本發(fā)明涉及含酰胺鍵雜環(huán)類化合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

白血病，亦稱作血癌，是一類造血干細(xì)胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細(xì)胞失去進(jìn)一步分化成熟的能力而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細(xì)胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。

白血病通常分為:1)急性白血??；2)慢性白血?。?)特殊類型白血病。

急性白血病是一種造血干細(xì)胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細(xì)胞失去進(jìn)一步分化成熟的能力而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細(xì)胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。急性白血病大體上可以分為淋巴細(xì)胞白血病或粒細(xì)胞白血病，它們可以從表型和基因上鑒別，其特點(diǎn)是病程進(jìn)展快速，需要立即治療。急性白血病來源于早期造血祖細(xì)胞。急性淋巴細(xì)胞白血病是比較少見的惡性腫瘤。每年急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)的總發(fā)病率為1.1/100,000。該發(fā)病率在童年時期達(dá)到高峰，并隨著年齡逐漸增大而不斷降低。35歲之后該發(fā)病率又再次上升，并從80歲開始觀察到第二個高峰。

急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)成人患者的治療變得日益復(fù)雜，因?yàn)獒槍Σ煌募膊喰鸵肓硕喾N多樣的治療方案，體現(xiàn)出根據(jù)適應(yīng)于特定風(fēng)險的病種最佳地調(diào)整治療的意圖。已通過引入新治療方案完成最新的改進(jìn)，如針對Ph-陽性(Ph+)ALL而在早期加入酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼或針 對B-系A(chǔ)LL的CD20+病例使用抗-CD20抗體利妥昔單抗(Rituximab)。但是這些藥對復(fù)發(fā)性急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者的療效極差，約30％的患者將最終復(fù)發(fā)。

特征類型白血病又可包括早幼粒細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞白血病、淋巴瘤白血病以及中樞性白血病。這種特殊類型白血病，除了具有一般白血病臨床表現(xiàn)(發(fā)熱、出血、貧血)、浸潤癥狀、肝脾淋巴結(jié)腫大)外，主要有如下特點(diǎn)：發(fā)病急，進(jìn)展快，出血明顯，可發(fā)生致命性腦出血或合并彌散性血管內(nèi)凝血，如未能及時診斷和治療，在短時間內(nèi)可因出血導(dǎo)致死亡。因此，是人類健康的隱形殺手。

其中，慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelocytic leukemia，CML)又叫慢性髓細(xì)胞白血病，它是血液系統(tǒng)的造血干細(xì)胞惡性克隆增殖性疾病，導(dǎo)致病人出現(xiàn)貧血、出血、感染等癥狀。CML占成人白血病的20％左右，大約每年的發(fā)病率為五萬分之一，其在任何年齡段都有可能發(fā)病，尤其是在老年人中發(fā)病率更高，且男性比女性發(fā)病率高。根據(jù)CML患者的疾病進(jìn)展?fàn)顩r和嚴(yán)重程度分為慢性期(CP)、加速期(AP)和急變期(BP)。大約85％～90％的慢性粒細(xì)胞白血病患者在慢性期被診斷發(fā)現(xiàn)，這個階段癥狀并不明顯，或者僅有乏力、關(guān)節(jié)疼痛或腹脹，如果藥物治療及時，慢性期就會變長，在沒有及時治療的情況下，疾病會進(jìn)入到加速期。CML形成的主要原因是9號和22號染色體發(fā)生異位t(9:22)(q34:q11)(費(fèi)城染色體Ph)形成一種融合基因即BCR-ABL融合基因，該基因能夠編碼BCR-ABL蛋白，是一種活性酪氨酸激酶。這種BCR-ABL激酶能使下游的一些底物磷酸化，進(jìn)而激活與細(xì)胞增殖有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，造成成熟粒細(xì)胞無限增殖而導(dǎo)致CML的發(fā)生。

