本發(fā)明涉及含三氮唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

白血病，亦稱作血癌，是一類造血干細(xì)胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細(xì)胞失去進(jìn)一步分化成熟的能力而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細(xì)胞大量增生積聚并浸潤(rùn)其他器官和組織，同時(shí)使正常造血受抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤(rùn)癥狀。

白血病通常分為:1)急性白血病；2)慢性白血?。?)特殊類型白血病。

急性白血病是一種造血干細(xì)胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細(xì)胞失去進(jìn)一步分化成熟的能力而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤(rùn)癥狀。已通過引入新治療方案完成最新的改進(jìn)，如針對(duì)Ph-陽性(Ph+)ALL而在早期加入酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼或針對(duì)B-系A(chǔ)LL的CD20+病例使用抗-CD20抗體利妥昔單抗(Rituximab)。但是這些藥對(duì)復(fù)發(fā)性急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者的療效極差，約30％的患者將最終復(fù)發(fā)。

特征類型白血病又可包括早幼粒細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞白血病、淋巴瘤白血病以及中樞性白血病。這種特殊類型白血病，除了具有一般白血病臨床表現(xiàn)(發(fā)熱、出血、貧血、浸潤(rùn)癥狀、肝脾淋巴結(jié)腫大)外，主要有如下特點(diǎn)：發(fā)病急，進(jìn)展快，出血明顯，可發(fā)生致命性腦出血或合并彌散性血管內(nèi)凝血，如未能及時(shí)診斷和治療，在短時(shí)間內(nèi)可因出血導(dǎo)致死亡。因此，是人類健康的隱形殺手。

其中，慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelocytic leukemia，CML)又叫 慢性髓細(xì)胞白血病，它是血液系統(tǒng)的造血干細(xì)胞惡性克隆增殖性疾病，導(dǎo)致病人出現(xiàn)貧血、出血、感染等癥狀。根據(jù)CML患者的疾病進(jìn)展?fàn)顩r和嚴(yán)重程度分為慢性期(CP)、加速期(AP)和急變期(BP)。CML形成的主要原因是9號(hào)和22號(hào)染色體發(fā)生異位t(9:22)(q34:q11)(費(fèi)城染色體Ph)形成一種融合基因即BCR-ABL融合基因，該基因能夠編碼BCR-ABL蛋白，是一種活性酪氨酸激酶。這種BCR-ABL激酶能使下游的一些底物磷酸化，進(jìn)而激活與細(xì)胞增殖有關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，造成成熟粒細(xì)胞無限增殖而導(dǎo)致CML的發(fā)生。

目前，臨床上對(duì)CML的治療方法主要是傳統(tǒng)的藥物治療、造血干細(xì)胞移植和新興的分子靶向治療。普通的藥物治療包括烷化劑白消安、羥基脲、干擾素(IFN-α)、阿糖胞苷及高三尖杉酯堿、阿霉素等。其中，由于白消安副反應(yīng)比較大，目前在臨床上已經(jīng)停止使用；羥基脲、阿霉素等均是通過非特異地抑制腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的脫氧核糖核酸代謝發(fā)揮抗癌作用，而對(duì)CML發(fā)病的分子機(jī)理無特異的逆轉(zhuǎn)作用，故對(duì)腫瘤組織與正常組織的選擇性較差，毒性較大，療效欠佳；α-干擾素較前兩者毒副作用更小，病人耐受性也好，能夠產(chǎn)生持續(xù)的細(xì)胞遺傳學(xué)緩解使CML病患者的生存期延長(zhǎng)，但是其對(duì)加速期和急變期的CML患者效果很差。這種普通藥物治療的一個(gè)很大弊端是在對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用的同時(shí)也能對(duì)正常的機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生損傷。

而造血干細(xì)胞移植在實(shí)際操作起來存在很多困難，比如對(duì)患者的年齡有一定的要求，手術(shù)復(fù)雜，成功率低，耗費(fèi)高，而且存在移植配型成功率過低，占病人總數(shù)30％的白血病人對(duì)化療藥物完全不敏感，治療后難以清除病人體內(nèi)殘存的微小白血病病灶，導(dǎo)致白血病復(fù)發(fā)率高達(dá)30-40％，只有少數(shù)年輕患者能長(zhǎng)期存活。另外，造血干細(xì)胞移植花費(fèi)較高，動(dòng)輒花費(fèi)數(shù)十萬元，一般病人家庭很難接受。

2001年全球第一個(gè)與腫瘤發(fā)生相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑伊馬替尼上市，主要用于治療急性和慢性白血病，近年來，隨著伊馬替尼被大量使用，其耐藥性現(xiàn)象也逐漸凸顯，且多發(fā)生在CML加速期或急變期的患者。

