可以充分吸附或絮凝海參腸中的污泥和重金屬雜質(zhì)等雜質(zhì)，尤其是對(duì)重金屬的去除效果極佳，采用葡聚糖混懸液預(yù)處理劑預(yù)處理后，海參腸的伸展性都上佳，后續(xù)均質(zhì)、酶解的效果大大改善，另外，葡聚糖安全無毒，殘留的葡聚糖反而有增加免疫力、改善免疫功能的功效，提供復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；(2)還原型谷胱甘肽水溶液具有良好的活化細(xì)胞和組織的功能，可以改善細(xì)胞或組織內(nèi)的活性氧和滲透壓，維持海參腸細(xì)胞和組織較長(zhǎng)時(shí)間的新鮮健康狀態(tài)，大大改善后續(xù)酶處理的效果，谷胱甘肽也安全無毒，殘留的谷胱甘肽反而有改善免疫系統(tǒng)、解毒的功能，提高復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，提高成品的品質(zhì)，將復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵中可能存在的重金屬危害風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步降低或消除。

(2)海參腸的均質(zhì)：將步驟(1)預(yù)處理后的海參腸置于高壓均質(zhì)機(jī)中，加入適量的水，進(jìn)行均質(zhì)，得到海參腸均質(zhì)液；

(3)一次酶解：將步驟(2)所得海參腸均質(zhì)液升溫至35-45℃，調(diào)pH值至6.5-7.5，加入適量食品級(jí)脂肪酶，攪拌均勻，酶解0.5-1h，對(duì)海參腸進(jìn)行脫脂，然后升溫至75℃滅活3-5min，然后冷卻至常溫靜置1-2h，去除上清液油脂層；通過脂肪酶酶解去除海參腸中的脂肪，可以改善復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的品質(zhì)，延長(zhǎng)復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的保質(zhì)期。

(4)二次酶解：將步驟(3)處理后的一次酶解液升溫至40-50℃，調(diào)pH值6.5-7.0，加入適量的復(fù)合食品級(jí)蛋白酶酶解2-3h，所述復(fù)合食品級(jí)蛋白酶由復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶組成，酶解后加熱至80℃滅酶10-15min，然后離心分離，得海參腸二次酶解上清液；通過酶解將海參腸中的蛋白質(zhì)充分降解成氨基酸和小分子多肽，便于復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的吸收與利用，利用率高，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。

(5)超濾：將海參腸二次酶解上清液用截留分子量為5000-8000Da的超濾膜超濾得超濾透過液；

(6)納濾：將步驟(6)的超濾透過液用適量純水稀釋，然后用納濾膜進(jìn)行透析濃縮，超濾透過液透析濃縮至稀釋前體積的0.25-0.35倍得納濾濃縮液，所述納濾膜的截留分子量為150-300Da；通過納濾對(duì)復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵脫鹽處理，獲得的復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵鹽分低，口感好；

(7)鐵螯合：取適量濃縮液，在35-45℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量亞鐵鹽，同時(shí)緩慢加入適量酸調(diào)節(jié)體系pH為3-4，反應(yīng)時(shí)間為2～3h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、過濾，濾過液經(jīng)真空濃縮和噴霧干燥制得海參腸多肽螯合鐵；

(8)鈣螯合：取適量濃縮液，在35-45℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量無機(jī)鈣，同時(shí)緩慢加入適量堿調(diào)節(jié)體系pH為7.0～7.5，反應(yīng)時(shí)間為2～3h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、離心，固形物經(jīng)洗滌、干燥和粉碎，制得復(fù)合氨基酸螯合鈣；

(9)混合：將步驟(7)和(8)制備得到的海參腸多肽螯合鐵和海參腸多肽螯合鈣按質(zhì)量比2-3:1混合均勻，得復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵。

優(yōu)選的，海參腸多肽螯合鐵和海參腸多肽螯合鈣按質(zhì)量比5:2混合均勻，得復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵。

優(yōu)選的，步驟(1)中預(yù)處理劑A為質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％的水不溶性葡聚糖混懸液，所述預(yù)處理劑B為質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.0％的還原型谷胱甘肽水溶液。

優(yōu)選的，步驟(2)中高壓均質(zhì)的溫度35-65℃，壓力120-400Mpa，循環(huán)均質(zhì)至少兩次。

優(yōu)選的，所述食品級(jí)脂肪酶的酶活為2萬U/g，酶用量為新鮮海參腸質(zhì)量的0.2-0.8％。

優(yōu)選的，所述步驟(4)中復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶的酶活力比為2-3:1，酶總用量為新鮮海參腸質(zhì)量的0.6-1.0％。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明制備的復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵營(yíng)養(yǎng)成分豐富，易于吸收利用，吸收利用率高，雜質(zhì)和重金屬含量低，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。