目前，臨床上對CML的治療方法主要是傳統(tǒng)的藥物治療、造血干細(xì)胞移植和新興的分子靶向治療。普通的藥物治療包括烷化劑白消安、羥基脲、干擾素(IFN-α)、阿糖胞苷及高三尖杉酯堿。其中，由于白消安副反應(yīng)比較大，目前在臨床上已經(jīng)停止使用；羥基脲雖然價格低廉，治療成本低，毒副作用小，但是其對于處于加速期的CML病人作用效果差，而且對于急變期的CML患者基本沒有效果；α-干擾素較前兩者毒副作用更小，病人耐 受性也好，能夠產(chǎn)生持續(xù)的細(xì)胞遺傳學(xué)緩解使CML病患者的生存期延長，但是其對加速期和急變期的CML患者效果很差。這種普通藥物治療的一個很大弊端是在對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用的同時也能對正常的機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生損傷。造血干細(xì)胞移植是目前理論上唯一可以治愈CML的方法，它是通過先用大劑量放化療將CML患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞清除，再將自體或異體的造血干細(xì)胞移植給患者，使其重新建立正常的的造血免疫系統(tǒng)。但是這種方法在實(shí)際操作起來存在很多困難，比如對患者的年齡有一定的要求，手術(shù)復(fù)雜，成功率低，耗費(fèi)高，且必須要有合適的骨髓捐獻(xiàn)者，而且移植后期有可能發(fā)生感染，會使CML患者和家人面臨很大的風(fēng)險，所以造血干細(xì)胞移植在實(shí)際應(yīng)用過程中很受限制。直到2001年全球第一個與腫瘤發(fā)生相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑伊馬替尼的上市，使CML的治療看到的希望，開創(chuàng)CML分子靶向治療的新時代。

伊馬替尼是全球第一個獲得批準(zhǔn)的與腫瘤發(fā)生相關(guān)的信號傳導(dǎo)抑制劑，主要用于治療急性和慢性白血病，近年來，隨著伊馬替尼作為治療慢性粒細(xì)胞白血病的一線用藥被大量使用，其耐藥性現(xiàn)象也逐漸凸顯，且多發(fā)生在CML加速期或急變期的患者。所以尋找一種對白血病干細(xì)胞有殺傷力并且能夠克服伊馬替尼耐藥的化合物迫在眉睫，而且這也將開啟CML治療的新方向和改變抗CML藥物的臨床評估標(biāo)準(zhǔn)。

上述數(shù)據(jù)表明，白血病對大多數(shù)患者而言仍然是爆發(fā)性且無法治愈的疾病。因而，迫切需要改進(jìn)的治療白血病的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中用于治療白血病的藥物療效不佳的問題，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種含酰胺鍵雜環(huán)類化合物，所述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式：

在上述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物中，所述通式中X為：

并且其中，R包括以下基團(tuán)：

在上述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物中，所述通式中X為：

并且其中，R包括以下基團(tuán)：

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種含酰胺鍵雜環(huán)類化合物的制備方法，包括以下合成路線：使(2-(4-(4-((4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯)[氨基甲酰)2-(三氟甲基)芐基)哌嗪-1-基)乙基)氨基叔丁基甲酸酯與三氟乙酸反應(yīng)，生成4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；在N,N'-二環(huán)己基碳酰亞胺存在下，使4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺與二硫化碳反應(yīng)，生成4-((4-(2- 異硫氰酸酯乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；使4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺與氯乙酰氯反應(yīng)，生成4-((4-(2-氯乙酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；使4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺與丙烯酸反應(yīng)，生成4-((4-(2-丙烯酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；使4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺與維生素A酸反應(yīng)，生成4-(4-(2-(3,7-二甲基-9-(2,6,6-三甲基環(huán)己烯)-2,4,6,8-全反式壬四烯)酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；使4-((4-(2-氯丙酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺與二甲胺鹽酸鹽反應(yīng)，生成4-((4-(3-二甲氨基丙酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；其中，所述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物包括以下結(jié)構(gòu)通式：

其中，R包括以下基團(tuán)：

在上述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物的制備方法中，所述(2-(4-(4-((4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯)[氨基甲酰)2-(三氟甲基)芐基)哌嗪-1-基)乙基)氨基叔丁基甲酸酯的制備方法進(jìn)一步包括：使4-溴甲基-N-(4-甲基-3-{[4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]胺}苯基)-3-三氟甲基苯甲酰胺與叔丁基(2-(哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯反應(yīng)，生成所述(2-(4-(4-((4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯)[氨基甲酰)2-(三氟甲基)芐基)哌嗪-1-基)乙基)氨基叔丁基甲酸酯。

在上述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物的制備方法中，包括以下合成路線：使叔丁基(2-(4-(4-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)2-(三氟甲基)芐基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯與鹽酸反應(yīng)，生成N-(4-(4-(2-氨乙基)哌啶-1-基)甲基)3-(三氟甲基)苯基)4甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺；使N-(4-(4-(2-氨乙基)哌啶-1-基)甲基)3-(三氟甲基)苯基)4甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺與二硫化碳反應(yīng)，生成N-(4-(4-(2-異硫氰酸酯乙基)哌啶-1-基)甲基)3-(三氟甲基)苯基)4甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺；其中，所述含酰胺鍵雜環(huán)類化 合物包括以下結(jié)構(gòu)通式：其中，R包括以下基團(tuán)：

