1.一種卡貝縮宮素的全固相制備方法,其包括如下步驟:
1)以固相合成樹脂為載體,通過連接受保護(hù)的氨基酸,脫除氨基保護(hù)基,再連接受保護(hù)的氨基酸的方法依次連接氨基和側(cè)鏈經(jīng)過保護(hù)的甘氨酸(Gly)、亮氨酸、脯氨酸(Pro)、半胱氨酸(Cys)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、異亮氨酸(Ile)、酪氨酸(Tyr),得到末端氨基經(jīng)過保護(hù)的線性八肽片段樹脂;
2)脫除末端氨基保護(hù)后,連接4-氯丁酸,得到全保護(hù)九肽片段樹脂;
3)脫除半胱氨酸巰基保護(hù)基,得到裸露巰基的九肽片段樹脂;
4)在DBU作用下,末端氯基團(tuán)與半胱氨酸側(cè)鏈巰基偶聯(lián)成環(huán),得到卡貝縮宮素肽樹脂;
5)裂解卡貝縮宮素肽樹脂,得到卡貝縮宮素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卡貝縮宮素的全固相制備方法,其中所述氨基經(jīng)過保護(hù)的甘氨酸選自Fmoc-Gly-OH;所述氨基經(jīng)過保護(hù)的亮氨酸選自Fmoc-Leu-OH;所述氨基和側(cè)鏈經(jīng)過保護(hù)的脯氨酸選自Fmoc-Pro-OH;所述氨基和側(cè)鏈經(jīng)過保護(hù)的半胱氨酸選自Fmoc-Cys(Mmt)-OH;所述氨基和側(cè)鏈經(jīng)過保護(hù)的天冬酰胺選自Fmoc-Asn(Trt)-OH;所述氨基和側(cè)鏈經(jīng)過保護(hù)的谷氨酰胺選自Fmoc-Gln(Trt)-OH;所述氨基和側(cè)鏈經(jīng)過保護(hù)的異亮氨酸選自Fmoc-Ile-OH;所述氨基和側(cè)鏈經(jīng)過保護(hù)的酪氨酸選自Fmoc-Tyr(Me)-OH。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的卡貝縮宮素的全固相制備方法,步驟1)中所述的固相合成方法是Fmoc固相多肽合成方法,選用的偶聯(lián)劑為DIPCDI+A或者DIPEA+A+B,其中A選自HOBt或HOAt,B選自PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU中的一種或多種;優(yōu)選地,偶聯(lián)劑中各成分的比例以摩爾比例計(jì)為DIPCDI:A=1.1~1.5:1.0~1.4,DIPEA:A:B=1.8~2.2:1.0~1.4:0.95~1.05;更優(yōu)選為DIPCDI:A=1.3:1.2,DIPEA:A:B=2.0:1.2:1.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的卡貝縮宮素的全固相制備方法,其中,步驟1)中所述的固相載體為Rink Amide樹脂Rink Amide-AM樹脂或Rink Amide-MBHA樹脂,優(yōu)選地,樹脂替代度為0.2-0.9mmol/g,更優(yōu)選0.4~0.6mmol/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的卡貝縮宮素的全固相制備方法,步驟3)的脫除試劑為三氟乙酸和三異丙基硅烷的二氯甲烷溶液,三氟乙酸濃度為2~5%,三異丙基硅烷濃度為3~8%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的卡貝縮宮素的全固相制備方法,步驟4)所述溶劑優(yōu)選為DMF或N-甲基吡咯烷酮,反應(yīng)時(shí)間為2-3小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的卡貝縮宮素的全固相制備方法,步驟5)采用的裂解試劑為TFA:TIS:H2O=85~95:2~8:2~8(V:V)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的卡貝縮宮素的全固相制備方法,步驟5)獲得產(chǎn)物后,還包括純化步驟,優(yōu)選所述純化步驟選自重結(jié)晶、反相高壓液相方法。