實(shí)施例1：

一種復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的制備方法，所述制備方法包括如下步驟：

(1)海參腸預(yù)處理：收集新鮮的海參腸，采用預(yù)處理劑A和B進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理劑A為質(zhì)量分?jǐn)?shù)8％的水不溶性葡聚糖混懸液，所述預(yù)處理劑B為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5％的還原型谷胱甘肽水溶液，具體預(yù)處理操作為：先采用預(yù)處理劑A于常溫下預(yù)處理2h，料液比為1:2，再用預(yù)處理劑B于常溫下攪拌預(yù)處理2h，然后靜置45minh，料液比為1:1；

(2)海參腸的均質(zhì)：將步驟(1)預(yù)處理后的海參腸置于高壓均質(zhì)機(jī)中，加入適量的水，進(jìn)行均質(zhì)，得到海參腸均質(zhì)液，高壓均質(zhì)溫度35-45℃，壓力120Mpa，循環(huán)均質(zhì)三兩次；

(3)一次酶解：將步驟(2)所得海參腸均質(zhì)液升溫至35℃，調(diào)pH值至6.5，加入適量食品級(jí)脂肪酶，攪拌均勻，酶解1h，對(duì)海參腸進(jìn)行脫脂，然后升溫至75℃滅活3min，然后冷卻至常溫靜置1h，去除上清液油脂層，所述食品級(jí)脂肪酶的酶活為2萬U/g，酶用量為新鮮海參腸質(zhì)量的0.2％；

(4)二次酶解：將步驟(3)處理后的一次酶解液升溫至40℃，調(diào)pH值6.5，加入適量的復(fù)合食品級(jí)蛋白酶酶解2h，所述復(fù)合食品級(jí)蛋白酶由復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶組成，酶解后加熱至80℃滅酶10min，然后離心分離，得海參腸二次酶解上清液，復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶的酶活力比為2:1，酶總用量為新鮮海參腸質(zhì)量的0.6％；

(5)超濾：將海參腸二次酶解上清液用截留分子量為5000-2000Da的超濾膜超濾得超濾透過液；

(6)納濾：將步驟(6)的超濾透過液用適量純水稀釋，然后用納濾膜進(jìn)行透析濃縮，超濾透過液透析濃縮至稀釋前體積的0.25倍得納濾濃縮液，所述納濾膜的截留分子量為150-200Da；

(7)鐵螯合：在35℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量亞鐵鹽，同時(shí)緩慢加入適量酸調(diào)節(jié)體系pH為3，反應(yīng)時(shí)間為2h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、過濾，濾過液經(jīng)真空濃縮和噴霧干燥制得海參腸多肽螯合鐵；

(8)鈣螯合：在35℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量無機(jī)鈣，同時(shí)緩慢加入適量堿調(diào)節(jié)體系pH為7.0，反應(yīng)時(shí)間為2h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、離心，固形物經(jīng)洗滌、干燥和粉碎，制得復(fù)合氨基酸螯合鈣；

(9)混合：將步驟(7)和(8)制備得到的海參腸多肽螯合鐵和海參腸多肽螯合鈣按質(zhì)量比2:1混合均勻，得復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵。

實(shí)施例2

一種復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的制備方法，所述制備方法包括如下步驟：

(1)海參腸預(yù)處理：收集新鮮的海參腸，采用預(yù)處理劑A和B進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理劑A為質(zhì)量分?jǐn)?shù)12％的水不溶性葡聚糖混懸液，所述預(yù)處理劑B為質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5％的還原型谷胱甘肽水溶液，具體預(yù)處理操作為：先采用預(yù)處理劑A于常溫下預(yù)處理1h，料液比為1:3，再用預(yù)處理劑B于常溫下攪拌預(yù)處理3h，然后靜置45min，料液比為1:1；

(2)海參腸的均質(zhì)：將步驟(1)預(yù)處理后的海參腸置于高壓均質(zhì)機(jī)中，加入適量的水，進(jìn)行均質(zhì)，得到海參腸均質(zhì)液，高壓均質(zhì)的溫度60-65℃，壓力400Mpa，循環(huán)均質(zhì)兩次；

(3)一次酶解：將步驟(2)所得海參腸均質(zhì)液升溫至45℃，調(diào)pH值至7.5，加入適量食品級(jí)脂肪酶，攪拌均勻，酶解1h，對(duì)海參腸進(jìn)行脫脂，然后升溫至75℃滅活5min，然后冷卻至常溫靜置2h，去除上清液油脂層；食品級(jí)脂肪酶的酶活為2萬U/g，酶用量為新鮮海參腸質(zhì)量的0.8％；

(4)二次酶解：將步驟(3)處理后的一次酶解液升溫至40-50℃，調(diào)pH值6.5-7.0，加入適量的復(fù)合食品級(jí)蛋白酶酶解2-3h，所述復(fù)合食品級(jí)蛋白酶由復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶組成，酶解后加熱至80℃滅酶10-15min，然后離心分離，得海參腸二次酶解上清液；復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶的酶活力比為3:1，酶總用量為新鮮海參腸質(zhì)量的1.0％；