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，還提供了上述的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物在用于治療白血病的藥物中的應(yīng)用。

在上述應(yīng)用中，所述用于治療白血病的藥物包含所述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物、所述含酰胺鍵雜環(huán)類化合物在藥學(xué)上可接受的鹽、酯、水合物或它們的組合以及輔料。

在上述應(yīng)用中，所述治療白血病的藥物的劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、氣霧劑、口服液體制劑、顆粒劑、散劑、注射劑、糖漿劑、酒劑、酊劑、露劑、膜劑或它們的組合。

在上述應(yīng)用中，所述治療白血病的藥物的給藥方式包括口服、注射、植入、外用、噴霧、吸入或它們的組合。

從而，本發(fā)明提供了一類新的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物及其制備方法和應(yīng)用，通過細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖，通過測定IC₅₀和IC₉₀值發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物對K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖的抑制作用均可達(dá)到90％，并且特別是本發(fā)明提供的實(shí)例1-5化合物(化合物7a至7e)在藥物濃度低于陽性對照藥物伊馬替尼的情況下，可以同樣實(shí)現(xiàn)抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞增殖的效果，因此本發(fā)明提供的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物可以用于治療白血病。

附圖說明

圖1是化合物7a的¹H NMR。

圖2是化合物7a的¹³C NMR。

圖3是化合物7a的HR-MS。

圖4是化合物7b的¹H NMR。

圖5是化合物7b的¹³C NMR。

圖6是化合物7b的HR-MS。

圖7是化合物7c的¹H NMR。

圖8是化合物7c的¹³C NMR。

圖9是化合物7c的HR-MS。

圖10是化合物7d的¹H NMR。

圖11是化合物7d的¹³C NMR。

圖12是化合物7d的HR-MS。

圖13是化合物7e的¹H NMR。

圖14是化合物7e的¹³C NMR。

圖15是化合物7e的HR-MS。

圖16是化合物7f的¹H NMR。

圖17是化合物7f的¹³C NMR。

圖18是化合物7f的HR-MS。

圖19是化合物14a的¹H NMR。

圖20是化合物14a的¹³C NMR。

圖21是化合物14a的HR-MS。

圖22是化合物14b的¹H NMR。

圖23是化合物14b的¹³C NMR。

圖24是化合物14b的HR-MS。

圖25示出了伊馬替尼、實(shí)例1化合物、實(shí)例3化合物和實(shí)例4化合物對K562細(xì)胞的抑制。

圖26示出了實(shí)例2化合物和實(shí)例5化合物對K562細(xì)胞的抑制。

圖27示出了伊馬替尼、實(shí)例1化合物、實(shí)例3化合物和實(shí)例4化合物對HL60的抑制。

圖28示出了實(shí)例2化合物對HL60的抑制。

圖29示出了實(shí)例5化合物對HL60的抑制。

圖30示出了伊馬替尼、實(shí)例1-5化合物KG1a細(xì)胞的抑制。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1具有通式一的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成和結(jié)構(gòu)鑒定

1.通式一結(jié)構(gòu)式如下：

在上述通式一中，取代基-R包括以下結(jié)構(gòu):

2.具有通式一的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成實(shí)驗(yàn)步驟(通式一所包含的實(shí)例化合物實(shí)驗(yàn)步驟)

實(shí)例1化合物7a:4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1.1：化合物4:4-溴甲基-N-(4-甲基-3-{[4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]胺}苯基)-3-三氟甲基苯甲酰胺的合成

化合物2(621mg，2.16mmol)溶于12mL無水二氯甲烷中，0℃攪拌5分鐘，553uL草酰氯20uL DMF依次加入反應(yīng)液中，反應(yīng)液0℃攪拌3小時，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去反應(yīng)溶劑，殘余物用10mL無水THF溶解，加入碳酸鉀598mg，化合物1(500mg，1.8mmol)溶于20mLTHF滴加到反應(yīng)體系中，室溫攪拌6小時。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)體系中加入水100mL攪拌30分鐘，有固體析出，過濾，得黃色固體986mg(粗品)。反應(yīng)產(chǎn)物中，有溴和氯取代物兩種， 不易分開，此步驟不用純化。

2.2.1.2：化合物6：(2-(4-(4-((4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯)[氨基甲酰)2-(三氟甲基)芐基)哌嗪-1-基)乙基)氨基叔丁基甲酸酯

