專(zhuān)利名稱(chēng)：多烯多羧酸或其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型多烯多羧酸或其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi)(以下有時(shí)簡(jiǎn)稱(chēng)多烯多羧酸類(lèi))，具體地說(shuō)，涉及可以用藍(lán)霉菌屬(Talaromyces)微生物生產(chǎn)、分散性?xún)?yōu)異的多烯多羧酸類(lèi)。
背景技術(shù)：
先有技術(shù)上，在顏料、涂料、化妝品、加工紙、染料、窯業(yè)、土木建筑等各種各樣領(lǐng)域中，表面活性劑或高分子聚合物等作為工業(yè)用分散劑加以利用，尤其近年來(lái)，這些化合物也廣泛用于微細(xì)粒子的制造。
上述化合物雖然如此廣泛地用來(lái)作為工業(yè)用分散劑，但這些是有機(jī)合成化合物的情況居多，因而，具有優(yōu)異分散性的反面，安全性或可生物降解性等低劣者居多，因此，因使用方法而異，對(duì)生物體的不良影響或?qū)Νh(huán)境的污染、擴(kuò)散等問(wèn)題令人擔(dān)心。
因此，為了解決上述問(wèn)題，可生物降解性?xún)?yōu)異且安全性高、對(duì)地球環(huán)境友好、來(lái)源于天然物質(zhì)的分散劑引人注目。作為這樣的分散劑，可以列舉諸如微生物產(chǎn)生多糖類(lèi)黃原酸膠，利用其粘性，在各種各樣的產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。然而，黃源酸膠雖然安全性?xún)?yōu)異，但對(duì)于在顏料或涂料等中使用的無(wú)機(jī)物或油性成分，有分散性缺乏這樣的問(wèn)題。
此外，葡糖酸鈉等糖酸類(lèi)也在一部分工業(yè)領(lǐng)域中得到應(yīng)用，但可以適用的情況或分散質(zhì)種類(lèi)有限，因而作為分散劑的利用范圍是有限的。
因此，迫切希望提供一些無(wú)論分散質(zhì)的種類(lèi)如何都能發(fā)揮優(yōu)異分散性、來(lái)源于天然物質(zhì)的化合物。
發(fā)明公開(kāi)可以解決上述課題的本發(fā)明化合物，其特征在于是下式(1)所示的多烯多羧酸或其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi) 式中，n是0～5的整數(shù)，m是1或2的整數(shù)，但n為0時(shí)m是1。其中，上述式(1)中m=1、n=0者；m=2、n=1者；m=2、n=2者，是本發(fā)明的較好形態(tài)。
而且，可以解決上述課題的本發(fā)明分散劑，其特征在于含有上述式(1)(式中，n為0～5的整數(shù)，m為1或2)所示的多烯多羧酸或其羧基衍生物或這些的鹽。其中，上述式(1)中m=2、n=0者；m=2、n=1者；m=2、n=2者，均為本發(fā)明的較好形態(tài)。
此外，上述式(1)(式中，n為0～5的整數(shù)，m為1或2)所示的多烯多羧酸或其酸酐或這些的鹽類(lèi)可以采用藍(lán)霉菌屬(Talaromyces)微生物在培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液來(lái)制造，因而這樣的制造方法也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。進(jìn)而，能生產(chǎn)上述式(1)(式中，n為0～5的整數(shù)，m為1或2)所示多烯多羧酸或其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi)的微生物也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
要說(shuō)明的是，以下為了便于敘述，有時(shí)稱(chēng)上述式(1)(式中，n為0～5的整數(shù)，m為1或2)所示多烯多羧酸或其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi)為“本發(fā)明化合物”。而且，上述式(1)中m=1、n=0的多烯多羧酸簡(jiǎn)稱(chēng)R0化合物；m=2、n=0的多烯多羧酸簡(jiǎn)稱(chēng)S0化合物；m=2、n=1的多烯多羧酸簡(jiǎn)稱(chēng)S1化合物；m=2、n=2的多烯多羧酸簡(jiǎn)稱(chēng)S2化合物。進(jìn)而，上述R0化合物、S0化合物、S1化合物、和S2化合物中鄰接碳原子上結(jié)合的2個(gè)羧基完全結(jié)合而形成酸酐基者，分別簡(jiǎn)稱(chēng)為R0酐、S0酐、S1酐、和S2酐。這些的結(jié)構(gòu)式如以下所示。 發(fā)明最佳實(shí)施形態(tài)本發(fā)明者等人為解決上述課題而進(jìn)行銳意探討的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)屬于藍(lán)霉菌屬的NO.10092菌株生產(chǎn)的化合物，無(wú)論在水系還是非水系中，對(duì)各種分散質(zhì)都有優(yōu)異的分散性，從而完成本發(fā)明。
上述式(1)所示化合物中n為1～5的整數(shù)、m為1或2的化合物或者n為0、m為1的化合物，是本發(fā)明者等人最先發(fā)現(xiàn)的新型化合物。要說(shuō)明的是，n為0且m為2的化合物是已知的，例如，Aldridge,DC等人，J.C.S.Perkin I,1980,2134(isol,struct,nmr)中公開(kāi)了下式所示的三羧酸酸酐 并描述該化合物可從一種霉菌即擬青霉菌(Paecilomyces variotii)得到。而且，在另一篇文獻(xiàn)[Jabbra,A等人，Pharmazie,1995,50,706(isol,props)]中，也描述了可以從青霉菌(Penicillium sp.)從分離出同樣的化合物。然而，這些文獻(xiàn)中，均只字未提上述化合物具有分散性。
因此，當(dāng)使用上述化合物作為分散劑時(shí)，n為0～5的整數(shù)、m為1或2所代表的化合物包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本說(shuō)明書(shū)中，“低級(jí)”系指碳原子數(shù)1～6個(gè)者。
而且，本發(fā)明的化合物中，除上述式(1)所示的多烯多羧酸外，還包含其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi)。
作為上述“其羧基衍生物”，可以列舉上述式(1)中羧基之一部或全部為鹽類(lèi)、酐、酯、酰胺等的化合物。而且，這種衍生物中也包含上述式(1)中羧基之一部或全部為這些的組合的化合物。具體地說(shuō)，可以列舉上述式(1)中羧基之一部為酯、其余羧基為酐者。而上述“這些的鹽類(lèi)”系指所述衍生物的鹽類(lèi)，具體地說(shuō)，可以列舉上述式(1)中羧基之一部變成所述衍生物、其余羧基為鹽類(lèi)者。
其中，作為上述“鹽類(lèi)”，只要是常用的無(wú)毒性鹽類(lèi)即可，其種類(lèi)沒(méi)有特別限定，但可以列舉諸如堿金屬鹽(例如鈉鹽、鉀鹽等)、堿土金屬鹽(例如鈣鹽、鎂鹽等)、銨鹽、有機(jī)堿鹽(例如三甲胺鹽、三乙胺鹽、吡啶鹽、甲基吡啶鹽、二環(huán)己基胺鹽、N,N′-二芐基乙二胺鹽等)、與氨基酸的鹽(例如精氨酸鹽、天冬氨酸鹽、谷氨酸鹽等)等。
而作為上述“酐”，可以列舉在鄰接碳原子上結(jié)合的2個(gè)羧基結(jié)合而形成酸酐基者。這種酐的實(shí)例如下所示； 進(jìn)而，作為上述“酯”，可以列舉酯化的羧基；作為較好的實(shí)例，可以列舉烷酯，包括甲酯、乙酯、丙酯、異丙酯、丁酯、異丁酯、叔丁酯、戊酯、己酯等低級(jí)烷酯。
