本發(fā)明涉及新的一類作為NS4B抑制劑的苯并呋喃類似物，具體涉及式(I)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

背景技術(shù)：
HCV是主要的人類病原體之一，估計(jì)全球慢性HCV感染者約1.7億，為人免疫缺陷病毒1型感染人數(shù)的5倍。慢性HCV感染者會(huì)發(fā)展成嚴(yán)重的進(jìn)行性肝病，包括肝硬化和肝細(xì)胞癌。因此，慢性HCV感染是全球患者因肝病而死亡的主要原因。目前，標(biāo)準(zhǔn)的慢性HCV感染療法是采用α-干擾素和利巴韋林與近兩年來(lái)批準(zhǔn)的其中的一個(gè)直接作用抗病毒(DAA)藥物的聯(lián)合用藥。療效雖較之前的α-干擾素和利巴韋林聯(lián)合用藥明顯提高，但仍對(duì)部分慢性HCV感染者無(wú)效，而且病毒可產(chǎn)生抗藥性。加之α-干擾素和利巴韋林有明顯的副反應(yīng)。因此，新的有效的治療慢性HCV感染的藥物是目前迫切所需的。HCV是單鏈正鏈RNA病毒。屬黃病毒科(Flaviviridaefamily)單獨(dú)的一個(gè)屬內(nèi)。黃病毒科的所有成員都是含正鏈RNA基因組的有包膜病毒粒子，該基因組通過(guò)單個(gè)不間斷開放閱讀框(ORF)的翻譯，編碼所有已知的病毒特異性蛋白。HCV基因組的核苷酸和所編碼的氨基酸序列存在相當(dāng)多的異質(zhì)性。已經(jīng)鑒定出至少6個(gè)主要的基因型，50多個(gè)亞基因型。HCV的主要基因型在全球的分布不同，雖然進(jìn)行了大量基因型對(duì)發(fā)病機(jī)制和治療作用的研究，但仍不清楚HCV遺傳異質(zhì)性的臨床重要性。HCVRNA基因組長(zhǎng)度約為9500個(gè)核苷酸，具有單個(gè)開放閱讀框，編碼單個(gè)約3000個(gè)氨基酸的多聚蛋白。在感染細(xì)胞中，該多聚蛋白在多個(gè)位點(diǎn)上被細(xì)胞蛋白酶和病毒蛋白酶切割，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白。就HCV而言，成熟非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的形成是通過(guò)兩種病毒蛋白酶實(shí)現(xiàn)的。一般認(rèn)為第一種(NS2)是金屬蛋白酶，在NS2-NS3接點(diǎn)進(jìn)行切割；第二個(gè)蛋白酶是包含在NS3(本文中亦稱為NS3蛋白酶)N端區(qū)域的絲氨酸蛋白酶，它介導(dǎo)NS3下游所有的后續(xù)切割，在NS3-NS4A切割位點(diǎn)為順式，在NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NA5B位點(diǎn)則為反式。NS4A蛋白似乎有多種功能，起NS3蛋白酶輔因子的作用，并可能協(xié)助NS3和其他病毒復(fù)制酶組分進(jìn)行膜定位。NS3蛋白還顯示出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS4B和NS5A兩個(gè)蛋白的功能尚不完全清楚，但對(duì)HCV的復(fù)制起著重要的作用。NS4B是一個(gè)穿膜蛋白，參與病毒復(fù)制復(fù)合體的形成。NS5A是一個(gè)磷酸化蛋白，參與病毒RNA的復(fù)制和病毒顆粒的形成。NS5B(亦稱HCV聚合酶)是參與HCV基因組RNA復(fù)制的依賴于RNA的RNA聚合酶。WO2013095275、WO2012122716、CN102863428A等文獻(xiàn)各自報(bào)道了一系列作為HCV抑制劑的化合物，其活性、溶解性等方面的效果有待改善。Med.Chem.Lett.2012，3，565-569報(bào)道了YA_0001，其結(jié)構(gòu)式如下所示，其活性、耐藥性、成藥性等方面有待改進(jìn)。J.Med.Chem.2014，57，2107-2120報(bào)道了下述化合物1a，7天安全研究表明該化合物有心血管毒副作用導(dǎo)致終止后續(xù)研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供式(I)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，T21選自N或C(Rt)；D21-22、L1分別獨(dú)立地選自-[C(Rd1)(Rd2)]0-2-、-C(＝O)-、-C(＝O)N(Rd3)-、-N(Rd4)-、-C(＝NRd5)-、-S(＝O)2N(Rd6)-、-S(＝O)N(Rd7)-、-O-、-S-、-C(＝O)O-、-C(＝S)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-或-N(Rd8)C(＝O)N(Rd9)-；m選自1、2、3或4；R3選自其中，T31-33分別獨(dú)立地選自N；D31-35分別獨(dú)立地選自-[C(Rd1)(Rd2)]0-2-、-C(＝O)-、-C(＝O)N(Rd3)-、-N(Rd4)-、-C(＝NRd5)-、-S(＝O)2N(Rd6)-、-S(＝O)N(Rd7)-、-O-、-S-、-C(＝O)O-、-C(＝S)-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-；R31選自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH、C(＝O)NH2，或選自任選被R01取代的C1-10烷基或雜烷基、C3-10環(huán)烴基或雜環(huán)烴基、被C3-10環(huán)烴基或雜環(huán)烴基取代的C1-10烷基或雜烷基；任選地，D33與D34之間還存在另一條連接鍵(CH2)1-3；R11-12、Rt、Rd1、Rd2分別獨(dú)立地選自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH、C(＝O)NH2，或選自任選被R01取代的C1-10烷基或雜烷基、C3-10環(huán)烴基或雜環(huán)烴基、被C3-10環(huán)烴基或雜環(huán)烴基取代的C1-10烷基或雜烷基；R01選自F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、R02；R02選自C1-10烷基、C1-10烷氨基、N，N-二(C1-10烷基)氨基、C1-10烷氧基、C1-10烷酰基、C1-10烷氧羰基、C1-10烷基磺?；?、C1-10烷基亞磺?；?、C3-10環(huán)烷基、C3-10環(huán)烷氨基、C3-10雜環(huán)烷氨基、C3-10環(huán)烷氧基、C3-10環(huán)烷基?；?、C3-10環(huán)烷氧羰基、C3-10環(huán)烷基磺?；?、C3-10環(huán)烷基亞磺?；?；“雜”表示雜原子或雜原子團(tuán)，選自-C(＝O)N(Rd3)-、-N(Rd4)-、-C(＝NRd5)-、-S(＝O)2N(Rd6)-、-S(＝O)N(Rd7)-、-O-、-S-、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-和/或-N(Rd8)C(＝O)N(Rd9)-；Rd3-d9分別獨(dú)立地選自H、OH、NH2、R02；R02任選地被R001取代；R001選自F、Cl、Br、I、CN、OH、N(CH3)2、NH(CH3)、NH2、CHO、COOH、C(＝O)NH2、三鹵代甲基、二鹵代甲基、一鹵代甲基、氨甲基、羥甲基、甲基、甲氧基、甲?；?、甲氧羰基、甲磺?；?、甲基亞磺?；?；上述任何一種情況下，R01、R001、雜原子或雜原子團(tuán)的數(shù)目分別獨(dú)立地選自0、1、2或3。本發(fā)明的一些方案中，上述D21-22、L1分別獨(dú)立地選自(CH2)0-2、-C(＝O)-或-C(＝O)NH-、-C(＝O)N(Me)-。本發(fā)明的一些方案中，上述結(jié)構(gòu)單元選自R101-103分別獨(dú)立地選自H、F、Cl、Br、I、CN、OH、SH、NH2、CHO、COOH、C(＝O)NH2，或選自任選被R01取代的C1-10烷基或雜烷基、C3-10環(huán)烴基或雜環(huán)烴基、被C3-10環(huán)烴基或雜環(huán)烴基取代的C1-10烷基或雜烷基，R01如上述所定義。本發(fā)明的一些方案中，上述R101-103分別獨(dú)立地選自F、Cl、Br、-CF3、-CHF2、CN、Me、乙基、丙基、環(huán)丙基或異丙基。本發(fā)明的一些方案中，上述結(jié)構(gòu)單元選自本發(fā)明的一些方案中，上述結(jié)構(gòu)單元選自本發(fā)明的一些方案中，上述D31-35分別獨(dú)立地選自-C(＝O)-、-O-、亞甲基、-N(CH3)-、-CH(OH)-、-CF2-；R31選自H、甲基、乙基、正丙基、異丙基。本發(fā)明的一些方案中，上述R3選自本發(fā)明的一些方案中，上述化合物選自：有關(guān)定義：除非另有說(shuō)明，本文所用的下列術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)旨在具有下列含義。一個(gè)特定的術(shù)語(yǔ)或短語(yǔ)在沒有特別定義的情況下不應(yīng)該被認(rèn)為是不確定的或不清楚的，而應(yīng)該按照普通的含義去理解。當(dāng)本文中出現(xiàn)商品名時(shí)，意在指代其對(duì)應(yīng)的商品或其活性成分。C1-10選自C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10；C3-10選自C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10。C1-10烷基或雜烷基、C3-10環(huán)基或雜環(huán)烴基、被C3-10環(huán)烴基或雜環(huán)烴基取代的C1-10烷基或雜烷基包括但不限于：C1-10烷基、C1-10烷氨基、N，N-二(C1-10烷基)氨基、C1-10烷氧基、C1-10烷?；1-10烷氧羰基、C1-10烷基磺?；?、C1-10烷基亞磺?；?、C3-10環(huán)烷基、C3-10環(huán)烷氨基、C3-10雜環(huán)烷氨基、C3-10環(huán)烷氧基、C3-10環(huán)烷基?；3-10環(huán)烷基氧羰基、C3-10環(huán)烷基磺酰基、C3-10環(huán)烷基亞磺酰基；甲基、乙基、正丙基、異丙基、-CH2C(CH3)(CH3)(OH)、環(huán)丙基、環(huán)丁基、丙基亞甲基、環(huán)丙?；⑵S氧基、三氟甲基、氨甲基、羥甲基、甲氧基、甲?；?、甲氧羰基、甲磺?；⒓谆鶃喕酋；⒁已趸?、乙?；⒁一酋；?、乙氧羰基、二甲基氨基、二乙基氨基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基；N(CH3)2，NH(CH3)，-CH2CF3，-CH2CH2CF3，-CH2CH2F，-CH2CH2S(＝O)2CH3，-CH2CH2CN，-CH2CH(OH)(CH3)2，-CH2CH(F)(CH3)2，-CH2CH2F，-CH2CF3，-CH2CH2CF3，-CH2CH2NH2，-CH2CH2OH，-CH2CH2OCH3，-CH2CH2CH2OCH3，-CH2CH2N(CH3)2，-S(＝O)2CH3，-CH2CH2S(＝O)2CH3，苯基、噻唑基、聯(lián)苯基、萘基、環(huán)戊基、呋喃基、3-吡咯啉基、吡咯烷基、1，3-氧五環(huán)基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑基、惡唑基、噻唑基、1，2，3-唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，3，4-噻二唑基、4H-吡喃基、吡啶基、哌啶基、1，4-二氧六環(huán)基、嗎啉基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基、1，3，5-三噻烷基、1，3，5-三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基或喹喔啉基；C6～12芳基、C6～12芳烷基、C6～12雜芳環(huán)或C6～12雜芳烷基；這里所采用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”，是針對(duì)那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們?cè)诳煽康尼t(yī)學(xué)判斷的范圍之內(nèi)，適用于與人類和動(dòng)物的組織接觸使用，而沒有過(guò)多的毒性、刺激性、過(guò)敏性反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥，與合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指本發(fā)明化合物的鹽，由本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的具有特定取代基的化合物與相對(duì)無(wú)毒的酸或堿制備。當(dāng)本發(fā)明的化合物中含有相對(duì)酸性的功能團(tuán)時(shí)，可以通過(guò)在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的堿與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得堿加成鹽。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機(jī)氨或鎂鹽或類似的鹽。當(dāng)本發(fā)明的化合物中含有相對(duì)堿性的官能團(tuán)時(shí)，可以通過(guò)在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的酸與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)酸鹽，所述無(wú)機(jī)酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氫根，磷酸、磷酸一氫根、磷酸二氫根、硫酸、硫酸氫根、氫碘酸、亞磷酸等；以及有機(jī)酸鹽，所述有機(jī)酸包括如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來(lái)酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸和甲磺酸等類似的酸；還包括氨基酸(如精氨酸等)的鹽，以及如葡糖醛酸等有機(jī)酸的鹽(參見Bergeetal.，″PharmaceuticalSalts″，JournalofPharmaceuticalScience66：1-19(1977))。本發(fā)明的某些特定的化合物含有堿性和酸性的官能團(tuán)，從而可以被轉(zhuǎn)換成任一堿或酸加成鹽。優(yōu)選地，以常規(guī)方式使鹽與堿或酸接觸，再分離母體化合物，由此再生化合物的中性形式?；衔锏哪阁w形式與其各種鹽的形式的不同之處在于某些物理性質(zhì)，例如在極性溶劑中的溶解度不同。本文所用的“藥學(xué)上可接受的鹽”屬于本發(fā)明化合物的衍生物，其中，通過(guò)與酸成鹽或與堿成鹽的方式修飾所述母體化合物。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括但不限于：堿基比如胺的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸鹽、酸根比如羧酸的堿金屬或有機(jī)鹽等等。藥學(xué)上可接受的鹽包括常規(guī)的無(wú)毒性的鹽或母體化合物的季銨鹽，例如無(wú)毒的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸所形成的鹽。常規(guī)的無(wú)毒性的鹽包括但不限于那些衍生自無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸的鹽，所述的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸選自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氫根、碳酸、檸檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富馬酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸鹽、羥基、羥萘、羥乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、馬來(lái)酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水楊酸、硬脂酸、亞乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、對(duì)氨基苯磺酸、硫酸、單寧、酒石酸和對(duì)甲苯磺酸。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可由含有酸根或堿基的母體化合物通過(guò)常規(guī)化學(xué)方法合成。一般情況下，這樣的鹽的制備方法是：在水或有機(jī)溶劑或兩者的混合物中，經(jīng)由游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計(jì)量的適當(dāng)?shù)膲A或酸反應(yīng)來(lái)制備。一般地，優(yōu)選醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈等非水介質(zhì)。除了鹽的形式，本發(fā)明所提供的化合物還存在前藥形式。本文所描述的化合物的前藥容易地在生理?xiàng)l件下發(fā)生化學(xué)變化從而轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的化合物。此外，前體藥物可以在體內(nèi)環(huán)境中通過(guò)化學(xué)或生化方法被轉(zhuǎn)換到本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的某些化合物可以以非溶劑化形式或者溶劑化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶劑化形式與非溶劑化的形式相當(dāng)，都包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的某些化合物可以具有不對(duì)稱碳原子(光學(xué)中心)或雙鍵。外消旋體、非對(duì)映異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體和單個(gè)的異構(gòu)體都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本文中消旋體、ambiscalemicandscalemic或者對(duì)映體純的化合物的圖示法來(lái)自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62：114-120。1985年，62：114-120。除非另有說(shuō)明，用楔形鍵和虛線鍵表示一個(gè)立體中心的絕對(duì)構(gòu)型。當(dāng)本文所述化合物含有烯屬雙鍵或其它幾何不對(duì)稱中心，除非另有規(guī)定，它們包括E、Z幾何異構(gòu)體。同樣地，所有的互變異構(gòu)形式均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明設(shè)想所有的這類化合物，包括順式和反式異構(gòu)體、(-)-和(+)-對(duì)映體、(R)-和(S)-對(duì)映體、非對(duì)映異構(gòu)體、(D)-異構(gòu)體、(L)-異構(gòu)體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映體富集的混合物，所有這些混合物都屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。烷基等取代基中可存在另外的不對(duì)稱碳原子。所有這些異構(gòu)體以及它們的混合物，均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。可以通過(guò)的手性合成或手性試劑或者其他常規(guī)技術(shù)制備光學(xué)活性的(R)-和(S)-異構(gòu)體以及D和L異構(gòu)體。如果想得到本發(fā)明某化合物的一種對(duì)映體，可以通過(guò)不對(duì)稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來(lái)制備，其中將所得非對(duì)映體混合物分離，并且輔助基團(tuán)裂開以提供純的所需對(duì)映異構(gòu)體?；蛘?，當(dāng)分子中含有堿性官能團(tuán)(如氨基)或酸性官能團(tuán)(如羧基)時(shí)，與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性的酸或堿形成非對(duì)映異構(gòu)體的鹽，然后通過(guò)本領(lǐng)域所公知的常規(guī)方法進(jìn)行非對(duì)映異構(gòu)體拆分，然后回收得到純的對(duì)映體。此外，對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體的分離通常是通過(guò)使用色譜法完成的，所述色譜法采用手性固定相，并任選地與化學(xué)衍生法相結(jié)合(例如由胺生成氨基甲酸鹽)。