發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及作為轉(zhuǎn)染重排(rearrangedduringtransfection，ret)激酶抑制劑的新化合物、含有其的藥物組合物、其制備方法及其單獨(dú)或組合在治療中的用途，所述治療是用于胃腸道敏感性、運(yùn)動性和/或分泌作用的正?；?、和/或腹部病況或疾病、和/或與ret功能障礙有關(guān)的或其中調(diào)節(jié)ret活性可能具有治療益處的下述疾病的治療：包括但不限于全部類型的腸易激綜合征(ibs)，包括腹瀉主導(dǎo)型、便秘主導(dǎo)型或交替排便模式、功能性胃氣脹、功能性便秘、功能性腹瀉、非特異性功能性腸病、功能性腹痛綜合征、慢性特發(fā)性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指腸病、功能性肛門直腸疼痛、炎性腸病，增殖性疾病例如非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)腸直腸癌、髓樣甲狀腺癌、濾泡性甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、乳頭狀甲狀腺癌、腦瘤、腹膜腔癌、實(shí)體瘤、其它肺癌、頭頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、vonhipple-lindau綜合征和腎腫瘤、乳腺癌、輸卵管癌、卵巢癌、過渡型細(xì)胞癌、前列腺癌、食道和食管胃連接處的癌癥、膽道癌和腺癌、及帶有增加的ret激酶活性的任何惡性腫瘤。

發(fā)明背景

腸易激綜合征(ibs)是一種常見的疾病，在發(fā)達(dá)國家中影響10-20％的個(gè)體，并且其特征為異常腸排便習(xí)慣、胃氣脹和內(nèi)臟超敏反應(yīng)(camilleri,m.,n.engl.j.med.,2012,367:1626-1635)。雖然ibs的病因不明，但據(jù)信是由腦和胃腸道之間的病癥、腸微生物的干擾或增加的炎癥所導(dǎo)致的。所導(dǎo)致的胃腸道變化會影響正常的腸道輸送，從而造成腹瀉或便秘。此外，在大多數(shù)ibs患者中，外周神經(jīng)系統(tǒng)的敏化導(dǎo)致內(nèi)臟超敏反應(yīng)或異常性疼痛(keszthelyi,d.,eur.j.pain,2012,16:1444–1454)。

雖然ibs并不直接改變預(yù)期壽命，但其對患者的生活質(zhì)量有很大的影響。而且，針對ibs相關(guān)的健康護(hù)理以及由于工作者缺勤導(dǎo)致的生產(chǎn)力損失會存在顯著的經(jīng)濟(jì)成本(nellesen,d.,etal.,j.manag.carepharm.,2013,19:755-764).。極大影響ibs患者生活質(zhì)量的最重要的癥狀之一是內(nèi)臟痛(spiegel,b.,etal.,am.j.gastroenterol.,2008,103:2536–2543)。抑制ibs相關(guān)的內(nèi)臟痛的分子策略將極大影響ibs患者的生活質(zhì)量并降低相關(guān)花費(fèi)。

轉(zhuǎn)染重排(ret)是一種神經(jīng)生長因子受體酪氨酸激酶，其在與分別與共受體神經(jīng)營養(yǎng)因子(gdnf)家族受體α-1、2、3和4組合的四種神經(jīng)營養(yǎng)因子(神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子、neurturin、artemin和persephin)之一結(jié)合后被活化(plaza-menacho,i.,etal.,trendsgenet.,2006,22:627-636)。已知ret在皮膚和腸的傳入疼痛感受器的發(fā)育和存活中起重要作用。ret激酶敲除的小鼠缺少腸神經(jīng)元，并具有其他神經(jīng)系統(tǒng)異常，表明在發(fā)育過程中需要功能性ret激酶蛋白產(chǎn)物(taraviras,s.etal.,development,1999,126:2785-2797)。而且，對患有特征為因缺乏正常結(jié)腸削弱作用(enervation)導(dǎo)致的結(jié)腸梗阻的hirschsprung病的患者群研究具有較高比例的家族性和偶發(fā)性功能性ret突變喪失(butlertjadenn.,etal.,transl.res.,2013,162:1-15)。

類似地，異常ret激酶活性與多發(fā)性內(nèi)分泌瘤(men2a和2b)、家族性髓樣甲狀腺癌(fmtc)、乳頭狀甲狀腺癌(ptc)和hirschsprung病(hscr)有關(guān)(borello,m.,etal.,expertopin.ther.targets,2013,17:403-419)。men2a是一種由ret胞外富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)域中突變經(jīng)二硫鍵導(dǎo)致二聚化(其造成酪氨酸激酶活性的組成性激活)導(dǎo)致的癌癥綜合征(wellsjr,s.,etal.,j.clin.endocrinol.metab.,2013,98:3149–3164)。具有該突變的個(gè)體可能會發(fā)展髓樣甲狀腺癌(mtc)、甲狀旁腺增生和嗜鉻細(xì)胞瘤。men2b是由于ret上的met918thr突變導(dǎo)致的，其改變了酪氨酸激酶的特異性。men2b與men2a類似，但缺乏甲狀旁腺增生，且還會導(dǎo)致嘴唇、舌頭和腸道的許多粘膜神經(jīng)節(jié)的發(fā)育。連接啟動子和nh2末端結(jié)構(gòu)域或與ret激酶cooh末端不相關(guān)的基因從而形成組成性活化嵌合形式的受體(ret/ptc)的染色體重排被認(rèn)為是ptc中的腫瘤引發(fā)事件(viglietto,g.etal.,oncogene,1995,11:1207-1210)。ptc涵蓋所有甲狀腺癌的約80％。這些數(shù)據(jù)表明，抑制ret可能是用于治療與ibs和其他胃腸病癥相關(guān)的疼痛以及用于治療具有組成性ret激酶活性的癌癥的有吸引力的治療策略。

發(fā)明簡述

本發(fā)明涉及式(i)表示的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺、或其可藥用鹽、和其結(jié)晶形式∶

，以及式(ii)表示的n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺、或其可藥用鹽∶

本發(fā)明還涉及包括式(i)或(ii)的化合物和可藥用賦形劑的藥物組合物。

本發(fā)明還涉及一種治療腸易激綜合征的方法，其包括向有需要的人給藥有效量的式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽。本發(fā)明還涉及一種治療癌癥的方法，其包括向有需要的人給藥有效量的式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物，用于治療。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽用于治療腸易激綜合征的用途。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽用于治療癌癥的用途。

本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療ret介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療腸易激綜合征的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。

附圖簡述

圖1顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的x射線粉末衍射圖案。

圖2顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的拉曼光譜。

圖3顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的差示掃描量熱法跡線。圖4顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的熱重量分析跡線。

圖5顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的x射線粉末衍射圖案。

圖6顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的拉曼光譜。

圖7顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的差示掃描量熱法跡線。

圖8顯示式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的熱重量分析跡線。

圖9顯示式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的x射線粉末衍射圖案。

圖10顯示式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的拉曼光譜。

圖11顯示式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的差示掃描量熱跡線。

圖12顯示式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的熱重量分析跡線。

圖13顯示式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的x射線粉末衍射圖案。

圖14顯示式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的拉曼光譜。

圖15顯示式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的差示掃描量熱跡線。

圖16顯示式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的熱重量分析跡線。

圖17顯示式(i)的化合物的馬尿酸鹽的x射線粉末衍射圖案。

圖18顯示式(i)的化合物的馬尿酸鹽的拉曼光譜。

圖19顯示式(i)的化合物的馬尿酸鹽的差示掃描量熱法跡線。

圖20顯示式(i)的化合物的馬尿酸鹽的熱重量分析跡線。

圖21顯示式(i)的化合物的磷酸鹽的x射線粉末衍射圖案。

圖22顯示式(i)的化合物的磷酸鹽的拉曼光譜。

圖23顯示式(i)的化合物的磷酸鹽的差示掃描量熱法跡線。

圖24顯示式(i)的化合物的磷酸鹽的熱重量分析跡線。

發(fā)明詳述

本發(fā)明涉及如上定義的式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽。

本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識到，當(dāng)使用不同命名軟件時(shí)，本發(fā)明化合物可具有不同的名稱。

本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽，用于治療，特別地用于其中受試者為人的治療。特別地，用于治療下述ret介導(dǎo)的疾病∶腸易激綜合征(ibs)，包括腹瀉主導(dǎo)型、便秘主導(dǎo)型或交替排便模式、功能性胃氣脹、功能性便秘、功能性腹瀉、非特異性功能性腸病、功能性腹痛綜合征、慢性特發(fā)性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指腸病、功能性肛門直腸疼痛、炎性腸病，增殖性疾病例如非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)腸直腸癌、髓樣甲狀腺癌、濾泡性甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、乳頭狀甲狀腺癌、腦瘤、腹膜腔癌、實(shí)體瘤、其它肺癌、頭頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、vonhipple-lindau綜合征和腎腫瘤、乳腺癌、輸卵管癌、卵巢癌、過渡型細(xì)胞癌、前列腺癌、食道和食管胃連接處的癌癥、膽道癌和腺癌。特別地，本發(fā)明涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽，用于治療下述疾病∶腸易激綜合征(ibs)，包括腹瀉主導(dǎo)型、便秘主導(dǎo)型或交替排便模式、功能性胃氣脹、功能性便秘、功能性腹瀉、非特異性功能性腸病、功能性腹痛綜合征、慢性特發(fā)性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指腸病、功能性肛門直腸疼痛、炎性腸病，非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)腸直腸癌、髓樣甲狀腺癌、濾泡性甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、乳頭狀甲狀腺癌、腦瘤、腹膜腔癌、實(shí)體瘤、其它肺癌、頭頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、vonhipple-lindau綜合征和腎腫瘤、乳腺癌、輸卵管癌、卵巢癌、過渡型細(xì)胞癌、前列腺癌、食道和食管胃連接處的癌癥、膽道癌和腺癌。

本發(fā)明還涉及用作藥物的式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物在制備用于治療ret介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療腸易激綜合征的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。

本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物在治療中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步包括本發(fā)明的化合物作為活性治療物質(zhì)的用途，特別地在治療ret介導(dǎo)的疾病中的用途。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物用于治療腸易激綜合征的用途。本發(fā)明還涉及式(i)或(ii)的化合物用于治療癌癥的用途。

由于它們在醫(yī)學(xué)中的潛在用途，式(i)化合物的鹽優(yōu)選地是藥學(xué)上可接受的。合適的藥學(xué)上可接受鹽包括由berge,bighley,andmonkhouse,j.pharm.sci.(1977)66,pp1-19描述的那些。涵蓋在術(shù)語“藥學(xué)上可接受鹽”之內(nèi)的鹽指本發(fā)明的化合物的無毒鹽。所公開化合物的鹽可以通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制備，包括用無機(jī)酸或有機(jī)酸處理游離堿，所述無機(jī)酸比如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有機(jī)酸比如乙酸、三氟乙酸、馬來酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖基酸(pyranosidylacid)(比如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥酸(比如檸檬酸或酒石酸)、氨基酸(比如天冬氨酸或谷氨酸)、芳香酸(比如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(比如對甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸)等。藥學(xué)上可接受鹽的實(shí)例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽(phenylbutrate)、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、扁桃酸鹽和磺酸鹽，比如二甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽和萘-2-磺酸鹽。

藥學(xué)上可接受的鹽也可以用提供藥學(xué)上可接受的陽離子的堿基來制備，其包括堿金屬鹽(特別是鈉和鉀)、堿土金屬鹽(特別是鈣和鎂)、鋁鹽和銨鹽、以及由生理學(xué)可接受的有機(jī)堿制成的鹽，所述有機(jī)堿比如三甲胺、三乙胺、嗎啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二環(huán)己胺、n,n'-二芐基乙二胺、2-羥基乙胺、雙-(2-羥乙基)胺、三-(2-羥乙基)胺、普魯卡因、二芐基哌啶、脫氫樅胺、n,n'-雙脫氫樅胺、葡萄糖胺、n-甲基葡萄糖胺、可力丁(collidine)、膽堿、奎寧、喹啉和堿性氨基酸(比如賴氨酸和精氨酸)。

不是藥學(xué)上可接受的其他鹽可用于制備本發(fā)明化合物，并且這些應(yīng)視為形成本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的方面。這些鹽，比如三氟乙酸鹽，雖然其本身不是藥學(xué)上可接受的，但可用于制備用作獲得本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受鹽的中間體的鹽。

如果本發(fā)明的化合物以鹽的形式被分離，則該化合物的相應(yīng)游離堿形式可以通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制備，包括用無機(jī)堿或有機(jī)堿處理該鹽，合適地是具有比該化合物的游離堿形式更高pka的無機(jī)堿或有機(jī)堿。類似地，如果本發(fā)明的化合物以鹽的形式被分離，則該化合物的相應(yīng)游離酸形式可以通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制備，包括用無機(jī)酸或有機(jī)酸處理該鹽，合適地是具有比該化合物的游離酸形式更低pka的無機(jī)酸或有機(jī)酸。

式(i)或(ii)的化合物可以以結(jié)晶或非結(jié)晶形式或其混合物存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，對于結(jié)晶或非結(jié)晶化合物，都可形成藥學(xué)上可接受的溶劑合物。在結(jié)晶溶劑合物中，溶劑分子在結(jié)晶過程中被結(jié)合到晶格中。溶劑化物可包括非水溶劑，比如但不限于乙醇、異丙醇、dmso、乙酸、乙醇胺或乙酸乙酯，或者它們可包括水作為結(jié)合到晶格中的溶劑。其中水為結(jié)合到晶格中的溶劑的溶劑化物通常被稱為“水合物”。水合物包括化學(xué)計(jì)量的水合物以及含有可變量水的組合物。本發(fā)明包括所有這樣的溶劑化物。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步理解，以結(jié)晶形式存在的本發(fā)明化合物(包括其各種溶劑化物)可顯示多晶型現(xiàn)象(即，能夠以不同的晶體結(jié)構(gòu)存在)。這些不同的晶型通常被稱為“多晶型物(polymorph)”。本發(fā)明包括所有這樣的多晶型物。多晶型物具有相同的化學(xué)組成，但是在堆積(packing)、幾何排布和結(jié)晶固態(tài)的其他表征性質(zhì)方面不同。因此，多晶型物可以具有不同的物理性質(zhì)，比如形狀、密度、硬度、變形性、穩(wěn)定性和溶出性。多晶型物通常顯示出不同的熔點(diǎn)、紅外光譜和x射線粉末衍射圖，其可用于鑒定。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，不同的多晶型物可通過例如改變或調(diào)整制備該化合物所用的反應(yīng)條件或試劑進(jìn)行生產(chǎn)。例如，溫度、壓力或溶劑的改變可能導(dǎo)致多晶型物。另外，一種多晶型物可以在一定的條件下自發(fā)地轉(zhuǎn)化成另一種多晶型物。

本發(fā)明進(jìn)一步涉及n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的各種鹽(特別是鹽酸鹽、天門冬氨酸鹽、馬尿酸鹽和磷酸鹽)的一些晶型。

