本發(fā)明提供了一種具有調(diào)節(jié)表皮生長(zhǎng)因子受體(egfr)激酶活性的三嗪衍生物。具體而言，本發(fā)明涉及苯胺基-三嗪化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物或其鹽可通過(guò)調(diào)節(jié)某些突變形式的表皮生長(zhǎng)因子受體而用于治療或預(yù)防疾病或病癥。本發(fā)明還涉及包含所述化合物或其鹽的藥物組合物，以及使用所述化合物及其鹽治療由各種不同形式的egfr所介導(dǎo)的多種疾病的方法，包括非小細(xì)胞肺癌。

背景技術(shù)：

在抗癌藥物領(lǐng)域中，對(duì)于新的具有更好的活性/選擇性的抗癌化合物一直存在需求。已知egfr是erbb受體家族的跨膜蛋白酪氨酸激酶成員。erbb受體的同源二聚化和/或異源二聚化導(dǎo)致胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域中某些酪氨酸殘基的磷酸化，并且激活參與細(xì)胞增殖和生存的多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路。erbb家族信號(hào)傳導(dǎo)的失調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞增殖、侵入、轉(zhuǎn)移和血管生成，并且已在肺癌、頭頸部癌和乳腺癌等癌癥中有報(bào)道。因此，作為抗癌藥物開(kāi)發(fā)的靶點(diǎn)，靶向于egfr或erbb2的許多藥物目前在臨床上已得到應(yīng)用。例如，在新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(newenglandjournalofmedicine)，2008年第358期，1160-1174頁(yè)以及生物化學(xué)和生物物理研究通訊(biochemicalandbiophysicalresearchcommunications)，2004年第319卷，1-11頁(yè)中給出了對(duì)erbb受體信號(hào)傳導(dǎo)及其參與腫瘤發(fā)生的綜述。

但是，在實(shí)際的癌癥治療中存在egfr激活突變(例如l858r和dele746_a750)，例如，參見(jiàn)科學(xué)(science)，2004年第304期，1497-500頁(yè)和新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志，2004年第350期，2129-39頁(yè)。這些最普遍的egfr激活突變(l858r和dele746_a750)相對(duì)于野生型(wt)egfr而言，對(duì) 小分子酪氨酸激酶抑制劑(例如吉非替尼和厄洛替尼)的親和力增加、同時(shí)對(duì)三磷酸腺苷(atp)的親和力下降。最后，產(chǎn)生對(duì)吉非替尼或厄洛替尼治療的獲得性抗性，例如由于看門(mén)殘基t790m的突變。由于這種突變導(dǎo)致對(duì)靶向于egfr的現(xiàn)有藥物的抗性，本領(lǐng)域中仍然需要能抑制包括看門(mén)基因突變的egfr的新化合物。所述的新化合物應(yīng)當(dāng)相對(duì)于激活突變體形式的egfr(例如l858regfr突變體、或者dele746_a750突變體或exon19缺失egfr突變體)和/或抗性突變體形式的egfr(例如t790megfr突變體)而言，具有對(duì)野生型egfr的有利活性和/或選擇性。換言之，本領(lǐng)域需要對(duì)某些激活或抗性突變體形式的egfr顯示較高的抑制、同時(shí)對(duì)野生型egfr顯示相對(duì)較低的抑制的化合物，從而不僅能夠發(fā)揮抗癌效力，而且能夠降低與抑制野生型egfr相關(guān)的不良反應(yīng)和毒理學(xué)(例如皮疹和/或腹瀉)。

為了解決這一問(wèn)題，發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究后，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)了一類(lèi)苯胺基-三嗪化合物，其對(duì)于egfr的突變體形式具有較高的抑制效力，同時(shí)又具有對(duì)野生型egfr相對(duì)較低的抑制。此外，這些化合物具有較好的藥理學(xué)效果、可接受的毒理學(xué)作用以及有利的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

一方面，本發(fā)明提供了式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中

g選自芳基、雜芳基或雜環(huán)基，優(yōu)選c6-10芳基、c5-10雜芳基或c4-10雜環(huán)基，所述芳基、雜芳基或雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自c1-6烷基、c1-6烷氧基、氧代、鹵素或c1-6鹵代烷基的取代基所取代；

r¹選自氫、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵素和c1-6鹵代烷基；

r²選自c1-6烷基、c1-6雜烷基、c6-10芳基、c5-10雜芳基、c4-10雜環(huán)基、c6-10芳基-c1-6亞烷基、c5-10雜芳基-c1-6亞烷基、或c4-10雜環(huán)基-c1-6亞烷基，其中所述烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二-c1-6烷基氨基、氧代、鹵素、c1-6鹵代烷基、氨基?；1-6烷基氨基?；蚨?c1-6烷基氨基酰基的取代基所取代；

r³選自氫或c1-6烷基；

或者r²和r³與它們所連接的氮原子一起形成雜芳基或雜環(huán)基，優(yōu)選c5-10雜芳基或c4-10雜環(huán)基，其中所述雜芳基或雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二-c1-6烷基氨基、氧代、鹵素、c1-6鹵代烷基、氨基酰基、c1-6烷基氨基酰基或二-c1-6烷基氨基?；娜〈〈?；

r⁴選自氫或c1-6烷基；

r⁵選自以下基團(tuán)：

另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含如上所述的式(i)的化合 物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。

在另一方面，本發(fā)明提供了如上所述的式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用作藥物。

另一方面，本發(fā)明還提供了如上所述的式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。

另一方面，本發(fā)明還提供了在需要這種治療的溫血?jiǎng)游锢缛酥挟a(chǎn)生抗癌作用的方法，其包括：向所述動(dòng)物施用有效量的如上所述的式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

另一方面，本發(fā)明還提供了如上所述的式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和另外的抗腫瘤物質(zhì)的用途，用于癌癥的同時(shí)、獨(dú)立或序貫治療。

定義

在本發(fā)明中，下列術(shù)語(yǔ)具有以下所述的含義：

單獨(dú)或與其他基團(tuán)組合的術(shù)語(yǔ)“烷基”表示由碳和氫原子組成的直鏈或支鏈的單價(jià)飽和烴基團(tuán)?！癱1-6烷基”表示具有1至6個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正己基。

單獨(dú)或與其他基團(tuán)組合的術(shù)語(yǔ)“亞烷基”表示由碳和氫原子組成的直鏈或支鏈的二價(jià)飽和烴基團(tuán)?！癱1-6亞烷基”表示具有1至6個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷基，例如亞甲基、亞乙基、亞丙基等。

單獨(dú)或與其他基團(tuán)組合的術(shù)語(yǔ)“烷氧基”表示基團(tuán)r’-o-，其中r’是如上所述的烷基。“c1-6烷氧基”表示基團(tuán)r’-o-，其中r’是如上所述的c1-6烷基。

