本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取領域，涉及從紅景天中提取紅景天苷的方法，特別是涉及一種采用高速逆流色譜分離與重結晶聯(lián)用的紅景天苷的生產(chǎn)方法。

背景技術：

紅景天(Rhodiola)為景天科紅景天屬多年生草本或亞灌木植物，是珍稀藥用植物之一，被譽為“高原人參”。該屬植物在全世界共約90種,在我國分布70多種,主產(chǎn)于華北、東北、西南、西北和華中等地區(qū)。其化學成分主要有黃酮類、酪醇、紅景天苷(Salidroside) 、谷甾醇、有機酸、揮發(fā)油、多糖、脂肪、蛋白質等。紅景天苷為紅景天根莖提取物，經(jīng)科學研究及臨床應用證明，紅景天苷具有增強運動耐力，抗氧化、抗糖尿病、抗肺炎及哮喘，抗癌等功效。天然植物紅景天中含有大量的紅景天苷，由于其原料紅景天來源較廣，從中提取紅景天苷已取得了可喜進展。

專利CN021004897公開了一種經(jīng)過兩次高速逆流色譜提取紅景天苷的方法，提取產(chǎn)物的純度較高，但是收率較低。專利CN201310463903.9公開了一種從紅景天中提取紅景天苷的方法，采用大孔樹脂純化與模擬移動床純化聯(lián)用的方式進行分離純化，雖然提取產(chǎn)物的純度較高，但操作過程較復雜，收率也較低。

高速逆流色譜（HSCCC）是20世紀80年代以來在液液分配色譜的基礎上發(fā)展起來的新型分離技術，無需固態(tài)載體，克服了傳統(tǒng)分離技術對樣品組分的不可逆吸附作用，節(jié)省了材料和溶媒消耗，樣品回收率高，同時分離量大，周期短，被廣泛應用于生物、醫(yī)藥領域。

為了克服現(xiàn)有方法的缺陷，本發(fā)明采用連續(xù)逆流提取法，并用高速逆流色譜與重結晶聯(lián)用的方法進行純化，提供了一種工藝簡單，收率和純度都比較高的紅景天苷的生產(chǎn)方法，具有良好的應用前景。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種工藝簡單，收率和純度高的紅景天苷的生產(chǎn)方法。

本發(fā)明目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的, 本發(fā)明所述的紅景天苷純品是指HPLC純度在99%以上的紅景天苷。

一種從紅景天中提取紅景天苷的方法，包括如下步驟：

（1）將紅景天干燥粉碎后，加入PH=3.8-4.5檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入生物酶進行酶解，得酶解液；其中緩沖溶液用量為原料紅景天重量的5-10倍；

（2）將步驟（1）的酶解液轉移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入重量為紅景天原料2-5倍的水，回流提取，過濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物；

（3）將步驟（2）所得的紅景天苷粗提物，用高速逆流色譜法進行分離，收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷粗品；

（4）將步驟（3）得到的紅景天苷粗品用有機混合溶劑進行重結晶，得到紅景天苷純品。

作為優(yōu)選的方案：所述步驟（1）的生物酶選自纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶中兩種或三種；用量為原料的0.1-1.5%，優(yōu)選0.5-1.2%。

進一步優(yōu)選，所述的檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液的PH為4.0

進一步地，所述的高速逆流色譜法中的固定相和流動相按照如下方法制備：將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動相。

在優(yōu)選的實施例中，上述環(huán)己烷、正丁醇、甲醇、水的體積比為1.5-3.5：2.0-3.5：1.0-2.5：3.0-6.0，更優(yōu)選為3.0-3.5：2.5-3.0：1.0-2.0：3.0-4.5，最優(yōu)選3：2.5：1.5：3.5。

在優(yōu)選的實施例中，步驟（4）所述的有機混合溶劑為乙醇和乙酸乙酯的混合溶劑，進一步優(yōu)選地，乙醇和乙酸乙酯的體積比為4~8:1，最優(yōu)選5-7:1。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，有益效果在于：

1）采用高速逆流色譜法與重結晶聯(lián)用的純化方法，特別地選擇以環(huán)己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5作為高速逆流色譜的溶劑體系，以乙醇和乙酸乙酯的混合溶劑作為重結晶溶劑，使提取產(chǎn)品的純度達到99%以上，同時也大大提高了提取率。

2）本發(fā)明將生物酶結合連續(xù)逆流提取法提取紅景天苷，有助于提高提取率。

下面將結合具體的實施方式進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

具體實施方式

實施例1

將干燥的紅景天1kg粉碎后，加入5倍重量的PH=4.0檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入0.4%的纖維素酶和果膠酶（1:1），在45℃下，酶解2h后，轉移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入5kg水，回流提取，過濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物；用高速逆流色譜法進行純化，其中高速逆流色譜法中的固定相和流動相按照如下方法制備：按環(huán)己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5的比例將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動相。收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷粗品，用乙醇：乙酸乙酯=6：1的混合溶劑重結晶得紅景天苷純品13.7g，HPLC:99.67%；

實施例2

將干燥的紅景天1kg粉碎后，加入8倍重量的PH=3.8檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入0.7%的纖維素酶和果膠酶（1:1），在50℃下，酶解1.5h后，轉移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入4kg水，回流提取，過濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物；用高速逆流色譜法進行純化，其中高速逆流色譜法中的固定相和流動相按照如下方法制備：按環(huán)己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5的比例將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動相。收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷粗品，用乙醇：乙酸乙酯5：1的混合溶劑重結晶得紅景天苷純品13.1g，HPLC:99.54%；

實施例3

將干燥的紅景天1kg粉碎后，加入10倍重量的PH=4.5檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖溶液，然后加入0.4%的纖維素酶和果膠酶（1:1），在55℃下，酶解1h后，轉移至連續(xù)逆流提取罐中，并加入2kg水，回流提取，過濾，濃縮，得到紅景天苷粗提物；用高速逆流色譜法進行純化，其中高速逆流色譜法中的固定相和流動相按照如下方法制備：按環(huán)己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5的比例將環(huán)己烷、正丁醇、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動相。收集含有紅景天苷的組分，減壓蒸干，得到紅景天苷粗品，用乙醇：乙酸乙酯7：1的混合溶劑重結晶得紅景天苷純品12.8g，HPLC:99.61%；

對比例1：參照實施例1的方法進行，將環(huán)己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5用乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水為高速逆流色譜的溶劑體系，得到紅景天苷9.8g，HPLC:97.86%；

對比例2：參照實施例2的方法進行，將環(huán)己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5用氯仿-正丁醇-甲醇-水為高速逆流色譜的溶劑體系，得到紅景天苷10.6g，HPLC:97.13%；

對比例3：參照實施例1的方法進行，重結晶用乙醇溶劑替代，得到紅景天苷11.6g，HPLC:97.02%；

盡管本發(fā)明已進行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可進行各個條件的適當變化?？梢岳斫猓景l(fā)明不限于所述實施方案，而歸于權利要求的范圍，其包括所述每個因素的等同替換。