室溫下，在25mL三口瓶中加入化合物5(780mg,1.438mmol)、碳酸鉀(596mg,4.315mmol)和THF(20mL)，攪拌5分鐘，加入化合物4(660mg，2.876mmol)，反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和碳酸氫鈉50mL，用二氯甲烷萃取。有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘余物柱層析純化得蒼白色固體549.4mg，產(chǎn)率：55.3％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.24(d,J＝1.6Hz,1H),8.69(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.60(d,J＝2Hz,1H),8.50(d,J＝4.8Hz,1H),8.47(dt,J＝2.0,8.0Hz,1H),8.13(s,1H),8.07(s,1H),8.01(dd,J＝2.0,8.0Hz,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.41(dd,J＝5.2,7.6Hz,1H),7.31(dd,J＝2.0,8.0Hz,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(s,1H),3.70(s,2H),3.23(q,J＝4.4Hz,2H),2.46-2.60(m,10H),2.34(s,3H),1.45(s,9H)。

2.2.1.3：化合物7a：4-((4-(2-氨乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺

在10mL兩口瓶中，化合物6(500mg，0.724mmol)溶于二氯甲烷10mL，0℃下攪拌5分鐘，加入三氟乙酸4mL，反應(yīng)液移至室溫攪拌2小時，反應(yīng)結(jié)束后加入飽和碳酸鈉調(diào)節(jié)pH>10，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋除多余的溶劑，殘余物柱層析純化，得黃色固體315mg，產(chǎn)率：73.7％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δppm 10.52(s,1H),9.30(s,1H),9.02(s,1H),8.70(d,J＝3.2Hz,1H),8.49-8.53(m,2H),8.29(s,1H),8.13(s,1H),7.93(d,J＝7.6Hz,1H),7.54(d,J＝6.4Hz,2H),7.45(d,J＝4.4Hz,1H),7.24(d,J＝8.0Hz,1H),3.69(s,2H),2.88(s,2H),2.47-2.52(m,10H),2.25(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆)δ164.3,162.1,161.6,159.9,151.8,148.7,141.4,138.3,137.3,134.9,134.4,132.7,132.1,131.1,130.5,128.4,127.8,127.5,127.2,126.0,125.6,125.5,125.5,124.2,123.3,120.6,117.8,117.4,108.0,58.0,55.1,53.1,53.0,36.3,18.2。

實(shí)例2化合物7b：4-((4-(2-異硫氰酸酯乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，25mL三口瓶中加入8ml THF，0℃攪拌5分鐘，加入化合物7a(270mg，0.457mmol)，二硫化碳(348mg,4.57mmol)和DCC(N,N'-二環(huán)己基碳酰亞胺，94.3mg，0.457mmol)，0℃反應(yīng)2小時。反應(yīng)結(jié)束后，旋除溶劑，殘余物柱層析純化，得白色固體191.5mg，產(chǎn)率：66.2％。

HRMS-ESI(+)：C₃₂H₃₁F₃N₈OSH計算值633.2549，實(shí)測值633.2485；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.23(d,J＝1.6Hz,1H),8.67(dd,J＝1.2,4.8Hz,1H),8.59(s,1H),8.49(d,J＝5.2Hz,1H),8.46(d,J＝8.0Hz,1H),8.16(s,1H),8.12(s,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(dd,J＝1.2,8.0Hz,1H),7.30(dd,J＝1.2,8.0Hz,1H),7.19(d,J＝8.0Hz,1H),7.15(d,J＝5.2Hz,1H),7.05(s,1H),3.71(s,2H),3.59(t,J＝6.4Hz,2H),2.69(t,J＝6.4Hz,2H),2.54-2.56(m,8H),2.33(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ164.220,162.764,160.522,159.002,151.503,148.552,137.854,136.288,134.868,133.920,132.618,130.823,130.248,129.230,128.924,125.293,124.787,124.732,124.424,123.706,122.568,115.422, 113.174,108.439,57.859,57.182,53.068,52.918,43.045,17.689。

實(shí)例3化合物7c:4-((4-(2-氯乙酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在10mL兩口瓶中，化合物7a(100mg，0.169mmol)和三乙胺50ul加入4mL THF中，-20℃攪拌5分鐘，氯乙酰氯20μL加入反應(yīng)液中，繼續(xù)攪拌2小時。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和碳酸氫鈉50mL，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相無水硫酸鈉干燥，過濾，旋除溶劑，殘余物柱層析純化，得蒼白色固體78mg(化合物容易變質(zhì)，需低溫避光保存)，產(chǎn)率：69％。

