本發(fā)明涉及酶制品領域。具體地，本發(fā)明涉及一種固定化脂肪酶顆粒及其制備方法。
背景技術：
：脂肪酶(lipase，ec3.1.1.3)全稱為三?；视退饷?。來自不同微生物的脂肪酶還具有酯化、酯交換、醇解、消旋體拆分等功能，因而，廣泛地應用于包括食品、藥品、日化等的各個領域。由于難以分離，并且不能重復使用，液體脂肪酶在工業(yè)上的應用有限。為此，已經(jīng)通過固定化技術，將酶賦形于具有一定物理性質(zhì)的載體之上，從而便于分離及重復利用。目前酶固定化技術主要分為兩類：無機或有機高分子粉末材料，有機高分子樹脂。其中高分子樹脂載體形狀規(guī)則，物理性質(zhì)可控，被廣泛用于酶的固定化技術中。美國專利申請公開us4818695a描述了一種固定化脂肪酶，其中將脂肪酶水溶液與顆粒狀的大孔弱陰離子交換樹脂混合，回收并干燥固定有脂肪酶的樹脂。然而，這種固定化酶的造價昂貴，限制了其在對成本要求較高的行業(yè)中的應用。美國專利申請公開us5342768a涉及一種顆粒狀的固定化微生物脂肪酶，其中，采用粒徑分布在200-1000微米的無機二氧化硅或硅酸鹽為載體，和液體脂肪酶進行混合，吸附，干燥，得到了水解活力和酯化活力均有提高的固定化酶產(chǎn)品。然而，這種固定化酶顆粒較小，比表面積和孔徑均較小，在工業(yè)應用中存在傳質(zhì)限制。美國專利申請公開us5776741a描述了一種固定化酶，其中，以無機二氧化硅為載體，將酶液和粘合劑引入制粒機中通過高速旋轉(zhuǎn)粘合，將載體，酶液，粘合劑制成200-800微米的顆粒，應用在油脂酯交換或者酯化反應中。然而，高速混合制粒的方法制得的顆粒結(jié)構(gòu)松散，酶蛋白容易脫落。中國專利公開cn101023167b描述了一種脂肪酶粉末，其中，將脂肪酶和碳原子數(shù)為8-12的脂肪酸，其醇酯以及它們的混合物的至少一種進行造粒，以提高脂肪酶的活性。然而，在實際應用中，這種脂肪酶粉末因含大量的脂肪酸和脂肪酸酯，在高溫反應中容易溶于產(chǎn)物中，導致酶不能重復利用，提高了生產(chǎn)成本。與有機高分子樹脂相比，無機載體如二氧化硅，硅酸鹽，硅藻土，沸石等粉末載體價格便宜，可用制粒的方法將其制成特定性質(zhì)和大小的顆粒便于工業(yè)應用。如丹麥諾維信公司的固定化脂肪酶產(chǎn)品lipozymetlim，其中，將二氧化硅和酶混合在制粒機中進行粒子化，得到的產(chǎn)品廣泛用于油脂工業(yè)中。然而，此類產(chǎn)品具有酶活穩(wěn)定性差，傳質(zhì)限制，容易破碎等問題。目前本領域中還需要一種以無機粉末載體制備的成本低，無傳質(zhì)限制，酶活性穩(wěn)定的固定化酶產(chǎn)品。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明人經(jīng)過研究開發(fā)出一種固定化脂肪酶顆粒，其酯交換效率提高，酶活性穩(wěn)定，成本效益提高，且可以反復利用，從而解決了上述技術問題。在第一方面，本發(fā)明提供了一種固定化脂肪酶顆粒，其特征在于包含5-25%重量的油，優(yōu)選10-15%重量的油。根據(jù)本發(fā)明，所述油以微小油滴或粉末形式存在于所述固定化脂肪酶顆粒中。在一個具體實施方式中，所述固定化脂肪酶顆粒包含：油5-25%重量，脂肪酶蛋白1-8%重量，其它組分含量為無機載體40-90%重量，和/或麥芽糊精10-40%重量，和/或粘合劑0.5-5%重量，和/或水1-15%重量。優(yōu)選地，所述固定化脂肪酶顆粒包含：油10-15%重量，脂肪酶蛋白2-5%重量，其它組分含量為無機載體65-80%重量，和/或麥芽糊精15-20%重量，和/或粘合劑1-3%重量，和/或水5-10%重量。在一個具體實施方式中，所述固定化脂肪酶顆粒具有90-120m2/g的比表面積。在一個具體實施方式中，所述固定化脂肪酶顆粒具有50-80nm的孔徑。在一個具體實施方式中，所述無機載體選自：硅膠，硅藻土，硅酸鹽，堿式碳酸鎂，白炭黑，氧化鋁和沸石，但不限于此。在一個具體實施方式中，所述無機載體的平均粒徑為10~80μm。優(yōu)選地，可用于本發(fā)明的無機載體的平均粒徑為20~60μm。在一個具體實施方式中，所述油包含甘油三酯，甘油二酯，甘油單酯中任一種或多種，或其混合物。