在某些實(shí)施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽(式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1)的晶型的特征在于，當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)，x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少九個(gè)衍射角：約6.0、6.1、9.0、9.2、11.8、11.9、12.1、13.3、13.4、13.6、14.0、14.8、14.9、15.3、20.5、22.2、22.3、24.5、24.6、25.0、25.1和25.2度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于，當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)，x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少八個(gè)衍射角或至少七個(gè)衍射角或至少六個(gè)衍射角或至少五個(gè)衍射角或至少四個(gè)衍射角：約6.0、6.1、9.0、9.2、11.8、11.9、12.1、13.3、13.4、13.6、14.0、14.8、14.9、15.3、20.5、22.2、22.3、24.5、24.6、25.0、25.1和25.2度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于，當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)，x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含至少選自下述的三個(gè)衍射角：約6.0、6.1、9.0、9.2、11.8、11.9、12.1、13.3、13.4、13.6、14.0、14.8、14.9、15.3、20.5、22.2、22.3、24.5、24.6、25.0、25.1和25.2度2θ。

在還有另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于，當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)，x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含約6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有與圖1實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案。

在其它實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少九個(gè)峰：約456、581、698、774、809、952、999、1030、1109、1172、1248、1282、1335、1362、1461、1532、1626、1678、2903、2952、和3033cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少八個(gè)峰或至少七個(gè)峰或至少六個(gè)峰或至少五個(gè)峰或至少四個(gè)、三個(gè)峰：約456、581、698、774、809、952、999、1030、1109、1172、1248、1282、1335、1362、1461、1532、1626、1678、2903、2952和3033cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少三個(gè)峰：約456、581、698、774、809、952、999、1030、1109、1172、1248、1282、1335、1362、1461、1532、1626、1678、2903、2952和3033cm^-1。

在還有另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于拉曼光譜包含位于約774、809、999、1282、1335、1362、1532、1626、2903、2952和3033cm^-1的峰。在還有另一實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有與圖2實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有與圖3實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線和/或與圖4實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在仍然進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有表征前述實(shí)施方案的分析數(shù)據(jù)的任意組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有與圖1實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖2實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜和與圖3實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線及與圖4實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有與圖1實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖2實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有與圖1實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖3實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有與圖1實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖4實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有包含使用cukα射線測量的約6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和包含位于約774、809、999、1282、1335、1362、1532、1626、2903、2952和3033cm^-1的峰的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有包含使用cukα射線測量的約6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖3實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的特征在于具有包含使用cukα射線測量的約6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖4實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在某些實(shí)施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽(式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2)的晶型的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少九個(gè)衍射角：約6.0、9.0、12.1、13.4、13.5、14.7、14.8、14.9、15.3、20.3、20.4、22.2、22.3、22.4、24.7和24.8度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少八個(gè)衍射角或至少七個(gè)衍射角或至少六個(gè)衍射角或至少五個(gè)衍射角或至少四個(gè)衍射角：約6.0、9.0、12.1、13.4、13.5、14.7、14.8、14.9、15.3、20.3、20.4、22.2、22.3、22.4、24.7和24.8度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少三個(gè)衍射角：約6.0、9.0、12.1、13.4、13.5、14.7、14.8、14.9、15.3、20.3、20.4、22.2、22.3、22.4、24.7和24.8度2θ。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含約6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ的衍射角。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有與圖2實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案。

在其它實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少九個(gè)峰：約455、588、699、734、775、807、885、949、1000、1033、1112、1181、1247、1269、1283、1332、1366、1425、1466、1530、1550、1570、1627、1684、2902、2946和3044cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少八個(gè)峰或至少七個(gè)峰或至少六個(gè)峰或至少五個(gè)峰或至少四個(gè)、三個(gè)峰：約455、588、699、734、775、807、885、949、1000、1033、1112、1181、1247、1269、1283、1332、1366、1425、1466、1530、1550、1570、1627、1684、2902、2946和3044cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少三個(gè)峰：約455、588、699、734、775、807、885、949、1000、1033、1112、1181、1247、1269、1283、1332、1366、1425、1466、1530、1550、1570、1627、1684、2902、2946和3044cm^-1。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于拉曼光譜包含位于約775、1000、1247、1269、1283、1332、1366、1627、2902和2946cm^-1的峰。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有與圖6實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有與圖7實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線和/或與圖8實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在仍然進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有表征前述實(shí)施方案的分析數(shù)據(jù)的任意組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有與圖5實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖6實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜和與圖7實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線及與圖8實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有與圖5實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖6實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有與圖5實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖7實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有與圖5實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖8實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和包含位于約775、1000、1247、1269、1283、1332、1366、1627、2902和2946cm^-1的峰的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)約6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ的衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖7實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ的衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖8實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在某些實(shí)施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽(式(i)的化合物的無水鹽酸鹽)的晶型的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少九個(gè)衍射角：8.3、8.4、10.7、11.3、15.5、16.0、20.0、20.4、20.8、22.6、23.2、23.3、23.6、24.6、24.9、25.3、25.9、26.9、27.3、27.4、28.1和28.2度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少八個(gè)衍射角或至少七個(gè)衍射角或至少六個(gè)衍射角或至少五個(gè)衍射角或至少四個(gè)衍射角：約8.3、8.4、10.7、11.3、15.5、16.0、20.0、20.4、20.8、22.6、23.2、23.3、23.6、24.6、24.9、25.3、25.9、26.9、27.3、27.4、28.1和28.2度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少三個(gè)衍射角：約8.3、8.4、10.7、11.3、15.5、16.0、20.0、20.4、20.8、22.6、23.2、23.3、23.6、24.6、24.9、25.3、25.9、26.9、27.3、27.4、28.1和28.2度2θ。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含約16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有與圖9實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案。

在其它實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少九個(gè)峰：約418、454、575、636、699、771、782、805、864、894、941、974、998、1058、1116、1190、1246、1273、1299、1329、1356、1407、1433、1462、1489、1511、1546、1562、1614、1626、1667、1695、2922、2950、2986、3036、3075和3095cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少八個(gè)峰或至少七個(gè)峰或至少六個(gè)峰或至少五個(gè)峰或至少四個(gè)、三個(gè)峰：約418、454、575、636、699、771、782、805、864、894、941、974、998、1058、1116、1190、1246、1273、1299、1329、1356、1407、1433、1462、1489、1511、1546、1562、1614、1626、1667、1695、2922、2950、2986、3036、3075和3095cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少三個(gè)峰：約418、454、575、636、699、771、782、805、864、894、941、974、998、1058、1116、1190、1246、1273、1299、1329、1356、1407、1433、1462、1489、1511、1546、1562、1614、1626、1667、1695、2922、2950、2986、3036、3075和3095cm^-1。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于拉曼光譜包含位于約771、805、998、1058、1246、1329、1614、1626、2922、2950和3036cm^-1的峰。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有與圖10實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有與圖11實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線和/或與圖12實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在仍然進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有表征前述實(shí)施方案的分析數(shù)據(jù)的任意組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有與圖9實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖10實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜和與圖11實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線及與圖12實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有與圖9實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖10實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有與圖9實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖11實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的特征在于具有與圖9實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖12實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和包含位于約771、805、998、1058、1246、1329、1614、1626、2922、2950和3036cm^-1的峰的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖11實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的無水鹽酸鹽具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖12實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。

在某些實(shí)施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽(式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽)的晶型的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少九個(gè)衍射角：約6.7、7.0、7.6、11.8、13.9、14.8、15.6、15.8、16.2、17.7、18.4、18.7、19.1、19.2、20.1、20.6、21.0、21.1、21.2、21.7、22.1、22.8、23.0、23.1、23.3、23.7、23.8、25.0、25.1、25.4、25.5、25.7、26.2、27.4、28.2、31.2、35.9和36.0度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少八個(gè)衍射角或至少七個(gè)衍射角或至少六個(gè)衍射角或至少五個(gè)衍射角或至少四個(gè)衍射角：約6.7、7.0、7.6、11.8、13.9、14.8、15.6、15.8、16.2、17.7、18.4、18.7、19.1、19.2、20.1、20.6、21.0、21.1、21.2、21.7、22.1、22.8、23.0、23.1、23.3、23.7、23.8、25.0、25.1、25.4、25.5、25.7、26.2、27.4、28.2、31.2、35.9和36.0度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少三個(gè)衍射角：約6.7、7.0、7.6、11.8、13.9、14.8、15.6、15.8、16.2、17.7、18.4、18.7、19.1、19.2、20.1、20.6、21.0、21.1、21.2、21.7、22.1、22.8、23.0、23.1、23.3、23.7、23.8、25.0、25.1、25.4、25.5、25.7、26.2、27.4、28.2、31.2、35.9和36.0度2θ。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含約7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度的2θ衍射角。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有與圖13實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案。

在其它實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少九個(gè)峰：約452、574、691、770、807、1000、1037、1106、1162、1237、1274、1332、1364、1471、1487、1530、1627、1705、2918和3073cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少八個(gè)峰或至少七個(gè)峰或至少六個(gè)峰或至少五個(gè)峰或至少四個(gè)、三個(gè)峰：約452、574、691、770、807、1000、1037、1106、1162、1237、1274、1332、1364、1471、1487、1530、1627、1705、2918和3073cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少三個(gè)峰：約452、574、691、770、807、1000、1037、1106、1162、1237、1274、1332、1364、1471、1487、1530、1627、1705、2918和3073cm^-1。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于拉曼光譜包含位于約770、807、1000、1237、1274、1332、1364、1471、1627、2918和3073cm^-1的峰。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有與圖14實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有與圖15實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線和/或與圖16實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在仍然進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有表征前述實(shí)施方案的分析數(shù)據(jù)的任意組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有與圖13實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖14實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜和與圖15實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線及與圖16實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有與圖13實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖14實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有與圖13實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖15實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有與圖13實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖16實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和包含位于約770、807、1000、1237、1274、1332、1364、1471、1627、2918和3073cm^-1的峰的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖15實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖16實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在某些實(shí)施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽(式(i)的化合物的馬尿酸鹽)的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少九個(gè)衍射角：約6.1、9.2、10.1、12.0、12.3、12.6、13.8、14.0、17.2、17.3、18.1、18.4、18.9、19.0、19.1、19.6、20.6、21.1、21.2、21.5、21.7、22.4、22.9、23.5、23.6、24.9、27.2、27.4、27.6和28.0度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少八個(gè)衍射角或至少七個(gè)衍射角或至少六個(gè)衍射角或至少五個(gè)衍射角或至少四個(gè)衍射角：約6.1、9.2、10.1、12.0、12.3、12.6、13.8、14.0、17.2、17.3、18.1、18.4、18.9、19.0、19.1、19.6、20.6、21.1、21.2、21.5、21.7、22.4、22.9、23.5、23.6、24.9、27.2、27.4、27.6和28.0度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案選自下述的至少三個(gè)衍射角：約6.1、9.2、10.1、12.0、12.3、12.6、13.8、14.0、17.2、17.3、18.1、18.4、18.9、19.0、19.1、19.6、20.6、21.1、21.2、21.5、21.7、22.4、22.9、23.5、23.6、24.9、27.2、27.4、27.6和28.0度2θ。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含約6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ的衍射角。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有與圖17實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案。

在其它實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少九個(gè)峰：約557、618、694、771、809、917、997、1042、1108、1236、1272、1335、1366、1467、1537、1575、1601、1630、1695、2944和3071cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少八個(gè)峰或至少七個(gè)峰或至少六個(gè)峰或至少五個(gè)峰或至少四個(gè)、三個(gè)峰：約557、618、694、771、809、917、997、1042、1108、1236、1272、1335、1366、1467、1537、1575、1601、1630、1695、2944和3071cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少三個(gè)峰：約557、618、694、771、809、917、997、1042、1108、1236、1272、1335、1366、1467、1537、1575、1601、1630、1695、2944和3071cm^-1。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于拉曼光譜包含位于約809、997、1236、1272、1335、1366、1601、1630、2944和3071cm^-1的峰。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有與圖18實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有與圖19實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線和/或與圖20實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在仍然進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有表征前述實(shí)施方案的分析數(shù)據(jù)的任意組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有與圖17實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖18實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜和與圖19實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線及與圖20實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有與圖17實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖18實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有與圖17實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖19實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有與圖17實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖20實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和包含位于約809、997、1236、1272、1335、1366、1601、1630、2944、和3071cm^-1的峰的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖19實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的馬尿酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖20實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在某些實(shí)施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽(式(i)的化合物的磷酸鹽)的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少九個(gè)衍射角：5.5、5.6、7.7、9.9、11.2、15.4、16.0、16.8、18.2、19.9、20.3、23.9、24.2、24.4、26.5、26.7、27.0和28.7度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少八個(gè)衍射角或至少七個(gè)衍射角或至少六個(gè)衍射角或至少五個(gè)衍射角或至少四個(gè)衍射角：約5.5、5.6、7.7、9.9、11.2、15.4、16.0、16.8、18.2、19.9、20.3、23.9、24.2、24.4、26.5、26.7、27.0和28.7度2θ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含選自下述的至少三個(gè)衍射角：約5.5、5.6、7.7、9.9、11.2、15.4、16.0、16.8、18.2、19.9、20.3、23.9、24.2、24.4、26.5、26.7、27.0和28.7度2θ。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)x射線粉末衍射(xrpd)圖案包含約9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ的衍射角。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有與圖21實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案。

在其它實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少九個(gè)峰：約461、485、529、577、638、696、732、773、786、806、867、889、1002、1036、1187、1243、1276、1296、1326、1358、1375、1442、1466、1510、1532、1580、1625、1698、2936、2964和3069cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少八個(gè)峰或至少七個(gè)峰或至少六個(gè)峰或至少五個(gè)峰或至少四個(gè)、三個(gè)峰：約461、485、529、577、638、696、732、773、786、806、867、889、1002、1036、1187、1243、1276、1296、1326、1358、1375、1442、1466、1510、1532、1580、1625、1698、2936、2964和3069cm^-1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于拉曼光譜包含選自如下峰位置的至少三個(gè)峰：約461、485、529、577、638、696、732、773、786、806、867、889、1002、1036、1187、1243、1276、1296、1326、1358、1375、1442、1466、1510、1532、1580、1625、1698、2936、2964和3069cm^-1。

在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于拉曼光譜包含位于約786、806、1002、1036、1243、1296、1326、1375、1625、2936和2964cm^-1的峰。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有與圖22實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有與圖23實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線和/或與圖24實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

在仍然進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有表征前述實(shí)施方案的分析數(shù)據(jù)的任意組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有與圖21實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖22實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜和與圖23實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線及與圖24實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有與圖21實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖22實(shí)質(zhì)上一致的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有與圖21實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖23實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有與圖21實(shí)質(zhì)上一致的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖24實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和包含位于約786、806、1002、1036、1243、1296、1326、1375、1625、2936和2964cm^-1的峰的拉曼光譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ的衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖23實(shí)質(zhì)上一致的差示掃描量熱法跡線。在另一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)的化合物的磷酸鹽的特征在于具有當(dāng)使用cukα射線測量時(shí)包含約9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ的衍射角的x射線粉末衍射(xrpd)圖案和與圖24實(shí)質(zhì)上一致的熱重量分析跡線。

