專利名稱：用于治療由細(xì)胞活素引起的疾病的苯甲酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作細(xì)胞活素引起的疾病的抑制劑的酰胺衍生物。本發(fā)明還涉及制備本發(fā)明酰胺衍生物的方法、含有該酰胺衍生物的藥物組合物及其在通過(guò)抑制細(xì)胞活素引起的疾病的治療方法中的應(yīng)用。
本發(fā)明公開的酰胺衍生物為產(chǎn)生細(xì)胞活素的抑制劑，所述細(xì)胞活素如腫瘤壞死因子(下文稱TNF)，如TNFα，以及各種白介素(下文稱IL)科，如IL-1、IL-6和IL-8。因此，本發(fā)明化合物將用于治療其中發(fā)生生成過(guò)多細(xì)胞活素(如生成過(guò)多TNFα或IL-1)的疾病。眾所周知，細(xì)胞活素是由多種細(xì)胞(如單細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)產(chǎn)生的，它們能夠?qū)е略S多生理學(xué)作用，這些生理學(xué)作用被認(rèn)為在疾病(如炎癥和免疫調(diào)節(jié))中非常重要。例如，TNFα和IL-1已經(jīng)在細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)中受到影響，這被認(rèn)為促成了病態(tài)的病理，所述病態(tài)如炎癥和過(guò)敏癥及由細(xì)胞活素引起的毒性。人們還知道，在某些細(xì)胞系中，TNFα的生成領(lǐng)先于或引起了其它細(xì)胞活素(如IL-1)的生成。
例如，通過(guò)刺激T-輔助細(xì)胞、活化導(dǎo)致鈣再吸收的破骨細(xì)胞的活性、刺激蛋白聚糖從軟骨中釋放、刺激細(xì)胞增殖和促進(jìn)血管生成素生成，在如生理活性類花生四烯酸(如前列腺素和白細(xì)胞三烯)的生成、蛋白水解酶(如膠原酶)釋放的刺激、免疫系統(tǒng)的活化中也可影響細(xì)胞活素的非正常水平。
細(xì)胞活素也被認(rèn)為影響著疾病的產(chǎn)生和發(fā)展，所述疾病例如炎癥和過(guò)敏癥，如關(guān)節(jié)炎癥(特別是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng))、胃腸道炎癥(特別是腸炎、潰瘍性大腸炎、節(jié)段性回腸炎和胃粘膜炎)、皮膚病(特別是牛皮癬、濕疹和皮膚炎)和呼吸道疾病(特別是哮喘、支氣管炎、過(guò)敏性鼻炎和成年呼吸窘迫綜合癥)；以及影響各種心血管和腦血管疾病的產(chǎn)生和發(fā)展，這類疾病如充血性心衰竭、心肌梗塞、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成、高血壓、血小板聚集、心絞痛、中風(fēng)、再灌注受傷、血管受傷(包括再狹窄和末梢血管疾病)，以及各種骨代謝疾病，如骨質(zhì)疏松癥(包括老年性骨質(zhì)疏松癥和絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥)、變形性骨炎、骨轉(zhuǎn)移、高鈣血、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、骨硬化、骨膜炎和牙周炎，還有可伴隨類風(fēng)溫性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎的骨代謝異常變化。過(guò)量細(xì)胞活素生成也可導(dǎo)致一些細(xì)菌、真菌和/或病毒感染的并發(fā)癥，如內(nèi)毒素休克、膿毒性休克和毒性休克綜合癥，以及導(dǎo)致一些CNS外科手術(shù)或受傷的并發(fā)癥，如神經(jīng)外傷和充血性休克。過(guò)量細(xì)胞活素產(chǎn)生還可導(dǎo)致或加劇疾病的發(fā)展，所述疾病包括軟骨組織或肌肉再吸收、肺纖維變性、硬化、腎纖維變性、在某些慢性疾病中存在的惡變質(zhì)(如惡性疾病和后天性免疫缺乏綜合癥(AIDS))、腫瘤侵襲和腫瘤轉(zhuǎn)移及多發(fā)性硬化癥。
通過(guò)TNFα抗體的臨床研究，可提供TNFα在導(dǎo)致類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)中所起主要作用的證據(jù)(The Lancet，1994，344，1125 and British Journal of Reheumatology，1995，34，334)。
由此，細(xì)胞活素(如TNFα和IL-1)被認(rèn)為是許多疾病和重要介體。所以人們期望抑制這些細(xì)胞活素的生成和/或作用可有利于預(yù)防、控制或治療這類疾病。
在不希望僅僅由于對(duì)單個(gè)生物過(guò)程的作用而暗示本發(fā)明公開的化合物具有藥理活性的條件下，人們通過(guò)化合物可抑制酶p38激酶，從而相信該化合物可抑制細(xì)胞活素的作用。p38激酶(也被公知為細(xì)胞活素抑制結(jié)合蛋白(下文稱為CSBP)和再活化激酶(下文稱為RK))是酶的促細(xì)胞分裂劑活化蛋白(下文稱為MAP)激酶科；人們公知它是由生理壓力活化，所述生理壓力由電離輻射、細(xì)胞毒素試劑和毒素(例如內(nèi)毒素，如細(xì)菌脂多糖)引起，以及通過(guò)許多試劑引起，所述試劑包括細(xì)胞活素，如TNFα和IL-1。人們已知，p38激酶可使一些胞內(nèi)蛋白質(zhì)磷酸化，該蛋白質(zhì)包含在酶解步驟的級(jí)聯(lián)中，能夠?qū)е录?xì)胞活素(如TNFα和IL-1)的生物合成和排泄。p38激酶的已知吲唑基綜述在G.J.Hanson in Expert Opinions on Therapeutic Patents，1997，7，729-733中。p38激酶公知以p38α和p38β異構(gòu)重整形式存在。
本發(fā)明公開的化合物是產(chǎn)生細(xì)胞活素(如TNF，特別是TNFα)和各種白介素(特別是IL-1)的抑制劑。
人們從J.Med.Chem.，1996，39，3343-3356可以知道，一些苯甲酰胺衍生物可以升調(diào)節(jié)人體肝細(xì)胞中低密度脂蛋白(LDL)受體的表達(dá)。公開的化合物包括一些N-(2-甲氧基苯基)-和N-(2-鹵代苯基)-苯甲酰胺衍生物。
J.Chem.Res.Synop.，1988，182-183，886-896(化學(xué)文摘，第129卷，摘要67538)公開了化合物N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)苯甲酰胺。
一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯，式I 其中R1和R2可相同或不同，選自羥基、C1-6烷氧基、巰基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、氨基甲?；?、C1-6烷基氨基甲?；⒍?C1-6烷基氨基甲?；1-6烷基亞硫?；?、C1-6烷基磺?；?、芳基亞硫?；?、芳基磺酰基、C1-6烷氨基磺?；?、二-(C1-6烷基)氨基磺?；?、硝基、氰基、氰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷酰氨基、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6烷炔基、鹵素、三氟甲基、芳基、芳基C1-6烷基、芳基C1-6烷氧基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基C1-6烷基；m和p獨(dú)立地為0-3，且當(dāng)m和/或p為2或3時(shí)，R1和R2相同或不同；R3為鹵素、氰基或C1-6烷氧基；q為0-4；以及R4為芳基或環(huán)烷基，其中R4可任意地被至多3個(gè)取代基取代，所述取代基為各個(gè)R1基團(tuán)定義的任何基團(tuán)；條件是不包括N-[5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)-2-甲氧基苯基]-4-乙?；郊柞０罚?br> N-[2-溴-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-羥基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-乙?；郊柞０?，N-[2-氯-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-羥基苯甲酰胺，N-[2-氟-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-羥基苯甲酰胺，和N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)苯甲酰胺。
術(shù)語(yǔ)如“芳基”、“芳基C1-6烷基”、“芳基硫基”、“芳基亞硫?；薄ⅰ胺蓟酋；焙汀胺蓟鵆1-6烷氧基”中的“芳基”典型地為苯基或萘基，優(yōu)選苯基。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”和“雜芳基C1-6烷基”中的“雜芳基”是指含有至多五個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的芳族單-或雙環(huán)5至10元環(huán)。“雜芳基”的實(shí)例包括噻吩基、吡咯基、呋喃基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、哌嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吡啶基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基和噌啉基。“雜環(huán)基”和“雜環(huán)基C1-6烷基”的“雜環(huán)基”是指含有至多五個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的非芳族單-或雙環(huán)5至10元環(huán)?！半s環(huán)基”的實(shí)例包括吡咯啉基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、二氫吡啶基和二氫嘧啶基?！碍h(huán)烷基”是指非芳族單-或雙環(huán)5-10元碳環(huán)。“環(huán)烷基”的實(shí)例包括環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、二環(huán)[2.2.1]庚基和二環(huán)[4.4.0]癸基。
其它典型的-般性基團(tuán)包括C1-6烷氧基，如甲氧基和乙氧基；C1-6烷硫基，如甲硫基和乙硫基；C1-6烷氨基，如甲氨基和乙氨基；二-(C1-6烷基)氨基，如二甲氨基；C1-6烷氧基羰基，如甲氧基羰基和乙氧基羰基；C1-6烷基氨基甲?；缂谆被柞；欢?C1-6烷基氨基甲?；?，如二甲基氨基甲?；籆1-6烷基亞硫?；?，如甲基亞硫酰基；C1-6烷基磺?；缂谆酋；籆1-6烷氨基磺?；?，如甲氨基磺?；欢?(C1-6烷基)氨基磺?；?，如二甲氨基磺酰基；氰基C1-6烷基，如氰基甲基；羥基C1-6烷基，如羥甲基；氨基C1-6烷基，如氨基甲基；C1-6烷?；被缂柞０被鸵阴０被?；C1-6烷氧基羰基氨基，如甲氧基羰基氨基；C1-6烷?；?，如甲?；鸵阴；?；C1-6烷酰氧基，如乙酰氧基；C1-6烷基，如甲基、乙基、異丙基和叔丁基；C2-6鏈烯基，如乙烯基和烯丙基；C2-6炔基，如乙炔基和2-丙炔基；鹵素，如氟、氯和溴；芳基C1-6烷基，如芐基；芳基C1-6烷氧基，如芐氧基。
R1或R2中的任何環(huán)或R4上的取代基中的任何環(huán)可任意地帶有至多3個(gè)取代基。適當(dāng)?shù)娜〈u基、C1-6烷氧基、巰基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、氨基甲酰基、C1-6烷基氨基甲酰基、二-C1-6烷基氨基甲?；?、C1-6烷基亞硫?；?、C1-6烷基磺酰基、芳基亞硫?；?、芳基磺酰基、C1-6烷氨基磺?；⒍?(C1-6烷基)氨基磺?；?、硝基、氰基、氰基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷?；被?、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷?；1-6烷酰氧基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素和三氟甲基。
在本說(shuō)明書中，一般性術(shù)語(yǔ)“烷基”包括直鏈和支鏈烷基。但對(duì)單獨(dú)的烷基(如丙基)僅特指直鏈基團(tuán)，而對(duì)單獨(dú)的支鏈烷基僅特指支鏈基團(tuán)。類似的規(guī)則可應(yīng)用于其它一般性基團(tuán)。