優(yōu)選地，所述油為植物油，其選自大豆油，葵籽油，菜籽油，棕櫚油中任一種或多種，或其混合物。更優(yōu)選地，所述油為大豆油、棕櫚油，或其混合物。在一個具體實施方式中，所述脂肪酶來自疏棉狀嗜熱絲孢菌(thermomyceslanuginose)、米黑根毛霉(rhizomucormiehei)、米黑毛霉(mucormiehei)、假單胞菌(pseudomonassp.)、根霉(rhizopussp.)、青霉(penicilliumsp.)、黑曲霉(aspergillusniguer)或伯克霍爾德氏菌(burkholderiasp.)。在第二方面，本發(fā)明還提供了一種制備本發(fā)明的第一方面的固定化脂肪酶顆粒的方法，包括：將無機粉末載體、麥芽糊精、脂肪酶、粘合劑、水，和油混合，制成顆粒；擠壓；整粒；和干燥。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法所制備的所述固定化脂肪酶顆粒，以及所述固定化脂肪酶顆粒用于制備食品、藥品、日化產(chǎn)品的用途。以下將對本發(fā)明的以上和其他特征進行進一步的詳細描述。針對具體實施方式描述的特征，也可以用于本發(fā)明的其他具體實施方式。固定化脂肪酶顆粒本發(fā)明提供了一種固定化脂肪酶顆粒，其包含吸附在無機載體上的固定化脂肪酶，并且還包含分布于該固定化脂肪酶產(chǎn)品中的油脂，使得固定化脂肪酶產(chǎn)品的比表面積和孔徑得到提高，并且酯交換活力和穩(wěn)定性得到了大幅度改善。根據(jù)本發(fā)明，按照重量計，所述固定化脂肪酶顆粒包含3-25%重量的油，例如3-20%重量，4-20%重量，5-15%重量，6-10%重量的油，優(yōu)選5-10%重量的油。根據(jù)本發(fā)明，按照重量計，所述固定化脂肪酶顆粒包含無機載體40-90%重量，麥芽糊精10-40%重量，脂肪酶蛋白1-8%重量，粘合劑0.5-5%重量，水1-15%重量，和油5-25%重量。優(yōu)選地，所述固定化脂肪酶顆粒包含：無機載體65-80%重量，麥芽糊精15-20%重量，脂肪酶蛋白2-5%重量，粘合劑1-3%重量，水5-10%重量，和油10-15%重量。在本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒中，油脂以液體或粉末的顆粒形式分散在載體之中。更具體地，所述油脂以分散液滴或粉末狀態(tài)存在于無機載體之中。根據(jù)本發(fā)明，所述油的液滴或粉末的粒徑在20nm-2μm之間。以微小粒徑存在的油脂不僅提高了脂肪酶的催化活性，而且還有助于改進固定化脂肪酶顆粒的結(jié)構(gòu)以及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。根據(jù)本發(fā)明，所述固定化脂肪酶顆粒為粒徑在200-600μm范圍的顆粒。根據(jù)本發(fā)明，所述固定化脂肪酶顆粒具有在90-120m2/g的范圍的比表面積。根據(jù)本發(fā)明，所述固定化脂肪酶顆粒具有在50-80nm的范圍的孔徑。在上述比表面積和/或孔徑的范圍內(nèi)，所述固定化脂肪酶顆粒中的脂肪酶可以與底物充分接觸，從而減少了傳質(zhì)限制，同時使所述固定化脂肪酶顆粒保持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒具有改進的傳質(zhì)性能，隨機酯交換酶活性高并穩(wěn)定。脂肪酶在本發(fā)明中使用的術語“脂肪酶”是指催化油脂(脂質(zhì))水解的一類酶，根據(jù)國際生物化學會酶學委員會的分類為ec3.1.1.3。用于本發(fā)明的脂肪酶可以是各種動物、植物和微生物來源的脂肪酶。優(yōu)選地，所述脂肪酶是來自微生物的脂肪酶，例如，來自疏棉狀嗜熱絲孢菌(thermomyceslanuginose)、米黑根毛霉(rhizomucormiehei)、米黑毛霉(mucormiehei)、假單胞菌(pseudomonassp.)、根霉(rhizopussp.)、青霉(penicilliumsp.)、黑曲霉(aspergillusniguer)及伯克霍爾德氏菌(burkholderiasp.)