專利名稱：丙烯羧酸偕胺肟衍生物,其制備方法及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其制備方法及其藥物組合物。這些新的化合物有價(jià)值的藥學(xué)作用，因此，它們可以特別用于與細(xì)胞的能量缺乏相關(guān)的狀態(tài)、心臟和大腦的缺氧狀態(tài)、神經(jīng)變性疾病、自身免疫和/或病毒疾病的治療，進(jìn)一步用于中毒引起的疾病。
背景技術(shù)：
一些Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮衍生物的制備描述于Chem.Ber.，103，2330-2335(1970)，其中沒有提及其任何可能的生物作用。由上述化合物，制備5，6-二氫-4H-1，2，4-噁二嗪衍生物在Chem.Ber.，108，1911-1923(1975)中進(jìn)行了討論，其中同樣沒有提及任何生物作用。
由HU-P No.179 951知1，2，4-噁二唑啉-5-酮衍生物具有外周血管舒張、抗心絞痛和抗心律不齊作用。由HU-P No.180 708知1，2，4-噁二嗪衍生物具有外周血管舒張和降血壓、抗心律不齊、輕微的抗炎和利尿作用。但是，已知的1，2，4-噁二唑啉-5-酮和1，2，4-噁二嗪衍生物不含有任何鏈烯基取代基，即它們無(wú)法得自丙烯羧酸偕胺肟。
本發(fā)明的目的是制備具有有價(jià)值的藥學(xué)作用的新化合物。
發(fā)明概述我們發(fā)現(xiàn)上述目的可以通過涉及下式的新的丙烯羧酸偕胺肟衍生物及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物來(lái)實(shí)現(xiàn) 其中R表示C1-C20烷基、苯基，其中后者被1-3個(gè)取代基任選地取代--其中取代基是鹵原子和/或C1-C2烷基和/或C1-C2烷氧基和/或氨基和/或(C1-C4烷基)氨基和/或二(C1-C4烷基)氨基和/或(C1-C4烷?；?氨基--，此外還表示5-或6-員飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)，其中含有一個(gè)或兩個(gè)氮原子或一個(gè)硫原子作為雜原子且所述雜環(huán)基團(tuán)任選地與一個(gè)或多個(gè)苯環(huán)和/或一個(gè)或多個(gè)雜環(huán)基團(tuán)稠合，而R′表示氫原子，或R與R′一起形成C5-C7環(huán)烷基，其任選地與苯環(huán)稠合，R4和R5獨(dú)立地表示氫原子、C1-C5烷基、C1-C5烷?；虮交?，其中后者被1-3個(gè)取代基任選地取代--其中取代基是鹵原子和/或C1-C2烷基和/或C1-C2烷氧基--，或R4和R5與相鄰的氮原子一起形成5-或6-員飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)，其可以含有另一個(gè)氮原子和/或氧原子和/或硫原子作為雜原子并可以與苯環(huán)稠合，且此雜環(huán)基團(tuán)和/或此苯環(huán)可以帶有一個(gè)或兩個(gè)取代基，其中該取代基是鹵原子和/或C1-C2烷基和/或C1-C2烷氧基，R1和R2表示氫原子，而R3指氫原子、羥基或C1-C5烷氧基，或R1與R2一起形成羰基或硫羰基，其中的碳原子與比鄰R1的氧原子和比鄰R2的氮原子結(jié)合，而R3表示氫原子，鹵原子，羥基，C1-C5烷氧基，C1-C5烷硫基，C1-C20烷酰氧基，含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的C3-C22鏈烯酰氧基，甲磺酰氧基，苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，或
R2是氫原子，而R1與R3一起在比鄰R1的氧原子和比鄰R3的碳原子之間形成一個(gè)價(jià)鍵。
優(yōu)選實(shí)施方案的描述在說明書和權(quán)利要求書中，C1-C20烷基，例如，指甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、異丁基、正戊基、正己基、正庚基、正癸基、十二烷基、十六烷基、十八烷基等。
鹵原子主要指氟、氯或溴原子，優(yōu)選氯和溴原子。
C1-C2烷基是甲基或乙基，而C1-C2烷氧基是甲氧基或乙氧基。
C1-C4烷基是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基或異丁基。C1-C5烷基除上述基團(tuán)外，例如，正戊基。
(C1-C4烷基)氨基是，例如，甲基氨基、乙基氨基、異丙基氨基等。二(C1-C4烷基)氨基是，例如，二甲基氨基、二乙基氨基、甲基異丙基氨基等。
C1-C4烷?；鶅?yōu)選是，甲?；?、乙酰基、正丙?；蛘□；?。除所述所列基團(tuán)外，C1-C5烷?；部梢允?，例如，正戊?；?。
含有一個(gè)或兩個(gè)氮原子或硫原子作為雜原子的5-或6-員飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)是，例如，吡咯基、pyratolyl、咪唑基、噻吩基、吡啶基、哌啶基、嘧啶基、哌嗪基等。
任選地與苯環(huán)稠合的C5-C7環(huán)烷基是，例如，環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、二氫化茚基或四氫萘基。
除了與取代基R4和R5相鄰的氮原子外還可以含有氮原子和/或氧原子和/或硫原子作為雜原子的5-或6-員飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)，除上述雜環(huán)基團(tuán)外，可以是，例如，4-嗎啉基。
C1-C20烷酰氧基是，例如，甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、辛酰氧基、棕櫚酰氧基、硬脂酰氧基等。
C3-C22鏈烯酰氧基-般可以含有1-6個(gè)雙鍵，并優(yōu)選是，亞麻酰氧基、亞油酰氧基、二十二碳六烯酰氧基、二十碳五烯酰氧基或二十碳四烯酰氧基。
式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物及其N-氧化物的藥用酸加成鹽是與以下酸形成的酸加成鹽無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、硫酸、磷酸等，或有機(jī)酸，如乙酸、富馬酸、乳酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸等。
在式I化合物及其N-氧化物的季銨鹽衍生物中，丙烯羧酸偕胺肟的一個(gè)或多個(gè)氮原子被季銨化，即，例如，其它C1-C4烷基或苯基(C1-C4烷基)連接在所述碳原子上，因此所述碳原子變?yōu)閹д姾?。在式I化合物中存在的氮原子，特別適合的是與取代基R4和R5相鄰的一個(gè)氮原子，被季銨化。在式I中，如果R表示含有一個(gè)氮原子的雜環(huán)基團(tuán)如吡啶基，則所述雜環(huán)基團(tuán)的該氮原子也可以被季銨化。
式I化合物的N-氧化物中，一個(gè)或多個(gè)氮原子以氧化形式存在，因此，有一個(gè)氧原子也結(jié)合在所述碳原子上。存在于式I中的氮原子，特別適合的是與取代基R4和R5相鄰的，可以以N-氧化物的形式存在。在式I中，如果R表示含有一個(gè)氮原子的雜環(huán)基團(tuán)如吡啶基，所述雜環(huán)基團(tuán)的該氮原子也可以以N-氧化物的形式存在。
由于式I中存在的雙鍵，新的式I的丙烯羧酸衍生物及其N-氧化物可以以幾何異構(gòu)體的形式存在，即順式或反式異構(gòu)體或者其任何混合物。本發(fā)明包括純的幾何異構(gòu)體及其任何混合物。
除幾何異構(gòu)形式外，某些式I的化合物及其N-氧化物含有一個(gè)或多個(gè)手性碳原子，于是，這些化合物也可以以旋光異構(gòu)體的形式存在。本發(fā)明還包括純的旋光異構(gòu)體及其任何混合物。
優(yōu)選的一類本發(fā)明的化合物包括下式的丙烯羧酸偕胺肟衍生物 其中
R1和R2表示氫原子，R3表示氫原子、羥基或C1-C5烷氧基，R，R′，R4和R5定義如上，及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。
另一類本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括下式的噁二唑啉衍生物 其中R1與R2一起形成羰基或硫羰基，其中的碳原子與比鄰R1的氧原子和比鄰R2的氮原子結(jié)合，R3表示氫原子、鹵原子、羥基、C1-C5烷氧基、C1-C5烷硫基、C1-C5烷酰氧基、含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的C3-C22鏈烯酰氧基、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，X表示氧原子或硫原子，R，R′，R4和R5定義如式I，及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。
進(jìn)一步優(yōu)選的本發(fā)明的一類化合物包括下式的噁二嗪衍生物 其中R2是氫原子，而R1與R3一起在比鄰R1的氧原子和比鄰R3的碳原子之間形成一個(gè)價(jià)鍵，R、R′、R4和R5定義如式I，
及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。
式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物制備如下a)為了制備式Ia的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R1、R2和R3表示氫原子，R、R′、R4和R5定義如式I，下式的丙烯衍生物 其中R、R′、R3、R4和R5定義如上，Y表示鹵原子或式-SR6的基團(tuán)，其中R6指氫原子或C1-C4烷基，與羥胺反應(yīng)；或b)為了制備式Ia的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R1和R2表示氫原子，R3表示氫原子或羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R、R′、R3、R4和R5定義如上，X表示氧原子或硫原子，與堿金屬氫氧化物的水溶液反應(yīng)；或c)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示氫原子，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，下式的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物 其中R和R′定義如上，與下式的氨基烷基鹵化物反應(yīng)
其中Z指鹵原子，R3、R4和R5定義如上；或d)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示氫原子或羥基，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與下式的1，3-二鹵代丙烷反應(yīng) 其中Z和Z1獨(dú)立地表示鹵原子，R3定義如上，并將所得下式的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基鹵化物 其中R、R′、R3和Z定義如上，與下式的胺反應(yīng) 其中R4和R5定義如上；或e)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示羥基，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)，并將所形成的下式的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基氯 其中R和R′定義如上，與式VII的胺反應(yīng)，其中R4和R5定義如上；或f)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示羥基，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式VIII的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基氯，其中R和R′定義如上，與酸結(jié)合劑反應(yīng)，并將所形成的下式的環(huán)氧化物 其中R和R′定義如上，與式VII的胺反應(yīng)，其中R4和R5定義如上；或g)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示氫原子或羥基，X表示氧原子或硫原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式Ia的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R、R′、R3、R4和R5定義如上，與下式的碳酸衍生物反應(yīng) 