應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)xrpd圖案包含的衍射角(以度2θ表示)在指定值的±0.3度2θ之內(nèi)時(shí)，則該xrpd圖案包括本文所指定“約”值的衍射角。進(jìn)一步，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知且理解，所用的裝置、濕度、溫度、粉末晶體的取向及涉及獲得x射線粉末衍射(xrpd)圖案的其它參數(shù)可以造成衍射圖譜的外觀、強(qiáng)度和直線位置的某些變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，本文提供的與圖1、5、9、13、17或21“實(shí)質(zhì)上一致”的x射線粉末衍射圖案為表示具有與提供圖1、5、9、13、17或21的xrpd圖案的化合物相同晶形的化合物的xrpd圖案。即，該xrpd圖案可能與圖1、5、9、13、17或21的相同，或者更可能其可能有些差異。這樣的xrpd圖案可能并不一定顯示本文所示的衍射圖中任一個(gè)的各個(gè)線條，和/或可能顯示由于涉及獲得數(shù)據(jù)的條件不同導(dǎo)致的在外觀、強(qiáng)度或該線的位移上的稍微變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過比較它們的xrpd圖案確定，結(jié)晶化合物的樣品是否具有與本文公開形式相同的形式或不同的形式。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以將n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的樣品的xrpd圖案與圖1重疊，并且使用本領(lǐng)域的專門技術(shù)和知識容易地確定樣品的xrpd圖案是否與本文公開的式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的xrpd圖案實(shí)質(zhì)上一致。如果該xrpd圖案與圖1實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可以被容易及精確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1具有相同的形式。類似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的樣品的xrpd圖案與圖5實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可以容易及精確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2具有相同的形式。類似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的樣品的xrpd圖案與圖9實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可以容易及精確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的無水鹽酸鹽具有相同的形式。類似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽的樣品的xrpd圖案與圖13實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可以容易及精確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽具有相同的形式。類似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的樣品的xrpd圖案與圖17實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可以容易及精確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的馬尿酸鹽相同的形式。類似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的樣品的xrpd圖案與圖21實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可以容易及精確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的磷酸鹽具有相同的形式。

應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)拉曼光譜包括的峰(以cm^-1表示)在指定值的±5.0cm^-1之內(nèi)時(shí)，則該拉曼光譜包括本文所指定“約”值的峰。進(jìn)一步，本領(lǐng)域技術(shù)人員還熟知且理解，所用的裝置、濕度、溫度、粉末晶體的取向及涉及獲得拉曼光譜的其它參數(shù)可以造成該光譜的外觀、強(qiáng)度和峰位置的某些變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，與本文提供的圖2、6、10、14、18或22“實(shí)質(zhì)上一致”的拉曼光譜為表示具有與提供圖2、6、10、14、18或22的拉曼光譜的化合物相同晶形的化合物的拉曼光譜。即，該拉曼光譜可能與圖2、6、10、14、18或22的相同，或者更可能其可能有些差異。這樣的拉曼光譜可能并不一定顯示本文所示的光譜中任一個(gè)的各個(gè)峰，和/或可能顯示由于涉及獲得數(shù)據(jù)的條件不同導(dǎo)致在外觀、強(qiáng)度或所述峰的位移上的稍微變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過比較它們的xrpd拉曼光譜確定，結(jié)晶化合物的樣品是否具有與本文公開形式相同的形式或不同的形式。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以將n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的樣品的拉曼光譜與圖2重疊，并且使用本領(lǐng)域的專門技術(shù)和知識容易地確定樣品的拉曼光譜是否與本文公開的式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的拉曼光譜實(shí)質(zhì)上一致。如果該拉曼光譜與圖6實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可被容易且準(zhǔn)確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2具有相同的形式。類似地，如果該拉曼光譜與圖10實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可被容易且準(zhǔn)確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的無水鹽酸鹽具有相同的形式。類似地，如果該拉曼光譜與圖14實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可被容易且準(zhǔn)確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽具有相同的形式。類似地，如果該拉曼光譜與圖18實(shí)質(zhì)上致，則該樣品形式可被容易且準(zhǔn)確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的馬尿酸鹽具有相同的形式。類似地，如果該拉曼光譜與圖22實(shí)質(zhì)上一致，則該樣品形式可被容易且準(zhǔn)確地確定為與本文公開的式(i)的化合物的磷酸鹽具有相同的形式。

進(jìn)一步理解式(i)或(ii)化合物或其鹽可以以不同于化學(xué)式中所顯示的互變異構(gòu)形式存在，這些也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。例如，當(dāng)式(i)和(ii)的化合物描述為含有吡啶-2-酮部分時(shí)，則該相應(yīng)的2-羥基吡啶互變異構(gòu)體也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，式(i)或(ii)的化合物的某些保護(hù)的衍生物，其可以在之前或最后脫保護(hù)階段之后制備，因而可以不具有藥理學(xué)活性，但是在某些情況下，可以以口服或腸胃外給藥，且之后在體內(nèi)代謝以形成具有藥理學(xué)活性的本發(fā)明的化合物。因此，這樣的衍生物可以描述為“前藥”。所有本發(fā)明的化合物的保護(hù)的衍生物和前藥都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。

本發(fā)明化合物的合適的前藥的實(shí)例描述在drugsoftoday,volume19,number9,1983,pp499-538andintopicsinchemistry,chapter31,pp306-316andin“designofprodrugs”byh.bundgaard,elsevier,1985,chapter1中。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)合適的官能團(tuán)存在于本發(fā)明的化合物之內(nèi)時(shí)，可以將本領(lǐng)域技術(shù)人員已知為“前體部分(pro-moieties)”的一些部分(例如h.bundgaard在“designofprodrugs”中描述的)置于合適的的官能團(tuán)上。本發(fā)明的化合物的優(yōu)選的“前體部分”包括：式(i)或(ii)化合物的酯、碳酸酯、半酯、磷酸酯、硝基酯、硫酸酯、亞砜、酰胺、氨基甲酸酯、偶氮(azo-)、磷酰胺、糖苷、醚、縮醛和縮酮衍生物。

給藥呈前藥的本發(fā)明的化合物可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)行以下中的一或多項(xiàng)：(a)修飾該化合物在體內(nèi)的起始作用；(b)修飾該化合物在體內(nèi)的作用持續(xù)時(shí)間；(c)修飾該化合物在體內(nèi)的運(yùn)輸或分布；(d)修飾該化合物在體內(nèi)的溶解性；和(e)克服該化合物所遭遇的副作用或其他困難。

本發(fā)明還包括同位素標(biāo)記的化合物，其與式(i)或(ii)中列舉的那些化合物相同，但是一個(gè)或多個(gè)原子被具有不同于自然界通常發(fā)現(xiàn)的該原子的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子所替代。可摻入本發(fā)明的化合物及其可藥用鹽的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，比如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹⁵n、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i和¹²⁵i。

含有前述同位素和/或其他原子的其它同位素的本發(fā)明的化合物和所述化合物的藥學(xué)上可接受鹽都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。同位素標(biāo)記的本發(fā)明的化合物，例如將放射性同位素(比如³h或¹⁴c)摻入其中的那些化合物，用于藥物和/或底物組織分布測定。氚代的(即，³h)和碳-14(即，¹⁴c)同位素由于它們易于制備和檢測，因此是特別優(yōu)選的。¹¹c和¹⁸f同位素尤其用于pet(正電子發(fā)射斷層顯像)，以及¹²⁵i同位素尤其用于spect(單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)化斷層顯像)，它們?nèi)坑糜谀X成像。進(jìn)一步，用較重同位素(比如氘，即，²h)的取代，因其更大的代謝穩(wěn)定性，可提供一些治療優(yōu)勢，例如增加的體內(nèi)半衰期或降低的劑量需求，因此，在一些情況可能是優(yōu)選的。同位素標(biāo)記的式(i)的化合物和按照本發(fā)明的化合物通?？梢酝ㄟ^下述進(jìn)行制備：實(shí)施下述方案和/或?qū)嵤├泄_的操作、用容易獲得的同位素標(biāo)記試劑代替非同位素標(biāo)記試劑。

定義

術(shù)語在其可接受的含義內(nèi)使用。下述定義旨在闡明而非限定所定義的術(shù)語。

“藥學(xué)上可接受(可藥用)”指其在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適于接觸人類和動物的組織而沒有過度毒性、刺激或其它問題或并發(fā)癥，與合理的益處/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的那些化合物、物質(zhì)、組合物和劑型。

如本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指保留所述主題化合物期望的生物活性，并顯示出最小的不希望的毒理效應(yīng)的鹽。這些藥學(xué)上可接受的鹽可以在化合物的最后分離和純化過程中原位制備，或通過單獨(dú)地將其游離酸或游離堿形式的純化化合物分別與合適的堿或酸反應(yīng)來制備。

藥物組合物

本發(fā)明進(jìn)一步提供藥物組合物(也稱為藥物制劑)，其包含式(i)或(ii)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一種或多種賦形劑(在藥學(xué)領(lǐng)域也稱為載體和/或稀釋劑)。從與制劑的其他成分相容以及對接受者(即患者)無害的意義上說，賦形劑是藥學(xué)上可接受的。合適的藥學(xué)上可接受賦形劑包括下述類型的賦形劑：稀釋劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、造粒劑、包衣劑、潤濕劑、溶劑、共溶劑、助懸劑、乳化劑、增甜劑、矯味劑、掩味劑、著色劑、抗結(jié)塊劑、保濕劑、螯合劑、增塑劑、增粘劑、抗氧劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和緩沖劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解一些可藥用賦形劑可以提供一種以上的功能，且其可提供其他的功能，這取決于該賦形劑存在于制劑中的多少以及還有什么其他成分存在于該制劑中。

本領(lǐng)域技術(shù)人員擁有本領(lǐng)域知識和技術(shù)，從而能夠選擇合適的量的合適的藥學(xué)上可接受賦形劑用于本發(fā)明。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得描述藥學(xué)上可接受賦形劑并可用于選擇合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑的大量資源。實(shí)例包括remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany),thehandbookofpharmaceuticaladditives(gowerpublishinglimited),andthehandbookofpharmaceuticalexcipients(theamericanpharmaceuticalassociationandthepharmaceuticalpress)。

使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)和方法制備本發(fā)明藥物組合物。常用于本領(lǐng)域的一些方法描述在remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany)中。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種制備藥物組合物的方法，包括將式(i)或(ii)的化合物或其藥學(xué)上可接受鹽與至少一種賦形劑混合(或摻和)。

藥物組合物可以為每個(gè)單位劑量含有預(yù)定量的活性成分的單位劑量形式。這樣的單位可以含有治療有效劑量的式(i)或(ii)的化合物或其藥學(xué)上可接受鹽，或一定比例的治療有效劑量的式(i)或(ii)化合物或其藥學(xué)上可接受鹽，從而在給定的時(shí)間可給藥多個(gè)單位劑量形式以達(dá)到期望的治療有效劑量。優(yōu)選的單位劑量制劑是本文上述列舉的含有活性成分的每日劑量或亞劑量或其適當(dāng)?shù)谋壤哪切?。此外，這樣的藥物組合物可以通過藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備。

藥物組合物可以適于通過任何合適的途徑給藥，例如，經(jīng)口服(包括頰內(nèi)或舌下)、直腸、鼻、局部(包括頰內(nèi)、舌下或透皮)、陰道或胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi))途徑給藥。這樣的組合物可通過本領(lǐng)域已知的任何方法制備，例如，通過使活性成分與一種或多種賦形劑結(jié)合。

當(dāng)適于口服給藥時(shí)，藥物組合物可以為離散單位比如片劑或膠囊劑、粉末或顆粒、在水性或非水性液體中的溶液或懸浮液、可食用泡沫或攪打劑(whip)，或水包油型液體乳劑或油包水型液體乳劑。本發(fā)明的化合物或其鹽或本發(fā)明的藥物組合物也可被摻入到糖果、威化餅(wafer)和/或舌帶型(tonguetape)制劑中，用于作為“快速溶解”的藥物給藥。

例如，以片劑或膠囊劑形式的口服給藥，可以將活性藥物組分與口服的、無毒的藥學(xué)上可接受惰性載體比如乙醇、甘油、水等混合。粉末劑或顆粒劑是如下制備的：將化合物研磨至合適的微細(xì)尺寸，然后與經(jīng)類似研磨的藥物載體比如可食用的碳水化合物(如例如淀粉或甘露醇)混合。矯味劑、防腐劑、分散劑和著色劑也可存在。

膠囊劑是如下制備的：如上所述制備粉末混合物，然后填充到成形的明膠或非明膠殼中?？梢詫⒅鲃┖蜐櫥瑒┍热缒z體二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、固體聚乙二醇加入到粉末混合物中，之后進(jìn)行填充操作。也可以加入崩解劑或增溶劑比如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉以改善膠囊劑被攝入時(shí)的藥物利用度。

而且，當(dāng)期望或需要時(shí)，也可以將合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑摻入到混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖(比如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然膠和合成膠比如阿拉伯膠、西黃蓍膠、海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。在這些劑型中使用的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括，但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等。

片劑是如下配制的：例如制備粉末混合物，制?；蝾A(yù)壓片，加入潤滑劑和崩解劑，然后壓制成片劑。粉末混合物是如下制備的：將經(jīng)合適粉碎的化合物與如上所述稀釋劑或基質(zhì)混合，以及與任選的粘合劑(比如羧甲基纖維素和海藻酸鹽、凝膠或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液阻滯劑(比如石蠟)、吸收促進(jìn)劑(比如季胺鹽)和/或吸收劑(比如膨潤土、高嶺土或磷酸二鈣)混合。粉末混合物可以如下制粒：潤濕粘合劑比如糖漿、淀粉糊、阿拉伯膠液、纖維素溶液或聚合物溶液，然后擠壓過篩。作為可選擇的制粒方法，粉末混合物可以通過壓片機(jī)來處理，導(dǎo)致不完全成形的預(yù)壓片破裂成顆粒?？梢酝ㄟ^加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油的方式來對顆粒進(jìn)行潤滑，以防止與片劑成形模粘連。然后，將潤滑的混合物壓制成片劑。本發(fā)明的化合物或鹽也可以與自由流動的惰性載體組合，并且在不經(jīng)歷制?；蝾A(yù)壓片步驟的情況下直接壓制成片劑?？梢蕴峁┯上率鼋M成的透明的或不透明的保護(hù)性包衣：由蟲膠形成的隔離包衣層、由糖或聚合物形成的包衣層和由蠟形成的光亮包衣層。可以將染料加入到這些包衣中以區(qū)分不同的劑量。

