本發(fā)明屬于功能性食品技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是關(guān)于一種植物乳桿菌X7021的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著人民生活水平的提高和生活方式的改變，肥胖、高血壓和高血尿酸等代謝性疾病的發(fā)生率顯著增加。除了采用傳統(tǒng)的藥物治療方式外，還可以通過健康的飲食習(xí)慣來更好地預(yù)防和降低代謝性疾病的發(fā)生率。因此，越來越多的人開始食用健康食品如：有機(jī)食品、功能性食品等。功能性食品是指具有特定功能的食品，適宜于特定人群食用，可調(diào)節(jié)機(jī)體的功能，又不以治療為目的并且對(duì)人體不產(chǎn)生任何急性、亞急性或慢性危害的食品。
豆乳因其蛋白質(zhì)含量高且具有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分而深受廣大消費(fèi)者的歡迎，常通過乳酸菌發(fā)酵制備成功能性豆乳。大量的研究者已經(jīng)篩選出多種植物乳桿菌制備出了多種功能性豆乳，如：中國(guó)專利CN102586155A公開了一種植物乳桿菌N13，保藏編號(hào)為CGMCC NO 5495，對(duì)致病菌腸侵襲性大腸桿菌Enteroinvasive Escherichia coli.,ATCC43893具有抑制作用，能夠用于制備酸豆乳、發(fā)酵乳制品、發(fā)酵蔬菜和發(fā)酵青飼料等。中國(guó)專利CN103169075A公開了一種植物乳桿菌ST-III在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑或制備具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的發(fā)酵豆類制品中的用途，具有作為口服的降糖食品、保健品或者藥品，降低糖尿病人的餐后高血糖，調(diào)節(jié)餐后血糖波動(dòng)的作用。
由于豆乳中含有較多的嘌呤，而嘌呤攝入量過多會(huì)引起痛風(fēng)患者的血尿酸含量升高，致使痛風(fēng)患者的病情加重，所以多數(shù)痛風(fēng)患者不敢食用豆乳。目前，還沒有發(fā)現(xiàn)能夠有效降低豆乳中嘌呤含量的植物乳桿菌。
因此，篩選一種植物乳桿菌，能夠有效地降解豆乳中的嘌呤含量，從而制備出嘌呤含量低且口感良好的功能性豆乳，能夠滿足廣大消費(fèi)者尤其是痛風(fēng)患者對(duì)營(yíng)養(yǎng)和健康的追求就具有十分重要的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種植物乳桿菌X7021的應(yīng)用，用于通過發(fā)酵豆乳降解豆乳中的嘌呤，以克服現(xiàn)有技術(shù)中的豆乳嘌呤含量高，痛風(fēng)患者食用后會(huì)加劇痛風(fēng)癥狀的缺陷，能夠有效降解豆乳中的嘌呤，且能保持豆乳良好的口感。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種植物乳桿菌X7021的應(yīng)用，用于通過發(fā)酵豆乳降解豆乳中的嘌呤，其中，所述植物乳桿菌X7021的保藏編號(hào)為：CCTCC NO:M2015039。
所述嘌呤包括黃嘌呤、腺嘌呤、鳥嘌呤和次黃嘌呤。
所述發(fā)酵豆乳包括如下工藝步驟：
1)將植物乳桿菌X7021凍干菌粉取出解凍，按2-6％的體積比接種至滅菌的MRS培養(yǎng)基中，置于37℃，200rpm條件下培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)取出，得到活化菌液；
2)將步驟1)的活化菌液按照2-6％的體積比接種至滅菌豆乳中，于33-42℃靜置發(fā)酵6-12h，0-10℃條件下后熟2-48h，得到發(fā)酵豆乳。
優(yōu)選地，所述步驟2)中的所述活化菌液的接種體積比為5％。
優(yōu)選地，所述步驟3)中的所述發(fā)酵溫度為40℃。
優(yōu)選地，所述步驟3)中的所述發(fā)酵時(shí)間為9h。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
本發(fā)明的植物乳桿菌X7021應(yīng)用于豆乳發(fā)酵，能有效降解豆乳中的嘌呤含量，制備出的功能性豆乳嘌呤含量低且口感良好，能夠滿足廣大消費(fèi)者尤其是痛風(fēng)患者對(duì)營(yíng)養(yǎng)和健康的追求，具有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。