其中X定義如上，Z2和Z3獨(dú)立地表示鹵原子、C1-C4烷氧基或C1-C4烷巰基；或h)為了制備式Ic的噁二嗪衍生物，其中R、R′、R4和R5定義如式I，式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R、R′、R4和R5定義如上，X表示氧原子或硫原子，R3指鹵原子、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，在水的存在下與堿金屬氫氧化物反應(yīng)；或i)為了制備式Ic的噁二嗪衍生物，其中R、R′、R4和R5定義如式I，下式的環(huán)化合物 其中R和R′定義如上，R7表示鹵原子、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，與式VII的胺反應(yīng)，其中R4和R5定義如上；或j)為了制備下式的季銨鹽衍生物 其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如式I，R8表示C1-C4烷基或苯基(C1-C4烷基)基團(tuán)，Y表示鹵原子或式R8-SO4的基團(tuán)，其中R8定義如上，式III的Δ2-1，2，4-噁唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與下式的季銨烷基鹵化物反應(yīng) 其中R3、R4、R5、R8和Y定義如上，Z表示鹵原子；或k)為了制備下式的N-氧化物 其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如式I，式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與下式的化合物反應(yīng) 其中R3、R4和R5定義如上，Z表示鹵原子；且如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與鹵化試劑反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3是鹵原子；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與C1-C20烷基酰鹵化物或含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的C3-C22烯基酰鹵化物反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3表示C1-C20烷酰氧基或C3-C22烯酰氧基；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與C1-C5烷基鹵化物反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3表示C1-C5烷氧基；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示鹵原子，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與C1-C5烷醇或C1-C5硫代烷醇的堿金屬鹽反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3指C1-C5烷氧基或C1-C5烷硫基；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與甲基磺酰基鹵化物、苯磺?；u化物或甲苯磺酰基鹵化物反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3表示甲基磺酰氧基，苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基；且如果需要，所得式I的化合物與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)得到藥用酸加成鹽，或由酸加成鹽得到游離堿，和/或用烷基化試劑將式I化合物的一個(gè)或多個(gè)氮原子季銨化，和/或式I的化合物與氧化劑反應(yīng)將其一個(gè)或多個(gè)氮原子轉(zhuǎn)變?yōu)镹-氧化物。
在本發(fā)明的方法a)中，式II的丙烯衍生物與羥胺的反應(yīng)在溶劑或溶劑混合物中用羥胺堿進(jìn)行，該堿也可以通過加入強(qiáng)堿就地從其酸加成鹽中釋放。所形成的式Ia的產(chǎn)物用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式分離，例如，通過從該反應(yīng)混合物中結(jié)晶或通過將該反應(yīng)混合物蒸發(fā)或通過沉淀其酸加成鹽。
如果使用式II的丙烯衍生物，其中Y表示鹵原子，該溶劑是無(wú)水惰性有機(jī)溶劑，例如，鹵代烴如氯仿、二氯甲烷等，烴如苯、甲苯等，或者是常用于?；磻?yīng)的任何其它溶劑如吡啶。
如果使用式II的丙烯衍生物，其中Y表示式-SR6的基團(tuán)，除上述類型的溶劑外，例如，也可以將烷醇作為有機(jī)溶劑來(lái)使用。
式II的丙烯衍生物，其中Y表示鹵原子，通常為氯原子，--實(shí)際上所述化合物是亞胺?；u化物，一般是亞胺?；?，由下式的相應(yīng)的酰胺 其中R、R′、R4和R5定義如式I，R3表示氫原子或C1-C5烷氧基，通過與鹵化試劑，一般是亞硫酰氯、三氯化磷、五氯化磷等，以文獻(xiàn)中已知的方式反應(yīng)來(lái)制備。
式II的丙烯衍生物，其中Y表示巰基，例如，可以由相應(yīng)的式XVI的酰胺與五氯化磷在有機(jī)溶劑如甲苯、二甲苯或吡啶中以文獻(xiàn)中已知的方式反應(yīng)來(lái)制備。式II的丙烯衍生物，其中Y表示烷硫基，通過式II的丙烯衍生物，其中Y指巰基，與烷基化試劑反應(yīng)來(lái)制備。
在本發(fā)明的方法b)中，通過使用Chem.Ber.，103，2330-2335(1970)的方法將噁二唑啉環(huán)打開，該方法包括在含水介質(zhì)中進(jìn)行堿水解。作為堿金屬氫氧化物，在其水溶液中一般使用氫氧化鉀或氫氧化鈉，如果需要，該溶液中也加入有機(jī)溶劑，優(yōu)選脂族醇如甲醇或乙醇。在本發(fā)明的方法中，在反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)，在短時(shí)間內(nèi)，此噁二唑啉開環(huán)，并以良好的收率得到式Ia的化合物?？梢匀绶椒╝)，以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式分離反應(yīng)產(chǎn)物。
在本發(fā)明的方法c)中，該反應(yīng)在有機(jī)溶劑中，在酸結(jié)合劑的存在下，一般在該反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)下進(jìn)行，該有機(jī)溶劑對(duì)該反應(yīng)而言是惰性的。惰性有機(jī)溶劑是，例如，烷醇如甲醇或乙醇，烴如苯、甲苯或二甲苯或其混合物。作為酸結(jié)合劑，可以使用無(wú)機(jī)或有機(jī)堿。該反應(yīng)混合物可以用常規(guī)方法處理，例如，蒸發(fā)溶劑和結(jié)晶產(chǎn)物或沉淀其酸加成鹽。
式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物可以由相應(yīng)的偕胺肟通過與碳酸衍生物反應(yīng)來(lái)制備。一些具有代表性的偕胺肟見Chem.Rews.，62，155(1962)。按照該文獻(xiàn)中描述的方法，由相應(yīng)的丙烯羧基腈通過與羥胺反應(yīng)可以制備新的偕胺肟。大多數(shù)式IV的氨基烷基鹵化物是已知化合物，它們可以購(gòu)買或可以以簡(jiǎn)單的方式通過1，3-二鹵代丙烷與式VII的胺反應(yīng)來(lái)制備。
在本發(fā)明的方法d)中，烷基化反應(yīng)——即式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物與式V的1，3-二鹵代丙烷的反應(yīng)，和氨基化反應(yīng)--即所形成的式VI的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基鹵化物與式VII的胺的反應(yīng)，都在對(duì)該反應(yīng)是惰性的有機(jī)溶劑中，在酸結(jié)合劑一般是無(wú)機(jī)堿如氫氧化鈉或碳酸鈉的存在下，一般在該反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)下進(jìn)行。在烷基化反應(yīng)中所形成的式VI的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基鹵化物或者結(jié)晶，或者不經(jīng)結(jié)晶在蒸發(fā)后用于胺化反應(yīng)。所形成的式Ib的反應(yīng)產(chǎn)物以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式用上述任何方法進(jìn)行分離。惰性有機(jī)溶劑可以是烴或鹵代脂族或芳族烴如氯仿，烷醇如甲醇或乙醇，酮如丙酮或所述溶劑的混合物。
在本發(fā)明方法e)中，式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物環(huán)氧氯丙烷的反應(yīng)在惰性溶劑中或者在不存在任何溶劑的情況下，一般在該反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)下進(jìn)行，優(yōu)選環(huán)氧氯丙烷過量。惰性溶劑可以是，例如，烴，醚如二噁烷、四氫呋喃等。堿如氫氧化鈉、碳酸鈉等用作催化劑。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，蒸發(fā)溶劑并將該殘余物結(jié)晶。所形成的式VIII的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基氯與式VII的胺以方法d)的胺化反應(yīng)中所描述的類似方式反應(yīng)。所形成的式Ib的反應(yīng)產(chǎn)物以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式用所述任何方法進(jìn)行分離。
在本發(fā)明方法f)中，酸結(jié)合劑是，例如，堿金屬碳酸鹽如碳酸鈉、碳酸鉀等，或堿金屬氫氧化物如氫氧化鈉、氫氧化鉀等。為了制備式IX的環(huán)氧化物，該反應(yīng)在惰性有機(jī)溶劑中，一般在該反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)下進(jìn)行。作為惰性溶劑，使用，例如，烴，丙酮，醚如四氫呋喃或二噁烷，鹵代脂族或芳族烴。將反應(yīng)混合物過濾，蒸發(fā)濾液，并將所形成的式IX的環(huán)氧化物結(jié)晶，再以方法d)中胺化反應(yīng)方式與式VII的胺反應(yīng)，該優(yōu)選優(yōu)選在烷醇中進(jìn)行。作為可以選擇的步驟，不分離式IX的環(huán)氧化物，而是將式VII的胺直接加入到已制備了該環(huán)氧化物的反應(yīng)混合物中，然后將此反應(yīng)混合物進(jìn)一步加熱。所形成的式Ib的反應(yīng)產(chǎn)物以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式用所述任何方法進(jìn)行分離。
在本發(fā)明方法g)中，式X的任何碳酸或硫代碳酸衍生物可以用于該環(huán)的環(huán)合，在式Ia的該部分具有式-C(＝N-OH)-NH-的情況下，該試劑能夠在羥基的氧原子和氨基的氮原子之間分別形成羰基或硫羰基。適宜的化合物包括碳酸和硫代碳酸鹵化物如光氣和硫光氣，鹵化物酯如氯甲酸乙酯或氯代硫代甲酸烷基酯，或酯如碳酸二烷基酯，單、二和三硫代碳酸酯，黃原酸酯等。惰性有機(jī)溶劑用于該環(huán)合反應(yīng)，但是，該反應(yīng)也可以在不存在任何溶劑的條件下進(jìn)行。將該反應(yīng)混合物冷卻或加熱，一般來(lái)說該環(huán)合反應(yīng)在反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)下進(jìn)行。所形成的式Ib的反應(yīng)產(chǎn)物以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式用所述任何方法進(jìn)行分離。
如果式X的碳酸，其中Z2和Z3之一或都表示鹵原子，用于該反應(yīng)，任何將適宜的烴、鹵代脂族或芳族烴或醚用作惰性溶劑。如果Z2和Z3都表示烷氧基或烷巰基，則除上述的之外惰性有機(jī)溶劑也可以是烷醇。