等的脂肪酶，但不限于此?？捎糜诒景l(fā)明的脂肪酶的制備方法是本領域中已知的。例如，可以通過合適的條件下，培養(yǎng)產(chǎn)生所述脂肪酶的微生物而制備。也可以使用經(jīng)過修飾的脂肪酶，例如，經(jīng)過化學修飾的脂肪酶，以及蛋白質(zhì)工程的脂肪酶突變體，或基因工程菌產(chǎn)生的脂肪酶等。在本發(fā)明中，可以使用粉末形式或液體形式的脂肪酶。例如，可以直接使用市售的脂肪酶溶液，例如諾維信公司的lipozymetl100l、palatase20000l。也可以使用脂肪酶粉末，經(jīng)復溶獲得脂肪酶液。在本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒中包含脂肪酶?；谒龉潭ɑ久割w粒的總重量，所述脂肪酶蛋白的含量為1-8%重量，優(yōu)選2-5%重量。關于脂肪酶的活性，例如酯交換活性的測定方法也是本領域中已知的。例如，可以參見實施例10中記載的方案。無機載體在本發(fā)明中使用的術語“無機載體”是指用于固定脂肪酶的無機粉末材料。與有機高分子樹脂相比，無機載體如二氧化硅，硅酸鹽，硅藻土，沸石等粉末載體價格便宜，可用制粒的方法將其制成特定性質(zhì)和大小的顆粒便于工業(yè)應用。用于本發(fā)明的無機載體可以選自不引起脂肪酶失活或變性的任何吸附材料，例如，硅膠、硅藻土、硅酸鹽、堿式碳酸鎂、白炭黑、氧化鋁、多孔陶瓷、多孔玻璃和沸石，但不限于此。在本發(fā)明中，所述無機載體的平均粒徑為10~80μm，優(yōu)選平均粒徑為20~60μm。在本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒中包含無機載體。基于所述固定化脂肪酶顆粒的總重量，所述無機載體的含量為40-90%重量，優(yōu)選65-80%重量。粘合劑本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒包含粘合劑?？捎糜诠潭ɑ腹に囍械恼澈蟿┦潜绢I域中已知的，包括，羧甲基纖維素鈉，羥丙基甲基纖維素鈉，甲基纖維素鈉，羥乙基纖維素鈉，明膠，聚乙烯吡咯烷酮，但不限于此。在本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒中，基于所述固定化脂肪酶顆粒的總重量，所述粘合劑的含量為0.5-5%重量，優(yōu)選1-3%重量。麥芽糊精在本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒中包含麥芽糊精。麥芽糊精在本發(fā)明中起保護脂肪酶活力的作用?；谒龉潭ɑ久割w粒的總重量，麥芽糊精的含量為10-40%重量，優(yōu)選15-20%重量。油/油脂在本發(fā)明中使用的術語“油”或“油脂”是指甘油酯，包括甘油三酯、甘油二酯、和/或甘油一酯中的任一種或多種，或其混合物。根據(jù)本發(fā)明，在固定化脂肪酶顆粒中加入油脂，可以提高所述固定化脂肪酶顆粒的比表面積和孔徑，從而提高固定化脂肪酶顆粒的催化效率，增加脂肪酶的活性和穩(wěn)定性。用于本發(fā)明的油可以是各種動物、植物和微生物來源的油。優(yōu)選地，所述油是植物油，例如大豆油、葵花籽油、菜籽油、棕櫚油、花生油、玉米油、稻米油、橄欖油、油茶籽油、亞麻籽油、葡萄籽油、核桃油、杏仁油等中的任一種或多種，或其混合物。優(yōu)選地，所述油是大豆油，棕櫚油，或其混合物。在本發(fā)明中，可以使用在常溫下為液體或固體的油。如果油在常溫下是液體，則將其添加到酶液中剪切成乳液形式。如果油常溫是固體，則將其處理成粉末形式添加到無機載體中混勻，也可將固體的油加熱融化，隨后進行加工。在具體實施方式中，將在常溫下為液體油或經(jīng)融化的油添加到水和/或脂肪酶和/或粘合劑和/或麥芽糊精中，隨后經(jīng)過高壓均質(zhì)或高速剪切制成混合液體，再將制備的混合液噴淋或滴入高速混合的無機載體中，制成顆粒。在其他的實施方式中，首先用研磨機或粉碎機將在常溫下為固體的油粉碎，隨后將粉碎的油粉末加入到無機載體中，噴淋或滴入水和/或脂肪酶和/或粘合劑和/或麥芽糊精的混合液體，使得油以乳液形式存在于無機載體中，按照常規(guī)制粒方式制成顆粒。在本發(fā)明的固定化脂肪酶顆粒中包含油?