附圖說明
圖1為采用本發(fā)明的經(jīng)植物乳桿菌X7021發(fā)酵的豆乳及未發(fā)酵的豆乳中的嘌呤含量的比較圖。
保藏說明
本發(fā)明的植物乳桿菌X7021(Lactobacillus plantarum X7021)菌株，又名植物乳桿菌S1L12(Lactobacillus plantarum S1L12)，已于2015年1月16日保存在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，簡(jiǎn)稱CCTCC)，保藏地址：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2015039。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限制本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明中應(yīng)用的植物乳桿菌X7021來源于臭豆腐鹵液中。
MRS培養(yǎng)基配方：10.0g蛋白胨、5.0g牛肉粉、4.0g酵母粉、20.0g葡萄糖、1.0mL吐溫80、2.0g磷酸氫二鉀、5.0g乙酸鈉、2.0g檸檬酸三銨、0.2g硫酸鎂、0.05g硫酸錳、16.0g瓊脂粉和1000mL蒸餾水。
本發(fā)明的其他原料和設(shè)備均為市售。
產(chǎn)酸凝乳標(biāo)準(zhǔn)：測(cè)定發(fā)酵終點(diǎn)時(shí)功能性豆乳的pH，pH越低說明體系產(chǎn)酸越多，功能性豆乳的凝乳效果越好。
實(shí)施例1：植物乳桿菌凍干菌粉的制備
1)在無菌操作臺(tái)中，從植物乳桿菌X7021甘油管中挑取少量菌液，在MRS固體平板上劃線，于37℃培養(yǎng)36–48h，從MRS固體平板上挑取單菌落接種于MRS培養(yǎng)基中，于37℃厭氧培養(yǎng)18h，然后接種于含MRS培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，厭氧發(fā)酵24h，然后6000rpm條件下離心10分鐘，收集菌體，并用pH值為6.4的無菌磷酸緩沖液洗滌2次，再次離心，得到菌泥。
2)將步驟1)制備的菌泥與經(jīng)滅菌的凍干保護(hù)劑按重量比1:2充分混合乳化，得到乳化混合液。
3)將步驟2)制備的乳化混合液在–45℃以下預(yù)凍4h以上，再放入凍干機(jī)中凍干，得到植物乳桿菌凍干菌粉。
4)經(jīng)測(cè)定，步驟3)制備的植物乳桿菌凍干菌粉中的活菌數(shù)為1.0×1010-1.5×1011CFU/g。
其中，上述步驟2)中的凍干保護(hù)劑含有20％脫脂奶粉，6％海藻糖，2.5％谷氨酸鈉，2％甘油和0.5％半胱氨酸鹽酸鹽(以上均為質(zhì)量百分比)。
實(shí)施例2：豆乳原料的制備
將非轉(zhuǎn)基因大豆打漿制成豆乳，于100℃沸水浴中煮沸滅菌30分鐘，制備成滅菌豆乳，備用。
豆乳的制備過程如下：精選非轉(zhuǎn)基因大豆→清洗→豆：水＝1:3(體積比)加蒸餾水進(jìn)行浸泡過夜→加入一定體積的85℃的熱水進(jìn)行熱磨→紗布過濾→煮30min→冷卻。
實(shí)施例3-5：植物乳桿菌X7021在發(fā)酵豆乳中的應(yīng)用
植物乳桿菌X7021用于制備發(fā)酵性豆乳，具體步驟如下：
1)將實(shí)施例1制備的植物乳桿菌X7021凍干菌粉取出解凍，按2％的體積比接種至滅菌的MRS培養(yǎng)基中，置于37℃，200rpm條件下培養(yǎng)至進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)取出，得到活化菌液。
2)將步驟1)的活化菌液按照2-6％的體積比接種至滅菌豆乳中，在33-42℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置發(fā)酵6-12h，0-10℃條件下后熟2-48小時(shí)，得到發(fā)酵豆乳。
實(shí)施例3-5的制備條件及發(fā)酵始末的pH值如表1所示：
表1
由表1可以看出，豆乳接種植物乳桿菌后，pH快速下降，且通過觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵豆乳凝乳狀況良好。
實(shí)施例6：發(fā)酵豆乳中嘌呤含量的測(cè)定