“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。

“鹵代烷基”表示被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的如上所定義的烷基，例如c1-6鹵代烷基。鹵代烷基的非限定性實(shí)例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全鹵代烷基是 指全部氫原子都被鹵素原子代替的烷基，例如三氟甲基。

術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指4-7元單環(huán)飽和烴環(huán)系。環(huán)烷基基團(tuán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)本文所定義的取代基取代。環(huán)烷基包括環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。

術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”是指5-7元單環(huán)不飽和(但是非芳香性)烴環(huán)系。環(huán)烯基基團(tuán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)本文所定義的取代基取代。環(huán)烯基包括環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基和環(huán)庚烯基。

術(shù)語(yǔ)“芳基”是指含有碳原子的單環(huán)或稠合雙環(huán)的芳香環(huán)?！癱6-10芳基”是指含有6-10個(gè)碳原子的芳基。例如，c6-10芳基可以是苯基或萘基。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“雜原子”是指氮(n)、氧(o)和硫(s)原子。

術(shù)語(yǔ)“雜烷基”和“雜亞烷基”是指如上所述的烷基和亞烷基，其中的一個(gè)或多個(gè)碳原子被雜原子所替代。

如本文所用，除非另外指明，術(shù)語(yǔ)"雜芳基"是指5-10元的單環(huán)芳香環(huán)系或二環(huán)稠合芳香環(huán)系，其具有1-4個(gè)雜原子。雜芳基還可以指8-10元環(huán)系，其中雜芳環(huán)與一個(gè)苯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)基環(huán)稠合，其中連接基或連接點(diǎn)是在雜芳環(huán)上。雜芳基非限定性的實(shí)例包括2-或3-噻吩基；2-或3-呋喃基；2-或3-吡咯基；2-、4-或5-咪唑基；3-、4-或5-吡唑基；2-、4-或5-噻唑基；3-、4-或5-異噻唑基；2-、4-或5-噁唑基；3-、4-或5-異噁唑基；3-或5-1,2,4-三唑基；4-或5-1,2,3-三唑基；呋咱基；噻二唑基；四唑基；2-、3-或4-吡啶基；3-或4-噠嗪基；3-、4-或5-吡嗪基；2-吡嗪基和2-、4-或5-嘧啶基；1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-吲嗪基；1-、3-、4-、5-、6-或7-異吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基；2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹嗪基；2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基；1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基；2-、3-、4-、5-或6-萘啶基；2-、3-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基；3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基；2-、4-、6-或7-蝶啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4ah咔唑基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-咔唑基；1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-咔啉基；1-、2-、 3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基；1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-萘嵌間二氮雜苯基；2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-或10-菲咯啉基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-酚嗪基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噁嗪基；2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯并異喹啉基；2-、3-、4-或噻吩并[2,3-b]呋喃基；2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-7h-吡嗪并[2,3-c]咔唑基；2-、3-、5-、6-或7-2h-呋喃并[3,2-b]-吡喃基；2-、3-、4-、5-、7-或8-5h-吡啶并[2,3-d]-o-噁嗪基；1-、3-或5-1h-吡唑并[4,3-d]-噁唑基；2-、4-或54h-咪唑并[4,5-d]噻唑基；3-、5-或8-吡嗪并[2,3-d]噠嗪基；2-、3-、5-或6-咪唑并[2,1-b]噻唑基；1-、3-、6-、7-、8-或9-呋喃并[3,4-c]噌啉基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或11-4h-吡啶并[2,3-c]咔唑基；2-、3-、6-或7-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基；7-苯并[b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并噁唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基；2-、4-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基；2-、4-、5-、6-、7-或8-苯并噁嗪基。通常稠合的雜芳基基團(tuán)還包括但不限于2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并噁唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基；環(huán)庚二烯并[d]咪唑基；7,8-二氫-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶基；1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶基；噻吩并[3,2-d]嘧啶基；6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并嘧啶基；5,6-二氫-噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑基；[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶基；7,8-二氫-5h-吡喃并[3,4-d]噠嗪基；和異噁唑并[5,4-b]吡啶基。

除非另外指明，包含超過(guò)一個(gè)雜原子的雜芳基基團(tuán)可以包含不同的雜原子。雜芳基基團(tuán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)本文所定義的取代基取代。

如本文所用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”是指含有1-4個(gè)雜原子的4-10元單環(huán)或二環(huán)的飽和或不飽和環(huán)，包括橋聯(lián)的雜環(huán)或螺環(huán)。雜環(huán)基環(huán)不是芳香性的。包含超過(guò)一個(gè)雜原子的雜環(huán)基可以包含不同的雜原子。雜環(huán)基基團(tuán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)本文所定義的取代基取代。雜環(huán)基的實(shí)例包括四氫呋喃、 二氫呋喃、1,4-二噁烷、嗎啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧雜環(huán)戊烷、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氫吡喃、二氫吡喃、氮雜環(huán)丁烷、氧雜硫雜環(huán)戊烷、二硫雜環(huán)戊烷、1,3-二噁烷、1,3-二噻烷、氧雜硫雜環(huán)已烷、硫嗎啉等。雜環(huán)基與分子的其他部分可以直接連接，也可以通過(guò)c1-6亞烷基或c1-6雜亞烷基鏈進(jìn)行連接。

當(dāng)任何基團(tuán)或部分(例如烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基)被本文定義為“任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自以下的取代基取代”時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解，所述基團(tuán)或部分是未取代的或者被一個(gè)、一個(gè)或兩個(gè)、或者一至三個(gè)取代基取代，其中各個(gè)取代基獨(dú)立地選自所述取代基的組。

在本文中，所述的任選被取代的雜芳基或雜環(huán)基的實(shí)例包括但不限于4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基、1h-吲哚-3-基、1-甲基-1h-吲哚-3-基和吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基、(3r)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、(3s)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-基、5-甲基-2,5-二氮雜螺環(huán)[3.4]辛-2-基、(3ar,6ar)-5-甲基六氫-吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2h)-基、1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-[2-(二甲氨基)-2-氧代乙基]哌嗪-1-基、甲基[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基、甲基[2-(嗎啉-4-基)乙基]氨基、1-氨基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、或4-[(2s)-2-氨基丙?；鵠哌嗪-1-基。

術(shù)語(yǔ)“?；笔侵富鶊F(tuán)-co-r，其中r為如上所述的烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基。

術(shù)語(yǔ)“氧代”是指基團(tuán)(＝o)。

在本說(shuō)明書(shū)的上下文中，除非有相反的指示，術(shù)語(yǔ)“治療”也包含“預(yù)防”。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“治療”意在具有其如下的普通含義：處理疾病以完全地或部分地緩解其癥狀中的一種、部分或全部，或者糾正或補(bǔ)償潛在的病理。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“預(yù)防”意在具有其正常日常含義，并且包括防止疾病發(fā)展的初級(jí)預(yù)防和防止已發(fā)生疾病的二級(jí)預(yù)防，暫時(shí)或持續(xù)地防止患者疾病的加劇或惡化或者與疾病相關(guān)的新癥狀的發(fā)生。

