一種制作細(xì)胞塊的專用離心管和方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種從細(xì)胞病理學(xué)和外科病理學(xué)標(biāo)本中制 作細(xì)胞塊的專用離心管和制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)胞病理學(xué)通過分析細(xì)胞或者小的細(xì)胞團(tuán)診斷多種疾病和評(píng)估健康狀況。
[0003] 最常用的細(xì)胞病理學(xué)技術(shù)是細(xì)胞涂片（pap smear)。細(xì)胞涂片是將細(xì)胞或小的細(xì) 胞團(tuán)涂布于玻片上，用診斷試劑染色后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)從而對(duì)多種疾病做出診 斷或者評(píng)估健康狀況。細(xì)胞涂片方法有明顯的局限性，主要表現(xiàn)在：細(xì)胞涂片不能復(fù)制，一 旦細(xì)胞涂片用一種診斷試劑染色以后，難以同時(shí)再進(jìn)行另外的染色和檢測(cè)；難以進(jìn)行免疫 組化和分子病理等檢測(cè)；血液、蛋白沉淀物、粘液干擾以及細(xì)胞堆積等因素使細(xì)胞的形態(tài)和 結(jié)構(gòu)不清楚；細(xì)胞在制片過程中因受力扭曲變形難于判讀；不能長(zhǎng)期保存等。
[0004] 細(xì)胞蠟塊（cell block)是將檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)過脫水、石蠟包埋等程序后制作而成。細(xì) 胞蠟塊經(jīng)切割制作成細(xì)胞切片，進(jìn)一步染色后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。與細(xì)胞涂片相比，細(xì)胞蠟塊 有許多優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞不變形，結(jié)構(gòu)清楚，易于觀察判讀；能夠像活檢組織切片那樣清楚觀察細(xì) 胞的排列，因此，也被稱作微活檢；細(xì)胞塊能夠切出多張細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)的切片進(jìn)行分析； 易于進(jìn)行特殊染色、免疫細(xì)胞化學(xué)染色以及分子病理檢測(cè)等；能夠長(zhǎng)期保存，供進(jìn)一步診斷 和研宄用。
[0005]有許多種方法制作細(xì)胞蠟塊，傳統(tǒng)的方法是用普通的離心管離心沉淀以后，傾倒 去上清液，然后取出沉渣，再用常規(guī)病理技術(shù)方法制作成細(xì)胞蠟塊。也有一些方法對(duì)傳統(tǒng)方 法進(jìn)行改進(jìn)。但這些現(xiàn)有的方法都有不同的缺陷，其中最明顯的缺陷是：不適于在細(xì)胞或細(xì) 胞團(tuán)數(shù)量少的情況下制備細(xì)胞塊，因此，臨床上的有一部分標(biāo)本因細(xì)胞數(shù)量少而無法制作 成細(xì)胞蠟塊，不能對(duì)患者做出明確診斷；另外，目的細(xì)胞(病變細(xì)胞）在細(xì)胞蠟塊中的位置分 散而不確定，切片時(shí)難以切割到病變細(xì)胞，或者細(xì)胞在切片上的分布面小，密度低；蠟塊大 小、形狀不規(guī)則等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種制作細(xì)胞塊的專用離心管和制作方法。
[0007] -種制作細(xì)胞塊的專用離心管，由離心管和兩個(gè)離心管蓋構(gòu)成。離心管是兩端開 口，圓柱形中空管，離心管兩端的外表層帶有外螺紋。離心管蓋是密封型蓋，平底(細(xì)胞分布 在一個(gè)平面上的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ))，底部有密封圈（墊)，內(nèi)側(cè)壁表層設(shè)有內(nèi)螺紋，能夠與離心管兩 端外螺紋擰緊咬合，防止液體滲出，形成密閉的圓柱形空間。設(shè)計(jì)成一組內(nèi)外徑不相同的離 心管，離心管內(nèi)徑從外徑一般在不超過20mm范圍內(nèi)變化；可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)成不 同長(zhǎng)度，通常60~80mm比較合適。管壁厚度l~2mm。不同規(guī)格離心管能夠滿足不同細(xì)胞數(shù) 量制作細(xì)胞塊的需要，內(nèi)徑2~5mm的離心管特別適用于臨床微量細(xì)胞標(biāo)本或者分離、培養(yǎng) 獲得的微量細(xì)胞制作細(xì)胞塊。管壁厚度可以根據(jù)需要增加，以達(dá)到增強(qiáng)保溫效果的目的，能 夠使基質(zhì)較長(zhǎng)時(shí)間在室溫中保持液態(tài)。大離心管和小離心管能夠套疊在一起，在操作和離 心時(shí)，大離心管作為小離心管的支架，能夠使小離心管保持直立。離心管由玻璃或透明塑料 制成，瓶蓋由透明塑料制成，便于對(duì)離心后細(xì)胞所處位置和基質(zhì)情況進(jìn)行觀察。