本發(fā)明的化合物可以在一個(gè)或多個(gè)構(gòu)成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標(biāo)記化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本發(fā)明的化合物的所有同位素組成的變換，無(wú)論放射性與否，都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”是指能夠遞送本發(fā)明有效量活性物質(zhì)、不干擾活性物質(zhì)的生物活性并且對(duì)宿主或者患者無(wú)毒副作用的任何制劑或載體介質(zhì)代表性的載體包括水、油、蔬菜和礦物質(zhì)、膏基、洗劑基質(zhì)、軟膏基質(zhì)等。這些基質(zhì)包括懸浮劑、增粘劑、透皮促進(jìn)劑等。它們的制劑為化妝品領(lǐng)域或局部藥物領(lǐng)域的技術(shù)人員所周知。關(guān)于載體的其他信息，可以參考Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy，21stEd.，Lippincott，Williams&Wilkins(2005)，該文獻(xiàn)的內(nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。術(shù)語(yǔ)“賦形劑”通常是指配制有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質(zhì)。針對(duì)藥物或藥理學(xué)活性劑而言，術(shù)語(yǔ)“有效量”或“治療有效量”是指無(wú)毒的但能達(dá)到預(yù)期效果的藥物或藥劑的足夠用量。對(duì)于本發(fā)明中的口服劑型，組合物中一種活性物質(zhì)的“有效量”是指與該組合物中另一種活性物質(zhì)聯(lián)用時(shí)為了達(dá)到預(yù)期效果所需要的用量。有效量的確定因人而異，取決于受體的年齡和一般情況，也取決于具體的活性物質(zhì)，個(gè)案中合適的有效量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)試驗(yàn)確定。術(shù)語(yǔ)“活性成分”、“治療劑”，“活性物質(zhì)”或“活性劑”是指一種化學(xué)實(shí)體，它可以有效地治療目標(biāo)紊亂、疾病或病癥。術(shù)語(yǔ)“被取代的”是指特定原子上的任意一個(gè)或多個(gè)氫原子被取代基取代，包括重氫和氫的變體，只要特定原子的價(jià)態(tài)是正常的并且取代后的化合物是穩(wěn)定的。當(dāng)取代基為酮基(即＝O)時(shí)，意味著兩個(gè)氫原子被取代。酮取代不會(huì)發(fā)生在芳香基上。術(shù)語(yǔ)“任選被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規(guī)定，取代基的種類和數(shù)目在化學(xué)上可以實(shí)現(xiàn)的基礎(chǔ)上可以是任意的。當(dāng)任何變量(例如R)在化合物的組成或結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)一次以上時(shí)，其在每一種情況下的定義都是獨(dú)立的。因此，例如，如果一個(gè)基團(tuán)被0-2個(gè)R所取代，則所述基團(tuán)可以任選地至多被兩個(gè)R所取代，并且每種情況下的R都有獨(dú)立的選項(xiàng)。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會(huì)產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物的情況下才是被允許的。當(dāng)一個(gè)連接基團(tuán)的數(shù)量為0時(shí)，比如-(CRR)0-，表示該連接基團(tuán)為單鍵。當(dāng)其中一個(gè)變量選自單鍵時(shí)，表示其連接的兩個(gè)基團(tuán)直接相連，比如A-L-Z中L代表單鍵時(shí)表示該結(jié)構(gòu)實(shí)際上是A-Z。當(dāng)一個(gè)取代基的鍵可以交叉連接到一個(gè)環(huán)上的兩個(gè)原子時(shí)，這種取代基可以與這個(gè)環(huán)上的任意原子相鍵合。當(dāng)所列舉的取代基中沒有指明其通過(guò)哪一個(gè)原子連接到化學(xué)結(jié)構(gòu)通式中包括但未具體提及的化合物時(shí)，這種取代基可以通過(guò)其任何原子相鍵合。取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會(huì)產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物的情況下才是被允許的。例如，結(jié)構(gòu)單元表示其可在環(huán)己基或者環(huán)己二烯上的任意一個(gè)位置發(fā)生取代。除非另有規(guī)定，術(shù)語(yǔ)“鹵代素”或“鹵素”本身或作為另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”意在包括單鹵代烷基和多鹵代烷基。例如，術(shù)語(yǔ)“鹵代(C1-C4)烷基”意在包括但不僅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。鹵代烷基的實(shí)例包括但不僅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。“烷氧基”代表通過(guò)氧橋連接的具有特定數(shù)目碳原子的上述烷基。C1-6烷氧基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基?！碍h(huán)烷基”包括飽和環(huán)基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)戊基。3-7環(huán)烷基包括C3、C4、C5、C6和C7環(huán)烷基。“鏈烯基”包括直鏈或支鏈構(gòu)型的烴鏈，其中該鏈上任何的穩(wěn)定位點(diǎn)上存在一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵，例如乙烯基和丙烯基。術(shù)語(yǔ)“鹵”或“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。除非另有規(guī)定，術(shù)語(yǔ)“雜”表示雜原子或雜原子團(tuán)(即含有雜原子的原子團(tuán))，包括碳(C)和氫(H)以外的原子以及含有這些雜原子的原子團(tuán)，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、鍺(Ge)、鋁(Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-，以及任選被被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-或-S(＝O)N(H)-。除非另有規(guī)定，“環(huán)”表示被取代或未被取代的環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、環(huán)炔基、雜環(huán)炔基、芳基或雜芳基。所謂的環(huán)包括單環(huán)、聯(lián)環(huán)、螺環(huán)、并環(huán)或橋環(huán)。環(huán)上原子的數(shù)目通常被定義為環(huán)的元數(shù)，例如，“5～7元環(huán)”是指環(huán)繞排列5～7個(gè)原子。除非另有規(guī)定，該環(huán)任選地包含1～3個(gè)雜原子。因此，“5～7元環(huán)”包括例如苯基吡啶和哌啶基；另一方面，術(shù)語(yǔ)“5～7元雜環(huán)烷基環(huán)”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。術(shù)語(yǔ)“環(huán)”還包括含有至少一個(gè)環(huán)的環(huán)系，其中的每一個(gè)“環(huán)”均獨(dú)立地符合上述定義。除非另有規(guī)定，術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”意指穩(wěn)定的含雜原子或雜原子團(tuán)的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)，它們可以是飽和的、部分不飽和的或不飽和的(芳族的)，它們包含碳原子和1、2、3或4個(gè)獨(dú)立地選自N、O和S的環(huán)雜原子，其中上述任意雜環(huán)可以稠合到一個(gè)苯環(huán)上形成雙環(huán)。氮和硫雜原子可任選被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已經(jīng)定義過(guò)的其他取代基)。該雜環(huán)可以附著到任何雜原子或碳原子的側(cè)基上從而形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。如果產(chǎn)生的化合物是穩(wěn)定的，本文所述的雜環(huán)可以發(fā)生碳位或氮位上的取代。雜環(huán)中的氮原子任選地被季銨化。一個(gè)優(yōu)選方案是，當(dāng)雜環(huán)中S及O原子的總數(shù)超過(guò)1時(shí)，這些雜原子彼此不相鄰。另一個(gè)優(yōu)選方案是，雜環(huán)中S及O原子的總數(shù)不超過(guò)1。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“芳族雜環(huán)基團(tuán)”或“雜芳基”意指穩(wěn)定的5、6、7元單環(huán)或雙環(huán)或7、8、9或10元雙環(huán)雜環(huán)基的芳香環(huán)，它包含碳原子和1、2、3或4個(gè)獨(dú)立地選自N、O和S的環(huán)雜原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已經(jīng)定義過(guò)的其他取代基)。氮和硫雜原子可任選被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香雜環(huán)上S和O原子的總數(shù)不超過(guò)1。橋環(huán)也包含在雜環(huán)的定義中。當(dāng)一個(gè)或多個(gè)原子(即C、O、N或S)連接兩個(gè)不相鄰的碳原子或氮原子時(shí)形成橋環(huán)。優(yōu)選的橋環(huán)包括但不限于：一個(gè)碳原子、兩個(gè)碳原子、一個(gè)氮原子、兩個(gè)氮原子和一個(gè)碳-氮基。值得注意的是，一個(gè)橋總是將單環(huán)轉(zhuǎn)換成三環(huán)。橋環(huán)中，環(huán)上的取代基也可以出現(xiàn)在橋上。雜環(huán)化合物的實(shí)例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巰基呋喃基、苯并巰基苯基、苯并惡唑基、苯并惡唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異惡唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氫吡喃基、色烯、噌啉基十氫喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氫呋喃并[2，3-b]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氫吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、isatino基、異苯并呋喃基、吡喃、異吲哚基、異二氫吲哚基、異吲哚基、吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異惡唑基、亞甲二氧基苯基、嗎啉基、萘啶基，八氫異喹啉基、惡二唑基、1，2，3-惡二唑基、1，2，4-惡二唑基、1，2，5-惡二唑基、1，3，4-惡二唑基、惡唑烷基、惡唑基、異惡唑基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黃嘌呤基、酚惡嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并惡唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、吡唑基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環(huán)基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基，6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、異噻唑基噻吩基、噻吩基、噻吩并惡唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基和呫噸基。還包括稠環(huán)和螺環(huán)化合物。除非另有規(guī)定，術(shù)語(yǔ)“烴基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、苯基等等)本身或者作為另一取代基的一部分表示直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的烴原子團(tuán)或其組合，可以是完全飽和的、單元或多元不飽和的，可以是單取代、二取代或多取代的，可以是一價(jià)(如甲基)、二價(jià)(如亞甲基)或者多價(jià)(如次甲基)，可以包括二價(jià)或多價(jià)原子團(tuán)，具有指定數(shù)量的碳原子(如C1-C10表示1至10個(gè)碳)。“烴基”包括但不限于脂肪烴基和芳香烴基，所述脂肪烴基包括鏈狀和環(huán)狀，具體包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烴基包括但不限于6-12元的芳香烴基，例如苯、萘等。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“烴基”表示直鏈的或支鏈的原子團(tuán)或它們的組合，可以是完全飽和的、單元或多元不飽和的，可以包括二價(jià)和多價(jià)原子團(tuán)。飽和烴原子團(tuán)的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、仲丁基、異丁基、環(huán)己基、(環(huán)己基)甲基、環(huán)丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子團(tuán)的同系物或異構(gòu)體。不飽和烷基具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵或三鍵，其實(shí)例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高級(jí)的同系物和異構(gòu)體。除非另有規(guī)定，術(shù)語(yǔ)“雜烴基”或者其下位概念(比如雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜芳基等等)本身或者與另一術(shù)語(yǔ)聯(lián)合表示穩(wěn)定的直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的烴原子團(tuán)或其組合，有一定數(shù)目的碳原子和至少一個(gè)雜原子組成。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“雜烴基”本身或者與另一術(shù)語(yǔ)聯(lián)合表示穩(wěn)定的直鏈的、支鏈的烴原子團(tuán)或其組合物，有一定數(shù)目的碳原子和至少一個(gè)雜原子組成。在一個(gè)典型實(shí)施例中，雜原子選自B、O、N和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮雜原子任選地被季銨化。雜原子B、O、N和S可以位于雜烴基的任何內(nèi)部位置(包括該烴基附著于分子其余部分的位置)。實(shí)例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-CH2-CH＝N-OCH3和-CH＝CH-N(CH3)-CH3。至多兩個(gè)雜原子可以是連續(xù)的，例如-CH2-NH-OCH3。術(shù)語(yǔ)“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)屬于慣用表達(dá)，是指分別通過(guò)一個(gè)氧原子、氨基或硫原子連接到分子的其余部分的那些烷基基團(tuán)。除非另有規(guī)定，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烴基”、“雜環(huán)烴基”或者其下位概念(比如芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、環(huán)炔基、雜環(huán)炔基等等)本身或與其他術(shù)語(yǔ)聯(lián)合分別表示環(huán)化的“烴基”、“雜烴基”。此外，就雜烴基或雜環(huán)烴基(比如雜烷基、雜環(huán)烷基)而言，雜原子可以占據(jù)該雜環(huán)附著于分子其余部分的位置。環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于環(huán)戊基、環(huán)己基、1-環(huán)己烯基、3-環(huán)己烯基、環(huán)庚基等。雜環(huán)基的非限制性實(shí)例包括1-(1，2，5，6-四氫吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃吲哚-3-基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。除非另有規(guī)定，術(shù)語(yǔ)“芳基”表示多不飽和的芳族烴取代基，可以是單取代、二取代或多取代的，可以是一價(jià)、二價(jià)或者多價(jià)，它可以是單環(huán)或多環(huán)(優(yōu)選1至3個(gè)環(huán))，它們稠合在一起或共價(jià)連接。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指含有一至四個(gè)雜原子的芳基(或環(huán))。在一個(gè)示范性實(shí)例中，雜原子選自B、N、O和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮原子任選地被季銨化。雜芳基可通過(guò)雜原子連接到分子的其余部分。芳基或雜芳基的非限制性實(shí)施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-聯(lián)苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-惡唑基、4-惡唑基、2-苯基-4-惡唑基、5-惡唑基、3-異惡唑基、4-異惡唑基、5-異惡唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一個(gè)芳基和雜芳基環(huán)系的取代基選自下文所述的可接受的取代基。為簡(jiǎn)便起見，芳基在與其他術(shù)語(yǔ)聯(lián)合使用時(shí)(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定義的芳基和雜芳基環(huán)。因此，術(shù)語(yǔ)“芳烷基”意在包括芳基附著于烷基的那些原子團(tuán)(例如芐基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亞甲基)已經(jīng)被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。術(shù)語(yǔ)“離去基團(tuán)”是指可以被另一種官能團(tuán)或原子通過(guò)取代反應(yīng)(例如親和取代反應(yīng))所取代的官能團(tuán)或原子。例如，代表性的離去基團(tuán)包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對(duì)溴苯磺酸酯、對(duì)甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。術(shù)語(yǔ)“保護(hù)基”包括但不限于“氨基保護(hù)基”、“羥基保護(hù)基”或“巰基保護(hù)基”。術(shù)語(yǔ)“氨基保護(hù)基”是指適合用于阻止氨基氮位上副反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。代表性的氨基保護(hù)基包括但不限于：甲?；?；酰基，例如鏈烷?；?如乙?；?、三氯乙?；蛉阴；?；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如芐氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如芐基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。術(shù)語(yǔ)“羥基保護(hù)基”是指適合用于阻止羥基副反應(yīng)的保護(hù)基。