本發(fā)明屬于醫(yī)藥及保健食品領(lǐng)域，具體涉及一種苯丙酸苷類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

我國(guó)已成為糖尿病世界第一大國(guó)，目前我國(guó)的糖尿病患者超過(guò)1億，而糖尿病前期患者數(shù)量超過(guò)1.5億，這為數(shù)眾多的糖尿病前期患者中每年有10％的人轉(zhuǎn)變?yōu)檎嬲奶悄虿?，形?shì)十分嚴(yán)峻。糖尿病的大規(guī)模爆發(fā)和治療給國(guó)家和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)，因此必須采取有效措施來(lái)預(yù)防和有效治療。

外周組織對(duì)胰島素的抵抗是糖尿病發(fā)生發(fā)展的開始階段，在這一階段，肌肉、脂肪或肝臟細(xì)胞對(duì)胰島素產(chǎn)生抵抗，可發(fā)生在受體前、受體或受體后。胰島素抵抗也貫穿于整個(gè)糖尿病期間，直到最后胰島β細(xì)胞衰竭，無(wú)法產(chǎn)生胰島素。在胰島β細(xì)胞還沒(méi)有徹底衰竭前，如果某種物質(zhì)能夠恢復(fù)或促進(jìn)靶細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性，能夠促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝入和轉(zhuǎn)化，則該物質(zhì)可能就具有很好的抗糖尿病作用，也就可能有希望阻止或延緩將處于糖尿病前期的患者向真正的糖尿病轉(zhuǎn)變。

增加胰島素敏感性的抗糖尿病藥物有雙胍類和噻唑烷二酮類等，一方面這些藥物都有不同程度的副作用，比如噻唑烷二酮類容易引起血液稀釋，因引起心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)等。另一方面，更重要的是這些藥物均會(huì)隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)繼發(fā)性失效，無(wú)論是單一療法還是聯(lián)合治療，都沒(méi)能取得令人滿意的結(jié)果，我國(guó)有三分之二以上二型糖尿病患者的長(zhǎng)期血糖控制不達(dá)標(biāo)。因此，仍然需要不斷地尋找改善胰島素敏感性的抗糖尿病藥物。

天然產(chǎn)物是尋找新藥不可替代的重要源泉，其結(jié)構(gòu)多樣性和活性多樣性是合成產(chǎn)物無(wú)法比擬的。因此從植物或微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物中尋找具有高效低毒的先導(dǎo)化合物或新藥依然是一個(gè)重要途徑。民族藥是我國(guó)少數(shù)民族人民與疾病長(zhǎng)期斗爭(zhēng)中積累的寶貴財(cái)富，是中華文明的瑰寶。興安獨(dú)活(Heracleum dissectum)，也稱坎庫(kù)拉，屬菊科多年生草本，是東北鄂倫春族藥食兩用的野生植物，春夏季節(jié)其幼嫩的莖葉被當(dāng)?shù)厝擞米髅牢兜氖卟耸秤?，其根作為傳統(tǒng)的鄂族藥材用于祛風(fēng)除濕、止痛止瀉等。但目前對(duì)其化學(xué)成分和藥理活性的研究報(bào)道極少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種苯丙酸苷類化合物及其制備方法和應(yīng)用，能夠從興安獨(dú)活中提取分離出苯丙酸苷類化合物，該化合物能夠促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝入和轉(zhuǎn)化。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明苯丙酸苷類化合物分子式為C₂₆H₃₆O₁₃。

進(jìn)一步地，其結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明制備方法，包括以下步驟：

1)取興安獨(dú)活的干燥根進(jìn)行回流提取若干次，將提取液減壓濃縮，得到總浸膏或濃縮液；

2)將總浸膏混懸于水中，得到浸膏液，浸膏液或濃縮液經(jīng)乙酸乙酯萃取若干次后分離出有機(jī)層，剩余水層通過(guò)正丁醇萃取若干次后合并萃取液，減壓除去正丁醇得到正丁醇萃取層；

3)將正丁醇萃取層上樣于硅膠柱，以氯仿-甲醇系統(tǒng)作為洗脫液，按體積比(100:0)～(0:100)進(jìn)行梯度洗脫，對(duì)流出液進(jìn)行檢測(cè)，將洗脫液體積比為6:1的流份合并，除去溶劑，得到第一次過(guò)柱部分；

