本發(fā)明屬于天然藥物領域，特別是涉及一種抗腫瘤活性化合物的制備方法。

背景技術：
云南藤黃(GarciniayunnanensisHu)是我國的特有植物，分布于云南省西南部，生于丘陵、坡地的雜木林中，海拔1,300米至1,600米。研究表明其主要成分oblongifolinC和guttiferoneK具有良好的藥理活性。WafaaHamed等(J.Nat.Prod.2006,69:774-777)從Garciniaoblongifolia的樹皮(500g)中分離得到化合物oblongifolinC(110mg，得率：0.022％)，其采用乙酸乙酯浸泡提取，兩次硅膠柱層析分離，以庚烷-乙酸乙酯混合溶液進行洗脫，采用制備液相以乙腈-水-0.1％甲酸混合溶液洗脫進行純化，制得。GangXu等(J.Agric.FoodChem.2008,56(23):11144-11150)從Garciniayunnanensis的果皮(9.0kg)中分離得到化合物oblongifolinC(9.375g換算所得產(chǎn)量，得率：0.10％)，其采用丙酮浸泡提取,提取物經(jīng)娃膠柱層析分離，三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮依次洗脫，三氯甲烷洗脫部位再進行硅膠柱層析分離，正己烷-丙酮混合溶液進行梯度洗脫，洗脫液再采用制備液相經(jīng)反相C18柱純化制得。Sheng-XiongHuang等(J.Nat.Prod.2009，72:130-135)從Garciniaoblongifolia的樹皮(5.4kg)中分離得到化合物oblongifolinC(140mg換算所得產(chǎn)量，得率：0.003％)，其采用丙酮浸泡提取，提取物水混懸后以三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取部位用硅膠柱層析分離，以正己烷-丙酮混合溶液進行梯度洗脫，洗脫液再采用制備液相經(jīng)反相C18柱以甲醇-水混合溶液進行梯度洗脫，再經(jīng)過凝膠LH-20柱以甲醇進行洗脫，再采用制備液相以含0.3％甲酸的乙腈-0.3％甲酸的水混合溶液為流動相進行洗脫，純化，制得。ShugengCao等(J.Nat.Prod.2007,70:686-688)從Rheediacalcicola的果實(130g)中分離得到化合物guttiferoneK(1.32g換算所得產(chǎn)量，得率：1.02％)，其采用乙醇滲濾提取，回收溶劑后提取物用甲醇-水(9:1)混懸，以正己烷萃取。甲醇-水層稀釋為70％甲醇溶液，再用二氯甲烷萃取。二氯甲烷層回收有機溶劑后，殘渣用甲醇復溶，經(jīng)C18固相萃取柱，后采用制備液相以甲醇-水(85:15)洗脫，制得。MilenaMasullo等(J.Agric.FoodChem.2008，56(13):5205-5210)從Garciniacambogia的果實(200g)中分離得到化合物guttiferoneK(1.26g換算所得產(chǎn)量，得率：0.63％)，其采用乙醇浸 泡提取20天，回收有機溶劑后，提取物以水混懸，用二乙醚萃取，二乙醚萃取物再采用半制備高效液相經(jīng)反相ODS色譜柱分離純化，以含0.1％三氟乙酸的水-含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液為洗脫液洗脫，純化，制得。GangXu等(J.Agric.FoodChem.2008，56(23):11144-11150)從Garciniayunnanensis的果皮(9.0kg)中分離得到化合物guttiferoneK(5.625g換算所得產(chǎn)量，得率：0.06％)，其采用丙酮浸泡提取，提取物經(jīng)硅膠柱層析分離，三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮依次洗脫，氯仿洗脫部位再進行硅膠柱層析分離，正己烷-丙酮混合溶液進行梯度洗脫，洗脫液再經(jīng)過硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮混合溶液進行梯度洗脫，后再采用制備液相經(jīng)反相C18柱，以乙腈-0.1％乙酸水為流動相洗脫，純化，制得。Huiyang等(J.Agric.FoodChem.2010,58(8):4749-4755)從GarciniaIivingstonei果肉(2.8kg)中分離得到化合物guttiferoneK(21.15mg換算所得產(chǎn)量，得率：0.00076％)，其采用甲醇浸泡提取，回收有機溶劑后用水混懸，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯萃取部位經(jīng)兩次凝膠SephadexLH-20柱層析分離，用甲醇洗脫，后再采用制備液相進行純化制得。GiovannaR.Almanza等(Nat.Prod.Comm.2011,6(9):1269-124)從Rheediaacuinata的莖皮(1500g)中分離得到化合物guttiferoneK(446mg，得率：0.03％)，其采用石油醚浸泡提取后，藥渣再經(jīng)二氯甲烷浸泡提取，二氯甲烷提取物再經(jīng)減壓液相柱色譜(VLC)純化，以二氯甲烷-石油醚及甲醇-二氯甲烷為流動相依次進行梯度洗脫，洗脫液在經(jīng)多次柱層析，后經(jīng)重結晶純化制得。之前本發(fā)明人申請的專利(徐宏喜等，抗腫瘤活性化合物的制備方法，申請?zhí)枺?01310410325.2，公開號：103626644A)從GarciniayunnanensisHu果皮(9.0kg)中分離得到guttiferoneK(5.625g換算所得產(chǎn)量，得率：0.06％)，采用甲醇、乙醇、丙酮或丁酮浸泡提取，提取物經(jīng)硅膠柱層析分離，三氯甲烷洗脫，再經(jīng)MCI柱或大孔樹脂柱層析分離，以乙醇-水的混合溶液進行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)中壓ODS柱柱層析分離，以乙醇-水的混合溶液進行梯度洗脫，后采用半制備高效液相經(jīng)反相ODS色譜柱分離純化，以等比例的甲醇與乙腈的混合溶液再與0.1％甲酸水的混合溶液進行梯度洗脫，純化制得。