人們應(yīng)當(dāng)理解，上文定義的式I化合物可以以含有一個(gè)或多個(gè)非對(duì)稱碳原子的旋光活性或外消旋形式存在，在其定義中，本發(fā)明包括具有抑制細(xì)胞活素(特別是TNF)性能的旋光活性或外消旋形式。旋光活性形式的化合物的合成可通過(guò)本領(lǐng)域公知的有機(jī)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行，例如由旋光活性起始原料合成或通過(guò)拆分外消旋形式合成。類似地，通過(guò)利用下文所述的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方法，可以評(píng)估對(duì)TNF的抑制性能。
優(yōu)選地，R1為羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、C1-6烷基氨基甲?；⑶杌?、C1-6烷酰氨基、C1-6烷?；?、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、鹵素、三氟甲基或雜環(huán)基。進(jìn)一步優(yōu)選地，R1為氨基C1-6烷基。
更優(yōu)選地，R1為羥基、C1-6烷氧基、氰基、鹵素、嗎啉代或4-甲基哌嗪-1-基。
優(yōu)選地，m為1或2。
方便地，p為1且R2為C1-6烷氧基、羧基、C1-6烷氧基羰基、C1-6烷基或鹵素。
優(yōu)選地，p為0。
優(yōu)選地，R3為鹵素。
優(yōu)選地，q為0、1或2。更優(yōu)選地q為0。
優(yōu)選地，R4為苯基、環(huán)己基或環(huán)戊基。
更優(yōu)選地，R4為苯基。
R4上的優(yōu)選取代基為羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、C1-6烷酰氨基、C1-6烷?；?、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、鹵素、三氟甲基、苯基、苯基C1-6烷氧基和雜環(huán)基。
進(jìn)一步優(yōu)選地，R4上的取代基選自羥基、氰基、二甲氨基、甲氧基、乙氧基、氟、氯和嗎啉代。
本發(fā)明特別新的化合物包括如式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，不包括上文定義的不包括的化合物，其中(a)R1為羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、氰基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷?；被1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷酰基、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、鹵素或三氟甲基；以及m為1或2；R2、R3、R4、p和q具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(b)R1為含有1或2個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子的非芳族飽和5-或6-元雜環(huán)；以及m為1或2；R2、R3、R4、p和q具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(c)R1為選自吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、哌嗪基和4-(C1-6烷基)哌嗪基；以及m為1或2；R2、R3、R4、p和q具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(d)R2為羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、C1-6烷基、鹵素或三氟甲基；以及p為1；R1、R3、R4、m和q具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(e)p為0；R1、R3、R4、m和q具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(f)R3為鹵素；以及R1、R2、R4、m、p和q具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(g)q為1、2、3或4；R4為環(huán)烷基；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(h)q為1；R4為苯基，所述苯基可任意地被選自下列的至多3個(gè)取代基取代羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、硝基、氰基、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷?；1-6烷酰氧基、C1-6烷基、鹵素、三氟甲基、苯基、芐基或芐氧基；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(i)q為0；R4為苯基，所述苯基被選自下列的1或2個(gè)取代基取代雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-6烷基；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；(j)q為0；R4為苯基，所述苯基被含具有選自氮、氧和硫的1或2個(gè)雜原子的非芳族飽和5-或6-元雜環(huán)的1或2個(gè)雜環(huán)基團(tuán)取代；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義；以及(k)q為0；R4為苯基，所述苯基被選自吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、哌嗪基和4-(C1-6烷基)哌嗪基的1或2個(gè)雜環(huán)基團(tuán)取代；以及R1、R2、R3、m和p具有上文定義的任何含義或具有涉及本發(fā)明特別新的化合物部分的任何含義。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物為式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、氰基、乙酰氨基、乙?；⒁阴Ｑ趸?、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、氟、氯、三氟甲基、吡咯烷-1-基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；q為1、2或3；以及
R4為環(huán)己基或環(huán)庚基。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的化合物為式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、氰基、乙酰氨基、乙酰基、乙酰氧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、氟、氯、三氟甲基、吡咯烷-1-基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；q為0；以及R4為苯基，所述苯基被選自下列的1或2個(gè)取代基取代羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、丙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、硝基、氰基、乙酰氨基、乙酰基、乙酰氧基、甲基、乙基、氟、氯、溴、三氟甲基、苯基、芐氧基、吡咯烷-1-基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的化合物為式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、氰基、氟、氯、嗎啉代或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；q為0；以及R4為苯基，所述苯基被選自下列的1或2個(gè)取代基取代羥基、甲氧基、二甲氨基、甲氧基羰基、氰基、氟、氯和嗎啉代。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的化合物為式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、氨基、氰基、乙酰氧基、氟、氯、嗎啉代或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；
q為0；以及R4為苯基，所述苯基被選自下列的1或2個(gè)取代基取代羥基、甲氧基、氨基、二甲氨基、甲氧基羰基、硝基、氰基、氟、氯和嗎啉代。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物為下列化合物或其可藥用鹽N-[2-氯-5-(3-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，和N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物包括下列化合物或其可藥用鹽N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(3-嗎啉代苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[5-(4-乙酰氧基苯甲酰氨基)-2-氯苯基]-4-氰基苯甲酰胺，N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-2-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺，和N-[2-氯-5-(3-嗎啉代苯甲酰氨基)苯基]-4-氰基苯甲酰胺。
式I化合物的適宜可藥用鹽為如具有足夠堿性的式I化合物酸加成鹽，例如與有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、三氟乙酸、檸檬酸或馬來(lái)酸)形成的酸加成鹽；或具有足夠酸性的式I化合物的鹽，例如堿金屬或堿土金屬鹽(如鈣或鎂鹽)或銨鹽或與有機(jī)堿(如甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或三-(2-羥乙基)胺)形成的鹽。
各種前藥形式是本領(lǐng)域公知的。這類前藥衍生物可參見a)Design of Prodrugs，edited by H.Bundgaard，(Elsevier，1985)and Method in Enzymology，Vol.42，p.309-396，edited byK.widder，et al.(Academic Press，1985)；b)A Textbook of Design and Development，edited byKrogsgaard-Larsen and H.Bundgaard，Chapter 5“Design andApplication of Produgs”，by H.Bundgaard，p.113-191(1991)；c)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews，8，1-38(1992)；d)H.Bundgaard，et al.，Journal of PharmaceuticalSciences，77，285(1998)；以及e)N.Kakeya，et al.，Chem.Pharm.Bull.，32，692(1984)。
這類實(shí)例性前藥可用于形成式I化合物的體內(nèi)可分解酯。含羧基的式I化合物的體內(nèi)可裂解酯為如在人或動(dòng)物體中裂解生成母酸的可藥用酯。適宜的含羧基的可藥用酯包括C1-6烷氧基甲基酯(如甲氧基甲基酯)、C1-6烷酰氧基甲基酯(如戊酰氧基甲基酯)、2-苯并[c]呋喃酮基酯、C3-8烷環(huán)烷氧基羰基氧基C1-6烷基基酯(如1-環(huán)己基羰基氧基乙基酯)、1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基酯(如5-甲基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基酯)和C1-6烷氧基羰基氧基乙基酯(如1-甲氧基羰基乙基酯)，該可藥用酯可在式I化合物的任何羧基上生成。