本發(fā)明的化合物

本發(fā)明提供了式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中

g選自芳基、雜芳基或雜環(huán)基，優(yōu)選c6-10芳基、c5-10雜芳基或c4-10雜環(huán)基，所述芳基、雜芳基或雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自c1-6烷基、c1-6烷氧基、氧代、鹵素或c1-6鹵代烷基的取代基所取代；

r¹選自氫、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵素和c1-6鹵代烷基；

r²選自c1-6烷基、c1-6雜烷基、c6-10芳基、c5-10雜芳基、c4-10雜環(huán)基、c6-10芳基-c1-6亞烷基、c5-10雜芳基-c1-6亞烷基、或c4-10雜環(huán)基-c1-6亞烷基，其中所述烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二-c1-6烷基氨基、氧代、鹵素、c1-6鹵代烷基、氨基?；?、c1-6烷基氨基?；蚨?c1-6烷基氨基?；娜〈〈?；

r³選自氫或c1-6烷基；

或者r²和r³與它們所連接的氮原子一起形成雜芳基或雜環(huán)基，優(yōu)選c5-10雜芳基或c4-10雜環(huán)基，其中所述雜芳基或雜環(huán)基任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二-c1-6烷基氨基、氧代、鹵素、c1-6鹵代烷基、氨基?；1-6烷基氨基?；蚨?c1-6烷基氨基酰基的取代基所取代；

r⁴選自氫或c1-6烷基；

r⁵選自以下基團(tuán)：

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，r²和r³與它們所連接的氮原子一起形成選自下述的基團(tuán)：(3r)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、(3s)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-基、[2-(二甲氨基)乙基]-(甲基)氨基、[2-(甲氨基)乙基](甲基)氨基、5-甲基-2,5-二氮雜螺環(huán)[3.4]辛-2-基、(3ar,6ar)-5-甲基六氫-吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2h)-基、1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-[2-(二甲氨基)-2-氧代乙基]哌嗪-1-基、甲基[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基、甲基[2-(嗎啉-4-基)乙基]氨基、1-氨基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、或4-[(2s)-2-氨基丙?；鵠哌嗪-1-基。

在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中

g選自4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基，1h-吲哚-3-基，1-甲基-1h- 吲哚-3-基和吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基；

r¹選自甲氧基、甲基、氯、氟和三氟甲基；

r⁴是氫；

r⁵是以下基團(tuán)：

r²和r³與它們所連接的氮原子一起形成選自下述的基團(tuán)：(3r)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、(3s)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、3-(二甲氨基)氮雜環(huán)丁烷-1-基、[2-(二甲氨基)乙基]-(甲基)氨基、[2-(甲氨基)乙基](甲基)氨基、5-甲基-2,5-二氮雜螺環(huán)[3.4]辛-2-基、(3ar,6ar)-5-甲基六氫-吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2h)-cn基、1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-[2-(二甲氨基)-2-氧代乙基]哌嗪-1-基、甲基[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基、甲基[2-(嗎啉-4-基)乙基]氨基、1-氨基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基、或4-[(2s)-2-氨基丙?；鵠哌嗪-1-基。

在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，g是1h-吲哚-3-基、1-甲基-1h-吲哚-3-基或吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，r¹是甲氧基。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，g是1-甲基-1h-吲哚-3-基。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，r²和r³與它們所連接的氮原子一起形成[2-(二甲氨基)乙基](甲基)氨基。

在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽是n-(2-{2-(二甲基氨基)乙基-(甲基)氨基}-4-甲氧基-5-{[4-(1-甲基吲哚-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基]氨基}苯基)丙-2-烯酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽是n-(4-甲氧基-5-{[4-(1-甲基吲哚-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基]氨基}-2-[甲基-(2-甲氨基乙基)氨基]苯基)丙-2-烯酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以制備式(i)化合物的鹽，包括藥學(xué)上可接受的鹽。這些鹽類(lèi)可以在所述化合物最終分離和純化過(guò)程中原位制備，或者通過(guò)獨(dú)立地分別將以其游離酸或游離堿形式的純化的化合物與適合的堿或酸反應(yīng)制備。

可以與無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，例如，乙酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘化物/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、硬脂酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、軟脂酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽和三氟乙酸鹽。

可以生成鹽的無(wú)機(jī)酸包括，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以生成鹽的有機(jī)酸包括，例如，乙酸、丙酸、羥乙酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸等。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可以與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿形成。

可以生成鹽的無(wú)機(jī)堿包括，例如銨鹽和元素周期表的i至xii族的金屬。在某些實(shí)施方案中，所述鹽是衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅和銅；特別適合的鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。

可以生成鹽的有機(jī)堿包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺包括天然產(chǎn)生的取代胺類(lèi)，環(huán)胺、堿離子交換樹(shù)脂等。某些有機(jī)胺類(lèi)包括異丙胺、二乙醇胺、二乙胺、賴(lài)氨酸、葡甲胺、哌嗪及氨基丁三醇。

本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽能夠通過(guò)常規(guī)的化學(xué)方法由堿性或酸性部 分合成而來(lái)。通常，這些鹽能夠通過(guò)將這些化合物的游離酸形式與化學(xué)量的合適的堿(na、ca、mg或k的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等)反應(yīng)、或者通過(guò)將這些化合物的游離堿形式與化學(xué)量的合適的酸反應(yīng)而進(jìn)行制備。這些反應(yīng)通常在水中或在有機(jī)溶劑中、或在兩者的混合物中進(jìn)行。通常，在適宜時(shí)，需要使用非水介質(zhì)，例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。其它合適的鹽的列表可在“remington'spharmaceuticalsciences”,第20版,mackpublishingcompany,easton,pa.,(1985)；以及stahl和wermuth的“handbookofpharmaceuticalsalts：properties,selection,anduse”(wiley-vch,weinheim,德國(guó),2002)中找到。

還可以制備式(i)化合物的溶劑化物，包括藥學(xué)上可接受的溶劑化物。“溶劑化物”是指由溶質(zhì)和溶劑形成的可變化學(xué)量的復(fù)合物。為了本發(fā)明目的的此類(lèi)溶劑不影響所述溶質(zhì)的生物活性。適合溶劑的實(shí)例包括但不限于水、meoh、etoh和acoh。其中水是溶劑分子的溶劑化物通常是指水合物。水合物包括包含化學(xué)計(jì)量的量的水的組分，以及包含可變量的水的組分。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”的含義是適用于藥物用途的化合物。適用于藥物的本發(fā)明化合物的鹽和溶劑化物(例如水合物和鹽的水合物)是其中平衡離子或結(jié)合溶劑是藥學(xué)上可接受的那些。但是，具有非藥學(xué)上可接受的平衡離子或結(jié)合溶劑的鹽和溶劑化物也包含在本發(fā)明范圍內(nèi)，例如，用作制備其它本發(fā)明化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物的中間體。

