高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物基因工程領(lǐng)域，公開了一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法，包括：構(gòu)建表達(dá)HttQ蛋白的植物表達(dá)載體；利用所述植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，獲得含有HttQ基因的植物細(xì)胞。本發(fā)明所述方法制備的植物細(xì)胞模型，具有高通量篩選特性、操作簡單、成本低、且篩選有效，彌補(bǔ)了原核生物、單細(xì)胞真核生物以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞模型的不足。與人工合成的polyQ多肽相比較，可大大降低其篩選成本。
【專利說明】高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物基因工程領(lǐng)域，尤其涉及高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]亨廷頓病(Huntington’s Disease, HD)是一種人類常染色體顯性遺傳的神經(jīng)退行性疾病，主要發(fā)生在中老年人群，患者的行為能力和認(rèn)知水平障礙。該疾病的發(fā)生，不僅給患者帶來身心的痛苦，導(dǎo)致患者的死亡，而且給患者的家庭帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。隨著老齡化社會(huì)的到來，患亨廷頓疾病的老年人群的比例也在增大，因此干預(yù)、緩解亨廷頓疾病的發(fā)生及發(fā)展，有著十分重要的意義。
[0003]現(xiàn)已查明，亨廷頓病是由HD基因突變，即HD基因第一外顯子中CAG重復(fù)序列異常擴(kuò)增，其表達(dá)產(chǎn)物一亨廷頓蛋白(huntingtin, HttQ)氨基端的多聚谷氨酰胺(PolyQ)異常延伸導(dǎo)致的。正常情況下 ，人表達(dá)的正常的HttQ蛋白含PolyQ的長度少于35個(gè)谷氨酰胺，正常的HttQ蛋白可彌散分布在神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)，并不引起人的發(fā)病。然而，在患者體內(nèi)表達(dá)的異常HttQ蛋白的PolyQ長度超出一定閾值，即> 35，其表達(dá)產(chǎn)物(HttQ蛋白)發(fā)生異常聚集，進(jìn)而對神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生毒性而使患者發(fā)病。在HD患者和HD動(dòng)物模型的腦組織(或神經(jīng)元)內(nèi)，突變的HttQ蛋白聚集形成了淀粉樣斑塊或形成包涵體。可見，HttQ蛋白中的PolyQ長度與患者發(fā)病年齡相關(guān)。PolyQ在正常人群中短于35個(gè)，在HD患者中突變Htt的PolyQ長度超過36個(gè)。在HD成年患者中約為40~50個(gè)，老年患者中則> 55個(gè)。
[0004]亨廷頓病的發(fā)生與亨廷頓蛋白(HttQ)內(nèi)的多聚谷氨酰胺(PolyQ)長度、多肽的構(gòu)象變化(形成β -片層)、形成的多聚體及其在神經(jīng)元內(nèi)形成的淀粉樣斑塊沉淀直接相關(guān)。亨廷頓蛋白(HttQ)內(nèi)多聚谷氨酰胺(PolyQ)長度變化是引起亨廷頓疾病發(fā)病的重要因素之一。因此，以HttQ為靶點(diǎn)，獲得具有抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)及先導(dǎo)性藥物，對預(yù)防和干預(yù)亨廷頓疾病的發(fā)生及發(fā)展有重要意義。
[0005]從大量天然產(chǎn)物或化合物文庫中獲得抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)通常采用以下幾種模型，如體外模型、Ε.coli模型、酵母模型、哺乳動(dòng)物細(xì)胞模型及果蠅、線蟲和哺乳動(dòng)物模型等。在實(shí)踐中，這些模型顯示出各自的優(yōu)點(diǎn)和不足。
[0006]如，利用HttQ蛋白的體外聚集模型可以篩選出抗HttQ蛋白聚集的活性分子。Heiser V等利用聚集的HttQ51蛋白不溶于SDS的特性，采用自動(dòng)濾過阻滯系統(tǒng)對數(shù)萬種化合物文庫進(jìn)行初篩，從中獲得了一些可減緩HttQ51聚集的化合物或天然產(chǎn)物。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，體外實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)活性的部分化合物在細(xì)胞模型中未表現(xiàn)出抗HttQ51聚集的作用，有的化合物甚至表現(xiàn)出細(xì)胞毒性?？梢?，利用體外模型篩選出可直接抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)，還需在細(xì)胞模型或動(dòng)物模型上進(jìn)行進(jìn)一步的活性鑒定。應(yīng)當(dāng)指出的是，要獲得大量商品HttQ蛋白，需花費(fèi)高昂的費(fèi)用；即使可以通過體外表達(dá)HttQ蛋白，也需要重組菌發(fā)酵、蛋白質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá)及冗長的純化工作，工作量大，所涉及的費(fèi)用高。