為了將式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于治療性處理(包括預(yù)防處理)哺乳動(dòng)物(包括人)，通常需要根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥物方法，將藥物組合物制成制劑。
根據(jù)本發(fā)明這一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含上文定義的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽或可體內(nèi)分解酯以及可藥用稀釋劑或載體。
本發(fā)明組合物可以是適于經(jīng)口使用的劑型(如片劑，錠劑，硬或軟膠囊，水合或油懸浮液、乳液，可分散粉劑或顆粒劑，糖漿或酏劑)、適于局部使用的劑型(如膏劑，油劑，凝膠，或水或油溶液或懸浮液)、適于吸入給藥的劑型(如細(xì)磨粉末或液體氣霧劑)、適于吹入給藥的劑型(如細(xì)磨粉末)或適于非腸道給藥的劑型(如無(wú)菌水或油溶液，適于靜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)給藥；或栓劑，適于直腸給藥)。
本發(fā)明組合物可利用本領(lǐng)域公知的常規(guī)藥物賦形劑，通過(guò)常規(guī)的方法制備。由此，用于經(jīng)口使用的組合物可包含如一種或多種著色劑、甜味劑、矯味劑和/或防腐劑。
例如，適用于片劑劑型的適宜可藥用賦形劑包括惰性稀釋劑，如乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣；成粒劑和崩解劑，如玉米淀粉或藻酸；結(jié)合劑，如淀粉；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石；保存劑，如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或丙酯；以及抗氧化劑，如抗壞血酸。片劑劑型可以不包衣，或者可以利用常規(guī)的包衣劑和本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行包衣，從而改進(jìn)活性成分在胃腸道中的分解和吸收，改善其穩(wěn)定性和/或外觀。
經(jīng)口使用的組合物可以以硬明膠形式存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑混合，所述固體稀釋劑如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土，或者以軟明膠形式存在，其中活性成分與水或油(如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。
水懸浮液一般包含以細(xì)粉形式存在的活性成分和一種或多種懸浮劑及分散劑或濕潤(rùn)劑，所述懸浮劑如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯樹膠；所述分散劑或濕潤(rùn)劑如卵磷脂或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物(如十七氧乙烯鯨蠟醇)，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯)，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酸酐衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚乙烯山梨糖醇單油酸酯)。水懸浮液也可含義一種或多種保存劑(如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化劑(如抗壞血酸)、著色劑、矯味劑和/或甜味劑(如蔗糖、糖精或天冬甜素)。
油懸浮液可通過(guò)將活性成分懸浮在植物油(如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油(如液體石蠟)中而制成。油懸浮液也可包含增稠劑，如蜂蠟、固體石蠟或鯨蠟醇。也可加入如上所述的甜味劑和矯味劑，提供可口的口服制劑。這些組合物可通過(guò)加入抗氧化劑(如抗壞血酸)保存。
適用于通過(guò)添加水而制備水懸浮液的分散粉末和顆粒一般含有活性成分及分散劑或濕潤(rùn)劑、懸浮劑和一種或多種保存劑。適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑及懸浮劑的實(shí)例已在上文提到過(guò)。也可存在另外的賦形劑，如甜味劑、矯味劑和著色劑。
本發(fā)明藥物組合物也可以以水包油乳液形式存在。油相可以是植物油(如橄欖油或花生油)或礦物油(如液體石蠟)及其混合物。適宜的乳化劑可以是天然樹膠，如阿拉伯樹膠或黃蓍膠，天然磷脂，如大豆、卵磷脂、由脂肪酸和己糖醇酸酐衍生的酯或偏酯(如失水山梨醇單油酸酯)和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯)。乳液也可包含甜味劑、矯味劑和保存劑。
糖漿和酏劑可利用甜味劑(如甘油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜素或蔗糖)制成，也可包含潤(rùn)滑劑、保存劑、矯味劑和/或著色劑。
藥物組合物也可以以無(wú)菌注射水或油懸浮液形式存在，可利用上文所述的一種或多種適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶?rùn)劑及懸浮劑，通過(guò)公知的方法制成。無(wú)菌注射制劑也可以是于無(wú)毒且可用于非腸道給藥的稀釋劑或溶劑中無(wú)菌注射溶液或懸浮液(如于1，3-丁二醇中的溶液)。
栓劑制劑可通過(guò)將活性成分與適當(dāng)?shù)姆谴碳ば再x形劑混合制得，所述非刺激性賦形劑在常溫下為固體，而在直腸溫度下為液體，因而可在直腸道中熔化而釋放藥物。適宜的賦形劑包括如可可脂和聚乙二醇。
局部制劑(如膏劑、油劑、膠劑或油溶液或乳液)一般可通過(guò)本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法，將活性成分與常規(guī)的可局部給藥的載體或稀釋劑混合制得。
適于吹入給藥的組合物可以以細(xì)分的粉末形式存在，所述細(xì)分粉末包含平均直徑為小于等于30μm的顆粒，該粉末本身可僅包含活性成分，或者還包含稀釋劑及一種或多種可藥用載體(如乳糖)。適于吹入給藥的粉末可方便地包含在膠囊中，該膠囊包含如1至50mg活性成分和渦輪吸入器裝置，如用于吹入公知試劑色甘酸鈉的裝置。
適于吸入給藥的組合物可以以安排成可分散活性成分的常規(guī)壓縮氣溶膠形式存在，其中所述活性成分被分散成包含細(xì)分固體的氣溶膠或液滴?？墒褂贸Ｒ?guī)的氣溶膠推進(jìn)劑，如揮發(fā)性烴或氟化烴，氣溶膠裝置可方便地安排成可分散計(jì)量活性成分。
對(duì)于制劑的進(jìn)一步信息，讀者可參見Comprehensive MedicinalChemistry(Crowin Hansch；Chairman of Editorial Board，；Pergamon Press 1990)第5卷第25.2章。
與一種或多種賦形劑結(jié)合生成單個(gè)劑量形式的活性成分的量可有必要地根據(jù)受治療主體及特殊給藥路線而變化。例如，治療人的經(jīng)口給藥的制劑一般可包含如與適量賦形劑結(jié)合的0.5g至0.5g活性劑，所述賦形劑含量可在組合物總重量大約5至大約98％之間變化。劑量單元制劑一般包含大約1mg至大約500mg活性成分。對(duì)于進(jìn)一步的給藥路線和劑量規(guī)則，讀者可參見Comprehensive MedicinalChemistry(Crowin Hansch；Chairman of Editorial Board，；Pergamon Press 1990)第5卷第25.3章。
根據(jù)公知的醫(yī)學(xué)原理，本發(fā)明式I化合物用于治療或預(yù)防目的的劑量大小實(shí)質(zhì)上取決于疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、動(dòng)物或患者的年齡和性別以及給藥路線。
在將式I化合物用于治療或預(yù)防目的時(shí)，給藥的日劑量范圍一般為0.5mg至75mg/kg體重，可分次服用。一般地，如果采用非腸道給藥路線，則可服用低劑量。由此例如，對(duì)于靜內(nèi)給藥，一般使用的劑量范圍為0.5mg至30mg/kg體重。類似地，對(duì)于吸入給藥，所使用的劑量范圍為0.5mg至25mg/kg體重。但優(yōu)選經(jīng)口給藥，特別是以片劑形式給藥。典型地，單位劑型含有大約1mg至500mg本發(fā)明化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了將上文定義的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于通過(guò)治療處理人體或動(dòng)物體的方法。
另一方面，本發(fā)明提供了上文定義的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯(不包括本發(fā)明化合物定義中那些公知的任何化合物)用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療由細(xì)胞活素引起的醫(yī)學(xué)疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了治療由細(xì)胞活素引起的醫(yī)學(xué)疾病的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療由TNF、IL-1、IL-6或IL-8引起的疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了治療由TNF、IL-1、IL-6或IL-8引起的疾病的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療由TNF引起的疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了治療由TNF引起的疾病的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于制備藥物的用途，所述藥物用于抑制TNF、IL-1、IL-6或IL-8。
另一方面，本發(fā)明提供了抑制TNF、IL-1、IL-6或IL-8的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于制備藥物的用途，所述藥物用于抑制TNF。
另一方面，本發(fā)明提供了卻制TNF的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療由p38激酶引起的疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了治療由p38激酶引起的疾病的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于制備藥物的用途，所述藥物用于產(chǎn)生p38激酶抑制作用。
另一方面，本發(fā)明提供了提供p38激酶抑刺作用的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、哮喘、應(yīng)急性腸疾病、多發(fā)性硬化癥、AIDS、膿毒性休克、缺血性心臟病或牛皮癬。
另一方面，本發(fā)明提供了治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、哮喘、應(yīng)急性腸疾病、多發(fā)性硬化癥、AIDS、膿毒性休克、缺血性心臟病或牛皮癬的方法，該方法包括對(duì)熱血?jiǎng)游锓糜行┝康氖絀化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
本發(fā)明化合物可與用于治療疾病的其它藥物和治療方法一起使用，所述藥物和治療方法對(duì)抑制細(xì)胞活素(特別是TNF和IL-1)有利。例如，本發(fā)明式I化合物可與用于治療本說(shuō)明書上文所述的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、哮喘、應(yīng)急性腸疾病、多發(fā)性硬化癥、AIDS、膿毒性休克、缺血性心臟病、牛皮癬及其它疾病的藥物和治療方法一起使用。