式(i)化合物(包括其鹽和溶劑化物)可以以結(jié)晶形式、非結(jié)晶形式或其混合物存在。所述化合物或其鹽或溶劑化物還可以表現(xiàn)出多晶現(xiàn)象，即以不同結(jié)晶形式出現(xiàn)的能力。這些不同的結(jié)晶形式通常已知為“多晶型”。多晶型具有相同的化學(xué)組成，但是結(jié)晶固體狀態(tài)的堆積、幾何排列和其它描述特性不同。因此，多晶型可以具有不同的物理性質(zhì)，例如形狀、密度、硬度、變形性、穩(wěn)定性和溶解度性質(zhì)。多晶型通常表現(xiàn)出不同的熔點(diǎn)、ir光譜和x-射線(xiàn)粉末衍射圖譜，其全部都可以用于鑒別。本領(lǐng)域技術(shù)人員能 夠了解，例如，通過(guò)改變或調(diào)整在式(i)化合物的結(jié)晶/重結(jié)晶中所使用的條件而可能產(chǎn)生不同的多晶型。

本發(fā)明還包含式(i)化合物的不同異構(gòu)體。“異構(gòu)體”是指具有相同構(gòu)成和分子量，但是物理和/或化學(xué)性質(zhì)不同的化合物。結(jié)構(gòu)的區(qū)別可以是在結(jié)構(gòu)中(幾何異構(gòu)體)或者在旋轉(zhuǎn)平面偏振光的能力上(立體異構(gòu)體)。關(guān)于立體異構(gòu)體，式(i)化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)碳原子，并可以以外消旋體、外消旋混合物以及以單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體出現(xiàn)。全部此類(lèi)異構(gòu)體形式都包含在本發(fā)明范圍內(nèi)，包括其混合物。如果所述化合物含有雙鍵，取代基可以是e或z構(gòu)型。如果所述化合物包含二取代的環(huán)烷基，該環(huán)烷基的取代基可以具有順式-或反式-構(gòu)型。也期望包含全部的互變異構(gòu)體形式。

式(i)化合物的任意不對(duì)稱(chēng)原子(例如碳等)都能夠以外消旋或?qū)τ钞悩?gòu)體富集存在，例如(r)-、(s)-或(r,s)-構(gòu)型。在某些實(shí)施方案中，每一個(gè)不對(duì)稱(chēng)原子在(r)-或(s)-構(gòu)型中有至少50％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量、至少60％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量、至少70％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量、至少80％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量、至少90％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量、至少95％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量、或至少99％對(duì)映異構(gòu)體過(guò)量。如有可能，在具有不飽和雙鍵的原子上的取代基以順式-(z)-或反式-(e)-形式存在。

因此，如本文所用，式(i)化合物能夠是可能的異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其混合物之一的形式，例如作為基本上純的幾何異構(gòu)體(順式或反式)、非對(duì)映異構(gòu)體、旋光異構(gòu)體(對(duì)映異構(gòu)體)、外消旋體或其混合物。

任何所得的異構(gòu)體的混合物都能夠基于組分的物理化學(xué)差異被分離成純的或基本上純的幾何或旋光異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體，例如通過(guò)色譜法和/或分步結(jié)晶。

任何所得的終產(chǎn)物或中間體的外消旋體能夠通過(guò)已知的方法(例如通過(guò)其非對(duì)映體鹽的分離)被拆分成旋光對(duì)映異構(gòu)體，其用有光學(xué)活性的酸或堿獲得，并且釋放出有光學(xué)活性的酸性或堿性化合物。特別地，堿性部分 因此可以用于將本發(fā)明的化合物拆分成其旋光對(duì)映異構(gòu)體，例如通過(guò)與有光學(xué)活性的酸(例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-o,o'-對(duì)甲苯酰酒石酸、扁桃酸、蘋(píng)果酸或樟腦-10-磺酸)形成的鹽的分步結(jié)晶。外消旋產(chǎn)物也能夠通過(guò)手性色譜法進(jìn)行拆分，例如使用手性吸附劑的高壓液相色譜法(hplc)。

本發(fā)明包括式(i)化合物的未標(biāo)記的形式以及同位素標(biāo)記的形式。同位素標(biāo)記的化合物具有由本文所給出的化學(xué)式描述的結(jié)構(gòu)，除了一個(gè)或多個(gè)原子被具有所選擇的原子量或質(zhì)量數(shù)的原子替換。能夠被摻入本發(fā)明化合物的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分別例如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹⁵n、¹⁸f、³¹p、³²p、³⁵s、³⁶cl、¹²⁵i。本發(fā)明包括如本文所定義的各種同位素標(biāo)記的化合物，例如其中出現(xiàn)放射性同位素(例如³h和¹⁴c)的那些或其中出現(xiàn)非放射性同位素(例如²h和¹³c)的那些。這些同位素標(biāo)記的化合物可用于代謝研究(例如使用¹⁴c)、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究(例如用²h或³h)、檢測(cè)或成像技術(shù)，例如正電子發(fā)射斷層掃描術(shù)(pet)或單光子發(fā)射計(jì)算體層攝影術(shù)(spect)，包括藥物底物組織分布分析，或者用于患者的放射治療。特別地，對(duì)于pet或spect研究可能特別需要¹⁸f或標(biāo)記的化合物。同位素標(biāo)記的式(i)化合物通常能夠通過(guò)本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)或者通過(guò)與所附實(shí)施例和制備例中所述方法類(lèi)似的方法、使用合適的同位素標(biāo)記的試劑代替以前所用的未標(biāo)記的試劑進(jìn)行制備。

此外，用較重的同位素、特別是氘(即²h或d)的取代可能帶來(lái)由更強(qiáng)的代謝穩(wěn)定性導(dǎo)致的某些治療優(yōu)勢(shì)，例如增加的體內(nèi)半衰期或減少的劑量需求或治療指數(shù)的改善。可以理解，在本文中氘被視為式(i)的化合物的取代基。該較重同位素、特別是氘的濃度可能由同位素富集因子決定。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“同位素富集因子”是指特定同位素的同位素豐度和天然豐度之間的比例。如果本發(fā)明化合物中的取代基被標(biāo)為氘，那么對(duì)于每一個(gè)標(biāo)出的氘原子，該化合物具有至少3500(在每一個(gè)標(biāo)出的氘原子處52.5％氘摻入)、至少4000(60％氘摻入)、至少4500(67.5％氘摻入)、至少5000(75％ 氘摻入)、至少5500(82.5％氘摻入)、至少6000(90％氘摻入)、至少6333.3(95％氘摻入)、至少6466.7(97％氘摻入)、至少6600(99％氘摻入)、或至少6633.3(99.5％氘摻入)的同位素富集因子。

藥物組合物

本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含如上所述的式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。