4)將第一次過(guò)柱部分上樣于反相硅膠層析柱，以甲醇-水系統(tǒng)作為洗脫液，按體積比(0:100)～(100:0)進(jìn)行梯度洗脫，將洗脫液體積比為75:30的流份合并，除去溶劑，得到第二次過(guò)柱部分；

5)將第二次過(guò)柱部分上樣于高效液相色譜分離柱，用流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，得到苯丙酸苷類化合物。

進(jìn)一步地，步驟1)的回流提取中采用甲醇、水或體積分?jǐn)?shù)10～95％的乙醇作為提取劑，興安獨(dú)活的干燥根與提取劑的質(zhì)量體積比為1kg：(1～8)L；當(dāng)提取劑為甲醇或體積分?jǐn)?shù)10～95％的乙醇時(shí)，將得到的提取液中溶劑回收得到總浸膏；當(dāng)提取劑為水時(shí)，將提取液的體積濃縮至六分之一到十分之一，得到濃縮液。

進(jìn)一步地，步驟1)中提取次數(shù)為1～6次，每次1～4小時(shí)。

進(jìn)一步地，步驟2)中總浸膏和水的體積比為1:1～1:5。

進(jìn)一步地，步驟2)中直接經(jīng)過(guò)乙酸乙酯萃??；或者先依次經(jīng)石油醚和氯仿萃取后，再經(jīng)過(guò)乙酸乙酯萃??；每次萃取均是等體積萃取；每種溶劑分別萃取1～6次。

進(jìn)一步地，步驟3)中梯度洗脫后每300～800mL收集一個(gè)流份；步驟4)中梯度洗脫后每200～500mL收集一個(gè)流份；步驟3)和步驟4)中對(duì)流出液均是進(jìn)行TLC檢測(cè)；步驟5)中等度洗脫的流速為3～6mL/min。

進(jìn)一步地，步驟5)中流動(dòng)相是甲醇-0.5％醋酸水系統(tǒng)或乙腈-0.5％醋酸水系統(tǒng)，甲醇-0.5％醋酸水系統(tǒng)中甲醇、水和醋酸的體積比為45：55：0.5；乙腈-0.5％醋酸水系統(tǒng)中乙腈、水和醋酸的體積比為42：58：0.5。

如上所述的苯丙酸苷類化合物在制備抗糖尿病藥物和/或保健品中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明中的苯丙酸苷類化合物對(duì)脂肪細(xì)胞的甘油三酯的蓄積有促進(jìn)作用，意即有將細(xì)胞外葡萄糖攝入細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化為甘油三酯的促進(jìn)作用，經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明化合物在3μM時(shí)就有顯著性促進(jìn)作用，具有濃度依賴關(guān)系，且該化合物具有高效、低毒的特點(diǎn)，有望開發(fā)成新的抗糖尿病藥物，或者用于制備具有預(yù)防和治療糖尿病作用的保健食品。

本發(fā)明中得到的苯丙酸苷類化合物活性較好，但在植物中的含量不高，且極性較大，并且呈現(xiàn)一定的酸性，用常規(guī)的色譜方法難以富集并分離得到。本發(fā)明中采用特殊的親水色譜柱，并在流動(dòng)相中加一定量的醋酸以改善分離，能將其很好地分離純化得到，具有方法簡(jiǎn)便有效，得到的化合物純度高的特點(diǎn)。