[0007]利用細(xì)胞模型篩選抗HttQ蛋白聚集的先導(dǎo)藥物，成為首選的模型。近年來，一些科學(xué)家利用大腸桿菌繁殖能力高、繁殖周期短、遺傳操作簡單的特征，構(gòu)建了 EGFP-HttQ蛋白表達(dá)、聚集的大腸桿菌模型，利用EGFP-HttQ融合蛋白的綠色熒光，高通量的篩選抗HttQ蛋白聚集的先導(dǎo)性化合物。由于導(dǎo)入的HttQ蛋白含的polyQ長度大于35，表達(dá)的HttQ蛋白在大腸桿菌內(nèi)發(fā)生聚集，且重組菌的生長受到抑制。如Invernizzi G等利用E.coli模型模擬出ataxin-3 (HttQ蛋白的短肽)聚集,檢測到ataxin_3短肽的表達(dá)對大腸桿菌重組子的生長有抑制作用，由此提出了 ataxin-3短肽或HttQ聚集過程中產(chǎn)生的可溶性低聚物可對細(xì)胞產(chǎn)生毒性或有生長抑制作用。然而，尚未見到利用這種模型篩選抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)篩選的報(bào)告。酵母細(xì)胞為單細(xì)胞真核生物，具有與真核生物類似的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制，可較好的模擬HttQ蛋白在細(xì)胞中的聚集。Zhang X等將帶有報(bào)告基因的HttQ103_EGFP轉(zhuǎn)化酵母，并誘導(dǎo)該基因表達(dá)，表達(dá)后的HttQ103-EGFP蛋白在酵母細(xì)胞內(nèi)發(fā)生了聚集。他們來利用酵母重組細(xì)胞模型從含有16000種化合物的化合物庫中高通量篩選出了可減緩HttQ103聚集的四種先導(dǎo)化合物(Cl - C4)，進(jìn)一步通過ThT體外實(shí)驗(yàn)及果蠅模型驗(yàn)證了化合物C2的同系物C2-8具有很好的抑制HttQ蛋白聚集的作用。哺乳動(dòng)物細(xì)胞屬高等生物的細(xì)胞。Zhang H等在用哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行的活性研究中，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖在C0S-7細(xì)胞模型中具有明顯的多聚谷氨酰胺(polyQ)聚集抑制活性。由此可見，利用ThT體外模型和細(xì)胞模型篩選和研究抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)，成為科學(xué)家常常采用的策略。但，哺乳動(dòng)物細(xì)胞模型進(jìn)行抗亨廷頓疾病的研究，成本較高，不能用于高通量活性物質(zhì)的篩選。
[0008]果蠅和線蟲是一種多細(xì)胞模式動(dòng)物。將導(dǎo)致亨廷頓疾病基因(HttQ基因)轉(zhuǎn)入果蠅，以構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因果蠅模型也可用于篩選干預(yù)亨廷頓疾病發(fā)生的活性物質(zhì)。如Kazantsev等通過構(gòu)建果蠅模型，以此篩選出了可減緩HttQ蛋白聚集的活性的Sup3蛋白。我國學(xué)者黃澤波等也利用表達(dá)EGFP-HttQ102綠色熒光蛋白的秀麗線蟲，篩選出了可間接抑制HttQ150蛋白聚集的黃芪多糖PS5。小鼠有著與人類高度同源的生物學(xué)特性。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得患亨廷頓疾病的小鼠品系。通過對其藥物喂養(yǎng)，觀察轉(zhuǎn)基因鼠的行為學(xué)、解剖學(xué)和生物學(xué)特性，篩選出干預(yù)小鼠亨廷頓疾病發(fā)生的藥物。Southwell AL等通過轉(zhuǎn)基因鼠模型，證明了HttQ蛋白的表達(dá)在2型亨廷頓舞蹈癥發(fā)病中起到了關(guān)鍵的作用，由此提出干預(yù)HttQ蛋白聚集可作為干預(yù)和治療亨廷頓疾`病的祀點(diǎn)。Venkatraman P等證實(shí)雷帕霉素能減少細(xì)胞中PolyQ蛋白的聚集，并且減輕HD小鼠模型中的神經(jīng)毒性?？梢?，模式動(dòng)物模型、特別是哺乳動(dòng)物模型中是研究藥理、藥效的理想模型。如在小鼠體內(nèi)證明活性物質(zhì)對亨廷頓疾病的干預(yù)和抑制作用，則可為先導(dǎo)藥物臨床試驗(yàn)打下重要基礎(chǔ)。然而，在哺乳動(dòng)物模型上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)需要的實(shí)驗(yàn)周期長，培養(yǎng)動(dòng)物需要較多的人力、物力和實(shí)驗(yàn)條件，最重要的一點(diǎn)是，整體動(dòng)物模型不適合于活性化合物的高通量篩選。
[0009]到目前為止，還未見將人亨廷頓疾病相關(guān)蛋白基因(HttQ基因)轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞中的?艮告。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法。
[0011]一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法，包括:[0012]構(gòu)建表達(dá)HttQ蛋白的植物表達(dá)載體；
[0013]利用所述植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，獲得含有HttQ基因的植物細(xì)胞。