藥物組合物能夠針對(duì)特定的給藥途徑進(jìn)行配制，例如口服給藥、腸胃外給藥和直腸給藥等。此外，本發(fā)明的藥物組合物能夠以固體形式(非限制性地包括膠囊、片劑、丸劑、顆粒劑、粉末劑或栓劑)或以液體形式(非限制性地包括溶液劑、混懸劑或乳劑)制成。藥物組合物能夠經(jīng)歷常規(guī)的制藥操作(例如滅菌)和/或能夠含有常規(guī)的惰性稀釋劑、潤(rùn)滑劑或緩沖劑以及輔料，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑和緩沖劑等。

通常，藥物組合物是片劑或明膠膠囊，其包含活性成分以及

a)稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；

b)潤(rùn)滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；對(duì)于片劑也包含

c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，還有

d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽、或泡騰混合物；和/或

e)吸收劑、著色劑、調(diào)味劑和增甜劑。

根據(jù)本領(lǐng)域中已知的方法，片劑可以是薄膜包衣或腸溶包衣的。

用于口服給藥的合適的組合物包括有效量的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其為片劑、錠劑、水或油混懸液、可分散的粉末或顆粒、乳劑、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑的形式。根據(jù)本領(lǐng)域中已知的用于制備藥物組合物的任意方法制備用于口服使用的組合物，并且為了提供精制和適 口的制劑該組合物能夠含有1種或多種選自增甜劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑的試劑。片劑可以含有與適合于制備片劑的無(wú)毒的藥學(xué)上可接受的賦形劑混合在一起的活性成分。這些賦形劑是例如惰性的稀釋劑(例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉)；成粒劑和崩解劑(例如玉米淀粉、或海藻酸)；粘合劑(例如淀粉、明膠或阿拉伯膠)；和潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉)。片劑是未經(jīng)包衣的或者通過(guò)已知的技術(shù)進(jìn)行包衣從而延緩在胃腸道的崩解和吸收，從而在較長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)提供持久的作用。例如，能夠使用延時(shí)材料，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服的制劑能夠以硬明膠膠囊呈遞，其中活性成分與惰性的固體稀釋劑(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合，或者以軟明膠膠囊呈遞，其中活性成分與水或油介質(zhì)(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。

某些可注射的組合物是等滲水溶液或混懸液，栓劑有利地由脂肪乳或混懸液制得。所述的組合物可以進(jìn)行滅菌和/或含有輔料，例如防腐、穩(wěn)定、潤(rùn)濕或乳化劑、溶解促進(jìn)劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，其也可以含有其他的治療上有價(jià)值的物質(zhì)。所述的組合物分別根據(jù)常規(guī)的混合、制?；虬路ㄟM(jìn)行制備，并且含有大約0.1-75％或含有大約1-50％的活性成分。

由于水可能促進(jìn)某些化合物的降解，本發(fā)明還提供無(wú)水的藥物組合物和劑型，其包含作為活性成分的本發(fā)明化合物。

使用無(wú)水或低水含量的成分和低水含量或低濕度的條件能夠制備本發(fā)明的無(wú)水的藥物組合物和劑型?？梢灾苽浜唾A存無(wú)水的藥物組合物以便保持其無(wú)水的性質(zhì)。因此，使用已知防止與水接觸的材料包裝無(wú)水的組合物以便其能夠包含于合適的配方藥盒中。合適的包裝的實(shí)例非限制性地包括氣密的箔、塑料、單位劑量容器(例如管形瓶)、泡罩包裝和條帶包裝。

本發(fā)明進(jìn)一步提供藥物組合物和劑型，其包含1種或多種降低作為活性成分的本發(fā)明化合物的分解速率的試劑。該試劑(其在本文中稱(chēng)作“穩(wěn)定劑”)非限制性地包括抗氧化劑(例如抗壞血酸)、ph緩沖劑或鹽緩沖劑等。

對(duì)于大約50-70kg的個(gè)體，本發(fā)明的藥物組合物或組合產(chǎn)品能夠是大 約1-1000mg活性成分的單位劑量，或者大約1-500mg或大約1-250mg或大約1-150mg或大約0.5-100mg、或大約1-50mg活性成分。化合物、藥物組合物或其組合產(chǎn)品的治療有效劑量取決于個(gè)體的物種、體重、年齡和個(gè)體情況、其正在接受治療的病癥或疾病或其嚴(yán)重程度。普通技術(shù)的內(nèi)科醫(yī)生、臨床醫(yī)師或獸醫(yī)能夠容易地確定為了預(yù)防、治療或抑制病癥或疾病的發(fā)展所需的每一種活性成分的有效量。

治療用途

另一方面，本發(fā)明提供了式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用作藥物。在另一方面，本發(fā)明還提供了式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。

另一方面，本發(fā)明還提供了在需要這種治療的溫血?jiǎng)游锢缛酥挟a(chǎn)生抗癌作用的方法，其包括：向所述動(dòng)物給藥有效量得如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

另一方面，本發(fā)明還提供了式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和另外的抗腫瘤物質(zhì)的用途，用于癌癥的同時(shí)、獨(dú)立或序貫治療。

在上文提及的任一方面或?qū)嵤┓桨钢校霭┌Y可以選自卵巢癌、宮頸癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤,黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝細(xì)胞癌、胃癌、胃腸道間質(zhì)瘤(gist)、甲狀腺癌、膽管癌、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、急性髓細(xì)胞白血病(aml)、多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、間皮瘤。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述癌癥為非小細(xì)胞肺癌。

上述的式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可作為單獨(dú)治療應(yīng)用，或者除了本發(fā)明化合物以外還涉及到常規(guī)的手術(shù)或放射療法或化學(xué)療法或免疫療法。這種化學(xué)療法與本發(fā)明化合物可以并列地、同時(shí)地、序貫地、或分別地給藥，并且可包含以下類(lèi)型的抗腫瘤劑的一種或多種：

(i)醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)中所使用的抗增殖/抗腫瘤藥物及其組合，例如烷化劑 (例如順鉑、奧沙利鉑、卡鉑、環(huán)磷酰胺、氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺、亞硝基脲類(lèi))；抗代謝藥(例如吉西他濱和抗葉酸劑，例如氟嘧啶(如5-氟尿嘧啶和替加氟)、雷替曲塞、甲氨喋呤、阿糖胞苷、羥基脲)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環(huán)類(lèi)，如阿霉素、博來(lái)霉素、多柔比星、道諾霉素、表柔比星、伊達(dá)比星、絲裂霉素c、放線(xiàn)菌素、光神霉素)；抗有絲分裂藥劑(例如長(zhǎng)春花生物堿，如長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱；以及紫杉烷類(lèi)，如紫杉醇、泰索帝)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如表鬼臼毒素(如依托泊苷、替尼泊苷)，安吖啶、托泊替康、喜樹(shù)堿)；