所以尋找一種有效治療白血病、復(fù)發(fā)率低并且能夠克服伊馬替尼耐藥的化合物迫在眉睫。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中用于治療白血病的藥物療效不佳的問題，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種含三氮唑雜環(huán)類化合物，所述含三氮唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述含三氮唑雜環(huán)類化合物中，所述結(jié)構(gòu)通式中R包括以下基團(tuán)：

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種含三氮唑雜環(huán)類化合物的制備方法，包括以下合成路線：在氧化亞銅存在下，使4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮與疊氮化合物(R-N₃)反應(yīng)，生成所述含三氮唑雜環(huán)類化合物；其中，所述含三氮唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述制備方法中，所述結(jié)構(gòu)通式中R包括以下基團(tuán)：

在上述制備方法中，所述4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮的制備方法進(jìn)一步包括：

在硝酸鈉和鹽酸存在下，使4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯胺與疊氮化鈉反應(yīng)，生成4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮。

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，還提供了上述的含三氮唑雜環(huán)類化合物在用于治療白血病的藥物中的應(yīng)用。

在上述應(yīng)用中，所述用于治療白血病的藥物包含所述含三氮唑雜環(huán)類化合物、所述含三氮唑雜環(huán)類化合物在藥學(xué)上可接受的鹽、酯、水合物或它們的組合以及輔料。

在上述應(yīng)用中所述治療白血病的藥物的劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、 栓劑、氣霧劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、糖漿劑、酒劑、酊劑、露劑、膜劑或它們的組合。

在上述應(yīng)用中所述治療白血病的藥物的給藥方式包括口服、注射、植入、外用、噴霧、吸入或它們的組合。

從而，本發(fā)明提供了一類新的含三氮唑雜環(huán)類化合物及其制備方法和應(yīng)用，通過細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖，通過測(cè)定IC₅₀和IC₉₀值發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物對(duì)K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖的抑制作用均可達(dá)到90％，并且特別是本發(fā)明提供的實(shí)例3化合物(化合物15c)在藥物濃度低于陽性對(duì)照藥物伊馬替尼的情況下，可以同樣實(shí)現(xiàn)抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞增殖的效果，因此本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物可以用于治療白血病。

附圖說明

圖1是化合物15a的¹H NMR。

圖2是化合物15a的¹³C NMR。

圖3是化合物15b的¹H NMR。

圖4是化合物15b的¹³C NMR。

圖5是化合物15c的¹H NMR。

圖6是化合物15c的¹³C NMR。

圖7是化合物15d的¹H NMR。

圖8是化合物15d的¹³C NMR。

圖9是化合物15e的¹H NMR。

圖10是化合物15e的¹³C NMR。

圖11是化合物15f的¹H NMR。

圖12是化合物15f的¹³C NMR。

圖13是化合物15g的¹H NMR。

圖14是化合物15g的¹³C NMR。

圖15是化合物15h的¹H NMR。

圖16是化合物15h的¹³C NMR。

圖17是化合物15i的¹H NMR。

圖18是化合物15i的¹³C NMR。

圖19是化合物15j的¹H NMR。

圖20是化合物15j的¹³C NMR。

圖21是化合物15k的¹H NMR。

圖22是化合物15k的¹³C NMR。

圖23是化合物15l的¹H NMR。

圖24是化合物15l的¹³C NMR。

圖25是化合物15m的¹H NMR。

圖26是化合物15m的¹³C NMR。

圖27是化合物15n的¹H NMR。

圖28是化合物15n的¹³C NMR。

圖29示出了伊馬替尼、實(shí)例1化合物、實(shí)例8-9化合物和實(shí)例11-14化合物對(duì)K562細(xì)胞的抑制。

圖30示出了伊馬替尼、實(shí)例1化合物、實(shí)例8-10化合物和實(shí)例12-13化合物對(duì)HL60的抑制。

圖31示出了伊馬替尼、實(shí)例1化合物、實(shí)例3化合物、實(shí)例8-10化合物和實(shí)例12-13化合物對(duì)KG1a細(xì)胞的抑制。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1含三氮唑雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成和結(jié)構(gòu)鑒定

1.本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述結(jié)構(gòu)通式中，取代基R包括以下結(jié)構(gòu):

2.本發(fā)明提供的含三氮唑雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成實(shí)驗(yàn)步驟

2.1通用合成路線為:

2.2實(shí)驗(yàn)部分

2.2.1化合物4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯疊氮(2)的合成

取100ml三口圓底燒瓶，在0℃下，依次加入N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-氨基嘧啶(反應(yīng)底物1，500mg)，亞硝酸鈉(250mg)，水(15ml)(注意此時(shí)最好使用機(jī)械攪拌，因?yàn)橐运魅軇┊?dāng)溫度過低時(shí)反應(yīng)液會(huì)凝固，且機(jī)械攪拌的攪拌槳不能為金屬材質(zhì)，否則會(huì)與疊氮化鈉劇烈反應(yīng)出現(xiàn)危險(xiǎn))。當(dāng)攪拌充分后，滴加HCl(192mg)，速度不能過快，滴加完畢后，保持反應(yīng)體系的溫度在0-5℃繼續(xù)反應(yīng)1.5小時(shí)。反應(yīng)液的顏色加深。然后再加入疊氮化鈉(141mg)的水溶液，一定要滴加，且速度不能過快，滴加過程中會(huì)產(chǎn)生大量的泡沫，此時(shí)需補(bǔ)加反應(yīng)溶劑-水。滴加完畢保持溫度不變繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)過程中通過TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。在反應(yīng)的過程中會(huì)發(fā)現(xiàn)反應(yīng)液的顏色由深黃色又變回淺黃色且伴有黃色的泡沫^[68]。反應(yīng)結(jié)束，將反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取(40ml×3)，有機(jī)相飽和食鹽水水洗三次，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，濃縮得到粗品，通過柱層析分得化合物2的純品，產(chǎn)率為95％。該化合物的MS：[M+H]⁺304.12；¹H NMR(400 MHz，CDCl₃)：δppm 9.27(s，1H)，8.75(d，J＝4.0Hz，1H)，8.54(d，J＝4.0Hz，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.45(m，1H)，7.24(d，J＝5.2Hz，1H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，7.12(s，1H)， 6.69(m，1H)，2.36(s，3H)。

2.2.2化合物5a-5n的合成

2.2.2.1化合物5a的合成

路線1

取250ml三口燒瓶，放入原料胺3(1.00g，4.15mmol)，加入20ml水，使反應(yīng)體系的溫度降至0℃，0.23g的HCl于5ml水中稀釋滴加到反應(yīng)體系中，隨著HCl的加入，反應(yīng)體系的黏度不斷增加，因此我們?cè)谶M(jìn)行此步反應(yīng)時(shí)最好使用機(jī)械攪拌，滴加完畢后繼續(xù)維持0℃攪拌1小時(shí)，再向反應(yīng)體系中加入0.28g亞硝酸鈉的20ml水溶液，繼續(xù)攪拌0.5小時(shí)。將上述的反應(yīng)溶液體系在0℃下加入到KI(0.83g)，CuI(0.97g)的20ml水溶液中，加畢，將整個(gè)反應(yīng)體系慢慢升溫至75℃，反應(yīng)體系中不斷有氣泡產(chǎn)生，是生成的氮?dú)?，?dāng)氣泡不再產(chǎn)生，向反應(yīng)體系中加入50ml的乙酸乙酯將產(chǎn)物萃取出來，該反應(yīng)過程收率不高，原因是因?yàn)榛衔?生成的重氮鹽不穩(wěn)定，隨著溫度的升高，部分重氮鹽在未與碘離子完成置換前就已經(jīng)分解。過硅膠柱得純品，即得化合物14。該化合物的MS：[M+H]⁺353.09；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 8.46 (s，2H)，7.99(s，1H)，7.98(s，1H)，7.17(s，1H)，2.35(s，3H)。

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，取50ml三口瓶，將該步反應(yīng)含碘的底物4(280mg)，三甲基硅基乙炔(156mg)，雙三苯基膦二氯化鈀(1％mmol)，CuI(1％mmol)，加入到反應(yīng)體系中，向反應(yīng)體系中加入6ml的三乙胺(三乙胺預(yù)先干燥除氧除水)，再加入5ml的四氫呋喃做為底物的助溶劑，常溫25℃反應(yīng)4小時(shí)，將反應(yīng)液直接旋干，水洗用乙酸乙酯(20ml×3)進(jìn)行萃取，合并有機(jī)相，濃縮得到含有三甲基硅炔的中間產(chǎn)物^[66]。