代表性羥基保護(hù)基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如鏈烷?；?如乙?；?；芳基甲基，如芐基(Bn)，對(duì)甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。本發(fā)明的化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的多種合成方法來(lái)制備，包括下面列舉的具體實(shí)施方式、其與其他化學(xué)合成方法的結(jié)合所形成的實(shí)施方式以及本領(lǐng)域技術(shù)上人員所熟知的等同替換方式，優(yōu)選的實(shí)施方式包括但不限于本發(fā)明的實(shí)施例。本發(fā)明所使用的所有溶劑是市售的，無(wú)需進(jìn)一步純化即可使用。反應(yīng)一般是在惰性氮?dú)庀?、無(wú)水溶劑中進(jìn)行的。質(zhì)子核磁共振數(shù)據(jù)記錄在BrukerAvanceIII400(400MHz)分光儀上，化學(xué)位移以四甲基硅烷低場(chǎng)處的(ppm)表示。質(zhì)譜是在安捷倫1200系列加6110(&1956A)上測(cè)定。LC/MS或ShimadzuMS包含一個(gè)DAD：SPD-M20A(LC)和ShimadzuMicromass2020檢測(cè)器。質(zhì)譜儀配備有一個(gè)正或負(fù)模式下操作的電噴霧離子源(ESI)。本發(fā)明采用下述縮略詞：aq代表水；HATU代表O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；m-CPBA代表3-氯過(guò)氧苯甲酸；eq代表當(dāng)量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二異丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亞砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表芐氧羰基，是一種胺保護(hù)基團(tuán)；BOC代表叔丁基羰基是一種胺保護(hù)基團(tuán)；HOAc代表乙酸；NaCNBH3代表氰基硼氫化鈉；r.t.代表室溫；O/N代表過(guò)夜；THF代表四氫呋喃；Boc2O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二異丙基乙基胺；SOCl2代表氯化亞砜；CS2代表二硫化碳；TsOH代表對(duì)甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺?；?苯磺酰胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2，5-二酮；n-Bu4NF代表氟化四丁基銨；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔點(diǎn)；LDA代表二異丙基胺基鋰；Pd(dppf)2Cl2代表1，1’-雙(二苯基磷)二茂鐵氯化鈀；(c-hex)3p代表三環(huán)己基磷；(PinB)2代表雙聯(lián)嚬哪醇硼酸酯；[Ir(OMe)(COD)]2代表二(1，5-環(huán)辛二烯)二-μ-甲氧基二銥(I)；dtbpy代表4，4’-二叔丁基-2，2’-聯(lián)吡啶；NBS代表氮-溴代丁二酰亞胺；DAST代表二乙氨基三氟化硫；DIEA代表氮，氮-二異丙基乙胺；DPPA代表疊氮磷酸二苯酯；TsCl代表對(duì)甲基苯基磺酰氯；HOBt代表1-羥基苯并三唑；EDCI代表1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽；PhSH代表苯硫酚；DMAD代表炔二酸二甲酯；AUC代表血藥濃度-時(shí)間曲線下面積；AUC0-last代表從零時(shí)間點(diǎn)到最后一個(gè)可檢測(cè)到濃度時(shí)間點(diǎn)的血漿濃度-時(shí)間曲線下面積；AUC0-inF代表從零時(shí)間點(diǎn)到無(wú)窮大的血漿濃度-時(shí)間曲線下面積；Cmax代表峰濃度；MRT代表平均滯留時(shí)間；MRT0-last代表從零時(shí)間點(diǎn)到最后一個(gè)可檢測(cè)到濃度時(shí)間點(diǎn)的平均滯留時(shí)間；MRT0-inf代表從零時(shí)間點(diǎn)到無(wú)窮大的平均滯留時(shí)間；Tmax代表達(dá)峰時(shí)間；T1/2代表半衰期；Male代表雄性；Female代表雌性；Mean代表平均值；C0代表初始濃度；Vdss代表表觀分布容積；Cl代表清除率；Tlast代表最后一個(gè)可定量時(shí)間點(diǎn)；IV代表靜脈注射；PO代表口服；Bioavailability代表生物利用度?；衔锝?jīng)手工或者軟件命名，市售化合物采用供應(yīng)商目錄名稱。具體實(shí)施方式為了更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，給出下列實(shí)例，但本發(fā)明的范圍并非限定于此。參考例1：片段BB-1合成路線：步驟1：化合物BB-1-2的合成將化合物BB-1-1(6.0g，37mmol)溶于三氟乙酸(30mL)，然后緩慢滴加液溴(5.91g，37mmol)，反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯(200mL)，有機(jī)相用食鹽水洗(50mLx2)，飽和碳酸鈉洗(50mLx2)，食鹽水洗(50mL)，硫酸鈉干燥，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-1-2(灰色固體，8.9g，收率：100％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.63(s，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，6.88(d，J＝8.8Hz，1H)，6.09(s，1H)。步驟2：化合物BB-1-4的合成將化合物BB-1-2(1g，4.13mmol)溶于三氟乙酸(5mL)，然后加入烏洛托品BB-1-3(2.33g，16.6mmol)。反應(yīng)物在悶罐中加熱至90℃攪拌過(guò)夜，冷卻后，加入水(20mL)和50％硫酸(7mL)，再攪拌1小時(shí)，過(guò)濾，固體用水洗，干燥得到目標(biāo)化合物BB-1-4(灰色固體，0.60g，收率：53.75％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ11.62(s，1H)，9.93(s，1H)，7.92(s，1H)，7.88(s，1H)。步驟3：化合物BB-1-6的合成將反應(yīng)物BB-1-4(0.60g，2.23mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(8mL)，然后加入碳酸鉀(0.925g，6.69mmol)，化合物BB-1-5(0.41g，2.45mmol)。反應(yīng)物加熱到100℃，攪拌2小時(shí)。加入乙酸乙酯(50mL)，該混合物用鹽水洗(20mL)，干燥，濃縮得到粗產(chǎn)物，快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)得到目標(biāo)化合物BB-1-6(黃色固體，0.35g，收率：46.5％)。MS(ESI)m/z：337[M+H]+，339[M+H+2]+。步驟4：化合物BB-1-8和BB-1-8a的合成將化合物BB-1-6(0.34g，1.01mmol)溶于異丙醇(5mL)，然后加入異丙烯基三氟硼酸鉀BB-1-7(0.194g，1.31mmol)，三乙胺(0.510g，5.04mmol)，1，1’-雙(二苯基磷)二茂鐵氯化鈀(0.074g，0.101mmol)。反應(yīng)液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下反應(yīng)3小時(shí)。冷卻后，加入乙酸乙酯(100mL)，混合液用食鹽水洗(20mL)，硫酸鈉干燥，濃縮得到粗產(chǎn)物，快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)得到目標(biāo)化合物BB-1-8和BB-1-8a(黃色油狀物，0.295g，收率：98％)。MS(ESI)m/z：299[M+H]+。步驟5：化合物BB-1-9和BB-1-9a的合成將化合物BB-1-8和BB-1-8a(0.295g，0.989mmol)溶于乙酸乙酯(15mL)，加入10％鈀炭(0.03g)，反應(yīng)物在20PsiH2下室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)液旋干得到目標(biāo)化合物BB-1-9和BB-1-9a直接用于下一步合成(灰色固體，0.295g，收率：99％)。MS(ESI)m/z：301[M+H]+。步驟6：化合物BB-1的合成將化合物BB-1-9(0.105g，0.35mmol)溶于四氫呋喃/水(3mL，2∶1)，加入水合氫氧化鋰(0.073g，1.75mmol)。反應(yīng)液在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用2M鹽酸調(diào)pH值至1，然后用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-1(灰色固體，0.093g，收率：98％)。MS(ESI)m/z：273[M+H]+。參考例2：片段BB-2合成路線：步驟1：化合物BB-2-1的合成將化合物BB-1-6(2g，5.93mmol)溶于甲苯/水(30mL，2∶1)，然后依次加入環(huán)丙基硼酸(1.02g，11.86mmol)，醋酸鈀(0.133g，0.593mmol)，三環(huán)己基磷(0.183g，0.652mmol)，磷酸鉀(3.78g，17.79mmol)。該反應(yīng)液在100℃下攪拌3小時(shí)。冷卻后加入乙酸乙酯(100mL)，有機(jī)相用食鹽水洗(50mLx2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/10)得到目標(biāo)化合物BB-2-1(黃色油狀物，1.6g，收率：90.4％)。MS(ESI)m/z：299[M+H]+。步驟2：化合物BB-2-2的合成將化合物BB-2-1(1.6g，5.36mmol)溶于正己烷(30mL)，然后依次加入雙聯(lián)嚬哪醇硼酸酯(1.497g，5.896mmol)，二(1，5-環(huán)辛二烯)二-μ-甲氧基二銥(I)(0.216g，0.32mmol)，4，4’-二叔丁基-2，2’-聯(lián)吡啶(0.144g，0.536mmol)，反應(yīng)物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液旋干，然后快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/10)得到目標(biāo)化合物BB-2-2(白色固體，2.1g，收率：92％)。MS(ESI)m/z：343[M-82+H]+。步驟3：化合物BB-2-3的合成將化合物BB-2-2(0.50g，1.18mmol)溶于甲醇(8mL)，然后加入氯化銅(0.317g，2.36mmol).該反應(yīng)液升溫至50℃反應(yīng)16小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)液旋干，然后快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/10)得到目標(biāo)化合物BB-2-3(白色固體，0.310g，收率：79％)。MS(ESI)m/z：333[M+H]+。步驟4：化合物BB-2的合成將化合物BB-2-3(0.31g，0.932mmol)溶于甲醇/水(6mL，2∶1)，然后加入水合氫氧化鋰(0.156g，3.73mmol)。反應(yīng)結(jié)束后，用2N鹽酸將pH調(diào)到1，然后用二氯甲烷萃取，合并后的有機(jī)相用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-2可直接用于下一步反應(yīng)(白色固體，0.270g，收率：95％)。MS(ESI)m/z：305[M+H]+。參考例3：片段BB-3合成路線：步驟1：化合物BB-3-1的合成將化合物BB-1-9(0.20g，0.666mmol)溶于正己烷(3mL)，然后依次加雙聯(lián)嚬哪醇硼酸酯(0.186g，0.763mmol)，二(1，5-環(huán)辛二烯)二-μ-甲氧基二銥(I)(0.028g，0.042mmol)，4，4’-二叔丁基-2，2’-聯(lián)吡啶(0.018g，0.067mmol)，反應(yīng)物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液旋干，然后快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)純化得到目標(biāo)化合物BB-3-1(白色固體，0.20g，收率：70％)。MS(ESI)m/z：345[M-82+H]+。步驟2：化合物BB-3-2的合成將化合物BB-3-1(0.20g，0.469mmol)溶于甲醇(4mL)，然后加入氯化銅(0.126g，0.938mmol)，該反應(yīng)液升溫至50℃反應(yīng)16小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)液旋干，然后快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)得到目標(biāo)化合物BB-3-2(黃色固體，0.140g，收率：89％)。MS(ESI)m/z：335[M+H]+。步驟3：化合物BB-3的合成將化合物BB-3-2(0.130g，0.388mmol)溶于甲醇/水(5mL，2∶1)，然后加入水合氫氧化鋰(0.081g，1.94mmol)。該反應(yīng)液在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用2N鹽酸將pH調(diào)到1，然后用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，合并后的有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-3(白色固體，粗品，0.119g，收率：100％)直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：307[M+H]+。參考例3a：片段BB-3a以化合物BB-1-9a為原料，參考參考例3中片段BB-3合成步驟1-3，合成參考例3a(片段BB-3a)。MS(ESI)m/z：307[M+H]+。參考例4：片段BB-4合成路線：步驟1：化合物BB-4-1的合成將化合物BB-2-2(0.30g，0.707mmol)溶于甲醇(8mL)，然后加入溴化銅(0.316g，1.41mmol)，該反應(yīng)液升溫至50℃反應(yīng)20小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)液旋干得粗產(chǎn)品，快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/10)得到目標(biāo)化合物BB-4-1(灰色固體，0.22g，收率：82％)。MS(ESI)m/z：377[M+H]+，379[M+H+2]+。步驟2：化合物BB-4的合成將化合物BB-4-1(0.120g，0.318mmol)加入到甲醇/水(5mL，2∶1)中，然后加入一水合氫氧化鋰(0.089g，1.59mmol)。室溫反應(yīng)2h后，減壓旋干后用2N的鹽酸將pH調(diào)節(jié)到1。用乙酸乙酯萃取(25mLx3)，有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗，加無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑，得到目標(biāo)化合物BB-4(灰色固體，0.105g，收率：95％)。MS(ESI)m/z：349[M+H]+，351[M+H+2]+。參考例5：片段BB-5合成路線：步驟1：化合物BB-5-1的合成將化合物BB-4-1(0.100g，0.265mmol)溶于甲苯/水(3mL，2∶1)，然后加入甲基硼酸(0.032g，0.53mmol)，醋酸鈀(0.006g，0.0265mmol)，三環(huán)己基磷(0.008g，0.029mmol)，磷酸鉀(0.169g，0.795mmol)。反應(yīng)物加熱至100℃反應(yīng)16小時(shí)。冷卻后加入乙酸乙酯(100mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品。通過(guò)薄層硅膠板純化(展開劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-5-1(灰色固體，0.075g，收率：90.6％)。MS(ESI)m/z：313[M+H]+。步驟2：化合物BB-5的合成將化合物BB-5-1(0.075g，0.24mmol)溶于甲醇/水(3mL，2∶1)，然后加入水合氫氧化鋰(0.040g，0.96mmol)。該反應(yīng)液在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用2N鹽酸將pH調(diào)到1，然后用二氯甲烷(50mLx2)萃取，合并后的有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-5(灰色固體，0.067g，收率：98％)直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：285[M+H]+。參考例6：片段BB-6合成路線：步驟1：化合物BB-6-1的合成將化合物BB-4-1(0.160g，0.424mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(3mL)，然后加入CuCN(0.152g，1.7mmol)，該反應(yīng)液在160℃反應(yīng)4小時(shí)，冷卻后，加入乙酸乙酯(50mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品，再用薄層硅膠板分離(展開劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)得到目標(biāo)化合物BB-6-1(灰色固體，0.040g，收率：29％)。MS(ESI)m/z：324[M+H]+。步驟2：化合物BB-6的合成將化合物BB-6-1(0.040g，0.124mmol)溶于四氫呋喃/MeOH/水(3mL，1∶1∶1)，然后加入水合氫氧化鋰(0.021g，0.495mmol)。該反應(yīng)液在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用6N鹽酸將pH調(diào)到1，然后用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，合并后的有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-6(灰色固體，0.036g，收率：98.6％)直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：296[M+H]+。參考例7：片段BB-7合成路線：步驟1：化合物BB-7-2的合成將化合物BB-7-1(5g，26.18mmol)溶于三氟乙酸(5mL)，然后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下分批加入化合物BB-1-3(7.34g，52.36mmol)。反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后升溫至90℃反應(yīng)過(guò)夜，冷卻后，加入水(30mL)和50％硫酸(15mL)，攪拌2小時(shí)，過(guò)濾，干燥得到目標(biāo)化合物BB-7-2(褐色固體，3.5g，收率：61％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ10.85(br.s.，1H)，9.84-9.89(m，1H)，7.45-7.53(m，2H)步驟2：化合物BB-7-3的合成將化合物BB-7-2(1g，4.57mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(12mL)，然后加入碳酸鉀(1.89g，13.7mmol)，溴乙酸乙酯(0.838g，5.02mmol)。反應(yīng)液加熱至100℃反應(yīng)2小時(shí)。冷卻后，加入乙酸乙酯(100mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mLx2)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)得到目標(biāo)化合物BB-7-3(黃色固體，0.400g，收率：30％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.61(s，1H)，7.48(d，J＝3.01Hz，1H)，7.34(dd，J＝9.54，1.51Hz，1H)，4.46(q，J＝7.03Hz，2H)，1.43(t，J＝7.03Hz，3H)。