口服流體比如溶液劑、糖漿劑和酏劑可以按劑量單位形式來制備，從而使給定的量含有預(yù)定量的活性成分。糖漿劑可以通過將本發(fā)明的化合物或其鹽溶于經(jīng)合適矯味的水溶液中來制備，而酏劑通過使用無毒的含醇媒介物來制備。懸浮劑可以通過將本發(fā)明的化合物或其鹽分散在無毒的媒介物中來制備。也可以加入增溶劑和乳化劑(比如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐劑、矯味添加劑(比如薄荷油、天然甜味劑、糖精或其它人造甜味劑)等。

當(dāng)合適時(shí)，可以對用于口服給藥的劑量單位制劑進(jìn)行微囊化。也可以例如通過將顆粒物質(zhì)包衣或包埋到聚合物、蠟等中來制備制劑，以延長或維持釋放。

在本發(fā)明中，對于遞送藥物組合物而言，片劑和膠囊劑是優(yōu)選的。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的無水鹽酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的無水鹽酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以本文所述式(i)的化合物的無水鹽酸鹽存在。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽的藥物組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽的藥物組合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽以本文所述式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺門冬氨酸鹽的藥物組合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽以本文所述式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺門冬氨酸鹽的藥物組合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽以本文所述式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽存在。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的藥物組合物，.在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的藥物組合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽以本文所述式(i)的化合物的馬尿酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的藥物組合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽以本文所述式(i)的化合物的馬尿酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的藥物組合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽鹽以本文所述式(i)的化合物的馬尿酸鹽存在。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的藥物組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的藥物組合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽以本文所述式(i)的化合物的磷酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的藥物組合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽以本文所述式(i)的化合物的磷酸鹽存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的藥物組合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽以本文所述式(i)的化合物的磷酸鹽存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的藥學(xué)上可接受鹽(特別是鹽酸鹽、天門冬氨酸鹽、馬尿酸鹽和磷酸鹽)的藥物組合物，其中不超過90％重量的所述鹽為非晶形的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的藥學(xué)上可接受鹽(特別是鹽酸鹽、天門冬氨酸鹽、馬尿酸鹽或磷酸鹽)的藥物組合物，其中不超過80％重量、或不超過70％重量、或不超過60％重量、或不超過50％重量、或不超過40％重量、或不超過30％重量、或不超過20％重量、或不超過10％重量的所述鹽為非晶形的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的藥學(xué)上可接受鹽(特別是鹽酸鹽、天門冬氨酸鹽、馬尿酸鹽或磷酸鹽)的藥物組合物，其中不超過5％重量、或不超過4％重量、或不超過3％重量、或不超過2％重量、或不超過1％重量、或不超過0.5％重量、或不超過0.2％重量、或不超過0.1％重量的所述鹽為非晶形的。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過80％重量、或不超過70％重量、或不超過60％重量、或不超過50％重量、或不超過40％重量、或不超過30％重量、或不超過20％重量、或不超過10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過5％重量、或不超過4％重量、或不超過3％重量、或不超過2％重量、或不超過1％重量、或不超過0.5％重量、或不超過0.2％重量、或不超過0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的形式存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過80％重量、或不超過70％重量、或不超過60％重量、或不超過50％重量、或不超過40％重量、或不超過30％重量、或不超過20％重量、或不超過10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過5％重量、或不超過4％重量、或不超過3％重量、或不超過2％重量、或不超過1％重量、或不超過0.5％重量、或不超過0.2％重量、或不超過0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的形式存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過80％重量、或不超過70％重量、或不超過60％重量、或不超過50％重量、或不超過40％重量、或不超過30％重量、或不超過20％重量、或不超過10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽的藥物組合物，其中不超過5％重量、或不超過4％重量、或不超過3％重量、或不超過2％重量、或不超過1％重量、或不超過0.5％重量、或不超過0.2％重量、或不超過0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的形式存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽的藥物組合物，其中不超過90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽的藥物組合物，其中不超過80％重量、或不超過70％重量、或不超過60％重量、或不超過50％重量、或不超過40％重量、或不超過30％重量、或不超過20％重量、或不超過10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽的藥物組合物，其中不超過5％重量、或不超過4％重量、或不超過3％重量、或不超過2％重量、或不超過1％重量、或不超過0.5％重量、或不超過0.2％重量、或不超過0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的形式存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的藥物組合物，其中不超過90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的馬尿酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的藥物組合物，其中不超過80％重量、或不超過70％重量、或不超過60％重量、或不超過50％重量、或不超過40％重量、或不超過30％重量、或不超過20％重量、或不超過10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的馬尿酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽的藥物組合物，其中不超過5％重量、或不超過4％重量、或不超過3％重量、或不超過2％重量、或不超過1％重量、或不超過0.5％重量、或不超過0.2％重量、或不超過0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的馬尿酸鹽的形式存在。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的藥物組合物，其中不超過90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的磷酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的藥物組合物，其中不超過80％重量、或不超過70％重量、或不超過60％重量、或不超過50％重量、或不超過40％重量、或不超過30％重量、或不超過20％重量、或不超過10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的磷酸鹽的形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽的藥物組合物，其中不超過5％重量、或不超過4％重量、或不超過3％重量、或不超過2％重量、或不超過1％重量、或不超過0.5％重量、或不超過0.2％重量、或不超過0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽以不同于本文所述式(i)的化合物的磷酸鹽的形式存在。

如本文使用的術(shù)語“治療”指在先前患有的或被診斷的患者或受試者中減輕具體的病癥，消除或減少所述病癥的一種或多種癥狀，減慢或消除所述病癥的進(jìn)展以及預(yù)防或延遲所述病癥的復(fù)發(fā)。

本發(fā)明提供一種治療患有下述病癥的哺乳動物(特別是人類)的方法：腸易激綜合征(ibs)，包括腹瀉主導(dǎo)型、便秘主導(dǎo)型或交替排便模式、功能性胃氣脹、功能性便秘、功能性腹瀉、非特異性功能性腸病、功能性腹痛綜合征、慢性特發(fā)性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指腸病、功能性肛門直腸疼痛、炎性腸病、增殖性疾病例如非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺髓樣癌、濾泡性甲狀腺癌、未分化甲狀腺癌、乳頭狀甲狀腺癌、腦瘤、腹膜腔癌、實(shí)體瘤、其它肺癌、頭頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、vonhipple-lindau綜合征和腎腫瘤、乳腺癌、輸卵管癌、卵巢癌、過渡型細(xì)胞癌、前列腺癌、食道和食管胃連接處的癌癥、膽道癌和腺癌、或其組合。這樣的治療包括向所述哺乳動物(例如人類)給藥治療有效量的式(i)或(ii)的化合物或其藥學(xué)上可接受鹽的步驟。治療還包括以下步驟：向所述哺乳動物(特別是人類)給藥治療有效量的含有式(i)或(ii)的化合物或其藥學(xué)上可接受鹽的藥物組合物。

如本文使用的術(shù)語"有效量"指引發(fā)例如研究人員或臨床醫(yī)師尋求的組織、系統(tǒng)、動物或人的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的藥物或藥劑的量。

術(shù)語“治療有效量”指與未接受所述量的相應(yīng)受試者相比，使疾病、病癥或副反應(yīng)得到改善的治療、治愈、預(yù)防或緩解，或降低疾病或病癥的進(jìn)展速度的任何量。該術(shù)語還在其范圍內(nèi)包括有效增強(qiáng)正常生理功能的量。對于治療中使用，治療有效量的式(i)或(ii)化合物以及其鹽可以作為化學(xué)原料(rawchemical)的形式給藥。另外，活性成分可以作為藥物組合物存在。對于治療中使用，盡管治療有效量的式(i)或(ii)化合物或其可藥用鹽可以作為化學(xué)原料的形式給藥是可能的，但其通常作為藥物組合物或制劑的活性成分存在。

本發(fā)明的化合物或其鹽的精確的治療有效量將取決于多種因素，包括但不限于，待治療的受試者(患者)的年齡和體重、需要治療的精確病癥及其嚴(yán)重性、藥物制劑/組合物的性質(zhì)，以及給藥途徑，并且最終將由主治醫(yī)師或獸醫(yī)判斷決定。通常，給予治療的式(i)或(ii)化合物或其藥學(xué)上可接受鹽的范圍為每天約0.1至100mg/kg接受者(患者，哺乳動物)的體重，更通常地范圍為每天0.1至10mg/kg體重?？山邮艿娜談┝靠梢詾榧s0.1至約1000mg/天，以及優(yōu)選地約1至約100mg/天。該量可以以每天的單次劑量給予或以每天數(shù)次(比如2、3、4、5或更多)亞劑量給予，從而使得總?cè)談┝渴窍嗤摹｛}的有效量可以按照式(i)或(ii)化合物本身有效量的一定比例來確定。用于治療的類似的劑量對于治療本文提及的其他病癥而言應(yīng)當(dāng)是適合的。通常，適合劑量的確定可以容易地由醫(yī)學(xué)或藥學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員獲得。

本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用或與一種或多種其他治療劑組合使用。因此，本發(fā)明提供一種組合，其包含式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受鹽以及一或多種其他治療劑。這樣的組合可單獨(dú)存在(其中各活性物質(zhì)在單獨(dú)的組合物中)或該活性物質(zhì)以組合的組合物存在。

本發(fā)明的化合物可以與其他治療劑，特別是可提高該化合物活性或處置時(shí)間(timeofdisposition)的藥劑組合或共同給藥。根據(jù)本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物以及使用至少一種其他治療方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明的化合物和外科手術(shù)療法。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明的化合物和放射療法。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明化合物和至少一種支持療法試劑(例如，至少一種鎮(zhèn)吐藥)。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合療法包括施用至少一種本發(fā)明的化合物以及至少一種其他化療劑。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括施用至少一種本發(fā)明的化合物和至少一種抗腫瘤劑。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種治療方案，其中本公開的ret抑制劑本身并不是有活性的或活性不顯著，但當(dāng)其與其他療法(作為單獨(dú)療法可能有活性也可能沒有活性)組合時(shí)，該組合提供有用的治療結(jié)果。

如本文使用的術(shù)語“共同給藥”及其衍生詞指同時(shí)給藥或以任意單獨(dú)依次的方式給藥如本文所述的ret抑制化合物和其他的活性成分，特別是已知用于治療癌癥(包括化療和放療治療)的那些組分。如本文使用的術(shù)語其他的活性成分包括已知或證實(shí)當(dāng)給藥至需要治療癌癥的患者時(shí)具有或展示出有益的性質(zhì)的任意化合物或治療劑。優(yōu)選地，如果該給藥不是同時(shí)的，則該化合物是在彼此接近的時(shí)間進(jìn)行給藥的。此外，無論該化合物是否以同一劑型給藥都不重要，例如一種化合物可以局部給藥而另一種化合物可以口服給藥。

通常，對治療的敏感性(susceptible)腫瘤具有活性的任何抗腫瘤劑都可以在本發(fā)明具體癌癥治療中共同給藥。這樣的試劑的實(shí)例可以在cancerprinciplesandpracticeofoncologybyv.t.devitaands.hellman(editors),6^thedition(february15,2001),lippincottwilliams&wilkinspublishers中找到。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)藥物與所涉及癌癥的具體特征鑒別有用的藥劑組合。本發(fā)明有用的典型抗腫瘤藥物包括，但不限于：抗微管劑，比如二萜類化合物和長春花生物堿；鉑配位絡(luò)合物；烷化劑，比如氮芥(nitrogenmustard)、氧氮磷環(huán)類(oxazaphosphorine)、烷基磺酸鹽、亞硝基脲和三氮烯；抗生素試劑，比如蒽環(huán)類抗生素(anthracyclin)、放線菌素和博來霉素；拓?fù)洚悩?gòu)酶ii抑制劑，比如表鬼臼毒素；抗代謝劑，比如嘌呤和嘧啶類似物和抗葉酸化合物；拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制劑，比如喜樹堿；激素和激素類似物；dna甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，比如阿扎胞苷和地西他濱；信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑；非受體酪氨酸激酶血管生成抑制劑；免疫治療劑；促凋亡劑；和細(xì)胞周期信號抑制劑。

通常，對所治療的敏感性瘤具有活性的任意化療劑都可以與本發(fā)明的化合物組合使用，條件是該具體試劑與采用本發(fā)明的化合物的療法在臨床上相容。用于本發(fā)明的典型抗腫瘤劑包括，但不限于：烷化劑、抗代謝藥、抗腫瘤抗生素、抗有絲分裂劑、核苷類似物、拓?fù)洚悩?gòu)酶i和ii抑制劑、激素和激素類似物；類視黃醇，組蛋白脫乙?；敢种苿?；信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑，包括細(xì)胞生長或生長因子功能的抑制劑、血管生成抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸或其他激酶抑制劑；細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑；反義療法和免疫治療劑，包括單克隆抗體、疫苗或其他生物制劑。

核苷類似物是轉(zhuǎn)化成三磷酸脫氧核苷酸并代替胞嘧啶并入到復(fù)制的dna中的那些化合物。dna甲基轉(zhuǎn)移酶共價(jià)結(jié)合至該修飾的堿基上，導(dǎo)致酶失活以及降低的dna甲基化。核苷類似物的實(shí)例包括阿扎胞苷和地西他濱，其都用于治療骨髓增生異常疾病。組蛋白脫乙?；?hdac)抑制劑包括伏立諾他，用于治療皮膚t細(xì)胞淋巴瘤。hdac通過組蛋白脫乙酰基作用來修飾染色質(zhì)。另外，它們具有各種作用底物，包括各種轉(zhuǎn)錄因子和信號分子。其他hdac抑制劑正在研發(fā)中。

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑是阻斷或抑制化學(xué)過程的那些抑制劑，所述化學(xué)過程引起細(xì)胞內(nèi)變化。如本文使用的，所述變化是細(xì)胞增殖或分化或存活。用于本發(fā)明的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑包括，但不限于，受體酪氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶、sh2/sh3結(jié)構(gòu)域阻斷劑、絲氨酸/蘇氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3-oh激酶、肌醇信號傳導(dǎo)和ras癌基因的抑制劑。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑可以與上述組合物和方法中的本發(fā)明的化合物組合使用。

受體激酶血管生成抑制劑也可以用于本發(fā)明中。涉及vegfr和tie-2的血管生成抑制劑在上述針對信號傳導(dǎo)抑制劑(兩者都是受體酪氨酸激酶)中進(jìn)行了討論。其它抑制劑可以與本發(fā)明的化合物組合使用。例如，抗vegf抗體，其不識別vegfr(受體酪氨酸激酶)，但結(jié)合配體；整聯(lián)蛋白(αvβ3)的小分子抑制劑，其抑制血管生成；內(nèi)皮他丁和血管他丁(非-rtk)也被證明可用于與本發(fā)明的化合物組合。vegfr抗體的一個(gè)實(shí)例是貝伐單抗