而且，作為上述“酰胺”，可以列舉酰胺化的羧基，也可以是縮合成馬來(lái)酰亞胺型的。作為這樣的實(shí)例，可以列舉諸如一甲基酰胺、一乙基酰胺等低級(jí)烷基酰胺；一苯基酰胺、一芐基酰胺、苯乙基酰胺等芳基酰胺等。
上述“鹽類(lèi)”、“酐”、“酯”和“酰胺”可以用常法制造。
例如，上述“酐”可以通過(guò)使上述式(1)所示的多烯多羧酸發(fā)生脫水反應(yīng)等方法制造。
而上述“酯”可以通過(guò)使上述式(1)所示的多烯多羧酸與醇反應(yīng)，使該多烯多羧酸的酸酐酯化等的方法制造。
而且，上述“酰胺”可以通過(guò)使上述式(1)所示的多烯多羧酸銨鹽發(fā)生脫水反應(yīng)、或使該多烯多羧酸的腈化合物發(fā)生堿解反應(yīng)、或用該多烯多羧酸的酸酐或酯等進(jìn)行酰胺化等的方法制造。
上述的本發(fā)明化合物中，S1化合物和S2化合物在致突變性(mutagenicity)試驗(yàn)中呈陰性，在小鼠急性毒性試驗(yàn)(經(jīng)口給藥2.0g/kg)中未見(jiàn)異常，可以確認(rèn)是毒性極低的安全化合物。
以下說(shuō)明用藍(lán)霉菌屬微生物得到本發(fā)明化合物的方法。
首先說(shuō)明上述微生物的培養(yǎng)方法。關(guān)于這種微生物的特征見(jiàn)后述，但由于該微生物屬于真菌類(lèi)〔俗稱(chēng)霉菌(絲狀菌)〕，因而在其培養(yǎng)時(shí)可以使用一般已知物作為霉菌用培養(yǎng)基，可以列舉由碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)和微量營(yíng)養(yǎng)源組成的培養(yǎng)基等。其中，作為碳源，可以利用葡萄糖、木糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、淀粉、氧化淀粉、水解淀粉等；作為氮源，可以利用玉米浸漬液等天然物，硝酸鈉等無(wú)機(jī)氮，亮氨酸、賴(lài)氨酸等氨基酸。此外，作為上述無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，可以利用碳酸鈣、硫酸鎂等；作為微量元素，可以利用硫酸鐵等。
要說(shuō)明的是，所使用的培養(yǎng)基可以是液體、固體中任何一種，只要這些能進(jìn)行振蕩培養(yǎng)或通氣攪拌培養(yǎng)即可。只要將培養(yǎng)時(shí)的pH調(diào)整在3～8、溫度調(diào)整在20～40℃的范圍內(nèi)，就能以良好的產(chǎn)率得到有效活性成分。培養(yǎng)時(shí)間推薦為3～5日左右，不僅可以用間歇法制造，而且也可以用連續(xù)發(fā)酵法制造。
這樣得到的培養(yǎng)物通過(guò)萃取、分離、精制，就可以得到本發(fā)明化合物。具體地說(shuō)，首先將以上述方法得到的培養(yǎng)物借助于過(guò)濾或離心分離等分離成培養(yǎng)液和菌體，得到含有本發(fā)明化合物的培養(yǎng)濾液。這種培養(yǎng)濾液用通常方法萃取、分離、精制，就可以得到本發(fā)明化合物。這些萃取方法、分離、精制方法沒(méi)有特別限定，可以適當(dāng)選擇常用方法。例如，為了分離、精制本發(fā)明化合物，可以采用向上述培養(yǎng)濾液中添加無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸等的酸處理方法，借助于離子交換樹(shù)脂、吸附樹(shù)脂等的處理法，借助于滲析膜、超濾膜、凝膠過(guò)濾等的方法等。
這樣得到的化合物通過(guò)用常用方法處理，可以得到其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi)。例如，本發(fā)明化合物的酯或酰胺等衍生物，只要在上述培養(yǎng)濾液濃縮至干得到的粗物質(zhì)中發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而制成酯或酰胺等衍生物之后，按照常用的脂溶性物質(zhì)精制法，就可以得到。而且，這些衍生物進(jìn)行水解，也可以制成本發(fā)明化合物及其鹽類(lèi)。關(guān)于這一系列步驟，可以參照諸如后述實(shí)施例中記載的方法。
這樣得到的化合物(1)、其羧基衍生物或這些的鹽類(lèi)，對(duì)無(wú)機(jī)質(zhì)或有機(jī)質(zhì)等范圍廣泛的分散質(zhì)在水系或非水系中能發(fā)揮優(yōu)異的分散性能，因而在涂料、顏料、油墨、纖維、紙、化妝品、食品、造影劑、繪具、水泥、混凝土、橡膠、塑料、噴墨、醫(yī)藥品、農(nóng)藥、染料、釉藥、煤-油混合物〔COM(微粉煤)〕、照橡膠片、磁帶、除垢(scale)、重油、清潔·分散劑(潤(rùn)滑油添加劑)等各種產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域中，可以作為分散使用。
此外，本發(fā)明化合物也有螯合作用。即，本發(fā)明化合物能螯合有害金屬離子，從而使該金屬離子掩蔽。利用這種作用，可以作為洗滌劑、染料中的添加劑，或食品、藥品、化妝品等的穩(wěn)定劑使用。具體地說(shuō)，可以在金屬表面清洗劑、食品工業(yè)中使用的洗瓶劑、醫(yī)院等中使用的玻璃器具洗滌劑、印染工業(yè)中使用的染色助劑等范圍廣泛的產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域中使用。
進(jìn)而，本發(fā)明化合物也有表面活性作用。利用這種作用，可以廣泛用來(lái)作為洗衣用、櫥房用、洗發(fā)用、洗臉用、洗澡用洗滌劑，化妝品或農(nóng)藥的乳化劑，服裝的防靜電劑等。
本發(fā)明分散劑的使用量，因所用分散質(zhì)的種類(lèi)等而異，可以選擇較好適用范圍，但通常相對(duì)于分散質(zhì)而言較好添加0.01～20％(重量)。低于0.01％(重量)時(shí)，不能達(dá)到所希望的分散作用。更好的是在0.1％(重量)以上。另一方面，若添加量超過(guò)20％(重量)，則有產(chǎn)生沉淀等問(wèn)題。更好的是在10％(重量)以下。
以下說(shuō)明能生產(chǎn)本發(fā)明化合物的藍(lán)霉菌屬微生物。要說(shuō)明的是，作為其代表性實(shí)例，詳述了本發(fā)明者等人分離的絲狀菌10092株的特征，但絕無(wú)限定于此的意圖。
上述絲狀菌10092株是從日本鹿兒島縣指宿市采集的土壤分離出來(lái)的。這個(gè)菌株能在各種培養(yǎng)基上廣為生長(zhǎng)，形成黃白色到淺黃色色調(diào)的菌落。而且，在培養(yǎng)基上形成大量子囊果(teleo-morphs)和少量分生孢子結(jié)構(gòu)(anamorphs)。其中，子囊果是有未分化菌絲覆蓋的球形橙色子囊果，內(nèi)部有子囊分散存在。這種子囊孢子是無(wú)色、單細(xì)胞、寬橢圓形的，可以觀察到赤道面上隆起。另一方面，分生孢子結(jié)構(gòu)包含單獨(dú)的分生孢子形成細(xì)胞或帚狀分生孢子柄，所形成的分生孢子是單細(xì)胞、球形、連接成鏈狀的。以下列出其細(xì)菌學(xué)特征。
各種瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)性狀結(jié)果歸納在表1～3中。
要說(shuō)明的是，表1的數(shù)據(jù)是接種后在25℃培養(yǎng)7日后觀察到的。色調(diào)均按照Methuen的顏色手冊(cè)(Handbook of Colour)(Komerup,A．和J.H.Wanscher，第3版第525頁(yè)，Methuen，倫敦，1978年)記載。
而表2和表3的數(shù)據(jù)是接種后在25℃培養(yǎng)14日后觀察到的。色調(diào)同表1一樣進(jìn)行觀察、確定。
表1