步驟3：化合物BB-7-4的合成將化合物BB-7-3(0.287g，1mmol)溶于甲苯/水(5mL，2∶1)，然后加入環(huán)丙基硼酸(0.172g，2mmol)，醋酸鈀(0.022g，0.1mmol)，三環(huán)己基磷(0.028g，0.1mmol)，磷酸鉀(0.637g，3mmol)。反應(yīng)物加熱至100℃反應(yīng)4小時(shí)。冷卻后加入乙酸乙酯(100mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mLx2)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-7-4(灰色固體，0.240g，收率：96.7％)。MS(ESI)m/z：249[M+H]+。步驟4：化合物BB-7-5的合成將化合物BB-7-4(0.080g，0.322mmol)溶于正己烷(3mL)，然后依次加雙聯(lián)嚬哪醇硼酸酯(0.106g，0.419mmol)，二(1，5-環(huán)辛二烯)二-μ-甲氧基二銥(I)(0.015g，0.022mmol)，4，4’-二叔丁基-2，2’-聯(lián)吡啶(0.009g，0.032mmol)，反應(yīng)物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液旋干，然后通過(guò)薄層硅膠板純化(展開劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)得到目標(biāo)化合物BB-7-5(白色固體，0.070g，收率：58％)。MS(ESI)m/z：293[M-82+H]+。步驟5：化合物BB-7-6的合成將化合物BB-7-5(0.070g，0.187mmol)溶于甲醇(3mL)，然后加入氯化銅(0.05g，0.374mmol)，該反應(yīng)液升溫至50℃反應(yīng)20小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)液旋干，然后加入乙酸乙酯(50mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-7-6(灰色固體，0.052g，收率：98％)直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：283[M+H]+。步驟6：化合物BB-7的合成將化合物BB-7-6(0.052g，0.184mmol)溶于四氫呋喃/MeOH/水(4mL，2∶1∶1)，然后加入水合氫氧化鋰(0.039g，0.92mmol)。該反應(yīng)液在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用2N鹽酸將pH調(diào)到1，然后用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，合并后的有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-7(灰色固體，0.045g，收率：96％)直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：255[M+H]+。參考例8：片段BB-8合成路線：步驟1：化合物BB-8-2的合成將化合物BB-8-1(5g，36.72mmol)溶于醋酸(30mL)，冷卻至0℃，然后滴加液溴(6.75g，42.23mmol)，該反應(yīng)液在0℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入水(100mL)，過(guò)濾，固體用水洗，干燥得到目標(biāo)化合物BB-8-2(黃色固體，7.5g，收率：95％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ11.18(s，1H)，9.81(s，1H)，7.51-7.47(m，2H)，2.25(s，3H)。步驟2：化合物BB-8-3的合成將化合物BB-8-2(5.4g，25.11mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(70mL)，然后加入碳酸鉀(6.94g，50.22mmol)，溴乙酸乙酯(5.03g，30.13mmol)。該反應(yīng)液在室溫下反應(yīng)1小時(shí)，然后升溫至80℃反應(yīng)16小時(shí)。冷卻后，加入乙酸乙酯(50mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-8-3(白色固體，4.2g，收率：59％)。MS(ESI)m/z：283[M+H]+，285[M+H+2]+。步驟3：化合物BB-8-4的合成將化合物BB-8-3(0.50g，1.77mmol)溶于四氯化碳(7mL)，然后加入氮-溴代丁二酰亞胺(0.377g，2.12mmol)，過(guò)氧化苯甲酰(0.043g，0.177mmol)。該反應(yīng)液在80℃下反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液濃縮粗產(chǎn)品，快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-8-4(灰色固體，0.660g，粗品)。MS(ESI)m/z：363[M+H]+，361[M+H-2]+，365[M+H+2]+。步驟4：化合物BB-8-5的合成將化合物BB-8-4(0.30g，0.829mmol)溶于乙腈(10mL)，然后加入氮-甲基嗎啉氮氧化物(0.970g，8.29mmol)。該反應(yīng)液在室溫下攪拌4小時(shí)，溶液旋干，加入乙酸乙酯(50mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)得到目標(biāo)化合物BB-8-5(白色固體，0.180g，73.11％)。MS(ESI)m/z：297[M+H]+，299[M+H+2]+。步驟5：化合物BB-8-6的合成將化合物BB-8-5(0.170g，0.572mmol)溶于甲苯(2mL)，然后加入二乙氨基三氟化硫(0.185g，1.15mmol)，該反應(yīng)物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，25℃攪拌16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯(50mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-8-6(灰色固體，0.175g，95.84％)。MS(ESI)m/z：319[M+H]+，321[M+H+2]+。步驟6：化合物BB-8-7的合成將化合物BB-8-6(0.170g，0.533mmol)溶于甲苯(3mL)和水(1mL)，然后加入三環(huán)己基磷(0.015g，0.053mmol)，環(huán)丙基硼酸(0.10g，1.16mmol)，醋酸鈀(0.012g，0.053mmol)，該反應(yīng)物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫至110℃攪拌5小時(shí)。冷卻后加入乙酸乙酯(50mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)得到目標(biāo)化合物BB-8-7(黃色固體，0.132g，88.40％)。MS(ESI)m/z：281[M+H]+。步驟7：化合物BB-8-8的合成將化合物BB-8-7(0.132g，0.471mmol)溶于正己烷(3mL)，然后依次加雙聯(lián)嚬哪醇硼酸酯(0.145g，0.571mmol)，4，4’-二叔丁基-2，2’-聯(lián)吡啶(0.013g，0.048mmol)，二(1，5-環(huán)辛二烯)二-μ-甲氧基二銥(I)(0.019g，0.029mmol)，反應(yīng)物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液旋干，快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/5)得到目標(biāo)化合物BB-8-8(白色固體，0.10g，52.27％)。MS(ESI)m/z：325[M-82+H]+。步驟8：化合物BB-8-9的合成將化合物BB-8-8(0.095g，0.234mmol)溶于甲醇(4mL)，然后加入氯化銅(0.063g，0.468mmol)，該反應(yīng)液升溫至50℃反應(yīng)16小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)液旋干，然后加入乙酸乙酯(50mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-8-9(白色固體，0.073g，99.19％)直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：315[M+H]+步驟9：化合物BB-8的合成將化合物BB-8-9(0.070g，0.222mmol)溶于甲醇(2mL)和水(2mL)，然后加入水合氫氧化鋰(0.050g，1.19mmol)，該反應(yīng)液在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用3N鹽酸將pH調(diào)到1，然后用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，合并后的有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-8(白色固體，0.063g，98.81％)后直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：287[M+H]+。參考例9：片段BB-9合成路線：步驟1：化合物BB-9-2的合成將化合物BB-2(0.30g，0.98mmol)，化合物BB-9-1(0.141g，0.98mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(0.449g，1.18mmol)和氮，氮-二異丙基乙胺(0.382g，2.95mmol)溶于干燥的氮，氮-二甲基甲酰胺(3mL)，20℃攪拌6小時(shí)，加入水，用乙酸乙酯萃取(20mL×2)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，加無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑，得到化合物BB-9-2(黃色油狀體，0.460g，收率：100％)。無(wú)需純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：430.2[M+H]+。步驟2：化合物BB-9的合成將化合物BB-9-2(0.460g，1.07mmol)溶于四氫呋喃∶甲醇∶水＝2∶2∶1(10mL)中，加入一水合氫氧化鋰(0.135g，3.21mmol)。反應(yīng)液在18℃攪拌2小時(shí)后，減壓去除溶劑，得到的殘留物重新溶于水中，用2N鹽酸水溶液中和至pH值2-3左右，收集固體得到化合物BB-9(白色固體，0.380g，收率：85.4％)。無(wú)需純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：416[M+H]+。參考例9a：片段BB-9a合成路線：步驟1：化合物BB-9a-2的合成將化合物BB-2(0.147g，0.483mmol)，化合物BB-9a-1(0.100g，0.483mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(1mL)，加入氮，氮-二異丙基乙胺(0.187g，1.45mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(0.275g，0.724mmol)。反應(yīng)液在18℃下攪拌2小時(shí)，加入水(3mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并有機(jī)相，用水(20mL×2)，飽和食鹽水(20mL)洗滌，加無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾，濃縮，得到化合物BB-9a-2(黃色固體，0.220g，收率：99.58％)。MS(ESI)m/z：458[M+H]+。步驟2：化合物BB-9a的合成將化合物BB-9a-2(0.220g，0.480mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入一水合氫氧化鋰(0.101g，2.40mmol)和水(1mL)。反應(yīng)液在25℃攪拌16小時(shí)后，減壓去除溶劑，得到的殘留物重新溶于水中，用濃鹽酸調(diào)至pH值到3。過(guò)濾，濾餅溶于二氯甲烷(20mL)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到化合物BB-9a(黃色固體，0.150g，收率：72.63％)。MS(ESI)m/z：430[M+H]+。參考例10：片段BB-10合成路線：步驟1：化合物BB-10-2的合成將化合物BB-10-1(10.0g，52.85mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(120mL)，加入烯丙基溴(7.67g，63.42mmol)，然后在0℃下分批加入氫化鈉(3.17g，79.28mmol，60％)，反應(yīng)液在0℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入水萃滅反應(yīng)，用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品。快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-10-2(灰色固體，9.3g，收率：76.7％)。MS(ESI)m/z：230[M+H]+。步驟2：化合物BB-10-3的合成將化合物BB-10-2(9g，39.25mmol)溶于甲醇(200mL)，冷卻到-78℃，通入O3直至反應(yīng)液變成藍(lán)色，然后通入N2直至反應(yīng)液變成無(wú)色，再加入Me2S(15mL，203mmol)，室溫反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后濃縮，加入乙酸乙酯(150mL)，有機(jī)相用食鹽水(50mLx2)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-10-3(黃色油狀物，9.1g，收率：100％)。MS(ESI)m/z：232[M+H]+。步驟3：化合物BB-10-5的合成將化合物BB-10-3(6.35g，27.46mmol)溶于甲醇(100mL)，然后加入BB-10-4(5.0g，32.95mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(4.26g，32.95mmol)，硫酸鈉(20g)，反應(yīng)液在室溫下攪拌1小時(shí)，然后加入硼氫化鈉(1.25g，32.95mmol)，反應(yīng)液在室溫下攪拌2小時(shí)。然后分批加入氫化鈉(2.2g，54.92mmol，60％)，反應(yīng)液在室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)液濃縮，加入乙酸乙酯(200mL)，有機(jī)相用食鹽水(50mLx2)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品然后用重結(jié)晶(乙酸乙酯/石油醚＝1/5)得目標(biāo)化合物BB-10-5(黃色固體，5.58g，收率：67％)。MS(ESI)m/z：299[M+H]+。步驟4：化合物BB-10的合成將化合物BB-10-5(5.5g，18.43mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，然后加入鹽酸/二氧六環(huán)(50mL，4N)。反應(yīng)液在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后濃縮得目標(biāo)化合物BB-10(黃色固體，4.4g，收率：100％)。MS(ESI)m/z：199[M+H]+。參考例11：片段BB-11合成路線：驟1：化合物BB-11-1的合成將化合物BB-10-3(0.450g，1.95mmol)溶于甲醇(5mL)，然后加入肼基甲酸芐酯(0.356g，2.14mmol)，硫酸鈉(0.50g)，反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮得目標(biāo)化合物BB-11-1(灰色固體，0.740g，收率：100％)。MS(ESI)m/z：402[M+Na]+。步驟2：化合物BB-11-2的合成將化合物BB-11-1(0.22g，0.58mmol)溶于甲醇(10mL)，然后加入氫氧化鈀/炭(0.020g)，反應(yīng)物在15Psi氫氣下室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮得目標(biāo)化合物BB-11-2(灰色固體，0.110g，收率：76.7％)。步驟3：化合物BB-11-3的合成將化合物BB-11-2(0.110g，0.445mmol)溶于甲醇(3mL)，然后加入MeONa(0.048g，0.889mmol)，反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，滴加水萃滅，加入乙酸乙酯(50mLx2)萃取，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-11-3(黃色油狀物，0.090g，收率：94％)。MS(ESI)m/z：160[M-tBu+H]+。步驟4：化合物BB-11-4的合成將化合物BB-11-3(0.090g，0.418mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，然后加入氯甲酸-2-氯乙酯(0.072g，0.502mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(0.162g，1.25mmol)，反應(yīng)物在0℃攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入二氯甲烷(100mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-11-4(黃色油狀物，0.110g，收率：74.3％)。MS(ESI)m/z：322[M+H]+。步驟5：化合物BB-11-5的合成將化合物BB-11-4(0.100g，0.31mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(3mL)，然后加入氫化鈉(0.025g，0.62mmol)，反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，滴加水萃滅，加入乙酸乙酯(50mLx2)萃取，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-11-5(黃色油狀物，0.080g，收率：90.2％)。MS(ESI)m/z：308[M+Na]+。步驟6：化合物BB-11的合成將化合物BB-11-5(0.080g，0.28mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，然后加入鹽酸/二氧六環(huán)(3mL，4N)，反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液濃縮得目標(biāo)化合物BB-11直接用于下一步反應(yīng)(灰色固體，0.064g，收率：100％)。MS(ESI)m/z：186[M+H]+。參考例12：片段BB-12合成路線：步驟1：化合物BB-12-2的合成將化合物BB-12-1(15.0g，67.20mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(170mL)，加入烯丙基溴(9.76g，80.64mmol)，然后在0℃下分批加入氫化鈉(3.23g，80.64mmol，60％)，反應(yīng)液在0℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入水萃滅反應(yīng)，用乙酸乙酯(150mLx2)萃取，有機(jī)相用食鹽水(50mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品。快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-12-2(灰色固體，12.0g，收率：67.83％)。MS(ESI)m/z：264[M+H]+。步驟2：化合物BB-12-3的合成將化合物BB-12-2(12g，45.58mmol)溶于甲醇(250mL)，冷卻到-78℃，通入O3直至反應(yīng)液變成藍(lán)色，然后通入N2直至反應(yīng)液變成無(wú)色，再加入二甲硫醚(15mL，203mmol)，室溫反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后濃縮，加入乙酸乙酯(250mL)，有機(jī)相用食鹽水(50mLx2)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-12-3(黃色油狀物，12g，收率：99.26％)。MS(ESI)m/z：266[M+H]+。