技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的旨在提供一種利用pH區(qū)帶高速逆流色譜法快速大量制備兩種來源于云南藤黃的抗腫瘤化合物的方法，其彌補了現(xiàn)有技術中存在的固態(tài)支持物或載體的不可逆吸附、損耗和變性等缺點，使分離回收率提高，且耗時短、操作簡單、得率高。具體地說，本發(fā)明的第一方面是提供了一種式(Ⅰ)化合物的制備方法，所述方法包括 如下步驟：(a)將云南藤黃果實、枝或葉粉末用60％以上乙醇、甲醇或丙酮等溶劑室溫滲漉提取或冷凝回流提取，減壓濃縮提取液至無有機溶劑味，得浸膏A；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相，對浸膏C采用高速逆流色譜分離，待所有餾分洗脫結束后，再用等量的浸膏C經(jīng)上相溶解后進樣，通過高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，采用Waterse2695高效液相色譜儀在如下色譜條件下檢測分析：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D：0.1％甲酸水，梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集合并含有目標化合物的流份，減壓、濃縮，干燥。在一優(yōu)選例中，所述步驟(a)為：將云南藤黃果實粉末用95％乙醇室溫滲漉提取，減壓濃縮95％乙醇提取液至無醇味，得浸膏A。本發(fā)明第二方面是提供了式(Ⅱ)化合物的制備方法，所述方法包括如下步驟：(a)將云南藤黃果實、枝或葉粉末用60％以上乙醇、甲醇或丙酮等溶劑室溫滲漉提取或冷凝回流提取，減壓濃縮提取液至無有機溶劑味，得浸膏A；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1,v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相，對浸膏C采用高速逆流色譜分離，待所有餾分洗脫結束后，再用等量的浸膏C經(jīng)上相溶解后進樣，通過高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，采用Waterse2695高效液相色譜儀在如下色譜條件下檢測分析：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D：0.1％甲酸水，梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集合并含有目標化合物的流份，減壓、濃縮，得粗品D；(e)以正己烷:叔丁基甲醚:95％乙醇:水(7:3:7.5:2.5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.08％三乙胺作為流動相，對粗品D采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件同(d)，收集合并含有目標化合物的流份；(f)對上述(e)所得含有目標化合物的流份，采用與(e)相同的高速逆流色譜分離條件純化，紫外檢測器檢測，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件同(d)，收集合并含有目標化合物的流份，減壓、濃縮、干燥。在一優(yōu)選例中，所述步驟(a)為：將云南藤黃果實粉末用95％乙醇室溫滲漉提取，減壓濃縮95％乙醇提取液至無醇味，得浸膏A。本發(fā)明各個方面的細節(jié)將在隨后的章節(jié)中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本發(fā)明的特點、目的和優(yōu)勢將更為明顯。附圖說明圖1是本發(fā)明實施例1粗品D的HSCCC-UV檢測圖譜；圖2是本發(fā)明實施例1的HPLC-UV檢測圖譜；圖3是本發(fā)明實施例1的HPLC-UV檢測圖譜；圖4是本發(fā)明實施例1的HPLC-UV檢測圖譜；圖5是本發(fā)明實施例5的HSCCC-UV檢測圖譜；圖6是本發(fā)明實施例5的HSCCC-UV檢測圖譜；圖7是本發(fā)明實施例5的HPLC-UV檢測圖譜；圖8是本發(fā)明實施例5的HPLC-UV檢測圖譜；圖9是本發(fā)明實施例5的HPLC-UV檢測圖譜。具體實施方式本發(fā)明所述的，可用本發(fā)明的方法快速、大量制備的抗腫瘤化合物，是從云南藤黃果實中提取獲得的，其具有如下化學結構式：簡而言之，本發(fā)明的方法是將分離的溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中充分搖勻后靜置分層，上相加入保留酸作為固定相，下相加入洗脫堿作為流動相。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解浸膏C進樣，再泵入下相洗脫，待流動相開始流出色譜柱時，收集分離物，將不同成分分別收集，待所有成分洗脫結束后，再將等量的浸膏C經(jīng)上相溶解后進樣，通過逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，高效液相檢測分析，收集合并含有目標化合物的流份，減壓濃縮， 分離得到純度﹥98％的化合物oblongifolinC及粗品D。