*麥芽提取瓊脂、添加酵母提取物的察氏液瓊脂、G25N瓊脂的組成系按照Pitt的專(zhuān)著(Pitt,J.I.，青霉菌屬及其子囊果狀態(tài)-真青霉菌和藍(lán)霉菌，學(xué)術(shù)出版社，倫敦，1979年)。
表2

**察氏(Czapek)液瓊脂的組成按照J(rèn)CM分類(lèi)目錄(Nakase,T.，第5版第503頁(yè)，日本物理與化學(xué)研究所微生物和生命科學(xué)研究信息部資料集，Saitama,1992年)。
表3

**MY20瓊脂的組成按照J(rèn)CM分類(lèi)目錄(Nakase,T.，第5版第503頁(yè)，日本物理與化學(xué)研究所微生物和生命科學(xué)研究信息部資料集，Saitama,1992年)。
從這些表可以考察如下。
上述菌株在添加酵母提取物的察氏液瓊脂培養(yǎng)基中可以迅速培養(yǎng)，在25℃培養(yǎng)7日后可以變成直徑4.7～5.2cm的圓形菌落。這種菌落的表面是平坦的，產(chǎn)生氈狀、輻射狀的溝。而且菌落的色調(diào)是白色或黃白色～淺黃色，菌落里面是黃白色或灰黃色。此外，子囊果和分生孢子結(jié)構(gòu)均未觀察到。
而且，若用麥芽提取瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，則與上述瓊脂培養(yǎng)基相比，可以更快地得到菌落，在與上述相同的條件下培養(yǎng)的情況下菌落大小達(dá)到直徑6.2～7.0cm。這種菌落擴(kuò)大成圓形，表面平坦且呈氈狀到粒狀，其色調(diào)呈白色或黃白色～淺黃色。而這種菌落里面呈黃色～灰黃色，有黃色可溶性色素?cái)U(kuò)散到培養(yǎng)基中。要說(shuō)明的是，上述培養(yǎng)基上形成了少量分生孢子結(jié)構(gòu)。進(jìn)而，在該麥芽提取瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)到2周后，如表2中所示，菌落擴(kuò)大到8cm以上，一直到達(dá)培養(yǎng)皿的壁面。其菌落表面平坦，有氈狀到粒狀，除少量分生孢子結(jié)構(gòu)外，還形成了豐富的子囊果。而且菌落的色調(diào)呈黃白色～淺黃色，其里面是黃色～灰黃色，有黃色可溶性色素?cái)U(kuò)散到培養(yǎng)基中。
進(jìn)而，關(guān)于上述菌株的形態(tài)特征，是基于三浦和工藤(Miura,K.和M.Kudo:Trans.Myco1.Soc.Japan,11:116-118,1970)開(kāi)發(fā)的LCA瓊脂培養(yǎng)基(三浦培養(yǎng)基)上的培養(yǎng)結(jié)果確定的。其結(jié)果，在上述培養(yǎng)基上，觀察到豐富的子囊果和分生孢子結(jié)構(gòu)。
其中，子囊果是表在性、獨(dú)立、有球形～亞球形的，直徑最大350μm，閉鏈型的。這種子囊果表面有相互交織的菌絲網(wǎng)覆蓋，呈黃白色～橙色。上述子囊果的內(nèi)部分散、形成了子囊，這種子囊有消失性、呈亞球形～橢圓形，直徑7～10μm，內(nèi)部產(chǎn)生8個(gè)子囊孢子。這種子囊孢子呈無(wú)色～淺橙色，表面稍微粗糙，單細(xì)胞，有寬橢圓形～透鏡形。進(jìn)而，該子囊孢子有一個(gè)赤道面隆起，大小為3～4.5×2.5～3μm。
另一方面，分生孢子結(jié)構(gòu)的形成方式是瓶梗型的，分生孢子是由瓶梗(phialide)連接成鏈而形成的。這種瓶梗是作為氣中或基底菌絲的分枝產(chǎn)生的，或者在帚狀分生孢子柄的尖端上形成3～5個(gè)。這些是無(wú)色、表面光滑、呈筆尖形的，其大小，單線(xiàn)體為13～18×1.5～3.5μm，輪生體為8～14×1.5～3.5μm。而且，分生孢子是無(wú)色、表面光滑、單細(xì)胞的，呈球形～寬橢圓形或卵形，大小為2～4(～5)×2～3.5μm。要注意的是，營(yíng)養(yǎng)菌絲是表面光滑、有隔壁、無(wú)色、有分枝的。菌絲細(xì)胞是圓筒形的，寬1.5～6.5μm，但不形成厚膜孢子。
關(guān)于上述菌株的最佳生長(zhǎng)溫度，用馬鈴薯右旋糖瓊脂培養(yǎng)基(日水制藥)考察時(shí)，發(fā)現(xiàn)在7～40℃的溫度范圍內(nèi)可以生長(zhǎng)，且最佳生長(zhǎng)溫度為29～34℃。
以上細(xì)菌學(xué)特征，若與Von Arx的菌類(lèi)分類(lèi)基準(zhǔn)(J.A.vonArx:The Genera of Fungi-Sporulating in Pure Culture,3rded.,J.Cramer,Vaduz,1974)以及Pitt的專(zhuān)著(Pitt.J.I.,The genusPenicillium and its teleomorphic states-Eupenicillium andTalaromyces,Academic Press,Lodon,1979)比較，則可以認(rèn)為上述10092菌株屬于不整子囊菌類(lèi)的藍(lán)霉菌屬(Talaromyces C.R.Benj.1955)。這個(gè)菌株鑒定為藍(lán)霉菌屬的一個(gè)菌株，并命名為藍(lán)霉菌屬第10092號(hào)種(Talaromyces sp,No.10092)。要說(shuō)明的是，這個(gè)菌株寄存于根據(jù)布達(dá)佩斯條約建立的國(guó)際寄存機(jī)關(guān)工業(yè)技術(shù)院生命工學(xué)工業(yè)技術(shù)研究所，寄存序號(hào)為FERM BP-6250(寄存接受日平成10年2月9日)。
以下根據(jù)實(shí)施例詳述本發(fā)明。但下述實(shí)施例不限制本發(fā)明，而且在不背離上述和下述的本發(fā)明精神的范圍內(nèi)可以變更實(shí)施，并完全包含在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)。
以下用培養(yǎng)例1～5的方法培養(yǎng)上述10092號(hào)菌株。
培養(yǎng)例1〔通氣攪拌培養(yǎng)法(其1)〕①預(yù)培養(yǎng)1向225mL容量燒瓶中加入有下列組成的培養(yǎng)基1(60mL)，接種來(lái)自斜面培養(yǎng)的菌種后，在25℃培養(yǎng)3日。
〔培養(yǎng)基1的組成〕甘油 2％蔗糖 2％FERMA培養(yǎng)基2％干燥酵母 1％胨 1％KH2PO40.1％吐溫80 0.1％②預(yù)培養(yǎng)2向500mL容量燒瓶中加入有下列組成的培養(yǎng)基2(140ml)后，接種上述前培養(yǎng)1得到的菌落(2.4ml)，在25℃培養(yǎng)3日。
〔培養(yǎng)基2的組成〕玉米淀粉 3％玉米漿 3％CaCO30.2％用NaOH調(diào)整到pH7③主培養(yǎng)向30L容量廣口瓶中加入上述培養(yǎng)基2(24L)后，滅菌，然后添加預(yù)培養(yǎng)2的菌液(480mL)，通入20L/分鐘的無(wú)菌空氣，同時(shí)以300轉(zhuǎn)/分鐘攪拌，在25℃培養(yǎng)4日。向培養(yǎng)后的液中添加過(guò)濾助劑(昭和化學(xué)公司制“Radiolight”食品添加劑用濾料，硅藻土)，用壓濾機(jī)(東京工程公司制“TFP-6-12型壓濾機(jī)”)使濾液與菌體分離。其結(jié)果，從3個(gè)30L容量廣口瓶得到濾液(40L干燥固形分1.7％)。
培養(yǎng)例2〔通氣攪拌培養(yǎng)法(其2)〕在本培養(yǎng)例中，使培養(yǎng)例1中的培養(yǎng)基添加量或菌液添加量增大10倍，培養(yǎng)上述菌株。
即，在培養(yǎng)例1的主培養(yǎng)中，向300L容量廣口瓶中加入培養(yǎng)基2(240L)、滅菌后加入預(yù)培養(yǎng)2的菌液(4.8L)，通入200L/分鐘的無(wú)菌空氣，同時(shí)以150轉(zhuǎn)/分鐘攪拌、培養(yǎng)，除此之外同培養(yǎng)例1一樣進(jìn)行培養(yǎng)。其結(jié)果，得到濾液(100L干燥固形分1.4％)。
以下培養(yǎng)例3～6中，與上述培養(yǎng)例1、2的通氣攪拌培養(yǎng)不同，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。
培養(yǎng)例3〔振蕩培養(yǎng)法(其1)〕向225mL容量玻璃制三角燒瓶中加入上述培養(yǎng)基2(60mL)后，添加按照上述培養(yǎng)例1進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)得到的菌液(1.2mL)，在25℃以每分鐘1500轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)4日。向所得到的培養(yǎng)物中添加過(guò)濾助劑Radiolight，用瓷漏斗過(guò)濾，得到濾液(40mL干燥固形分1.25％)。
培養(yǎng)例4〔振蕩培養(yǎng)法(其2)〕除培養(yǎng)例3中的培養(yǎng)基2用有表4中所列組成的培養(yǎng)基3代替外，同培養(yǎng)例3一樣進(jìn)行，得到濾液(40mL干燥固形分1.25％)。
表4

*表中各成分的單位g/L培養(yǎng)例5〔振蕩培養(yǎng)法(其3)〕除培養(yǎng)例3中的培養(yǎng)基2用有表4中所列組成的培養(yǎng)基4代替外，同培養(yǎng)例3一樣進(jìn)行，得到濾液(40mL干燥固形分1.25％)。
培養(yǎng)例6〔振蕩培養(yǎng)法(其4)〕除培養(yǎng)例3中的培養(yǎng)基2用有表4中所列組成的培養(yǎng)基5代替外，同培養(yǎng)例3一樣進(jìn)行，得到濾液(40mL干燥固形分1.25％)。
其次，按照下列制造實(shí)施例，進(jìn)行培養(yǎng)濾液精制、分離，得到本發(fā)明化合物。
要說(shuō)明的是，對(duì)于培養(yǎng)濾液中含有S1化合物的五鈉鹽和S2化合物的七鈉鹽者，可以用下列分析條件確認(rèn)。
〔HPLC分析條件〕柱TSKgel ODS-80TsQA(φ4.6×250mm，東ソ-公司制)柱溫40℃移動(dòng)相磷酸緩沖液*∶甲醇=65∶35(分析條件1)磷酸緩沖液*∶甲醇=60∶40(分析條件2)流速1.0mL/分鐘檢測(cè)UV260nm
*用磷酸水溶液(磷酸1mL用水稀釋到10mL)調(diào)整到pH7.5的20mM Na2HPO4水溶液(含5mM溴化四丁銨)上述分析條件1和分析條件2的結(jié)果分別列于表5和表6中。
表5