生長因子受體的多種抑制劑正在研發(fā)中，且包括配體拮抗劑、抗體、酪氨酸激酶抑制劑、反義寡核苷酸和適體。任意這些生長因子受體抑制劑都可以與本發(fā)明的化合物組合用于本文所述的任意組合物和方法/用途中。曲妥珠單抗是生長因子功能的抗-erbb2抗體抑制劑的一個(gè)實(shí)例。生長因子功能的抗-erbb2抗體抑制劑的實(shí)例是西妥昔單抗(erbitux^tm,c225)。貝伐單抗是直接針對vegfr的單克隆抗體的一個(gè)實(shí)例。表皮生長因子受體的小分子抑制劑的實(shí)例包括但不限于拉帕替尼和厄洛替尼甲磺酸伊馬替尼是pdgfr抑制劑的一個(gè)實(shí)例。vegfr抑制劑的實(shí)例包括帕唑帕尼zd6474、azd2171、ptk787、舒尼替尼和索拉非尼。

抗微管或抗有絲分裂劑是時(shí)相特異性試劑(phasespecificagent)，其在細(xì)胞周期中的m期或有絲分裂期對腫瘤細(xì)胞的微管具有活性?？刮⒐軇┑膶?shí)例包括，但不限于二萜類化合物(diterpenoid)和長春花生物堿(vincaalkaloid)。

天然來源的二萜類化合物是時(shí)相特異性的抗癌劑，其在細(xì)胞周期中的g2/m期起作用。據(jù)信二萜類化合物通過與該蛋白結(jié)合，使微管的β-微管蛋白亞基穩(wěn)定。然后使蛋白的分解受到抑制，有絲分裂停止，接著發(fā)生細(xì)胞死亡。二萜類化合物的實(shí)例包括，但不限于紫杉醇(paclitaxel)及其類似物多西他賽。

紫杉醇，5β,20-環(huán)氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羥基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2r,3s)-n-苯甲酰基-3-苯基異絲氨酸酯；是一種從太平洋紫杉樹短葉紫杉(taxusbrevifolia)中分離出來的天然二萜產(chǎn)物，且作為可注射的溶液市售可獲得的。其為萜類紫杉烷家族的成員。其在1971年由wani等人首次分離出來(j.am.chem，soc.,93：2325,1971)，并通過化學(xué)和x-射線結(jié)晶學(xué)方法表征其結(jié)構(gòu)。其活性的機(jī)理之一是關(guān)于紫杉醇結(jié)合微管蛋白的能力，由此抑制癌細(xì)胞生長。schiffetal.,proc.natl,acad,sci.usa,77:1561-1565(1980)；schiffetal.,nature,277:665-667(1979)；kumar,j.biol,chem,256:10435-10441(1981)。對于一些紫杉醇衍生物的合成和抗癌活性的綜述，參見∶d.g.i.kingstonetal.,studiesinorganicchemistryvol.26,entitled“newtrendsinnaturalproductschemistry1986”,attaur-rahman,p.w.lequesne,eds.(elsevier,amsterdam,1986)pp219-235。

在美國，已經(jīng)批準(zhǔn)了紫杉醇的臨床用途，用于治療難治性卵巢癌(markmanetal.,yalejournalofbiologyandmedicine,64:583,1991；mcguireetal.,ann.int.med.,111:273,1989)和用于治療乳腺癌(holmesetal.,j.nat.cancerinst.,83:1797,1991.)。其為一種用于治療皮膚癌(einziget.al.,proc.am.soc.clin.oncol.,20：46)和頭頸癌(forastireet.al.,sem.oncol.,20：56,1990)的可能的候選藥物。該化合物還具有治療多囊性腎病(wooet.al.,nature,368：750,1994)、肺癌和瘧疾的潛力。采用紫杉醇治療患者，導(dǎo)致骨髓抑制(多重細(xì)胞譜系(multiplecelllineage),ignoff,r.j.et.al,cancerchemotherapypocketguide,1998)，這與高于閾濃度(50nm)的給藥的持續(xù)時(shí)間有關(guān)(kearns,c.m.et.al.,seminarsinoncology,3(6)p.16-23,1995)。

多西他賽，(2r,3s)-n-羧基-3-苯基異絲氨酸n-叔丁基酯，13-酯與5β-20-環(huán)氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羥基紫杉-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯，三水合物；以可注射溶液市售可獲得。多西他賽指明用于治療乳腺癌。多西他賽是紫杉醇的半合成衍生物，參見，使用天然前體，從歐洲紫杉樹的針葉中提取的10-去乙?；鶟{果赤霉素iii制備。多西他賽的劑量限制性毒性是嗜中性白細(xì)胞減少癥。

長春花生物堿(vincaalkaloids)是來源于長春花屬植物的時(shí)相特異性的抗腫瘤劑。長春花生物堿通過特異性地結(jié)合微管蛋白而在細(xì)胞周期的m期(有絲分裂)起作用。因此，被結(jié)合的微管蛋白分子不能聚合成微管。有絲分裂被認(rèn)為在中期被停止，隨后細(xì)胞死亡。長春花生物堿的實(shí)例包括，但不限于長春堿、長春新堿和長春瑞濱。

長春堿(vinblastine)，長春堿硫酸鹽，以注射溶液市售可獲得。盡管其有可能作為各種實(shí)體瘤的二線治療，但是其最初指定用于治療睪丸癌和各種淋巴瘤，包括霍奇金病；以及淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞的淋巴瘤。骨髓抑制是長春堿的劑量限制性副作用。

長春新堿(vincristine)，長春堿22-氧代-硫酸鹽，以注射溶液市售可獲得。長春新堿指定用于治療急性白血病，還發(fā)現(xiàn)用于治療霍奇金和非霍奇金惡性淋巴瘤。脫發(fā)和神經(jīng)作用是長春新堿最常見的副作用，并產(chǎn)生較小程度的骨髓抑制和胃腸粘膜炎作用。

長春瑞濱，3',4'-二脫氫-4'-脫氧-c'-去甲長春堿(norvincaleukoblastine)[r-(r*,r*)-2,3-二羥基丁二酸二酯(1：2)(鹽)]，以長春瑞濱酒石酸鹽注射溶液市售可獲得，是半合成的長春花生物堿。長春瑞濱可以作為單獨(dú)的藥劑或與其它化學(xué)治療劑(比如順鉑)組合，用于治療各種實(shí)體瘤，特別是非小細(xì)胞肺癌、晚期乳腺癌和激素難治性前列腺癌。骨髓抑制是長春瑞濱最常見的劑量限制性副作用。

鉑配位絡(luò)合物是非時(shí)相特異性的抗癌劑，其與dna相互作用。鉑絡(luò)合物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，進(jìn)行水合作用，并與dna形成鏈內(nèi)和鏈之間的交聯(lián)，導(dǎo)致對腫瘤不利的生物學(xué)作用。鉑配位絡(luò)合物的實(shí)例包括但不限于順鉑和卡鉑。

順鉑，順式-二氨二氯合鉑，以注射溶液市售可獲得。順鉑最初指定用于治療轉(zhuǎn)移性睪丸癌和卵巢癌以及晚期的膀胱癌。順鉑的主要劑量限制性副作用是腎毒性和耳毒性，所述腎毒性可以通過水合和利尿來控制。

卡鉑，二氨[1,1-環(huán)丁烷-二羧酸根(2-)-o,o']合鉑，以注射溶液市售可獲得。卡鉑最初指定用于晚期卵巢癌的一線和二線治療。骨髓抑制是卡鉑的劑量限制性毒性。

烷化劑是非時(shí)相特異性抗癌藥劑和強(qiáng)親電試劑。通常，烷化劑借助于烷基化作用，通過dna分子的親核部分比如磷酸基(phosphate)、氨基、巰基、羥基、羧基和咪唑基，與dna形成共價(jià)鍵。這樣的烷基化作用破壞核酸功能，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。烷化劑的實(shí)例包括，但不限于氮芥，比如環(huán)磷酰胺、美法侖和苯丁酸氮芥；磺酸烷基酯，比如白消安；亞硝基脲，比如卡莫司??；以及三氮烯，比如達(dá)卡巴嗪。

環(huán)磷酰胺，2-[雙(2-氯乙基)氨基]四氫-2h-1,3,2-氧氮磷雜環(huán)己二烯(oxazaphosphorine)2-氧化物一水合物，以注射溶液或片劑市售可獲得。環(huán)磷酰胺指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它化學(xué)治療劑組合，用于治療惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和白血病。脫發(fā)、惡心、嘔吐和白細(xì)胞減少癥是環(huán)磷酰胺最常見的劑量限制性副作用。

美法侖，4-[雙(2-氯乙基)氨基]-l-苯基丙氨酸，以注射溶液或片劑市售可獲得。美法侖指定用于多發(fā)性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮癌的姑息療法。骨髓抑制是美法侖最常見的劑量限制性副作用。

苯丁酸氮芥，4-[雙(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，以片劑市售可獲得。苯丁酸氮芥指定用于慢性淋巴細(xì)胞性白血病和惡性淋巴瘤(比如淋巴肉瘤、巨濾泡性淋巴瘤和霍奇金病)的姑息療法。骨髓抑制是苯丁酸氮芥最常見的劑量限制性副作用。

白消安，1,4-丁二醇二甲磺酸酯，以片劑市售可獲得。白消安指定用于慢性髓細(xì)胞性白血病的姑息療法。骨髓抑制是白消安最常見的劑量限制性副作用。

卡莫司汀，1,3-[雙(2-氯乙基)-1-亞硝基脲，以單瓶的凍干產(chǎn)物市售可獲得?？就≈付ㄗ鳛閱为?dú)的藥劑或與其它藥劑組合，用于腦瘤、多發(fā)性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤的姑息療法。延遲的骨髓抑制是卡莫司汀最常見的劑量限制性副作用。

達(dá)卡巴嗪，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，以dtic-單瓶裝的物質(zhì)市售可獲得。達(dá)卡巴嗪指定用于轉(zhuǎn)移性惡性黑素瘤的治療，并且可與其它藥劑組合，用于霍奇金病的二線治療。惡心、嘔吐和厭食是達(dá)卡巴嗪最常見的劑量限制性副作用。

抗生素類抗腫瘤劑(antibioticanti-neoplastics)是非時(shí)相特異性的藥劑，其結(jié)合或嵌入dna中。通常，這種作用導(dǎo)致穩(wěn)定的dna復(fù)合物或鏈斷裂，破壞核酸的正常功能，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。抗生素類抗腫瘤劑的實(shí)例包括但不限于放線菌素(比如更生霉素)，蒽環(huán)類(anthrocyclins)(比如柔紅霉素和多柔比星)；以及博來霉素。

更生霉素，也稱為放線菌素d，以注射液形式市售可獲得。更生霉素指定用于維爾姆斯腫瘤(wilm’stumor)和橫紋肌肉瘤的治療。惡心、嘔吐和厭食是更生霉素最常見的劑量限制性副作用。

柔紅霉素，(8s-順式-)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三脫氧基α-l-來蘇-己吡喃糖基)-氧基]-7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮鹽酸鹽，以脂質(zhì)體可注射形式或可注射形式市售可獲得。柔紅霉素指定在急性非淋巴細(xì)胞性白血病和晚期hiv相關(guān)的卡波西肉瘤的治療中用于誘導(dǎo)癥狀緩解。骨髓抑制是柔紅霉素最常見的劑量限制性副作用。

多柔比星，(8s,10s)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脫氧-α-l-來蘇-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇?；?7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮鹽酸鹽，以或adriamycin注射溶液市售可獲得。多柔比星最初指定用于急性成淋巴細(xì)胞性白血病和急性成髓細(xì)胞性白血病的治療，但也是治療某些實(shí)體瘤和淋巴瘤的有用組分。骨髓抑制是多柔比星最常見的劑量限制性副作用。

博來霉素，是從輪絲鏈霉菌(streptomycesverticilus)菌株中分離出來的細(xì)胞毒素糖肽類抗生素的混合物，以市售可獲得。博來霉素指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它藥劑組合，用于鱗狀細(xì)胞癌、淋巴瘤和睪丸癌的姑息療法。肺部和皮膚毒性是博來霉素最常見的劑量限制性副作用。

拓?fù)洚悩?gòu)酶ii抑制劑包括但不限于表鬼臼脂毒素。

表鬼臼脂毒素是來源于曼德拉草(mandrake)植物的時(shí)相特異性的抗腫瘤藥物。表鬼臼脂毒素通常通過與拓?fù)洚悩?gòu)酶ii和dna形成三元復(fù)合物，來影響處于細(xì)胞周期的s和g2期的細(xì)胞，導(dǎo)致dna鏈斷裂。鏈斷裂積聚，接著細(xì)胞死亡。表鬼臼脂毒素的實(shí)例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(r)-亞乙基-β-d-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液或膠囊市售可獲得，并且通常稱為vp-16。依托泊苷指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它化療劑組合，用于治療睪丸癌和非小細(xì)胞肺癌。骨髓抑制是依托泊苷最常見的副作用。白細(xì)胞減少癥的發(fā)病率傾向于比血小板減少癥的發(fā)病率更嚴(yán)重。

替尼泊苷，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(r)-噻吩亞甲基-β-d-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液市售可獲得，并且通常稱為vm-26。替尼泊苷指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它化療劑組合，用于治療兒童急性白血病。骨髓抑制是替尼泊苷最常見的劑量限制性副作用。替尼泊苷可引起白細(xì)胞減少癥和血小板減少癥。

抗代謝腫瘤藥劑是時(shí)相特異性的抗腫瘤藥劑，其作用于細(xì)胞周期的s期(dna合成)，通過抑制dna的合成，或者通過抑制嘌呤或嘧啶堿基的合成從而限制dna的合成。因此，s期不能繼續(xù)下去，接著細(xì)胞死亡?？勾x類抗腫瘤藥劑的實(shí)例包括，但不限于氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、巰基嘌呤、硫鳥嘌呤和吉西他濱。

5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1h,3h)嘧啶二酮，以氟尿嘧啶市售可獲得。5-氟尿嘧啶的給藥導(dǎo)致胸苷酸合成的抑制，并且還結(jié)合到rna和dna中。結(jié)果通常是細(xì)胞死亡。5-氟尿嘧啶指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它化療劑組合，用于治療乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌和胰腺癌。骨髓抑制和粘膜炎是5-氟尿嘧啶的劑量限制性副作用。其它的氟嘧啶類似物包括5-氟脫氧尿嘧啶核苷(氟尿苷)和5-氟脫氧尿嘧啶核苷單磷酸鹽。

阿糖胞苷，4-氨基-1-β-d-阿拉伯呋喃糖基-2(1h)-嘧啶酮，以市售可獲得，并且通常稱之為ara-c。據(jù)信阿糖胞苷在s-期具有細(xì)胞時(shí)相特異性，其通過將阿糖胞苷末端結(jié)合到生長的dna鏈中而抑制dna鏈的延長。阿糖胞苷作為單獨(dú)的藥劑或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。其它的胞苷類似物包括5-氮雜胞苷和2',2'-二氟脫氧胞苷(吉西他濱)。阿糖胞苷引起白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和粘膜炎。

