本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種蠶沙葉蛋白的提取方法。

技術(shù)背景

桑葉中的葉蛋白主要有葉肉蛋白和葉綠蛋白兩種，葉肉蛋白約占桑葉干重的11.89％，葉綠蛋白約占桑葉干重的12.31％。家蠶在食用桑葉后對(duì)葉蛋白的消化和破壞不大，因此蠶沙中所含葉蛋白仍占蠶沙干重的14％左右。經(jīng)葉綠素和果膠提取后，蠶沙中的葉蛋白有一定的損失，但含量仍在12％左右，提取完果膠和葉綠素后的蠶沙廢渣中仍還含有豐富的蛋白質(zhì)。隨著畜牧業(yè)的迅速發(fā)展，蛋白質(zhì)飼料供應(yīng)嚴(yán)重不足的問(wèn)題日益突出?，F(xiàn)有葉蛋白的提取原料多種多樣，但成本都相對(duì)較高，且工藝復(fù)雜。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供了以提取葉綠素后的脫綠蠶沙為原料提取蠶沙葉蛋白的方法，其特征在于，是通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的：

(1) 打漿、酶解、過(guò)濾：按蠶沙與水(g/ml)1 ：3-5 的比例加入水，用打漿機(jī)將蠶沙打漿3-5min，然后加入（蠶沙漿質(zhì)量0.1-0.3%）植物復(fù)合蛋白酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1-2 h 進(jìn)行酶解后， 用 800-2000 目濾網(wǎng)過(guò)濾取濾液備用。

（2）加熱、發(fā)酵：將(1) 所取濾液迅速放入沸水中加熱到40-45℃后加入保加利亞乳酸桿菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.01-0.03%)、嗜熱鏈球菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.01-0.03%)、在密閉條件下發(fā)酵 36-48 小時(shí)。

（3）膜分離：將經(jīng)（2）發(fā)酵過(guò)的蠶沙液用10000-50000 道爾頓膜超濾，分離出乳清溶液和蛋白溶液。

（4）吸附、酶氧化脫色：將經(jīng)（3）分離出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附5-10 min，然后過(guò)濾將活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液質(zhì)量0.3-0.5%) 脂肪氧合酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1-2 h 進(jìn)行酶解。

（5）干燥：將經(jīng)（4）吸附、酶氧化脫色后的蠶沙蛋白溶液采用真空冷凍干燥制得白色蠶沙蛋白粉。凍干工藝參數(shù)：物料厚度8-9 mm，預(yù)凍溫度-35--40℃，預(yù)凍時(shí)間2-2.5h，升華時(shí)加熱板溫度45-50℃，干燥倉(cāng)工作壓力22-26Pa，解析時(shí)加熱板溫度60-65℃。

步驟（1）中的植物復(fù)合蛋白酶含量為蠶沙漿質(zhì)量的0.1-0.3%。

步驟（2）中保加利亞乳酸桿菌含量為所取步驟(1) 濾液質(zhì)量0.01-0.03%、嗜熱鏈球菌含量為步驟(1) 所取濾液質(zhì)量0.01-0.03%。

步驟（4）中脂肪氧合酶含量為蛋白溶液質(zhì)量的0.3-0.5%。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn) ：本發(fā)明以蠶沙為原料經(jīng)→打漿→酶解→過(guò)濾→加熱→發(fā)酵→膜分離→吸附→酶氧化脫色→真空冷凍干燥，得到的蠶沙蛋白的提取率為85%以上，蠶沙葉蛋白得率為10.6%以上，蠶沙蛋白的顏色為白色，無(wú)腥味，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為58%以上。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

(1) 打漿、酶解、過(guò)濾：按蠶沙與水(g/ml)1 ：3 的比例加入水，用打漿機(jī)將蠶沙打漿3min，然后加入（蠶沙漿質(zhì)量0.1%）植物復(fù)合蛋白酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1h 進(jìn)行酶解后， 用 800 目濾網(wǎng)過(guò)濾取濾液備用。

（2）加熱、發(fā)酵：將(1) 所取濾液迅速放入沸水中加熱到40℃后加入保加利亞乳酸桿菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.01%)、嗜熱鏈球菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.01%)、在密閉條件下發(fā)酵 36 小時(shí)。

（3）膜分離：將經(jīng)（2）發(fā)酵過(guò)的蠶沙液用10000 道爾頓膜超濾，分離出乳清溶液和蛋白溶液。

（4）吸附、酶氧化脫色：將經(jīng)（3）分離出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附5 min，然后過(guò)濾將活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液質(zhì)量0.3%) 脂肪氧合酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1 h進(jìn)行酶解。