例如，鑒于其抑制細(xì)胞活素的能力，式I化合物可用于治療某些炎癥性和非炎癥性疾病，這類疾病目前是利用環(huán)氧酶抑制非甾類抗炎藥物(NSAID)治療，這類藥物如消炎痛、酮咯酸、乙酰水楊酸、布洛芬、舒林酸、托美丁和吡氧噻嗪。式I化合物與NSAID共同給藥可導(dǎo)致需要產(chǎn)生治療作用的后者的劑量降低。由此似乎可降低NSAID的副作用，如腸胃反應(yīng)。因此，本發(fā)明的另一特征在于提供了與環(huán)氧酶抑制非甾類抗炎劑結(jié)合的藥物組合物，該藥物組合物包含式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯以及可藥用鹽稀釋劑或載體。
本發(fā)明化合物還可與5-脂氧合酶抑制劑類抗炎劑一起使用(如下列歐洲專利申請(qǐng)中所公開、0351194、0375368、0375404、0375452、037547、0381375、0385662、0385663、0385679、0385680)。
在治療如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎類疾病方面，式I化合物也可與抗關(guān)節(jié)炎藥一起使用，所述抗關(guān)節(jié)炎藥如金、氨甲喋呤、類固醇和青霉素胺；在治療骨關(guān)節(jié)炎中可與類固醇一起使用。
在降解性疾病(如骨關(guān)節(jié)炎)方面，本發(fā)明化合物也可與軟骨保護(hù)劑、抗降解劑和/或修補(bǔ)劑一起使用，所述軟骨保護(hù)劑、抗降解劑和/或修補(bǔ)劑如雙醋瑞因、玻璃糖醛酸制劑(如Hyalan、Rumalon、Arteparon)及葡萄糖胺鹽(如Antril)。
在治療哮喘方面，式I化合物可與抗哮喘劑一起使用，所述抗哮喘劑如支氣管擴(kuò)張藥和白三烯拮抗劑。
如果是固定劑量的劑型，這類組合制品可在這里描述的劑量范圍內(nèi)使用本發(fā)明化合物，以及在所承認(rèn)的劑量范圍內(nèi)使用其它藥物活性劑。當(dāng)組合制劑不適當(dāng)時(shí)，可采用連續(xù)使用。
盡管式I化合物主要用作熱血?jiǎng)游?包括人)的治療劑，但本發(fā)明化合物也可根據(jù)需要起著抑制細(xì)胞活素的作用。由此，這些化合物可用作用于研制新的生物試驗(yàn)及尋找新藥物制劑的藥物標(biāo)準(zhǔn)。
式I酰胺衍生物或其可藥用鹽或其體內(nèi)可分解酯可通過(guò)應(yīng)用于制備相關(guān)化合物的公知方法制得。適宜的方法參見如下述文獻(xiàn)所述的方法J.Med.Chem.，1996，39，3343-3356。當(dāng)將其應(yīng)用于制備式I新酰胺衍生物時(shí)，該方法提供了本發(fā)明的另外特征，這可通過(guò)下述有代表性的方法說(shuō)明，除非另外說(shuō)明，其中的變量R1、R2、R3、R4、m、p和q具有上文定義的任何含義。必要的起始原料可由有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得。這些起始原料的制備在接著的實(shí)施例中與下述有代表性的方法一起描述。另外，必要的起始原料也可通過(guò)所述的類似方法獲得，該類似方法屬于有機(jī)化學(xué)工作者的普通技術(shù)范疇。
(a)式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯可通過(guò)下述方法制備在生成酰胺鍵的標(biāo)準(zhǔn)條件下，將式II苯胺， 式II與式III酸或其活性衍生物反應(yīng)， 式III其中可變基團(tuán)如上文定義，如果需要的話，則可對(duì)任何官能團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，以及(i)除去任何保護(hù)基團(tuán)；(ii)任意地形成可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
適宜的式III酸的活性衍生物為如?；u，如通過(guò)酸與無(wú)機(jī)酰氯反應(yīng)形成的酰氯，如亞硫酰氯；混合酸酐，如通過(guò)酸與氯甲酸酯(如氯甲酸異丁酯)反應(yīng)形成的酸酐；活性酯，如通過(guò)酸與酚(五氟苯酚)或醇(如N-氰基苯并三唑)反應(yīng)形成的酯，所述酯如三氟乙酸五氟苯基酯；?；B氮化物，如通過(guò)酸與疊氮化物反應(yīng)形成的疊氮化物，如二苯基磷酰基疊氮化物；?；杌?，如通過(guò)酸與氰化物形成的氰化物，如二乙基磷酰基氰化物；或酸與碳化二亞胺的反應(yīng)產(chǎn)物，如二環(huán)己基碳化二亞胺。
反應(yīng)優(yōu)選地在存在適當(dāng)堿的條件下進(jìn)行，所述堿如堿金屬或堿土金屬碳酸鹽、醇鹽、氫氧化物或氫化物，例如碳酸鈉、碳酸鉀、乙醇鈉、丁醇鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉或氫化鉀；或有機(jī)金屬堿，例如烷基鋰(如正丁基鋰)或二烷氨基鋰(如二異丙基胺化鋰)或有機(jī)胺(如吡啶、2，6-二甲基吡啶、可力丁、4-二甲氨基吡啶、三乙胺、嗎啉或二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯)。反應(yīng)也可優(yōu)選地在適當(dāng)惰性溶劑或稀料(如四氫呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亞砜或丙酮)中于如-78℃至150℃的溫度范圍(可方便地在接近環(huán)境溫度下)內(nèi)進(jìn)行。
典型地，碳化二亞胺偶合劑可在存在有機(jī)溶劑(優(yōu)選無(wú)水極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑)的條件下，于非極端溫度(如-10至40℃，典型地于大約20℃的環(huán)境溫度)下使用。
保護(hù)基團(tuán)一般可選自文獻(xiàn)中描述或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的適用于所討論的基團(tuán)保護(hù)的任何基團(tuán)，該保護(hù)基團(tuán)可通過(guò)常規(guī)方法引入。保護(hù)基團(tuán)可通過(guò)文獻(xiàn)中描述或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的適用于去除所討論的保護(hù)基團(tuán)的方法去除，這類方法可選擇成能夠在對(duì)該分子的別處影響最小的條件下有效地去除保護(hù)基團(tuán)。
為了簡(jiǎn)便起見，保護(hù)基團(tuán)給出如下，其中這里所述的“低級(jí)”(如低級(jí)烷基)是指所使用的基團(tuán)優(yōu)選地含有1-4個(gè)碳原子。人們應(yīng)當(dāng)可以理解，這些實(shí)例是非窮盡的。去除保護(hù)基團(tuán)方法的特例給出如下，它們也是非窮盡的。沒有特別提到的保護(hù)基團(tuán)的使用和脫保護(hù)的方法當(dāng)然也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
羧基保護(hù)基團(tuán)可以是成酯脂族或芳基脂族醇或成酯硅烷醇(所述醇或硅烷醇優(yōu)選地包含1-20個(gè)碳原子)。
羧基保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括直鏈或支鏈C1-12烷基基團(tuán)(如異丙基、叔丁基)；低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基基團(tuán)(如甲氧基甲基、乙氧基甲基、異丁氧基甲基)；低級(jí)脂族酰氧基低級(jí)烷基基團(tuán)(如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基)；低級(jí)烷氧基羰基氧基低級(jí)烷基基團(tuán)(如1-甲氧基羰基氧基乙基、1-乙氧基羰基氧基乙基)；芳基低級(jí)烷基基團(tuán)(如芐基、p-甲氧基芐基、o-硝基芐基、p-硝基芐基、二苯甲基和2-苯并[c]呋喃酮基)；三(低級(jí)烷基)甲硅烷基基團(tuán)(如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；三(低級(jí)烷基)甲硅烷基低級(jí)烷基基團(tuán)(如三甲基甲硅烷基乙基)；以及C2-6鏈烯基(如烯丙基和乙烯基乙基)。
特別適用于去除羧基保護(hù)基團(tuán)的方法包括如酸-、堿-、金屬-或酶-催化水解。
羥基保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括低級(jí)烷基基團(tuán)(如叔丁基)，低級(jí)鏈烯基基團(tuán)(如烯丙基)；低級(jí)烷?；鶊F(tuán)(如乙酰基)；低級(jí)烷氧基羰基基團(tuán)(如叔丁氧基羰基)；低級(jí)烯氧基羰基基團(tuán)(如烯丙氧基羰基)；芳基低級(jí)烷氧基羰基基團(tuán)(如苯甲酰氧基羰基、p-甲氧基芐氧基羰基、o-硝基芐氧基羰基、p-硝基芐氧基羰基)；三低級(jí)烷基甲硅烷基(如三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基)和芳基低級(jí)烷基基團(tuán)(如芐基)。
氨基保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括甲?；纪榛?如芐基和取代芐基、p-甲氧基芐基、硝基芐基、2，4-二甲氧基芐基和三苯基甲基)；二-p-茴香基甲基和呋喃基甲基基團(tuán)；低級(jí)烷氧基羰基(如叔丁氧基羰基)；低級(jí)烯氧基羰基(如烯丙氧基羰基)；芳基低級(jí)烷氧基羰基基團(tuán)(如芐氧基羰基、p-甲氧基芐氧基羰基、o-硝基芐氧基羰基、p-硝基芐氧基羰基)；三烷基甲硅烷基(如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)；亞烷基(如亞甲基)；亞芐基和取代亞芐基。
適用于去除羥基和氨基保護(hù)基團(tuán)的方法包括例如，對(duì)于如p-硝基芐氧基羰基，可采用酸-、堿-、金屬-或酶-催化水解；對(duì)于如芐基，可采用氫化反應(yīng)；以及對(duì)于如o-硝基芐氧基羰基，可采用光解作用。
對(duì)于反應(yīng)條件和試劑的一般性知識(shí)，讀者可參見AdvancedOrganic Chemistry，4thEdition，by Jerry March，published byJohn Wiley & Sons，1992。對(duì)于保護(hù)基團(tuán)的一般性知識(shí)，讀者可參見Protective Groups in Organic Synthrsis，2ndEdition，byGreen et al.，published by John Wiley & Sons。式II苯胺可通過(guò)還原相應(yīng)的式IV硝基化合物制得 式IV典型的反應(yīng)條件包括在存在催化劑(如Pd/C)和有機(jī)溶劑(優(yōu)選極性質(zhì)子溶劑)條件下使用甲酸銨，優(yōu)選在加熱(如加熱至大約60℃)下進(jìn)行。如果需要的話，任何官能團(tuán)均可以被保護(hù)和脫保護(hù)。
式IV化合物可在適當(dāng)?shù)纳甚０锋I的條件下，將式V酸或其活性衍生物， 式V與式VI苯胺反應(yīng)制得， 式VI典型的反應(yīng)條件包括如在環(huán)境溫度下，于有機(jī)溶劑中，利用鹵代試劑(如草酰氯)處理，活化式V羧基基團(tuán)，生成?；u，然后將活化的化合物與式VI苯胺反應(yīng)。如果需要的話，任何官能團(tuán)均可以被保護(hù)和脫保護(hù)。
(b)式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯可通過(guò)下述方法制備在生成酰胺鍵的標(biāo)準(zhǔn)條件下，將上文定義的式V酸或其活性衍生物， 式V與式VII苯胺反應(yīng)， 式VII其中可變基團(tuán)如上文定義，如果需要的話，則可對(duì)任何官能團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，以及(i)除去任何保護(hù)基團(tuán)；(ii)任意地形成可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。
式VII苯胺可利用如上文描述或?qū)嵤├f(shuō)明的常規(guī)方法，還原相應(yīng)的硝基化合物而制得。
(c)其中R1或R4上的取代基為氨基基團(tuán)的式I化合物可通過(guò)還原其中R1或R4上的取代基為硝基的式I化合物制得。