巰基嘌呤，1,7-二氫-6h-嘌呤-6-硫酮一水合物，以市售可獲得。巰基嘌呤在s-期通過至今尚未清楚的機(jī)理抑制dna的合成，顯示出細(xì)胞時(shí)相特異性。巰基嘌呤指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。預(yù)期骨髓抑制和胃腸粘膜炎是高劑量巰基嘌呤的副作用。可使用的巰基嘌呤類似物是硫唑嘌呤。

硫鳥嘌呤，2-氨基-1,7-二氫-6h-嘌呤-6-硫酮，以市售可獲得。硫鳥嘌呤在s-期通過至今尚未清楚的機(jī)理抑制dna的合成，顯示出細(xì)胞時(shí)相特異性。硫鳥嘌呤指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它化療劑組合，用于治療急性白血病。骨髓抑制，包括白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血是給藥硫鳥嘌呤最常見的劑量限制性副作用。然而，還發(fā)生胃腸副作用，而且該副作用可能是劑量限制性的。其它的嘌呤類似物包括噴司他丁、赤式羥基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、磷酸氟達(dá)拉濱和克拉屈濱。

吉西他濱，2'-脫氧-2',2'-二氟胞苷一鹽酸鹽(β-異構(gòu)體)，以市售可獲得。吉西他濱通過阻斷細(xì)胞通過g1/s邊界的發(fā)展在s-期顯示出細(xì)胞時(shí)相特異性。吉西他濱指定與順鉑組合，用于治療局部的晚期非小細(xì)胞肺癌，和單獨(dú)用于治療局部的晚期胰腺癌。骨髓抑制(包括白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血)是給藥吉西他濱最常見的劑量限制性副作用。

甲氨蝶呤，n-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲?；鵠-l-谷氨酸，以甲氨蝶呤鈉市售可獲得。甲氨蝶呤在s-期顯示出細(xì)胞時(shí)相特異性作用，其通過抑制合成嘌呤核苷酸和胸苷酸所需的脫氫葉酸還原酶來抑制dna的合成、修復(fù)和/或復(fù)制。甲氨蝶呤指定作為單獨(dú)的藥劑或與其它化療劑組合，用于治療絨毛膜癌、腦膜白血病、非霍奇金淋巴瘤，以及乳腺癌、頭癌、頸癌、卵巢癌和膀胱癌。預(yù)期骨髓抑制(白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥和貧血)和粘膜炎是給藥甲氨蝶呤的副作用。

喜樹堿(camptothecins)，包括喜樹堿和喜樹堿衍生物，作為拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制劑來使用或在開發(fā)中。喜樹堿細(xì)胞毒素活性被認(rèn)為與其拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制活性相關(guān)。喜樹堿的實(shí)例包括，但不限于伊立替康、托泊替康，以及如下所述7-(4-甲基哌嗪基-亞甲基)-10,11-亞乙二氧基-20-喜樹堿的各種光學(xué)形式。

鹽酸伊立替康(irinotecanhcl)，(4s)-4,11-二乙基-4-羥基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰基氧基]-1h-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14(4h,12h)-二酮鹽酸鹽，以注射溶液市售可獲得。

伊立替康是喜樹堿的衍生物，其與其活性代謝物sn-38一起結(jié)合在拓?fù)洚悩?gòu)酶i-dna復(fù)合物上。據(jù)信由于雙鏈不可修復(fù)的(irreparable)斷裂，導(dǎo)致出現(xiàn)細(xì)胞毒性，所述斷裂是由拓?fù)洚悩?gòu)酶i：dna：伊立替康或sn-38三元復(fù)合物與復(fù)制酶之間的相互作用引起的。伊立替康指定用于治療結(jié)腸或直腸的轉(zhuǎn)移癌。鹽酸伊立替康的劑量限制性副作用是骨髓抑制，包括嗜中性白細(xì)胞減少癥，以及包括腹瀉的gi效應(yīng)。

鹽酸托泊替康(topotecanhcl)，(s)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羥基-1h-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14-(4h,12h)-二酮一鹽酸鹽，以注射溶液市售可獲得。托泊替康是喜樹堿的衍生物，其與拓?fù)洚悩?gòu)酶i-dna復(fù)合物結(jié)合，并阻止單鏈斷裂的再連接，所述單鏈斷裂是拓?fù)洚悩?gòu)酶i響應(yīng)dna分子的扭轉(zhuǎn)應(yīng)變(torsionalstrain)所引起的。托泊替康指定用于轉(zhuǎn)移性卵巢癌和小細(xì)胞肺癌的二線治療。鹽酸托泊替康的劑量限制性副作用是骨髓抑制，主要是嗜中性白細(xì)胞減少癥。

試驗(yàn)例

下述實(shí)施例說明本發(fā)明。這些實(shí)施例并非旨在限制本發(fā)明的范圍，而是為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供關(guān)于制備和使用本發(fā)明的化合物、組合物和方法的指導(dǎo)。雖然描述了本發(fā)明的特定的實(shí)施方案，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以作出各種變化和修飾。除非另有說明，否則試劑是市售可獲得的或根據(jù)文獻(xiàn)中的方法制備的。在描述方法、方案和實(shí)施例時(shí)使用的符號和慣例與當(dāng)前的科學(xué)文獻(xiàn)例如thejournaloftheamericanchemicalsociety或thejournalofbiologicalchemistry中使用的那些一致。

在實(shí)施例∶

化學(xué)位移是以百萬分率(ppm)單位表示。偶合常數(shù)(j)的單位是赫茲(hz)。分裂模式描述了表觀多重性(apparentmultiplicities)，且被稱為s(單峰)、d(雙峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、dd(雙二重峰)、dt(雙三重峰)、dq(雙四重峰)、m(多重峰)、br(寬峰)。

快速柱色譜在硅膠上進(jìn)行。

所使用的命名程序是ultra12.0。

縮寫

18-冠-61,4,7,10,13,16-六氧雜環(huán)十八烷

cdcl3氯仿-d

cd3od甲醇-d4

cs2co3碳酸銫

d天

dcm二氯甲烷

dmfn,n-二甲基甲酰胺

ea乙酸乙酯

es-lcms電噴射液相色譜-質(zhì)譜

et3n三乙胺

etoh乙醇

g克

h小時(shí)

h2氫氣

hcl鹽酸

h2o水

hplc高效液相色譜

h2so4硫酸

k2co3碳酸鉀

koac乙酸鉀

koh氫氧化鉀

lcms液相色譜-質(zhì)譜

lioh·h2o氫氧化鋰水合物

mecn乙腈

meoh甲醇

mg毫克

mgso4硫酸鎂

min分鐘

ml毫升

mmol毫摩爾

n2氮?dú)?/p>

nacn氰化鈉

nahco3碳酸氫鈉

naoh氫氧化鈉

na2so4硫酸鈉

nbsn-溴代琥珀酰亞胺

nh4oh氫氧化銨

nmr核磁共振

pd/c鈀碳

pdcl2(dppf)1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯鈀(ii)

pe石油醚

pmb對-甲氧基芐基

rt室溫

socl2亞硫酰氯

tbme叔丁基甲基醚

tfa三氟乙酸

tlc薄層色譜

丙基膦酸酸酐

中間體的制備

中間體1：2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸

步驟1：2-氯-4-乙氧基吡啶

在0℃下，向2-氯-4-硝基吡啶(170g,1070mmol)在thf(2l)中的混合物中慢慢地加入乙醇鈉(109.45g，1610mmol)。在25℃下，攪拌該混合物12小時(shí)。lcms和tlc分析(pe/ea＝5:1,rf＝0.6)顯示反應(yīng)完成。過濾該混合物，并通過減壓除去大部分的濾液溶劑。將混合物用水淬滅，并用ea萃取，用鹽水洗滌有機(jī)層，然后濃縮。按照相同的方法制備另外六批，得到2-氯-4-乙氧基吡啶(1100g,7.01mol,92.4％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.15(d,j＝6.0hz,1h),6.99(d,j＝2.0hz,1h),6.91-6.89(m,1h),4.16-4.14(m,2h),1.41-1.38(m,3h)；es-lcmsm/z:158.1(m+h)。

步驟2：5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶

將2-氯-4-乙氧基吡啶(100g,634.5mmol)慢慢地加入到h2so4(500ml)中。然后，在室溫下，將nbs(124.2g,698.0mmol)加入到上述反應(yīng)混合物中。在80℃下，攪拌該混合物3小時(shí)。tlc分析(pe/ea＝10:1,rf＝0.5)顯示反應(yīng)完成。將該反應(yīng)混合物傾倒入冰-水(2000ml)中，用ea萃取，然后濃縮。按照相同的方法制備另外十批。通過快速柱色譜純化合并的粗產(chǎn)物，得到5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶(670g,2.84mol,40.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.31(s,1h),7.14(s,1h),4.32-4.10(m,2h),1.58-1.35(m,3h)；es-lcmsm/z:236.0,238.0(m,m+2h)。

步驟3：5-溴-4-乙氧基-2-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶

在室溫下，向5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶(75g,317.1mmol)在甲苯(500ml)中的混合物中加入(4-甲氧基苯基)甲醇(52.6g,380.6mmol)、koh(35.6g,634.3mmol)和18-冠-6(8.4g,31.2mmol)。在120℃下，攪拌該反應(yīng)混合物2小時(shí)。用tbme萃取該混合物，用鹽水洗滌并濃縮。按照相同的方法制備另外八批。通過快速柱色譜(pe/ea＝10:1,rf＝0.5)純化合并的粗產(chǎn)物，得到5-溴-4-乙氧基-2-((4--甲氧基芐基)氧基)吡啶(650g,1.99mol,70.0％):¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.05(s,1h),7.33(d,j＝8.6hz,2h),6.90-6.84(m,2h),6.38(s,1h),5.20(s,2h),4.16-4.05(m,2h),3.77(s,3h),1.43(q,j＝6.8hz,3h)；es-lcmsm/z:338.3(m+2h)。

步驟4：2-(4-溴-2-氟苯基)乙腈

在20℃下，于n2下，向攪拌的4-溴-1-(溴乙基)-2-氟苯(500g,1.87mol)在etoh(2.2l)中的溶液中一次性加入nacn(93g,1.90mmol)。在60℃下，攪拌反應(yīng)混合物12小時(shí)。然后，濃縮該溶液，并分配在dcm(2000ml)和飽和的nahco3溶液(1800ml)之間。按照相同的方法制備另一批。然后，合并兩批。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)mgso4干燥，過濾并濃縮，得到2-(4-溴-2-氟苯基)乙腈(794g,99％)：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38-7.27(m,3h),3.72(s,2h)。

步驟5：2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸

在20℃下，于n2下，向2-(4-溴-2-氟苯基)乙腈(397g,1.82mol)在meoh(500ml)中的溶液中一次性加入naoh(2.22l,2.5m,5.56mol)溶液。在80℃下攪拌該反應(yīng)混合物5小時(shí)。然后，濃縮該溶液，并用濃hcl中和至ph＝5，同時(shí)攪拌。接著，用ea(1.5l×2)萃取溶液。按照相同的方法制備另外兩批。然后，合并三批。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空中濃縮，得到純化的2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸(1200g，92％)∶tlc(pe/ea＝5:1,rf＝0.2)；；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(br.s.,1h),7.12(t,j＝7.9hz,1h),3.65(s,2h)。

步驟6：2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸甲酯

在室溫下，向2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸(260g,1.13mol)在meoh(2l)中的溶液中加入h2so4(30ml)。將該溶液加熱回流過夜。然后，濃縮溶劑，并將殘余物分配在ea和飽和的nahco3溶液之間。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并濃縮。按照相同的方法制備另一批。然后，合并兩批，得到2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸甲酯(520g,94％)。tlc(pe/ea＝10:1,rf＝0.7).¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25-7.20(m,2h),7.14(t,j＝8.0hz,1h),3.70(s,3h),3.62(s,2h)。

步驟7：2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯

在室溫下，向2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸甲酯(260g,1.05mol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基2,2'-雙(1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷)(320g,1.26mol)在1,4-二噁烷(2l)中的溶液中加入koac(206g,2.10mol)和pdcl2(dppf)(23g,0.03mol)。在n2下，將該溶液加熱回流4小時(shí)。然后，將該溶液過濾，并在真空中濃縮濾液，得到粗產(chǎn)物。按照相同的方法制備另一批。然后，將兩批合并，并通過快速柱色譜(pe/ea＝30:1至10:1)純化。將通過tlc(pe/ea＝10:1,rf＝0.5)發(fā)現(xiàn)包含產(chǎn)物的所有級分合并，并濃縮，得到呈淺黃色油狀物的2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(560g,90％)：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.54(d,j＝7.5hz,1h),7.49(d,j＝10.0hz,1h),7.31-7.26(m,1h),3.73(s,2h),1.34(s,12h),1.27(s,3h)；es-lcmsm/z295.2(m+h)。

步驟8：2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸甲酯

在n2氣氛下，向5-溴-4-乙氧基-2-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶(175g,519mmol)在1,4-二噁烷(1200ml)和h2o(300ml)中的溶液中加入2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(167g,569mmol)、pdcl2(dppf)(25g,5.19mmol)和cs2co3(337g,1038mmol)。將該混合物回流2小時(shí)。tlc分析(pe/ea＝5:1,rf＝0.3)顯示反應(yīng)完成。用ea/h2o(2l)萃取混合物，得到油層，經(jīng)na2so4干燥，過濾，濃縮。按照相同的方法制備另兩批。通過快速柱色譜(pe/ea＝5:1,rf＝0.3)純化合并的粗產(chǎn)物，得到5-溴-4-乙氧基-2-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶(630g,1.48mol,90.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.94(s,1h),7.36(d,j＝8.8hz,2h),7.32-7.22(m,3h),6.90(d,j＝8.8hz,2h),6.43(s,1h),5.26(s,2h),4.11(d,j＝6.8hz,2h),3.78(s,3h),3.72(s,2h),3.70(s,3h),1.36(t,j＝7.0hz,3h)；es-lcmsm/z:426.1(m+h)。

步驟9：2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶3-基)-2-氟苯基)乙酸

向2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(210g,519mmol)在thf(500ml)中的溶液中加入在h2o(700ml)中的lioh·h2o(52g,1230mmol)。在60℃下，攪拌該混合物過夜。tlc分析(pe/ea＝5:1,rf＝0.3)顯示反應(yīng)完成。將混合物濃縮，并用hcl(1n)調(diào)節(jié)至ph＝7。按照相同的方法制備另兩批。然后，過濾合并的粗產(chǎn)物，用水洗滌固體并干燥，得到2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(550g,1.34mol,93.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od):δ7.94(s,1h),7.41-7.28(m,3h),7.24(d,j＝9.5hz,2h),6.91(d,j＝8.6hz,2h),6.44(s,1h),5.26(s,2h),4.11(q,j＝6.9hz,2h),3.78(s,3h),3.67(s,2h),1.36(t,j＝7.0hz,3h)；es-lcmsm/z:412.1(m+h)。