HRMS-ESI(+)：C₃₃H₃₄ClF₃N₈O₂H計算值667.2518，實(shí)測值667.2524；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.24(d,J＝1.6Hz,1H),8.68(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.59(s,1H),8.50(d,J＝5.2Hz,1H),8.48(dT,J＝2.0,8.4Hz,1H),8.17(s,1H),8.14(s,1H),8.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.40(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.31(dd,J＝1.6,8.4Hz,1H),7.18-7.23(m,2H),7.16(d,J＝5.2Hz,1H),7.06(s,1H),4.04(s,2H),3.70(s,2H),3.38(q,J＝5.6Hz,2H),2.52-2.56(m,10H),2.34(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δppm 151.49,148.55,141.78,137.85,136.31,134.88,133.90,133.43,132.63,130.82,130.79,130.28,129.18,128.88,124.80,124.74,124.50,123.70,122.61,115.50,113.29,108.43,57.89,55.86,53.23,52.81,42.71,36.23,17.68.

實(shí)例4化合物7d:4-((4-(2-丙烯酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在10mL兩口瓶中，化合物7a(100mg，0.169mmol)，丙烯酸(17.5ul，0.261mmol)，DMAP(41.4mg，0.338mmol)和EDCI(129.8，0.676mmol)加入4mL二氯甲烷中，反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液加入50mL二氯甲烷，水洗一次，飽和氯化銨水溶液洗滌一次，飽和食鹽水洗滌一次。有機(jī)相無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘余物柱層析純化，的白色固體57mg，產(chǎn)率：52％。

HRMS-ESI(+)：C₃₄H₃₅F₃N₈O₂H計算值645.2913，實(shí)測值645.2911；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.23(s,1H),8.66(d,J＝4.8Hz,1H),8.58(s,1H),8.45-8.49(m,2H),8.39(s,1H),8.14(s,1H),8.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.89(d,J＝4.0Hz,1H),7.39(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.31(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.15(d,J＝5.2Hz,1H),7.08(s,1H),6.35(s,1H),6.26(d,J＝16.8Hz,1H),6.12(dd,J＝10,16.8Hz,1H),5.62(d,J＝10Hz,1H),3.69(s,2H),3.42(q,J＝5.6Hz,2H),2.51-2.55(m,10H),2.32(s,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δppm 148.52,141.55,137.79,136.38,134.90,133.97,132.63,130.89,130.78,130.74,130.34,129.12,128.81,126.28,125.34,124.91,124.85,124.58,123.71,122.61,115.64,113.47,108.38,57.87,56.38,52.96,52.87,35.85,17.68。

實(shí)例5化合物7e:4-(4-(2-(3,7-二甲基-9-(2,6,6-三甲基環(huán)己烯)-2,4,6,8-全反式壬四烯)酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在10mL兩口瓶中，化合物7a(100mg，0.169mmol)，全反式V_A酸(17.5μl，0.261mmol)，DMAP(41.4mg，0.338mmol)和EDCI(129.8，0.676mmol)加入4mL二氯甲烷中，反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液加入50mL二氯甲烷，水洗一次，飽和氯化銨水溶液洗滌一次，飽和食鹽水洗滌一次。有機(jī)相無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，殘余物柱層析純化，的黃色固體91mg，產(chǎn)率：61.6％。

HRMS-ESI(+)：C₅₁H₅₉F₃N₈O₂H計算值873.4791，實(shí)測值873.4775；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.25(s,1H),8.70(d,J＝4.4Hz,1H),8.61(s,1H),8.49-8.53(m,2H),8.15(s,1H),8.00-8.04(m,2H),7.93(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.32(d,J＝7.6Hz,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.19(d,J＝5.2Hz,1H),7.04(s,1H),6.92(dd,J＝11.6,14.8Hz,1H),6.11-6.28(m,4H),5.72(s,1H),3.73(s,2H),3.44(d,J＝4.8Hz,2H),2.57(br,10H),2.34-2.36(m,6H),1.96-2.03(m,5H),1.70-1.75(m,3H),1.59-1.63(m,2H),1.45-1.48(m,2H),1.03(s,6H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δppm 167.16,164.55,162.54,160.51,158.90,151.29,148.40,148.15,141.40,138.61,137.70,137.60,137.32,136.64,135.58,134.87,133.89,132.55,130.62,130.47,129.77,129.59,128.79,128.49,128.16,125.34,125.05,125.00,124.62,123.68,122.61,121.63,115.86,113.81,108.16,57.83,56.50,53.02,52.82,39.55,35.75,34.23,33.06,28.95,21.75,19.21,17.65,13.52,12.86。