典型的反應(yīng)條件包括在存在催化劑的條件下使用甲酸銨或氫氣氣體，所述催化劑如金屬催化劑，例如Pd/C。另外，溶解金屬的還原反應(yīng)可通過(guò)如在存在酸的條件下使用鐵進(jìn)行，所述酸如無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸或乙酸。反應(yīng)可方便地在存在有機(jī)溶劑(優(yōu)選極性質(zhì)子溶劑)下進(jìn)行，優(yōu)選在加熱(如大約60℃)下進(jìn)行。如果需要的話，可對(duì)任何官能團(tuán)進(jìn)行保護(hù)和脫保護(hù)。
下列生物鑒定和實(shí)施例被用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。生物鑒定下列鑒定用來(lái)測(cè)定本發(fā)明化合物的p38激酶-抑制、TNF-抑制和治療關(guān)節(jié)炎效果。體外酶測(cè)定測(cè)定本發(fā)明化合物抑制酶p38激酶的能力。測(cè)定特定試驗(yàn)化合物對(duì)酶的各種p38α和p38β異構(gòu)重整的活性。
利用與J.Han et al.，Journal of Biological Chemistry，1996，271，2886-2891中公開的類似方法，從圖像克隆45578(Genomics，1996，33，151)分離人體重組體MKK6(GenBank Accesion NumberG1209672)，將其在pGEX媒介動(dòng)物中用于制備GST融合蛋白質(zhì)形式的蛋白質(zhì)。通過(guò)文獻(xiàn)(Han et al.，Biochemica et Biophysica Acta，1995，1265，224-227和Y.Jiang，et al.，Journal of BiologicalChemistry，1996，271，17920-17926)中描述的類似方法，利用指定為人體p38α和p38β基因5’和3’端的寡核苷酸，分別通過(guò)人體淋巴樣干細(xì)胞cDNA(GenBank Accession Number G1416)和人體甲胎腦cDNA[利用Gibco標(biāo)記cDNA合成器，由mRNA(Clontech，Catalogue no.6525-1)合成]的PCR放大，分離出p38α(GenBankAccession Number G529039)和p38β(GenBank Accession NumberG1469305)。
兩種p38蛋白質(zhì)異構(gòu)重整均以PET載體中的e coli表達(dá)。人體重組體p38α和p38β異構(gòu)重整以5’c-myc，6His標(biāo)記蛋白質(zhì)形式生成。MKK6和p38蛋白質(zhì)均利用標(biāo)準(zhǔn)方法純化GST MKK6通過(guò)利用谷胱甘肽瓊脂糖柱純化，p38蛋白質(zhì)通過(guò)利用鎳螯合物柱純化。
p38酶在使用前通過(guò)利用MKK6在30℃下孵育3小時(shí)活化。未活化的coli-表達(dá)MKK6保留的活性足以完全活化兩種p38異構(gòu)重整?；罨跤琾38α(10μl，10mg/ml)和p38β(10μl，5mg/ml)以及MKK6(10μl，1mg/ml)、“激酶緩沖液”[100μl，pH7.4緩沖液，該緩沖液包含Tris(50mM)、EGTA(0.1mM)、原釩酸鈉(0.1mM)和β-巰乙醇(0.1％)]和MgATP(30μl，50mM Mg(OCOCH3)2和0.5mMATP)。這就產(chǎn)生足夠的活化p38用于3個(gè)微滴定板。
試驗(yàn)化合物溶解在DMSO中。將于“激酶緩沖液”中的10μl 1∶10稀釋樣品加到微滴定板的孔中。對(duì)于單劑量測(cè)試，化合物以30μM加入。在加入“標(biāo)記ATP”[30μl；包含50μM ATP、0.1μCi33P ATP(Amersham International cat.no.BF1000)和50mM Mg(OCOCH3)2]之后，加入“激酶測(cè)定混合物”[30μl；包含Myelin堿性蛋白質(zhì)(GibcoBRL cat.no.1322B-010；1ml，3.33mg/ml水溶液)、活化p38酶(50μl)和“激酶緩沖液”(2ml)]。在輕微攪拌條件下，微滴定板在室溫下孵育。包含p38α的滴定板孵育90分鐘，包含p38β的滴定板孵育45分鐘。通過(guò)加入50μl 20％三氯乙酸(TCA)，使孵育停止。通過(guò)p38激酶磷?；恋淼牡鞍踪|(zhì)，測(cè)定試驗(yàn)化合物抑制這種磷酰化用作的能力。利用Canberra Packard Unifilter過(guò)濾滴定板，利用2％TCA洗滌，干燥過(guò)夜，在Top Count閃爍計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)。
起初以單劑量測(cè)試試驗(yàn)化合物，再測(cè)試活性化合物，從而測(cè)定IC50值。基于體外細(xì)胞的測(cè)定(i)PBMC利用人周圍血單核細(xì)胞測(cè)定本發(fā)明化合物抑制TNFα生成的能力，所述人周圍血單核細(xì)胞在由脂多糖刺激時(shí)可合成和分泌TNFα。
周圍血單核細(xì)胞(PBMC)是通過(guò)密度離心(LymphoprepTM；Nycomed)，從肝素化(10單位/ml肝素)人血中分離出來(lái)的。將單核細(xì)胞再懸浮在培養(yǎng)基[RPMI 1640培養(yǎng)物(Gibco)，該培養(yǎng)物補(bǔ)充有50單位/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素、2mM谷酰胺和1％熱滅活人AB血清(Sigma H-1513)]中。將化合物溶解在DMSO，濃度為50mM，在培養(yǎng)基中稀釋1∶100，接著在含1％DMSO的培養(yǎng)基中制備系列稀釋物。在增濕(5％CO2/95％空氣)恒溫箱(Falcon 3072；96孔平底組織培養(yǎng)板)中，在37℃下，利用20μl改變濃度的試驗(yàn)化合物(一式三份培養(yǎng)基)或μl包含1％DMSO的培養(yǎng)基(對(duì)照孔)孵育PBMCs(160μl培養(yǎng)基中包含2.4×105細(xì)胞)。將溶解在培養(yǎng)基中的20μl脂多糖[LPS E.Coli 0111B4(Sigma L-4130)，最終濃度為10μg/ml]加入到適當(dāng)?shù)目字?。?0μl培養(yǎng)基加入到“只有培養(yǎng)基”的對(duì)照孔中。每個(gè)96孔板中包含六個(gè)“只有LPS”和四個(gè)“只有培養(yǎng)基”的對(duì)照組。在每個(gè)試驗(yàn)中，改變公知TNFα抑制劑的濃度，也就是PDE型IV酶抑制劑(參見如Semmler，J.Wachtel.H and Endres，S.，Int.J.Immunopharmac.(1993)，15(3)，409-413)或proTNFα轉(zhuǎn)化酶抑制劑(參見如McGeehan，G.M.et al.，Nature(1994)370，558-561)。在從每個(gè)孔中去除100μl上清液并存放在-70℃(96孔圓底板；Corning 25850)下之后，將板在37℃下孵育7小時(shí)(增濕恒溫箱)。利用人TNFαELISA(參見WO92/10190和CurrentProtocols in Molecular Biology，vol2，by Frederick M.Ausbelet al.，John Wiley & Sons Inc.)，測(cè)定每個(gè)樣品的TNFα水平。
抑制％＝[(只有LPS-只有培養(yǎng)基)-(測(cè)試濃度-只有培養(yǎng)基)]/(只有LPS-只有培養(yǎng)基)×100(ii)人全血本發(fā)明化合物抑制TNFα的能力也可在人全血測(cè)定中測(cè)定。當(dāng)利用LPS刺激時(shí)，人全血可分泌TNFα。血的這種性能構(gòu)成了測(cè)定的基礎(chǔ)，該測(cè)定是在PBMC試驗(yàn)中顯示活性的化合物的第二種試驗(yàn)，從自愿者身上取出肝素化(10單位/ml)人血。將160μl全血加入到96孔圓底板(Corning 25850)中。溶解化合物并順序地在RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco)中稀釋，如上文細(xì)述，所述RPMI 1640培養(yǎng)基補(bǔ)充有50單位/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素和2mM谷酰胺。將補(bǔ)充有抗生素和谷酰胺的20μl RPMI 1640培養(yǎng)基加入到對(duì)照孔中。在加入20μl LPS(最終濃度為10μg/ml)之前，將該板在37℃(增濕恒溫箱)下孵育30分鐘。將RPMI 1640培養(yǎng)基加入到對(duì)照孔中。每個(gè)板中包含六個(gè)“只有LPS”和四個(gè)“只有培養(yǎng)基”的對(duì)照組。在每個(gè)試驗(yàn)中均包含了公知的合成/分泌抑制劑。在37℃(增濕恒溫箱)下，將板孵育6小時(shí)。離心(2000rpm，10分鐘)該板，除去100μl血漿并存放在-70℃(Corning 25850板)下。通過(guò)ELISA(參見WO92/10190和Current Protocols in Molecular Biology，vol 2，by Frederick M.Ausbel et al.，John Wiley & Sons Inc.)，測(cè)定TNFα水平。ELISA中使用的成對(duì)抗體是從R&D System(cataloguenos.MAB610 anti-human TNFαcoating antibody，BAF210biotinylated anti-human TNFαdetect antibody)得到的。體外/體內(nèi)測(cè)定在大鼠或小鼠中測(cè)定本發(fā)明化合物作為體外TNFα抑制劑的能力。簡(jiǎn)單地，通過(guò)適當(dāng)?shù)慕o藥路線，如經(jīng)口(p.o.)、腹膜內(nèi)(i.p.)或皮下(s.c.)，將一組雄性Wistar Alderley Park(AP)大鼠(180-210g)服用化合物(6只大鼠)或藥物載體(10只大鼠).9分鐘后升高CO2的濃度處死大鼠，通過(guò)尾部靜脈取血，制成5單位肝素鈉/ml血。將血樣立即放置在冰上，在4℃下利用2000rpm離心10分鐘，收集的血漿在-20℃下冷凍，用于接著的測(cè)定(對(duì)由LPS-刺激人血產(chǎn)生的TNFα的作用)。融化大鼠血漿，將175μl每份樣品加入到96孔圓底板(Corning 25850)上的一組格式化結(jié)構(gòu)中。然后向各個(gè)孔中加入50μl肝素人血并混合，該板在37℃(恒溫箱)下孵育30分鐘。向孔中加入LPS(25μl；最終濃度為10μg/ml)，再繼續(xù)孵育5.5小時(shí)。利用25μl只含培養(yǎng)基的培養(yǎng)基孵育對(duì)照孔。然后在200rpm下離心該板，將200μl上清液轉(zhuǎn)移至96孔板中并在-20℃下冷凍，用于在ELISA之后分析TNF濃度。
通過(guò)專用軟件對(duì)各個(gè)化合物/劑量進(jìn)行數(shù)據(jù)分析計(jì)算TNFα抑制％＝[平均TNFα(對(duì)照組)-平均TNFα(測(cè)試組)]/[平均TNFα(對(duì)照組)]×100另外，在上述方法中了利用小鼠代替大鼠。作為抗關(guān)節(jié)炎藥的測(cè)試化合物作為抗關(guān)節(jié)炎藥的活性的測(cè)試如下。Trentham等人[1]指出，酸溶解天然II型膠原蛋白在大鼠中具有產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎作用?，F(xiàn)在人們知道，由膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)或類似疾病可在小鼠和靈長(zhǎng)目動(dòng)物中誘導(dǎo)。最近的研究也表明，抗-TNF單核抗體[2]和TNF受體-IgG聯(lián)合蛋白[3]能夠改善移植生長(zhǎng)的CIA，這就表明TNF在CIA病理中起著主要的作用。另有報(bào)道，在最近的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床試驗(yàn)中可顯著有效地抵抗TNF單核抗體，這也表明TNF在慢性炎癥性疾病中起著重要的作用。由此，正如參考文獻(xiàn)2和3中描述的DAB/1小鼠中的CIA可以是用于說(shuō)明化合物抗關(guān)節(jié)炎活性的第三模型。參見參考文獻(xiàn)4。
1.Trentham，D.E.et al.，(1977)J.Exp.Med.，146，857.
