專利名稱：一種雙保護(hù)氨基酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雙保護(hù)氨基酸的制備方法，尤其是Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH雙保護(hù)氨基酸的制備方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有制備Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH雙保護(hù)氨基酸的方法，即制備NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH雙保護(hù)氨基酸的方法，如Tetrahedron，47(32)，6353～70，1991中介紹，參照NG-(2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；?-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pmc)-OH的制備實(shí)例中敘述的操作步驟，用2，3，5-三甲基苯酚和異戊二烯在醋酸中以無水氯化鋅為催化劑制備得2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃，再經(jīng)氯磺化得2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺酰氯pmc-Cl，并將之與Nα-芐氧基碳-L-精氨酸，即Z-Arg-OH反應(yīng)縮合，經(jīng)結(jié)晶、純化和氫解(10％鈀/炭)，獲得NG-(2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺酰基)-精氨酸，即[L-Arg(Pmc)·OH]。然后將L-Arg(Pmc)·OH與N-(9-芴甲氧羰基氧)琥珀酰亞胺Fmoc-Osu反應(yīng)縮合而成最終產(chǎn)品NG-(2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺酰基)-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pmc)-OH。又據(jù)Tetrahedron Letters，1993，34(49)P7829～7832介紹，2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?Pbf)保護(hù)的氨基酸要比相應(yīng)的2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；?Pmc)衍生物更易被三氟乙酸(TFA)解封。NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰基)-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH的合成方法與NG-(2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；?-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pmc)-OH類似。上述制備方法的不足是反應(yīng)操作步驟復(fù)雜、收率低、純度低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雙保護(hù)氨基酸的制備方法，以提高產(chǎn)品的收率、純度，并簡化操作步驟。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明這樣實(shí)現(xiàn)的在冰水冷卻下將2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰氯和Nα-芐氧羰基-L-精氨酸按1～2∶1的比例用量溶于六甲基磷酰胺溶液中，再滴入到含有按2～4∶1比例計(jì)算量的吡啶和Nα-芐氧羰基-L-精氨酸在六甲基磷酰胺溶液中，保持2小時(shí)，在室溫下再保持2小時(shí)，用水稀飽和釋反應(yīng)液，用1，2-二氯乙烷提取以去除六甲基磷酰胺，水相用檸檬酸水液中和酸化到PH3～4，析出的油狀物用乙酸乙酯提取，去除溶劑后的殘留物在甲醇及無水乙醚中加入環(huán)己烷胺制成Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸環(huán)己烷胺鹽，然后在蒸餾水中以飽和檸檬酸水液酸化后得到游離Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰基)-L-精氨酸，即Nα-Cbz-Arg(Pbf)-OH；將Nα-Cbz-Arg(Pbf)-OH在10％鈀/炭存在下進(jìn)行氫化以脫去上Nα上的保護(hù)基芐氧羰基，得NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸，即L-Arg(Pbf)-OH；將L-Arg(Pbf)-OH置于10％Na2CO3水液中，加入二氯甲烷，并在-2℃下邊攪拌邊加入按1∶1.07比例計(jì)算量的N-(9-芴甲氧羰基氧)琥珀酰亞胺Fmoc-Osu，再加入1克相轉(zhuǎn)移催化劑N.N，N-三辛基-N-甲基硫酸氫銨，在冰浴下保持1小時(shí)，在室溫下攪拌4小時(shí)，加入蒸餾水后，分出水相，水相用乙醚提取后，用3N鹽酸及飽和檸檬酸水液將水相酸化到PH3～4，去乙醚后析出的油狀物用二氯甲烷及石油醚重結(jié)晶后得到最終產(chǎn)物NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸，即Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH。