在本發(fā)明的方法h)中，實(shí)際上，噁二唑啉環(huán)轉(zhuǎn)變?yōu)閲f二嗪環(huán)。為此，使用Chem.Ber.，108，1911-1923(1975)的方法。一般來(lái)說，氫氧化鈉或氫氧化鉀用作堿金屬氫氧化物。該反應(yīng)在有機(jī)溶劑如烷醇和堿金屬氫氧化物水溶液的混合物中，在該反應(yīng)混合物的沸點(diǎn)下進(jìn)行。所形成的式Ic的反應(yīng)產(chǎn)物以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式用所述任何方法進(jìn)行分離。
在本發(fā)明的方法i)中，該反應(yīng)在惰性有機(jī)溶劑或若干此類溶劑的混合物中，在存在或不存在酸結(jié)合劑的條件下進(jìn)行。惰性有機(jī)溶劑是，例如，烴，鹵代脂族或芳族烴，醚或烷醇，優(yōu)選丁醇。該反應(yīng)也可以在不存在任何有機(jī)溶劑的條件下進(jìn)行，在此情況下過量的式VII的胺可以用作溶劑。所形成的式Ic的反應(yīng)產(chǎn)物以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式用所述任何方法進(jìn)行分離。
在本發(fā)明的方法j)和k)中，該方法類似于方法c)所述。式XIII的季銨烷基鹵化物通過將相應(yīng)的式IV的氨基烷基鹵化物季銨化來(lái)制備。式XV的化合物可以由相應(yīng)的式IV的氨基烷基鹵化物與氧化劑反應(yīng)來(lái)制備。
式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示羥基，可以通過與鹵化試劑反應(yīng)，轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的式Ib的化合物，其中R3表示鹵原子。優(yōu)選亞硫酰氯、三氯化磷或五氯化磷用作鹵化試劑，而該鹵化反應(yīng)在類似反應(yīng)中所常用的有機(jī)溶劑中進(jìn)行，或者在不存在任何溶劑的情況下進(jìn)行，例如，在過量的鹵化試劑中。鹵化反應(yīng)后，用常用的方法處理該反應(yīng)混合物。
式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示羥基，可以與C1-C20烷基羧酸或C3-C22烯基羧酸的活性?；苌稃u化物、酸酐、疊氮化物等，或者與甲基磺?；u化物、苯磺?；u化物或甲苯磺?；u化物，在惰性有機(jī)溶劑優(yōu)選芳烴或鹵代芳烴或脂族烴的存在下，在存在或不存在酸結(jié)合劑的條件下反應(yīng)。所形成的相應(yīng)的式Ib的反應(yīng)產(chǎn)物通過上述常規(guī)方法分離。
式Ib的化合物，其中R3表示羥基，可以以類似的方式與C1-C5烷基鹵化物反應(yīng)。在此情況下，該化合物的一個(gè)或多個(gè)氮原子可以同時(shí)被季銨化。
式Ib的化合物，其中R3表示鹵原子，優(yōu)選氯原子，與烷醇或硫代烷醇的堿金屬鹽的反應(yīng)，可以在上述反應(yīng)條件下進(jìn)行。
如果需要，式I的化合物可以轉(zhuǎn)變?yōu)樗幱名}或者從其酸加成鹽中游離出。在成鹽過程中，如果使用了旋光活性的有機(jī)酸，例如，樟腦酸、樟腦磺酸、酒石酸或酒石酸衍生物，可能能夠分離具有手性中心的化合物的立體異構(gòu)體。在此情況下，該反應(yīng)以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式，通過將與旋光活性有機(jī)酸形成的酸加成鹽分級(jí)結(jié)晶來(lái)進(jìn)行。
如果需要，式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物的一個(gè)或多個(gè)氮原子被季銨化。為此，式I的化合物與式R8-Y的烷基化試劑反應(yīng)，其中R8表示C1-C4烷基或苯基(C1-C4烷基)，Y表示鹵原子，得到式XII的季銨鹽衍生物，其中R8和Y定義如上。此季銨化反應(yīng)也可以用式(R8)2SO4的硫酸二烷基酯進(jìn)行，其中R8定義如上。在后種情況下，得到了式XII的季銨鹽衍生物，其中Y指式R8-SO4基團(tuán)。該季銨化反應(yīng)在惰性有機(jī)溶劑中或在不存在任何溶劑的情況下進(jìn)行。
或者，式I化合物的其它氮原子或另外的氮原子也可以季銨化。在式I中，如果R表示含氮原子的雜環(huán)基團(tuán)如吡啶基，此吡啶基的氮原子可以季銨化，即該氮原子也可以季銨化。
當(dāng)式I的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)镹-氧化物時(shí)，一般氧化連接取代基R4和R5的氮原子。在此情況下，一般用過氧化氫，優(yōu)選在含烷醇如甲醇的溶液中，適合地在室溫下進(jìn)行氧化反應(yīng)。在式I中，如果R表示含氮原子的雜環(huán)基團(tuán)如吡啶基，吡啶基的該氮原子可以同時(shí)或者代替上述氮原子用氧化劑轉(zhuǎn)變?yōu)镹-氧化物。在此情況下，氧化劑優(yōu)選是過酸，例如3-氯-過苯甲酸，而該氧化反應(yīng)在惰性有機(jī)溶劑，一般在芳烴如苯或甲苯中，適合地在室溫下進(jìn)行。
當(dāng)然，式I化合物的N-氧化物也可以以本領(lǐng)域已知的方式轉(zhuǎn)變?yōu)樗幱盟峒映甥}或其季銨鹽衍生物。
本發(fā)明化合物的藥學(xué)作用通過以下試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。
PARP抑制的檢測(cè)已知釋放活性氧(ROS)，例如，氫氧基、過氧化物、過氧亞硝酸鹽、過氧化氫形式在肝組織中源源不斷[Richter，C.，F(xiàn)EBS Lett.，241，1-5(1988)]且在低含量范圍內(nèi)它們?cè)诳刂浦匾纳磉^程中起一定作用[Beck，K.F.等，J.Exp.Biol.，202，645-53(1999)；McDonald，L.J.and Murad，F(xiàn).，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，211，1-6(1966)](如血管擴(kuò)張、血小板凝集、白細(xì)胞附著)。在急、慢性炎癥中釋放活性氧的濃度明顯較高，例如，在大多數(shù)自身免疫性疾病中[Taraza，C.等，Rom.J.Intern.Med.，35，89-98(1997)]，在局部缺血后心力衰竭、腦局部缺血(中風(fēng))的情況下[Brain Pathology，9，119-131(1999)]。ROS的來(lái)源包括正常組織細(xì)胞，部分由于炎性組織中存在的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，部分由于炎性細(xì)胞因子的誘導(dǎo)作用。
除了其它以外，釋放活性氧破壞DNA。DNA的損壞在細(xì)胞中引起復(fù)雜的防御和修復(fù)過程。此過程的一個(gè)重要因素是聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶(PARP)的激活。PARP是核排列的酶，其大量存在于幾乎所有細(xì)胞中，并促進(jìn)腺苷二磷酸核糖單元由煙酸腺嘌呤二核苷酸(NAD)向蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，并構(gòu)建聚(腺苷二磷酸核糖)鏈。該酶的主要底物包括其本身[Gonzalez，R.等，Mol.Cell.Biochem.，138，33-37(1994)]、核蛋白、組蛋白、拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II、轉(zhuǎn)錄因子。在DNA鏈一處斷裂的情況下，PARP酶的活性由某種因子提高了約500倍[Menissier deMurcia，J.等，J.Mol.Biol.，210，229-233(1989)]。由于極度高的DNA破壞造成的PARP酶激活引起NAD濃度極度降低。結(jié)果，細(xì)胞中腺苷三磷酸(ATP)的合成降低，同時(shí)，由于細(xì)胞試圖通過使用ATP由腺苷二磷酸核糖和煙酰胺來(lái)恢復(fù)NAD水平，ATP的利用越來(lái)越高。這些生化過程破壞了在一些疾病如自身免疫性疾病臨床表現(xiàn)[Szab6，C.等，Trends Pharmacol.Sci.，19，287-98(1998)]、心臟和腦的缺血狀態(tài)及神經(jīng)變性疾病的治療中的重要物質(zhì)。可以通過抑制PARP酶、降低細(xì)胞中煙酰胺和腺苷二磷酸核糖水平及抑制NAD合成用腺苷三磷酸的消耗，消除NAD異化作用。
體外對(duì)分離的酶的PARP抑制的檢測(cè)按照Shah，G.M.[Anal.Biochem.，227，1-13(1995)]的方法，從大鼠肝臟中分離聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶。在130μl的反應(yīng)混合物中檢測(cè)PARP活性，該反應(yīng)混合物組成如下100mM的tris-HCl緩沖液，pH8.0，10mM的MgCl2，10％甘油，1.5mM的DTT，100μg的(32P)或(3H)NAD+，10μg的活化DNA，10μg的組蛋白。[Tris-HCl是三(羥基甲基)氨基甲烷鹽酸鹽]。孵育10分鐘后，用8％高氯酸停止反應(yīng)，并通過離心(10分鐘，10.000g)。將沉淀物用8％高氯酸洗滌3次，并用閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)結(jié)合到蛋白上的放射性。結(jié)果見表I。
表I
由四組平行的檢測(cè)得到上述數(shù)據(jù)。
從表I中可以看出部分被測(cè)化合物是非常好的PARP抑制劑(I0.5＜10mg/l)。大部分被測(cè)化合物可以視為良好的PARP抑制劑(I0.5＝10-28mg/l)。
式I的化合物對(duì)局部缺血性心力衰竭和再灌注性心律不齊的作用大多數(shù)情況下，供給性疾病中發(fā)生心肌損傷和心肌細(xì)胞死亡。供給性疾病最普通的形式是缺氧。進(jìn)行性心肌損傷是心肌局部缺血，它可能由于急性低氧癥/缺氧癥、冠狀動(dòng)脈閉塞、痙攣或慢性冠狀動(dòng)脈疾病而形成。急性心肌梗塞的局部缺血部分，接著是過度的血流相，即所謂的再灌注相?？赡馨l(fā)生再灌注的致命后果心律不齊(包括室性心動(dòng)過速和纖)。這些是再灌注損傷的第一個(gè)表現(xiàn)。通過給藥來(lái)防止再灌注心肌紊亂，是要預(yù)防梗塞后早期的致命危險(xiǎn)。
在雄性SPRD大鼠(可接受的體重范圍300-350g)中進(jìn)行試驗(yàn)。通過使用戊巴比妥[5-乙基-5-(1-甲基丁基)-2，4，6-(1H，3H，5H)-嘧啶三酮](60mg/kg腹膜內(nèi))麻醉動(dòng)物，并保留自主呼吸。氣管切開術(shù)后插入氣管插管用呼吸器(Kutesz，Hungarian Academy of Sciences制造)幫助動(dòng)物呼吸?？刂艵CGII的標(biāo)準(zhǔn)電極。給右股動(dòng)脈進(jìn)行插管并連接壓力傳感器(BPR-01，Experimetria，Hungary)和前置放大器。通過動(dòng)脈血壓的搏動(dòng)信號(hào)啟動(dòng)脈力血流計(jì)(HG-M，Experimetria，Hungary)。給表面頸靜脈插管以進(jìn)行給藥。進(jìn)行胸廓切開術(shù)后，將一根絲線(編成辮，外套4-0)置于左前冠狀(LAD)動(dòng)脈下。幾分鐘的穩(wěn)定期過后，使LAD動(dòng)脈閉塞5分鐘，接著再灌注10分鐘。開始時(shí)的正常狀態(tài)下和上述階段中記錄ECG。由ECG數(shù)據(jù)，以秒為單位測(cè)定室性心動(dòng)過速和纖顫的時(shí)間范圍。此外，記錄接受處理的動(dòng)物組中的存活率。
所得結(jié)果表明本發(fā)明的化合物適于預(yù)防再灌注引起的心律不齊。例如，用實(shí)施例2處理的動(dòng)物在再灌注后與對(duì)照組相比顯示了超過50％的存活時(shí)間。
在大腦局部缺血中檢測(cè)式I的化合物人局部缺血發(fā)作后，海馬CA1區(qū)的錐體細(xì)胞細(xì)胞大部分被破壞，而該區(qū)(CA2，CA3)的其它細(xì)胞并不如此敏感[Crain，B.J.等在蒙古沙土鼠短暫前腦局部缺血后選擇性的神經(jīng)元死亡，銀浸滲研究，Neuroscience，27，402(1988)]。按照一些作者的觀點(diǎn)，記憶力的失調(diào)與海馬細(xì)胞的死亡有關(guān)[Walker，A.E.等中風(fēng)NINCDS，NIH的國(guó)內(nèi)調(diào)查臨床發(fā)現(xiàn)，Stroke.12，Suppl.，1，1-44(1981)]。哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)局部缺血性損傷不是同等敏感的。由于其解剖學(xué)上的特點(diǎn)，蒙古沙土鼠(Meriones unguiculatus)更適于檢測(cè)腦局部缺血，因?yàn)榇祟愔?0％的基底接合系統(tǒng)(Circulus Willisi)中斷，因此，在頸動(dòng)脈和脊椎動(dòng)脈系統(tǒng)之間沒有聯(lián)系。因此，給頸動(dòng)脈加壓可以誘發(fā)廣泛的前腦局部缺血。