2.Willams，R.O.et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.，89，9784.
3.Willams，R.O.et al.，(1995)Immunology，84，433.
4.Badger，M.B.et al.，(1996)The Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics，279，1453-1461.
正如所預(yù)期，式I化合物的藥物性能隨著結(jié)構(gòu)改變而變化，一般地，在濃度高達(dá)50μM的PBMC測(cè)試中，式I化合物能夠抑制30％。在本發(fā)明試驗(yàn)化合物有效劑量范圍內(nèi)，沒有觀察到生理不適毒性。
本發(fā)明將通過(guò)下列非限定性實(shí)施例加以說(shuō)明，除非另外說(shuō)明，其中(i)除非另外說(shuō)明，操作在環(huán)境溫度(即17至25℃范圍)下，于惰性氣體(如氬氣)氣氛下進(jìn)行；(ii)蒸發(fā)通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行，收集步驟在通過(guò)過(guò)濾分離殘留固體后進(jìn)行；(iii)(快速)柱色譜和中壓液相色譜(MPLC)可在從E.Merck，Darmstadt，Germany得到的Merck Kieselgel硅膠(Art.9358)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303)反相硅膠上進(jìn)行；高壓液相色譜(HPLC)可在C18反相硅膠上進(jìn)行，例如在Dynamax C-18 60制備反相柱上進(jìn)行；(iv)收率僅僅是為了說(shuō)明，而不必是可能獲得的最大值；(v)一般地，式I最終產(chǎn)物具有滿意的微量分析值，它們的結(jié)構(gòu)可通過(guò)核磁共振(NMR)和/或質(zhì)譜技術(shù)確定；利用Platform光譜儀可得到快速原子轟擊(FAB)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，而且如果適當(dāng)?shù)脑?，可得到其正離子數(shù)據(jù)和負(fù)離子數(shù)據(jù)；NMR化學(xué)位移值可在δ-標(biāo)度上測(cè)定[利用在場(chǎng)強(qiáng)為300MHz下工作的Varian Gemini 2000光譜儀或者利用在場(chǎng)強(qiáng)為250MHz下工作的Bruker AM250光譜儀測(cè)定質(zhì)子磁共振光譜]；采用了下列縮略語(yǔ)s，單峰；d，雙蜂；t，三峰；q，四峰；m，多峰；br，寬峰；(vi)中間體一般不完全表征，通過(guò)薄層色譜、HPLC、紅外(IR)和/或NMR分析測(cè)定純度；(vii)熔點(diǎn)是未修正的，它可利用Mettler SP62自動(dòng)熔點(diǎn)設(shè)備或油浴設(shè)備測(cè)定；式I最終產(chǎn)物的熔點(diǎn)可在從常規(guī)有機(jī)溶劑結(jié)晶后測(cè)定，所述常規(guī)有機(jī)溶劑包括乙醇、甲醇、丙酮、乙醚或己烷，可以是單獨(dú)的溶劑，也可以是溶劑混合物；以及(viii)采用下列縮略語(yǔ)DMF N，N-二甲基甲酰胺HPLC高壓液相色譜DMSO二甲亞砜實(shí)施例1N-[2-氯-5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺在20℃下，將草酰氯(0.11ml)滴加到3-二甲氨基苯甲酸(0.18g)的二氯甲烷(10ml)攪拌懸浮液中。加入DMF(2滴)，攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，得到固體。將該固體溶解在二氯甲烷(15ml)中，在5分鐘內(nèi)滴加到N-(5-氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(0.306g)、三乙胺(0.4ml)、4-二甲氨基吡啶(0.005g)和二氯甲烷(5ml)的攪拌混合物中。反應(yīng)混合物在20℃下攪拌18小時(shí)。利用水、飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌反應(yīng)混合物，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。殘留油狀物通過(guò)硅膠柱色譜純化，利用99∶1二氯甲烷和甲醇混合物作為洗脫液。由此得到標(biāo)題化合物(0.19g)，m.p.98-99℃；NMR光譜(CDCl3)3.02(s，6H)，3.95(s，6H)，6.86 (m，1H)，6.93(d，1H)，7.1(d，1H)，7.31(t，1H)，7.42(m，2H)，7.54(d，1H)，7.98(m，2H)，8.42(s，1H)，8.58(d，1H)；質(zhì)譜M+H+454.
用作起始原料的N-(5-氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法制備在20℃下，將3，4-二甲氧基苯甲酰氯(2g)加入到2-氯-5-硝基苯胺(1.72g)的吡啶(10ml)攪拌懸浮液中。反應(yīng)混合物在100℃下加熱1小時(shí)。在冷卻至環(huán)境溫度后，將反應(yīng)混合物注入到水(100ml)中。收集所得沉淀，利用水洗滌并干燥。在二氯甲烷(20ml)中研磨固體，得到N-(2-氯-5-硝基苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(1.2g)，m.p.231-231℃；NMR光譜(DMSOd6)3.82(s，6H)，7.08(d，1H)，7.62(m，1H)，7.82(d，1H)，8.08(m，1H)，8.54(d，1H)，10.07(m，1H)；質(zhì)譜M+H+337.
在10分鐘內(nèi)，將所得物質(zhì)(1.12g)分批加入到溫?zé)嶂?0-75℃的鐵粉(3.0g)的乙酸(1ml)、水(10ml)和乙醇(60ml)混合物的攪拌懸浮液中。回流加熱所得混合物1小時(shí)。允許冷卻混合物并加入固體碳酸鈉，直至混合物呈堿性(pH＝8-9)。過(guò)濾混合物，利用二氯甲烷洗滌固體物質(zhì)。蒸發(fā)濾液，利用乙酸乙酯研磨殘留物，過(guò)濾并蒸發(fā)濾液，得到所需起始原料，為有色膏狀固體，m.p.146-149℃；NMR光譜(CDCl3)3.70(s，2H)，3.88(s，3H)，3.91(s，3H)，6.31(m，1H)，6.74(d，1H)，7.06(d，1H)，7.37(m，1H)，7.42(d，1H)，7.92(d，1H)，8.30(s，1H)；質(zhì)譜M+H+307.
表I
注釋1、使用Brown et al.在J.Med.Chem.，1985，28，143-146中描述的方法。
2、利用從5％至30％甲醇的二氯甲烷劑型漸增的梯度混合物，通過(guò)HPLC純化反應(yīng)混合物。
用作起始原料的N-(5-氨基-2-溴苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法制備在25℃下，將3，4-二甲氧基苯甲酰氯(2g)加入到2-溴-5-硝基苯胺(2.17g)的攪拌溶液中。反應(yīng)混合物在100℃下加熱5小時(shí)。在冷卻后，加入水(25ml)和3M鹽酸(100ml)。過(guò)濾所得固體，利用水(50ml)洗滌并干燥。在乙醚中研磨固體，得到N-(2-溴-5-硝基苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(2.01g)，為有色砂狀固體，m.p.183-184℃；NMR光譜(DMSOd6)3.92(s，6H)，7.08(d，1H)，7.56(d，1H)，7.65(m，1H)，8.0(s，2H)，8.4(s，1H)，10.09(s，1H).
在5分鐘內(nèi)，將所得物質(zhì)(1.9g)分批加入到溫?zé)嶂?0-75℃的鐵粉(4.5g)的乙酸(1.5ml)、水(15ml)和乙醇(90ml)混合物的攪拌懸浮液中?；亓骷訜崴没旌衔?.75小時(shí)。加入固體碳酸鈉，直至混合物呈堿性(pH＝8-9)。過(guò)濾熱混合物，利用熱乙醇洗滌殘留物。蒸發(fā)濾液，利用熱乙酸乙酯提取所得殘留物，過(guò)濾溶液并蒸發(fā)濾液，得到N-(5-氨基-2-溴苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(1.43g)，m.p.154-155℃；NMR光譜(CDCl3)3.88(s，2H)，3.94(s，3H)，3.96(s，3H)，6.38(m，1H)，6.93(d，1H)，7.25(d，1H)，7.46(m，1H)，7.55(d，1H)，8.02(d，1H)，8.38(s，1H).