本發(fā)明由于在上述制備工藝中采用相轉(zhuǎn)移催化反應(yīng)技術(shù)以及非水反應(yīng)溶劑體系的選擇，簡化反應(yīng)操作步驟，使反應(yīng)總收率達(dá)62.9％(以L-精氨酸計(jì))，含量≥99.0％。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1將Nα-芐氧羰基-L-精氨酸19.2g(62.5mmole)溶于100ml六甲基磷酰胺中，加入500ml配有機(jī)械攪拌的三口燒瓶中，放置在冰水浴上，攪拌下加入19g(240mmole)吡啶。在攪拌下滴加28.8g(99.5mmole)2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰氯溶解于100ml六甲基磷酰胺的溶液。保持反應(yīng)溫度在0～3℃。加畢，繼續(xù)在此溫度下攪拌2小時(shí)，室溫下2小時(shí)。加入800ml水稀釋反應(yīng)液，用200ml×3次1，2-二氯乙烷提取去除六甲基磷酰胺，水相用飽和檸檬酸水溶液酸化到PH3.5～4，再以乙酸乙酯300ml×3次提取。過濾除去乙酸乙酯提取液中的不溶物，以無水硫酸鈉干燥之。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，真空旋轉(zhuǎn)蒸干乙酸乙酯溶液，加入甲醇200ml，再旋轉(zhuǎn)蒸去160ml甲醇，在冰水浴冷卻下，滴加環(huán)己烷胺7.2ml，再加入200ml無水乙醚，析出白色固體，1小時(shí)后過濾，減壓烘干獲得29克固體即Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸環(huán)己烷胺鹽。將上述白色固體置于200ml蒸餾水中以飽和檸檬酸水溶液酸化到PH3～4，攪拌0.5小時(shí)，過濾固體，減壓下烘干得24.4克Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸(簡稱中間體1)，其熔點(diǎn)174～7℃，薄層層析(氯仿∶甲醇∶醋酸＝100∶10∶5)為一個(gè)斑點(diǎn)，收率68.4％。將中間體1以0.5g的10％鈀-炭催化劑在常壓催化氫解3小時(shí)，除去Nα上的保護(hù)基芐氧羰基，濾去催化劑濃縮后得到NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰基)-L-精氨酸L-Arg(Pbf)-OH(簡稱中間體2)。將14.2克(33.25mmole)的中間體2，溶于64ml 10％碳酸鈉水溶液中，過濾澄清，加入二氯甲烷80ml，冰鹽浴冷卻至-2℃，邊攪拌邊加入11.4克N-(9-芴甲氧羰基氧)琥珀酰亞胺Fmoc-Osu(35.5mmole)，再加入1克相轉(zhuǎn)移催化劑N，N，N-三辛基-N-甲基硫酸氫銨，呈混濁狀。冰浴下攪拌1小時(shí)后，室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)4小時(shí)。加入蒸餾水300ml，攪拌10分鐘，分出水相，過濾除去水中不溶物。所得水溶液用乙醚提取三次(100ml×3次)。取水相用3N鹽酸中和到PH～7，再用飽和檸檬酸水溶液酸化到PH3～4，有白色油狀物析出。用100ml×3次乙酸乙酯提取，合并提取液。分別用0.1N鹽酸100ml、50ml、蒸餾水100ml洗滌，用無水硫酸鈉干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上真空旋轉(zhuǎn)蒸干，加入二氯甲烷20ml及160ml石油醚，在35℃水浴上真空旋轉(zhuǎn)蒸去300ml左右溶劑，瓶壁出現(xiàn)厚油狀物，加入300ml石油醚，攪拌40分鐘，出現(xiàn)白色固體，過濾干燥之，得目的產(chǎn)物NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH 22.5克。薄板層析(氯仿∶甲醇∶醋酸＝85∶10∶5)顯示一個(gè)主斑點(diǎn)，其下有少許淺淡小斑點(diǎn)。收率91.9％，總收率62.9％。比旋光度[α]D25-5.5°(C＝1，二甲基甲酰胺中)。