本試驗(yàn)的目的是確定式I的新化合物是否在大腦局部缺血中具有保護(hù)作用。該試驗(yàn)在蒙古沙土鼠中進(jìn)行。將這些動(dòng)物用2％的三氟溴氯乙烷[2-溴-2-氯-1，1，1-三氟-乙烷]、68％的氧化氮和30％的氧氣的混合物麻醉。在麻醉中，在兩側(cè)給頸動(dòng)脈施壓5分鐘。神經(jīng)元沒有立即破壞，因此，施壓后有4天的再灌注(遲發(fā)型細(xì)胞死亡)。在如此處理4天后，在CA1錐體區(qū)80-90％的細(xì)胞被破壞。
為了確定學(xué)習(xí)和記憶能力以及運(yùn)動(dòng)過強(qiáng)，在Y-迷宮中檢測(cè)動(dòng)物。
用組織切片研究CA1區(qū)的細(xì)胞死亡。用緩沖的甲醛灌注動(dòng)物，取出大腦并在甲醛中固定。染色后對(duì)大腦切片被破壞的CA1區(qū)的生長(zhǎng)進(jìn)行研究。
在這些試驗(yàn)中使用下列物質(zhì)GYKI-52466(參照物)，劑量為40mg/kg腹膜內(nèi)，局部缺血后給藥30分鐘；尼莫地平[1，4-二氫-2，6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3，5-吡啶二甲酸2-甲氧基乙基1-甲基乙基酯](參照物)，劑量為10mg/kg腹膜內(nèi)，局部缺血后給藥5和30分鐘；式I的新的化合物，劑量為25mg/kg腹膜內(nèi)，局部缺血后給藥5和30分鐘。
試驗(yàn)組-局部缺血對(duì)照，-局部缺血后接受參照物治療，-局部缺血后接受被測(cè)物質(zhì)治療，-假的操作。
在該試驗(yàn)中，能夠確定式I的化合物在大腦局部缺血中具有保護(hù)作用。
式I化合物抗自身免疫性疾病的作用自身免疫性疾病是其中機(jī)體啟動(dòng)對(duì)抗其正常構(gòu)成部分的免疫反應(yīng)的疾病[Ring，G.H.等，Semin.Nephrol.，19，25-33(1999)；Theofilopoulos，A.N.，Ann.N.Y.Acad.Sci.，841，225-235(1998)]。不同的自身免疫性疾病在啟動(dòng)該過程的抗原方面彼此不同，但是，在進(jìn)行性自身免疫性過程的細(xì)胞組織破壞的機(jī)理方面存在極大的相似性[Szabó，C.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95，3867-3872(1998)]。首先，自身免疫性疾病包括如下-激素性疾病胰島素依賴型糖尿病(IDDM)；-肝病肝炎；-皮膚病大泡性天皰瘡樣狼瘡、普通天皰瘡、牛皮癬、硬皮病、白癜風(fēng)；-成血器官的疾病肉狀瘤病；-關(guān)節(jié)病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；-血管病結(jié)節(jié)性脈管炎、無(wú)脈病、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、強(qiáng)直性脊椎炎；-腸疾病潰瘍性結(jié)腸炎；-肌肉和神經(jīng)系統(tǒng)的疾病多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病。
在所列出的自身免疫性疾病中，用小鼠研究了對(duì)鏈脲霉素引起的I型糖尿病的預(yù)防。
體內(nèi)碳水化合物代謝的主要調(diào)節(jié)劑胰島素，由胰腺的胰島細(xì)胞產(chǎn)生并轉(zhuǎn)運(yùn)到血流中。β細(xì)胞的損傷或破壞引起胰島素產(chǎn)生的降低或停止，這導(dǎo)致I型糖尿病的發(fā)展。β細(xì)胞對(duì)ROS和氧化氮的毒性作用特別敏感。對(duì)氧化氮引起的DNA破壞的研究帶來(lái)了一種假設(shè)，即PARP酶的過度激活及NAD水平的降低造成β細(xì)胞的死亡[Heller，B.等，J.Biol.Chem.，270，11176-180(1995)]。根據(jù)類似的機(jī)理，鏈脲霉素(SZ)[2-脫氧-2-(3-甲基-3-亞硝基脲基)-D-吡喃葡萄糖]破壞產(chǎn)生胰島素的β細(xì)胞，因此，當(dāng)用于動(dòng)物試驗(yàn)中時(shí)提供了I型糖尿病的模型[Yamamoto，H.等，Nature，294，284-286(1981)]。鏈脲霉素通過烷基化作用和氧化氮的形成破壞DNA，如上所述氧化氮的引起PARP酶的激活。檢測(cè)了通過單劑量的式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物是否可以防止單劑量的鏈脲霉素的升高血糖的作用。用CD-1雄性小鼠進(jìn)行試驗(yàn)。將動(dòng)物分為3組，每組8只動(dòng)物。第一組腹膜內(nèi)接受160mg/kg的鏈脲霉素(Sigma)，第二組接受160mg/kg的鏈脲霉素并口服200mg/kg的式I的化合物，第三組作為對(duì)照。在處理后第3天檢測(cè)血糖濃度。然后，處死動(dòng)物，并采集血清樣本檢測(cè)胰島素。
發(fā)現(xiàn)被測(cè)的本發(fā)明化合物顯著降低鏈脲霉素升高的血糖水平。
對(duì)胰島素抗性的作用II型糖尿病不是胰島素依賴性的。此類疾病的病理本質(zhì)上是外周組織，特別是紋狀(骨骼)肌和脂肪組織對(duì)胰島素的敏感性的降低或喪失。自然，此不敏感性不能通過胰島β細(xì)胞的過度產(chǎn)生(過多分泌)得到補(bǔ)償。重要的是強(qiáng)調(diào)胰島素抗性，即使沒有腎糖尿病的發(fā)作，導(dǎo)致若干心血管調(diào)節(jié)紊亂。因此，胰島素抗性是冠狀血管疾病的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。由于胰島素抗性的中樞病生理重要性，目標(biāo)是增加胰島素敏感性的藥物治療的可能性在藥物開發(fā)中是非常重要的。在臨床上僅有的真正的胰島素敏化劑藥物是所謂的噻唑烷二酮類。它們的毒性(主要是肝毒性)是其應(yīng)用的限制因素。胰島素敏化劑降低血糖、甘油三酯和胰島素，其機(jī)理是靶組織(肝、骨骼肌、脂肪細(xì)胞)中胰島素敏感性增加[Colca，J.R.和Morton，D.R.抗高血糖的噻唑烷Ciglitazone及其類似物，見《新的抗糖尿病藥物》，Bailey，C.J.和Flatt，P.R.編輯，Smith-Gordon，New York，1990，pp.255-261]。
調(diào)查了用本發(fā)明的化合物處理是否影響正常的和血膽固醇過多的清醒兔子的胰島素敏感性。成年雄性白色新西蘭兔重3-3.5kg，在動(dòng)物室中關(guān)養(yǎng)(每天12小時(shí)光照/黑暗，溫度22-25℃，濕度50-70％)，用商購(gòu)的實(shí)驗(yàn)室飼料喂養(yǎng)，并在整個(gè)過程中自由地飲水。2周的適應(yīng)期后開始試驗(yàn)。將兔子隨機(jī)分為兩組。給一半的動(dòng)物繼續(xù)喂正常的兔飼料，而給第二組動(dòng)物喂8周富含1.5％膽固醇的飼料。將個(gè)大組分為4個(gè)組-不處理組，-用本發(fā)明化合物處理組，靜脈內(nèi)10mg/kg，每天兩次，共4天，-用7-硝基吲唑作為NOS抑制劑處理組在5分鐘內(nèi)使用5mg/kg的7-硝基吲唑，在此之前以5分鐘的輸液間隔使用胰島素，-如上所述用7-硝基吲唑和本發(fā)明的化合物處理組。
麻醉動(dòng)物并將聚乙烯插管插入到右頸靜脈和左頸動(dòng)脈的兩個(gè)主枝中。將這些插管通過頸后伸出，并充入含肝素的生理鹽水。
對(duì)分離血管的研究由兔子的胸主動(dòng)脈和頸動(dòng)脈，制備4mm長(zhǎng)的血管環(huán)，并水平置于兩個(gè)小的L形玻璃鉤上，其中一個(gè)連接力量傳感器(SG-02，Experimetria，London，UK)以檢測(cè)和記錄等距張力。在充滿Krebs溶液的結(jié)構(gòu)室(5ml)中進(jìn)行這些試驗(yàn)，該溶液中充入了95％的氧氣和5％的二氧化碳。將起始靜止張力分別設(shè)為主動(dòng)脈環(huán)20mN，頸動(dòng)脈環(huán)10mN。平衡時(shí)間總計(jì)為60分鐘。接著，以累積的方式讓血管環(huán)接觸濃度逐步升高的去甲腎上腺素。最大的反應(yīng)后，從該結(jié)構(gòu)室中清洗去甲腎上腺素直到張力回到原來(lái)的基線水平。為了研究血管對(duì)乙酰膽堿的反應(yīng)性，用去甲腎上腺素的EC50濃度預(yù)處理這些環(huán)。獲得適當(dāng)?shù)氖湛s后，讓樣本接觸濃度逐步升高的乙酰膽堿氯化物。
在第二套血管反應(yīng)性研究中，給獨(dú)立分組的頸動(dòng)脈環(huán)進(jìn)行電場(chǎng)刺激。起始張力設(shè)定為10mN后，讓這些環(huán)平衡1小時(shí)。然后，研究對(duì)電場(chǎng)刺激(100刺激，20V，0.1ms和20Hz)的兩個(gè)連續(xù)脈沖的收縮反應(yīng)。然后，在1μM的阿托品和4μM的胍乙啶(“非腎上腺素能非膽堿能＝NANC溶液)的存在下，重復(fù)該場(chǎng)刺激方案。用帶有完整內(nèi)皮的環(huán)和內(nèi)皮層被輕輕除去的環(huán)完成整個(gè)試驗(yàn)。
按照Szilvássy[Szilvássy，Z.等，Coron art.Dis.，4，443/452(1993)；Am.J.Physiol.，266，H2033-H2041(1994)]測(cè)定組織環(huán)GMP(鳥苷一磷酸)含量用預(yù)冷的Wollenberger夾子將肌肉環(huán)立即冷凍并在液氮中粉碎。然后，將這些樣本在比樣本的重量高出10倍的6％(v/v)三氯乙酸中在預(yù)先保持在-70℃下的研缽中勻化。解凍后，在4℃下處理這些樣本。用Janetzki K-24離心機(jī)(Leipzig，Germany)以15000g離心沉積10分鐘，接著用5ml以水飽和的乙醚在Wortex萃取器中將上清夜萃取5分鐘。除去乙醚餾分，并再重復(fù)5次萃取。然后，在氮?dú)庀聦⑦@些樣本蒸發(fā)，用Amersham放免檢測(cè)試劑盒檢測(cè)環(huán)GMP含量。數(shù)值表示為pmol/mg濕組織重。
高胰島素血的優(yōu)糖血(euglycaemic)夾研究以恒定的速度(13mU/kg)通過一個(gè)靜脈插管在120分鐘內(nèi)輸入人常規(guī)胰島素。這樣的胰島素輸液速度在穩(wěn)定狀態(tài)中產(chǎn)生100±5μM/ml的血漿胰島素免疫活性。以10分鐘的間隔從動(dòng)脈插管中采集血樣(0.3ml)以檢測(cè)血糖濃度。通過第二個(gè)靜脈插管進(jìn)行變速葡萄糖輸液將血糖濃度維持恒定(5.5±0.5mmol/l)。當(dāng)血糖穩(wěn)定至少30分鐘時(shí)，我們將該狀態(tài)定義為穩(wěn)定狀態(tài)，以10分鐘的間隔再采集血樣(0.5ml)以檢測(cè)血漿胰島素。在穩(wěn)定狀態(tài)中，用葡萄糖輸液的速度來(lái)描述胰島素敏感性的特性。
從這些檢測(cè)中獲得了如下結(jié)果1.在正常兔子的血管中，1μM的本發(fā)明化合物不改變對(duì)累積增加的乙酰膽堿濃度(1nm-10μM)帶來(lái)的舒張反應(yīng)。
2.在試驗(yàn)性膽固醇過多血癥中，在本發(fā)明化合物的存在下乙酰膽堿帶來(lái)的血管舒張明顯變小。
3.場(chǎng)刺激引起孵育在Krebs溶液中的頸動(dòng)脈張力的升高。但是，在NANC溶液中，在所用的對(duì)刺激方案的反應(yīng)中，觀察到舒張反應(yīng)。這兩種反應(yīng)都不受本發(fā)明化合物的影響。
4.除去內(nèi)皮顯著增加了場(chǎng)刺激造成的收縮并降低了NANC舒張。本發(fā)明的化合物減輕了場(chǎng)刺激引起的收縮并增加了無(wú)內(nèi)皮血管環(huán)中NANC舒張。
5.與在正常兔樣本中所見的相比較，在高膽固醇血癥動(dòng)物的血管環(huán)中，場(chǎng)刺激引起的收縮升高，而NANC舒張反應(yīng)減弱。不論內(nèi)皮是否存在，在高膽固醇血癥兔子的環(huán)中，本發(fā)明的化合物顯著降低了電刺激誘發(fā)的收縮并放大了NANC舒張反應(yīng)。
6.與正常環(huán)相比較，高膽固醇血癥兔子的環(huán)中基線環(huán)GMP濃度顯著降低。用1μM的本發(fā)明化合物孵育幾乎校正了此降低。但是，在正常環(huán)中被測(cè)化合物對(duì)靜息環(huán)GMP含量沒有作用。場(chǎng)刺激造成正常動(dòng)物的樣本中環(huán)GMP濃度升高。在高膽固醇血癥兔子的環(huán)中，所用的該刺激方案不能引起環(huán)GMP的任何升高。本發(fā)明化合物對(duì)場(chǎng)刺激引起的正常環(huán)中的組織環(huán)GMP含量升高沒有作用，但是在高膽固醇血癥兔子的樣本中觀察到了環(huán)GMP的巨大升高。