表6

通過(guò)比較峰的保留時(shí)間，清楚地看出，在濾液中，S1化合物中全部羧基都鈉化的S1化合物的五鈉鹽和S2化合物中全部羧基都鈉化的S2化合物的七鈉鹽兩者都存在。由于可以確認(rèn)各峰的保留時(shí)間有一些差異，因而，像〔濾濾+S1化合物的五鈉鹽〕、〔濾液+S2化合物的七鈉鹽〕那樣以等量混合注入，試驗(yàn)峰面積的加和性。
這樣的等量混合時(shí)，各該峰均增大，并等于兩者合計(jì)之峰面積。這在改變移動(dòng)相的情況下也得到了同樣的結(jié)果。
制造實(shí)施例1(從培養(yǎng)濾液中分離本發(fā)明化合物)本制造實(shí)施例中，精制上述培養(yǎng)例得到的培養(yǎng)濾液，分離了本發(fā)明化合物。
即，培養(yǎng)例2得到的培養(yǎng)濾液(5.1L)調(diào)整到pH=3之后，用乙酸乙酯(7.6L)萃取。所得到的萃取液用無(wú)水硫酸鎂干燥后，減壓蒸出溶劑，得到茶色透明油狀物質(zhì)(37g)。
這種油狀物質(zhì)按照下列條件用HPLC分級(jí)，分離成S1酐的前溶出級(jí)分，和含有S1酐與S2酐的溶出級(jí)分。
〔HPLC分級(jí)條件〕柱直徑50mm、長(zhǎng)度250mm的YMC制ODS柱柱溫室溫移動(dòng)相乙腈∶磷酸緩沖液=6∶4(磷酸緩沖液的組成KH2PO46.53g,H3PO41.18g，水3L)流速50mL/分鐘檢測(cè)UV210nm然后，對(duì)上述S1酐的前溶出級(jí)分，含有S1酐和S2酐的溶出級(jí)分減壓蒸出乙腈后，所得到的水層用乙酸乙酯萃取，用無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸出乙酸乙酯，得到了S1酐的前溶出級(jí)分(3.9g)、S1酐(7.7g)和S2酐(13.7g)。
其中S1酐的前溶出級(jí)分(850mg)進(jìn)一步按照下列條件用HPLC分級(jí)，得到含有S0酐的溶出級(jí)分。
〔HPLC分級(jí)條件〕柱直徑50mm、長(zhǎng)度250mm的YMC制ODS柱柱溫室溫移動(dòng)相乙腈∶磷酸緩沖液=4∶6(磷酸緩沖液組成KH2PO46.53g,H3PO41.18g，水3L)流速50mL/分鐘檢測(cè)UV210nm然后，對(duì)上述含有S0酐的溶出級(jí)分減壓蒸出乙腈后，所得到的水層用乙酸乙酯萃取、用無(wú)水硫酸鎂干燥、減壓蒸出乙酸乙酯，得到S0酐(70mg)。經(jīng)確認(rèn)，此物質(zhì)的1H-NMR與文獻(xiàn)(Aldridge,DC等人，J.C.S.Perkin I,1980,2134；Jabbar,A.等人，Pharmazie,1995,50,706)上記載的值一致。
此外，S1酐和S2酐是以下列性狀和儀器分析數(shù)據(jù)表征的無(wú)色透明油狀物質(zhì)。
①S1酐的性狀和儀器分析數(shù)據(jù)a)性狀無(wú)色透明油狀物質(zhì)
b)分子式C20H22O8ESI質(zhì)譜(m/z)389(M-H)-c)紫外線(xiàn)吸收譜(乙腈中)λmax(nm)255,312d)紅外線(xiàn)吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax3100～2600,2970,1815,1770,1705,1640,1430,1355,1265,965,920cm-1e)1H-NMR譜(氘代氯仿中)δ(積分值，多重度)7.28(1H,dt,J=15.8,6.6Hz),6.23(1H,dt,J=15.8,1.5Hz),2.90～2.70(4H,m),2.62～2.16(7H,m),1.42～1.26(2H,m),1.12(3H,t,J=7.4Hz),0.98(3H,t,J=7.0Hz)ppmf)13C-NMR譜(氘代氯仿中)δ(多重度)177.3(s),166.2(s),165.5(s),165.2(s),164.1(s),150.5(d),144.3(s),143.5(s),138.5(s),136.8(s),115.9(d),38.2(d),30.8(t),28.7(t),28.2(t),27.8(t),26.7(t),19.8(t),12.4(q),10.7(q)ppm②S2酐的性狀和儀器分析數(shù)據(jù)a)性狀無(wú)色透明油狀物質(zhì)b)分子式C29H32O11ESI質(zhì)譜(m/z)555(M-H)-c)紫外線(xiàn)吸收譜(乙腈中)λmax(nm)258,313
d)紅外線(xiàn)吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax3100～2600,2970,1815,1770,1705,1640,1430,1350,1265,965,925cm-1e)1H-NMR譜(氘代氯仿中)δ(積分值，多重度)7.28(1H,dt,J=15.8,6.7Hz),6.23(1H,dt,J=15.8,1.5Hz),2.70～2.90(4H,m),2.63～2.18(12H,m),1.37～1.26(4H,m),1.11(3H,t,J=7.4Hz),0.97(6H,t,J=7.0Hz)ppmf)13C-NMR譜(氘代氯仿中)δ(多重度)177.1(s),166.3(s),165.7(s),165.6(s),165.5(s),165.2(s),164.0(s),150.7(d),144.4(s),144.2(s),144.0(s),143.7(s),138.6(s),136.7(s),115.9(d),38.0(d),37.7(d),30.7(t),29.0(t),28.9(t),28.7(t),28.2(t),27.5(t),26.8(t),26.7(t),19.8(t),12.4(q),10.7(2c∶q)ppm制造實(shí)施例2(S1化合物和S2化合物的鈉鹽的制備)然后，把制造實(shí)施例1分離的S1酐和S2酐中的S1酐(206mg)和S2酐(199mg)分別懸浮在水(100mL)中之后，邊攪拌邊滴加0.1N氫氧化鈉水溶液中的，直至該懸浮液的液性達(dá)到pH=7，溶解后，該溶液減壓下濃縮至干，分別得到粉末狀的S1化合物的五鈉鹽(304mg)和S2化合物的七鈉鹽(290mg)。這些物質(zhì)的性狀和儀器分析數(shù)據(jù)如下。
③S1化合物五鈉鹽的性狀和儀器分析數(shù)據(jù)a)性狀無(wú)色粉末狀物質(zhì)b)紅外線(xiàn)吸收譜(液體石蠟，NaCl板)Vmax3700～2600,2960,1660,1630,1560,1400cm-1c)1H-NMR譜(重水中)δ(積分值，多重度)6.38(1H,d,J=15.8Hz),5.87(1H,dt,J=15.8,6.6Hz),2.54～2.10(10H,m),1.53(1H,m),1.33(2H,m),1.00(3H,t,J=7.4Hz),0.86(3H,t,J=7.0Hz)ppmd)13C-NMR譜(重水中)δ(多重度)185.5(s),182.0(s),181.8(s),181.7(s),180.8(s),143.0(s),141.0(d),140.4(s),139.8(s),135.2(s),126.6(d),41.3(d),39.1(t),36.4(t),35.3(t),29.7(t),28.8(t),27.4(t),15.7(q),12.9(q)ppm④S2化合物七鈉鹽的性狀和儀器分析數(shù)據(jù)a)性狀無(wú)色粉末狀物質(zhì)
b)紅外線(xiàn)吸收譜(液體石蠟,NaCl板)Vmax3700～2600,2960,1660,1630,1565,1400cm-1c)1H-NMR譜(重水中)δ(積分值，多重度)6.38(1H,d,J=15.8Hz),5.86(1H,dt,J=15.8,6.7Hz),2.53～2.19(14H,m),1.60～1.18(6H,m),1.01(3H,t,J=6.4Hz),0.86(3H,t,J=7.0Hz),0.84(3H,t,J=7.0Hz)ppmd)13C-NMR譜(重水中)δ(多重度)185.4(s),182.3(2C:s),181.9(2C:s),181.7(s),181.0(s),142.7(s),140.9(d),140.8(s),140.7(s),140.1(s),140.0(s),135.4(s),126.6(d),41.4(d),40.6(d),39.1(t),37.1(2C:
t).36.4(t),35.3(t),29.6(t),28.8(t),27.1(2C:t),15.8(q),12.9(q),12.8(q)ppm
制造實(shí)施例3(S1化合物五甲酯和S2化合物七甲酯的制造方法)培養(yǎng)例2得到的發(fā)酵濾液(100mL,pH=6.2)在室溫?cái)嚢?，向此濾液中以少量重復(fù)添加1N乙酸水溶液。從濾液pH達(dá)到4.2時(shí)起開(kāi)始析出沉淀，進(jìn)一步添加該乙酸水溶液直至pH=3(約350mL)，然后添加沸石(1g)、過(guò)濾。向?yàn)V取的固形物(1.45g)中加蒸餾水(50mL)、攪拌、制成懸浮液(pH=3.6)，然后用1N氫氧化鈉水溶液中和(pH=7)，在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后過(guò)濾除去不溶物。向所得到的濾液中添加1N乙酸水溶液使pH=3(約200mL)，析出物用二氯甲烷萃取。所得到的二氯甲烷層用硫酸鎂干燥，然后減壓蒸出溶劑，加甲苯共沸除去乙酸，得到酸提取物(1.4g)。
然后，上述酸提取物(80mg)用乙醚(2mL)與甲醇(1mL)的混合液溶解，在冰冷卻下以少量重復(fù)添加重氮甲烷乙醚溶液，直至反應(yīng)液變成黃色。要說(shuō)明的是，所使用的重氮甲烷乙醚溶液是向乙醚(15mL)中添加40％(重量)氫氧化鉀(10mL)、用冰冷卻后，以少量重復(fù)添加N-甲基-N-亞硝基脲(0.5g)，確認(rèn)乙醚層變成黃色之后分離該乙醚層，用氫氧化鉀顆粒干燥。
然后，此溶液在室溫下反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用分級(jí)用TLC〔正相硅膠，20cm×20cm,5枚，展開(kāi)溶劑(己烷∶乙酸乙酯=1∶2)〕分離，分別得到S1化合物的甲基化物(20.5mg)和S2化合物的甲基化物(16.8mg)。這些化合物的1H-NMR和IR數(shù)據(jù)分別如以下所述。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S1化合物、S2化合物中全部羧基都甲酯化的衍生物。
⑤S1化合物五甲酯a)1H-NMR譜(氘代氯仿中)δ(積分值，多重度)
6.31(1H,dt,J=15.8,1.3Hz),6.01(1H,dt,J=15.8,6.6Hz),3,83(3H,s),3.75(3H,s),3.72(3H,s),3.71(3H,s),3.68(3H,s),2.69(2H,t,J=8.2Hz),2.44(2H,t,J=8.2Hz),2.35～2.48(3H,m),2.30(1H,dd,J=13.9,6.9Hz),2.24(2H,ddq,J=7.4,6.6,1.3Hz),1.63(1H,hep,J=6.9Hz),1.25～1.35(2H,m),1.05(3H,t,J=7.4Hz),0.91(3H,t,J=7.3Hz)ppmb)紅外線(xiàn)吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax1716,1280cm-1⑥S2化合物七甲酯a)1H-NMR譜(氘代氯仿中)δ(積分值，多重度)6.31(1H,dt,J=15.8,1.3Hz),6.01(1H,dt,J=15.8,6.6Hz),3.83(3H,s),3.74(3H,s),3.73(3H,s),3.72(6H,bs),3.70(3H,s),3.67(3H,s),
2.68(2H,t,J=7.7Hz),2.44(2H,t,J=7.7Hz),2.2～2.42(10H,m),1.49～1.59(2H,m),1.23～1.33(4H,m),1.04(3H,t,J=7.4Hz),0.89(3H,t,J=7.4Hz),0.87(3H,t,J=7.4Hz)ppmb)紅外線(xiàn)吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax1731,1264cm-1制造實(shí)施例4(S2酐的對(duì)溴芐基酰胺的制造方法)在冰冷卻下，向S2酐(224mg)的乙腈(2mL)溶液中添加二苯基磷酰氯(110mg)、N-甲基嗎啉(81mg)，攪拌2小時(shí)。在冰冷卻下，進(jìn)一步添加鹽酸對(duì)溴芐胺(89mg)和N-甲基嗎啉(40mg)，在冰冷卻下反應(yīng)1小時(shí)、在室溫反應(yīng)2小時(shí)。將此反應(yīng)液傾入水中，用乙酸乙酯萃取后，用水洗滌，用硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔1∶1(體積比)〕的混合液洗脫。含所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到S2酐的對(duì)溴芐基酰胺(193mg)。此化合物的1H-NMR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S2酐的羧基已發(fā)生了對(duì)溴芐基酰胺化的衍生物。