【附圖說(shuō)明】

圖1為本發(fā)明化合物1的¹H-NMR圖譜；

圖2為本發(fā)明化合物1的¹³C-NMR圖譜；

圖3為本發(fā)明化合物1的DEPT圖譜；

圖4為本發(fā)明化合物1的¹H-¹H COSY圖譜；

圖5為本發(fā)明化合物1的HMQC圖譜；

圖6為本發(fā)明化合物1的HMBC圖譜；

圖7為本發(fā)明化合物1的ROESY圖譜；

圖8為本發(fā)明化合物1的HR-ESI-MS圖譜。

【具體實(shí)施方式】

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不局限于此。

本發(fā)明苯丙酸苷類化合物的制備方法，包括以下步驟：

1)取一定質(zhì)量(kg)的興安獨(dú)活干燥根，用體積為興安獨(dú)活干燥根質(zhì)量1～8倍量的甲醇、體積分?jǐn)?shù)為10～95％的乙醇或水(L)在各自沸點(diǎn)附近加熱回流提取1～6次，每次1～4小時(shí)，當(dāng)提取劑為甲醇或體積分?jǐn)?shù)10～95％的乙醇時(shí)，合并提取液減壓回收除去溶劑，得到總浸膏，當(dāng)提取劑為水時(shí)，合并提取液并將其體積濃縮至六分之一到十分之一，得到濃縮液；

2)將總浸膏混懸于水中，總浸膏和水的體積比為1:1～1:5，得到浸膏液，浸膏液或濃縮液分別依次用等體積的有機(jī)溶劑萃取，其中，第一次萃取時(shí)用石油醚對(duì)浸膏液或濃縮液進(jìn)行等體積萃取，之后每次萃取均是分離出上一次萃取后的有機(jī)層，將剩余的水層用有機(jī)溶劑等體積進(jìn)行下一次萃??；每種溶劑各萃取1～6次，合并萃取液，常壓或減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，分別得到各萃取層和水層。有機(jī)溶劑包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等，且萃取次序?yàn)橄扔脴O性小的溶劑，再用極性大的有機(jī)溶劑，石油醚和氯仿可以省去。

3)取正丁醇萃取層，通過(guò)采用柱層析純化等分離方法，得到本發(fā)明的苯丙酸苷類化合物。

柱層析包括以下三個(gè)階段：

第一階段：將正丁醇萃取層上樣于硅膠柱，以氯仿-甲醇系統(tǒng)作為洗脫液，按體積比(100:0)～(0:100)進(jìn)行梯度洗脫，每300～800mL收集一個(gè)流份，對(duì)流出液進(jìn)行TLC檢測(cè)，合并相同流份，共得到30個(gè)流份，分別命名為FrB1-FrB30，常壓或減壓蒸干溶劑，取其中的FrB26流份，即洗脫液體積比為6:1的流份，作為第一次過(guò)柱部分；

第二階段：將第一次過(guò)柱部分，上樣于反相硅膠層析柱，以甲醇-水系統(tǒng)作為洗脫液，按體積比(0:100)～(100:0)進(jìn)行梯度洗脫，每200～500mL收集一個(gè)流份，對(duì)流出液進(jìn)行TLC檢測(cè)，合并相同流份，減壓除去溶劑，得到3個(gè)亞流份，分別命名為FrB26.1-FrB26.3，將FrB26.2流份，即洗脫液體積比為75:30的流份，作為第二次過(guò)柱部分；

第三階段：將第二次過(guò)柱部分，上樣于高效液相色譜分離柱，分離得到苯丙酸苷類化合物。

其中，高效液相色譜分離柱為江蘇漢邦的Megres C18柱，高效液相色譜分離是用示差折光檢測(cè)器，以甲醇-0.5％醋酸水系統(tǒng)或乙腈-0.5％醋酸水系統(tǒng)作為流動(dòng)相，按3～6mL/min進(jìn)行等度洗脫。甲醇-0.5％醋酸水系統(tǒng)中甲醇、水和醋酸的體積比為45：55：0.5；乙腈-0.5％醋酸水系統(tǒng)中乙腈、水和醋酸的體積比為42：58：0.5。

本發(fā)明中得到的苯丙酸苷類化合物，其結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明中的苯丙酸苷類化合物在制備抗糖尿病藥物和/或保健品中的應(yīng)用：本發(fā)明在對(duì)興安獨(dú)活進(jìn)行化學(xué)成分和藥理活性的研究中發(fā)現(xiàn)，從中分離得到的苯丙酸苷類化合物具有很好的改善脂肪細(xì)胞胰島素敏感性的作用，能夠顯著促進(jìn)脂肪細(xì)胞攝入葡萄糖并轉(zhuǎn)化為甘油三酯，因此，有望將其開發(fā)成具有改善胰島素抵抗的抗糖尿病藥物和/或保健品。