[0014]所述高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法,進(jìn)一步還包括:轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞篩選。
[0015]所述植物表達(dá)載體通過農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞。
[0016]適于本發(fā)明轉(zhuǎn)染的農(nóng)桿菌包括但不限于，例如:根癌農(nóng)桿菌細(xì)胞LBA4404、EHA105.GV3101 等。
[0017]本發(fā)明首次提出構(gòu)建亨廷頓疾病蛋白(HttQ蛋白)的植物細(xì)胞模型，即利用DNA重組技術(shù)，構(gòu)建EGFP-HttQ23和EGFP_HttQ52表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌浸染法，將上述融合蛋白基因轉(zhuǎn)化煙草懸浮細(xì)胞(BY-2)。在激光共聚焦顯微鏡(confocal)觀察，可知顯示綠色熒光的EGFP-HttQ23和EGFP_HttQ52蛋白在BY-2細(xì)胞中表達(dá)。其中，EGFP_HttQ23融合蛋白在轉(zhuǎn)基因煙草懸浮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均勻分布，而EGFP-HttQ52蛋白在轉(zhuǎn)基因煙草懸浮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中形成聚集呈點(diǎn)狀分布。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，EGFP-HttQ52蛋白在轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞中的聚集率為100%。與含EGFP-HttQ23重組細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)EGFP_HttQ52基因的植物細(xì)胞生長速率要緩慢，表明在轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞中EGFP-HttQ52蛋白的表達(dá)及聚集對宿主細(xì)胞的生長明顯的抑制。
[0018]利用24-孔板培養(yǎng)法，將轉(zhuǎn)EGFP_HttQ52基因的植物細(xì)胞在24-孔板進(jìn)行培養(yǎng)，并將不同濃度的HttQ蛋白聚集抑制劑(EGCG，茶多酚)加入轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞的培養(yǎng)基中。經(jīng)過一定時(shí)間的培養(yǎng)，將24-孔板中的樣品取出測量其密實(shí)體積，可見在培養(yǎng)基中加入EGCG的轉(zhuǎn)EGFP-HttQ52基因煙草細(xì) 胞生長緩慢現(xiàn)象得到明顯的恢復(fù)。其中，加入200uM、300uM和500uM EGCG的轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞的生長恢復(fù)達(dá)顯著性差異。
[0019]本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型。
[0020]一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型，所述植物細(xì)胞含有表達(dá)HttQ蛋白的植物表達(dá)載體。
[0021]所述植物表達(dá)載體為PCAMBIA1302-EGFP-HttQ。
[0022]適用于本發(fā)明的植物表達(dá)載體包括但不限于雙元農(nóng)桿菌表達(dá)載體、可用于植物微彈轟擊的載體等。
[0023]使用EGFP-HttQ構(gòu)建植物表達(dá)載體時(shí)，在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前可加上任何一種組成型啟動(dòng)子，如花椰菜花葉病毒(CAMV) 35S啟動(dòng)子、玉米的泛素啟動(dòng)子(Ubiquitin);或加入任何一種誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如擬南芥rd29A啟動(dòng)子和葡萄白藜蘆醇合酶基因Vstl啟動(dòng)子；上述啟動(dòng)子可單獨(dú)使用或與其它植物啟動(dòng)子結(jié)合使用；此外，使用本發(fā)明的基因構(gòu)建植物表達(dá)載體時(shí)，還可使用增強(qiáng)子，包括翻譯增強(qiáng)子或轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，這些增強(qiáng)子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個(gè)序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。
[0024]為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植物進(jìn)行鑒定及篩選，可對所用植物表達(dá)載體進(jìn)行加工，如加入可在植物中表達(dá)的編碼可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因(GUS基因、螢光素酶基因等)、具有抗性的抗生素標(biāo)記物(慶大霉素標(biāo)記物、卡那霉素標(biāo)記物等)或是抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因(如抗除莠劑基因)等。