(ii)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑，例如抗雌激素藥(例如他莫昔芬、氟維司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、抗雄激素藥(例如比卡魯胺、氟他胺、尼魯米特、醋酸環(huán)丙孕酮)、lhrh拮抗劑或lhrh激動(dòng)劑(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林、和布舍瑞林)、孕激素類(lèi)(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑、來(lái)曲唑、伊西美坦)、5α-還原酶抑制劑(例如非那雄胺)；

(iii)抗侵襲劑，例如c-src激酶家族抑制劑，例如達(dá)沙替尼和波舒替尼(ski-606)，以及金屬蛋白酶抑制劑(如馬立馬司他)、尿激酶纖溶酶原激活物受體功能的抑制劑或者類(lèi)肝素酶的抗體；

(iv)生長(zhǎng)因子功能的抑制劑：例如這種抑制劑包括生長(zhǎng)因子抗體和生長(zhǎng)因子受體抗體(例如抗erbb2抗體曲妥珠單抗、抗egfr抗體帕尼單抗、抗erbb1抗體西妥昔單抗以及任何生長(zhǎng)因子或生長(zhǎng)因子受體抗體)；這種抑制劑還包括：酪氨酸激酶抑制劑，例如表皮生長(zhǎng)因子家族的抑制劑(例如egfr家族酪氨酸激酶抑制劑，如n-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉基丙氧基)-喹唑啉-4-胺(吉非替尼，zd1839)、n-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼，osi-774)、6-丙烯酰胺基-n-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-嗎啉基丙氧基)-喹唑啉-4-胺(ci1033)、erbb2酪氨酸激酶抑制劑(例如拉帕替尼)；肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族的抑制劑；胰島素生長(zhǎng)因子家族的抑制劑；血小板衍生的生長(zhǎng)因子家族的抑制劑，例如伊馬替尼和/或尼洛替尼(amn107)；絲氨酸/蘇氨酸激酶的抑制劑(例如ras/raf信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑，例如法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，例如索拉非尼(bay43-9006)、替匹法尼 (r115777)、氯那法尼(sch66336))、通過(guò)mek和/或akt激酶的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑、c-kit抑制劑、abl激酶抑制劑、pi3激酶抑制劑、plt3激酶抑制劑、csf-1r激酶抑制劑、igf受體(胰島素樣生長(zhǎng)因子)激酶抑制劑；極光激酶(aurorakinase)抑制劑(例如azd1152、ph739358、vx-680、mln8054、r763、mp235、mp529、vx-528、ax39459)，細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制劑，例如cdk2和/或cdk4抑制劑；

(v)抗血管生成劑，例如抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子作用的藥劑，例如抗人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體貝伐珠單抗以及例如vegf受體酪氨酸激酶抑制劑，例如凡德他尼(zd6474)、伐他拉尼(ptk787)、舒尼替尼(su11248)、阿西替尼(ag-013736)、帕唑帕尼(gw786034)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(azd2171；wo00/47212中的實(shí)施例240)，例如wo97/22596、wo97/30035、wo97/32856和wo98/13354中公開(kāi)的那些；

(vi)血管損傷劑，例如康普瑞汀a4以及wo99/02166、wo00/40529、wo00/41669、wo01/92224、wo02/04434和wo02/08213中公開(kāi)的化合物；

(vii)內(nèi)皮素受體拮抗劑，例如齊泊騰坦(zd4054)或者阿曲生坦；

(viii)基因治療方法，包括例如替換異常基因(例如異常p53或者異常brca1或brca2)的方法；gdept(基因定向的酶前藥治療)法，例如使用胞嘧啶脫氨酶、胸苷激酶或者細(xì)菌硝基還原酶的那些；提高患者對(duì)化學(xué)治療或放射治療的耐受性的方法，例如多重耐藥基因治療；和

(ix)免疫治療方法，包括例如提高患者腫瘤細(xì)胞的免疫原性的體外和體內(nèi)方法，例如用細(xì)胞因子(例如白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素4或者粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子)進(jìn)行轉(zhuǎn)染；降低t細(xì)胞無(wú)效能的方法；使用轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞(例如細(xì)胞因子轉(zhuǎn)染的樹(shù)突狀細(xì)胞)的方法；使用細(xì)胞因子轉(zhuǎn)染的腫瘤細(xì)胞系的方法；使用抗獨(dú)特型抗體的方法；降低免疫抑制性細(xì)胞(例如調(diào)節(jié)性t細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞、或表達(dá)ido(吲哚胺2,3-脫氧酶)的樹(shù)突狀細(xì)胞)的功能的方法；以及使用衍生自腫瘤相關(guān)抗原(例如ny-eso-1， mage-3、wt1或her2/neu)的蛋白質(zhì)類(lèi)或肽類(lèi)組成的癌癥疫苗的方法。

本文中，如果術(shù)語(yǔ)“聯(lián)合治療”是用來(lái)描述組合治療，則應(yīng)理解這可以表示同時(shí)給藥、獨(dú)立給藥或序貫給藥。關(guān)于“聯(lián)合給藥”應(yīng)類(lèi)似地理解。在本發(fā)明的一個(gè)方面，“聯(lián)合治療”是指同時(shí)給藥。在本發(fā)明的另一方面，“聯(lián)合治療”是指獨(dú)立給藥。在本發(fā)明的另一方面，“聯(lián)合治療”是指序貫給藥。當(dāng)序貫給藥或獨(dú)立給藥時(shí)，給藥第二組分的延遲不應(yīng)例如失去使用組合產(chǎn)生的效果的利益。

通用合成方法

本發(fā)明化合物可以通過(guò)許多種方法制備，包括標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)方法。在下文列出了說(shuō)明性的一般合成方法，并且在實(shí)施例中提供了所制備的本發(fā)明的具體化合物。

可以通過(guò)有機(jī)合成領(lǐng)域中已知的方法制備式(i)化合物。在參考下文所述的實(shí)施例的方法時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)部分取代基進(jìn)行本領(lǐng)域中熟知的基團(tuán)替換，從而在不偏離本發(fā)明的主旨的情況下得到類(lèi)似的衍生物。如果必要，按照一般原理或化學(xué)方法對(duì)敏感性或反應(yīng)性基團(tuán)使用保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)是按照有機(jī)合成的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行操作(t.w.greene和p.g.m.wuts,"protectivegroupsinorganicsynthesis",第三版,wiley,newyork1999)。這些基團(tuán)在化合物合成的方便階段使用本領(lǐng)域技術(shù)人員很清楚的方法除去。選擇方法以及反應(yīng)條件和其處理次序，應(yīng)當(dāng)與式(i)化合物的制備相符。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠識(shí)別在式(i)化合物中是否存在立體中心。因此，本發(fā)明包括可能的立體異構(gòu)體，并且既包括外消旋化合物又包括單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體。當(dāng)所需化合物是單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體時(shí)，其可以通過(guò)立體特異性合成或通過(guò)終產(chǎn)物或任何方便的中間體拆分獲得。終產(chǎn)物、中間體或起始原料的拆分可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何適合的方法實(shí)現(xiàn)。參見(jiàn)，例如e.l.eliel,s.h.wilen和l.n.mander的“stereochemistryoforganiccompounds”(wiley-interscience,1994)。