實(shí)施例1

1、苯丙酸苷類化合物1的提取和分離

1)取坎庫(kù)拉干燥根6kg，用體積量為坎庫(kù)拉干燥根質(zhì)量5倍的甲醇加熱回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液減壓回收溶劑，得總浸膏；

2)將總浸膏混懸于4倍量水中，用石油醚等體積萃取4次，然后經(jīng)氯仿，乙酸乙酯和正丁醇等體積萃取4次，萃取層減壓除去溶劑后分別得到石油醚層，氯仿層，乙酸乙酯層，正丁醇層。

3)取正丁醇萃取層100g，首先通過(guò)采用硅膠柱色譜，氯仿/甲醇按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每500mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后共得到30個(gè)流份(FrB1-FrB30)。

4)其中第26個(gè)流份FrB26(7.0g)經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，用MeOH/H₂O按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每200mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后得到3個(gè)流份(FrB26.1-FrB26.3)。

5)然后FrB26.2用半制備高效液相色譜純化，采用Megres C18柱，流動(dòng)相是MeOH/0.5％HAc水溶液(45:55,v/v)，流速為3.0mL/min，得到化合物1(t_R 17分鐘)。

本發(fā)明通過(guò)理化常數(shù)和現(xiàn)代波譜學(xué)技術(shù)手段(HR-ESI-MS，1D-NMR，2D-NMR)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)，化合物1為drupanin-4-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside?；衔?的結(jié)構(gòu)鑒定過(guò)程如下所述。

2、苯丙酸苷類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

1)化合物1為淡黃色粉末；其圖8的HR-ESI-MS m/z 579.2070[M+Na]⁺(calcd579.2048)，確定分子式為C₂₆H₃₆O₁₃。在圖1的¹H-NMR中，化學(xué)位移δ_H 7.41(1H,dd,J＝8.5,1.9Hz)，7.31(1H,d,J＝1.9Hz)和7.20(1H,d,J＝8.5Hz)的質(zhì)子信號(hào)顯示該化合物中含有一個(gè)1,2,4-三取代苯環(huán)結(jié)構(gòu)，質(zhì)子δ_H 7.56(1H,d,J＝15.9Hz)和6.29(1H,d,J＝15.9Hz)表明分子中存在一個(gè)反式雙鍵。在圖2的¹³C NMR譜和圖3的DEPT譜中，共有26個(gè)碳，包括1個(gè)羧基碳，2個(gè)芳香季碳，1個(gè)連氧芳香季碳，6個(gè)SP²雜化次甲基碳，1個(gè)SP²雜化季碳，8個(gè)連氧次甲基碳，2個(gè)連氧亞甲基碳，2個(gè)芳香次甲基碳，1個(gè)亞甲基碳和2個(gè)甲基碳。在圖2的¹³CNMR譜和圖6的HMBC譜中，羧基碳δ_C 170.1和兩個(gè)雙鍵質(zhì)子δ_H 7.56(1H,d,J＝15.9Hz)及6.29(1H,d,J＝15.9Hz)相關(guān)，表明分子中存在一個(gè)桂皮酸的結(jié)構(gòu)。另外，季碳δ_C 133.8和δ_C 123.4(相應(yīng)的氫信號(hào)是δ_H 5.32,1H,t,J＝7.3Hz)相關(guān)，說(shuō)明分子中還存在一個(gè)三取代雙鍵的結(jié)構(gòu)片段。在¹H NMR譜和圖4的¹H-¹H COSY譜中，質(zhì)子δ_H 3.38(2H,m)和SP²雜化的次甲基δ_H5.32(1H,t,J＝7.3Hz)相關(guān)，HMBC譜中兩個(gè)甲基質(zhì)子δ_H 1.71(3H,s)and 1.73(3H,s)和季碳δ_C133.8相關(guān)，以上信息揭示分子中存在一個(gè)異戊烯基片段，且該片段連接在桂皮酸的C-3位，因?yàn)镠MBC譜中可觀察到異戊烯基片段中的亞甲基質(zhì)子δ_H 3.38(2H,m)和雙鍵質(zhì)子5.32(1H,t,J＝7.4Hz)與苯環(huán)的C-3位碳δ_C 132.6相關(guān)?；衔?的核磁數(shù)據(jù)與化合物drupanin的十分相似。

