本發(fā)明屬于兒茶素的制備領(lǐng)域，具體涉及一種表兒茶素沒食子酸酯單體的制備方法。

背景技術(shù)：

兒茶素是茶葉中最重要的生理活性物質(zhì)，約占多酚類80%，屬黃烷醇類，其基本結(jié)構(gòu)是α-苯基苯并吡喃，分為酯型和非酯型兩類，結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別在于氫基取代的數(shù)量和位置不同。兒茶素主要由表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)和表兒茶素(EC)等單體組成。兒茶素具有明顯的抗衰老、防癌抗突變、降脂減肥、降低血糖、血脂和膽固醇、預(yù)防心血管疾病等藥理功能，已廣泛應(yīng)用于食品加工、醫(yī)藥保健和日用化工等領(lǐng)域。衛(wèi)生部已批準(zhǔn)了茶多酚為我國食品添加劑。兒茶素藥理功能是多種有效活性組分綜合作用的結(jié)果，但各兒茶素單體均表現(xiàn)出專化性機能，尤其是酯型兒茶素EGCG和ECG，它們在許多方面表現(xiàn)出的功效遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他兒茶素組分，成為兒茶素分離、純化與臨床應(yīng)用研究的焦點.目前，國內(nèi)外對于EGCG結(jié)構(gòu)與功效的研究已趨于完善，并已成功地開發(fā)研制出EGCG單體，但在ECG分離純化方面的報道則相對較少,據(jù)國外最新研究成果表明，ECG在抑制人體病毒侵染、清除脂質(zhì)自由基方面作用顯著．同時，ECG具有極強的抑菌活性，可開發(fā)成一種天然的類抗生素物質(zhì)．用大孔吸附樹脂柱色譜法制備高ECG型兒茶素，摒棄傳統(tǒng)的提取分離工藝主要包括離子沉淀法、有機溶劑萃取法，由于茶葉的功能成分復(fù)雜，從茶葉中制取高純度的兒茶素單體具有相當(dāng)難度。迄今，國內(nèi)外尚未有ECG 單體產(chǎn)業(yè)化制備方面的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種表兒茶素沒食子酸酯單體的制備方法，該方法簡便，沒用毒性強的有機溶劑，制備周期短，成本低，符合環(huán)保和安全的要求，表兒茶素沒食子酸酯單體的提取率及產(chǎn)品純度高，適宜規(guī)模型工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種表兒茶素沒食子酸酯單體的制備方法，包括如下步驟：

（1）以小葉種兒茶素提取物為原料，加入純水溶解小葉種兒茶素提取物，配置成濃度為100-200mg/ml的溶液，制得小葉種兒茶素溶液；

（2）將小葉種兒茶素提取物的溶液通過裝有吸附樹脂的層析柱，并用乙醇水溶液進(jìn)行分級洗脫，收集洗脫液，將所述洗脫液濃縮至16-18波美度，得濃縮液；

（3）將濃縮液在0-4℃溫度下放置48～72小時，按照濃縮液總質(zhì)量0.1～0.2%的比例添加少量表兒茶素沒食子酸酯單體對濃縮液進(jìn)行結(jié)晶，離心、干燥，得到表兒茶素沒食子酸酯單體。

對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步限定：步驟（1）中，小葉種兒茶素提取物是在28-32℃溫度下攪拌40-50分鐘進(jìn)行溶解的。

對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步限定：將步驟（2）中小葉種復(fù)合兒茶素溶液緩慢通過裝有吸附樹脂的層析柱，并分別用10%、30%、80%的乙醇水溶液分級洗脫，收集30%的乙醇洗脫液，洗脫液濃縮至16-18波美度，得濃縮液。

對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步限定：所述吸附樹脂為RS-16或RS-8，對其它雜質(zhì)吸附率最低。

有益效果：本發(fā)明中，所述小葉種兒茶素溶液的濃度為100-200mg/ml，在這種較高的濃度下，有利于兒茶素富集；本發(fā)明采用吸附樹脂可以有效進(jìn)行分離，對其它雜質(zhì)吸附率低，解決了表兒茶素沒食子酸酯(ECG)與其它雜質(zhì)的分離，從而成功實現(xiàn)了表兒茶素沒食子酸酯(ECG)單體的制備。