（5）干燥：將經(jīng)（4）吸附、酶氧化脫色后的蠶沙蛋白溶液采用真空冷凍干燥制得白色蠶沙蛋白粉。凍干工藝參數(shù)：物料厚度8 mm，預(yù)凍溫度-35℃，預(yù)凍時(shí)間2h，升華時(shí)加熱板溫度45℃，干燥倉(cāng)工作壓力22Pa，解析時(shí)加熱板溫度60℃。

經(jīng)檢測(cè)，得到的蠶沙蛋白的提取率為85.2%，蠶沙葉蛋白得率為10.65%，蠶沙蛋白的顏色為白色，無(wú)腥味，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為58.84%。

實(shí)施例2

(1) 打漿、酶解、過(guò)濾：按蠶沙與水(g/ml)1 ：5 的比例加入水，用打漿機(jī)將蠶沙打漿5min，然后加入（蠶沙漿質(zhì)量0.3%）植物復(fù)合蛋白酶充分?jǐn)嚢韬箪o置2 h 進(jìn)行酶解后， 用2000 目濾網(wǎng)過(guò)濾取濾液備用。

（2）加熱、發(fā)酵：將(1) 所取濾液迅速放入沸水中加熱到45℃后加入保加利亞乳酸桿菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.03%)、嗜熱鏈球菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.03%)、在密閉條件下發(fā)酵48 小時(shí)。

（3）膜分離：將經(jīng)（2）發(fā)酵過(guò)的蠶沙液用50000 道爾頓膜超濾，分離出乳清溶液和蛋白溶液。

（4）吸附、酶氧化脫色：將經(jīng)（3）分離出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附10 min，然后過(guò)濾將活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液質(zhì)量0.5%) 脂肪氧合酶充分?jǐn)嚢韬箪o1-2 h進(jìn)行酶解。

（5）干燥：將經(jīng)（4）吸附、酶氧化脫色后的蠶沙蛋白溶液采用真空冷凍干燥制得白色蠶沙蛋白粉。凍干工藝參數(shù)：物料厚度9 mm，預(yù)凍溫度-40℃，預(yù)凍時(shí)間2.5 h，升華時(shí)加熱板溫度50℃，干燥倉(cāng)工作壓力26Pa，解析時(shí)加熱板溫度65℃。

經(jīng)檢測(cè)，得到的蠶沙蛋白的提取率為85.3%，蠶沙葉蛋白得率為10.68%，蠶沙蛋白的顏色為白色，無(wú)腥味，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為58.98%。

實(shí)施例3

(1) 打漿、酶解、過(guò)濾：按蠶沙與水(g/ml)1 ：5 的比例加入水，用打漿機(jī)將蠶沙打漿4min，然后加入（蠶沙漿質(zhì)量0.2%）植物復(fù)合蛋白酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1.5 h 進(jìn)行酶解后， 用 1500 目濾網(wǎng)過(guò)濾取濾液備用。

（2）加熱、發(fā)酵：將(1) 所取濾液迅速放入沸水中加熱到42℃后加入保加利亞乳酸桿菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.02%)、嗜熱鏈球菌((1) 所取濾液質(zhì)量0.02%)、在密閉條件下發(fā)酵 40 小時(shí)。

（3）膜分離：將經(jīng)（2）發(fā)酵過(guò)的蠶沙液用30000 道爾頓膜超濾，分離出乳清溶液和蛋白溶液。

（4）吸附、酶氧化脫色：將經(jīng)（3）分離出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附5-10min，然后過(guò)濾將活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液質(zhì)量0.4%) 脂肪氧合酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1.5 h 進(jìn)行酶解。

（5）干燥：將經(jīng)（4）吸附、酶氧化脫色后的蠶沙蛋白溶液采用真空冷凍干燥制得白色蠶沙蛋白粉。凍干工藝參數(shù)：物料厚度8 mm，預(yù)凍溫度-37℃，預(yù)凍時(shí)間2 h，升華時(shí)加熱板溫度47℃，干燥倉(cāng)工作壓力24Pa，解析時(shí)加熱板溫度62℃。

經(jīng)檢測(cè)，得到的蠶沙蛋白的提取率為85.6%，蠶沙葉蛋白得率為10.86%，蠶沙蛋白的顏色為白色，無(wú)腥味，蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為59.28%。

以上關(guān)于本發(fā)明的具體描述，僅用于說(shuō)明本發(fā)明而并非受限于本發(fā)明實(shí)施例所描述的技術(shù)方案，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，仍然可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改或等同替換。