7.在清醒兔子中，接觸富含膽固醇的飲食導(dǎo)致胰島素敏感性的顯著降低。用本發(fā)明化合物處理4天，幾乎恢復(fù)了高膽固醇血癥動(dòng)物的胰島素敏感性。但是，本發(fā)明的化合物對(duì)正常動(dòng)物的胰島素敏感性沒有作用。
8.神經(jīng)系統(tǒng)氧化氮合酶抑制劑7-硝基吲唑，本身在正常動(dòng)物中造成了胰島素抗性。本發(fā)明的化合物不能改變此胰島素抗性狀態(tài)。此外，在試驗(yàn)性高膽固醇血癥中，7-硝基吲唑阻斷本發(fā)明化合物的胰島素抗性改善作用。
結(jié)論給出的這些結(jié)果表明本發(fā)明的化合物在與清醒兔子的試驗(yàn)性高膽固醇血癥有關(guān)的胰島素抗性狀態(tài)中增加胰島素的降血糖作用。這些結(jié)果還提供了此胰島素敏化作用與氧化氮能(nitrergic)路徑強(qiáng)烈相關(guān)的證據(jù)，最近已表明對(duì)其的影響在調(diào)節(jié)胰島素敏感性中起主要作用[Shankar，R.R.等，Diabetes，49，684-687(2000)]。外周胰島素敏感性的肝臟神經(jīng)激素調(diào)節(jié)可以描述如下[Lautt，W.W.，Can.J.Physiol.，77，553-562(1999)]-胰島素的血液水平存在一種飯后升高。
-在對(duì)此胰島素水平升高的反應(yīng)中，肝臟副交感神經(jīng)反射被激活。
-此反射引起乙酰膽堿的釋放，乙酰膽堿激活毒蕈鹼能受體。
-毒蕈堿能激活導(dǎo)致氧化氮(NO)的釋放。
-只在進(jìn)食狀態(tài)，氧化氮引起肝胰島素敏化因子(HISS)的釋放，該因子具有胰島素胰島素協(xié)同或胰島素樣作用。
-HISS增加骨骼肌的葡萄糖攝取。此HISS機(jī)制對(duì)氧化氮合成的阻斷敏感，并可以被外源性NO-供體激活。HISS機(jī)制適合與肝臟感覺纖維的功能緊密相關(guān)。血漿胰島素水平的飯后增加激活了肝臟感覺神經(jīng)纖維的氧化氮能亞群，其引起從相鄰的纖維中釋放感覺神經(jīng)遞質(zhì)。這些感覺神經(jīng)遞質(zhì)通過其激素樣特性到達(dá)血流并升高組織中的胰島素敏感性。
就在最近的研究中，Steppan等著眼于肥胖和胰島素抗性之間的被人忽視的聯(lián)系[Steppan，C.M.等，Nature，409，307-312(2001)]。簡(jiǎn)言之，脂肪細(xì)胞產(chǎn)生產(chǎn)生一種稱為抵抗素的激素。抵抗素增加靶組織(脂肪和骨骼肌)對(duì)胰島素的降血糖作用的敏感性。因此，對(duì)抵抗素分泌的藥理學(xué)抑制可能是治療非胰島素依賴性糖尿病和胰島素抗性綜合征中藥理學(xué)作用的新機(jī)制。在目前已知的藥物中，噻唑烷二酮類的一些成員可以通過脂肪細(xì)胞中的過氧化物酶體增殖激活肌γ核受體可以抑制胰島素分泌。
式I的化合物對(duì)胰島素敏感性具有作用，它們能夠通過氧化氮能機(jī)制和感覺神經(jīng)遞質(zhì)緩解胰島素抗性。胰島素敏感性的正?；诎l(fā)病率和死亡率高的疾病如II型糖尿病、高血壓、冠心病、肥胖和一些內(nèi)分泌疾病中具有關(guān)鍵作用。
本發(fā)明化合物預(yù)防毒性作用的用途1)這些化合物對(duì)小鼠內(nèi)毒素引起的死亡的作用在集中看護(hù)的病房中，膿毒性休克是最常見的死因。革蘭氏陰性細(xì)菌引起的感染導(dǎo)致血壓過低，導(dǎo)致一些器官功能不全，并最后導(dǎo)致機(jī)體的虛脫。通過給試驗(yàn)動(dòng)物注射脂多糖(LPS)——一種細(xì)菌膜組分，產(chǎn)生了休克樣狀態(tài)并最后導(dǎo)致死亡。LPS激活NF-κB/Rel類轉(zhuǎn)錄因子，其調(diào)節(jié)若干參與休克的病理機(jī)制的遞質(zhì)產(chǎn)生的調(diào)節(jié)(如TNF-α、白細(xì)胞介素、NO合酶)[Oliver，F(xiàn).J.等對(duì)在聚(ADP核糖)聚合酶-1缺陷小鼠中作為缺陷NF-κB激活結(jié)果的內(nèi)毒素休克的抵抗性，EMBO J.，18(16)，4446-4454(1999)]。PARP-1基因與NF-κB功能上有聯(lián)系，因此，在PARP缺乏中，也不進(jìn)行依賴于NF-κB的轉(zhuǎn)錄，在內(nèi)毒素休克中炎性介體的釋放也變得不能充分調(diào)節(jié)。該試驗(yàn)的目的是確定是否可以通過式I的化合物抑制PARP-1來(lái)防止內(nèi)毒素引起的死亡。
在這些試驗(yàn)中，使用C57BL/6小鼠(Charles River BreedingLtd.)。在試驗(yàn)中，所用LPS的劑量和類型與上述Oliver，F(xiàn).J.的文摘所述相同得自大腸桿菌0111B4(Sigma)的脂多糖。在試驗(yàn)中，還使用3-氨基-苯甲酰胺(Sigma)。至少跟蹤觀察兩次24小時(shí)存活率。在用LPS處理后1和6小時(shí)，給動(dòng)物口服式I的化合物。
發(fā)現(xiàn)被測(cè)的式I化合物顯著降低了內(nèi)毒素造成的死亡。
2)化合物對(duì)乙酰氨基酚(醋氨酚)引起的肝毒性的作用已知多種非甾類抗風(fēng)濕藥[Peters，M.等，Clin.Inves.，71，875-881(1993)]和止痛藥具有顯著的肝毒性[Krger，H.等，Gen.Pharmac.，27，167-170(1996)]。大劑量對(duì)乙酰氨基酚引起肝臟和腎臟機(jī)能不全[Meredeth，T.J.等，Arch.Inter.Med.，141，397-400(1981)]。最近明顯意識(shí)到聚(ADP核糖)聚合酶抑制劑消除對(duì)乙酰氨基酚引起的肝損傷[Krger，H.等，Gen.Pharmac.，27，167-170(1996)]。從文獻(xiàn)中得知對(duì)乙酰氨基酚是細(xì)胞色素P-450的誘導(dǎo)劑。對(duì)乙酰氨基酚對(duì)細(xì)胞色素P-450系統(tǒng)的作用產(chǎn)生結(jié)合蛋白質(zhì)的巰基的活性醌亞胺，因此導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的快速缺失[Jollow，D.J.等，Pharmacol.，12，251-271(1974)]。失活的蛋白質(zhì)分別導(dǎo)致肝細(xì)胞的破壞和肝壞死。細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽分別是最重要的抗氧劑和釋放活性氧的最強(qiáng)清除劑。依賴于谷胱甘肽的抗氧劑保護(hù)系統(tǒng)的弱化導(dǎo)致氧自由基的細(xì)胞內(nèi)水平升高[Miesel，R.等，Inflamatin，17，283-294(1993)]。這些氧自由基是強(qiáng)的PARP誘導(dǎo)劑，影響蛋白質(zhì)的翻譯后過程。由于PARP活化的升高，細(xì)胞的NAD儲(chǔ)存減少，可能開始細(xì)胞凋亡[Hoschino，J.等，J.Steroid Mol.Biol.，44，113-119(1993)]。因此，煙酰胺，PARP酶的一種選擇性抑制劑，抑制肝臟中GOT和GPT酶的釋放，如用對(duì)乙酰氨基酚引起肝炎的小鼠中所示[Krger，H.and Ehrl ich，W.見《L-色氨酸藥物和藥物安全性中的展望》，Kochen，W.和Steinhart，H.編，Verl.Belin，1994]。
檢查了對(duì)乙酰氨基酚引起的肝損傷是否可以用式I的新化合物來(lái)防止。肝損傷的癥狀以對(duì)乙酰氨基酚引起的GOT和GTP酶水平的升高為特征。這些試驗(yàn)用體重30-40g的雄性NMRI小鼠進(jìn)行。用式I的化合物預(yù)處理動(dòng)物，口服7天。在第8天，讓小鼠禁食12小時(shí)，然后口服500mg/kg的對(duì)乙酰氨基酚和指定劑量的式I化合物。16小時(shí)后，將這些動(dòng)物放血致使并檢測(cè)血清的GOT和GPT酶活性。用Mann和Whitney的非參數(shù)檢驗(yàn)分析結(jié)果。對(duì)于這些結(jié)果，給出平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，其中p＜0.05被看做具有顯著性。
發(fā)現(xiàn)與生理鹽水處理的對(duì)照組相比，單一的口服對(duì)乙酰氨基酚升高了雄性NMRI小鼠的GOT和GPT活性。但是，式I的化合物在口服預(yù)處理7天后，非常顯著地降低了GOT和GPT酶的活性。例如，在以50mg/kg的劑量給藥的實(shí)施例12的化合物中，觀察到了非常有利的護(hù)肝作用。
3)化合物對(duì)百草枯毒性的作用百草枯[1，1′-二甲基-4，4′-雙吡啶]，早期用作殺蟲劑的化合物，通過超氧自由基的形成產(chǎn)生毒性作用。使用NADH和NAD(P)H作為電子供體的氧化還原酶參與超氧自由基的形成[NAD(P)H是磷酸煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的還原形式]。在傳遞對(duì)百草枯引起的氧化應(yīng)激的細(xì)胞反應(yīng)中，蛋白p66起重要作用[Migligaccio，E.等，Nature，402，309-313]。該機(jī)制歸因于超氧化物的滅活(如升高超氧化物歧化酶的水平)有效降低了百草枯的毒性。超氧自由基在若干疾病的病理中具有重要作用(如局部缺血再氧合、梗塞、炎性疾病)。通過使用百草枯得到了在這些疾病中所具有的超氧化物負(fù)荷的簡(jiǎn)單模型。
體外對(duì)百草枯毒性的作用在37℃下，在含有5％二氧化碳的空氣中，Hepa-1肝細(xì)胞瘤細(xì)胞在添加了10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而PC-12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞生長(zhǎng)于添加了10％小牛血清和5％馬血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中。用100μl的培養(yǎng)基，96孔Costar培養(yǎng)板的每孔中加入5x103個(gè)細(xì)胞。部分培養(yǎng)物不接受任何處理并用作對(duì)照。部分細(xì)胞用濃度漸增的百草枯處理，部分用相同濃度的百草枯和3、10及30μg/ml濃度的被測(cè)化合物處理。讓細(xì)胞再生長(zhǎng)3天，然后用SRB染色。較高的百草枯濃度導(dǎo)致細(xì)胞死亡，而較低的百草枯濃度部分抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。被測(cè)化合物的作用基于對(duì)百草枯毒性的降低來(lái)檢測(cè)。
對(duì)體內(nèi)百草枯毒性的作用百草枯對(duì)小鼠具有明顯的毒性。腹膜內(nèi)使用劑量70mg/kg導(dǎo)致動(dòng)物在2天內(nèi)死亡。調(diào)節(jié)超氧化物形成、中和及氧化應(yīng)激的機(jī)制也能夠降低體內(nèi)百草枯毒性。
將體重20-22g的CFLP小鼠分組，每組10只動(dòng)物，并分別用50和70mg/kg的百草枯進(jìn)行腹膜內(nèi)給藥。部分組別在百草枯給藥前和后還用被測(cè)化合物處理6小鼠。對(duì)于被測(cè)化合物，使用100mg/kg的口服劑量。被測(cè)化合物的效果基于小鼠存活率的增加進(jìn)行測(cè)定。
發(fā)現(xiàn)式I的化合物顯著降低了百草枯的毒性。
式I化合物對(duì)神經(jīng)變性疾病的作用如上所述，由于ROS造成的DNA損傷，PARP酶被激活，隨之細(xì)胞釋放NAD，于是導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在局部缺血樣腦局部缺血引起的神經(jīng)元死亡期間不僅僅觀察到PARP激活的極端速度，在其它神經(jīng)變性疾病如早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化中也被證實(shí)具有一定作用[Love等，Neuropathol.Appl.Neurobiol.，25，98-108(1999)；Eliasson等，Nat.Med.，10，1089-1095(1997)]。