在¹H和¹³C NMR譜中，兩個(gè)端基質(zhì)子δ_H 4.94(1H,d,J＝7.3Hz)及4.35(1H,d,J＝7.7Hz)和他們相應(yīng)的碳信號(hào)δ_C 101.9，104.7表明分子中存在兩個(gè)糖單位。酸水解后用GC分析表明這兩分子糖為葡萄糖，且構(gòu)型為β型，這從端基質(zhì)子的偶合常數(shù)也能判定，分別為7.3和7.7Hz。外側(cè)葡萄糖的1位連在內(nèi)側(cè)葡萄糖的6位，這可從HMBC譜中得到驗(yàn)證，外側(cè)葡萄糖的端基質(zhì)子δ_H 4.35(1H,d,J＝7.7Hz,H-1″)與內(nèi)側(cè)葡萄糖的6位亞甲基碳δ_C 69.8(C-6′)相關(guān)。同時(shí)，內(nèi)側(cè)葡萄糖的端基質(zhì)子δ_H 4.94(1H,d,J＝7.3Hz,H-1′)與苯環(huán)上的碳δ_C 158.4(C-4)相關(guān)，表明糖鏈連在苯環(huán)的4位。其它位置的連接均通過(guò)綜合解析2D-NMR包括圖5的HMQC,圖6的HMBC,圖4的¹H-¹H COSY和圖7的ROESY得以確定。因此，化合物1鑒定為drupanin-4-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside，即3-異戊烯基桂皮酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。是一個(gè)未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物。其結(jié)構(gòu)式如下：

其核磁數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1本發(fā)明中化合物1的¹H NMR和¹³C NMR數(shù)據(jù)

下面對(duì)本發(fā)明中所分離鑒定的化合物1進(jìn)一步做藥理活性檢測(cè)。

3、脂肪細(xì)胞甘油三酯脂肪蓄積實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)方法：

3T3-L1細(xì)胞(5.0×10⁴cells/well)接種于48孔板中，24小時(shí)后，加入分化培養(yǎng)基(含有10％FBS的DMEM(high glucose:4500mg/L，1μM的地塞米松，0.5mM的IBMX和5μg/mL的胰島素)培養(yǎng)3天，然后培養(yǎng)基換成維持培養(yǎng)基(含有10％FBS的DMEM(high glucose:4500mg/L和5μg/mL的胰島素)再培養(yǎng)2天后，更換新鮮維持培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2天，在第8天，吸去培養(yǎng)基，每孔加入200μL蒸餾水，超聲破碎，用甘油三酯液體試劑盒測(cè)定細(xì)胞破碎液中的TG含量。樣品溶于DMSO，在每次更換培養(yǎng)基時(shí)加入，其中DMSO的終濃度為0.1％，Troglitazone用作陽(yáng)性對(duì)照化合物。數(shù)值表示為與對(duì)照組相比的TG含量增加值MEAN±SEM(n＝4).*p<0.05,**p<0.01(與對(duì)照組相比)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4.化合物1對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞的TG蓄積作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表4中的數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明中的化合物1具有很好的促進(jìn)脂肪細(xì)胞蓄積甘油三酯的作用，化合物1在3μM時(shí)就有顯著性促進(jìn)作用(p<0.01)，且隨著濃度的增加，促進(jìn)作用也隨之增強(qiáng)，意即具有濃度依賴關(guān)系。

結(jié)合以上實(shí)驗(yàn)及其實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明本發(fā)明中的苯丙酸苷類化合物具有極強(qiáng)的改善脂肪細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性，促進(jìn)對(duì)葡萄糖的攝入和轉(zhuǎn)化，因此有望開發(fā)為新的抗糖尿病藥物；或者用于制備預(yù)防和治療糖尿病的保健食品。

實(shí)施例2

1)取坎庫(kù)拉干燥根6kg，用體積量為坎庫(kù)拉干燥根質(zhì)量3倍的95％乙醇加熱回流提取5次，每次1小時(shí)，合并提取液減壓回收溶劑，得總浸膏；