用作起始原料的3-嗎啉代苯甲酰氯可通過(guò)下列方法制備在氫氣氣氛下攪拌3-溴苯甲酸乙酯(1.92ml)、嗎啉(1.25ml)、2，2’-二(二苯基膦?；?-1，1’-二萘基(0.336g)、叔丁醇鈉(1.615g)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)(0.33g)和甲苯(25ml)的混合物，加熱至90℃18小時(shí)。允許將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，利用1M鹽酸提取。利用濃氫氧化鈉溶液堿化水相，利用乙酸乙酯提取。干燥(MgSO4)有機(jī)相并蒸發(fā)。通過(guò)硅膠柱色譜純化殘留油狀物，利用47∶3二氯甲烷和甲醇的混合物作為洗脫液。由此得到N-(3-嗎啉代苯甲?；?嗎啉(0.45g)。
攪拌所得物質(zhì)、5M氫氧化鈉溶液(2.5ml)和丁醇(2ml)的混合物，加熱至115℃18小時(shí)。蒸發(fā)混合物，通過(guò)加入1M鹽酸溶液(12.5ml)酸化殘留物。分離所得沉淀，利用水洗滌，得到3-嗎啉代苯甲酸(0.15g)；NMR光譜(DMSOd6)3.1(t，4H)，3.73(t，4H)，7.19(d.1H)，7.32(d，1H)，7.38(t，1H)，7.42(s，1H).
將草酰氯(0.14ml)加入到含DMF(2滴)的3-嗎啉代苯甲酸(0.28g)的二氯甲烷(10ml)溶液中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。蒸發(fā)混合物并利用甲苯共沸，得到3-嗎啉代苯甲酰氯(0.3g)；質(zhì)譜M+H+222。
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法制備將4-氰基苯甲酰氯(11.92g)慢慢加入到4-氯-3-硝基苯胺(10.4g)的吡啶(20ml)攪拌溶液中，攪拌混合物并加熱至115℃18小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度，注入到水(150ml)中并攪拌30分鐘。分離所得沉淀，利用水洗滌并干燥，得到N-[4-氯-3-硝基苯基]-4-氰基苯甲酰胺(18g)，m.p.213℃；NMR光譜(DMSOd6)7.78(d，1H)，8.05(m，3H)，8.1(d，2H)，8.58(s，1H)，10.93(s，1H).
將所得部分物質(zhì)(3.6g)加入到于乙醇(130ml)、水(30ml)和冰醋酸(4ml)混合物中的鐵粉(10g)懸浮液中?；旌衔锛訜嶂?5℃1小時(shí)，之后，趁熱通過(guò)加入碳酸鈉堿化。過(guò)濾混合物并蒸發(fā)濾液。殘留物在水中攪拌3小時(shí)。分離固體并干燥，得到所需的起始原料(2.7g)，m.p.237.7℃；NMR光譜(DMSOd6)5.44(s，2H)，6.98(m，1H)，7.21(d，1H)，7.42(d，1H)，8.07(d，2H)，8.14(d，2H)，10.36(s，1H).
用作起始原料的3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸可通過(guò)下列方法獲得攪拌3，4-二氟芐腈(8.65g)、N-甲基哌嗪(7.2ml)、三乙胺(9.1ml)和乙腈(12ml)的混合物并回流加熱2小時(shí)。蒸發(fā)混合物，殘留物通過(guò)柱色譜純化，利用1∶5∶94三乙胺、甲醇和二氯甲烷的混合物作為洗脫液。由此得到3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)芐腈，為油狀物，將其慢慢結(jié)晶得到白色固體(12.47g)，m.p.60-63℃；NMR光譜(CDCl3)2.37(s，3H)，2.61(t，4H)，3.24(t，4H)，6.89(m，1H)，7.27(m，1H)，7.35(m，1H).
將部分所得物質(zhì)(3g)溶解在6N鹽酸(30ml)中，回流加熱溶液13小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度。分離沉淀，利用水洗滌并在空氣中干燥，得到所需的起始原料(1.63g)。元素分析表明該晶體中包含大約6當(dāng)量水。
NMR光譜(DMSOd6)2.81(s，3H)，3.28(m，8H)，7.17(m，1H)，7.62(m，1H)，7.71(m，1H)，10.9(s，1H).
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氯苯基)-4-氰基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法合成將三乙胺(6.7ml)加入到冷卻至0℃的3-氨基-4-氯苯胺(3.44g)、4-氰基苯甲酰氯(4.0g)和二氯甲烷(50ml)的攪拌混合物中。允許將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度，攪拌5小時(shí)。將混合物濃縮至大約原始體積的三分之一，加入飽和碳酸氫鈉水溶液。分離所得固體，分別利用水和甲醇洗滌并在55℃下真空干燥，得到所需的起始原料(5.23g)；NMR光譜(DMSOd6)5.37(s，2H)，6.9(m，1H)，7.14(d，1H)，7.35(d，1H)，7.98(d，2H)，8.08(d，2H)，10.28(s，1H).
將于二氯甲烷(5ml)中的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.12g)加入到3，4-二甲氧基苯甲酸(0.91g)、N-(3-氨基-4-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(0.14g)、DMF(2ml)和4-二甲氨基吡啶(0.004g)的攪拌混合物中。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。加入水(20ml)和二氯甲烷(10ml)。利用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。殘留物通過(guò)硅膠柱色譜純化，利用49∶1二氯甲烷和甲醇的混合物作為洗脫液。所得物質(zhì)在乙醚中研磨。由此得到標(biāo)題化合物(0.084g)，為無(wú)色固體，m.p.187-188℃；NMR光譜(CDCl3)3.02(s，6H)，3.97(s，6H)，6.86(m，1H)，6.93(d，1H)，7.09(d，1H)，7.16(t，1H)，7.25(m，1H)，7.32(t，1H)，7.41(m，1H)，7.5(d，1H)，7.88(m，1H)，7.97(s，1H)，8.04(s，1H)，8.42(m，1H)；質(zhì)譜M+H+438；元素分析實(shí)測(cè)值C，65.4；H，5.5；N，9.5；C24H24NFO4理論值C，65.8；H，5.4；N，9.6％.
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法制備在20℃下于5分鐘內(nèi)，將草酰氯(1.2ml)滴加到3-二甲氨基苯甲酸(1.81g)的二氯甲烷(20ml)攪拌懸浮液中。加入DMF(2滴)，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌4小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘留物溶解在二氯甲烷(25ml)中在5分鐘內(nèi)較弱大-氟-3-硝基苯胺(1.56g)、三乙胺(4.1ml)和二氯甲烷(25ml)的攪拌混合物中。攪拌溶液18小時(shí)。分別利用3M鹽酸和水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。殘留固體先在甲基叔丁基醚中研磨，然后在二氯甲烷中研磨。由此得到N-(4-氟-3-硝基苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(0.96g)，m.p.176-177℃；NMR光譜(DMSOd6)2.93(s，6H)，6.92(m，1H)，7.2(m，2H)，7.31(t，1H)，7.56(q，1H)，8.11(m，1H)，8.63(m，1H)，10.58(s，1H).
將10％Pd/C(0.09g)加入到所得硝基化合物(0.910g)的乙醇(90ml)攪拌懸浮液中。混合物在大氣壓力和環(huán)境溫度下氫化，直至終止氫氣攝取。通過(guò)過(guò)濾分離催化劑并蒸發(fā)濾液。固體殘留物通過(guò)硅膠柱色譜純化，利用49∶1二氯甲烷和甲醇的混合物作為洗脫液。由此得到所需的起始原料(0.74g)；NMR光譜(CDCl3)3.0(s，6H)，3.78(s，2H)，6.7(m，1H)，6.92(m，2H)，7.05(d，1H)，7.30(m，2H)，7.37(m，1H)，7.68(s，1H).
用作起始原料的N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-4-甲氧基-2-硝基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法制備將苯甲酰氯(5.2ml)加入到冷卻至0℃的2，4-二氨基氯苯(6.42g)、三乙胺(12.5ml)和二氯甲烷(10ml)的攪拌混合物中。允許將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度并攪拌16小時(shí)。蒸發(fā)混合物，殘留物在飽和碳酸氫鈉水溶液中研磨。分離所得固體，依次利用水和異己烷洗滌，在55℃下真空干燥。由此得到N-(3-氨基-4-氯苯基)苯甲酰胺(10.38g)，為固體；NMR光譜(DMSOd6)5.32(s，2H)，6.9(m，1H)，7.1(d，1H)，7.37(d，1H)，7.52(m，3H)，7.9(d，2H)，10.05(s，1H).
將草酰氯(0.781ml)滴加到冷卻至0℃的4-甲氧基-2-硝基苯甲酸(1.6g)、DMF(幾滴)和二氯甲烷(30ml)的攪拌混合物中。允許將混合物溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度并攪拌4小時(shí)。蒸發(fā)混合物。將殘留物溶解在二氯甲烷(10ml)中，滴加到N-(3-氨基-4-氯苯基)苯甲酰胺(2.0g)、三乙胺(2.49ml)和二氯甲烷(30ml)的攪拌混合物中。所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)。分離沉淀，分別利用1N鹽酸水溶液和甲醇洗滌，在40℃下真空干燥。由此得到所需的起始原料(2.49g)；NMR光譜(DMSOd6)3.9(s，3H)，7.39(d，1H)，7.47-7.62(m，5H)，7.72(d，1H)，7.78(d，1H)，7.97(d，2H)，8.14(s，1H)，10.28(s，1H)，10.46(s，1H)；質(zhì)譜M+H+426和428.
質(zhì)譜M-H-409.