對(duì)試驗(yàn)性肌萎縮性側(cè)索硬化的作用肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)是致命性的進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病。在發(fā)展中國(guó)家中它是最常見的成人期發(fā)作的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病。ALS包括皮層、腦干和脊髓中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元紊亂，其引起骨骼肌萎縮、麻痹和死亡[Rowland，L.P.《神經(jīng)變性疾病》，pp.507-521(1994)]。在一部分ALS病例中，該疾病是家族性的。家族性病例部分是由Cu/Zn超氧化物歧化酶-1(SOD-1)基因的錯(cuò)義突變引起[Deng，R.H.等，Science，261，1047(1993)]。SOD-1是一種在神經(jīng)組織中含量豐富的胞質(zhì)酶，其在抗氧自由基引起的細(xì)胞損傷中起重要作用。突變的酶維持接近正常水平的酶活性。體外研究表明SOD-1突變導(dǎo)致自由基產(chǎn)生的功能的獲得和提高。
具有突變的SOD-1基因的轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)的癥狀類似于ALS。在轉(zhuǎn)基因小鼠中已經(jīng)超表達(dá)了若干種人突變SOD-1基因(G93A，V148G)，并將所產(chǎn)生的疾病模型應(yīng)用于抗-ALS藥物篩選[Gurney，M.E.，J.Neurol.Sci.，152Suppl.1，67-73(1997)]。
家族性ALS模型試驗(yàn)超表達(dá)突變的人SOD-1基因(G93A)的轉(zhuǎn)基因小鼠用于此研究。動(dòng)物購(gòu)自Jackson Laboratory，USA。在鼠齡4周時(shí)該疾病的癥狀出現(xiàn)前，開始用式I的化合物處理。被測(cè)化合物每天用一次，口服，用3個(gè)劑量水平直到該試驗(yàn)結(jié)束。通過每周檢查運(yùn)動(dòng)行為(伸縮反射、負(fù)載表格、旋轉(zhuǎn)棒試驗(yàn))、通過存活時(shí)間、在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(120天后)、并通過對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元區(qū)域的組織學(xué)和生化檢查，監(jiān)控疾病的進(jìn)展。
發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因ALS動(dòng)物中式I的化合物導(dǎo)致該反射出現(xiàn)、效應(yīng)和肌力缺失的中度延遲。該作用顯示出劑量依賴性。麻痹的出現(xiàn)和晚期疾病的出現(xiàn)也得到延遲。組織檢查的結(jié)果證實(shí)了觀察到的該治療的臨床作用。治療組中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和黑質(zhì)神經(jīng)元的退化和損失比對(duì)照組的發(fā)展小。基于這些結(jié)果，可以預(yù)計(jì)式I的化合物在ALS疾病中具有有利的治療作用。
對(duì)自身免疫性ALS模型的試驗(yàn)在偶發(fā)ALS疾病中，在SOD-1基因中沒有發(fā)現(xiàn)突變。該事實(shí)表明其它原因?qū)е峦瑯舆M(jìn)程的疾病。在患有偶發(fā)ALS的多數(shù)患者中，可以檢測(cè)到抗鈣離子通道的抗體。此觀察證實(shí)了對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和鈣離子通道的自身免疫過程在偶發(fā)ALS病例的形成中起了至關(guān)重要的作用。在試驗(yàn)動(dòng)物中，Engelhardt及其同事通過用運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元免疫，然后只用免疫血清誘發(fā)了顯示了ALS特異性改變的疾病[Engelhardt，J.等，Synapse，20，185-199(1995)]。此模型用于檢測(cè)式I的化合物在偶發(fā)ALS疾病中的作用。
用勻化的牛前角脊髓免疫Hartley豚鼠。為了此免疫，將運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元懸浮于完全福氏佐劑(CFA)中。通過10次皮下或皮內(nèi)注射，每次注射0.1ml懸浮液進(jìn)行處理。1個(gè)月后，重復(fù)注射，但是用不完全福氏佐劑制備此懸浮液。第二次免疫后2周，在1-3天內(nèi)，動(dòng)物中出現(xiàn)嚴(yán)重的虛弱，特別是下肢。體重停止增加，運(yùn)動(dòng)性降低。在隨后的2周內(nèi)，動(dòng)物的狀態(tài)沒有改變。然后，將動(dòng)物放血致死。將收集到的血液離心得到用于引起小鼠ALS的血清。
試驗(yàn)在5只一組的雄性白化小鼠(CFLP，25-30g體重)中進(jìn)行。將1ml上述血清給各動(dòng)物腹膜內(nèi)注射以破壞運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。一組動(dòng)物只用該血清處理，而其它動(dòng)物組除了用該血清處理外，還用式I的被測(cè)化合物以100mg/kg的劑量腹膜內(nèi)處理。另外一些動(dòng)物組只用式I的被測(cè)化合物處理，不注射血清。
只用血清處理的動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)性變低，下肢只能困難地使用，然后它們變得麻痹。在用血清和式I的被測(cè)化合物處理的動(dòng)物中，沒有可檢測(cè)的運(yùn)動(dòng)缺陷癥狀。只用式I的被測(cè)化合物處理的動(dòng)物中情況相同。所有這些表明式I的化合物防止可以由免疫引起的運(yùn)動(dòng)紊亂的進(jìn)展。
對(duì)帕金森氏病的試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷淖饔门两鹕喜?PD)是普通的致殘的原發(fā)性神經(jīng)變性疾病，其特征是震顫、行動(dòng)遲緩、僵化和平衡困難。這些運(yùn)動(dòng)異常是由腦多巴胺的缺失引起的，該缺失是由黑質(zhì)背側(cè)致密部和腹側(cè)網(wǎng)狀部中多巴胺能神經(jīng)元的損失導(dǎo)致的。對(duì)具有選擇性神經(jīng)毒性的1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)帕金森氏病的可能病理機(jī)制。MPTP在人和動(dòng)物中都引起帕金森氏病運(yùn)動(dòng)征[Dexter，A.等，Ann.Neurol.，35，38-44(1994)]。MPTP處理還導(dǎo)致黑質(zhì)背側(cè)致密部和腹側(cè)網(wǎng)狀部中多巴胺能神經(jīng)元的損失。在損傷的神經(jīng)元中出現(xiàn)Lewy體樣嗜酸性包含物，且在這些細(xì)胞中線粒體復(fù)合物I也減少。這些改變是氧化應(yīng)激的特征[Shapira，A.，Adv.Neurol.，69，161-165(1996)]。MPTP的生物活性代謝物是MPP[1-甲基-4-苯基吡啶翁]。MPP直接抑制線粒體中的復(fù)合物I，導(dǎo)致超氧陰離子的產(chǎn)生增加。數(shù)據(jù)顯示氧化應(yīng)激在自然型和MPTP誘發(fā)型帕金森氏病的發(fā)病機(jī)理中，氧化應(yīng)激扮演主要角色。PARP酶被氧化應(yīng)激激活，而此酶似乎在帕金森氏病的病理中扮演有效的角色。PARP分離的小鼠顯示了對(duì)MPTP誘導(dǎo)帕金森氏病作用的敏感性極大地降低[Mandir，A.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96，5774-5779(1999)]。這些發(fā)現(xiàn)表明PARP抑制可能給帕金森氏病帶來(lái)治療作用。
在這些試驗(yàn)中使用的C57BI小鼠購(gòu)自Charles River Hungary。重20g的小鼠用MPTP處理4次，每次20mg/kg的MPTP，以2小時(shí)的間隔腹膜內(nèi)給藥。在注射MPTP前30分鐘口服被測(cè)化合物。對(duì)照動(dòng)物以相同的速度接受載體治療。注射MPTP七天后，將小鼠處死并快速摘除大腦。在冰冷的陪替氏培養(yǎng)皿是解剖黑質(zhì)。將切除的組織立即冷凍并保存在-80℃下直到分析。在50體積的0.1M高氯酸中將組織樣本進(jìn)行超生處理，使其勻化。離心(14000xg，10min，4℃)后，將20μl的上清夜注射到反相兒茶酚胺柱(ESA，Bedford)中并檢測(cè)多巴胺的含量。
最后一次MPTP處理后2小時(shí)，切除中腦和黑質(zhì)并在蔗糖/DDT緩沖液中勻化，然后離心(14000xg，5min)。將沉淀顆粒再懸浮于此緩沖液中。測(cè)定蛋白濃度外，將等量的蛋白加到SDS/PAGE凝膠上。將蛋白從該凝膠轉(zhuǎn)移至硝基纖維素膜上并進(jìn)行免疫染色以檢測(cè)聚(ADP核糖)聚合物。用化學(xué)發(fā)光觀察特異性結(jié)合。
在此檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)MPTP處理引起紋狀體多巴胺含量的急劇降低(80％)。式I的被測(cè)化合物部分(20-40％)抑制MPTP引起的多巴胺損失。MPTP處理導(dǎo)致紋狀體區(qū)域出現(xiàn)聚(ADP-核糖)聚合物加成物。用被測(cè)化合物進(jìn)行的伴行處理造成了此過程的抑制(20-70％)。因此，可以預(yù)計(jì)式I的化合物對(duì)帕金森氏病具有治療作用。
細(xì)胞保護(hù)作用的檢測(cè)長(zhǎng)期使用或經(jīng)常使用的一些藥物可引起神經(jīng)元損傷的副作用。在大量的引起此類輔因子的藥物(氯霉素、氨苯砜、戒煙硫、dichloroacetate、乙硫異煙胺、苯乙哌啶酮、sodium aurothiomalate、肼苯噠嗪、異煙肼、甲硝唑、硝基呋喃妥英、氧化氮、順鉑、吡哆辛、長(zhǎng)春新堿)中，最好的特征和最常討論的問題是異煙肼、吡哆辛、長(zhǎng)春新堿或順鉑引起的神經(jīng)病。氯霉素可以引起此類神經(jīng)病，但是在停止治療后此副作用能夠消失。但是，在幾乎所有臨床病例中，化療的過早停止會(huì)妨礙治療的成功并會(huì)引起疾病的復(fù)發(fā)。在抗癌化療中由于副作用造成的治療變化具有特別高的危險(xiǎn)性。此事實(shí)給所謂的化療保護(hù)或細(xì)胞保護(hù)劑賦予了極大的重要性，這些保護(hù)劑能夠減小重要生命維持藥物的有害副作用，而不使治療效果有任何降低。
在接受順鉑治療的癌癥患者中，主要的副作用是外周神經(jīng)的損傷(外周神經(jīng)病)。此副作用的發(fā)作會(huì)妨礙順鉑治療的進(jìn)行，會(huì)危及治療的成功，并傷害患者的生命質(zhì)量。在臨床和試驗(yàn)研究中，神經(jīng)元損傷的出現(xiàn)和級(jí)別可以通過檢測(cè)神經(jīng)傳導(dǎo)速度來(lái)確定。順鉑[順-二氯二氨合鉑]的神經(jīng)毒性作用主要涉及大量的有髓鞘外周神經(jīng)并表現(xiàn)為感覺神經(jīng)元損傷(感覺神經(jīng)病)。最近，一些報(bào)告提及了用順鉑治療后出現(xiàn)自主神經(jīng)病，及也會(huì)偶爾出現(xiàn)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病。通過直接損壞脊神經(jīng)節(jié)和大量的感覺神經(jīng)，順鉑常能引起感覺神經(jīng)的功能紊亂。在大鼠中，長(zhǎng)期順鉑治療帶來(lái)了感覺神經(jīng)病，這反映在混合型坐骨神經(jīng)的感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度的減慢。
基于上述作用的生化模式，主要通過防止自由基引起的損傷，相信式I的化合物具有細(xì)胞保護(hù)的潛能，并可防止抗腫瘤藥物的器官毒副作用。因此，在大鼠試驗(yàn)中，以亞急性治療的形式使用順鉑10周，劑量為1和2mg/kg腹膜內(nèi)，并觀察外周神經(jīng)病的發(fā)展。此外，檢測(cè)不同劑量的被測(cè)化合物是如何影響神經(jīng)功能(神經(jīng)傳導(dǎo)速度)的損傷。
為了檢測(cè)順鉑引起的感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷，按照Miyoshi的改良方法檢測(cè)大鼠尾部的神經(jīng)傳導(dǎo)速度。改良包括檢測(cè)室溫下而不是37℃下的神經(jīng)傳導(dǎo)速度。在順鉑治療前(對(duì)照)及治療第5和第10周的檢測(cè)感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度。在檢測(cè)期間，用乙醚淺層麻醉動(dòng)物，并將兩個(gè)電極針置于尾部神經(jīng)上，彼此相距50mm。用超大刺激強(qiáng)度，記錄傳入(運(yùn)動(dòng))和傳出(運(yùn)動(dòng))神經(jīng)動(dòng)作電位。通過將10個(gè)動(dòng)作電位平均用下式離線確定神經(jīng)傳導(dǎo)速度NCV＝v/I [m/sec]其中v＝觸發(fā)點(diǎn)與記錄電極對(duì)之間的距離(mm)，I＝動(dòng)作電位啟動(dòng)的潛伏時(shí)間(毫秒)，NCV＝神經(jīng)傳導(dǎo)速度(m/sec)。