實(shí)施例2制備工藝與實(shí)施例1相同，但下列參數(shù)不相同1、加入9.5g(120mmole)吡啶；2、滴加36.2g(125mmole)2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰氯；3、得23.8克固體Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰基)-L-精氨酸環(huán)己烷胺鹽；4、得20.0克Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸，收率56.1％；5、取11.8g(27.6mmole)中間體2；6、加入9.2克(28.6mmole)N-(9-芴甲氧羰基氧)琥珀酰亞胺Fmoc-Osu；7、得目的產(chǎn)物NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH 19.8克，總收率51.6％。
實(shí)施例3制備工藝與實(shí)施例1相同，但下列參數(shù)不相同
1、加入9.5g(120mmole)吡啶；2、滴加18.8g(65mmole)2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰氯；3、得17.1克固體Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰基)-L-精氨酸環(huán)己烷胺鹽；4、得14.3克Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸，收率40.2％；5、取9.8g(23mmole)中間體2；6、加入7.5克(23.4mmole)N-(9-芴甲氧羰基氧)琥珀酰亞胺Fmoc-Osu；7、得目的產(chǎn)物NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-Nα-(9-芴甲氧羰基)-L-精氨酸Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH 13.2克，總收率36.9％。
權(quán)利要求
1.一種雙保護(hù)氨基酸的制備方法，其特征在于在冰水冷卻下將2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰氯和Nα-芐氧羰基-L-精氨酸按1～2∶1的比例用量溶于六甲基磷酰胺溶液中，再滴入到含有按2～4∶1比例計(jì)算量的吡啶和Nα-芐氧羰基-L-精氨酸在六甲基磷酰胺溶液中，保持2小時(shí)，在室溫下再保持2小時(shí)，用水稀釋反應(yīng)液，用1，2-二氯乙烷提取以去除六甲基磷酰胺，水相用飽和檸檬酸水液中和酸化到PH3～4，析出的油狀物用乙酸乙酯提取，去除溶劑后的殘留物在甲醇及無水乙醚中加入環(huán)己烷胺制成Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸環(huán)己烷胺鹽，然后在蒸餾水中以飽和檸檬酸水液酸化后得到游離Nα-芐氧羰基-NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰基)-L-精氨酸，然后在10％鈀/炭存在下進(jìn)行氫化以脫去Nα上的保護(hù)基芐氧羰基，得NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸，再將其置于10％Na2CO3水液中，加入二氯甲烷，并在-2℃下邊攪拌邊加入按1∶1.07比例計(jì)算量的N-(9-芴甲氧羰基氧)琥珀酰亞胺Fmoc-Osu，加入1克相轉(zhuǎn)移催化劑N.N，N-三辛基-N-甲基硫酸氫銨，在冰浴下保持1小時(shí)，在室溫下攪拌4小時(shí)，加入蒸餾水后，分出水相，水相用乙醚提取后，用3N鹽酸及飽和檸檬酸水液將水相酸化到PH3～4，去乙醚后析出的油狀物用二氯甲烷及石油醚重結(jié)晶后即可。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙保護(hù)氨基酸的制備方法，其特征在于Nα-芐氧羰基-L-精氨酸是19.2g(62.5mmole)，吡啶是19g(240mmole)，2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰氯是28.8g(99.5mmole)，NG-(2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺?；?-L-精氨酸L-Arg(Pbf)-OH是14.2克(33.25mmole)，N-(9-芴甲氧羰基氧)琥珀酰亞胺Fmoc-Osu(35.5mmole)是11.4克。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雙保護(hù)氨基酸的制備方法，尤其是Fmoc－L－Arg(Pbf)－OH雙保護(hù)氨基酸的制備方法。它由2，2，4，6，7－五甲基二氫苯并呋喃－5－磺酰氯與N
文檔編號C07D307/00GK1693305SQ20041001811
公開日2005年11月9日 申請日期2004年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月8日
發(fā)明者許云生, 葛邦錀, 許迎春 申請人:上海依福瑞實(shí)業(yè)有限公司