1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.43(2H,d),7.29(1H,dt),7.09(2H,d),6.20(1H,dt),5.88(1H,t),4.30(2H,d),2.81(2H,t),2.22～2.63(14H,m),1.22～1.37(4H,m),1.12(3H,t),0.97(6H,t)ppm制造實(shí)施例5(S2酐的對(duì)硝基芐基酰胺的制造方法)在冰冷卻下，向S2酐(163mg)的乙腈(2mL)溶液中添加二苯基磷酰氯(79mg)和N-甲基嗎啉(60mg)，攪拌2小時(shí)。在冰冷卻下，進(jìn)一步添加鹽酸對(duì)硝基芐基胺(55mg)和N-甲基嗎啉(30mg)，在冰冷卻下反應(yīng)1小時(shí)、在室溫反應(yīng)2小時(shí)。將此反應(yīng)液傾入水中，用乙酸乙酯萃取后，用水洗滌、用硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠柱色譜法精制，用乙酸乙酯洗脫。減壓蒸出含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑，得到S2酐的對(duì)硝基芐基酰胺(180mg)。此化合物的1H-NMR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S2酐的羧基已發(fā)生了對(duì)硝基芐基酰胺化的衍生物。
1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)8.16(2H,d),7.40(2H,d),7.27(1H,dt),6.20(1H,dt),6.14(1H,t),4.48(2H,d),2.81(2H,t),2.18～2.69(14H,m),1.22～1.37(4H,m),1.12(3H,t),0.97(6H,t)ppm制造實(shí)施例6(S2酐的環(huán)己基酰胺的制造方法)在冰冷卻下，向S2酐(156mg)的乙腈(2mL)溶液中添加二苯基磷酰氯(110mg)和N-甲基嗎啉(57mg)，攪拌2小時(shí)。在冰冷卻下進(jìn)一步添加環(huán)己基胺(28mg)和N-甲基嗎啉(28mg)，在冰冷卻下反應(yīng)1小時(shí)、在室溫反應(yīng)2小時(shí)。將此反應(yīng)液傾入水中，用乙酸乙酯萃取后，用水洗滌、用硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔1∶2(體積比)〕的混合液洗脫。減壓蒸出含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑，得到S2酐的環(huán)己基酰胺(10mg)。此化合物的1H-NMR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S2酐的羧基已發(fā)生了環(huán)己基酰胺化的衍生物。
1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)
7.31(1H,dt),6.22(1H,dt),5.37(d,1H),3.66(1H,m),2.78(2H,t),2.05～2.61(14H,m).
1.50～1.95(10H,m),1.22～1.37(4H,m),1.12(3H,t),0.98(6H,t)ppm制造實(shí)施例7(S2化合物七芐酯的制造方法)向S2酐(50mg)的四氫呋喃(2mL)溶液中添加對(duì)溴芐醇(51mg)和2-(對(duì)溴芐基)-1,3-二異丙基異脲(140mg),在室溫反應(yīng)3日。在反應(yīng)過(guò)程中,4次追加對(duì)溴芐醇(51mg)和2-(對(duì)溴芐基)-1,3-二異丙基異脲(140mg)。向此反應(yīng)液中添加己烷、過(guò)濾后，減壓蒸出溶劑。所得到的粗生成物用硅膠柱色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔4∶1(體積比)〕的混合液洗脫。減壓蒸出含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑，得到S2化合物的七芐酯(68mg)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S2化合物中全部羧基都芐基化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.38～7.52(14H,m),7.02～7.18(14H,m),6.26(1H,dt),5.85(1H,dt),4.70～5.05(14H,m),2.04～2.70(14H,m),1.15～1.60(6H,m),0.94(3H,t),0.70～0.82(6H,m)ppmb)紅外吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax2965,1733,1713cm-1制造實(shí)施例8(S2化合物的叔丁酯六甲酯的制造方法)向S2酐(100mg)的二氯甲烷(2mL)溶液中添加環(huán)己烷(2mL)、叔丁醇(0.5mL)、2,2,2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯(79mg)和三氟化硼-乙醚絡(luò)合物(0.05mL)，在室溫反應(yīng)15小時(shí)。向此反應(yīng)液中加水，用乙酸乙酯萃取后，有機(jī)層用檸檬酸水溶液和食鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的殘?jiān)谝颐?2mL)和甲醇(2mL)中溶解后，添加三甲基甲硅烷基重氮甲烷的己烷溶液(2M,0.5mL)，在室溫反應(yīng)4日。向此反應(yīng)液中添加乙酸，減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯(5∶2(體積比)〕的混合液洗脫。減壓蒸出含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑，得到S2化合物的叔丁酯六甲酯(106mg)。此化合物的1H-NMR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S2化合物的結(jié)構(gòu)式中飽和碳上結(jié)合的羧基發(fā)生叔丁基化、其它羧基全部甲基化的衍生物。
1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)6.00(1H,dt),3.84(3H,s),3.75(3H,s),3.72(9H,s),3.71(3H,s),2.64(2H,t),2.16～2.41(12H,m),1.44(9H,s),1.22～1.60(6H,m),1.05(3H,t),0.83～0.94(6H,m)ppm制造實(shí)施例9(S2化合物六甲酯的制造方法)向上述S2化合物的叔丁酯六甲酯(100mg)的二氯甲烷(2mL)溶液中添加三氟乙酸(2mL)，在室溫反應(yīng)1.5小時(shí)。減壓蒸出溶劑后，用甲苯共沸2次，得到S2化合物的六甲酯(95mg)。此化合物的1H-NMR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S2化合物的結(jié)構(gòu)式中除飽和碳上結(jié)合的羧基外全部羧基都甲基化的衍生物。
1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)6.30(1H,dt),6.02(1H,dt),3.85(3H,s),3.69～3.75(15H,m),2.19～2.70(14H,m),1.20～1.65(6H,m),1.04(3H,t),0.83～0.94(6H,m)ppm
制造實(shí)施例10(S2化合物的對(duì)溴苯甲?；柞サ闹圃旆椒?向上述S2化合物六甲酯(95mg)的乙酸乙酯(2mL)溶液中添加三乙胺(20mg)和對(duì)溴苯甲酰溴(34mg)，在室溫?cái)嚢琛?小時(shí)后，添加三乙胺(20mg)和對(duì)溴苯甲酰溴(34mg)，再反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液中添加乙酸乙酯和水，使之萃取到有機(jī)層中，用食鹽水洗滌后，用硫酸鎂干燥，減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔3∶2(體積比)〕的混合液洗脫。減壓蒸出含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑，得到S2化合物的對(duì)溴苯甲酰六甲酯(100mg)。此化合物的1H-NMR、IR和質(zhì)量分析如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S2化合物的結(jié)構(gòu)式中飽和碳上結(jié)合的羧基發(fā)生對(duì)溴苯甲?；?、其它羧基全部發(fā)生甲基化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.78(2H,d),7.64(2H,d),6.31(1H,d t),5.97(1H,dt),5.30(2H,s),3.83(3H,s),3.76(3H,s),3.74(3H,s),3.72(3H,s),3.70(6H,s),2.18～2.80(14H,m),1.20～1.65(6H,m),1.03(3H,t),0.88(6H,t)ppmb)紅外吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax2955,1747,1726,1427cm-1c)質(zhì)譜(MALDI)913[M+Na]+,915[M+2+Na]+制造實(shí)施例11(S0酐的合成制備)按以下要領(lǐng)制備S0酐。首先，從已知化合物二乙基膦酰溴乙酸乙酯和2-酮戊二酸二甲酯合成以下所示S0中間體1 再讓此化合物與丁烯基二戊基硼烷反應(yīng)，來(lái)合成以下所示中間體2 最后在堿性條件下使這種S0中間體2水解，所得到的鈉鹽在酸性條件下處理，合成S0酐。
以下詳細(xì)說(shuō)明各步驟。
首先，在冰冷卻下，向二乙基膦酰溴乙酸乙酯(48g)的乙腈(400mL)溶液中添加氯化鋰(4.7g)，并滴加二異丙基胺(14.3g)。就在這樣的狀態(tài)下攪拌1小時(shí)，然后滴加2-酮戊二酸二甲酯(13.7g)，在冰冷卻下反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，添加乙酸乙酯，水洗后用硫酸鎂干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔4∶1(體積比)〕的混合液洗脫。減壓蒸出含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑，得到S0中間體1(19.5g)。這種化合物的1H-NMR如下1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)4.25(2H,q),3.79(3H,s),3.70(3H,s),2.87(2H,t),
2.53(2H,t),1.33(3H,t)然后，上述S0中間體1(46.1g)的二噁烷(1.5L)溶液在氮?dú)夥諊绿砑佣∠┗旎鹜榈乃臍溥秽芤?0.47mol/L,500mL)、碳酸鉀(74.1g)、磷酸鉀(56.9g)和四(三苯膦)鈀(3.1g)，然后在攪拌下于100℃加熱。2小時(shí)40分鐘后又添加四(三苯膦)鈀(0.5g)和碳酸鉀(5.0g)，再反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔5∶1(體積比)〕的混合液洗脫。減壓蒸出含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑，得到S0中間體2(31.6g)。此化合物的1H-NMR如下1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)6.38(1H,dt),6.06(1H,dt),4.33(2H,q),3.75(3H,s),3.69(3H,s),2.71～2.81(2H,m)2.44～2.54(2H,m),2.17～2.28(2H,m),1.35(3H,t)1.06(3H,t)然后，上述S0中間體2(32.0g)溶解在二噁烷(250mL)和水(150mL)中之后，添加氫氧化鈉水溶液(400g/L,53.5mL)，在室溫反應(yīng)14小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，加水和二異丙醚，把粗生成物萃取到水層中。向此水層中添加檸檬酸水溶液把pH調(diào)整到3，放置1小時(shí)后用乙酸乙酯萃取，用硫酸鎂干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷、乙酸乙酯和乙酸〔2∶1∶0.1(體積比)〕的混合液洗脫。使含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到粗S0化合物(13.6g)。然后，用乙醚-己烷重結(jié)晶，進(jìn)一步用乙酸乙酯-己烷進(jìn)行重結(jié)晶，得到S0酐(7.7g)。此化合物的1H-NMR同制造實(shí)施例1所示S0酐以及文獻(xiàn)上記載的值一致。
