技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)熱原的細(xì)胞模型的構(gòu)建方法和細(xì)胞模型及熱原檢測(cè)試劑盒。該細(xì)胞模型利用CRISPR/CAS9誘導(dǎo)基因組特定位置形成雙鍵斷裂，并利用同源重組修復(fù)的原理在細(xì)胞系的兩個(gè)染色體分別定點(diǎn)敲入TLR4及CD14?MD2并以綠色熒光GFP和紅色熒光RFP分別示蹤最終我們成功構(gòu)建TLR4/CD14/MD2定點(diǎn)敲入熒光示蹤細(xì)胞模型，LPS刺激細(xì)胞模型可通過ELISA、Western?Blot、質(zhì)譜及磁珠法檢測(cè)到IL?6、TNF?a細(xì)胞因子的釋放，該細(xì)胞模型穩(wěn)定性好，靈敏性高，最低檢測(cè)限可達(dá)0.005EU/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于鱟試劑法的0.025EU/mL。

技術(shù)研發(fā)人員：牛剛;譚煥然
受保護(hù)的技術(shù)使用者：牛剛
文檔號(hào)碼：201610496477
技術(shù)研發(fā)日：2016.06.29
技術(shù)公布日：2016.11.23