1.SEQ ID NO:1所示的HIV-1廣譜中和抗體VRC01來源的scFv序列在作為CAR分子的胞外抗原結(jié)合域中的應(yīng)用。
2.一種VC-CAR分子,其特征在于,由SEQ ID NO:1所示的HIV-1廣譜中和抗體VRC01來源的scFv序列和CAR分子胞內(nèi)段序列連接而成,HIV-1廣譜中和抗體VRC01來源的scFv序列在N端,CAR分子胞內(nèi)段序列在C端。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的VC-CAR分子,其特征在于,所述VC-CAR分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的VC-CAR分子,其特征在于,所述VC-CAR分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
5.一種改造的CD8+ T細胞,其特征在于,使用權(quán)利要求2至4任一項所述的VC-CAR分子轉(zhuǎn)導(dǎo)至CD8+ T細胞中制備得到。
6.權(quán)利要求5所述的改造的CD8+ T細胞在制備清除 HIV-1感染細胞的制劑中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的改造的CD8+ T細胞,其特征在于,由以下方法制備得到:(1)收集外周血單個核細胞并分離富集其中的CD8+ T細胞,利用anti-CD3、anti-CD28和IL-2激活CD8+ T細胞;(2)細胞激活48小時后,以1ml/1×106細胞的比例加入VC-CAR分子重組的病毒濃縮液進行感染,同時加入聚凝胺溶液,離心后繼續(xù)培養(yǎng);8~12小時后,進行第二輪病毒感染。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的改造的CD8+ T細胞,其特征在于,所述anti-CD3的濃度為1μg/mL,anti-CD28的濃度為1μg/mL,IL-2的濃度為10ng/mL。
9.一種擴增權(quán)利要求5或7或8所述的改造的CD8+ T細胞的方法,其特征在于,包括如下步驟:(1)CD8+ T細胞被VC-CAR分子重組的病毒感染改造后的12小時,離心換液,洗去培養(yǎng)基中的病毒,以新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,并加入IL-2和IL-7保持細胞狀態(tài);(2)病毒感染改造后的第3天和第5天,根據(jù)細胞狀態(tài)和增殖情況,對細胞添加完全RMPI1640培養(yǎng)基,細胞濃度維持在2×106/ml,并補充IL-2和IL-7,繼續(xù)培養(yǎng)并及時傳代,進一步擴增細胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其特征在于,所述IL-2的濃度為10ng/mL, IL-7的濃度為10ng/mL。