制造實(shí)施例12(從濾液得到R0化合物的衍生物的制造方法)向制造實(shí)施例1從濾液得到的油狀物質(zhì)(1.13g)的二氯甲烷(15mL)溶液中添加對(duì)溴苯胺(1.5g)，在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，添加二異丙基碳化二亞胺(1.1g)，在室溫反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)液的溶劑減壓蒸出，添加乙酸乙酯和0.5N鹽酸萃取后，用水洗滌、用硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔9∶1(體積比)〕的混合液洗脫。含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到R0化合物的衍生物(40mg)。這種衍生物的1H-NMR、IR和元素分析如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述衍生物就是R0化合物的結(jié)構(gòu)式中飽和碳上結(jié)合的羧基已發(fā)生對(duì)溴苯胺化、其它羧基發(fā)生(對(duì)溴苯基)亞胺化的R0化合物的衍生物。
而且，從這些結(jié)果可以看出，培養(yǎng)濾液中產(chǎn)生了R0化合物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.60(2H,d),7.41(4H,s),7.34(1H,d),7.29(1H,s),7.26(2H,d),6.46(1H,d),3.62(2H,s),2.35(2H,q),1.13(3H,t)ppmb)紅外吸收譜(液體石蠟，NaCl板)vmax3345,1708,1685,1640,1589cm-1c)元素分析(C22H18N2O3Br)C H N計(jì)算值50.993.505.40測(cè)定值50.303.415.31制造實(shí)施例13(S1化合物的丁基酰胺四鈉鹽的制造方法)在冰冷卻下，向S1酐(840mg)的乙腈(8mL)溶液中添加二苯磷酰氯(577mg)和N-甲基嗎啉(430mg)，攪拌1小時(shí)。進(jìn)一步在冰冷卻下添加正丁胺(157mg)、反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液中添加乙酸乙酯，用檸檬酸水溶液洗滌后，用硫酸鎂干燥。減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔1∶1(體積比)〕的混合液洗脫。含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到S1酐的丁基酰胺(190mg)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S1酐中羧基發(fā)生了丁基酰胺化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.30(1H,dt),6.22(1H,d),5.45～5.60(1H,m),3.12～3.25(2H,m),2.80(2H,t),2.10～2.65(9H,m),1.20～1.50(6H,m),1.12(3H,t),
0.87～1.02(6H,m)ppmb)紅外吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax2970,1818,1769,1648cm-1然后，向上述S1酐的丁基酰胺(160mg)中添加碳酸氫鈉水溶液(NaHCO3121mg，水20mL)和1,4-二噁烷(20mL)，在室溫反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，得到S1化合物的丁基酰胺四鈉鹽(200mg)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，上述化合物就是S1化合物的結(jié)構(gòu)式中飽和碳上結(jié)合的羧基發(fā)生了丁基酰胺化、其它羧基業(yè)已鈉化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)6.36(1H,d),5.88(1H,dt),2.10～2.65(10H,m),1.25～1.60(7H,m),1.01(3H,t),0.80～0.95(6H,m)ppmb)紅外吸收譜(KBr)Vmax3425,1635,1550,1398cm-1制造實(shí)施例14(S1化合物的叔丁酯四鈉鹽的制造方法)向S1酐(500mg)的二氯甲烷(4mL)溶液中添加環(huán)己烷(4mL)、2,2,2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯(308mg)和三氟化硼乙醚絡(luò)合物(0.05mL)，在室溫反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加己烷、過(guò)濾、減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔1∶1(體積比)〕的混合液洗脫。含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到S1酐的叔丁酯(240mg)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)確認(rèn)，上述化合物就是S1化合物的羧基業(yè)已叔丁基化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.30(1H,dt),6.21(1H,dt),2.11～2.75(11H,m),1.41(9H,s),1.22～1.55(2H,m),1.08(3H,t),0.99(3H,t)ppmb)紅外吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax2975,1820,1771,1722cm-1然后，向上述S1酐的叔丁酯(218mg)中添加碳酸氫鈉水溶液(NaHCO3164mg，水20mL)和1,4-二噁烷(20mL)，在室溫反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，得到S1化合物的叔丁酯四鈉鹽(276mg)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)確認(rèn)，上述化合物就是S1化合物的結(jié)構(gòu)式中飽和碳上結(jié)合的羧基已經(jīng)叔丁基化、其它羧基業(yè)已鈉化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)6.36(1H,d),5.87(1H,dt),2.10～2.60(10H,m),1.47(9H,s),1.20～1.65(3H,m),1.01(3H,t),0.86(3H,t)ppmb)紅外吸收譜(KBr)Vmax3405,1705,1551,1403cm-1制造實(shí)施例15(S1化合物的芐基酰胺四鈉鹽的制造方法)在冰冷卻下，向S1酐(500mg)的乙腈(5mL)溶液中添加二苯基磷酰氯(344mg)和N-甲基嗎啉(260mg)，反應(yīng)1小時(shí)后添加芐胺(137mg)，進(jìn)一步反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷和乙酸乙酯〔1∶1(體積比)〕的混合液洗脫。含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到S1酐的芐基酰胺(159mg)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)確認(rèn)，上述化合物就是S1酐中羧基業(yè)已芐基酰胺化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.15～7.38(6H,m),6.21(1H,d),5.70～5.82(1H,m),4.38(2H,d),2.83(2H,t),2.10～2.63(9H,m),1.20～1.42(2H,m),1.11(3H,t),0.99(3H,t)ppmb)紅外吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax1820,1750,1640cm-1然后，向上述S1酐的芐基酰胺(157mg)中添加碳酸氫鈉水溶液(NaHCO3110mg，水20mL)和1,4-二噁烷(20mL)，在室溫反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，得到S1化合物的芐基酰胺四鈉鹽(196mg)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)確認(rèn)，上述化合物就是S1化合物的結(jié)構(gòu)式中飽和碳上結(jié)合的羧基已經(jīng)芐基酰胺化、其它羧基發(fā)生了鈉化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.25～7.50(5H,m),6.35(1H,d),5.85(1H,dt),4.40(2H,s),2.10～2.70(10H,m),1.20～1.65(3H,m),0.99(3H,t),0.85(3H,t)ppmb)紅外吸收譜(KBr)
Vmax3405,1641,1555,1403cm-1制造實(shí)施例16(S1化合物的二酰亞胺的制造方法)向S1酐(0.3g)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中，在氬氣流下添加氨水(0.5mL)和乙酸(0.1mL)，在105℃反應(yīng)9小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷、氯仿和甲醇〔2∶7∶1(體積比)〕的混合液洗脫。含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到S1化合物的二酰亞胺(0.2g)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)確認(rèn)，上述化合物就是S1化合物中鄰接碳原子上結(jié)合的2個(gè)羧基發(fā)生酰亞胺化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)8.53(1H,s),8.41(1H,s),7.09(1H,dt),6.15(1H,dt),2.68(4H,s),2.36～2.48(2H,m),2.19～2.34(4H,m),2.05～2.18(1H,m),1.28～136(2H,m),1.06(3H,t),0.94(3H,t)ppmb)紅外吸收譜(凈相，NaCl板)vmax2500～3500,1731,1741,1682,1349,1070cm-1制造實(shí)施例17〔S1化合物的二(對(duì)溴苯基)酰亞胺的制造方法〕在氬氣流下，向S1酐(0.3g)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中添加對(duì)溴苯胺(0.4mL)和乙酸(0.1mL),在105℃反應(yīng)9小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸出溶劑，所得到的粗生成物用硅膠色譜法精制，用己烷、氯仿和甲醇〔5∶7∶1(體積比)〕的混合液洗脫。含有所希望生成物的溶出級(jí)分的溶劑減壓蒸出，得到S1化合物的二(對(duì)溴苯基)酰亞胺(0.3g)。此化合物的1H-NMR和IR如下。從這些數(shù)據(jù)確認(rèn)，上述化合物就是S1化合物中鄰接碳原子上結(jié)合的2個(gè)羧基發(fā)生了(對(duì)溴苯基)酰亞胺化的衍生物。
a)1H-NMR(重水中)δ(積分值，多重度)7.50～7.56(4H,m),7.15～7.24(5H,m),6.24(1H,dt),2.70～2.80(4H,m),2.54～2.62(2H,m),2.40～2.47(2H,m),2.24～2.30(3H,m),1.35～1.48(2H,m),1.08(3H,t),1.03(3H,t)ppmb)紅外吸收譜(凈相，NaCl板)Vmax2500～3500,1738,1713,1681,1493,1392,1242,1120cm-1
以下實(shí)施例1～4中，對(duì)稀溶液中本發(fā)明分散劑的分散活性，以溶液的濁度等為指標(biāo)，進(jìn)行評(píng)價(jià)。
實(shí)施例1(稀溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)高嶺土的活性)]首先，向高嶺土(30g，和光純藥公司)中加蒸餾水(300mL)，用超聲波洗滌器(夏普公司制“UT 0205”)進(jìn)行超聲波照射(15分鐘，最大功率)，配制10％高嶺土懸浮液。
然后，向試管中分別注入上述高嶺土懸浮液(10mL)以及以下表7中所列各試樣水溶液(1mL)，用點(diǎn)式混合器(point mixer)攪拌15秒鐘后，在無(wú)振動(dòng)板上靜置24小時(shí)。要說(shuō)明的是，相對(duì)于分散質(zhì)微粒(高嶺土)而言，試樣添加量為0.1％和0.5％(固形物重量比)。靜置后測(cè)定高嶺土微粒的沉降體積，所得到的結(jié)果一并列于表7中。要說(shuō)明的是，以沉降體積作為分散性指標(biāo)，沉降體積越小，表明分散性越優(yōu)異。
表7