取25ml三口圓底燒瓶保持干燥，不能有水，在室溫下，依次加入碳酸鉀(276mg)，所得的含三甲基硅炔的中間產(chǎn)物(230mg)，將整個(gè)反應(yīng)體系用氮?dú)獗Ｗo(hù)，再向反應(yīng)體系中加入20ml重蒸的甲醇，室溫下繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)^[67]。反應(yīng)過程中通過TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束，將反應(yīng)液過濾，除去碳酸鉀固體，加入20ml超純水，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，飽和食鹽水水洗3次，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，濃縮的到產(chǎn)物的粗品，通過柱層析分得產(chǎn)物的純品化合物5a。該化合物的MS：[M+H]⁺251.23；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 7.81(s，1H)，7.69(s，1H)，7.66(s，1H)，7.58(s，1H)，7.05(s，1H)，3.27(s，1H)，2.31(s，3H)。

2.2.2.2化合物5b的合成

路線2

具體操作

在50ml的圓底燒瓶中加入25ml甲醇，冰浴冷卻下滴加二氯亞砜(874mg，7.35mmol)，滴畢加入4-甲基-3-三氟甲基苯甲酸6(500mg，2.45mmol)，將體系移至室溫反應(yīng)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，減壓濃縮，產(chǎn)品為油狀液體，即化合物7。¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 8.29(s，1H)，8.09(d，J＝8Hz，1H)，7.37(d，J＝8Hz，1H)，3.95(s，3H)，2.55(s，3H)。

取50ml的三口圓底燒瓶，加入15ml的四氯化碳，加入化合物7(436mg，2.00mmol)和N-溴丁二酰亞胺(NBS)(392mg，2.20mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至回流，回流15分鐘后緩慢加入過氧苯甲酰(BPO)(50mg，0.22mmol)(溶于5ml的四氯化碳)，加熱回流6小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)^[78]。反應(yīng)液冷卻至室溫，有固體析出，過濾，乙酸乙酯洗滌，濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮得到化合物8的粗品，直接用于下一步。取25mL的三口圓底燒瓶，加入10mL的四氫呋喃，加入化合物8的粗品，氮甲基哌嗪(600mg，6.00mmol)碳酸鉀(800mg，5.79mmol)室溫下攪拌3小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)^[79]。反應(yīng)結(jié)束后，旋干，水洗，二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮硅膠柱層析純化得化合物9純品210mg，產(chǎn)率為33.4％。該化合物的 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 8.31(s，1H)，8.18(d，J＝8Hz，1H)，7.94(d，J＝8Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.72(s，2H)，2.52(s，8H)，2.32(s，3H)。

取25ml的三口圓底燒瓶，加入15ml四氫呋喃，加入化合物9(610mg，1.93mmol)和硼氫化鈉(511mg，13.44mmol)加熱至回流，回流15分鐘后，緩慢的加入甲醇，有氣泡產(chǎn)生，繼續(xù)滴加甲醇直至不在產(chǎn)生氣泡，繼續(xù)加熱回流6小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入水淬滅，旋蒸旋走四氫呋喃，二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮硅膠柱層析純化得化合物10 ¹HNMR，7.66(s，1H)，7.53(d，J＝8Hz，1H)，4.76(s，2H)，3.68(s，2H)， 2.56(s，8H)，2.35(s，3H)。

取25ml的三口圓底燒瓶，加入15ml二氯甲烷，加入化合物10(352mg，1.22mmol)和氯鉻酸吡啶鹽(PCC)(523mg，2.44mmol)室溫下攪拌3小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)^[81]。反應(yīng)結(jié)束后，過濾除去黑色沉淀，水洗有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮硅膠柱層析純化得化合物11純品291mg，產(chǎn)率為83.3％。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 10.04(s，1H)，8.13(s，1H)，8.07-8.02(m，2H)，3.74(s，2H)，2.52(s，8H)，2.32(s，3H)。

取25ml的三口圓底燒瓶，加入15ml無水甲醇，加入化合物11(110mg，0.38mmol)化合物a(1-重氮基-2-氧代-丙基)-磷酸二甲酯)(113mg，0.59mmol)和碳酸鉀(106mg，0.77mmol)室溫下攪拌12小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，旋干，水洗，二氯甲烷萃取，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮得到化合物5b粗品70mg，由于化合物5b的極性較11的極性相差不大，很難分離，為了避免溶劑的浪費(fèi)和簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作，將本步所得粗品直接用于下一步反應(yīng)。