步驟3：化合物BB-12-5的合成將化合物BB-12-4(供應(yīng)商：TCI，0.1g，0.66mmol)和化合物BB-12-3(0.175g，0.66mmol)溶于干燥的甲醇(10mL)，反應(yīng)物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜后，減壓蒸餾除去溶劑，得到化合物BB-12-5(黃色油狀物，0.239g，收率：100％)。無(wú)需純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：363.0[M+H]+。步驟4：化合物BB-12-6的合成將化合物BB-12-5(0.239g，0.66mmol)溶解于醋酸∶水＝1∶1(3mL)中，隨后加入氰基硼氫化鈉(0.041g，0.66mmol)。反應(yīng)液在室溫下攪拌3小時(shí)后，加入1N氫氧化鈉水溶液，調(diào)節(jié)pH值在6-7后，用乙酸乙酯提取(20mL×3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，加無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑，得到化合物BB-12-6(微黃色油狀物，0.240g，收率：100％)。無(wú)需純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：365.1[M+H]+。步驟5：化合物BB-12-7的合成將化合物BB-12-6(0.190g，0.52mmol)溶于四氫呋喃∶甲醇∶水＝2∶2∶1(5mL)中，加入一水合氫氧化鋰(0.109g，2.61mmol)。反應(yīng)液在室溫下攪拌2小時(shí)后，減壓去除溶劑，得到的殘留物重新溶于水中，用2N鹽酸水溶液中和至pH值2-3左右，用二氯甲烷∶甲醇＝10∶1提取(10mL×3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，加無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑，得到化合物BB-12-7(黃色油狀物，0.120g，收率：65.7％)。無(wú)需純化直接用于下一步。步驟6：化合物BB-12-8的合成將化合物BB-12-7(0.183g，0.52mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(0.238g，0.63mmol)和氮，氮-二異丙基乙胺(0.338g，2.61mmol)溶于干燥的氮，氮-二甲基甲酰胺(3mL)。反應(yīng)液在室溫下攪拌過(guò)夜后，直接用制備色譜分離(柱子：AgelaDuraShellC18150*25*5um，洗脫劑：乙腈+0.075％TFA，水+0.075％TFA)，得到目標(biāo)化合物BB-12-8(微黃色油狀物，0.040g，收率：23％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)：δ7.42-7.35(m，5H)，5.19(s，2H)，4.28-3.72(m，8H)。步驟7：化合物BB-12的合成將化合物BB-12-8(0.040g，0.12mmol)溶于干燥的甲醇(5mL)，加入鈀炭(0.010g，10％)，氫氣(15Psi)下室溫?cái)嚢?小時(shí)后，過(guò)濾，濾液減壓蒸餾，得到化合物BB-12(白色固體，0.030g，收率：100％)。無(wú)需純化直接用于下一步。參考例13：片段BB-13合成路線：步驟1：化合物BB-13-2的合成將化合物BB-13-1(1.00g，4.71mol)溶于叔丁醇(15mL)，然后滴加三乙胺(0.572g，5.65mol)，二碳酸二叔丁酯(3.70g，17.0mmol)，然后緩慢滴加疊氮磷酸二苯酯(1.56g，5.65mmol)，反應(yīng)物在28℃下攪拌5小時(shí)，然后加熱到回流16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后旋干溶劑，剩余物溶于甲基叔丁基醚(50mL)，飽和碳酸氫鈉洗滌(20mL)，水層用甲基叔丁基醚萃取(50mLx2)，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20mL)，干燥，過(guò)濾，濃縮得到粗產(chǎn)物，快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/6)得到目標(biāo)化合物BB-13-2(白色固體，0.67g，收率：50％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ3.65(s，3H)，1.89(s，12H)，1.41(s，9H)。步驟2：化合物BB-13-3的合成將化合物BB-13-2(0.056g，0.2mmol)溶于甲醇(2.0mL)，然后加入氫氧化鋰(2N，2mL)，反應(yīng)物用1N鹽酸調(diào)pH4～5，乙酸乙酯萃取(20mLx3)，水洗，硫酸鈉干燥，旋干得到目標(biāo)化合物BB-13-3(白色固體，0.040g，收率：80％)。MS(ESI)m/z：214[M+H-56]+。步驟3：化合物BB-13-4的合成將反應(yīng)物BB-13-3(2.00g，7.43mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(20mL)，然后加入肼基甲酸芐酯(1.23g，7.43mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(2.88g，22.3mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(4.24g，11.1mmol)。反應(yīng)物在26℃下攪拌16小時(shí)。加入水(40mL)，過(guò)濾，濾餅溶于二氯甲烷(50mL)，干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-13-4(白色固體，2.5g，收率：81％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.55(m，5H)，5.16(s，2H)，1.69(s，12H)，1.43(s，9H)。步驟4：化合物BB-13-5的合成將化合物BB-13-4(1.00g，2.40mmol)溶于甲醇(20mL)，然后加入濕鈀炭(0.2g)。反應(yīng)液在氫氣(15Psi)保護(hù)下26℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液用硅藻土過(guò)濾，甲醇洗(50mL)，濾液濃縮得到目標(biāo)化合物BB-13-5(灰色固體，0.665g，收率：98％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ4.37(br，1H)，1.90-1.80(m，12H)，1.42(s，9H)。步驟5：化合物BB-13-6的合成將化合物BB-13-5(0.665g，2.35mmol)溶于原甲酸三乙酯(5mL)，加入對(duì)甲苯磺酸(0.040g，0.235mmol)，反應(yīng)物在90℃下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液濃縮得到粗產(chǎn)物，快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/2)得到目標(biāo)化合物BB-13-6(白色固體，0.560g，收率：81％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.31(s，1H)，4.40(br，1H)，2.10-1.96(m，12H)，1.44(s，9H)。步驟6：化合物BB-13的合成將化合物BB-13-6(0.560g，1.91mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，加入三氟乙酸(4mL)。反應(yīng)液在26℃下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用水洗(30mL)，水層用碳酸鈉調(diào)pH值至9，然后用二氯甲烷萃取(20mLx5)，合并有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-13(白色固體，0.200g，收率：54％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.31(s，1H)，2.08-2.04(br，6H)，1.71-1.68(m，6H)。參考例14：片段BB-14合成路線：步驟1：化合物BB-14-1的合成將化合物BB-13-3(1.65g，6.13mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(20mL)，然后加入乙酰肼(0.499g，6.74mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(2.37g，18.38mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(3.03g，7.96mmol)，反應(yīng)液在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入水，再用乙酸乙酯萃取(50mLx3)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝4/1)得到目標(biāo)化合物BB-14-1(白色固體，1.6g，收率：80％)。MS(ESI)m/z：326[M+H]+。步驟2：化合物BB-14-2的合成將化合物BB-14-1(0.500g，1.54mmol)溶于二氯甲烷(8mL)，然后加入三乙胺(0.311g，3.07mmol)，對(duì)甲苯磺酰氯(0.469g，2.46mmol)，反應(yīng)液在室溫下攪拌4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入二氯甲烷(100mL)，有機(jī)相用食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品?？焖龠^(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/1)得到目標(biāo)化合物BB-14-2(白色固體，0.330g，收率：70％)。MS(ESI)m/z：308[M+H]+。步驟3：化合物BB-14的合成將化合物BB-14-2(0.320g，1.04mmol)溶于二氯甲烷(4mL)，然后加入三氟乙酸(1mL)，反應(yīng)液在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入二氯甲烷(100mL)，有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉洗，食鹽水(20mL)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-14(白色固體，0.205g，收率：95％)。MS(ESI)m/z：208[M+H]+。參考例15：片段BB-15合成路線：步驟1：化合物BB-15-2的合成將甘氨酸(1.51g，20.1mmol)懸浮于水(5mL)中，滴加氫氧化鈉水溶液(1M，10mL)，加入化合物BB-15-1(6.20g，28.0mmol)，再分批滴加氫氧化鈉(1M，20mL)，并保持pH值大于9。滴加完畢后反應(yīng)物在室溫下再攪拌30分鐘。反應(yīng)物過(guò)濾，濾液用鹽酸水溶液(5M)調(diào)成酸性，固體析出物過(guò)濾得到目標(biāo)化合物BB-15-2(黃色固體，2.4g，收率：33％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.31(d，J＝8.8Hz，2H)，8.03(d，J＝8.8Hz，2H)，3.78(s，2H)。步驟2：化合物BB-15-4的合成將化合物BB-15-3(供應(yīng)商：AromaCircleCorp.，0.050g，0.417mmol)加入到1.5mL的氮，氮-二甲基甲酰胺中，然后將化合物BB-15-2(0.108g，0.417mmol)，1-羥基苯并三唑(0.062g，0.459mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(0.161g，1.25mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(0.088g，0.459mmol)。室溫?cái)嚢?h后，將有機(jī)相倒入水中，用乙酸乙酯(25mL)萃取，有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，加無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑，所得殘留物經(jīng)快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)得到目標(biāo)化合物BB-15-4(黃色固體，0.075g，收率：55.6％)。MS(ESI)m/z：326[M+H]+。步驟3：化合物BB-15-5的合成將化合物BB-15-4(0.100g，0.308mmol)加入到3mL的氮，氮-二甲基甲酰胺中，然后加入二溴乙烷(0.348g，1.85mmol)，碳酸銫(0.401g，1.23mmol)。室溫?cái)嚢?6h后。用水淬滅后，用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓旋干后得到目標(biāo)化合物BB-15-5(黃色固體，0.080g，收率：80％)。MS(ESI)m/z：352[M+H]+。步驟4：化合物BB-15的合成將化合物BB-15-5(0.080g，0.228mmol)加入到2mL的乙腈中，然后加入苯硫酚(0.075g，0.684mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?6h后，將有機(jī)相倒入二氯甲烷中，過(guò)濾，減壓旋干得到目標(biāo)化合物BB-15(黃色油狀物，0.025g，收率：65.8％)。MS(ESI)m/z：167[M+H]+。參考例16：片段BB-16合成路線：步驟1：化合物BB-16-2的合成將化合物BB-16-1(供應(yīng)商：上海書亞，0.50g，3.24mmol)，二碳酸二叔丁酯(2.5g，11.67mmol)和三乙胺(0.393g，3.89mmol)溶于叔丁醇(20mL)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢加入疊氮磷酸二苯酯(1.07g，3.89mmol)，然后在室溫下攪拌大約8小時(shí)，再回流加熱16小時(shí)，減壓去除溶劑，殘留物用甲基叔丁基醚萃取(150mLx3)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，所得殘留物經(jīng)快速制備色譜儀純化(展開劑∶石油醚/乙酸乙酯＝30∶1)得目標(biāo)化合物BB-16-2(白色固體，0.30g，收率：41％)直接用于下一步。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ4.27-4.13(br，1H)，1.77-1.63(m，6H)，1.62-1.51(m，6H)，1.50-1.45(m，1H)，1.35(s，9H)步驟2：化合物BB-16-3的合成將化合物BB-16-2(0.300g，1.33mmol)加入到5mL的二氯甲烷中，然后加入鹽酸/二氧六環(huán)(5mL)。室溫下攪拌16h后。減壓旋干后得到目標(biāo)化合物BB-16-3(白色固體，0.200g，收率：100％)。MS(ESI)m/z：126[M+H]+。步驟3：化合物BB-16-4的合成將化合物BB-16-3(0.200g，1.242mmol)加入到5mL的氮，氮-二甲基甲酰胺中，然后將化合物BB-15-2(0.324g，1.242mmol)，1-羥基苯并三唑(0.184g，1.366mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(0.262g，1.366mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(0.480g，3.72mmol)。室溫?cái)嚢?h后，將有機(jī)相倒入水中，用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，加無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑，所得殘留物經(jīng)快速過(guò)柱(淋洗劑，乙酸乙酯/石油醚＝1/3)得到目標(biāo)化合物BB-16-4(黃色油狀物，0.200g，收率：43.8％)。MS(ESI)m/z：368[M+H]+。步驟4：化合物BB-16-5的合成將化合物BB-16-4(0.150g，0.408mmol)加入到5mL的氮，氮-二甲基甲酰胺中，然后加入化合物1，2-二溴乙烷(0.462g，2.451mmol)，碳酸銫(0.531g，1.632mmol)。60℃下攪拌16h后。用水淬滅后，用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓旋干后得到目標(biāo)化合物BB-16-5(黃色固體，0.100g，收率：80％)。MS(ESI)m/z：394[M+H]+。步驟5：化合物BB-16的合成將化合物BB-16-5(0.100g，0.487mmol)加入到5mL的乙腈中，然后加入苯硫酚(0.429g，3.9mmol)，碳酸鉀(0.269g，1.95mmol)。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?6h后，將有機(jī)相倒入二氯甲烷中，過(guò)濾，減壓旋干得到目標(biāo)化合物BB-16(黃色油狀物，0.025g，收率：24.6％)。MS(ESI)m/z：209[M+H]+。參考例17：片段BB-17合成路線：步驟1：化合物BB-17-2的合成化合物BB-17-1(7.0g，31.78mmol)溶于稀鹽酸(6M，150mL)攪拌至均勻，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下慢慢滴加亞硝酸鈉溶液(4N，30mL)，然后在室溫下攪拌大約1小時(shí)，加入100mL水，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑，所得目標(biāo)化合物BB-17-2(7.5g，收率：66％)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：250[M+H]+。步驟2：化合物BB-17-3的合成將化合物BB-17-2(4.0g，16mmol)，鋅粉(6.2g，96mmol)和氯化銨(10g，192mmol)溶于甲醇(80mL)，在室溫下攪拌10分鐘，然后溫度升至45℃攪拌兩小時(shí)，減壓抽濾，甲醇洗滌濾餅，濾液真空減壓抽干，向殘留物中加入二氯甲烷，攪拌1小時(shí)，濾液減壓抽干，所得目標(biāo)化合物BB-17-3(3.5g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：236[M+H]+。步驟3：化合物BB-17-4的合成將化合物BB-17-3(3.5g粗品)和氮，氮-二異丙基乙胺(3.81g，29.6mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，在冰水浴氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢滴氯甲酸-2-氯乙酯(2.55g，18mmol)，然后在室溫下攪拌大約2小時(shí)，加水(80mL)稀釋，用二氯甲烷(100mL)萃取(60mL×3)。合并有機(jī)相用飽和的食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，所得化合物BB-17-4(5.0g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：342[M+H]+。步驟4：化合物BB-17-5的合成將化合物BB-17-4(5.0g粗品)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(100mL)，在冰水浴氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入鈉氫(60％，2.0g)，然后在室溫下攪拌大約2小時(shí)，加水(100mL)淬滅，用乙酸乙酯萃取(300mL)，有機(jī)相用飽和的食鹽水洗滌(30mL×5)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，所得殘留物經(jīng)快速制備色譜儀純化(淋洗劑∶石油醚/乙酸乙酯＝1∶10)得目標(biāo)化合物BB-17-5(2.4g)。MS(ESI)m/z：306[M+H]+。步驟4：化合物BB-17的合成將化合物BB-17-5(2.4g7.86mmol)溶于甲醇(80mL)，然后加入鈀炭(0.400g)，在氫氣(15Psi)下室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾鈀炭，濾液減壓蒸餾抽干得目標(biāo)化合物BB-17(1.2g，收率：89％)，直接用于下一步。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ4.30(t，J＝7.8Hz，2H)，3.62(t，J＝7.8Hz，2H)，3.03-2.87(m，8H)。