本文所述的化合物可以從市售的起始原料制備或者使用已知的有機(jī)、無(wú)機(jī)和/或酶促的方法合成。例如，本發(fā)明的化合物可以按照與pct申請(qǐng)pct/gb2012/051783所述的合成方法類(lèi)似的方法，采用適宜的化合物原料進(jìn)行制備。

例如，本發(fā)明的化合物可以按照以下流程1的方法進(jìn)行合成：

流程1

在流程1中，由起始原料2,4-二氯-1,3,5-三嗪與取代的苯胺類(lèi)化合物反應(yīng)得到中間體b，通過(guò)金屬催化的偶聯(lián)反應(yīng)或相關(guān)的反應(yīng)與適宜的雜環(huán)化合物偶聯(lián)得到中間體c，再經(jīng)過(guò)氨基取代反應(yīng)制得中間體d，通過(guò)還原硝基得到中間體e，再與適宜的酰氯或羧酸化合物反應(yīng)得到最終的式(i)化合物。其中，r¹、r²、r³、r⁴、r⁵和g如上文所定義。

具體實(shí)施方式

通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行進(jìn)一步的說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，提供以下實(shí)施例的目的僅僅是為了能夠更好的理解本發(fā)明，而不是以任何方式限定本發(fā)明的范圍。

在本申請(qǐng)中使用的縮寫(xiě)具有如下含義。

縮寫(xiě)：

boc叔丁氧基羰基

dcm二氯甲烷

dead偶氮二甲酸二乙酯

dipea二異丙基乙胺

etoac乙酸乙酯

hatuo-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽

tbaf四丁基氟化銨

thf四氫呋喃

實(shí)施例1：

n-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙-2-烯酰胺

將丙烯酸(1.62g,22.3mmol,1.06當(dāng)量)溶于二氯甲烷(100ml)，然后用冰水降至0度，依次加入dipea(4.14g,31.95mmol,1.5當(dāng)量)和hatu(12.2g,31.95mol,1.5當(dāng)量)攪拌10分鐘，分批加入化合物2(9.5g，21.3mmol，1當(dāng)量)完畢后，在此溫度下攪拌4小時(shí)，反應(yīng)完全。將反應(yīng)液倒入到二氯甲烷(200ml)和水(200ml),分層，有機(jī)層水洗兩次，用硫酸鈉干燥，濃縮加入硅膠拌樣，過(guò)柱純化(meoh/dcm：1％-5％梯度)得到黃色固體。固體用50ml的二氯甲烷溶解，加入20ml的飽和碳酸氫鈉，攪拌二十分鐘，分層。有機(jī)相水洗，干燥濃縮至干，得到淡黃色的標(biāo)題化合物1(3 g)。ms(esi)m/z＝501.3[m+h]⁺；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.15(s,1h),9.92(s,1h),9.38(s,1h),8.74(s,1h),8.65(dd,j＝6.1,2.9hz,1h),7.80(s,1h),7.41(dd,j＝6.3,2.8hz,1h),7.37–7.22(m,2h),6.83(s,1h),6.57–6.46(m,1h),6.41(dd,j＝16.8,9.8hz,1h),5.77(dd,j＝9.8,1.9hz,1h),4.02(s,3h),3.93(s,3h),2.37(s,2h),2.36(d,j＝8.7hz,6h)。

生物學(xué)實(shí)施例

測(cè)驗(yàn)1：l858r(激活單突變體)細(xì)胞磷酸化測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系nci-h3255(l858r單突變egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將nci-h3255細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的begm培養(yǎng)基中(lonza)。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照r&dsystems公司的duosetichumanphospho-egfrelisa(r&dsystems目錄號(hào)#dyc1095)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行細(xì)胞裂解液中內(nèi)源性細(xì)胞磷酸化p-egfr的檢測(cè)。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)在corning黑色透明底96孔板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，輕柔混合培養(yǎng)基之后，并將細(xì)胞再培養(yǎng)2小時(shí)。將100μl1x裂解緩沖液添加到各孔中。將greiner高結(jié)合力96孔板用捕獲抗體覆蓋，然后用3％bsa進(jìn)行封閉。去除封閉液之后，將100μl裂解液轉(zhuǎn)移到greiner高結(jié)合力96孔板中，孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng)板之后，添加100μl檢測(cè)抗體，并孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng)板之后，添加100μltmb底物(cellsignalingtechnology目錄號(hào)7004)，孵育1小時(shí)。將100μl終止溶液添加到培養(yǎng)板中，并檢測(cè)各孔對(duì)450nm波長(zhǎng)的吸光度。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析?；诖藬?shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

測(cè)驗(yàn)2：exon19缺失egfr(激活單突變體)細(xì)胞磷酸化測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系pc-9(exon19缺失egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將pc-9細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpmi1640培養(yǎng)基中。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照r&dsystems公司的duosetichumanphospho-egfrelisa(r&dsystems目錄號(hào)#dyc1095)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行細(xì)胞裂解液中內(nèi)源性細(xì)胞磷酸化p-egfr的檢測(cè)。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)在corning黑色透明底96孔板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，輕柔混合培養(yǎng)基之后，并將細(xì)胞再培養(yǎng)2小時(shí)。將100μl1x裂解緩沖液添加到各孔中。將greiner高結(jié)合力96孔板用捕獲抗體覆蓋，然后用3％bsa進(jìn)行封閉。去除封閉液之后，將100μl裂解液轉(zhuǎn)移到greiner高結(jié)合力96孔板中，孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng)板之后，添加100μl檢測(cè)抗體，并孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng)板之后，添加100μltmb底物(cellsignalingtechnology目錄號(hào)7004)，孵育1小時(shí)。將100μl終止溶液添加到培養(yǎng)板中，并檢測(cè)各孔對(duì)450nm波長(zhǎng)的吸光度。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析?；诖藬?shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

測(cè)驗(yàn)3：l858r/t790megfr(雙突變體)細(xì)胞磷酸化測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系nci-h1975(l858r/t790m雙突變egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將nci-h1975細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpmi1640培養(yǎng)基中。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照r&dsystems公司的duosetichumanphospho-egfrelisa(r&dsystems目錄號(hào)#dyc1095)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行細(xì)胞裂解液中內(nèi)源性細(xì)胞磷酸化p-egfr的檢測(cè)。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng) 在corning黑色透明底96孔板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜后，將細(xì)胞培養(yǎng)液換成含有1％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpmi1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，輕柔混合培養(yǎng)基之后，并將細(xì)胞再培養(yǎng)2小時(shí)。將100μl1x裂解緩沖液添加到各孔中。將greiner高結(jié)合力96孔板用捕獲抗體覆蓋，然后用3％bsa進(jìn)行封閉。去除封閉液之后，將100μl裂解液轉(zhuǎn)移到greiner高結(jié)合力96孔板中，孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng)板之后，添加100μl檢測(cè)抗體，并孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng)板之后，添加100μltmb底物(cellsignalingtechnology目錄號(hào)7004)，孵育1小時(shí)。將100μl終止溶液添加到培養(yǎng)板中，并檢測(cè)各孔對(duì)450nm波長(zhǎng)的吸光度。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析?；诖藬?shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