2.2.2.3化合物5c-5n的合成

路線三

實(shí)驗(yàn)步驟(以5c為例)：

取50ml三口圓底燒瓶，加入溶劑二氯甲烷(20ml)，在0℃下，依次加入4-(4-甲基-哌嗪基-1-基)甲基-苯甲酸12(0.76g，3.25mmol)、HOBt(0.49g，3.63mmol)、EDCI(0.69g，3.60mmol)、和4-甲基嗎啡啉(0.99g，9.79mmol)，使反應(yīng)體系保持0℃不變，攪拌20分鐘。然后加入N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(0.47g，4.82mmol)，保持0℃不變，反應(yīng)3小時(shí)。待反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液直接旋干，加入30ml 5％的氫氧化鈉水溶液，調(diào)節(jié)溶液的pH至12，然后用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，將殘留物經(jīng)硅膠柱層析(V_二氯甲烷/V_甲醇＝20:1)純化，得到0.82g預(yù)期產(chǎn)物13，為淺黃色油狀液體，收率為90.80％。該化合物的MS：[M+H]⁺278.18；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 7.59(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，3.53(s，3H)，3.51(s，2H)，3.32(s，3H)，2.46(s，8H)，2.27(s，3H)。

取25ml三口圓底燒瓶，加入四氫呋喃(15ml)，在0℃下，依次加入步驟中得到的化合物13(0.82g，2.96mmol)和四氫鋁鋰(0.32g，8.42mmol)，使反應(yīng)體系保持0℃不變，反應(yīng)3小時(shí)。待反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液滴加到飽和的氫氧化鈉水溶液中，會(huì)看到有大量的白色絮狀物生成，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取，用飽和食鹽水(30ml×3)洗滌，合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，將殘留物經(jīng)硅膠柱層析(V_二氯甲烷/V_甲醇＝20:1)純化，得到0.53g預(yù)期產(chǎn)物14，為黃色油狀液體，收率為82.02％。該化合物的MS：[M-H]^-217.14；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm9.99(s，1H)，7.83(d，J＝8.0Hz，2H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，3.59(s，2H)，2.52(s，8H)，2.32(s，3H)。

取25ml干燥的三口圓底燒瓶，在室溫下，依次加入碳酸鉀(276mg，2.00mmol)、第二步中得到的產(chǎn)物14(218mg，1.00mmol)、(1-重氮基-2-氧代-丙基)-磷酸二甲酯a(192mg，1.00mmol)，最后將V_甲醇/V_四氫呋喃＝1:1(14ml)加入到反應(yīng)體系中，在室溫下反應(yīng)18小時(shí)。在反應(yīng)的過程中發(fā)現(xiàn)反應(yīng)液的顏色由淺黃色變?yōu)樘O果青色。待反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液過濾，除去碳酸鉀固體，加入20ml超純水，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取，用飽和食鹽水(30ml×3)洗滌，合并有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到214mg粗標(biāo)題化合物，將該粗品經(jīng)硅膠柱層析(V_二氯甲烷/V_甲醇＝20:1)純化，得到170mg預(yù)期產(chǎn)物，為黃色固體，即為化合物5c，收率為79.22％。該化合物的MS：[M+H]⁺215.31；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 7.45(d，J＝8.0Hz，2H)， 7.29(d，J＝8.0Hz，2H)，3.52(s，2H)，3.06(s，1H)，2.51(s，8H)，2.33(s，3H)。

按照5c的反應(yīng)路線和操作方法得到了系列化合物5d-5n

實(shí)例1-14 化合物15a-15n的合成

實(shí)例1化合物15a的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

取25ml三口圓底燒瓶，在室溫下，依次加入乙醇-水混合體系(V_乙醇：V _水＝2:1，15ml)，所得化合物5a(0.18g，0.70mmol)，所得化合物2(0.25g，0.83mmol)，再加入納米Cu₂O(0.19g，1.00mmol)，反應(yīng)12小時(shí)，反應(yīng)過程中通過TLC來監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束，將反應(yīng)液過濾后濃縮，經(jīng)硅膠柱層析純化得產(chǎn)品0.23g，即為化合物15a。該化合物的MS：[M+H]⁺554.54；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 9.46(m，1H)，9.12(s，1H)，8.76-8.74(m，1H)，8.60(d，J＝4.4Hz，1H)，8.44(d，J＝7.2Hz，2H)，8.30(s，1H)，8.16(s，1H)，7.61(s，1H)，7.51(d，J＝7.2Hz，2H)，7.41(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.25(s，1H)，2.49(s，3H)，2.36(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.0，159.3，151.9，148.6，145.9，138.8，135.4，134.5，133.5，132.9，131.5，127.1，121.0，120.9，120.9，118.6，117.0，114.3，111.6，109.1，17.8。

反應(yīng)路線和操作方法和化合物15a的制備過程相似，所得系列化合物如下：

實(shí)例2化合物15b的結(jié)構(gòu)鑒定:

為淡黃色狀固體，收率為89.20％。該化合物的MS：[M+H]⁺518.27；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.32(d，J＝2.0Hz，1H)，9.50(d，J＝2.4Hz，1H)，8.78(dd，J＝1.6，4.8Hz，1H)，8.59(d，J＝5.2Hz，1H)，8.54(dt，J＝2.0，8.0Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.90(d，J＝8.4Hz，2H)，7.51(dd，J＝4.8，7.6Hz，1H)，7.43-7.45(m，3H)，7.38(d，J＝8.4Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.28(s，1H)，3.59(s，2H)，2.58(bs，8H)，2.47(s，3H)，2.36(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.3，160.0，159.0，151.5，148.3，147.9，138.6，138.4，135.4，134.6，132.2，131.1，129.6，129.1，127.1，125.6，123.7，117.3，113.8，111.9，108.6，62.7，55.1，53.0，46.0，17.7。

實(shí)例3化合物15c的結(jié)構(gòu)鑒定:

為淡黃色狀固體粉末。兩步總收率為56.3％。該化合物的MS：[M+H]⁺586.54；¹H NMR(400MHz，CDCl₃):δppm 9.32(s，1H)，9.04(d，J＝2.0Hz，1H)，8.75(d，J＝3.6Hz，1H)，8.56(d，J＝5.2Hz，1H)，8.49(dt，J＝1.6，8.0Hz，1H)，8.28(s，1H)，8.14(s，1H)，8.11(d，J＝8.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.0Hz，1H)，7.48(dd，J＝4.8，8.0Hz，1H)，7.42(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.25(s，1H)，3.71(s，2H)，2.54(bs，8H)，2.44(s，3H)，2.33(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.6，160.1，159.2，151.8，148.5，146.9，138.8，137.8，135.5，134.7， 132.4，131.3，131.1，129.4，129.2，129.1，128.9，127.2，123.8，123.2，123.2，117.8，114.1，112.1，108.9，58.0，55.2，53.1，46.0，17.8。

實(shí)例4化合物15d：(2-甲基-5-{4-(2-萘基)-基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物收率為56.2％。MS：[M+H]⁺:456.32；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.42(s，1H)，9.34(s，1H)，9.19(s，1H)，8.71(d，J＝4.0Hz，1H)，8.60(d，J＝4.0Hz，1H)，8.52(s，1H)，8.51(s，1H)，8.47(d，J＝2.0Hz，1H)，8.11-7.95(m，4H)，7.69-7.66(m，1H)，7.57-7.50(m，5H)，2.39(s，3H)。¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)：δ162.1，161.2，160.1，152.0，148.7，147.7，139.6，135.2，134.9，133.6，133.2，132.6，132.3，131.9，129.1，128.5，128.4，128.2，127.2，126.8，124.3，124.2，124.2，120.3，116.0，115.6，108.8，18.3。

實(shí)例5化合物15e：(2-甲基-5-{4-[3,4-二甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為49.6％。MS：[M+H]⁺466.34；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.31(bs，1H)，9.01(s，1H)，8.75(d，J＝4.0Hz，1H)，8.57 (d，J＝5.2Hz，1H)，8.52(d，J＝8.0Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.58(d，J＝1.6Hz，1H)，7.49(t，J＝4.0，1H)，7.44-7.35(m，3H)，7.22(s，1H)，6.95(d，J＝8.0Hz，1H)，4.01(s，3H)，3.95(s，3H)，2.45(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ162.6，160.2，159.2，151.7，149.4，149.3，148.4，148.2，138.7，135.7，134.8，132.5，131.3，127.1，123.9，123.4，118.4，116.9，114.3，112.3，111.4，109.1，108.9，56.1，55.9，17.8。

實(shí)例6化合物15f：(2-甲基-5-{4-[4-甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-嘧啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為62.7％。MS：[M+H]⁺436.35；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.30(s，1H)，9.02(d，J＝1.6Hz，1H)，8.76(d，J＝1.6Hz，1H)，8.57-8.51(m，1H)，8.14(s，1H)，7.86(d，J＝8.8Hz，2H)，7.51-7.48(m，1H)，7.42-7.40(m，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(d，J＝5.2Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.00(d，J＝8.8Hz，2H)，3.87(s，3H)，2.44(s，3H)。 ¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ162.6，160.1，159.7，159.2，151.6，148.4，148.1，138.7，135.8，134.9，132.5，131.3，127.2，127.0，123.9，123.1，116.7，114.3，114.2，112.2，108.9，55.4，17.8。