粗品D再經(jīng)過兩次pH區(qū)帶逆流色譜的純化后，得到純度﹥99％的化合物guttiferoneK。本發(fā)明首次采用連續(xù)pH曲帶高速逆流色譜進樣洗脫模式(即連續(xù)兩次進樣)，通過增大了進樣量，可從354.9g云南藤黃果實中快速大量制備抗腫瘤活性化合物oblongifolinC(8.37g換算所得產(chǎn)量，得率：2.36％)和guttiferoneK(7.65g換算所得產(chǎn)量，得率：2.16％)。由此可見，本發(fā)明的方法的得率要遠高于現(xiàn)有技術中已有方法的得率。而且，其還彌補了現(xiàn)有方法存在的過程繁瑣，耗時長且伴隨有樣品損失等諸多缺點。下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數(shù)、比率、比例、或份數(shù)按重量計。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。本發(fā)明提到的上述特征，或實施例提到的特征可以任意組合。本專利說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。制備抗腫瘤化合物oblongifolinC實施例1(a)將云南藤黃果實粉末359.4g(2014年6月采自云南省德宏州，植物樣本由上海中醫(yī)藥大學張紅梅博士鑒定，并留樣于上海中醫(yī)藥大學中藥創(chuàng)新實驗室，標號為CMED-0477)用30L95％乙醇滲漉提取，合并95％乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味得浸膏A206.9g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B62.9g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C31.0g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相 分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，HSCCC-UV圖譜如圖1所示，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件為：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有目標化合物的流份(185-250min，475-534min)，減壓濃縮，得純度﹥98％的化合物oblongifolinC1.080g?；衔飋blongifolinC的HPLC-UV色譜圖及相對峰面積數(shù)據(jù)如下：UV245nm(圖2)峰號保留時間面積相對峰面積％高度積分類型116.013879800.745848bb221.4081177542099.26607558bb表1UV280nm(圖3)峰號保留時間面積相對峰面積％高度積分類型18.081516820.711949bb216.018651970.904631bb321.409711661998.38352502bb表2UV351nm(圖4)峰號保留時間面積相對峰面積％高度積分類型12.78179790.092666bb221.409882106499.89462576bb324.55521650.02404bb表3化合物oblongifolinC的結構鑒定數(shù)據(jù)如下：EI-MS:670[M]+；HRESI-MS:693.4147[M+Na]+；[α]20D(c＝0.21,CHCl3):+14.5；UV(EtOH):λmax(logε)230(sh),282(3.93),356(sh)nm；IR(CHCl3):νmax3535,3338,2927,1727,1646,1611,1523,1442,1383,1290,1215,1114cm-1；H1-NMR(600MHzinCD3OD+0.1％TFA-d)及C13-NMR(150MHzinCD3OD+0.1％TFA-d)數(shù)據(jù)見表4所示。表4化合物oblongifolinC的H1-NMR、C13-NMR數(shù)據(jù)實施例2(a)將云南藤黃果實粉末300.6g用30L60％乙醇冷凝回流提取，合并60％乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味得浸膏A186.2g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B52.4g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C25.8g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件為：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有目標化合物的流份(185-250min，475-534min)，減壓濃縮，得純度﹥98％的化合物oblongifolinC1.012g。