測(cè)驗(yàn)4：野生型egfr細(xì)胞磷酸化測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系nci-h838(野生型egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將nci-h838細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpmi1640培養(yǎng)基中。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照r&dsystems公司的duosetichumanphospho-egfrelisa(r&dsystems目錄號(hào)#dyc1095)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行細(xì)胞裂解液中內(nèi)源性細(xì)胞磷酸化p-egfr的檢測(cè)。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)在corning黑色透明底96孔板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，輕柔混合培養(yǎng)基之后，并將細(xì)胞再培養(yǎng)2小時(shí)。將100μl1x裂解緩沖液添加到各孔中。將greiner高結(jié)合力96孔板用捕獲抗體覆蓋，然后用3％bsa進(jìn)行封閉。去除封閉液之后，將100μl裂解液轉(zhuǎn)移到greiner高結(jié)合力96孔板中，孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng)板之后，添加100μl檢測(cè)抗體，并孵育2小時(shí)。輕柔混合并用pbs清洗培養(yǎng) 板之后，添加100μltmb底物(cellsignalingtechnology目錄號(hào)7004)，孵育1小時(shí)。將100μl終止溶液添加到培養(yǎng)板中，并檢測(cè)各孔對(duì)450nm波長(zhǎng)的吸光度。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析。基于此數(shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

下表顯示了本發(fā)明的代表性化合物，即實(shí)施例1的化合物在上述的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的ic50值(μm)，其中用作對(duì)照的化合物osimertinib(azd9291)是按照以下文獻(xiàn)所述的方法合成：discoveryofapotentandselectiveegfrinhibitor(azd9291)ofbothsensitizingandt790mresistancemutationsthatsparesthewildtypeformofthereceptor，j.med.chem.,2014,57(20),pp8249–8267。

測(cè)驗(yàn)5：l858regfr(激活單突變體)細(xì)胞增殖測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系h3255(l858r單突變egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將h3255細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的begm培養(yǎng)基(lonza)中。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照promega公司的celltiter-gloluminescentcellviabilityassay(promega目錄號(hào)#g7570)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行檢測(cè)培養(yǎng)物中活細(xì)胞的數(shù)目。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)在corning黑色透明底96孔板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，并將細(xì)胞再培養(yǎng)72小時(shí)。將100μl混合好的celltiter-glo試劑加入到96孔培養(yǎng)板中的細(xì) 胞中裂解細(xì)胞，并輕柔混合。隨后，在envision微孔板檢測(cè)儀上進(jìn)行自發(fā)熒光的檢測(cè)，得到各個(gè)化合物的數(shù)據(jù)。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析。基于此數(shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

測(cè)驗(yàn)6：exon19缺失egfr(激活單突變體)細(xì)胞增殖測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系pc9(exon19缺失egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將pc9細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpmi1640培養(yǎng)基中。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照promega公司的celltiter-gloluminescentcellviabilityassay(promega目錄號(hào)#g7570)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行檢測(cè)培養(yǎng)物中活細(xì)胞的數(shù)目。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)在corning黑色透明底96孔板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，并將細(xì)胞再培養(yǎng)72小時(shí)。將100μl混合好的celltiter-glo試劑加入到96孔培養(yǎng)板中的細(xì)胞中裂解細(xì)胞，并輕柔混合。隨后，在envision微孔板檢測(cè)儀上進(jìn)行自發(fā)熒光的檢測(cè)，得到各個(gè)化合物的數(shù)據(jù)。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析?；诖藬?shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

測(cè)驗(yàn)7：l858r/t790megfr(雙突變體)細(xì)胞增殖測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系nci-h1975(l858r/t790m雙突變egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將nci-h1975細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpmi1640培養(yǎng)基中。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照promega公司的celltiter-gloluminescentcellviabilityassay(promega目錄號(hào)#g7570)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行檢測(cè)培養(yǎng)物中活細(xì)胞的數(shù)目。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)在corning黑色透明底96孔 板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，并將細(xì)胞再培養(yǎng)72小時(shí)。將100μl混合好的celltiter-glo試劑加入到96孔培養(yǎng)板中的細(xì)胞中裂解細(xì)胞，并輕柔混合。隨后，在envision微孔板檢測(cè)儀上進(jìn)行自發(fā)熒光的檢測(cè)，得到各個(gè)化合物的數(shù)據(jù)。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析?；诖藬?shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

測(cè)驗(yàn)8：野生型egfr細(xì)胞增殖測(cè)驗(yàn)

人肺細(xì)胞系nci-h838(野生型egfr)是從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心獲得。將nci-h838細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpmi1640培養(yǎng)基中。使細(xì)胞在有5％co2的加濕培養(yǎng)箱中于37℃生長(zhǎng)。

依照promega公司的celltiter-gloluminescentcellviabilityassay(promega目錄號(hào)#g7570)中所描述的方案，來(lái)進(jìn)行檢測(cè)培養(yǎng)物中活細(xì)胞的數(shù)目。將90μl細(xì)胞(8000細(xì)胞/孔)培養(yǎng)在corning黑色透明底96孔板里的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并于37℃下在5％co2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。使用移液器將100％dmso中連續(xù)稀釋的化合物加至細(xì)胞，并將細(xì)胞再培養(yǎng)72小時(shí)。將100μl混合好的celltiter-glo試劑加入到96孔培養(yǎng)板中的細(xì)胞中裂解細(xì)胞，并輕柔混合。隨后，在envision微孔板檢測(cè)儀上進(jìn)行自發(fā)熒光的檢測(cè)，得到各個(gè)化合物的數(shù)據(jù)。最后將數(shù)據(jù)輸入合適的軟件包(例如prism)以進(jìn)行曲線(xiàn)擬合分析。基于此數(shù)據(jù)并通過(guò)計(jì)算獲得50％抑制效果所需的化合物濃度來(lái)確定ic50值。

下表顯示了本發(fā)明的代表性化合物，即實(shí)施例1的化合物在上述的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的ic50值(μm)，其中用作對(duì)照的化合物osimertinib(azd9291)是按照以下文獻(xiàn)所述的方法合成：discoveryofapotentandselectiveegfrinhibitor(azd9291)ofbothsensitizingandt790mresistancemutationsthatsparesthewildtypeformofthereceptor，j.med.chem.,2014,57(20),pp8249–8267。