在這些試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照動(dòng)物相比用1和2mg/kg順鉑腹膜內(nèi)處理10周顯著降低了接受處理的動(dòng)物的體重。在用式I化合物處理的動(dòng)物中也存在這種體重的降低。在接受處理和未處理動(dòng)物之間或者用順鉑處理和用被測(cè)化合物處理的動(dòng)物之間，在一般行為方面沒有差異。在3個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)中，對(duì)照組的感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的NCV方面沒有差異。在用順鉑處理的動(dòng)物中，1mg/kg順鉑處理在第5周和第10周，NCV一致和顯著降低。用2mg/kg順鉑處理后，NCV更強(qiáng)烈地降低。在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)中也出現(xiàn)神經(jīng)病。
在順鉑處理10周的過程中，在1和2mg/kg順鉑劑量組中，運(yùn)動(dòng)NCV都顯著降低。此降低是劑量依賴性的。在用1mg/kg順鉑和式I化合物處理組中，與只用1mg/kg順鉑處理組相比，感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度的降低明顯小，因此，聯(lián)合治療后神經(jīng)元功能有所改善。損傷程度越強(qiáng)，改善的程度越高。在用2mg/kg順鉑和不同劑量的式I化合物處理組中，在第5周，感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度的降低與只用2mg/kg順鉑處理組的沒有不同。但是，在第10周，只用2mg/kg順鉑處理的動(dòng)物組進(jìn)一步顯著降低，而用順鉑和式I化合物處理的動(dòng)物中，與只用2mg/kg順鉑處理動(dòng)物細(xì)胞，該降低是劑量依賴性的。傳入神經(jīng)傳導(dǎo)速度的降低在第10周末變小，特別是在也接受本發(fā)明化合物治療的組別中。
總之，可以說，用式I化合物同時(shí)處理降低了順鉑處理引起的感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度的損傷，并阻止了由第5周到第10周的損傷發(fā)展。在一些組中，此保護(hù)作用是劑量依賴性的。因此，式I化合物的神經(jīng)保護(hù)作用可以在感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能中顯示出。
肉毒鹼-棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶(CPTI)的生物作用CPTI是調(diào)節(jié)脂肪酸代謝的關(guān)鍵酶。對(duì)于游離脂肪酸(FFA)的輔酶A酯(CoA)存在兩種可能1)通過與甘油反應(yīng)合成甘油三酯，或2)氧化，其第一步是借助CPTI酶形成乙?；舛钧|[見McGarry，J.D.等，Diabetes，5，271-284(1989)；McGarry，J.D.and Foster，D.，Ann.Rev.Biochem.，49，395-420(1980)]。CPTI酶位于線粒體內(nèi)膜的外部(或在外膜)并催化如下反應(yīng)FFA-CoA+L-肉毒鹼→FFA-肉毒鹼+CoA脂肪酸氧化的抑制導(dǎo)致葡萄糖裂解和氧化反應(yīng)的增加。特別是在心肌局部缺血和糖尿病中，該過程極端顯著和有利；這兩種病理狀態(tài)都具有高發(fā)病率和死亡率。在心肌局部缺血和在隨后的再氧合中，升高的脂肪酸氧化是有害的，因?yàn)樾枰~外的氧并形成乙酰基肉毒鹼的膜損傷作用[Busselen，P.等，J.Mol.Cell.Cardiol.，20，905-916(1988)；Ford，D.A.等，Biochemistry，35，7903-7909(1996)；Reeves，K.A.等，J.Pharm.Pharmacol.，48，245-248(1995)]?；谌舾稍囼?yàn)數(shù)據(jù)，現(xiàn)在接受了這樣的事實(shí)就心肌機(jī)械功能的恢復(fù)和代謝(酶釋放、脂過氧化)數(shù)據(jù)而言，葡萄糖代謝的激活及脂肪酸氧化的同時(shí)抑制具有有利的作用[Lopaschuk，G.D.等，Circ.Res.，66，546-553(1990)；Kennedy，J.A.等，Biochem.Pharmacol.，52，273-280(1996)]。心肌的此底物選擇，即，在葡萄糖和脂肪酸之間選擇，也可以用CPTI抑制劑達(dá)到，因此葡萄糖的利用增加而心肌的能量學(xué)得到改善[Lopaschuk，G.D.等，Circ.Res.，63，1036-1043(1988)；Carregal，M.等，Arch.Phys.Biochem.，103，45-49(1995)；Lopaschuk，G.D.等，65，378-387(1989)；Pauly，D.F.等，Circ.Res.，68，1085-1094(1991)]。
我們的研究表明催化脂肪酸氧化的限速反應(yīng)的酶，可以被亞毫摩爾濃度范圍的式I化合物抑制。這些研究還指出被測(cè)化合物影響心臟和其它組織的底物選擇，并通過改變底物的選擇也影響這些組織的局部缺血后損害。
主要由bHLH轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)的氧敏感基因的生物作用防止低氧癥的有害作用需要一系列有組織防御反應(yīng)，包括在單個(gè)細(xì)胞水平和在整個(gè)機(jī)體水平。在誘導(dǎo)低氧癥的基因表達(dá)的調(diào)節(jié)中，HIF-1/ARNT轉(zhuǎn)錄復(fù)合物扮演了重要的但不是唯一的角色。氧敏感性、共同調(diào)節(jié)的基因包括刺激紅細(xì)胞生成的紅細(xì)胞生成素[Wang，G.L.等，PNAS，92，5510(1995)]、刺激血管生成的VEGF(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)[Goldberg，M.A.和Schneider，T.J.，J.Biol.Chem.，269，4355(1994)]、乙醇酸酶如GAPDH，LDH(乳酸脫氫酶)[Rolfs，A.等，J.Biol.Chem.，272，20055(1997)]以及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut-1。
推測(cè)式I的化合物結(jié)合ARNT和/或HIF-1轉(zhuǎn)錄因子，因此，它們能夠影響參與警報(bào)(低氧癥敏感性)狀態(tài)的基因的激活。相信通過此信號(hào)傳導(dǎo)路徑，本發(fā)明的化合物表達(dá)在警報(bào)狀態(tài)中起重要作用的熱激蛋白。
熱激蛋白(HSP)的合成是由作用于細(xì)胞的多種應(yīng)激引起的。熱激蛋白有助于細(xì)胞在危險(xiǎn)狀態(tài)下存活并帶來(lái)對(duì)任何損傷的修復(fù)[Cardiovascular Res.，578(1993)；Neurosci.Lett.，163，135-137(1993)]。
在對(duì)低氧癥、再氧合的適應(yīng)中促進(jìn)警報(bào)反應(yīng)并恢復(fù)耗盡的適應(yīng)反應(yīng)的試劑，在疾病如梗塞、動(dòng)脈硬化和糖尿病中能夠減小低氧癥(低氧癥-再氧合)引起的組織損傷。
檢測(cè)HSP-70通過形成DNA雜交體的報(bào)道基因試驗(yàn)研究HSP-70的活性。將可以通過可很好檢測(cè)的酶活性來(lái)檢測(cè)的蛋白的基因，融合到編碼熱激蛋白的HSP-70啟動(dòng)子序列中。使用生物工程方法。用熒光素酶作為報(bào)道基因，其活性可以通過發(fā)光檢測(cè)很好地確定。如果熒光素酶的基因的啟動(dòng)子被HSP-70基因的啟動(dòng)子代替，則熒光素酶的活性發(fā)生變化，即，HSP-70基因的轉(zhuǎn)錄頻率變化與該基因在指定環(huán)境中進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄頻率相關(guān)。此種方式中，如果物質(zhì)或方法影響HSP-70基因的表達(dá)，則該作用可以通過熒光素酶活性的檢測(cè)進(jìn)行研究。在這樣的試驗(yàn)系統(tǒng)中進(jìn)行被測(cè)化合物對(duì)HSP-70表達(dá)的作用的研究。
構(gòu)建雙股DNA環(huán)狀分子，即含有HSP-70報(bào)道基因的質(zhì)粒，以進(jìn)行檢測(cè)。將接近600bp長(zhǎng)的小鼠HSP-70基因啟動(dòng)子序列(該基因起始位點(diǎn)的5′端)融合到得自Photymus pyralis的熒光素酶基因的編碼序列中。應(yīng)用的啟動(dòng)子序列含有若干有利于HSP-70基因表達(dá)的蛋白結(jié)合位點(diǎn)。在可以選擇新霉素的具有pBR的質(zhì)粒載體中，構(gòu)建HSP啟動(dòng)子-熒光素酶異種基因構(gòu)建物。將此HSP-70-熒光素酶質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到小鼠成纖維細(xì)胞L929細(xì)胞中。該試驗(yàn)進(jìn)行如下讓含有HSP-70-luc質(zhì)粒的L929細(xì)胞生長(zhǎng)在添加了5％FCS(胎牛血清)的DMEM(Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基)中。在24孔Costar細(xì)胞培養(yǎng)板的孔中，在1ml培養(yǎng)基中加入104個(gè)細(xì)胞。以10-2的濃度將被測(cè)物質(zhì)溶解于PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)中。細(xì)胞附著后(加入后3-4小時(shí))，將10μl的該溶液加入到培養(yǎng)物中，并在二氧化碳恒溫箱中在37℃下培養(yǎng)30分鐘。然后更新培養(yǎng)基(不合被測(cè)物質(zhì))，并讓細(xì)胞在37℃下再生1小時(shí)，然后用PBS洗滌一次。除去PBS后，向細(xì)胞中加入40μl的1x裂解緩沖液，并將樣本在冰上保持30分鐘。然后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到Eppendorf瓶中冰在4℃下以14000rpm離心20分鐘。將5μl的上清夜加入到25μl的熒光素酶檢測(cè)緩沖液中，并在發(fā)光計(jì)中檢測(cè)樣本的發(fā)光，檢測(cè)時(shí)間為25秒。
熒光素酶檢測(cè)緩沖液的組分20.00 mM的N-三(羥甲基)甲基甘氨酸[N-/2-羥基-1，1-雙(羥基甲基)乙基/甘氨酸]，pH7.8，1.07mM的(MgCO3)4Mg(OH)2·5H2O，2.67mM的MgSO4，0.10mM的EDTA[乙二氨基四乙酸]，3.33mM的DTT，270μM的輔酶A鋰鹽，470μM的熒光素，530μM的ATP[三磷酸腺苷]。
5X裂解緩沖液的組分125mM的Tris-H3PO4pH7.8，10mM的CDTA[反-1，2-二氨基環(huán)己烷-N，N，N′，N′-四乙酸]，10mM的DTT，50％的甘油，5％的曲通X-100。
低氧癥敏感性基因的研究以mRNA和蛋白質(zhì)水平研究式I化合物對(duì)生物異源物質(zhì)和低氧癥(1％氧氣)引起的Hepa和HepG2細(xì)胞培養(yǎng)物基因表達(dá)的作用。觀察到式I的化合物在Hepa細(xì)胞中將甲基-膽蒽引起的HSP-70表達(dá)升高了10倍。此外，在Hepa和HepG2細(xì)胞中出于對(duì)低氧癥治療的反應(yīng)，作為本發(fā)明的化合物增加了低氧癥敏感性基因入VEGF、GAPDH和LDH的表達(dá)。
在低氧癥中，式I化合物增加了若干低氧癥敏感性基因的表達(dá)。這表明被測(cè)化合物影響氧敏感性基因的調(diào)節(jié)中的普通路徑。式I化合物有利于對(duì)低氧癥和低氧癥-再氧合引起的應(yīng)激的適應(yīng)，它們適于防止低氧癥和低氧癥-再氧合的有害作用。預(yù)計(jì)這些化合物在循環(huán)障礙、動(dòng)脈狹窄和痙攣、動(dòng)脈硬化、梗塞、栓塞、血栓形成、低血壓、休克、燒傷、凍傷引起的組織損傷狀態(tài)中會(huì)提供治療效果。本發(fā)明的化合物在與變性和代謝疾病(早老性癡呆、糖尿病)有關(guān)的次低氧條件下，也會(huì)有效。