實(shí)例7化合物15g：(2-甲基-5-{4-[3-甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-嘧啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為58.9％。MS：[M+H]⁺436.37；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δppm 9.31(s，1H)，9.05(d，J＝2.0Hz，1H)，8.77(d，J＝3.2Hz，1H)，8.59(d，J＝4.8Hz，1H)，8.55(d，J＝8.0Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.57(s，1H)，7.48(m，3H)，7.39(t，J＝7.8Hz，2H)，7.22(s，1H)，6.94(m，1H)，3.92(s，3H)，2.47(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.1，160.1，159.2，151.6，148.3，148.1，138.7，135.7，134.9，132.5，131.7，131.3，129.9，127.1，124.0，118.3，117.8，114.3，114.3，112.3，111.0，108.9，55.4，17.8。

實(shí)例8化合物15h：(2-甲基-5-{4-[3,5-二三氟甲基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為30.6％。MS：[M+H]⁺542.45；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.40(m，1H)，9.12(s，1H)，8.79(d，J＝3.2Hz，1H)，8.60(d，J＝5.2Hz，1H)，8.50-8.41(m，2H)，8.36(d，J＝5.6Hz，1H)，7.54-7.47(m，2H)，7.40(d，J＝8.0Hz，1H)，7.31-7.28(m，3H)，2.49(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.0，159.3，151.9，148.5，146.0，138.8，135.4，134.6，132.4，132.2，131.8，131.4，127.2，126.3，124.8，123.9，118.6，118.4，118.2，114.2，113.6，111.8，109.1，84.28，29.7，17.8。

實(shí)例9化合物15i：(2-甲基-5-{4-[3-三氟甲基-4-甲基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為37.2％。MS：[M+H]⁺488.48；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.35(s，1H)，9.07(d，J＝2.0Hz，1H)，8.79(s，1H)，8.60(d，J＝5.2Hz，1H)，8.57(d，J＝8.0Hz，1H)，8.28(s，1H)，8.14(s，1H)，8.05(d，J＝8.0Hz，1H)，7.54(m，1H)，7.44-7.28(m，3H)，7.31(s，1H)，2.56(d，J＝1.2Hz，3H)，2.48(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.6，160.1，159.2，151.4，148.1，147.1，138.7，136.6，135.6，135.1，132.6，131.4，130.9，129.6，128.8，128.3，127.3，125.8，123.2，117.7，114.3，112.3，108.9，29.7，19.2，17.8。

實(shí)例10化合物15j：(2-甲基-5-{4-[3-三氟甲基-4-甲氧基-苯基]-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為40.1％。MS：[M+H]⁺504.48；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.35(s，1H)，9.32(d，J＝1.6Hz，1H)，9.18(s，1H)，8.70(dd，J＝1.6，4.8Hz，1H)，8.59(d，J＝5.2Hz，1H)，8.51(dt，J＝2.0，8.0Hz，1H)，8.41(d，J＝2.0Hz，1H)，8.21(dd，J＝2.0，8.8Hz，1H)，8.16(d，J＝1.6Hz，1H)，7.63(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.55-7.48(m，3H)，7.43(d，J＝8.8Hz，1H)，2.51(t，J＝1.6Hz，3H)，2.38(s，3H)。¹³C NMR(100MHz， CDCl₃)δ162.1，161.2，160.1，157.3，152.0，148.6，146.4，139.6，135.1，134.8，132.5，132.4，131.9，131.2，124.3，124.0，123.2，122.7，119.7，118.0，117.7，115.9，115.5，114.1，108.8，56.8，18.3。

實(shí)例11化合物15k：(2-甲基-5-{4-甲醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為47.2％。MS：[M+H]⁺360.28；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.28-9.27(m，1H)，9.03(d，J＝12Hz，1H)，8.76(d，J＝4.4Hz，1H)，8.68(s，1H)，8.65(d，J＝4.8Hz，1H)，8.57(t，J＝8.8Hz，2H)，8.31-8.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.85(t，J＝8.0Hz，1H)，7.57-7.54(m，1H)，7.47-7.45(m，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.31(d，J＝5.2Hz，1H)，7.22(s，1H)，2.47(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.2，159.2，151.7，150.1，149.3，148.7，138.8，137.1，135.7，134.9，132.5，131.4，127.2，124.0，123.0，120.5，114.2，112.3，108.9，17.8。

實(shí)例12化合物15l：(2-甲基-5-{4-乙醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為42.7％。MS：[M+H]⁺374.43；¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 9.32(bs，1H)，8.96(d，J＝2.0Hz，1H)，8.71(s，1H)，8.50 (d，J＝5.2Hz，1H)，8.35(d，J＝8.0Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.48(s，1H)，7.39(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.19(d，J＝5.2Hz，1H)，4.04(t，J＝5.6Hz，2H)，3.09(t，J＝5.6Hz，2H)，2.40(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl3)：δ162.6，160.1，159.7，159.2，151.6，148.4，148.1，138.7，135.8，134.9，132.5，131.3，127.2，127.0，123.9，123.1，116.7，114.3，114.2，112.2，108.9，55.4，17.8。