本發(fā)明的化合物的制備

實(shí)施例1：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

步驟1：3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸

向3-(三氟甲基)苯甲酸(5g,26.3mmol)在h2so4(50ml,938mmol)中的混合物中加入硝酸(3.53ml,79mmol)。在0℃下，攪拌該混合物15分鐘，并經(jīng)1小時(shí)升溫至90℃。然后，將該混合物滴加到冰水中。過濾該混合物，得到白色固體的3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(5.2g,21.01mmol,80.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.99(s,1h),8.72(s,1h),8.61(s,1h)。

步驟2：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

在75℃下，攪拌3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(3.3g,14.04mmol)在socl2(50ml,685mmol)和dmf(0.5ml,6.46mmol)中的混合物2小時(shí)。然后，濃縮該混合物，并將?；热苡赿cm(50ml)中。將該混合物冷卻至0℃，然后加入et3n(2.348ml,16.84mmol)，接著加入n¹,n¹-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.740ml,15.44mmol)。在0℃下，攪拌該反應(yīng)30分鐘，然后，濃縮該混合物。通過快速柱色譜(dcm/meoh＝15:1)純化粗物質(zhì)。將通過tlc(dcm/meoh＝15:1,rf＝0.3)發(fā)現(xiàn)包含產(chǎn)物的所有級分合并并濃縮，得到黃色油狀物的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(5g,8.19mmol,58.4％):¹hnmr(400mhz,cd3od)δ9.00(s,1h),8.65(s,1h),8.61(s,1h),3.86(t,j＝6.0hz,2h),3.42(t,j＝6.0hz,2h),2.99(s,6h)；es-lcmsm/z306.1(m+h)。

步驟3：3-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二鹽酸鹽

向n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(5g,8.19mmol)在meoh(100ml)中的混合物中加入pd/c(500mg,10％)。在10℃下，在h2氣氛下，攪拌該混合物16小時(shí)。然后，將該混合物過濾并濃縮。通過制備hplc(柱：asbc18150*25mm；流動相a:h2o+0.1％hcl；流動相b：mecn；流速：25ml/min；gradientprofiledescription:5-35(b％))純化粗物質(zhì)，得到黃白色固體的3-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二鹽酸鹽(878.01mg,2.52mmol,30.8％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.28(s,1h),8.19(s,1h),7.86(s,1h),3.84(t,j＝6.0hz,2h),3.47(t,j＝6.0hz,2h),3.02(s,6h)；es-lcmsm/z276.1(m+h)。

步驟4：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(3-(2-(5-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-4-甲基嘧啶-5-基)脲基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

向2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(100mg,0.243mmol)在吡啶(3ml)中的混合物中加入3-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(66.9mg,0.243mmol)和(0.8ml，0.243mmol，在ea中50％)。在10℃下，攪拌該混合物16小時(shí)。濃縮該混合物。通過制備tlc(dcm/meoh＝10:1,rf＝0.3)純化粗物質(zhì)，得到黃色固體的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(80mg,0.096mmol,39.4％)：¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.55(d,j＝4.4hz,1h),8.43(s,1h),8.06(s,1h),7.96(s,1h),7.89(s,1h),7.48-7.45(m,1h),7.36(d,j＝8.8hz,2h),7.29(s,1h),6.90(d,j＝8.8hz,2h),6.45(s,1h),5.26(s,2h),4.12(q,j＝7.2hz,2h),3.84(s,2h),3.78(s,3h),3.76(t,j＝2.4hz,2h),3.37(t,j＝5.6hz,2h),2.97(s,6h),1.36(t,j＝7.2hz,3h)；es-lcmsm/z669.1(m+h)。

步驟5：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

向n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(80mg,0.120mmol)在dcm(20ml)中的混合物中加入tfa(2ml,26.0mmol)。在25℃下，攪拌該混合物2小時(shí)。然后，濃縮反應(yīng)物，并用nh4oh堿化。通過制備hplc(儀器：gilsongx281；柱∶gemini150*25mm*5um；流動相a∶h2o(0.05％氨溶液)；流動相b：mecn；梯度∶25-55(b％)；流速∶25ml/min；運(yùn)行時(shí)間∶10min)純化粗物質(zhì)，得到白色固體的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(27.71mg,0.050mmol,41.8％)：tlc(dcm/meoh＝10:1,rf＝0.2)¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.26(s,1h),8.20(s,1h),7.90(s,1h),7.45-7.39(m,2h),7.29-7.23(m,2h),6.02(s,1h),4.14(q,j＝7.2hz,2h),3.86(s,2h),3.57(t,j＝6.4hz,2h),2.63(t,j＝6.8hz,2h),2.36(s,6h),1.40(t,j＝7.2hz,3h)；es-lcmsm/z549.2(m+h)。

實(shí)施例2：n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺

步驟1：n,n-二甲基-2-(3-硝基5-(三氟甲基)苯氧基)乙胺

向1-氟-3-硝基-5-(三氟甲基)苯(2g，,9.56mmol)在dmf(15ml)中的懸浮液中加入2-(二甲基氨基)乙醇(2.56g,28.7mmol)和k2co3(2.64g,19.13mmol)。在80℃下，攪拌該混合物8小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫。然后，濃縮該溶液，并分配在ea(10ml)和飽和的nahco3溶液(10ml)之間。將該有機(jī)萃取物用鹽水(10ml)洗滌，經(jīng)mgso4干燥，過濾并濃縮。通過快速柱色譜(pe/ea＝1:1)純化粗物質(zhì)。將通過tlc(pe/ea＝1:1,rf＝0.5)發(fā)現(xiàn)包含產(chǎn)物的所有級分合并并濃縮，得到淺黃色固體的n,n-二甲基-2-(3-硝基-5-(三氟甲基)苯氧基)乙胺(1.8g,5.18mmol,54.1％)：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.07(s,1h),7.94(s,1h),7.50(s,1h),4.18(t,j＝5.4hz,2h),2.79(t,j＝5.4hz,2h),2.36(s,6h)；es-lcmsm/z279.0(m+h)。

步驟2：3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯胺

向n,n-二甲基-2-(3硝基-5-(三氟甲基)苯氧基)乙胺(1.8g,6.47mmol)在meoh(20ml)中的懸浮液中加入pd/c(0.344g,10％)。在26℃下，在15psi的h2氣氛下，將該混合物氫化3小時(shí)。然后，過濾溶液并濃縮。通過快速柱色譜(pe/ea＝1:1)純化粗物質(zhì)。將通過tlc(pe/ea＝1:1,rf＝0.4)發(fā)現(xiàn)包含產(chǎn)物的所有級分合并并濃縮，得到淺黃色固體的3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯胺(1g,3.54mmol,54.7％):¹hnmr(400mhz,cd3od)δ6.53(d,j＝16.8hz,2h),6.38(s,1h),4.05(t,j＝5.6hz,2h),2.75-2.70(m,2h),2.35-2.32(m,6h)；es-lcmsm/z249.1(m+h)。

步驟3：n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺

在27℃下，在n2氣氛下，向2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(400mg,0.972mmol)和3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯胺(241mg,0.972mmol)在吡啶(8ml)中的溶液中加入(4ml,0.972mmol)。在27℃下，攪拌該混合物30分鐘。lcms顯示反應(yīng)完成。然后，將該混合物置于冰(1g)中。將該混合物濃縮成殘余物，通過制備tlc(dcm/meoh＝10:1,rf＝0.6)純化，得到淺黃色固體的n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺(300mg,0.421mmol,43.3％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.96(s,1h),7.75-7.68(m,1h),7.52(s,1h),7.38(d,j＝8.4hz,2h),7.32-7.24(m,3h),7.05(s,1h),6.92(d,j＝8.6hz,2h),6.45(s,1h),5.27(s,2h),4.43-4.36(m,2h),4.12(q,j＝6.8hz,2h),3.83(s,2h),3.82-3.77(m,3h),3.60-3.51(m,2h),2.93(s,6h),1.37(t,j＝6.9hz,3h)；es-lcmsm/z642.2(m+h)。

步驟4：n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺

向n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基芐基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺(300mg,0.468mmol)在meoh(10ml)中的懸浮液中加入pd/c(49.8mg,10％)。在25℃下，在h2氣氛下氫化該混合物3小時(shí)。然后，將反應(yīng)物過濾并濃縮成殘余物，通過制備hplc(儀器：gilsongx281/column:gemini150*25mm*5um/流動相a：h2o(0.05％氨水溶液)/流動相b：mecn/梯度:40-70(b％)/流速25ml/min/運(yùn)行時(shí)間:10min)純化，得到白色固體的n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺(54.34mg,0.104mmol,22.2％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.52(d,j＝9.9hz,2h),7.43-7.31(m,2h),7.27-7.17(m,2h),6.95(s,1h),5.99(s,1h),4.21-4.04(m,4h),3.80(s,2h),2.79(t,j＝5.3hz,2h),2.35(s,6h),1.38(t,j＝7.1hz,3h)；es-lcmsm/z522.2(m+h)。

實(shí)施例3：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽，水合物1

在23℃下，攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(350mg)在8.4ml的丙酮：水(9:1,v/v)中的懸浮液15分鐘。加入hcl(5m水溶液，1.0當(dāng)量)，并將樣品加熱至40℃。攪拌樣品，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)24小時(shí)，然后在20℃下攪拌0.5小時(shí)。通過真空過濾分離固體，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小時(shí)，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。

可替代的方法將n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽、脫水物(500mg)在水(12ml)中的漿液于40℃和5℃之間的溫度循環(huán)2天。通過過濾收集樣品，并干燥，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。

該物質(zhì)(式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1)的x射線粉末衍射(xrpd)圖案顯示在圖1中，衍射角和d-間距的概述在下表1中給出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射計(jì)于si零-背景晶片上進(jìn)行的。采集條件包括∶cukα射線，發(fā)生器電壓∶45kv，發(fā)生器電流：40ma，步距：0.02°2θ。

表i

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上記錄標(biāo)題化合物的拉曼光譜，4cm^-1分辨率，采用來自nd:yvo4激光的激發(fā)波長(λ＝1064nm)。該物質(zhì)的拉曼光譜顯示在圖2中，觀察到的主要峰位于455.6、581.0、697.7、773.5、809.3、951.5、999.3、1029.7、1109.3、1172.1、1247.8、1282.4、1334.7、1361.6、1461.3、1531.6、1626.3、1677.7、2902.7、2951.6和3032.8cm^-1。

在40ml/minn2吹掃下，在裝有自動采樣器和冷凍冷卻系統(tǒng)的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上記錄標(biāo)題化合物的差示掃描量熱法(dsc)熱分析圖，并顯示在圖3中。在卷邊鋁盤(crimpedaluminumpan)中，使用15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的dsc熱分析圖顯示第一次吸熱具有約32℃的起始溫度，約74℃的峰溫度和44.07j/g的焓，隨后的第二次吸熱具有約158℃的起始溫度，約173℃的峰溫度和55.24j/g的焓。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到吸熱的起始溫度、峰溫度和焓可能根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上記錄標(biāo)題化合物的熱重量分析(tga)熱分析圖，并顯示在圖4中。以40ml/minn2氣流和15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物1的tga熱分析圖顯示，在最終熱分解之前觀察到兩個(gè)步驟的重量損失事件。第一次重量損失事件發(fā)生在30℃至100℃的溫度范圍，重量損失1.52％。第二次重量損失事件發(fā)生在100℃至200℃的溫度范圍，重量損失2.57％。

實(shí)施例4：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽，水合物2

攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽水合物1(39.1mg)在1ml的丙酮：水(9:1，v/v)中的懸浮液，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)3天。然后，在室溫下蒸發(fā)濾液七天，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。

該物質(zhì)(式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2)的x射線粉末衍射(xrpd)圖案顯示在圖5中，衍射角和d-間距的概述在下表2中給出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射計(jì)于si零-背景晶片上進(jìn)行的。采集條件包括∶cukα射線，發(fā)生器電壓∶45kv，發(fā)生器電流：40ma，步距：0.02°2θ。

表ii

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上記錄標(biāo)題化合物的拉曼光譜，4cm-1分辨率，采用來自nd:yvo4激光的激發(fā)波長(λ＝1064nm)。該物質(zhì)的拉曼光譜顯示在圖6中，觀察到的主要峰位于455.3、588.2、699.4、734.2、775.3、806.8、884.7、948.6、1000.0、1033.3、1112.3、1180.6、1247.3、1269.2、1282.5、1331.8、1365.7、1424.7、1466.3、1530.0、1549.9、1569.7、1627.3、1683.8、2901.8、2946.4和3044.2cm^-1。

在40ml/minn2吹掃下，在裝有自動采樣器和冷凍冷卻系統(tǒng)的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上記錄標(biāo)題化合物的差示掃描量熱法(dsc)熱分析圖，并顯示在圖7中。在卷邊鋁盤中，使用15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的dsc熱分析圖顯示，第一次吸熱具有約66℃的起始溫度，約82℃的峰溫度和26.177j/g的焓，隨后的第二次吸熱具有約166℃的起始溫度，約181℃的峰溫度和65.71j/g的焓。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到吸熱的起始溫度、峰溫度和焓可能根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上記錄標(biāo)題化合物的熱重量分析(tga)熱分析圖，并顯示在圖8中。以40ml/minn2氣流和15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的鹽酸鹽的水合物2的tga熱分析圖顯示，在最終熱分解之前觀察到兩個(gè)步驟的重量損失事件。第一次重量損失事件發(fā)生在30℃至100℃的溫度范圍，重量損失2.43％。第二次重量損失事件發(fā)生在100℃至220℃的溫度范圍，重量損失3.29％。

實(shí)施例5：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽，無水物

攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺鹽酸鹽水合物1(500mg)在12.5ml的etoh中的漿液，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)1天。通過過濾收集樣品并風(fēng)干至少1小時(shí)，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。

該物質(zhì)(式(i)的化合物的無水鹽酸鹽)的x射線粉末衍射(xrpd)圖案顯示在圖9中，衍射角和d-間距的概述在下表iii中給出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertprodiffractometer于si零-背景晶片上進(jìn)行的。采集條件包括∶cukα射線，發(fā)生器電壓∶45kv，發(fā)生器電流：40ma，步距：0.02°2θ。

表iii

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上記錄標(biāo)題化合物的拉曼光譜，4cm-1分辨率，采用來自nd:yvo4激光的激發(fā)波長(λ＝1064nm)。該物質(zhì)的拉曼光譜顯示在圖10中，觀察到的主要峰位于418.4、453.5、575.3、635.8、699.3、771.0、782.0、805.0、863.9、893.8、940.5、974.2、997.9、1058.1、1115.8、1190.2、1245.9、1272.8、1299.2、1328.5、1355.7、1406.8、1433.1、1462.1、1489.0、1511.0、1546.3、1562.1、1614.1、1625.9、1666.7、1695.0、2921.9、2950.2、2986.2、3036.1、3075.0和3095.0cm^-1。