[0008]與該專用離心管配合使用的是細(xì)胞基質(zhì)材料，許多種物質(zhì)可以作為細(xì)胞基質(zhì)，其 中在分子生物學(xué)中常用的低熔點(diǎn)瓊脂糖能夠作為該方法有效的細(xì)胞基質(zhì)。選用熔點(diǎn)高于石 蠟的熔點(diǎn)、凝膠溫度接近室溫的低熔點(diǎn)瓊脂糖。這樣，在將細(xì)胞塊制作成細(xì)胞蠟塊的過程 中，即在脫水、透明、浸蠟、包埋等過程中細(xì)胞塊不會(huì)熔化；凝膠溫度接近室溫，熔化基質(zhì)余 熱能夠使基質(zhì)在室溫中長(zhǎng)時(shí)間處于液態(tài)，離心才夠有效將細(xì)胞富集到一個(gè)平面上。低熔點(diǎn) 瓊脂糖的熔點(diǎn)溫度在60~70°C，凝膠溫度在15~35°最為合適。過高的凝膠溫度，則需要在 離心過程中使用加熱或保溫措施，防止液態(tài)基質(zhì)凝固成固態(tài)，使方法變得復(fù)雜。
[0009]用專用離心管和基質(zhì)材料能夠方便地制作細(xì)胞塊?，F(xiàn)在以低熔點(diǎn)瓊脂糖作為細(xì)胞 基質(zhì)材料為例子加以說明。將低熔點(diǎn)瓊脂糖用pH=7. 4的磷酸鹽緩沖液配制成1%的瓊脂糖 (常用的濃度為1[3%)，加熱完全溶解后，取內(nèi)徑為5mm的離心管，直立在桌面或者離心管 架上，擰下上端的離心管蓋，將基質(zhì)分裝到離心管中，每管lmL，擰上離心管蓋。裝有基質(zhì)的 離心管可以在4°冰箱中長(zhǎng)期保存?zhèn)溆??；|(zhì)的使用量是根據(jù)細(xì)胞數(shù)量多少和選擇的離心 管規(guī)格確定，細(xì)胞數(shù)量多時(shí)應(yīng)該適當(dāng)增加細(xì)胞基質(zhì)材料的使用量。
[0010] 制作細(xì)胞塊時(shí)，將帶基質(zhì)材料的離心管放入烤片機(jī)中，溫度調(diào)至高于基質(zhì)的熔點(diǎn) 溫度(如70°C)以上，加熱20分鐘以上，使固態(tài)的基質(zhì)變成液態(tài)。室溫較低時(shí)，應(yīng)該增加熔 化基質(zhì)的溫度(如80°C)，以便在室溫中基質(zhì)有較長(zhǎng)的時(shí)間不會(huì)凝固，能夠從容操作和離心。
[0011] 為了在切片時(shí)觀察細(xì)胞所處位置，標(biāo)記細(xì)胞也是重要的步驟。用一滴伊紅將細(xì)胞 或組織碎肩（來自外科標(biāo)本）標(biāo)記上顏色。擰下上端的離心管蓋，將細(xì)胞懸液約0. 5mL加入 液態(tài)基質(zhì)上表面上，擰上離心管蓋，顛倒離心管混均；或者不混均，直接離心。立即用水平離 心機(jī)1000-2000rpm離心2~5分鐘，將細(xì)胞富集到基質(zhì)最底層的一個(gè)平面上。另外的方法還 包括，將細(xì)胞懸液加到離心管固態(tài)基質(zhì)的上面，將離心管垂直放入烤片機(jī)中，70°C以上溫度 加熱20分鐘，使基質(zhì)變成液態(tài)，離心使細(xì)胞通過膠墊(層）后，富集到膠的最底層的平面上。 同時(shí)細(xì)胞能夠與蛋白質(zhì)沉淀物、粘液等分離。取出離心管，垂直放于4°C冰箱中15min以上， 使基質(zhì)重新凝固變成固態(tài)。
[0012] 取出細(xì)胞塊方法也是本項(xiàng)發(fā)明的關(guān)鍵步驟。待基質(zhì)凝固以后，擰下離心管兩端的 離心管蓋，如果離心管內(nèi)徑< 5mm時(shí)，用氣體加壓原理推出帶有細(xì)胞層的基質(zhì)端，使用實(shí)驗(yàn) 室中的洗耳球能夠方便地完成操作。離心管內(nèi)徑>5_時(shí)用活塞原理推出帶有細(xì)胞層的基 質(zhì)端。用刀片切下帶有細(xì)胞層部分的固體基質(zhì)，通常的厚度為2~3_，即制作成高質(zhì)量的細(xì) 胞塊。細(xì)胞塊通過常規(guī)的病理技術(shù)方法制作成細(xì)胞蠟塊，再制作細(xì)胞切片。也可以通過冰 凍切片方法直接制作成細(xì)胞切片。
[0013] 該制作細(xì)胞塊的方法應(yīng)用范圍廣泛，適用于所有臨床細(xì)胞學(xué)標(biāo)本、部分外科方法 獲得的少量組織碎肩（不能夠用常規(guī)方法制作組織切片)、培養(yǎng)的細(xì)胞、