參考例18：片段BB-18合成路線：步驟1：化合物BB-18-2的合成將化合物BB-18-1(2.0g，10mmol)和三乙胺(2.02g，20mmol)溶于二氯甲烷(40mL)，在冰水浴中氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢加入氯甲酸芐酯(2.0g，11mmol)，然后室溫下攪拌24小時(shí)，加入稀鹽酸(1N，30mL)，用乙酸乙酯萃取(80mL×3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑得目標(biāo)化合物BB-18-2(2.6g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：279[M+H-56]+步驟2：化合物BB-18-3的合成化合物BB-18-2(2.6g粗品)溶于氯化氫二氧六環(huán)溶液中(4M，25mL)攪拌至均勻，然后在室溫下攪拌2小時(shí)，濃縮溶劑得目標(biāo)化合物BB-18-3(1.8g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：235[M+H]+。步驟3：化合物BB-18-4的合成化合物BB-18-3(1.8g粗品)溶于稀鹽酸(6M，40mL)攪拌至均勻，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下慢慢滴加亞硝酸鈉溶液(2N，17mL)，然后在室溫下攪拌1小時(shí)，加入50mL水，用乙酸乙酯萃取(60mL×3)。合并有機(jī)相，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓去除溶劑得目標(biāo)化合物BB-18-4(2g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：264[M+H]+。步驟4：化合物BB-18-5的合成將化合物BB-18-4(2g粗品)，鋅粉(2.73g，42mmol)和氯化銨(4.45g，84mmol)溶于甲醇(50mL)，在室溫下攪拌10分鐘，然后溫度升至45℃攪拌兩小時(shí)，減壓抽濾，甲醇洗滌濾餅，濾液真空減壓抽干，向殘留物中加入二氯甲烷(100mL)，攪拌1小時(shí)，濾除不溶物，濾液減壓抽干得目標(biāo)化合物BB-18-5(1.8g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：250[M+H]+。步驟5：化合物BB-18-6的合成將化合物BB-18-5(1.8g粗品)和氮，氮-二異丙基乙胺(1.85g，14.4mmol)溶于二氯甲烷(40mL)，在冰水浴氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢滴加化合物氯甲酸-2-氯乙酯(1.36g，9.6mmol)，然后在室溫下攪拌2小時(shí)，加水(50mL)稀釋，用二氯甲烷萃取(50mL×3)。合并有機(jī)相，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮溶劑得目標(biāo)化合物BB-18-6(2.5g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：356[M+H]+。步驟6：化合物BB-18-7的合成將化合物BB-18-6(0.710g粗品)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(15mL)，在冰水浴氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入鈉氫(60％，0.320g)，然后在室溫下攪拌大約2小時(shí)，加水(50mL)淬滅，用乙酸乙酯萃取(200mL)，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20mL×5)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，所得殘留物經(jīng)快速制備色譜儀純化(淋洗劑∶石油醚/乙酸乙酯＝1∶10)得目標(biāo)化合物BB-18-7(0.300g，收率：47％)。MS(ESI)m/z：320[M+H]+。步驟7：化合物BB-18的合成將化合物BB-18-7(0.300g，0.94mmol)溶于甲醇(5mL)，然后加入鈀炭(0.020g)，在氫氣(15Psi)下室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾鈀炭，濾液減壓蒸餾抽干，所得目標(biāo)化合物BB-18(0.170g，收率：97.7％)直接用于下一步。參考例19：片段BB-19合成路線：步驟1：化合物BB-19-2的合成將化合物BB-17-3(1.0g，4.2mmol)和三乙胺(0.860g，8.5mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，在-10℃氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢滴加化合物BB-19-1(0.680g，6.3mmol)，然后在室溫下攪拌2小時(shí)，加水(50mL)稀釋，用二氯甲烷萃取(50mL×3)。合并有機(jī)相，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮溶劑得目標(biāo)化合物BB-19-2(1.3g粗品)，無(wú)須純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：308[M+H]+。步驟2：化合物BB-19的合成將化合物BB-19-2(0.100g，0.32mmol)溶于甲醇(10mL)，然后加入鈀炭(0.020g)，在氫氣球(15Psi)保護(hù)下室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾鈀炭，濾液減壓蒸餾抽干得目標(biāo)化合物BB-19(0.056g，收率：99.4％)直接用于下一步。MS(ESI)m/z：174[M+H]+。參考例20：片段BB-20合成路線：步驟1：化合物BB-20-2的合成將化合物BB-20-1(1g，7.6mmol)溶于四氫呋喃(10mL)中，加入苯甲醛(0.77mL，7.6mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌4小時(shí)后，濃縮。將所得固體(1.3g，7.6mmol)再溶于THF(15mL)中，加入冰醋酸(9mL)和氰基硼氫化鈉(1.05g，16.7mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌過(guò)夜。用1M氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH到9-10，用乙酸乙酯(50mLx3)萃取。有機(jī)相用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得1.5g固體。再將所得固體(1.5g，7.6mmol)溶在甲醇中(10mL)，加入1M氫氧化鈉溶液(10mL)。反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)后，濃縮，用二氯甲烷(50mLx3)萃取。有機(jī)相用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到粗產(chǎn)品BB-20-2(白色固體，1.37g，81.45％)直接用于下一步反應(yīng)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.28-7.33(m.，4H)，4.02(s，2H)，1.45(s，9H)。MS(ESI)m/z：167.0[M+H-56]+。步驟2：化合物BB-20-4的合成將化合物BB-20-3(0.833g，7.5mmol)溶在二氯甲烷(20mL)中加入化合物BB-20-2(1.1g，5mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)后，加入水淬滅，用二氯甲烷萃取(100mLx3)。有機(jī)相合并，用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，粗品用高效液相制備分離純化(柱子：PhenomenexGeminiC18250*50mm*5um，洗脫劑：乙腈+0.05％NH3.H2O，水+0.05％NH3.H2O)，得到BB-20-4(黃色固體，0.730g，收率：49％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.29(m，5H)，6.10(br，s，5H)，3.92(s，2H)，1.73-1.77(m，8H)，1.45(s，9H)。MS(ESI)m/z：304.0[M+H]+。步驟3：化合物BB-20-5的合成將化合物BB-20-4(0.600g，1.80mmol)和1，2-二溴乙烷(0.507g，2.70mmol)溶在氮，氮-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入碳酸銫(1.76g，5.40mmol)。反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫?cái)嚢?0min，然后反應(yīng)加熱到40℃，攪拌48小時(shí)。反應(yīng)液冷卻到室溫，倒入50mL的水中。水相用乙酸乙酯萃取(100mLx3)。有機(jī)相合并，用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。粗品用快速硅膠柱分離純化(淋洗劑∶乙酯乙酯/石油醚＝1/1)得到BB-20-5(黃色油狀物，0.140g，收率：22％)。MS(ESI)m/z：382.2[M+Na]+。步驟4：化合物BB-20-6的合成將化合物BB-20-5(0.200g，0.556mmol)溶在甲醇(20mL)中，在氬氣保護(hù)下加入氫氧化鈀/碳(20％，0.020g)。反應(yīng)液用氫氣置換三次后，調(diào)節(jié)氫氣壓力(50psi)，溫度50℃。反應(yīng)攪拌48小時(shí)后，過(guò)濾，濃縮得到粗品BB-20-6(灰色固體，0.180g，粗品)，直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：270[M+H]+。步驟5：化合物BB-20的合成將化合物BB-20-6(0.180g，粗品)溶在氯化氫二氧六環(huán)中(3mL，4M)中，反應(yīng)在室溫下攪拌1小時(shí)后，濃縮得到化合物BB-20的粗品鹽酸鹽(黃色固體，0.140g，100％)直接用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：170[M+H]+。參考例21：片段BB-21合成路線：步驟1：化合物BB-21-2的合成將化合物BB-21-1(42.0g，259mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(400mL)，然后加入氮-溴代丁二酰亞胺(46.1g，259mmol)。反應(yīng)物在20℃下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液倒入攪拌下的5％亞硫酸氫鈉和水的混合物(10∶1)，析出物過(guò)濾，水洗，溶于二氯甲烷(500mL)，硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-20-2(黃色固體，51.0g，收率：89.7％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.27(s，1H)，7.80(s，1H)，5.02(br，2H)。MS(ESI)m/z：241[M+H]+，243[M+H+2]+。步驟2：化合物BB-21-3的合成將化合物BB-21-2(51.0g，212mmol)溶于二甲基甲酰胺(500mL)，然后加入溴代丙酮酸乙酯(82.5g，423mmol)。反應(yīng)物在50℃攪拌16小時(shí)。反應(yīng)液冷到室溫，倒入冰水混合物(1L)攪拌20分鐘，析出物過(guò)濾，濾餅溶于乙酸乙酯(500mL)，硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-21-3(黃色固體，71.0g，收率：99.5％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.49(s，1H)，8.25(s，1H)，7.69(s，1H)，4.47(q，J＝6.8Hz，2H)，1.43(t，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：337[M+H]+，339[M+H+2]+。步驟3：化合物BB-21-4的合成將化合物BB-21-3(55.0g，163mmol)和環(huán)丙基硼酸(15.4g，179mmol)溶于二氧六環(huán)(500mL)，然后氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入磷酸鉀(103.9g，489mmol)和1，1′-雙(二苯基磷)二茂鐵氯化鈀二氯甲烷混合物(2.70g，3.26mmol)。反應(yīng)物在90℃攪拌16小時(shí)。反應(yīng)液冷到室溫，硅藻土過(guò)濾，濾液濃縮得到粗產(chǎn)物，快速過(guò)柱(淋洗劑∶乙酸乙酯/石油醚＝1/4)得到目標(biāo)化合物BB-21-4(黃色固體，24.0g，收率：49.3％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.18(s，1H)，8.06(s，1H)，7.38(s，1H)，4.46(q，J＝7.2Hz，2H)，1.98(m，1H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H)，1.07(m，2H)，0.76(m，2H)。MS(ESI)m/z：299[M+H]+。步驟4：化合物BB-21-5的合成將化合物BB-21-4(28.0g，93.9mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(250mL)，加入氯代丁二酰亞胺(12.5g，93.9mmol)。反應(yīng)物在40℃攪拌16小時(shí)。反應(yīng)液冷到室溫，倒入水中(500mL)攪拌20分鐘，析出物過(guò)濾，干燥得到目標(biāo)化合物BB-21-5(白色固體，31.0g，收率：99.3％)。MS(ESI)m/z：333[M+H]+。步驟5：化合物BB-21-6的合成將化合物BB-21-5(31.0g，93.2mmol)溶于甲醇(400mL)，加入氫氧化鋰一水化合物(19.6g，466mmol)和水(100mL)。反應(yīng)物在20℃攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液濃縮，殘留物用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH小于3，乙酸乙酯萃取(400mLx3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗(200mL)，硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-21-6(白色固體，27.3g，收率：89.6％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.05(s，1H)，7.42(s，1H)，2.02(m，1H)，1.08(m，2H)，0.76(m，2H)。MS(ESI)m/z：305[M+H]+。參考例22：片段BB-22合成路線：步驟1：化合物BB-22-2的合成將化合物BB-22-1(0.1g，0.584mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入二甲胺鹽酸鹽(0.072g，0.876mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)后，加入氰基硼氫化鈉(0.055g，0.876mmol)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)物倒入20mL的水中，用二氯甲烷/甲醇(10/1)萃取(30mLx3)。有機(jī)相合并，用飽和食鹽水洗(20mLx2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾濃縮得到目標(biāo)化合物BB-22-2的粗產(chǎn)物(黃色油狀物，0.12g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ4.10-4.21(m，2H)，3.87-3.95(m，2H)，3.81(d，J＝4.41Hz，1H)，2.16(s，6H)，1.43-1.44(m，9H)。步驟2：化合物BB-22的合成將化合物BB-22-2(0.11g，0.549mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(1mL，4M)，反應(yīng)在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-22的鹽酸鹽(黃色固體，0.075g，粗品)，粗品未經(jīng)純化，直接用于下一步的反應(yīng)。參考例23：片段BB-23合成路線：步驟1：化合物BB-23-1的合成化合物BB-22-1(0.4g，2.34mmol)溶于無(wú)水四氫呋喃(5mL)中，將反應(yīng)液冷卻到0℃，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下慢慢滴加甲基溴化鎂的四氫呋喃溶液(3M，1.00mL)。然后反應(yīng)溫度升到室溫，攪拌1小時(shí)后，加入1M的氯化銨水溶液(10mL)。反應(yīng)用乙酸乙酯萃取(30mLx3)，合并有機(jī)相用飽和鹽水洗(20mLx2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾濃縮得到目標(biāo)化合物BB-23-1的粗產(chǎn)物(黃色固體，0.47g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ4.07-4.17(m，1H)，3.79-3.88(m，4H)，1.51(s，3H)，1.43(s，9H)。步驟2：化合物BB-23的合成將化合物BB-23-1(0.15g，0.80mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(1mL，4M)，反應(yīng)在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-23的鹽酸鹽(黃色固體，0.099g，粗品)，粗品未經(jīng)純化，直接用于下一步的反應(yīng)。參考例24：片段BB-24合成路線：步驟1：化合物BB-24-1的合成將化合物BB-23-1(0.2g，1.07mmol)溶于無(wú)水四氫呋喃(5mL)，在室溫下加入鈉氫(0.17g，4.30mmol，60％)。反應(yīng)攪拌10min后，加入碘甲烷(1.14g，8.03mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，加入20mL的水淬滅，用乙酸乙酯萃取(50mLx3)，合并有機(jī)相用飽和鹽水洗(20mLx2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾濃縮得到目標(biāo)化合物BB-23-1的粗產(chǎn)物(黃色油狀物，0.26g)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ3.90(d，J＝9.04Hz，2H)，3.66(d，J＝9.04Hz，2H)，3.19-3.29(m，3H)，1.45(s，3H)，1.44(s，9H)。步驟2：化合物BB-24的合成將化合物BB-23-1(0.14g，0.70mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(1mL，4M)，反應(yīng)在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-24的鹽酸鹽(白色固體，0.095g)，粗品未經(jīng)純化，直接用于下一步的反應(yīng)。參考例25：片段BB-25合成路線：步驟1：化合物BB-25-2的合成將化合物BB-25-1(0.1g，0.46mmol)和醋酸銨(0.035g，0.046mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(2mL)，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(0.265g，0.697mmol)和氮，氮-二異丙基乙胺(0.18g，1.39mmol)，反應(yīng)物在常溫下攪拌16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯，有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓去除溶劑得到目標(biāo)化合物BB-25-2(白色固體，0.05g，粗品)，粗品未經(jīng)純化用于下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：237[M+Na]+步驟2：化合物BB-25-3的合成將化合物BB-25-2(0.05g，粗品)溶于四氫呋喃(1.5mL)，然后加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(1.5mL，4M)，反應(yīng)物室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，然后減壓去除溶劑得到目標(biāo)化合物BB-25(白色固體，0.025g，粗產(chǎn)品)。