從表中可以看出，當(dāng)使用濾液、S1化合物五鈉鹽和S2化合物七鈉鹽作為試樣時(shí)，均能發(fā)揮比對(duì)照組(無(wú)添加組)良好的分散性。而且，S1化合物五鈉鹽和S2化合物七鈉鹽，即使與現(xiàn)有分散劑木素磺酸鹽相比，也有更高的活性，添加0.1％就顯示出令人滿(mǎn)意的活性。另一方面，濾液樣品顯示出與木素磺酸鹽大致相同的活性。
實(shí)施例2〔稀溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)碳酸鈣的活性)〕除使用碳酸鈣代替實(shí)施例1中的高嶺土作為分散質(zhì)外，同實(shí)施例1一樣進(jìn)行處理，測(cè)定表8中所列各試樣的沉降體積。要說(shuō)明的是，碳酸鈣同高嶺土一樣，用超聲波洗滌器(夏普公司制“UT 0205”)進(jìn)行超聲波照射(15分鐘，最大功率)，配制10％碳酸鈣懸浮液(30g/300mL)。所得到的結(jié)果一并列于表8中。要說(shuō)明的是，以沉降體積作為分散性指標(biāo)，沉降體積越小，表明分散性越優(yōu)異。
表 8

從表中可以看出，當(dāng)使用濾液、S1化合物五鈉鹽和S2化合物七鈉鹽作為試樣時(shí)，與對(duì)照組(無(wú)添加組)比較，都發(fā)揮出非常優(yōu)異的分散性。而且，就分散性程度而言，0.5添加組一方均比O.1％添加組優(yōu)異。
實(shí)施例3〔稀溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)水泥的活性)〕各試管中，分別注入表9中所列預(yù)定濃度的各試樣(1mL)，并且分別注入水泥(秩父小野田水汲)懸浮液(4mL:31.3g/500mL)，用點(diǎn)式混合器攪拌后靜置，用目視法觀察分散狀態(tài)隨時(shí)間的變化。分散狀態(tài)能保持2小時(shí)以上者，其分散性判定為有分散效果(○)，否則判定為無(wú)分散性(×)。這些結(jié)果一并列于表9中。
表9

注)○分散×不分散從表中可以看出，濾液添加組3.0mg/mL以上、S1化合物五鈉鹽添加組7.5mg/mL以上、S2化合物七鈉鹽添加組2.0mg/mL以上，分別達(dá)到了所希望的分散效果。
實(shí)施例4(稀溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)炭黑的活性))首先，將炭黑(80mg)加到水(1L)中，用超聲波洗滌器(夏普公司制“UT 0205”)進(jìn)行超聲波照射(15分鐘，最大功率)，配制炭黑懸浮液。
其次，向試管中分注所得到的炭黑懸浮液(10mL)，隨即添加預(yù)定量的各試樣，然后用點(diǎn)式混合器攪拌15秒鐘，在無(wú)振動(dòng)板上靜置5小時(shí)。靜置后添加3％氯化鈉水溶液(1mL)，然后用點(diǎn)式混合器攪拌15秒鐘，再一次在無(wú)振動(dòng)盤(pán)上靜置19小時(shí)。然后，取試管的上層液(從上表面起約2cm)，測(cè)定吸光度(波長(zhǎng)660nm)。
分散性評(píng)價(jià)按以下要領(lǐng)進(jìn)行。首先，預(yù)先求出炭黑濃度與吸光度的關(guān)系式，從所測(cè)定的吸光度算出各試管中懸浮的炭黑濃度。以最初配制的炭黑懸浮液的懸浮率為100％，從基于吸光度算出的炭黑濃度，求出微粒的懸浮率。其結(jié)果列于表10中。
表10

本試驗(yàn)法中使用的炭黑懸浮液，是用炭黑平均粒徑為20nm的微粉配制的、非常穩(wěn)定的懸浮液。為了強(qiáng)制凝聚之目的，這種懸浮液中添加電解質(zhì)(氯化鈉)后再評(píng)價(jià)其分散性。
從表中可以看出，在無(wú)添加時(shí)炭黑不懸浮(凝聚沉降)的條件下，濾液(冷凍干燥品)的分散活性為40mg/L以上。
以下實(shí)施例5～9涉及濃溶液中的分散活性，以液體的粘度等為指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
實(shí)施例5〔濃溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)高嶺土的活性-其1)〕在室溫25℃的條件下，向容器中添加高嶺土(42g)和含有上述培養(yǎng)例1得到的濾液的蒸餾水(60g)，然后用手動(dòng)混合器攪拌1分鐘。然后，用匙使容器底部和周?chē)浞只旌希S后再用手動(dòng)混合器攪拌2分鐘，立即用B型旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)(轉(zhuǎn)速60rpm，使用3號(hào)轉(zhuǎn)子)測(cè)定粘度。這些結(jié)果列于表11中。
表11

從表中可以看出，在使用培養(yǎng)例1的濾液的情況下，與不使用該濾液的情況相比，粘度顯著下降，表明有良好的分散性。
實(shí)施例6(濃溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)高嶺土的活性-其2)]在室溫25℃的條件下，向容器中添加表11中記載的樣品溶液(3mL)和高嶺土(2g)。此試樣用點(diǎn)式混合器攪拌1分鐘，進(jìn)一步進(jìn)行3分鐘超聲波處理，然后，10分鐘后用E型粘度計(jì)(可測(cè)定粘度范圍93～932 mPa·s)測(cè)定粘度。這些結(jié)果列于表12中。
表12

從表中可以看出，在使用S1化合物五鈉鹽、S2化合物七鈉鹽和含有這些的濾液中任何一種的情況下，也發(fā)現(xiàn)依賴(lài)于濃度的粘度顯著降低，表明有良好的分散性。
實(shí)施例7(濃溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)硫酸鋇的活性))除使用硫酸鋇(42g)代替實(shí)施例5中的高嶺土外，同實(shí)施例5一樣進(jìn)行處理，分別測(cè)定各試樣的粘度。這些結(jié)果列于表13中。
表13

從表中可以看出，在使用培養(yǎng)例1的濾液的情況下，與不使用該濾液的情況和使用木素磺酸鹽的情況相比，粘度顯著下降，顯示出良好的分散性。
實(shí)施例8〔濃溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)碳酸鈣的活性)〕除使用碳酸鈣(40g)代替實(shí)施例5中的高嶺土外，同實(shí)施例5一樣進(jìn)行處理，分別測(cè)定各試樣的粘度。這些結(jié)果列于表14中。
表14

從表中可以看出，當(dāng)使用培養(yǎng)例1的濾液時(shí)，與不使用該濾液的情況相比，粘度顯著下降，表明分散性?xún)?yōu)異。而且，分散性的程度與使用木素磺酸鹽時(shí)大致相同。
實(shí)施例9〔濃溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)輕質(zhì)碳酸鈣的活性)〕除使用輕質(zhì)碳酸鈣(40g)代替實(shí)施例5中的高嶺土外，同實(shí)施例5一樣進(jìn)行處理，分別測(cè)定各試樣的粘度。這些結(jié)果列于表15中。
表15

從表中可以看出，當(dāng)使用培養(yǎng)例1的濾液時(shí)，與不使用該濾液的情況相比，粘度顯著下降，顯示出良好的分散性。而且，其分散性程度與使用木素磺酸鹽時(shí)大致相同。
實(shí)施例10〔濃溶液中的分散活性評(píng)價(jià)(對(duì)長(zhǎng)石釉料的活性)〕除使用長(zhǎng)石釉料(50g)代替實(shí)施例5中的高嶺土外，同實(shí)施例5一樣進(jìn)行處理，分別測(cè)定各試樣的粘度。此外，本實(shí)施例中不僅測(cè)定了剛攪拌后的粘度，而且也同樣測(cè)定了攪拌后1個(gè)月后、2個(gè)月后的粘度。這些結(jié)果列于表16中。
表16

從表中可以看出，當(dāng)使用培養(yǎng)例1的濾液時(shí)，與不使用該濾液的情況相比，粘度顯著下降，顯示出良好的分散性。而且，其分散性程度在相對(duì)于長(zhǎng)石釉料而言固形分添加量為0.45％(重量)的情況下保存月數(shù)增長(zhǎng)，而且分散性有提高的趨勢(shì)。
實(shí)施例11〔灰漿試驗(yàn)法分散活性評(píng)價(jià)〕對(duì)添加了培養(yǎng)例1得到的濾液的灰漿的減壓水性能，與添加了市售木素磺酸鹽的灰漿的減水性能，進(jìn)行了比較研究。
(1)使用材料和灰漿的配合本實(shí)施例中，每一批都分別使用包含JIS R 5210規(guī)定的普通卜特蘭水泥(600g，比重3.16)、河砂(1800g，比重2.67、粗粒率2.99)、和水或含有培養(yǎng)例1得到的濾液的水溶液(310g)的材料。此外，實(shí)施時(shí)添加消泡劑，以使夾帶空氣量調(diào)整到2％左右。
(2)灰漿的混煉按照J(rèn)IS R 5201混煉灰漿，每一批灰漿(約1.2L)都用灰漿攪拌機(jī)混煉3分鐘。
(3)滑移(slump)測(cè)定灰漿的滑移是按照J(rèn)IS A 1173用滑移錐(上端內(nèi)徑50mm、下端內(nèi)徑100mm、高度150mm)測(cè)定的。此外，測(cè)定在2個(gè)時(shí)點(diǎn)實(shí)施剛混煉后和經(jīng)過(guò)60分鐘后，其中，經(jīng)過(guò)60分鐘后的滑移，是在測(cè)定了剛混煉后的滑移之后，把灰漿回收到混合容器中放置60分鐘后，用捏合匙反復(fù)捏合10次后再測(cè)定。這些結(jié)果列于表17中。要說(shuō)明的是，滑移測(cè)定值越大，表明分散性越優(yōu)異。
表17

從表中可以看出，在使用培養(yǎng)例1得到的濾液的情況下，與不使用該濾液的情況相比，滑移顯著提高了。而且，分散性程度也比使用木素磺酸鹽的情況優(yōu)異，而且其效果從60分鐘后的分散性差異可以更顯著地看出來(lái)。
實(shí)施例12〔水系中有機(jī)顏料的分散活性評(píng)價(jià)(其1)〕試管(16×150mm)中添加預(yù)定量酞菁綠懸浮液(5mL，酞菁綠16mg/蒸餾水200mL)和培養(yǎng)例1得到的濾液(干固物)，用點(diǎn)式混合器攪拌15秒鐘。攪拌后靜置3小時(shí)，然后測(cè)定試管底部堆積的酞菁綠的直徑，根據(jù)其直徑的大小評(píng)價(jià)分散性。即，所得到的直徑值越大，表示分散性越良好。此外，為比較起見(jiàn)，使用市售萘磺酸鹽或木素磺酸鹽進(jìn)行同樣處理。這些結(jié)果列于表18中。
表18