[0025]本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種植物細(xì)胞模型的應(yīng)用。
[0026]抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的篩選方法，包括:
[0027]培養(yǎng)含有HttQ基因的植物懸浮細(xì)胞；
[0028]將待篩選的活性物質(zhì)加入含有上述植物懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基中；
[0029]檢測植物懸浮細(xì)胞的密實(shí)體積；
[0030]判斷抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)。
[0031]所述活性物質(zhì)為化合物或天然產(chǎn)物，或餾分等。
[0032]本發(fā)明以構(gòu)建的表達(dá)EGFP_HttQ52融合蛋白的煙草懸浮細(xì)胞模型，將其在24-孔板上進(jìn)行培養(yǎng)，將待篩選的化合物、或天然產(chǎn)物配置成適當(dāng)?shù)臐舛燃尤肱囵B(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后檢測24-孔板每個(gè)井中的煙草懸浮細(xì)胞的體積；以加入EGCG樣品的為陽性對照，可用于高通量篩選抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)及先導(dǎo)化合物，如圖1所示。
[0033]本發(fā)明所述植物細(xì)胞模型具有高通量篩選特性、操作簡單、成本低、且篩選有效，彌補(bǔ)了原核生物、單細(xì)胞真核生物以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞模型的不足。與人工合成的polyQ多肽相比較，可大大降低其篩選成本。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0034]圖1用表達(dá)EGFP_HttQ52融合蛋白的煙草懸浮細(xì)胞模型高通量篩選抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)結(jié)果示意圖，化合物1，2，3代表待篩選的不同的化合物，每行為同一種化合物，每種化合物用不同濃度進(jìn)行篩選，濃度I和濃度2分別代表兩種不同的濃度；
[0035]圖2重組質(zhì)粒PCAMBIA1302-EGFP-HttQ23/52的酶切位點(diǎn)示意圖，其中TL、TR分別為載體的左、右邊界，T為載體的終止序列，35S為CaMV35S啟動(dòng)子；
[0036]圖3轉(zhuǎn)EGFP-HttQ基因細(xì)胞的RNA提取電泳圖，T1、T2、T3為EGFP_HttQ23的三個(gè)細(xì)胞團(tuán)，τ’ 1、T’ 2、Τ’ 3為EGFP-HttQ52三個(gè)的細(xì)胞團(tuán)；
[0037]圖4BY-2的內(nèi)參基因Actin9及目的基因HttQ23、HttQ52的RT-PCR結(jié)果電泳圖，Tl、T2、T3 為 EGFP-HttQ23 三個(gè)細(xì)胞團(tuán)，T’ 1、T’ 2、T’ 3 為 EGFP_HttQ52 三個(gè)細(xì)胞團(tuán)；
[0038]圖5在轉(zhuǎn)基因煙草懸浮細(xì)胞中表達(dá)的EGFP-HttQ23/EGFP-HttQ52融合蛋白的分布圖，注:標(biāo)尺為20 μ m ；
[0039]圖6轉(zhuǎn)EGFP-HttQ23和EGFP_HttQ52基因細(xì)胞在24孔板內(nèi)的生長變化圖；
[0040]圖7A利用24-孔板培養(yǎng)法，加入不同濃度的EGCG對轉(zhuǎn)EGFP_HttQ52基因細(xì)胞生長的影響；
[0041]圖7B是加入不同濃度的EGCG對表達(dá)EGFP_HttQ52蛋白的聚集的影響；
[0042]圖7C加入300 μ M EGCG后，EGFP_HttQ52融合蛋白的分布情況；
[0043]注:圖7A 至圖 7C 中標(biāo)尺為 20 μ m，* 為 ρ〈0.05，# 為 ρ〈0.01。
【具體實(shí)施方式】
[0044]以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)路線做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0045]本發(fā)明用到的實(shí)驗(yàn)材料:
[0046]大腸桿菌菌株Τ0Ρ10，根癌農(nóng)桿菌LBA4404，煙草懸浮細(xì)胞(Nicotianatabacumcv.bright yellow-2, BY-2),大腸桿菌重組質(zhì)粒 pGEX_5X/HttQ23/52、PCAMBIA1302-EGFP。
[0047]pGEX-5X/HttQ23/52質(zhì)粒構(gòu)建方法如下:將HttQ23和HttQ52基因進(jìn)行BamH I和EcoR I雙酶切后，連接至經(jīng)同樣雙酶切的PGEX-5X-1載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得pGEX_5X/HttQ23/52 質(zhì)粒，pGEX-5X-l 購自 GE Healthcare 公司。
[0048]HttQ23基因序列如SEQ ID NO:1所示，具體為:
[0049]
ggatccatgg cgaccctgga aaagctgatg aaggccttcg agtccctcaa gtcctcccag 60
cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag 120
cagcagccgc caccgccgcc gccgccgccg ccgcctcctc agcttcctca gccgccgccg 180
caggcacagc cgctgctacc tcagccgcag ccgcccccgc cgccgccccc gccgccaccc 240
[0050]
ggcccggctg tggctgagga gccgctgcac cgaccgtgag aattc285
[0051]HttQ52基因序列如SEQ ID NO:2所示，具體為:
[0052]
ggatccatgg cgaccctgga aaagctgatg aaggccttcg agtccctcaa gtcctcccag 60
cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag 120
cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag 180
cagcagcagc` agcagcagca gcagcagcaa cagccgccac cgccgccgcc gccgccgccg 240
cctcctcagc ttcctcagcc gccgccgcag gcacagccgc tgctacctca gccgcagccg 300
cccccgccgc cgcccccgcc gccacccggc ccggctgtgg ctgaggagcc gctgcaccga 360
ccgtgagaat tc372
[0053]pCAMBIA1302-EGFP質(zhì)粒構(gòu)建方法如下:以質(zhì)粒pEGFP-Cl為模板，以EGFP_F(5’-CCATGGATGGTGAGCAAGGGCGAGGA-3’)和 EGFP-R(5，-GGTCACCTCAAGATCTCTTGTACAGCTCGTCCA-3’)為引物，利用PCR方法擴(kuò)增EGFP基因片段。切膠并純化基因片段，經(jīng)Nco I和BstP I酶切后，連接至經(jīng)相同雙酶切的PCAMBIA1302載體。轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得pCAMBIA1302_EGFP質(zhì)粒。
[0054]EGFP基因序列如SEQ ID NO:3所示，具體為:
[0055]
【權(quán)利要求】
1.一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法，包括: 構(gòu)建表達(dá)HttQ蛋白的植物表達(dá)載體； 利用所述植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，獲得含有HttQ基因的植物細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法，進(jìn)一步還包括:轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞篩選。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法，其特征在于:所述植物表達(dá)載體通過農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一項(xiàng)所述的一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型的建立方法，其特征在于:所述表達(dá)HttQ蛋白的植物表達(dá)載體為pCAMBIA1302-EGFP-HttQo
5.一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型，其特征在于，所述植物細(xì)胞含有表達(dá)HttQ蛋白的植物表達(dá)載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種高通量篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的植物細(xì)胞模型，其特征在于:所述植物表達(dá)載體為pCAMBIA1302-EGFP-HttQ。
7.權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述方法建立的植物細(xì)胞模型在篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求5-6任意一項(xiàng)所述細(xì)胞模型在篩選抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)中的應(yīng)用。
9.抗亨廷頓疾病活性物`質(zhì)的篩選方法，包括: 培養(yǎng)含有HttQ基因的植物懸浮細(xì)胞； 將待篩選的活性物質(zhì)加入含有上述植物懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基中； 檢測植物懸浮細(xì)胞的密實(shí)體積； 判斷抗HttQ蛋白聚集的活性物質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的抗亨廷頓疾病活性物質(zhì)的篩選方法，其特征在于:所述活性物質(zhì)為化合物或天然產(chǎn)物。
【文檔編號】C12N15/82GK103525858SQ201310454085
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月29日
【發(fā)明者】鄭易之, 劉國寶, 胡躍明, 劉昀 申請人:深圳大學(xué)