參考例26：片段BB-26合成路線：步驟1：化合物BB-26的合成將化合物BB-26-1(0.100g，0.534mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，然后加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(1mL，4M)。反應(yīng)液在20℃攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液濃縮得到目標(biāo)化合物BB-26(白色固體，0.060g，收率：90.91％)。參考例27：片段BB-27合成路線：步驟1：化合物BB-27-2的合成將化合物BB-27-1(0.10g，0.411mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(3mL)，然后加入二甲胺鹽酸鹽(0.070g，0.858mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(0.210g，1.62mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(0.184g，0.484mmol)，反應(yīng)物在常溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯，有機(jī)相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓去除溶劑得到目標(biāo)化合物BB-27-2(淡黃色油狀物，0.111g，收率：99.89％)。MS(ESI)m/z：293[M+Na]+。步驟2：化合物BB-27-3的合成將化合物BB-27-2(0.111g，0.411mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，然后加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(3mL，4M，12.00mmol)，反應(yīng)物在常溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后濃縮直接得到目標(biāo)化合物BB-27用于下一步反應(yīng)(黃色固體，0.085g，粗品)。參考例28：片段BB-28合成路線：步驟1：化合物BB-28-2的合成將化合物BB-28-1(10g，85.36mmol)，二碳酸二叔丁酯(18.6g，85.36mmol)溶于乙醚(100mL)，然后將碳酸鈉(18.1g，170.73mmol)配制成飽和溶液加入反應(yīng)液，反應(yīng)物在25℃下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾除去固體，濾液濃縮得到目標(biāo)化合物BB-28-2(黃色固體，14g，粗品)。MS(ESI)m/z：240[M+Na]+。步驟2：化合物BB-28-3的合成將化合物BB-28-1(6g，27.6mmol)和烯丙基溴(4g，33.1mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(60mL)，然后在0℃下分批加入鈉氫(1.7g，41.4mmol，60％)，反應(yīng)液在0℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入水萃滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得粗產(chǎn)品。通過(guò)快速過(guò)柱儀過(guò)柱(淋洗劑∶乙酸乙酯/石油醚＝1/10)得到目標(biāo)化合物BB-28-3(黃色油狀物，2g，粗品)。MS(ESI)m/z：158[M-Boc+H]+。步驟3：化合物BB-28-4的合成將化合物BB-28-3(2g，7.8mmol)溶于甲醇(20mL)，冷卻到-78℃，通入臭氧直至反應(yīng)液變成藍(lán)色，然后通入氮?dú)庵敝练磻?yīng)液變成無(wú)色，再加入二甲硫醚(12.4g，38.8mmol)，25℃反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后濃縮，加入乙酸乙酯，有機(jī)相用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得目標(biāo)化合物BB-28-4(黃色油狀物，1.8g，粗品)。MS(ESI)m/z：160[M-Boc+H]+。步驟4：化合物BB-28-5的合成將化合物BB-28-4(0.5g，1.93mmol)，環(huán)戊胺(0.197g，2.31mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(0.29g，1.93mmol)和無(wú)水硫酸鈉(0.197g，2.31mmol)溶于干燥的甲醇(5mL)，反應(yīng)物室溫?cái)嚢?小時(shí)后，緩慢加入硼氫化鈉(0.088g，2.31mmol)，再室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后用氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯萃取，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得到粗產(chǎn)物，快速過(guò)柱(淋洗劑∶甲醇/二氯甲烷＝1/10)得到目標(biāo)化合物BB-28-5(黃色油狀物，0.25g，粗品)。MS(ESI)m/z：329[M+H]+。步驟5：化合物BB-28-6的合成將化合物BB-28-5(0.1g，0.3mmol)溶解于四氫呋喃(0.5mL)中，隨后加入氫氧化鋰水溶液(1mL，2M)。反應(yīng)液在30℃下攪拌4小時(shí)后，減壓除去四氫呋喃，然后凍干，得到化合物BB-28-6(黃色油狀物，0.09g，粗品)。無(wú)需純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：301[M+H]+。步驟6：化合物BB-28-7的合成將化合物BB-12-7(0.09g，0.3mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(0.172g，0.45mmol)和氮，氮-二異丙基乙胺(0.116g，0.9mmol)溶于干燥的氮，氮-二甲基甲酰胺(2mL)。反應(yīng)液在20℃攪拌4小時(shí)，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)液倒入乙酸乙酯中?；旌弦河檬雏}水洗，硫酸鈉干燥，濃縮得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物用薄層層析板(展開劑∶乙酸乙酯/石油醚＝1/3)分離純化得到化合物BB-28-6(黃色油狀物，0.05g，55％)。MS(ESI)m/z：227[M-56+H]+。步驟7：化合物BB-28的合成將化合物BB-28-7(0.05g，0.18mmol)溶于二氯甲烷(1mL)，加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(1mL，4M)，反應(yīng)液在20℃攪拌1.5小時(shí)后，反應(yīng)物減壓濃縮，得到化合物BB-28(白色固體，0.030g，粗品)。無(wú)需純化直接用于下一步。MS(ESI)m/z：183[M+H]+。參考例29：片段BB-29合成路線：步驟1：化合物BB-29-2的合成將化合物BB-29-1(4.56g，43.37mmol)溶于甲苯(24mL)，將氫氧化鈉(2.19g，54.65mmol)溶于水(12mL)，然后將氫氧化鈉的水溶液緩慢加入反應(yīng)物中。再將氯甲酸芐酯(6.96g，40.77mmol)緩慢滴加到反應(yīng)液中，控制反應(yīng)液的溫度在10-20℃，滴加結(jié)束后，反應(yīng)物在室溫下攪拌16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后將有機(jī)層分離出來(lái)，用食鹽水洗(50mLx2)，硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-29-2(黃色油狀物，11g，粗品)，直接用于下一步。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.38-7.27(m，5H)，5.1(s，2H)，4.38(t，J＝5.4Hz，1H)，3.38(s，6H)，3.35-3.32(m，2H)。步驟2：化合物BB-29-3的合成將化合物BB-29-2(5.62g，23.49mmol)，氫氧化鉀(2.64g，46.98mmol)和芐基三甲基氯化銨(0.088g，0.474mmol)懸浮于甲苯(20mL)中，然后緩慢加入3-溴丙烯(5.68g，46.98mmol)的甲苯溶液(6mL)，控制反應(yīng)物的溫度在20-30度。反應(yīng)物在室溫下攪拌16個(gè)小時(shí)，后又在30度下反應(yīng)24個(gè)小時(shí)。反應(yīng)完成后，加入20mL水，有機(jī)相分離出來(lái)，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮得到目標(biāo)化合物BB-29-3(黃色油狀物，5.20g，粗品)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.35-7.29(m，5H)，5.79-5.73(m，1H)，5.17-5.14(m，3H)，4.53-4.07(m，1H)，4.00-3.96(m，2H)，3.40-3.31(m，8H)。步驟3：化合物BB-29-4的合成將反應(yīng)物BB-29-3(2.00g，7.16mmol)溶于甲醇/二氯甲烷(3∶1，，40mL)，冷卻至-78度后，先通入氧氣5min，再通入臭氧至溶液出現(xiàn)持續(xù)的藍(lán)色，再通入氧氣直至溶液無(wú)色。將二甲硫醚(0.344g，7.16mmol)加入到反應(yīng)物中，并緩慢升至室溫，在室溫下攪拌16個(gè)小時(shí)。反應(yīng)液減壓濃縮得到目標(biāo)化合物BB-29-4(黃色油狀物，2.70g，粗品)，直接用于下一步反應(yīng)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.37-7.28(m，5H)，5.18-5.12(m，2H)，4.45-4.34(m，1H)，3.47-3.45(m，2H)，3.42-3.40(m，2H)，3.39-3.30(m，3H)，3.09(s，1H)。步驟4：化合物BB-29-5的合成將化合物BB-29-4(0.500g，1.32mmol)溶于甲醇(5mL)，然后加入化合物BB-12-4(TCI，0.199g，1.32mmol)，反應(yīng)液在室溫下反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液減壓濃縮得到目標(biāo)化合物BB-29-5(橙色油狀物，0.550g，粗品)，直接用于下一步反應(yīng)。步驟5：化合物BB-29-6的合成將化合物BB-29-5(0.450g，1.19mmol)懸浮在甲酸(5mL)中，緩慢加入氰基硼氫化鈉(0.150g，2.38mmol)，反應(yīng)物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?0小時(shí)。反應(yīng)液減壓濃縮，殘留物用用高效液相制備分離純化(柱子：PhenomenexGeminiC18150*25mm*5um，洗脫劑∶乙腈，水)，得到目標(biāo)化合物BB-29-6(黃色油狀物，0.040g，收率：10％)。MS(ESI)m/z：301[M+H]+。步驟6：化合物BB-29的合成將化合物BB-29-6(0.050g，0.157mmol)溶于甲醇(5mL)，然后加入鈀/炭(0.010g)，反應(yīng)物在15Psi氫氣下室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)液過(guò)濾，濾液濃縮得目標(biāo)化合物BB-29(黃色油狀物，0.030g，粗品)。MS(ESI)m/z：185[M+H]+。參考例30：片段BB-30和BB-30a合成路線：步驟1：化合物BB-30和BB-30a的合成將化合物BB-30-1(0.200g，1.10mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，然后加入氯化氫二氧六環(huán)溶液(1mL，4M)。反應(yīng)液在20℃攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液濃縮得到目標(biāo)化合物BB-30和BB-30a(白色固體，0.130g，收率：99％)，沒有分離直接用于下一步合成。MS(ESI)m/z：83[M+H]+。MS(ESI)m/z：101[M+H]+。參考例31：片段BB-31合成路線：步驟1：化合物BB-31-3的合成將化合物BB-31-1(0.5g，2.18mmol)和BB-31-2(0.239g，2.18mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(5mL)，然后加入氮，氮-二異丙基乙胺(0.845g，6.54mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(1.24g，3.27mmol)。反應(yīng)物在20℃下攪拌3小時(shí)。加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(20mLx3)。合并有機(jī)相用水洗滌(20mLx2)，食鹽水(20mL)洗滌，硫酸鈉干燥。過(guò)濾，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-31-3(黃色油狀物，0.6g，收率：97％)。MS(ESI)m/z：307[M+Na]+。步驟2：化合物BB-31的合成將化合物BB-31-3(0.1g，0.352mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，然后加入氯化氫甲醇溶液(1mL，4M)。反應(yīng)液在20℃攪拌1小時(shí)。反應(yīng)液濃縮得到目標(biāo)化合物BB-31(白色油狀物，0.077g，收率：99％)。MS(ESI)m/z：185[M+H]+。參考例32：片段BB-32合成路線：步驟1：化合物BB-32-2的合成將化合物BB-32-1(22g，134.9mmol)和無(wú)水碳酸鉀(23g，161.9mmol)溶于無(wú)水氮，氮-二甲基甲酰胺(250mL)中，再將碘甲烷(19mL，296.8mmol)慢慢加入。反應(yīng)液被加熱到65℃攪拌2小時(shí)。然后加水稀釋，用石油醚/二氯甲烷9∶1萃取(3×200mL)。合并有機(jī)相，水洗(50mL)，飽和食鹽水洗(50mL)，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得到目標(biāo)化合物BB-32-2(黃色油狀物，20g，粗品)，直接用于下一步反應(yīng)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.50(d，1H)，7.30(s，1H)，6.90(d，1H)。MS(ESI)m/z：178.1[M+H]+。步驟2：化合物BB-32-4的合成將氧-(2，4，6-三甲基苯磺?；?乙酰羥肟酸乙酯(50g，175.4mmol)溶于二氧六環(huán)(48mL，561.3mmol)中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將溶液冷卻到0℃。然后在30分鐘內(nèi)滴加高氯酸(22mL，368.3mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)后，加入100mL冰水混合物。用二氯甲烷萃取(3×200mL)，合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗(50mL)，無(wú)水碳酸鉀固體干燥，在30℃濃縮得到200mL化合物BB-32-3的二氯甲烷溶液。MS(ESI)m/z：216.1[M+H]+。將化合物BB-32-2(20g，112.9mmol)和化合物BB-32-3的二氯甲烷溶液混合。反應(yīng)在室溫下攪拌15小時(shí)后，濃縮得到粗產(chǎn)品。再將粗品溶在200mL的甲基叔丁基醚中攪拌10分鐘，過(guò)濾得到目標(biāo)化合物BB-32-4(淡黃色固體，15g，收率：69％)。步驟3：化合物BB-32-5的合成將化合物BB-32-4(25g，129mmol)和無(wú)水碳酸鉀(37.6g，272mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(250mL)，在0℃慢慢滴加丁炔二酸二甲酯(28.9mL，229.3mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌48小時(shí)后，倒入300mL的水中，大量固體析出后過(guò)濾，濾餅保存。濾液用石油醚/乙酸乙酯萃取(3×300mL)，合并有機(jī)相，水洗(50mL)，飽和食鹽水洗(50mL)，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，得到的粗品和上面的濾餅一起用快速過(guò)柱儀分離純化(淋洗劑∶二氯甲烷/石油醚＝1/1)得到目標(biāo)化合物BB-32-5(黃色固體，4.8g，收率10％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.60(s，1H)，7.13(s，1H)，3.98-4.00(s，6H)，3.90-3.94(s，3H)。MS(ESI)m/z：333.0[M+H]+。步驟4：化合物BB-32-6的合成將化合物BB-32-5(4.8g，14.5mmol)溶于濃硫酸(25mL，450mmol)和水(10mL)的混合溶液中，反應(yīng)升溫到120℃后，攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)液倒入200mL的冰水中，大量固體析出，過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯萃取(100mL×4)。合并有機(jī)相，直接用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮除去溶劑。殘留物與上面的濾餅合并干燥得到目標(biāo)化合物BB-32-6(黃色固體，4.2g，粗品)，未經(jīng)純化，直接下一步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：247.0[M+H]+。步驟5：化合物BB-32-7的合成將化合物BB-32-6(4.2g，17mmol)溶在甲醇中(50mL)，慢慢滴加濃硫酸(5mL)后，反應(yīng)在90℃回流2小時(shí)。反應(yīng)液濃縮，殘留物用水(50mL)稀釋，再用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，所得固體用快速層析柱分離純化(淋洗劑∶甲醇/二氯甲烷＝1/10)得到目標(biāo)化合物BB-32-7(黃色固體，2.7g，收率：61％)。MS(ESI)m/z：261.0[M+H]+。步驟6：化合物BB-32-8的合成將化合物BB-32-7(1.2g，4.6mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，室溫下依次加入二異丙基乙胺(1.19g，9.2mmol)和氮-苯基三氟甲基磺酰胺(3.2g，8.98mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌3小時(shí)后，再補(bǔ)加氮-苯基三氟甲基磺酰胺(1g，2.8mmol)，濃縮除去溶劑，所得固體通過(guò)快速層析柱分離純化(淋洗劑∶石油醚/二氯甲烷＝10/1)得到目標(biāo)化合物BB-32-8(黃色固體，1.2g，收率：67％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.76(s，1H)，7.35(s，1H)，7.26-7.28(m，1H)。步驟7：化合物BB-32-9的合成將化合物BB-32-8(0.5g，1.27mmol)溶在二氧六環(huán)(5mL)中，依次加入環(huán)丙基硼酸(0.219g，2.54mmol)，磷酸鉀(0.812g，3.82mmol)和1，1′-雙(二-叔-丁基膦)二茂鐵二氯化鈀-二氯甲烷復(fù)合物(0.05g，0.06mmol)。反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，90℃回流3小時(shí)后，冷卻到室溫，過(guò)濾除去不溶的固體。濾液倒入乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)的混合溶液中靜置分層，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮。所得固體用制備層析板分離純化(展開劑∶石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到目標(biāo)化合物BB-32-9(黃色油狀物，0.041g，收率：11％)。MS(ESI)m/z：285.0[M+H]+。步驟8：化合物BB-32-10的合成將化合物BB-32-9(0.04g，0.14mmol)溶在氮，氮-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入氯代丁二酰亞胺(0.028g，0.21mmol)。反應(yīng)在60℃攪拌1小時(shí)后，加水稀釋，用石油醚/二氯甲烷萃取(3×20mL)。合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮。所得固體用制備層析板分離純化(淋洗劑∶石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到目標(biāo)化合物BB-32-10(黃色油狀物，0.046g，收率：100％)。MS(ESI)m/z：319.0[M+H]+。步驟9：化合物BB-32的合成將化合物BB-32-10(0.046g，0.15mmol)溶在甲醇(2mL)和水(0.4mL)的混合溶液中，加入一水合氫氧化鋰(0.037g，0.75mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌過(guò)夜，濃縮除去甲醇，然后用1M的稀鹽酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH到1，用二氯甲烷萃取(3×20mL).合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，得到粗產(chǎn)品目標(biāo)化合物BB-32(灰色固體，0.028g，收率：62％)，未經(jīng)純化，直接進(jìn)行下步反應(yīng)。MS(ESI)m/z：305.0[M+H]+。參考例33～41：片段BB-33～41參照參考例20(片段BB-20)中步驟1～5合成下表中各參考例。實(shí)施例30：YD_0019合成路線：步驟1：化合物YD_0019的合成將化合物BB-1(0.035g，0.128mmol)溶于氮，氮-二甲基甲酰胺(2mL)，然后加入化合物BB-14(0.027g，0.128mmol)，氮，氮-二異丙基乙胺(0.050g，0.386mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-氮，氮，氮’，氮’-四甲基脲六氟磷酸酯(0.063g，0.167mmol)。反應(yīng)物在常溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加入乙酸乙酯(100mL)，然后用食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得到粗產(chǎn)品，用厚硅膠板分離(展開劑∶石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到目標(biāo)化合物YD_0019(0.050g，收率：84％)。MS(ESI)m/z：462[M+H]+。1HNMR(400MHz，MeOD)：δ7.87(s，1H)，7.62(s，1H)，7.55(s，1H)，3.15-3.11(m，1H)，2.52(s，3H)，2.13-2.26(m，12H)，1.36(d，J＝7.2Hz，6H)。參照實(shí)施例30(化合物YD_0019)中步驟1的合成方法，合成下表中各實(shí)施例：實(shí)驗(yàn)例1：體外評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河肏CV基因型1a(HCV-1a)和1b(HCV-1b)穩(wěn)轉(zhuǎn)復(fù)制子(replicon)細(xì)胞測(cè)定抗HCV化合物的EC50和CC50值?；蛐?a復(fù)制子來(lái)源為H77克隆，含有K1691R，K2040R和S2204I適應(yīng)性突變。基因型1b復(fù)制子來(lái)源為Con1克隆，含有E1202G，T1280I和K1846T適應(yīng)性突變。背景介紹：HCV1a(HCV-1a)和1b(HCV-1b)基因型亞基因組復(fù)制子系統(tǒng)含有相關(guān)HCV基因亞型非結(jié)構(gòu)蛋白基因，G418抗性基因NEO和熒光素酶基因，使得HCV相關(guān)蛋白及熒光素酶可在細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。通過(guò)檢測(cè)熒光素酶基因的表達(dá)高低可以確定HCV復(fù)制子的復(fù)制水平的高低。因此，該系統(tǒng)作為體外篩選抗HCV化合物活性的模型。實(shí)驗(yàn)材料：HCV復(fù)制子細(xì)胞系：HCV-1a和HCV-1b細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)液：DMEM(Invitrogen，Cat.#11960077)培養(yǎng)液，加10％胎牛血清(FBS，Sigma，Cat.#12003C)和1％雙抗(青霉素5000IU/mL，鏈霉素10mg/mL，Hyclone，Cat.#SV30010)。胰酶(Invitrogen，Cat.#25200072)。PBS(Invitrogen，Cat.#10010023)。臺(tái)盼藍(lán)(Invitrogen，Cat.#15250061)。CellTiter-fluor(Promega，Cat.#G6082)。Bright-Glo(Promega.Cat.#E2650)。CO2培養(yǎng)箱，Thermo240I。Multidrop自動(dòng)分液器，Thermo。POD810PlateAssembler全自動(dòng)微孔板預(yù)處理系統(tǒng)，Labcyte。EnVisionMultilabelPlateReaders微孔板分光光度計(jì)，PerkineElmer。實(shí)驗(yàn)步驟和方法：a)化合物溶液制備、稀釋和加樣：將化合物粉劑溶解于100％DMSO。然后對(duì)化合物以5倍稀釋6個(gè)點(diǎn)。用Echo聲波移液設(shè)備(Echoliquidhandler)5加到細(xì)胞板中。DMSO終濃度為0.5％。每個(gè)化合物做雙復(fù)孔。b)細(xì)胞培養(yǎng)(HCV-1a或HCV-1b復(fù)制子細(xì)胞)：1)吸掉細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)上清，用10mLPBS洗細(xì)胞。2)加入預(yù)熱過(guò)的胰酶到洗過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使胰酶均勻覆蓋培養(yǎng)瓶底部。放到37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中消化。3)每個(gè)T150培養(yǎng)瓶用10-15mL培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，吸取0.1mL用臺(tái)盼藍(lán)溶液稀釋2倍計(jì)數(shù)細(xì)胞。4)用培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞到8×104/mL，用自動(dòng)分液器(ThermoScientific)將稀釋好的細(xì)胞加入到含化合物的96孔板(Greiner，Cat.#655090)(100μL/孔，8000cells/孔)。置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天。細(xì)胞對(duì)照孔：不加化合物，只含0.5％DMSO。5)加熒光底物CellTiter-fluor到細(xì)胞孔，孵育30分鐘后用熒光檢測(cè)系統(tǒng)Envison(Ex_405nm/Em515nm)檢測(cè)信號(hào)。根據(jù)熒光數(shù)據(jù)分析化合物對(duì)HCV復(fù)制子細(xì)胞活性的影響，并用于計(jì)算CC50值。6)然后加熒光素酶發(fā)光底物Bright-Glo，溫孵5分鐘后用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)Envison檢測(cè)(波長(zhǎng)＞700mn)熒光素酶活性；根據(jù)熒光素酶數(shù)據(jù)分析化合物的抗HCV復(fù)制子抑制活性并用于計(jì)算EC50值。c)數(shù)據(jù)處理和分析：采用GraphPadPrism軟件對(duì)抑制百分比(inh％)數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性擬合分析得到EC50或CC50值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1-1和1-2：表1-1HCV復(fù)制子細(xì)胞EC50/CC50測(cè)試結(jié)果實(shí)施例化合物IDEC50(1b)EC50(1a)CC5038YD_0214AA＞300039YD_0215AA＞300040YD_0216AA＞300041YD_0219AA＞300042YD_0245AA＞300043YD_0250AA＞300045YD_0272BB＞300046YD_0278AA＞300047YD_0279AA＞300052YD_0331AA＞3000注：A(0.1nM～100nM)；B(100.01nM～1000nM)；C(1000.01nM～5000nM)。表1-2HCV復(fù)制子細(xì)胞EC50/CC50測(cè)試結(jié)果實(shí)施例化合物IDEC50(1b)(nM)EC50(1a)(nM)CC50(nM)38YD_02143.060.22＞300039YD_02154.171.79＞300040YD_02166.202.13＞300041YD_021914.084.36＞300042YD_024525.195.46＞300043YD_02501.740.48＞300045YD_0272102.70129.00＞300046YD_02784.771.63＞300047YD_02794.350.93＞300052YD_033121.199.72＞3000結(jié)論：本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的體外抗丙肝病毒活性。實(shí)驗(yàn)例2：體外活性對(duì)比1)抗丙型肝炎病毒GT1a和GT1b復(fù)制子活性測(cè)試在熒光素酶實(shí)驗(yàn)中YD_0250抗GT1a(H77)復(fù)制子的平均EC50值為0.34±0.06nM，其活性顯著優(yōu)于參考化合物YA_0001(表2-1)。參考化合物YA_0001參照文獻(xiàn)(Med.Chem.Lett.2012，3，565-569)合成。在熒光素酶實(shí)驗(yàn)中，YD_0250抗GT1b(Con1)復(fù)制子的平均EC50值為1.97±0.41nM，其活性顯著優(yōu)于參考化合物YA_0001(表2-1)。表2-1抗丙型肝炎病毒GT1a和GT1b復(fù)制子活性結(jié)論：在抗丙型肝炎病毒GT1a和GT1b復(fù)制子活性方面，YD_0250優(yōu)于YA_0001。2)抗已知NS4B蛋白抑制劑耐藥突變復(fù)制子活性測(cè)試YD_0250對(duì)丙型肝炎病毒NS4B抑制劑耐藥突變復(fù)制子的活性測(cè)試在Huh-7細(xì)胞中采用瞬轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。先將復(fù)制子質(zhì)粒DNA用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶線性化后，用T7RNA聚合酶將DNA轉(zhuǎn)錄成RNA。用電擊穿孔法將體外轉(zhuǎn)錄制備的復(fù)制子RNA轉(zhuǎn)染到Huh-7細(xì)胞內(nèi)。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞以每孔10,000個(gè)細(xì)胞的密度接種到96孔實(shí)驗(yàn)板中，然后加入3倍系列稀釋后的化合物，共8個(gè)濃度，雙復(fù)孔。細(xì)胞培養(yǎng)中的DMSO終濃度為0.5％。細(xì)胞在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素DMEM培養(yǎng)液，5％CO2、37℃條件下培養(yǎng)3天。然后棄去細(xì)胞上清，加入Bright-Glo檢測(cè)試劑，在5分鐘內(nèi)用Envision檢測(cè)化學(xué)發(fā)光信號(hào)(RLU)。根據(jù)熒光素酶數(shù)據(jù)分析化合物的抗HCVNS4B抑制劑耐藥突變復(fù)制子抑制活性并用于計(jì)算EC50值。YD_0250對(duì)丙型肝炎病毒NS4B抑制劑耐藥突變復(fù)制子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2-2。表2-2抗己知NS4B蛋白抑制劑耐藥突變復(fù)制子活性*C＝半胱氨酸；F＝苯丙氨酸；H＝組氨酸；M＝蛋氨酸；R＝精氨酸；V＝纈氨酸。H94R意為丙型肝炎病毒NS4B的94位殘基的組氨酸突變?yōu)榫彼?；余同。結(jié)果表明，GT1bNS4B蛋白抑制劑耐藥突變H94R和F98C對(duì)YD_0250耐藥水平與對(duì)參考化合物YA_0001耐藥水平相當(dāng)。耐藥突變V105M對(duì)YD_0250耐藥水平顯著優(yōu)于對(duì)參考化合物YA_0001耐藥水平。實(shí)驗(yàn)例3PK對(duì)比試驗(yàn)將試驗(yàn)化合物的澄清溶液經(jīng)尾靜脈注射到SD大鼠體內(nèi)(過(guò)夜禁食，7-10周齡)，將試驗(yàn)化合物灌胃給予到SD大鼠(過(guò)夜禁食，7-10周齡)。動(dòng)物均于給藥后0.033，0.0833，0.25，0.5，1，2，4，8，12和24小時(shí)從頸靜脈或尾靜脈采血約200μL置于添加了EDTA-K2的抗凝管中，4℃，3000g離心15min取血漿。采用LC-MS/MS法測(cè)定血藥濃度，使用WinNonlinTMVersion6.3(Pharsight，MountainView，CA)藥動(dòng)學(xué)軟件，以非房室模型線性對(duì)數(shù)梯形法計(jì)算相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。1)YA_0001PK測(cè)試單次靜脈注射給予1mg/kg的YA_0001(1mg/mL/compoundin20％DMSO/60％PEG400/20％Water)后，SD大鼠表現(xiàn)出快速的血漿清除率(CL)36.7±7.44mL/min/kg，表觀分布容積(Vdss)為1.57±0.102L/kg，平均血漿消除半衰期T1/2和曲線下面積AUC0-last分別為0.552±0.119h和1011±214ng·h/mL。試驗(yàn)結(jié)果詳見表3-1。表3-1YA_0001PK測(cè)試結(jié)果2)YD_0214PK測(cè)試單次靜脈注射給予2mg/kg的YD_0214(2mg/mLinDMSO/PEG400/H20-20/60/20)后，SD大鼠表現(xiàn)出很快的血漿清除率(CL)56.3±12.8mL/min/kg，表觀分布容積(Vdss)為2.26±0.400L/kg，平均血漿消除半衰期T1/2和曲線下面積AUC0-last分別為0.488±0.0350h和1340±336ng·h/mL?？诜o藥給予10mg/kg的YD_0214(2mg/mLinPEG400/Tween80/H20-40/10/50)后，SD大鼠在0.917±0.946小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為411±141ng/mL，AUC0-last為1610±622ng·h/mL?？诜枚葹?4.1％。試驗(yàn)結(jié)果詳見表3-2和表3-3.口服給藥給予10mg/kg的YD_0214(1mg/mLin0.5％CMC-Nawith0.5％Tween80inwater)后，SD大鼠在1.25±0.671小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為543±90.4ng/mL，AUC0-last為2028±383ng·h/mL?？诜o藥給予30mg/kg的YD_0214(3mg/mL)后，SD大鼠在1.50±0.577小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為1090±328ng/mL，AUC0-last為5441±872ng·h/mL?？诜o藥給予100mg/kg的YD_0214(10mg/mL)后，SD大鼠在4.67±4.74小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為1890±524ng/mL，AUC0-last為13978±9002ng·h/mL?？诜o藥給予300mg/kg的YD_0214(30mg/mL)后，SD大鼠在2.83±2.78小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為3559±1371ng/mL，AUC0-last為24403±17376ng·h/mL。YD_0214口服10和30mg/kg組的系統(tǒng)暴露量(AUC0-last和Cmax)未見明顯的性別差異(大于0.5并小于2倍)，100和300mg/kg組的系統(tǒng)暴露量(AUC0-last)雌性高于雄性2倍?？诜┝繌?0mg/kg增至100mg/kg，雄性與雌性SD大鼠系統(tǒng)暴露量增長(zhǎng)與劑量增加成線性，到300mg/kg時(shí)系統(tǒng)暴露量增長(zhǎng)低于劑量比例。試驗(yàn)結(jié)果詳見表3-4和表3-5：表3-2YD_0214PK測(cè)試結(jié)果表3-3YD_0214PK測(cè)試結(jié)果表3-4YD_0214PK測(cè)試結(jié)果表3-5YD_0214PK測(cè)試結(jié)果3)YD_0250PK測(cè)試單次靜脈注射給予1mg/kg的YD_0250(0.5mg/mLinDMSO∶PEG400∶20％Solutol＝15∶25∶60)后，SD大鼠表現(xiàn)出中等的血漿清除率(CL)17.8±3.03mL/min/kg，表觀分布容積(Vdss)為1.67±0.173L/kg，平均血漿消除半衰期T1/2和曲線下面積AUC0-last分別為1.15±0.318h和959±197ng·h/mL?？诜o藥給予3、10和30mg/kg的YD_0250(0.3，1and3mg/mLincomoil)后，口服利用度(根據(jù)雌雄動(dòng)物平均AUC0-inf進(jìn)行計(jì)算)分別為65.1％，40.1％以及43.1％。單次口服給予3mg/kgYD_0250后，SD大鼠在2.00±1.10小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為311±70.6ng/mL，AUC0-last為1610±399ng·h/mL。單次口服給予10mg/kgYD_0250后，SD大鼠在1.50±0.548小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為507±163ng/mL，AUC0-last為3820±1330ng·h/mL。單次口服給予30mg/kgYD_0250后，SD大鼠在2.67±1.03小時(shí)達(dá)峰，血漿達(dá)峰濃度為899±428ng/mL，AUC0-last為10600±5570ng·h/mL。YD_0250口服3、10以及30mg/kg組的系統(tǒng)暴露量(AUC0-last和Cmax)未見明顯的性別差異(大于0.5并小于2倍)?？诜┝繌?mg/kg增至30mg/kg，雄性與雌性SD大鼠系統(tǒng)暴露量增長(zhǎng)略低于劑量比例(雄性及雌性AUC0-last分別增長(zhǎng)4.64及7.02)。試驗(yàn)結(jié)果詳見表3-6：表3-6YD_0250PK測(cè)試結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)論：PK數(shù)據(jù)表明YD_0250比YD_0214及參考化合物YA_0001體內(nèi)清除率低。YD_0250口服同等劑量下(30mpk)生物利用度高于YD_0214，在所有測(cè)試濃度下均無(wú)明顯的性別差異，且具有較大的線性劑量遞增范圍，有更好的成藥性。實(shí)驗(yàn)例4：YD_0214和YD_0250Herg數(shù)據(jù)對(duì)比，試驗(yàn)結(jié)果詳見表4-1：表4-1QPatchHTXhERGIC50測(cè)試化合物IDYD_0214YD_0250hERGIC503.11μM11.71μM實(shí)驗(yàn)結(jié)論：Herg測(cè)試表明YD_0250比YD_0214更好的安全性。綜合起來(lái)，YD_0250化合物較參考化合物YA_0001有更好的體外活性及耐藥性，PK數(shù)據(jù)顯示YD_0250較參考化合物YA_0001有更低的體內(nèi)清除率及更好的成藥性；用親水性強(qiáng)的CN(YD_0250)取代Cl(YD_0214)后，PK數(shù)據(jù)顯示YD_0250較參考化合物YD_0214有更低的體內(nèi)清除率及更好的成藥性，Herg測(cè)試表明YD_250較YD_0214有更好的安全性。