實(shí)例6化合物7f：4-((4-(3-二甲氨基丙酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

.3.6.1化合物8:4-((4-(2-氯丙酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成：

在10mL兩口瓶中，化合物7a(100mg，0.169mmol)和三乙胺24.5ul溶于2.5mL二氯甲烷中，0℃攪拌5分鐘，氯丙酰氯21.5mg溶于2.5mL二氯甲烷中滴加到反應(yīng)液中。0℃攪拌2小時。反應(yīng)結(jié)束后移至室溫，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮，殘余物柱層析純化，得白色固體100.5mg，產(chǎn)率：87％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.24(s,1H),8.69(d,J＝4Hz,1H),8.60(s,1H),8.47-8.51(m,2H),8.14(s,1H),8.02(d,J＝8Hz,1H),7.92(d,J＝8Hz,1H),7.40(dd,J＝4.8,7.6Hz,1H),7.31(d,J＝8Hz,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.16(d,J＝5.2Hz,1H),7.05(s,1H),6.26(s,1H),3.80(t,J＝6.4Hz，2H)，3.71(s,2H),3.37(q,J＝5.2Hz,2H),2.64(t,J＝6.4Hz，2H)，2.52(br,10H),2.34(s,3H)。 2.3.6.2化合物7f:4-((4-(3-二甲氨基丙酰胺乙基)哌嗪-1-基)甲基)-N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成：

在50mL兩口瓶中，化合物8(483mg，0.709mmol)，二甲胺鹽酸鹽(173.5mg，2.127mmol)，碘化鉀(11.8mg，0.071mmol)加入20mL THF中，然后將碳酸鉀(294mg，2.127mmol)加入反應(yīng)液中，反應(yīng)過夜，TLC檢測，沒有產(chǎn)品點(diǎn)。加入二甲胺水溶液(33％)5mL，室溫攪拌2小時，有產(chǎn)品點(diǎn)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和碳酸氫鈉100mL，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮，殘余物柱層析純化，得淺黃色固體463mg，用THF和甲基叔丁基醚重結(jié)晶得純白色固體422mg，產(chǎn)率：86％。

HRMS-ESI(+)：C₃₆H₄₂F₃N₉O₂H計算值690.3486，實(shí)測值690.3478；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.16(d,J＝0.8Hz,1H),9.14(d,J＝2.0Hz,1H),8.59(d,J＝2.8Hz,1H),8.53(s,1H),8.39-8.40(m,2H),8.34(t,J＝2.8Hz,1H),8.13(s,1H),8.01(d,J＝5.2Hz,1H),7.81(d,J＝5.2Hz,1H),7.31(dd,J＝3.6,6.4Hz,1H),7.29(d,J＝5.6Hz,1H),7.15(s,1H),7.08(d,J＝5.6Hz,1H),7.05(d,J＝3.6Hz,1H),3.60(s,2H),3.26(q,J＝4.0Hz，2H)，2.47(t,J＝4.0Hz,2H)，2.38-2.42(m,10H),2.27(t,J＝4.0Hz,2H)，2.24(s,3H),2.21(s,6H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δppm 172.53,164.46,162.62,160.54,158.96,151.38,148.46,141.54,137.65,136.61,134.89,133.90,132.58,130.66,130.54,130.49,129.15,128.85,128.54,128.24,128.09,125.37,125.00,124.94,124.55,123.70,122.64,115.77,113.66,108.23,57.93,56.71,55.17,53.30,52.89,44.78,36.00,33.06,17.68。

實(shí)施例2具有通式二的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成和結(jié)構(gòu)鑒定

1.通式二結(jié)構(gòu)式如下：

在上述通式二中，取代基-R包括以下結(jié)構(gòu):

2.具有通式二的含酰胺鍵雜環(huán)類化合物的化學(xué)合成實(shí)驗(yàn)步驟(通式二所包含的實(shí)例化合物實(shí)驗(yàn)步驟)

2.1通用合成路線為:

2.1.1化合物11的合成:

在100mL三口瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入化合物9(1g，4.875mmol)，NBS(954.4mg,5.362mmol)和四氯化碳50mL，加熱回流5分鐘，加入引發(fā)劑BPO(118mg，0.488mmol)，繼續(xù)加熱回流4小時。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，加入乙酸乙酯100mL，水洗兩次，有機(jī)相無水硫酸鈉干燥，過濾，旋除溶劑，得到化合物10，殘余物不用純化直接投下一步反應(yīng)?；衔?叔丁基(2-(哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯(1.677mg，7.313mmol)和三乙胺2mL溶于10mL THF中。殘余物溶于10mL THF中滴加到這個反應(yīng)液中，室溫攪拌過夜，反應(yīng)液旋除溶劑，加入飽和碳酸氫鈉水溶液100mL，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液旋除溶劑，殘余物柱層析純化，得棕黃色固體936mg，兩步產(chǎn)率：44.4％