；谒龉潭ɑ久割w粒的總重量，所述油的含量為5-25%重量，優(yōu)選10-15%重量。制備方法本發(fā)明還提供了一種制備固定化脂肪酶顆粒的方法，包括：將無機載體、麥芽糊精、脂肪酶、粘合劑、水，和油混合，經(jīng)制成濕材；擠壓；整粒；和干燥。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在制備過程中添加油脂有助于改進固定化脂肪酶顆粒的結(jié)構(gòu)，能夠顯著改進所得的固定化脂肪酶顆粒的比表面積和孔徑，從而消除固定化脂肪酶產(chǎn)品的傳質(zhì)限制，提高固定化脂肪酶產(chǎn)品的催化效率。根據(jù)本發(fā)明，所述方法包括：將脂肪酶、麥芽糊精、粘合劑和水混合，隨后加入油，并均質(zhì)剪切獲得經(jīng)配制的酶液；將所述酶液噴灑到無機載體上經(jīng)濕法混合制粒獲得粒徑為200-600微米的濕材；對所述濕材進行擠壓造粒、拋丸和整粒；和將整粒所得的樣品顆粒干燥。對濕材進行擠壓造粒、拋丸和整粒等的方法和設備是本領域中已知的。例如，可用于所述濕法混合制粒的工藝和設備是本領域中已知的。例如，可以首先將無機載體加入高速混合制粒機(例如，ghl-7.5/5/2.5型高速混合制粒機，常州佳發(fā)制粒設備有限公司)中，攪拌混勻，將配制好的酶液噴淋添加到所述載體上，添加完成后繼續(xù)攪拌剪切直到成粒為止。根據(jù)本發(fā)明，在所述濕法混合制粒過程中，攪拌速度可以為100~800rpm，優(yōu)選200~600rpm，剪切速度可以為600~2000rpm，優(yōu)選1000~1500rpm。可用于所述擠壓造粒的工藝和設備是本領域中已知的，例如，可采用擠壓造粒機(例如，jzl-80實驗室擠壓造粒機，常州永昌制粒干燥設備有限公司)進行。根據(jù)本發(fā)明，在所述擠壓造粒過程中，擠壓造粒機的篩網(wǎng)孔徑可以為0.8mm，攪拌速度可以為10~50rpm。可用于所述拋丸的工藝和設備是本領域中已知的，例如，可采用球形拋丸機(例如，qzl-mini，常州佳發(fā)制粒設備有限公司)進行。根據(jù)本發(fā)明，在所述擠壓造粒過程中，球形拋丸機的圓盤轉(zhuǎn)速可以為500~1000rpm。關于本發(fā)明的制備方法的更詳細描述可參見下文記載的實施例。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在脂肪酶固定化的過程中加入油脂能夠顯著改進所得的固定化脂肪酶顆粒的比表面積和孔徑，從而消除固定化脂肪酶產(chǎn)品的傳質(zhì)限制，提高固定化脂肪酶產(chǎn)品的催化效率。本發(fā)明的固定化脂肪酶產(chǎn)品的傳質(zhì)限制降低，隨機酯交換酶活性提高，并且可以重復使用10次以上。按照本發(fā)明所述的方法制備的固定化脂肪酶顆?？梢源嬉后w脂肪酶或常規(guī)的固定化脂肪酶，用于制備食品、藥品、生物燃油、日化產(chǎn)品。例如，本發(fā)明的固定化脂肪酶可以用作廉價和便捷的催化劑以降解脂質(zhì)，從而用于洗滌材料中；并且可以作為生物催化劑將植物油轉(zhuǎn)化為燃料，從而用于能源工業(yè)中。本發(fā)明的固定化脂肪酶具有高且穩(wěn)定的酶促活性，能夠替代傳統(tǒng)催化劑用于生物燃料的加工，使加工過程更為安全且對環(huán)境友好。此外，本發(fā)明的固定化脂肪酶還可以用于精細化工領域，用于維a棕櫚酸酯、棕櫚酸異辛酯等產(chǎn)品的酶促合成，以及消旋混合物的酶促拆分等。通過參考以下非限定性實施例可更好地理解本發(fā)明，提供所述非限定性實施例作為本發(fā)明的示例。介紹以下實施例以更充分地說明本發(fā)明的實施方式，且決不應解釋為對本發(fā)明廣泛范圍的限制。具體實施方式實施例1將100mltl(thermomyceslanuginose)脂肪酶液(諾維信公司，商品名lipozymetl100l)，20g麥芽糊精(河南豫中生物科技有限公司)，1.5g羧甲基纖維素鈉(國藥試劑)，80ml水，混合均勻，加入10g大豆油(嘉里食品)，在均質(zhì)機(fluka)中剪切2min，備用。