用作起始原料的N-(3-氨基-4-氯苯基)-2-硝基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法制備將2-硝基苯甲酰氯(4.64ml)加入到3-氨基-4-氯苯胺(5g)、三乙胺(9.78ml)和二氯甲烷(300ml)的攪拌混合物中，反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)。將混合物分配在二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉水溶液之間。蒸發(fā)有機(jī)相，殘留物通過(guò)硅膠柱色譜純化，得到所需的起始原料(3.02g)；NMR光譜(DMSOd6)5.38(s，2H)，6.74(d，1H)，7.11(d，1H)，7.27(s，1H)，7.7-7.75(m，2H)，7.84(t，1H)，8.1(d，1H)，10.5(s，1H)；質(zhì)譜M+H+292和294.
用作起始原料的N-(5-氨基-4-氯-2-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺可通過(guò)下列方法制備將鄰苯二甲酸酸酐(11.83g)加入到2-氯-4-氟苯胺(11.08g)的冰醋酸(150ml)溶液中，攪拌混合物并加熱至100℃2小時(shí)。允許將混合物冷卻至環(huán)境溫度，分離沉淀，利用水洗滌，真空干燥。由此得到N-(2-氯-4-氟苯基)鄰苯二甲酰亞胺，該化合物可在無(wú)需進(jìn)一步純化的條件下使用。
將硝酸(4.6ml)和硫酸(5ml)的混合物漸漸地加入到在冰水浴中冷卻的所得的N-(2-氯-4-氟苯基)鄰苯二甲酰亞胺和硫酸(30ml)的混合物中，加料速率控制在使得內(nèi)部反應(yīng)溫度不超過(guò)30℃。所得清亮溶液在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)。加入冰水混合物(250ml)，分離固體沉淀并真空干燥。由此得到N-(2-氯-4-氟-5-硝基苯基)鄰苯二甲酰亞胺(17.9g)，為固體；NMR光譜(CDCl3)7.58(d，1H)，7.88(m，2H)，8.01(m，2H)，8.16(d，1H)；質(zhì)譜M-H-319和321.
攪拌乙醇(450ml)、水(65ml)和乙酸(6.5ml)的混合物并加熱至50℃。加入鐵粉(9g)，接著在10分鐘內(nèi)分批加入N-(2-氯-4-氟-5-硝基苯基)鄰苯二甲酰亞胺(8.98g)。攪拌所得混合物并回流加熱2小時(shí)。冷卻混合物至環(huán)境溫度，通過(guò)加入固體碳酸鈉堿化。過(guò)濾混合物，蒸發(fā)濾液。將殘留物分配在二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉水溶液之間。利用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)提取液，在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)。由此得到N-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)鄰苯二甲酰亞胺(6.3g)，為固體；NMR光譜(CDCl3)3.87(s，2H)，6.74(d，1H)，7.2(d，1H)，7.81(m，2H)，7.96(m，2H)；質(zhì)譜M-H-289和291.
向N-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)鄰苯二甲酰亞胺(2.9g)、3-二甲氨基苯甲酰氯鹽酸鹽(3.06g)和二氯甲烷(20ml)的混合物中加入吡啶(2.0ml)，混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。利用二氯甲烷(200ml)稀釋反應(yīng)混合物，依次利用飽和硫酸銅水溶液和水洗滌。干燥(MgSO4)有機(jī)相并蒸發(fā)。殘留物在乙酸乙酯中研磨。由此得到N-(4-氯-2-氟-5-鄰苯二甲酰亞氨基苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(2.46g)，為固體；NMR光譜(DMSOd6)2.94(s，6H)，6.94(m，1H)，7.28(m，3H)，7.8-7.92(m，2H)，7.94(m，2H)，8.02(m，2H)；質(zhì)譜M+H+438和440.
在環(huán)境溫度下攪拌所得物質(zhì)、乙醇胺(0.68ml)和二氯甲烷(40ml)的混合物4小時(shí)。利用二氯甲烷(200ml)稀釋混合物，所得溶液分別利用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)。由此得到N-(5-氨基-4-氯-2-氟苯基)-3-二甲氨基苯甲酰胺(1.26g)，為固體；NMR光譜(CDCl3)3.02(s，6H)，3.94(s，2H)，4.0(寬s，2H)，6.88(m，1H)，7.04(m，1H)，7.07(s，1H)，7.25(m，1H)，7.32(t，1H)，7.98(寬s，1H)，8.08(d，1H)；質(zhì)譜M+H+308和310.
權(quán)利要求
1.式I化合物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯，式I 其中R1和R2可相同或不同，選自羥基、C1-6烷氧基、巰基、C1-6烷硫基、氨基、C1-6烷氨基、二-(C1-6烷基)氨基、羧基、C1-6烷氧基羰基、氨基甲?；1-6烷基氨基甲?；?、二-C1-6烷基氨基甲酰基、C1-6烷基亞硫酰基、C1-6烷基磺酰基、芳基亞硫酰基、芳基磺酰基、C1-6烷氨基磺?；⒍?(C1-6烷基)氨基磺?；?、硝基、氰基、氰基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷酰氨基、C1-6烷氧基羰基氨基、C1-6烷?；?、C1-6烷酰氧基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6烷炔基、鹵素、三氟甲基、芳基、芳基C1-6烷基、芳基C1-6烷氧基、雜芳基、雜芳基C1-6烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基C1-6烷基；m和p獨(dú)立地為0-3，且當(dāng)m和/或p為2或3時(shí)，R1和R2相同或不同；R3為鹵素、氰基或C1-6烷氧基；q為0-4；以及R4為芳基或環(huán)烷基，其中R4可任意地被至多3個(gè)取代基取代，所述取代基為各個(gè)R1基團(tuán)定義的任何基團(tuán)；條件是該化合物不包括N-[5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)-2-甲氧基苯基]-4-乙?；郊柞０罚琋-[2-溴-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-羥基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-乙?；郊柞０罚琋-[2-氯-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-羥基苯甲酰胺，N-[2-氟-5-(3-環(huán)己基丙酰氨基)苯基]-4-羥基苯甲酰胺，和N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)苯甲酰胺。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、氰基、乙酰氨基、乙?；?、乙酰氧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、氟、氯、三氟甲基、吡咯烷-1-基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；q為1、2或3；以及R4為環(huán)己基或環(huán)庚基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、氰基、乙酰氨基、乙酰基、乙酰氧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、氟、氯、三氟甲基、吡咯烷-1-基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；q為0；以及R4為苯基，所述苯基被選自下列的1或2個(gè)取代基取代羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氨基、甲氨基、乙氨基、丙氨基、二甲氨基、二乙氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、硝基、氰基、乙酰氨基、乙?；⒁阴Ｑ趸?、甲基、乙基、氟、氯、溴、三氟甲基、苯基、芐氧基、吡咯烷-1-基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、氰基、氟、氯、嗎啉代或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；q為0；以及R4為苯基，所述苯基被選自下列的1或2個(gè)取代基取代羥基、甲氧基、二甲氨基、甲氧基羰基、氰基、氟、氯和嗎啉代。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽，其中R1為羥基、甲氧基、乙氧基、氨基、氰基、乙酰氧基、氟、氯、嗎啉代或4-甲基哌嗪-1-基；m為1或2；p為0；R3為氟、氯或溴；q為0；以及R4為苯基，所述苯基被選自下列的1或2個(gè)取代基取代羥基、甲氧基、氨基、二甲氨基、甲氧基羰基、硝基、氰基、氟、氯和嗎啉代。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I化合物或其可藥用鹽，該化合物選自N-[2-氯-5-(3-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(3-二甲氨基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，和N-[2-氯-5-(4-氰基苯甲酰氨基)苯基]-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I化合物或其可藥用鹽，該化合物選自N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[2-氯-5-(3-嗎啉代苯甲酰氨基)苯基]-3，4-二甲氧基苯甲酰胺，N-[5-(4-乙酰氧基苯甲酰氨基)-2-氯苯基苯基]-4-氰基苯甲酰胺，N-(5-苯甲酰氨基-2-氯苯基)-2-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺，和N-[2-氯-5-(3-嗎啉代苯甲酰氨基)苯基]-4-氰基苯甲酰胺。
8.制備權(quán)利要求1所述的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯的方法，該方法包括(a)在生成酰胺鍵的標(biāo)準(zhǔn)條件下，將式II的化合物， 式II與式III酸或其活性衍生物反應(yīng)， 式III其中可變基團(tuán)如權(quán)利要求1定義，如果需要的話，則可對(duì)任何官能團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，以及(i)除去任何保護(hù)基團(tuán)；(ii)任意地形成可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯，(b)在生成酰胺鍵的標(biāo)準(zhǔn)條件下，將上文定義的式V酸或其活性衍生物， 式V與式VII苯胺反應(yīng)， 式VII其中可變基團(tuán)如權(quán)利要求1定義，如果需要的話，則可對(duì)任何官能團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，以及(i)除去任何保護(hù)基團(tuán)；(ii)任意地形成可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯。(c)其中R1或R4上的取代基為氨基基團(tuán)的權(quán)利要求1式I化合物可通過(guò)還原其中R1或R4上的取代基為硝基的式I化合物制得。
9.一種藥物組合物，該藥物組合物包含權(quán)利要求1式I酰胺衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯和可藥用稀釋劑或載體。
10.權(quán)利要求1所述的式I酰胺衍生物或其可藥用鹽或體內(nèi)可分解酯在制備用于治療由細(xì)胞活素引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)酰胺衍生物、或藥用鹽或在體內(nèi)可分解的酯、其制備方法、包含該衍生物的藥物組合物以及所述衍生物在治療由細(xì)胞活素引起的疾病中的用途。在式(I)中,R
文檔編號(hào)C07D295/155GK1359371SQ9980614
公開日2002年7月17日 申請(qǐng)日期1999年5月11日 優(yōu)先權(quán)日1998年5月15日
發(fā)明者D·S·布朗, G·R·布朗 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司