實施例3(a)將云南藤黃果實粉末320.2g用30L甲醇滲漉提取，合并甲醇提取液，減壓濃縮至 無醇味得浸膏A183.7g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B55.8g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C26.4g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件為：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有目標化合物的流份(185-250min，475-534min)，減壓濃縮，得純度﹥98％的化合物oblongifolinC1.107g。實施例4(a)將云南藤黃果實粉末350.2g用30L丙酮冷凝回流提取，合并丙酮提取液，減壓濃縮至無酮味得浸膏A198.7g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B60.8g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C30.2g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整 個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件為：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有目標化合物的流份(185-250min，475-534min)，減壓濃縮，得純度﹥98％的化合物oblongifolinC1.004g。制備抗腫瘤化合物guttiferoneK實施例5(a)將云南藤黃果實粉末359.4g用30L95％乙醇滲漉提取，合并95％乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味得浸膏A206.9g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B62.9g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C31.0g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，HSCCC-UV圖譜如圖1所示，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有所述化合物的流份(135-170min，420-460min)，減壓濃縮，得粗品D1.376g。(e)以正己烷:叔丁基甲醚:95％乙醇:水(7:3:7.5:2.5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上 相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.08％三乙胺作為流動相，對上述粗品D1.376g采用高速逆流色譜分離，色譜分離檢測條件與(d)所示相同，HSCCC-UV圖譜如圖5所示，收集含有目標化合物的流份(90-170min)，減壓濃縮，得目標化合物流份1.051g。(f)1.051g含有目標化合物的流份，采用上述(e)相同的逆流色譜分離檢測條件純化，HSCCC-UV圖譜如圖6所示，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮，得純度﹥99％的化合物guttiferoneK978mg。化合物guttiferoneK的HPLC-UV色譜圖及相對峰面積數(shù)據(jù)如下：UV245nm(圖7)峰號保留時間面積相對峰面積％高度積分類型18.432543190.265021bb29.715414210.202490bb313.0212067526199.101264857bb414.081911500.446653bb表5UV280nm(圖8)峰號保留時間面積相對峰面積％高度積分類型18.439358410.282460bb29.733242820.192055bb312.657121520.091835bb413.0221270743599.03771752bb514.103518360.403787bb表6UV351nm(圖9)峰號保留時間面積相對峰面積％高度積分類型16.25672940.051069bb213.0221538610499.50943752bb314.068693580.455239bb表7化合物guttiferoneK的結構鑒定數(shù)據(jù)如下：HRFABMS:603.3712[M+H]+；[α]23D(c＝0.35,CHCl3):-2；UV(MeOH):λmax(logε)241(sh),255(4.54),325(4.14)nm；IR(film):νmax3348,2968,2916,2857,1728,1670,1640,1602,1542,1519,1440,1376,1289,1191,1116cm-1；H1-NMR(500MHzinCD3OD)及C13-NMR(125MHzinCD3OD)數(shù)據(jù)見表8所示。表8化合物guttiferoneK的H1-NMR、C13-NMR數(shù)據(jù)實施例6(a)將云南藤黃果實粉末300.6g用30L60％乙醇冷凝回流提取，合并60％乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味得浸膏A186.2g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B52.4g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C25.8g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，HSCCC-UV圖譜如圖1所示，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有所述化合物的流份(135-170min，420-460min)，減壓濃縮，得粗品D1.405g。