實(shí)例13化合物15m：(2-甲基-5-{4-(2-羥基)-乙醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為46.4％。MS：[M+H]⁺374.41；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.37(s，1H)，9.12(s，1H)，8.76(s，1H)，8.58(d，J＝5.2Hz，1H)，8.46(d，J＝8.0Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.54(m，1H)，7.42(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.35(s，1H)，5.23(q，J＝6.4Hz，1H)，2.47(s，3H)，1.71(d，J＝6.4Hz，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.3，160.0，159.2，153.6，151.3，148.2，138.6，135.8，135.0，131.3，126.6，124.1，118.7，114.3，112.4，108.8，63.3，29.7，23.3，17.7。

實(shí)例14化合物15n：(2-甲基-5-{4-丁醇基-[1,2,3]三氮唑-1-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的結(jié)構(gòu)鑒定

該化合物的收率為36.3％。MS：[M+H]⁺402.46；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δppm 9.32(m，1H)，8.92(s，1H)，8.55(d，J＝5.2Hz，1H)，8.47(d，J＝7.6Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.53(bs，1H)，7.37-7.31(m，2H)，7.24(d，J＝4.4Hz，2H)，3.73(t，J＝6.4Hz，2H)，2.87(t，J＝7.6Hz，2H)，1.91-1.84(m，2H)，1.75-1.68(m，2H)，2.43(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ162.7，160.1，159.2，138.6，135.9，134.9，131.2，126.8，118.9，114.2，112.1，108.9，62.3，32.2，25.6，25.3，17.8。

實(shí)施例2由實(shí)施例1制備的實(shí)例1至實(shí)例14化合物的活性測(cè)試

MTT粉末購買于Sigma公司，用磷酸緩沖液(PBS)將其配制成濃度為5毫克/毫升的溶液，選取0.22μm濾膜進(jìn)行過濾，然后于4℃下避光保存。K562細(xì)胞(慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系)購于自北京金紫晶生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞培養(yǎng)基為改良型RPMI-1640(Hyclone)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10％的胎牛血清(Hyclone)。

MTT比色法測(cè)定細(xì)胞活性包括下面幾個(gè)步驟(以K562細(xì)胞的測(cè)試方法為例，KG1a HL60細(xì)胞的測(cè)試方法與K562細(xì)胞的方法一致)：

(1)選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞，按每孔3×10³接種于96孔板，5％CO₂，37℃孵育培養(yǎng)過夜。

(2)加藥，本實(shí)驗(yàn)中設(shè)置了9個(gè)濃度梯度，體系中藥物終濃度梯度為：30μM，15μM，7.5μM，3.7μM，1.8μM，0.9μM，0.5μM，0.2μM，0.1μM。每個(gè)濃度5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組(不加藥僅接種細(xì)胞)及空白孔(未接種細(xì)胞僅加培養(yǎng)基)，5％CO₂，37℃培養(yǎng)箱孵育72小時(shí)。

(3)每孔再加入20μL MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

(4)4小時(shí)后終止培養(yǎng)，小心地吸去孔內(nèi)的液體。并向每孔加入150μL的二甲基亞砜。然后置于搖床上低速振蕩15min左右，使結(jié)晶物充分溶解。采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀MULTISKAN FC(Thermo scientific)測(cè)定490nm處及570nm各孔的吸光度值，測(cè)量時(shí)以空白孔作為調(diào)零孔。

(5)處理數(shù)據(jù)。以藥物濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞數(shù)為縱坐標(biāo)，用數(shù)據(jù)處理軟 件SPSS軟件(IBM公司)進(jìn)行幾率單位加權(quán)回歸法(Bliss法)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，作圖，得到IC₅₀和IC₉₀值，IC₅₀和IC₉₀值見表1。

表1實(shí)例1-14化合物對(duì)K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的IC₅₀和IC₉₀值

通過表1，可以看出實(shí)例1至實(shí)例14化合物(分別對(duì)應(yīng)于化合物15a-15n)均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖，特別是實(shí)例3化合物(化合物25c)在藥物濃度低于陽性對(duì)照藥物伊馬替尼的情況下，仍可以同樣實(shí)現(xiàn)有效抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞增殖的效果，因此實(shí)例1至實(shí)例14化合物可以用于治療白血病。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。