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 8.48(s,1H),8.35(d,J＝8.4Hz,1H),8.08(d,J＝8.4Hz,1H),4.98(s,1H),3.73(s,1H),3.22(s,1H),2.48-2.51(m,10H),1.44(s,9H)。

2.12化合物12的合成:

在100mL三口瓶中，化合物11(1.08g，2.5mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入鋅粉(10.8g，16.5mmol)，在0℃攪拌5分鐘，冰醋酸(2.4g，45mmol)溶于20mL二氯甲烷中滴加到反應(yīng)液中，滴加后，反應(yīng)液移到室溫，攪拌過夜。反應(yīng)完全后，過濾，濾餅用飽和碳酸氫鈉水溶液和二氯甲烷洗滌兩次，濾液用 二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮，殘余物柱層析純化，得棕黃色固體935mg，產(chǎn)率：93％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 7.47(br,1H),6.91(s,1H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),3.76(s，2H),3.53(s,2H),3.23(br,2H),2.48(br,10H),1.45(s,9H)。

2.1.3化合物13：叔丁基(2-(4-(4-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基苯甲酰氨基)2–三氟甲基)芐基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯的合成：

在100mL三口瓶中，化合物12(1.093g,2.72mmol),化合物a(915mg，2.99mmol)，DMAP(663.6mg，5.44mmol)，EDCI(1.0413g，5.44mmol)，和三乙胺(1.177mL，8.16mmol)加入到15mL二氯甲烷中，攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束后，加入二氯甲烷150mL，依次用水，飽和氯化銨水溶液，飽和碳酸氫鈉水溶液，飽和食鹽水洗滌一次，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液旋除溶劑，殘余物柱層析純化，得白色固體1.616g，產(chǎn)率：86.2％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.20(s,1H),8.73(d,J＝10.0Hz,1H),8.65(d,J＝4.4Hz,1H),8.57(s,1H),8.46(d,J＝5.2Hz,1H),8.35(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.86-7.90(m,2H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(dd,J＝4.8,7.6Hz,1H),7.20-7.25(m,2H),7.13(d,J＝5.2Hz,1H),5.06(s,1H),3.59(s,2H),3.20(s,2H),2.35-2.47(m,13H),1.43(s,9H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δppm 166.03,162.59,160.43,159.06,156.06,151.54,148.37,137.73,137.17,134.52,133.13,132.97,132.53,132.44,131.25,130.76,129.46,129.16,128.86,128.56,128.23,125.50,123.75,123.35,122.78,122.22,120.21,117.69,117.63,117.57,108.51,79.17,57.79,57.09,52.98,52.97,37.12,28.44,18.15。

實(shí)例7化合物14a:N-(4-(4-(2-氨乙基)哌啶-1-基)甲基)3-(三氟甲基)苯基)4甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在25mL三口瓶中，加入THF 4mL和化合物13(1.076g，1.56mmol)，在0℃攪拌5分鐘，滴加濃鹽酸2mL，繼續(xù)攪拌3小時。升至室溫，加入碳酸鈉和和無水硫酸鈉，過濾，濾餅用THF和甲醇洗滌一次，濾液濃縮，殘余物柱層析純化，得黃色固體858mg，產(chǎn)率：93％。

HRMS-ESI(+)：C₃₁H₃₃F₃N₈OH計算值591.2808，實(shí)測值591.2802；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δppm 10.45(s,1H),9.28(d,J＝1.6Hz,1H),8.68(dd,J＝1.6,8.8Hz,1H),8.45(d,J＝2.0Hz,1H),8.44(dt,J＝2.0,8.0Hz,1H),8.31(d,J＝1.6Hz,1H),8.21(d,J＝2.0Hz,1H),8.07(dd,J＝1.6,8.4Hz,2H),7.75(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),3.55(s,2H),2.60(t,J＝6.4Hz,2H),2.31-2.38(m,11H),2.28(t,J＝6.4Hz,2H)；

¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆):δppm 137.02,134.74,132.59,132.22,131.68,130.76,128.02,127.72,126.17,124.78,124.25,124.00,123.44,122.13,120.72,120.49,119.16,117.73,117.66,116.18,113.21,108.34,57.85,55.35,54.72,52.96,52.92,36.16,18.67。