2)將總浸膏混懸于2倍量水中，用乙酸乙酯等體積萃取1次，然后經(jīng)正丁醇等體積萃取6次，萃取層減壓除去溶劑后分別得到乙酸乙酯層，正丁醇層。

3)取正丁醇萃取層100g，首先通過(guò)采用硅膠柱色譜，氯仿/甲醇按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每500mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后共得到30個(gè)流份(FrB1-FrB30)。

4)其中第26個(gè)流份FrB26(7.0g)經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，用MeOH/H₂O按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每200mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后得到3個(gè)流份(FrB26.1-FrB26.3)。

5)然后FrB26.2用半制備高效液相色譜純化，采用Megres C18柱，流動(dòng)相是MeOH/0.5％HAc水溶液(45:55,v/v)，流速為3.0mL/min，得到化合物1(t_R 17分鐘)。

實(shí)施例3

1)取坎庫(kù)拉干燥根6kg，用體積量為坎庫(kù)拉干燥根質(zhì)量8倍的水加熱回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液減壓回收溶劑，得總浸膏；

2)將總浸膏混懸于1倍量水中，用乙酸乙酯等體積萃取2次，然后經(jīng)正丁醇等體積萃取3次，萃取層減壓除去溶劑后分別得到乙酸乙酯層，正丁醇層。

3)取正丁醇萃取層100g，首先通過(guò)采用硅膠柱色譜，氯仿/甲醇按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每800mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后共得到30個(gè)流份(FrB1-FrB30)。

4)其中第26個(gè)流份FrB26(7.0g)經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，用MeOH/H₂O按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每500mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后得到3個(gè)流份(FrB26.1-FrB26.3)。

5)然后FrB26.2用半制備高效液相色譜純化，采用Megres C18柱，流動(dòng)相是乙腈-0.5％醋酸水系統(tǒng)(42:58,v/v)，流速為3.0mL/min，得到化合物1(t_R 18.6分鐘)。

實(shí)施例4

1)取坎庫(kù)拉干燥根6kg，用體積量為坎庫(kù)拉干燥根質(zhì)量4倍的10％乙醇加熱回流提取4次，每次2小時(shí)，合并提取液減壓回收溶劑，得總浸膏；

2)將總浸膏混懸于5倍量水中，用石油醚等體積萃取2次，然后經(jīng)氯仿，乙酸乙酯和正丁醇等體積萃取2次，萃取層減壓除去溶劑后分別得到石油醚層，氯仿層，乙酸乙酯層，正丁醇層。

3)取正丁醇萃取層100g，首先通過(guò)采用硅膠柱色譜，氯仿/甲醇按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每300mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后共得到30個(gè)流份(FrB1-FrB30)。

4)其中第26個(gè)流份FrB26(7.0g)經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，用MeOH/H₂O按體積比(v/v)為100:0～0:100進(jìn)行梯度洗脫，每400mL收集一個(gè)流份，經(jīng)TLC檢識(shí)合并相同流份后得到3個(gè)流份(FrB26.1-FrB26.3)。

5)然后FrB26.2用半制備高效液相色譜純化，采用Megres C18柱，流動(dòng)相是乙腈-0.5％醋酸水系統(tǒng)(42:58,v/v)，流速為3.0mL/min，得到化合物1(t_R 18.6分鐘)。

對(duì)比例1

將步驟5)中的流動(dòng)相換成其它流動(dòng)相或不同比例的相同流動(dòng)相(或者色譜柱替換成一般的反相色譜柱)，其它步驟和條件與實(shí)施例1相同。發(fā)現(xiàn)無(wú)法分離出苯丙酸苷類化合物。

本發(fā)明公開了一種苯丙酸苷類化合物及其應(yīng)用。所述的苯丙酸苷類化合物是從鄂倫春族藥食兩用的植物坎庫(kù)拉中提取分離得到，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)該類化合物對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞的甘油三酯蓄積有促進(jìn)作用，意即對(duì)細(xì)胞攝入葡萄糖有促進(jìn)作用，且該類化合物從可食用野生植物中提取分離得到，具有高效低毒的特點(diǎn)，有望開發(fā)成具有抗糖尿病作用的藥物和/或保健品。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。