另取100g白炭黑(型號：5162q，邱博工程材料有限公司；平均粒徑50μm)，放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-7.5)，將配制好的酶液噴入制粒機中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，在型號為(jzl-80常州永昌制粒干燥設備有限公司)實驗室擠壓造粒機中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號qzlmini)中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例2——比較例將100mltl(thermomyceslanuginose)脂肪酶液(諾維信公司，商品名lipozymetl100l)，20g麥芽糊精(河南豫中生物科技有限公司)，1.5g羧甲基纖維素鈉，80ml水，混合均勻備用。另取100gzeofree白炭黑(型號：5162q，邱博工程材料有限公司；平均粒徑50μm)，放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-10)，將配制好的酶液噴入制粒機(型號qzlmini；常州佳發(fā)干燥設備公司)中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，在擠壓機中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例3將100mltl(thermomyceslanuginose)脂肪酶液，20g麥芽糊精(河南豫中生物科技有限公司)，1.5g羧甲基纖維素鈉，80ml水，混合均勻備用。另取120gaerosil200白炭黑(德固賽公司；平均粒徑30μm)和15g棕櫚硬脂粉末(嘉里特種油脂上海有限公司)放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-10)，將配制好的酶液噴入制粒機中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，擠壓機中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例4——比較例將100mltl(thermomyceslanuginose)脂肪酶液，20g麥芽糊精，1.5g羧甲基纖維素鈉，80ml水，混合均勻備用。另取120gaerosil200(德固賽公司；平均粒徑30μm)，白炭黑放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-10)，將配制好的酶液噴入制粒機中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，在擠壓機中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例5將100mltl(thermomyceslanuginose)脂肪酶液，20g麥芽糊精，1.5g羧甲基纖維素鈉，80ml水，混合均勻，加入10g葵花籽油(嘉里食品上海有限公司)，在均質(zhì)機中剪切2min，備用。另取100gf270白炭黑(益海佳木斯工廠；平均粒徑45μm)，放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-10)，將配制好的酶液噴入制粒機中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，在擠壓機中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例6——比較例將100mltl(thermomyceslanuginose)脂肪酶液，20g麥芽糊精，1.5g羧甲基纖維素鈉，80ml水，混合均勻備用。