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一種小動物肝臟特異性基因轉(zhuǎn)染方法以及以其為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)基因小動物模型的構(gòu)建方法與流程

文檔序號:11693808閱讀:來源:國知局
一種小動物肝臟特異性基因轉(zhuǎn)染方法以及以其為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)基因小動物模型的構(gòu)建方法與流程

技術(shù)特征:
1.一種構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小動物模型的方法,包括下述步驟:1)構(gòu)建攜帶目的基因的重組表達(dá)質(zhì)粒,所述目的基因?yàn)楦闻K特異性基因HBV或HCV全基因組基因;2)以眼底靜脈叢注射技術(shù)和靜脈高壓注射轉(zhuǎn)染法為基礎(chǔ)的小動物肝臟特異性基因轉(zhuǎn)染方法將所述攜帶目的基因的重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到小動物體內(nèi),得到轉(zhuǎn)基因小動物模型;所述以眼底靜脈叢注射技術(shù)和靜脈高壓注射轉(zhuǎn)染法為基礎(chǔ)的小動物肝臟特異性基因轉(zhuǎn)染方法,是將大于1μg攜帶目的基因的重組表達(dá)質(zhì)粒溶解于相當(dāng)于實(shí)驗(yàn)動物體重4-10%的生理鹽水,以8秒的速度注射入實(shí)驗(yàn)動物的眼底靜脈叢內(nèi),8-36小時(shí)后目的基因在實(shí)驗(yàn)動物肝臟處獲得表達(dá);所述小動物為新生鼠或樹鼩。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小動物模型的方法,其特征在于:所述攜帶目的基因的重組表達(dá)質(zhì)粒的注射量為10μg;所述生理鹽水的注射量為10%;所述目的基因的表達(dá)時(shí)間為8-24小時(shí)。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小動物模型的方法,其特征在于:重組質(zhì)粒為以pCI-neo為出發(fā)質(zhì)粒構(gòu)建的攜帶Gluc基因的重組表達(dá)質(zhì)粒,命名為pCI-Gluc,以pGL3為出發(fā)質(zhì)粒構(gòu)建的攜帶Fluc基因的重組表達(dá)質(zhì)粒命名為pCMV-Fluc,以pcDNA為出發(fā)質(zhì)粒構(gòu)建的攜帶lacZ基因的重組表達(dá)質(zhì)粒命名為pCMV-β-Gal。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小動物模型的方法,其特征在于:小動物為新生鼠,目的基因?yàn)镠BV,包括以下步驟:1)以pGL3出發(fā)載體構(gòu)建攜帶HBV1.2倍基因組的重組真核表達(dá)質(zhì)粒,命名為pGL-CP-Fluc-HBV1.2;2)將所述質(zhì)粒pGL-CP-Fluc-HBV1.210μg溶解于相當(dāng)于小鼠體重10%的生理鹽水中,然后以8秒的速度通過眼底靜脈叢快速轉(zhuǎn)染至小鼠體內(nèi),得到HBV轉(zhuǎn)基因新生鼠模型。5.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小動物模型的方法,其特征在于:小動物為新生鼠,目的基因?yàn)镠CV全基因,包括以下步驟:1)以pCI-neo為出發(fā)載體構(gòu)建攜帶HCV全基因組的重組真核表達(dá)質(zhì)粒pCI-attB-AerApoEAATP-Fluc-ECMVIRES-HCV;2)將所述質(zhì)粒pCI-attB-AerApoEAATP-Fluc-ECMVIRES-HCV10μg溶解于相當(dāng)于新生鼠體重10%的生理鹽水中,然后以8秒的速度通過眼底靜脈叢快速轉(zhuǎn)染至新生鼠體內(nèi),得到HCV轉(zhuǎn)基因新生鼠模型。
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