從表中可以看出，在使用培養(yǎng)例1得到的濾液(干固物)的情況下，與不使用該濾液的情況相比，直徑顯著增大，顯示出良好的分散性。而且，分散性程度也比使用萘磺酸鹽和木素磺酸鹽的情況更優(yōu)異。
實(shí)施例13〔水系中有機(jī)顏料的分散活性評(píng)價(jià)(其2)〕酮酞菁藍(lán)(400mg/水400mL)用超聲波洗滌器(夏普公司制“UT0205”)進(jìn)行超聲波照射(10分鐘，最大功率)，配制一種均勻懸浮液。這種懸浮液邊用攪拌器攪拌邊取出4.5mL，按表19中所列添加量添加各樣品液(0.5mL)。用點(diǎn)式混合器攪拌10秒鐘后，在無(wú)振動(dòng)盤(pán)上靜置，測(cè)定660nm的光透射率隨時(shí)間的變化。這些結(jié)果一并列于表19中。此外，透射率成為分散性的指標(biāo)，透射率越小，表示分散性越優(yōu)異。
表19

從表中可以看出，在使用S1化合物的衍生物作為試樣的情況下，與不使用該衍生物的情況相比，透射率顯著提高。而且，分散性程度也優(yōu)于使用十二烷基苯磺酸鈉的情況，低添加量時(shí)可以更顯著地看出分散性的差異。
實(shí)施例14〔非水系中有機(jī)顏料的分散活性評(píng)價(jià)(其1)〕試管(16×150mm)中邊用點(diǎn)式混合器攪拌邊量取銅酞菁藍(lán)的乙酸乙酯懸浮液(40mg/10mL)0.5mL，并進(jìn)一步添加乙酸乙酯(4.5mL)。
向其中添加制造實(shí)施例1得到的S1酐和S2酐的乙酸乙酯溶液(20mg/2mL)，并進(jìn)一步添加乙酸乙酯，使總量為6mL。此液用點(diǎn)式混合器攪拌l5秒鐘后，進(jìn)行30分鐘超聲波處理，靜置10～30分鐘。采集所得到的上清液(0.5mL)，然后添加乙酸乙酯，使總量為3mL，測(cè)定波長(zhǎng)660nm的吸光度。從這樣得到的吸光度評(píng)價(jià)分散性。這些結(jié)果列于表20中。
表20

從表中可以看出，在使用S1酐和S2酐的乙酸乙酯溶液的情況下，與不使用該化合物的情況相比，分散性顯著提高。
實(shí)施例15〔非水系中有機(jī)顏料的分散活性評(píng)價(jià)(其2)〕制造實(shí)施例11得到的S0酐同實(shí)施例14一樣進(jìn)行處理。采集上清液(0.25mL)，添加乙酸乙酯使總量為3mL，測(cè)定吸光度。從這樣得到的吸光度評(píng)價(jià)分散活性。這些結(jié)果列于表21中。
表21

從表中可以看出，在使用S0酐的乙酸乙酯溶液的情況下，與不使用該化合物的情況相比，分散性顯著提高了。
實(shí)施例16〔非水系中有機(jī)顏料的分散活性評(píng)價(jià)(其3)〕除使用乙醇代替實(shí)施例14中的乙酸乙酯外，同實(shí)施例14一樣進(jìn)行處理。但上清液的采集量為0.25mL。從這樣得到的吸光度評(píng)價(jià)分散活性。這些結(jié)果列于表22中。
表22

從表中可以看出，在使用S1酐和S2酐的乙醇溶液的情況下，與不使用該化合物的情況相比，分散性顯著提高了。
實(shí)施例17〔對(duì)鈣離子的封鎖能力(堿性條件下，pH13)〕首先，按以下要領(lǐng)配制測(cè)定液。即，草酸鉀(0.6g)用0.1N氫氧化鈉(500mL)溶解，向此溶液(10mL)中添加S1化合物五鈉鹽(40mg)或S2化合物七鈉鹽(40mg)，溶解后作為測(cè)定液。而使用2.2％乙酸鈣溶液作為滴定液。
此測(cè)定液邊攪拌邊滴加滴定液，測(cè)定液中有草酸鈣白色混濁析出的那一點(diǎn)為終點(diǎn)，求出其滴定數(shù)A(mL)。另外，對(duì)不含試樣的測(cè)定液也進(jìn)行同樣測(cè)定，求出空白滴定數(shù)B(mL)。根據(jù)這些A和B，按照下式算出對(duì)鈣離子的封鎖能力。此外，為比較起見(jiàn)，對(duì)現(xiàn)有螯合劑(EDTA·4Na)也進(jìn)行同樣處理，算出對(duì)鈣離子的封鎖能力。
對(duì)鈣離子的封鎖能力〔Ca離子(mg)/試樣(1g)〕=(A-B)×(1g/試樣精稱(chēng)量)×5式中的“5”是相當(dāng)于2.2％乙酸鈣溶液1mL的Ca離子量(5mg)。
得到的結(jié)果列于表23中。
表23

對(duì)鈣離子的封鎖能力是表示螯合作用的指標(biāo)之一，數(shù)值越大，意味著螯合能力越高。
從表中可以看出，與S1化合物的五鈉鹽相比，S2化合物的七鈉鹽有更強(qiáng)的螯合作用，與現(xiàn)有螯合劑(EDTA·4Na)大致相同。
實(shí)施例18(表面張力測(cè)定)按照Wihelmy的吊板法，分別測(cè)定S1化合物五鈉鹽和S2化合物七鈉鹽的表面張力。即，垂直懸掛一塊清潔的玻璃板，使樣品液面上升到一定位置以浸沒(méi)玻璃板，然后使樣品液面緩緩下降，同時(shí)用電子天平讀取該玻璃板整個(gè)前端與液面平齊時(shí)的負(fù)荷。若此時(shí)的荷重為P(g)、玻璃板的寬為L(zhǎng)(cm)、厚為d(cm)、浮力為B、重力為W，則表面張力γ(dyn/cm)為
γ=(P+B-W)/〔2(L+d)〕在本試驗(yàn)的情況下，求得γ=P×203.3要說(shuō)明的是，測(cè)定在室溫(25℃)進(jìn)行。此外，S1化合物五鈉鹽和S2化合物七鈉鹽均在1×10-5～1×10-2M的范圍內(nèi)測(cè)定表面張力。這些結(jié)果列于表24中。
表24

從表中可以看出，S1化合物五鈉鹽和S2化合物七鈉鹽有表面活性劑的特征，隨濃度增加出現(xiàn)表面張力下降現(xiàn)象，可以確認(rèn)S1化合物五鈉鹽和S2化合物七鈉鹽有表面活性作用。
實(shí)施例19〔作為衣料用洗滌劑的評(píng)價(jià)(對(duì)人工污染布的洗凈力活性)〕使用一臺(tái)Launder-O-meter作為洗凈力試驗(yàn)機(jī)，在有表25中所示組成的洗滌液(水溫20℃)150mL中，將(財(cái))洗滌科學(xué)協(xié)會(huì)制濕式人工污染布(尺寸5×5cm；污物組成油酸28.3％，三油精15.6％，油酸膽甾醇酯12.2％，液體石蠟2.5％，角鯊烯2.5％，膽甾醇1.6％，明膠7.0％，泥29.8％，炭黑0.2～0.3％)15枚，在洗滌時(shí)間10分鐘、漂洗時(shí)間3分鐘的條件下進(jìn)行洗凈力試驗(yàn)。
判定按以下要領(lǐng)進(jìn)行。對(duì)15枚人工污染布分別用分光測(cè)色計(jì)測(cè)定試驗(yàn)前后污染布的反射率，從其平均值按照Kubelka-Munk公式算出洗凈力，其與無(wú)添加情況下的洗凈力之比表示為洗凈力比。這些結(jié)果一并列于表25中。
表25

從表中可以看出，在使用S2化合物七鈉鹽的情況下，與不使用該化合物的情況相比，有高洗凈力。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性本發(fā)明的化合物由于具有如上所述的構(gòu)成，因而可以提供無(wú)論分散質(zhì)的種類(lèi)如何都能發(fā)揮優(yōu)異分散性的、源于天然產(chǎn)物的化合物。
進(jìn)而可以確認(rèn)，本發(fā)明的化合物除具有上述優(yōu)異的分散作用外，還能與有害金屬離子螯合，從而有掩蔽該金屬離子的作用，以及表面活性作用。
權(quán)利要求
1．下式(1)所示的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi) 式中，n是0～5的整數(shù)，m是1或2的整數(shù)，但n為0時(shí)m是1。
2．權(quán)利要求1記載的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi)，其中，上述式(1)中m=1、n=0。
3．權(quán)利要求1記載的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi)，其中，上述式(1)中m=2、n=1。
4．權(quán)利要求1記載的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi)，其中，上述式(1)中m=2、n=2。
5．從屬于藍(lán)霉菌(Talaromyces)屬的微生物在培養(yǎng)基上培養(yǎng)、得到的培養(yǎng)液制造上述式(1)所示的多烯多羧酸或其酸酐或這些的鹽類(lèi)的方法，式中，n是0～5的整數(shù)，m是1或2的整數(shù)。
6．分散劑，其特征在于含有上述式(1)所示的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi)，式中，n是0～5的整數(shù)，m是1或2的整數(shù)。
7．權(quán)利要求6記載的分散劑，包含上述式(1)中m=2、n=0的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi)。
8．權(quán)利要求6記載的分散劑，包含上述式(1)中m=2、n=1的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi)。
9．權(quán)利要求6記載的分散劑，包含上述式(1)中m=2、n=2的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi)。
全文摘要
下式(1)所示的多烯多羧酸或其羧基上的衍生物或這些的鹽類(lèi),式中,n是0～5的整數(shù),m是1或2的整數(shù),但n為0時(shí)m是1。上述化合物,其羧基衍生物,及這些的鹽類(lèi),是來(lái)源于天然物質(zhì)的化合物,無(wú)論被分散物質(zhì)屬何種類(lèi),都具有優(yōu)異分散性。
文檔編號(hào)C07D207/444GK1300274SQ9980611
公開(kāi)日2001年6月20日 申請(qǐng)日期1999年3月11日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月13日
發(fā)明者春日忍, 垣內(nèi)利仁, 山西了, 岡田和樹(shù) 申請(qǐng)人:藤澤藥品工業(yè)株式會(huì)社