發(fā)酵豆乳中嘌呤含量的測(cè)定方法如下：
1)取實(shí)施例3-5制備的功能性豆乳的發(fā)酵上清液及未發(fā)酵豆乳的上清液各5mL，分別加入2.5mL三氟乙酸(TFA)和2.5mL甲酸，于100℃水浴中煮沸1h，冷卻，得到冷卻液。
2)步驟1)制備的冷卻液于3000rpm條件下離心10分鐘，取上清液，并用15mol/L KOH調(diào)節(jié)pH值至中性，再用1mol/L的磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.8；再經(jīng)3600rpm離心10分鐘，取上清液備用。
3)步驟2)的上清液用超純水定容至50mL，再用0.22μm的濾膜過濾，得到待檢 測(cè)液，備用。
4)采用高效液相色譜法測(cè)定四種待檢測(cè)液中的嘌呤含量。
上述步驟4)中的高效液相色譜法的具體檢測(cè)條件為：C18柱，測(cè)定波長(zhǎng)為254nm，流速為1.0mL/min，柱溫設(shè)置為40℃，進(jìn)樣量為10μL，流動(dòng)相A相為pH值為3.8，濃度為0.02mol/L的KH2PO4，B相為乙腈，洗脫程序如表2所示。
以未經(jīng)發(fā)酵的豆乳為對(duì)照組，發(fā)酵豆乳中嘌呤含量經(jīng)檢測(cè)并計(jì)算為降解率，結(jié)果如表3所示。
表2高效液相色譜洗脫程序
表3豆乳中的嘌呤降解率的比較
由表3可以看出，實(shí)施例3-5中豆乳的嘌呤均有降解，其中豆乳中含量較高的黃嘌呤的降解率可高達(dá)70％，含量最高的鳥嘌呤的降解率可達(dá)到約40％，說明植物乳桿菌X7021具有降低豆乳中嘌呤含量的功效。實(shí)施例4在較少的接種量，較低的發(fā)酵溫度和較短的發(fā)酵時(shí)間下能夠達(dá)到最佳發(fā)酵效果和顯著嘌呤降低率。
實(shí)施例7：植物乳桿菌X7021發(fā)酵豆乳的感官評(píng)價(jià)
將植物乳桿菌X7021菌株用于制備發(fā)酵豆乳，具體步驟如下：
1)將實(shí)施例1制備的植物乳桿菌X7021取出解凍，按5％的體積比接種至滅菌的MRS培養(yǎng)基中，置于37℃，200rpm條件下培養(yǎng)至進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)取出，得到活化菌液。
2)將步驟1)的活化菌液按照5％的體積比接種至滅菌豆乳中，40℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置發(fā)酵9h，4℃條件下后熟1至14天，得到發(fā)酵豆乳。后熟期內(nèi)每天取出20個(gè)樣品進(jìn)行感官評(píng)價(jià)。
經(jīng)觀察，制備的發(fā)酵豆乳凝乳狀況良好。
隨機(jī)選取20人作為發(fā)酵豆乳樣品的受試人群，分別對(duì)樣品的顏色，顆粒感，豆腥味，香氣，凝乳程度，粘度，甜味，鮮味等指標(biāo)進(jìn)行1到5分的評(píng)價(jià)，其中1分表示及其輕微；2分表示輕微；3分表示中等；4分表示強(qiáng)；5分表示極強(qiáng)。同時(shí)對(duì)發(fā)酵豆乳作綜合口感評(píng)價(jià)，綜合評(píng)價(jià)為1-5級(jí)，1級(jí)表示很難吃，2級(jí)表示難吃，3級(jí)表示中等，4級(jí)表示好吃，5級(jí)表示很好吃，平均評(píng)價(jià)結(jié)果如表4所示。
表4發(fā)酵豆乳的感官評(píng)價(jià)
由表4可以看出，采用植物乳桿菌X7021發(fā)酵的豆乳，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)酵開始時(shí)的豆腥味得以緩解，實(shí)驗(yàn)人群對(duì)發(fā)酵豆乳的可接受度和好感度總體逐漸增強(qiáng)，發(fā)酵豆乳的綜合口感良好。
綜上所述，本發(fā)明的植物乳桿菌X7021應(yīng)用于豆乳發(fā)酵，制備出的發(fā)酵豆乳口感良好，能夠滿足廣大消費(fèi)者尤其是痛風(fēng)患者對(duì)營(yíng)養(yǎng)和健康的追求，具有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。
以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)該發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。