實(shí)例8化合物14b:N-(4-(4-(2-異硫氰酸酯乙基)哌啶-1-基)甲基)3-(三氟甲基)苯基)4甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺的合成和結(jié)構(gòu)鑒定

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，25mL三口瓶中加入8mL THF，0℃攪拌5分鐘，加入 化合物14a(200mg，0.339mmol)，二硫化碳(258mg,3.39mmol)和DCC(N,N'-二環(huán)己基碳酰亞胺，70mg，0.339mmol)，0℃反應(yīng)2小時。反應(yīng)結(jié)束后，旋除溶劑，殘余物柱層析純化，得白色固體167mg，產(chǎn)率：78％。

HRMS-ESI(+)：C₃₂H₃₁F₃N₈OSH計算值633.2372，實(shí)測值633.2363；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm 9.20(d,J＝2.0Hz,1H),8.73(d,J＝8.4Hz,1H),8.65(s,1H),8.545-8.54(m,2H),8.35(dd,J＝5.2Hz,1H),7.86-7.89(m,2H),7.71(s,1H),7.50(m,1H),7.33(m,1H),7.20-7.23(m,2H),7.13(m,1H),3.61(s,2H),3.57(t,J＝6.0Hz,2H),2.65-2.68(m,2H),2.53(br,8H),2.34-2.36(m,3H)；

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δppm 166.01,162.60,160.39,159.06,151.56,148.38,137.76,137.32,134.52,132.89,132.59,132.47,132.43,131.50,130.80,129.61,129.30,129.00,128.18,125.45,123.76,123.36,122.73,122.17,120.05,117.66,117.60,117.55,108.58,57.63,57.12,52.90,52.75,43.02,18.16。

實(shí)施例3由實(shí)施例1至實(shí)施例2制備的實(shí)例1至實(shí)例8化合物的活性測試

MTT粉末購買于Sigma公司，用磷酸緩沖液(PBS)將其配制成濃度為5毫克/毫升的溶液，選取0.22μm濾膜進(jìn)行過濾，然后于4℃下避光保存。K562細(xì)胞(慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系)購于自北京金紫晶生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞培養(yǎng)基為改良型RPMI-1640(Hyclone)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10％的胎牛血清(Hyclone)。

MTT比色法測定細(xì)胞活性包括下面幾個步驟(以K562細(xì)胞的測試方法為例，KG1a HL60細(xì)胞的測試方法與K562細(xì)胞的方法一致)：

(1)選取處于對數(shù)生長期的K562細(xì)胞，按每孔3×10³接種于96孔板，5％CO₂，37℃孵育培養(yǎng)過夜。

(2)加藥，本實(shí)驗(yàn)中設(shè)置了9個濃度梯度，體系中藥物終濃度梯度為：30μM，15μM，7.5μM，3.7μM，1.8μM，0.9μM，0.5μM，0.2μM，0.1μM。每個濃度5個復(fù)孔，同時設(shè)置對照組(不加藥僅接種細(xì)胞)及空白孔(未接種細(xì)胞僅加培養(yǎng)基)，5％CO₂，37℃培養(yǎng)箱孵育72小時。

(3)每孔再加入20μL MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖洗2-3 遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

(4)4小時后終止培養(yǎng)，小心地吸去孔內(nèi)的液體。并向每孔加入150μL的二甲基亞砜。然后置于搖床上低速振蕩15min左右，使結(jié)晶物充分溶解。采用酶聯(lián)免疫檢測儀MULTISKAN FC(Thermo scientific)測定490nm處及570nm各孔的吸光度值，測量時以空白孔作為調(diào)零孔。

(5)處理數(shù)據(jù)。以藥物濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞數(shù)為縱坐標(biāo)，用數(shù)據(jù)處理軟件SPSS軟件(IBM公司)進(jìn)行幾率單位加權(quán)回歸法(Bliss法)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，作圖，得到IC₅₀和IC₉₀值。見表1

表1實(shí)例1-8化合物對K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的IC₅₀和IC₉₀值

通過表1可以看出在實(shí)施例中制備的實(shí)例1至實(shí)例8化合物(分別對應(yīng)于化合物7a-7f和14a-14b)均可以有效地抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞的增殖，特別是實(shí)例1至實(shí)例5化合物(化合物7a至化合物7e)在藥物濃度低于陽性對照藥物伊馬替尼的情況下，仍可以同樣實(shí)現(xiàn)有效抑制K562-3d、HL60、KG1a細(xì)胞增殖的效果，因此，本發(fā)明提供的實(shí)例1至實(shí)例8化合物可以用于治療白血病。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。