另取100gf270白炭黑(益海佳木斯工廠；平均粒徑45μm)，放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-10)，將配制好的酶液噴入制粒機中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，在擠壓機中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例7將100mlrml(rhizomucormiehei)脂肪酶液(諾維信公司；palatase20000l)，20g麥芽糊精，1.5g羧甲基纖維素鈉，80ml水，混合均勻，加入10g大豆油(嘉里食品化學)，在均質(zhì)機中剪切2min，備用。另取100gf270白炭黑(益海佳木斯工廠；平均粒徑45μm)放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-10)，將配制好的酶液噴入制粒機中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，在擠壓機中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例8——比較例將100mlrml(rhizomucormiehei)脂肪酶液(諾維信公司；palatase20000l)，20g麥芽糊精，1.5g羧甲基纖維素鈉，80ml水，混合均勻備用。另取100gf270白炭黑(益海佳木斯工廠；平均粒徑45μm)放入高速混合制粒機(常州佳發(fā)干燥設備公司；型號ghl-10)，將配制好的酶液噴入制粒機中。待顆粒變大為200-600微米時，取出濕材，在擠壓機(jzl-80，常州永昌制粒干燥設備有限公司)中進行擠壓。擠壓好的軟材送入拋丸機中進行整粒，將拋好的樣品放在通風的自然條件下干燥至水分含量8%重量以下。實施例9：比表面積和孔徑測試將按照實施例1-8所述制備的固定化酶顆粒置于在70℃大豆油中進行預處理，隨后，用異丙醇溶劑沖洗除去固定化酶顆粒表面上的油，置于通風櫥中干燥。按照bet法測試比表面積，孔徑。具體測試方法參見：李坤權(quán)等，“新型胺化介孔炭的制備及其對pb(ii)的吸附”，中國環(huán)境科學，2014,34(8):1985-1992。測試儀器：bet法比表面分析儀(北京貝士德儀器設備有限公司；型號：3h-2000bet-a)。實驗結(jié)果表1：比表面積、孔徑測試結(jié)果實施例12345678比表面積m2/g94.6158.92103.4762.8998.2863.29112.5469.43孔徑nm53.5127.4356.7932.4167.6129.7176.4737.51從上述數(shù)據(jù)可見，在同等條件下，通過本發(fā)明方法制備的固定化酶顆粒的比表面積和孔徑相對于比較例有顯著的改進。相對大的比表面積和孔徑在反應中可以減少傳質(zhì)限制，提高反應效率。實施例10：固定化酶的酯交換活力的測定采用精煉大豆油和極度氫化大豆油為底物(w/w73:27)進行固定化酶的酯交換活力的測定，其中脂肪酶和底物質(zhì)量比為1:20。使反應混合物在70℃反應30min。反應完畢后，取出產(chǎn)物測其在40℃的固體脂肪含量(sfc)。每次取出產(chǎn)物把酶留在反應器內(nèi)，再加入底物進行反應，重復5次。在40℃的sfc含量的測定方法：將裝有樣品的固體脂肪管分別放入100℃烘箱中，15min，隨后60℃水浴5min，0℃水浴60min，40℃水浴30min，然后將固體脂肪管置于核磁共振儀(德國布魯克公司；型號mq20)測其固體脂肪含量。酯交換活力(iun)的公式為(sfcblank-sfc樣品)/30*1260。sfcblank是指沒有經(jīng)過酶反應的底物油脂在40℃下的sfc值。sfc樣品指40℃下酶反應產(chǎn)物樣品的sfc值。表2：酯交換活力測定結(jié)果(單位：iun)實施例12345678第一批675467701648669430702487第三批628433668594638419654459第五批593369625571612374619410第七批571320589536570318593371第九批530281541490546283548332第11批497223480467501270511298通過酯交換活力測定結(jié)果可見，通過本發(fā)明方法制備的固定化酶顆粒的酯交換活力和穩(wěn)定性有了大幅度的提高，遠高于在制備過程中不存在油脂的固定化酶顆粒(例如，比較實施例2、4、6和8)的酯交換活力。當前第1頁12