具體實施方式

實施例1

1、取小葉種兒茶素提取物200克，加入純水中溶解，配成1000 ml小葉種兒茶素溶液；

2、將步驟1中小葉種兒茶素溶液緩慢通過裝有RS-8吸附樹脂的層析柱，并分別用10%、30%、80%的乙醇水溶液分級洗脫，收集30%的乙醇洗脫液，并將所述洗脫液濃縮至16-18波美度，得濃縮液；

3、將所述濃縮液在0-4℃溫度下放置48小時，按照濃縮液總質(zhì)量0.1%的比例添加少量表兒茶素沒食子酸酯單體對濃縮液進(jìn)行結(jié)晶，然后離心、干燥得到22.43g白色固體。

將實施例1得到的白色固體與表兒茶素沒食子酸酯（ECG）單體標(biāo)準(zhǔn)品對照鑒定并經(jīng)高效液相色譜法分析檢測（鑒定、檢測結(jié)果為：所述白色固體，分子量為306.27，熔點208-210oC，分子式為：C15H14O7，表明所述白色固體為ECG 單體，而且純度≥98%。

實施例2

1、取小葉種兒茶素提取物100克，加入純水中溶解，配成1000 ml小葉種兒茶素溶液；

2、將步驟1中小葉種兒茶素溶液緩慢通過裝有RS-8吸附樹脂的層析柱，并分別用10%、30%、80%的乙醇水溶液分級洗脫，收集30%的乙醇洗脫液，并將所述洗脫液濃縮至16-18波美度，得濃縮液；

3、將所述濃縮液在0-4℃溫度下放置72小時，按照濃縮液總質(zhì)量0.2%的比例添加少量表兒茶素沒食子酸酯單體對濃縮液進(jìn)行結(jié)晶，然后離心、干燥得到12.13g白色固體。

將實施例2得到的白色固體與表兒茶素沒食子酸酯（ECG）單體標(biāo)準(zhǔn)品對照鑒定并經(jīng)高效液相色譜法分析檢測（鑒定、檢測結(jié)果為：所述白色固體，分子量為306.27，熔點208-210oC，分子式為：C15H14O7，表明所述白色固體為ECG 單體，而且純度≥98%。

實施例3

1、取小葉種兒茶素提取物50克，加入純水中溶解，配成1000 ml小葉種兒茶素溶液。

2、將步驟1中小葉種兒茶素溶液緩慢通過裝有RS-16吸附樹脂的層析柱，并分別用10%、30%、80%的乙醇水溶液梯度洗脫，收集30%的乙醇洗脫液，并將所述洗脫液濃縮至16-18波美度，得濃縮液；

3、將所述濃縮液在0-4°C溫度下放置48小時，按照濃縮液總質(zhì)量0.1%的比例添加少量表兒茶素沒食子酸酯單體對濃縮液進(jìn)行結(jié)晶，然后離心、干燥得到11.33g白色固體。

將實施例3得到的的白色固體與表兒茶素沒食子酸酯（ECG）單體標(biāo)準(zhǔn)品對照鑒定并經(jīng)高效液相色譜法分析檢測（鑒定、檢測結(jié)果為：所述白色固體，分子量為306.27，熔點208-210oC，分子式為：C15H14O7，表明所述白色固體為ECG 單體，而且純度≥98%。

在上述實施例中，吸附樹脂用量：50 倍小葉種兒茶素提取物重量；上柱流速：1.0 BV/h；三種不同濃度的乙醇水溶液的用量均為2BV；解吸流速：1.0 BV/h。

對本發(fā)明的進(jìn)一步說明：上述實施例1-實施例3涉及的步驟（1）中，小兒茶素提取物是在28-32℃溫度下攪拌40-50分鐘進(jìn)行溶解的，便于加快溶解速度和充分溶解。

對本發(fā)明的進(jìn)一步說明：添加少量表兒茶素沒食子酸酯的作用是加速結(jié)晶，如果不添加結(jié)晶速度慢或者不能結(jié)晶。

對本發(fā)明的進(jìn)一步說明：采用濃度為80%的乙醇水溶液主要目的是洗脫其它吸附在樹脂上的成分，以便再次使用樹脂；所述BV為層析柱（樹脂柱）內(nèi)裝載樹脂的體積。

以上實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明中，所述小葉種兒茶素提取物購自長沙飛拓植物制品有限公司， (本發(fā)明中“添加少量表兒茶素沒食子酸酯單體對濃縮液進(jìn)行結(jié)晶”) 表兒茶素沒食子酸酯單體購自杭州禾田生物技術(shù)有限公司。