在40ml/minn2吹掃下，在裝有自動采樣器和冷凍冷卻系統(tǒng)的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上記錄標(biāo)題化合物的差示掃描量熱法(dsc)熱分析圖，并顯示在圖11中。在卷邊鋁盤中，使用15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的dsc熱分析圖顯示尖吸熱峰(sharpendotherm)具有256.44℃的起始溫度，約258.48℃的峰溫度和128.0j/g的焓。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到吸熱的起始溫度、峰溫度和焓可能根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化。在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上記錄標(biāo)題化合物的熱重量分析(tga)熱分析圖，并顯示在圖12中。以40ml/minn2氣流和15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的無水鹽酸鹽的tga熱分析圖顯示在25℃至150℃的溫度范圍的可忽略的重量損失和267.33℃的熱分解起始溫度。實(shí)施例6：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽

在23℃下，攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(353.1mg)在8.4ml的丙酮中的懸浮液15分鐘。加入l-天門冬氨酸(純度99％，85.1mg，粉末，1.0當(dāng)量)，并將樣品加熱至40℃，然后用n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天門冬氨酸鹽作為晶種結(jié)晶。攪拌樣品，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)6小時(shí)，然后在20℃下攪拌0.5小時(shí)。通過真空過濾分離固體，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小時(shí)，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。¹hnmr分析(500mhz,dmso-d6)指示1:1的酸：游離堿化學(xué)計(jì)量。

晶種制備

在23℃下，攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(25mg)在0.6ml的丙酮中的懸浮液30分鐘。加入l-天門冬氨酸(6.1mg)，并將樣品加熱至40℃。攪拌樣品，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)48小時(shí)，然后在20℃下攪拌24小時(shí)，之后在4℃下攪拌24小時(shí)。通過真空過濾分離固體并干燥，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。

該物質(zhì)(式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽)的x射線粉末衍射(xrpd)圖案顯示在圖13中，衍射角和d-間距的概述在下表iv中給出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射計(jì)于si零-背景晶片上進(jìn)行的。采集條件包括∶cukα射線，發(fā)生器電壓∶45kv，發(fā)生器電流：40ma，步距：0.02°2θ。

表iv

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上記錄標(biāo)題化合物的拉曼光譜，4cm-1分辨率，采用來自nd:yvo4激光的激發(fā)波長(λ＝1064nm)。該物質(zhì)的拉曼光譜顯示在圖14中，觀察到的主要峰位于452.2、573.8、690.5、770.0、806.8、999.6、1036.5、1106.3、1162.4、1236.9、1274.1、1332.1、1363.6、1470.7、1487.4、1529.5、1627.1、1704.6、2917.9和3072.7cm^-1。

在40ml/minn2吹掃下，在裝有自動采樣器和冷凍冷卻系統(tǒng)的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上記錄標(biāo)題化合物的差示掃描量熱法(dsc)熱分析圖，并顯示在圖15中。在卷邊鋁盤中，使用15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的dsc熱分析圖顯示尖吸熱峰，具有220.62℃的起始溫度，約223.048℃的峰溫度和75.76j/g的焓。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到吸熱的起始溫度、峰溫度和焓可能根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上記錄標(biāo)題化合物的熱重量分析(tga)熱分析圖，并顯示在圖16中。以40ml/minn2氣流和15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的天門冬氨酸鹽的tga熱分析圖顯示在25℃至150℃的溫度范圍的可忽略的重量損失和240.39℃的熱分解起始溫度。實(shí)施例7：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽

在23℃下，攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(350mg)在8.4ml的丙酮中的懸浮液15分鐘。加入馬尿酸(純度98％，117.3mg，粉末，1.0當(dāng)量)，并將樣品加熱至40℃，然后用n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺馬尿酸鹽作為晶種結(jié)晶。攪拌樣品，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)6小時(shí)，然后在20℃下攪拌0.5小時(shí)。通過真空過濾分離固體，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小時(shí)，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。¹hnmr分析(500mhz,dmso-d6)指示1:1的酸：游離堿化學(xué)計(jì)量。

晶種制備

在23℃下，攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(25mg)在0.6ml的丙酮中的懸浮液30分鐘。加入馬尿酸(8.4mg)，并將樣品加熱至40℃。攪拌樣品，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)48小時(shí)，然后在20℃下攪拌24小時(shí)，之后在4℃下攪拌24小時(shí)。通過真空過濾分離固體并干燥，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。

該物質(zhì)(式(i)的化合物的馬尿酸鹽)的x射線粉末衍射(xrpd)圖案顯示在圖17中，衍射角和d-間距的概述在下表v中給出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射計(jì)于si零-背景晶片上進(jìn)行的。采集條件包括∶cukα射線，發(fā)生器電壓∶45kv，發(fā)生器電流：40ma，步距：0.02°2θ。

表v

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上記錄標(biāo)題化合物的拉曼光譜，4cm-1分辨率，采用來自nd:yvo4激光的激發(fā)波長(λ＝1064nm)。該物質(zhì)的拉曼光譜顯示在圖18中，觀察到的主要峰位于556.6、618.1、694.0、771.4、809.0、916.5、997.2、1041.9、1108.4、1235.8、1272.2、1335.1、1366.2、1466.6、1537.0、1575.4、1601.4、1630.2、1695.0、2943.8和3071.4cm^-1。

在40ml/minn2吹掃下，在裝有自動采樣器和冷凍冷卻系統(tǒng)的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上記錄標(biāo)題化合物的差示掃描量熱法(dsc)熱分析圖，并顯示在圖19中。在卷邊鋁盤中，使用15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的馬尿酸鹽的dsc熱分析圖顯示尖吸熱峰，具有232.10℃的起始溫度，約233.32℃的峰溫度和123.1j/g的焓。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到吸熱的起始溫度、峰溫度和焓可能根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上記錄標(biāo)題化合物的熱重量分析(tga)熱分析圖，并顯示在圖20中。以40ml/minn2氣流和15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的馬尿酸鹽的tga熱分析圖顯示在25℃至150℃的溫度范圍的可忽略的重量損失和245.70℃的熱分解起始溫度。

實(shí)施例8：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽

在23℃下，攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(352mg)在8.4ml的丙酮中的懸浮液15分鐘。加入磷酸(3.0m水溶液，1.0當(dāng)量)，并將樣品加熱至40℃，然后用n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸鹽作為晶種結(jié)晶。攪拌樣品，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)6小時(shí)，然后在20℃下攪拌0.5小時(shí)。通過真空過濾分離固體，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小時(shí)，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。感應(yīng)耦合等離子體原子發(fā)射光譜指示1:1的酸：游離堿化學(xué)計(jì)量。

晶種制備

在23℃下，攪拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(25mg)在0.6ml的丙酮中的懸浮液30分鐘。加入磷酸(3.0m水溶液，1.0當(dāng)量)，并將樣品加熱至40℃。攪拌樣品，并在40℃和5℃之間的溫度循環(huán)48小時(shí)，然后在20℃下攪拌24小時(shí)，之后在4℃下攪拌24小時(shí)。通過真空過濾分離固體并干燥，得到呈結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。

該物質(zhì)(式(i)的化合物的磷酸鹽)的x射線粉末衍射(xrpd)圖案顯示在圖21中，衍射角和d-間距的概述在下表vi中給出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射計(jì)于si零-背景晶片上進(jìn)行的。采集條件包括∶cukα射線，發(fā)生器電壓∶45kv，發(fā)生器電流：40ma，步距：0.02°2θ。

表vi

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上記錄標(biāo)題化合物的拉曼光譜，4cm-1分辨率，采用來自nd:yvo4激光的激發(fā)波長(λ＝1064nm)。該物質(zhì)的拉曼光譜顯示在圖22中，觀察到的主要峰位于460.6、484.5、529.3、577.0、637.8、696.3、731.9、773.1、786.2、805.7、866.9、888.7、1002.3、1035.6、1187.1、1242.7、1275.9、1296.0、1326.2、1357.6、1375.1、1441.7、1466.0、1510.1、1531.6、1580.3、1624.5、1698.2、2936.4、2964.1和3068.6cm^-1。

在40ml/minn2吹掃下，在裝有自動采樣器和冷凍冷卻系統(tǒng)的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上記錄標(biāo)題化合物的差示掃描量熱法(dsc)熱分析圖，并顯示在圖23中。在卷邊鋁盤中，使用15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的磷酸鹽的dsc熱分析圖顯示尖吸熱峰，具有235.69℃的起始溫度，約242.24℃的峰溫度和135.3j/g的焓。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到吸熱的起始溫度、峰溫度和焓可能根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件而變化

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上記錄標(biāo)題化合物的熱重量分析(tga)熱分析圖，并顯示在圖24中。以40ml/minn2氣流和15℃/min的加熱速率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。式(i)的化合物的磷酸鹽的tga熱分析圖顯示在25℃至150℃的溫度范圍的可忽略的重量損失和237.30℃的熱分解起始溫度。

生物分析

在ret激酶的酶分析、基于細(xì)胞的機(jī)理分析和基于細(xì)胞的增殖分析中檢測本發(fā)明的化合物的ret激酶抑制活性。

ret激酶的酶分析

使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，將人類ret激酶細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域(登記號np_000314.1的氨基酸658-1114)表達(dá)為n-末端gst-融合蛋白。使用谷胱甘肽瓊脂糖色譜純化gst-ret。以總體積10ul與遞增濃度的ret激酶抑制劑作為單峰在384孔模式，如下進(jìn)行ret激酶的酶分析：通過如下制備ret抑制劑化合物：將100nl不同濃度的ret抑制劑加入到384-孔板中。將5μl/孔的2x酶混合物(50mmhepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)；1mmchaps(3-[(3-膽酰胺丙基(cholamidopropyl))二甲基銨基(ammonio)]-1-丙磺酸鹽)；0.1mg/mlbsa(牛血清白蛋白)；1mmdtt(二硫蘇糖醇)；0.2nmret激酶)加入到該384孔板中，并在23℃下培養(yǎng)30分鐘。加入5μl/孔的2x底物混合物(50mmhepes；1mmchaps；0.1mg/mlbsa；20μm三磷腺苷；20mmmgcl2和1mm生物素化的肽底物)，并在23℃下培養(yǎng)1小時(shí)。在23℃下，培養(yǎng)10μl/孔2x停止/檢測混合物(50mmhepes；0.1％bsa；800mm氟化鉀；50mmedta(乙二胺四乙酸)；銪穴狀化合物標(biāo)記的抗-磷酸酪氨酸抗體的200x稀釋物；62.5nm鏈親和素-xl665)1小時(shí)，并在homogenoustime-resolvedfluorescence讀數(shù)機(jī)上讀數(shù)。使用graphpadprism將ic50擬合到s形劑量相應(yīng)曲線。

ret激酶基于細(xì)胞的機(jī)理分析

在基于細(xì)胞的分析中，檢測本發(fā)明的化合物抑制組成型ret激酶磷酸化能力的功效。將tt細(xì)胞(atcccrl-1803)，一種具有組成型活化ret激酶的髓樣甲狀腺癌細(xì)胞系，保持在37℃下的150cm²皿中5％二氧化碳中的f12kaighn’s培養(yǎng)基、10％胎牛血清、1xglutamax、1x非必需氨基酸、1xpen/strep抗生素中。將1.0e5tt細(xì)胞/孔鋪板在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，并使其粘附過夜。在37℃下，在5％二氧化碳中，用不同濃度的ret抑制劑化合物處理tt細(xì)胞，用冰冷的pbs(磷酸鹽緩沖鹽水)洗滌并通過加入200μl的25mmtrishclph7.5；2mmedta；150mmnacl；1％脫氧膽酸鈉；1％tritonx-100；50mmβ甘油磷酸鈉；1mm原釩酸鈉；1x磷酸酶抑制劑混合物#_2(sigma#_p5726)；1x磷酸酶抑制劑混合物#_3(sigma#_p0044)和1x完全小型無edta蛋白酶抑制劑混合物(roche#_4693159001)裂解，在-80℃下培養(yǎng)10分鐘，并在冰上融解。在4℃下，將100μl的tt細(xì)胞裂解產(chǎn)物加入到96孔板中過夜，其在4℃過夜已經(jīng)覆蓋1xpbs；0.05％吐溫-20；1％牛血清白蛋白阻斷的兔子抗-ret抗體(cellsignaling#_7032)。將該板用200μl的1xpbs沖洗4x；加入0.05％吐溫-20，然后加入100μl的抗-磷酸酪氨酸檢測抗體(cellsignaling#_7034)的1:1,000稀釋液，并在37℃下培養(yǎng)1小時(shí)。將所述板用200μl的1xpbs沖洗4x；加入0.05％tween-20，然后加入100μl的抗-小鼠免疫球蛋白辣根過氧化物酶結(jié)合抗體(cellsignaling#_7034)的1:1,000稀釋液，并在37℃下培養(yǎng)30分鐘。將所述板用200μl的1xpbs沖洗4x；加入0.05％吐溫-20、100ml的tmb(3,3',5,5”-四甲基聯(lián)苯胺)底物(cellsignaling#_7004)，并在37℃下培養(yǎng)10分鐘，加入100μl的終止液(cellsignaling#_7002)，并在分光光度計(jì)上于450nm讀取吸光度。使用graphpadprism將ic50擬合到s形劑量響應(yīng)曲線。

ret激酶基于細(xì)胞的增殖分析

檢測本發(fā)明的化合物抑制細(xì)胞增殖和細(xì)胞生存力的能力的功效。將tt細(xì)胞(atcccrl-1803)，一種具有組成型活化ret激酶的髓樣甲狀腺癌細(xì)胞系，保持在37℃下的150cm²皿中5％二氧化碳中的f12kaighn's培養(yǎng)基、10％胎牛血清、1xglutamax、1x非必需氨基酸、1xpen/strep抗生素中。將在50μl培養(yǎng)基中的6.0e3tt細(xì)胞/孔加入到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，并使其粘附過夜。將50μl的連續(xù)稀釋的ret抑制劑化合物加入到含有培養(yǎng)的tt細(xì)胞的96孔板中，并在37℃下，在5％二氧化碳中培養(yǎng)八天。加入50μl的celltiter-glo(promega#_g-7573)，并在攪拌器上混合內(nèi)含物1分鐘，接著在23℃下避光10分鐘，并通過envision(perkinelmer)讀取發(fā)光。使用graphpadprism將ic50擬合到s形劑量響應(yīng)曲線。

生物學(xué)數(shù)據(jù)

在上述ret分析中檢測了本發(fā)明的示例性化合物，發(fā)現(xiàn)所述示例性化合物為具有ic50＜10μm的ret抑制劑。所檢測的特定實(shí)施例的數(shù)據(jù)列在如下表1中：+＝10μm>ic50>100nm；++＝100nm≥ic50>10nm；+++＝ic50≤10nm.

表1

體內(nèi)結(jié)腸超敏模型

在結(jié)腸超敏的體內(nèi)模型中評價(jià)ret激酶抑制劑化合物的功效(hoffman,j.m.,etal.,gastroenterology,2012,142:844-854)。