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桔青霉LB及在生物轉(zhuǎn)化連翹苷制備連翹脂素中的應(yīng)用的制作方法

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技術(shù)特征:

1.桔青霉(Penicillium citrinum)LB,保藏于廣東省微生物菌種保藏中心,保藏編號(hào):GDMCC No:60050,保藏日期2016年6月27日,地址:廣東省廣州市先烈中路100號(hào)大院59號(hào)樓5樓;郵編:510075。

2.一種權(quán)利要求1所述桔青霉LB在生物轉(zhuǎn)化連翹苷制備連翹脂素中的應(yīng)用。

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于所述的應(yīng)用是將桔青霉LB經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體為生物催化劑,以連翹苷為底物,以甲醇為助溶劑,以含濕菌體的發(fā)酵液或?qū)窬w懸浮于緩沖液中構(gòu)成轉(zhuǎn)化體系,于30~35℃、200~250r/min恒溫振蕩條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng),轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后,將轉(zhuǎn)化液分離純化,獲得連翹脂素。

4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于所述轉(zhuǎn)化體系中生物催化劑用量以濕菌體干重計(jì)為1.51~1.64g/L。

5.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于所述轉(zhuǎn)化體系中,底物連翹苷的終濃度為1~2g/L,所述助溶劑甲醇的體積終濃度為1%~5%。

6.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于所述的轉(zhuǎn)化反應(yīng)條件為:在30~35℃、150~250r/min恒溫振蕩條件下轉(zhuǎn)化18~24h。

7.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于所述生物催化劑按如下方法制備:將桔青霉LB接種至發(fā)酵培養(yǎng)基,于28~30℃、200~250r/min恒溫振蕩條件下培養(yǎng)2~3天,獲得發(fā)酵液,發(fā)酵液離心,收集濕菌體;所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成為:蔗糖6~10g/L,(NH4)2SO4 4~7g/L,NaCl 5g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4 1g/L,MnSO4 0.5g/L,溶劑為水,pH 5~7。

8.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于所述桔青霉LB菌株在發(fā)酵前,通常需要先經(jīng)平板培養(yǎng)基活化培養(yǎng),再經(jīng)過(guò)種子培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng),然后用種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),所述生物催化劑制備方法為:(1)活化培養(yǎng):將桔青霉LB菌種孢子接種于平板培養(yǎng)基,于28~30℃恒溫培養(yǎng)2~3天,獲得平板孢子,所述的平板培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,其終濃度組成為:馬鈴薯200g/L,葡萄糖20g/L,瓊脂20g/L,溶劑為水,pH自然;(2)種子擴(kuò)大培養(yǎng):挑取步驟(1)活化培養(yǎng)后桔青霉LB孢子接種至種子培養(yǎng)基中,于28~30℃、200~250r/min恒溫振蕩條件下培養(yǎng)2~3天,得種子液;所述種子培養(yǎng)基,除不含瓊脂外,其終濃度組成同平板培養(yǎng)基;(3)菌體發(fā)酵:將種子液以體積濃度5%~10%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中,于28~30℃、200~250r/min恒溫振蕩條件下培養(yǎng)2~3天,獲得發(fā)酵液,將發(fā)酵液過(guò)濾,收集濕菌體;所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成為:蔗糖6~10g/L,(NH4)2SO4 4~7g/L,NaCl 5g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4 1g/L,MnSO4 0.5g/L,溶劑為水,pH 5~7。

9.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成為:蔗糖7g/L,(NH4)2SO4 5g/L,NaCl 5g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4 1g/L,MnSO4 0.5g/L,溶劑為水,pH 6。

10.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于所述轉(zhuǎn)化液分離純化的方法為:生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后,轉(zhuǎn)化體系用等體積的乙酸乙酯萃取,萃取液于圓底燒瓶中,45℃下減壓蒸干乙酸乙酯后,再加入原轉(zhuǎn)化體系體積1/4的甲醇溶解殘留物;用濾紙過(guò)濾后,于45℃下減壓干燥,即得連翹脂素。

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