(5)超濾：將海參腸二次酶解上清液用截留分子量為6000-8000Da的超濾膜超濾得超濾透過液；

(6)納濾：將步驟(6)的超濾透過液用適量純水稀釋，然后用納濾膜進(jìn)行透析濃縮，超濾透過液透析濃縮至稀釋前體積的0.35倍得納濾濃縮液，所述納濾膜的截留分子量為200-300Da；

(7)鐵螯合：在45℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量亞鐵鹽，同時(shí)緩慢加入適量酸調(diào)節(jié)體系pH為4，反應(yīng)時(shí)間為3h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、過濾，濾過液經(jīng)真空濃縮和噴霧干燥制得海參腸多肽螯合鐵；

(8)鈣螯合：在45℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量無機(jī)鈣，同時(shí)緩慢加入適量堿調(diào)節(jié)體系pH為7.5，反應(yīng)時(shí)間為3h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、離心，固形物經(jīng)洗滌、干燥和粉碎，制得復(fù)合氨基酸螯合鈣；

(9)混合：將步驟(7)和(8)制備得到的海參腸多肽螯合鐵和海參腸多肽螯合鈣按質(zhì)量比3:1混合均勻，得復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵。

實(shí)施例3：

一種復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵的制備方法，所述制備方法包括如下步驟：

(1)海參腸預(yù)處理：收集新鮮的海參腸，采用預(yù)處理劑A和B進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理劑A為質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％的水不溶性葡聚糖混懸液，所述預(yù)處理劑B為質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.0％的還原型谷胱甘肽水溶液，具體預(yù)處理操作為：將預(yù)處理劑A與預(yù)處理劑B以體積比1:1混合均勻，然后加入新鮮的海參腸，于常溫下攪拌處理2.5h，然后靜置1h，料液比1:2，預(yù)處理完畢后固液分離備用；

(2)海參腸的均質(zhì)：將步驟(1)預(yù)處理后的海參腸置于高壓均質(zhì)機(jī)中，加入適量的水，進(jìn)行均質(zhì)，得到海參腸均質(zhì)液，高壓均質(zhì)的溫度40-45℃，壓力180Mpa，循環(huán)均質(zhì)三次；

(3)一次酶解：將步驟(2)所得海參腸均質(zhì)液升溫至40℃，調(diào)pH值至7.0，加入適量食品級(jí)脂肪酶，攪拌均勻，酶解1h，對(duì)海參腸進(jìn)行脫脂，然后升溫至75℃滅活5min，然后冷卻至常溫靜置2h，去除上清液油脂層；食品級(jí)脂肪酶的酶活為2萬U/g，酶用量為新鮮海參腸質(zhì)量的0.5％；

(4)二次酶解：將步驟(3)處理后的一次酶解液升溫至45℃，調(diào)pH值6.8，加入適量的復(fù)合食品級(jí)蛋白酶酶解2.5h，所述復(fù)合食品級(jí)蛋白酶由復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶組成，酶解后加熱至80℃滅酶12min，然后離心分離，得海參腸二次酶解上清液；復(fù)合風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶的酶活力比為2.5:1，酶總用量為新鮮海參腸質(zhì)量的0.75％；

(5)超濾：將海參腸二次酶解上清液用截留分子量為6000Da的超濾膜超濾得超濾透過液；

(6)納濾：將步驟(6)的超濾透過液用適量純水稀釋，然后用納濾膜進(jìn)行透析濃縮，超濾透過液透析濃縮至稀釋前體積的0.3倍得納濾濃縮液，所述納濾膜的截留分子量為220Da；

(7)鐵螯合：在40℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量亞鐵鹽，同時(shí)緩慢加入適量酸調(diào)節(jié)體系pH為3.5，反應(yīng)時(shí)間為2.5h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、過濾，濾過液經(jīng)真空濃縮和噴霧干燥制得海參腸多肽螯合鐵；

(8)鈣螯合：在40℃的條件下，邊攪拌邊往納濾濃縮液中加入適量無機(jī)鈣，同時(shí)緩慢加入適量堿調(diào)節(jié)體系pH為7.3，反應(yīng)時(shí)間為2.5h，反應(yīng)過程中維持體系pH值穩(wěn)定，反應(yīng)結(jié)束后冷卻、離心，固形物經(jīng)洗滌、干燥和粉碎，制得復(fù)合氨基酸螯合鈣；

(9)混合：將步驟(7)和(8)制備得到的海參腸多肽螯合鐵和海參腸多肽螯合鈣按質(zhì)量比5:2混合均勻，得復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵。

本發(fā)明制備的復(fù)合氨基酸螯合鈣鐵營(yíng)養(yǎng)成分豐富，氨基酸態(tài)氮含量非常高，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，易于吸收利用，吸收利用率高，雜質(zhì)含量低，重金屬未檢出。以上所述的實(shí)施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。