(e)以正己烷:叔丁基甲醚:95％乙醇:水(7:3:7.5:2.5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.08％三乙胺作為流動相，對上述粗品D1.405g采用高速逆流色譜分離，色譜分離檢測條件與(d)所示相同，收集含有目標化合物的流份(90-170min)，減壓濃縮，得目標化合物流份1.138g。(f)1.138g含有目標化合物的流份，采用上述(e)相同的逆流色譜分離檢測條件純化，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮，得純度﹥99％的化合物guttiferoneK1.056mg。實施例7(a)將云南藤黃果實粉末320.2g用30L甲醇滲漉提取，合并甲醇提取液，減壓濃縮至無醇味得浸膏A183.7g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B55.8g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C26.4g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，HSCCC-UV圖譜如圖1所示，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有所述化合物的流份(135-170min，420-460min)，減壓濃縮，得粗品D1.320g。(e)以正己烷:叔丁基甲醚:95％乙醇:水(7:3:7.5:2.5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.08％三乙胺作為流動相，對上述粗品D1.320g采用高速逆流色譜分離，色譜分離檢測條件與(d)所示相同，收集含有目標化合物的流份(90-170min)，減壓濃縮，得目標化合物流份1.024g。(f)1.024g含有目標化合物的流份，采用上述(e)相同的逆流色譜分離檢測條件純化，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮，得純度﹥99％的化合物guttiferoneK986mg。實施例8(a)將云南藤黃果實粉末350.2g用30L丙酮冷凝回流提取，合并丙酮提取液，減壓濃縮至無醇味得浸膏A198.7g；(b)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(5:5:5:5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相8L，下相24L對浸膏A進行萃取，收集上相有機相濃縮，得浸膏B60.8g；(c)對浸膏B進行SephadexLH20凝膠柱柱層析分離：以氯仿:甲醇(1:1，v/v)的混合溶液進行洗脫，薄層層析檢測，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮得浸膏C30.2g；(d)以正己烷:乙酸乙酯:95％乙醇:水(9.75:0.25:8:2,v/v/v/v)對浸膏C采用高速逆流色譜分離：按體積比將溶劑系統(tǒng)至于分液漏斗中，搖勻靜置分層一段時間后，將上下相分開，向上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.025％三乙胺作為流動相。采用TBE-300C型高速逆流色譜儀，柱體積300mL，進樣圈20mL，TBP5002泵，TBP-2000UV/2000D紫外檢測器，DC-0506低溫恒溫槽，BSZ-100自動接收器，梅特勒-托利PH計。先用固定相充滿整個柱子，上相溶液溶解上述浸膏C2.0g進樣，調(diào)整主機轉速為850rpm，柱溫25℃，檢測波長351nm，以2mL/min的流速泵入流動相，每3分鐘每管收集餾分，待所有餾分洗脫結束后，等量的浸膏C2.0g經(jīng)上相溶解后進樣，通過逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，HSCCC-UV圖譜如圖1所示，采用Waterse2695高效液相色譜儀檢測分析，色譜條件：色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18column，5μm，4.6I.D.×250mm，流動相：C：乙腈，D:0.1％甲酸水；梯度洗脫程序：0-10min，C:D＝90:10→95:5，10-20min，C:D＝95:5→100:0，20-25min，C:D＝100:0→90:10，25-40min，C:D＝90:10→90:10，流速：1.0mL/min，檢測波長：351nm，收集含有所述化合物的流份(135-170min，420-460min)，減壓濃縮，得粗品D1.413g。(e)以正己烷:叔丁基甲醚:95％乙醇:水(7:3:7.5:2.5,v/v/v/v)作為溶劑系統(tǒng)，上相加入0.1％乙酸作為固定相，下相加入0.08％三乙胺作為流動相，對上述粗品D1.413g采用高速逆流色譜分離，色譜分離檢測條件與(d)所示相同，收集含有目標化合物的流份(90-170min)，減壓濃縮，得目標化合物流份1.162g。(f)1.162g含有目標化合物的流份，采用上述(e)相同的逆流色譜分離檢測條件純化，收集含有目標化合物的流份，減壓濃縮，得純度﹥99％的化合物guttiferoneK1.061mg。本發(fā)明所涉及的多個方面已做如上闡述。然而，應理解的是，在不偏離本發(fā)明精神之前提下，本領域專業(yè)人員可對其進行等同改變和修飾，所述改變和修飾同樣落入本申請所附權利要求的覆蓋范圍。