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一種小鼠腎足細胞分離及培養(yǎng)方法與流程

文檔序號:12644517閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種小鼠腎足細胞細胞分離及培養(yǎng)方法,其特征在于,包括步驟:(a)腹腔注射2%戊巴比妥鈉處死小鼠,酒精消毒后取出小鼠腎臟組織,置于預(yù)冷無菌含雙抗的PBS緩沖液中浸泡洗滌,并剝離除去腎包膜;(b)機械解離腎臟組織后,預(yù)熱混合酶液消化,混合完全培養(yǎng)液終止消化;(c)采用差異過篩的方法獲得腎足細胞,將足細胞接種于處理后的細胞瓶中培養(yǎng);(d)將培養(yǎng)3d的細胞經(jīng)胰酶消化后再次篩網(wǎng)純化,離心棄上清,重懸接種于處理后的細胞瓶中;(e)細胞免疫熒光鑒定腎足突細胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠腎足細胞細胞分離及培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的小鼠為22±3g,6-8周齡的小鼠。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠腎足細胞細胞分離及培養(yǎng)方法,其特征在于,所述步驟b消化所用的消化酶液為預(yù)先在37℃預(yù)熱的混合液,消化時間為20-30min;所述混合液包括0.1%-0.2%(m/v)IV型膠原酶和0.05%-0.1%(m/v)II型膠原酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠腎足細胞細胞分離及培養(yǎng)方法,其特征在于,所述步驟b中混合完全培養(yǎng)液為含15%小鼠血清和1%雙抗的DMEM/F12和RPMI1640(1∶1~1∶1.5)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠腎足細胞細胞分離及培養(yǎng)方法,其特征在于,所述步驟c差異過篩的方法為將終止消化后的細胞懸液依次經(jīng)過80目,100目,400目的篩網(wǎng),分別收集400目的濾過液和400目篩網(wǎng)上的細胞,離心棄上清,完全培養(yǎng)液重懸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠腎足細胞細胞分離及培養(yǎng)方法,其特征在于,所述步驟c中細胞瓶的處理方法為3-5μg/cm2I型鼠尾膠原蛋白包被之后的細胞瓶。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠腎足細胞細胞分離及培養(yǎng)方法,其特征在于,所述步驟d的純化方法為將培養(yǎng)3d的細胞經(jīng)胰蛋白酶消化后,再次通過400目的篩網(wǎng),收集濾液,離心棄上清,重懸接種。

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