在接觸低氧狀態(tài)的HepG2細(xì)胞中對(duì)LDH酶水平的作用HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于37℃下在含5％二氧化碳的氧氣中的DMEM培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基補(bǔ)充了10％的FCS。將105個(gè)細(xì)胞加入到Costar 24孔培養(yǎng)板孔中的1ml培養(yǎng)基中。第二天，異30μg/ml的濃度用被測(cè)化合物處理細(xì)胞，然后讓這些細(xì)胞接受低氧態(tài)處理(在氮?dú)庵写嬖?％氧氣，5％二氧化碳)24小時(shí)。部分對(duì)照組用用作溶劑的說處理，另一部分不接觸低氧狀態(tài)。在低氧態(tài)處理結(jié)束時(shí)，除去培養(yǎng)基并用冷PBS將細(xì)胞洗滌兩次。在含磷酸鹽緩沖液(0.05M)的0.05％曲通X-100中制備細(xì)胞裂解液。離心(2分鐘，20000×g)后，在丙酮酸鈉底物的存在下基于NADH消耗量來(lái)檢測(cè)上清夜的LDH活性。
應(yīng)用的低氧態(tài)處理引起細(xì)胞中LDH含量增加3倍。處理治療低氧癥，式I的化合物以累積的方式提高了LDH水平。
抗病毒作用逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組組成單鏈RNA分鐘，其通過雙鏈DNA中間體進(jìn)行復(fù)制。將此雙鏈DNA插入宿主基因組中，這在病毒的生命周期中是關(guān)鍵的事件。插入的機(jī)理磷酸鹽轉(zhuǎn)座的機(jī)理。
逆轉(zhuǎn)錄酶使DNA復(fù)制病毒RNA。在受染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中合成雙鏈DNA。然后，將線性DNA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中，且一個(gè)或多個(gè)拷貝整合到宿主細(xì)胞的基因組中。此整合是由整合酶介導(dǎo)的。當(dāng)原病毒DNA被整合時(shí)，其使用宿主細(xì)胞的酶來(lái)產(chǎn)生病毒RNA，該RNA用作mRNA并在包裝到病毒顆粒中后作為基因組。
在病毒復(fù)制的過程中，逆轉(zhuǎn)錄酶的正常功能是必需的。因此，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制提供了抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制的有效途經(jīng)。一部分現(xiàn)行的抗HIV藥物通過抑制逆轉(zhuǎn)錄酶起作用。目前，最有效的抗HIV治療是基于多種抗HIV藥物的聯(lián)合。這些聯(lián)合中的一個(gè)或兩個(gè)組分是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑存在兩種主要的類型。一個(gè)組成核苷類似物，此類中大家熟知的代表是疊氮基胸苷，即AZT。這些化合物通過結(jié)合核苷酸結(jié)合位點(diǎn)抑制該酶活性。非核苷類似物代表了其它類型的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。這些化合物也結(jié)合此酶，但是不結(jié)合核苷酸結(jié)合位點(diǎn)。此結(jié)合是特異性的、相對(duì)穩(wěn)定并導(dǎo)致該酶活性位點(diǎn)的變形，這引起酶活性的顯著損失。
對(duì)本發(fā)明化合物的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性進(jìn)行如下研究。這些化合物被分類為非核苷類似物逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。對(duì)Moloney鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行試驗(yàn)，其是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的良好模型。試驗(yàn)過程如下該試驗(yàn)用聚脫氧腺苷(poly(dA))模板和低聚脫氧胸苷(oligo(dT))12-18引物檢測(cè)摻入cDNA的(3H)dTTP的量。該反應(yīng)以20μl的體積進(jìn)行。
反應(yīng)混合物的組成2μl的10X緩沖液，
20μl的模板引物，5μM的dTTP，2μCi的(3H)dTTP，被測(cè)化合物溶解于1X緩沖液。
通過加入5U的逆轉(zhuǎn)錄酶開始該反應(yīng)。
10X逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液的組成500mM的Tris-HCl pH8.3，80mM的MgCl2，300mM的KCl，100mM的DTT。
在37℃下將反應(yīng)混合物孵育40分鐘。然后，將15μl的反應(yīng)混合物加樣到洗滌過的Whatman DE81濾板上，依次用5％磷酸氫二鈉緩沖液、水和96％(v/v)乙醇洗滌。干燥后，將此濾板置于5ml的閃爍混合液(OptiPhase HiSafe 3，Wallac)中，并用Packard Tri-Carb2200CE閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)放射活性。
在試驗(yàn)中用抑制活性已知的兩個(gè)化合物作為陽(yáng)性對(duì)照AZT是核苷類似物，而化合物奈韋拉平是非核苷型抑制劑。奈韋拉平結(jié)合該酶中所謂的苯并二氮雜環(huán)更三烯結(jié)合位點(diǎn)。
從試驗(yàn)結(jié)果中得出如下結(jié)論本發(fā)明的化合物抑制Moloney鼠白血病逆轉(zhuǎn)錄酶。被測(cè)化合物以0.2-2.0μg/ml的濃度使用。基于劑量依賴性的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性，可以說這些新化合物的抑制作用高于奈韋拉平，但是低于核苷類似物AZT的作用。由于所用酶被看做HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的真實(shí)模型，故觀察到的結(jié)果可以被看做是抗HIV作用。
最近的數(shù)據(jù)表明PARP是將病毒基因組整合到宿主細(xì)胞中所必需的，于是對(duì)PARP的抑制阻斷了病毒基因組向宿主DNA中的整合。為此，無(wú)毒的PARP抑制劑可以抑制噁性逆轉(zhuǎn)錄病毒，并停止逆轉(zhuǎn)錄病毒如HIV和非甲型肝炎病毒的傳播。
基于上述試驗(yàn)結(jié)果，可以確信本發(fā)明的化合物由于它們的逆轉(zhuǎn)錄酶和PARP抑制作用，也可以用作具有若干攻擊點(diǎn)的抗病毒活性物質(zhì)。
于是，這些新的丙烯羧酸偕胺肟衍生物可以用作藥物組合物的活性組分。因此，本發(fā)明包括含有式I的不飽和羥肟酸衍生物或其N-氧化物或幾何異構(gòu)體(一種或多種)和/或旋光異構(gòu)體(一種或多種)或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物作為活性組分以及一種或多種載體的藥物組合物。
一般來(lái)說，本發(fā)明的藥物組合物含有0.1-95％重量，優(yōu)選1-50％重量，適宜地5-30％重量的活性組分，且其適于治療基于氧和能量缺乏狀態(tài)、PARP抑制的疾病，特別是自身免疫性或神經(jīng)變性和/或病毒疾病，還適于預(yù)防中毒。
就本發(fā)明而言，術(shù)語(yǔ)“活性組分”包括式I的化合物或其N-氧化物，或者式I化合物或N-氧化物、式I化合物或N-氧化物的藥用酸加成鹽和/或季銨鹽的一種或多種幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體，或者式I化合物或N-氧化物的異構(gòu)體(一種或多種)的藥用酸加成鹽和/或季銨鹽。
本發(fā)明的藥物組合物適于經(jīng)口、非腸道或直腸給藥，或者用于局部治療，并可以是固體或液體。
適于口服給藥的固體藥物組合物可以是散劑、膠囊、片劑、膜包衣片劑、微囊等，并可以含有如下物質(zhì)作為載體粘合劑如明膠、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮等；填充劑如乳糖、葡萄糖、淀粉、磷酸鈣等；壓片用輔劑如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、二氧化硅等；濕潤(rùn)劑如十二烷基硫酸鈉等。
適于口服給藥的液體藥物組合物可以是溶液劑、混懸劑或乳劑，并可以含有如下物質(zhì)作為載體例如，助懸劑如明膠、羧甲基纖維素等；乳化劑如脫水山梨醇單油酸酯等；溶劑如水、油、甘油、丙二醇、乙醇等；防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸甲酯等。
適于非腸道給藥的藥物組合物一般由活性物質(zhì)的滅菌溶液組成。
上述劑型以及其它劑型是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如，見Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack PublishingCo.，Easton，USA(1990)。
藥物組合物一般含有單位劑型。對(duì)于成人患者來(lái)說典型的劑量以1千克體重計(jì)為0.1至1000mg的式I化合物或其N-氧化物或藥用酸加成鹽和/或季銨衍生物。每天的劑量可以一次或分多次給藥。實(shí)際的劑量依賴于很多因素并由醫(yī)生來(lái)確定。
通過將活性組分于一種或多種載體混合，并以本領(lǐng)域已知的方法將此混合物轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬锝M合物，制備藥物組合物?？梢岳玫姆椒ㄊ俏墨I(xiàn)中已知的，例如，上述Remington′s Pharmaceutical Sciences。
優(yōu)選的本發(fā)明的藥物組合物含有式Ia的丙烯-羧酸偕胺肟衍生物，其中R、R′、R3、R4和R5定義如式Ia，或者其N-氧化物或幾何異構(gòu)體(一種或多種)和/或旋光異構(gòu)體(一種或多種)或者藥用酸加成鹽和/或季銨鹽作為活性組分。
本發(fā)明另一組優(yōu)選的藥物組合物含有式Ib的丙烯-羧酸偕胺肟衍生物，其中R、R′、R3、R4、R5和x定義如式Ib，或者其N-氧化物或者幾何異構(gòu)體(一種或多種)和/或旋光異構(gòu)體(一種或多種)或者藥用酸加成鹽和/或季銨鹽作為活性組分。
本發(fā)明的另一組優(yōu)選的藥物組合物含有式Ic的丙烯-羧酸偕胺肟衍生物，其中R、R′、R4和R5定義如式Ic，或者其幾何異構(gòu)體(一種或多種)和/或旋光異構(gòu)體(一種或多種)或者藥用酸加成鹽和/或季銨鹽作為活性組分。
本發(fā)明包括治療方法，其中用無(wú)毒劑量的式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物或者其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或者藥用酸加成鹽和/或季銨鹽治療患有如下疾病的患者特別是與氧缺乏和/或能量缺乏有關(guān)的病癥，或者患有基于PARP抑制的疾病，特別是自身免疫性或神經(jīng)變性疾病，和/或病毒疾病，和/或中毒作用引起的疾病。
此外，本發(fā)明包括式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物或者其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或者藥用酸加成鹽和/或季銨鹽在制備適于治療與氧缺乏和/或能量缺乏有關(guān)的病癥，或者患有基于PARP抑制的疾病，特別是自身免疫性或神經(jīng)變性疾病，和/或病毒疾病，和/或中毒作用引起的疾病的藥物組合物中的用途。
本發(fā)明通過下列實(shí)施例做進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例實(shí)施例13-苯乙烯基-4-(3-(1-哌啶基)丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽將0.94g(0.005mol)的3-苯乙烯基-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮溶解于6ml的丙酮，向所得溶液中，加入1.19g(0.006mol)的1-氯-3-(1-哌啶基)丙烷鹽酸鹽、0.76g(0.0055mol)的無(wú)水碳酸鉀，1ml的甲醇和0.05g的碘化鉀。將反應(yīng)混合物加熱回流20小時(shí)，過濾出無(wú)機(jī)鹽，并將此溶液減壓下蒸發(fā)。將殘余的油狀粗品溶解于異丙醇，所得溶液通過加入存在于異丙醇中的氯化氫進(jìn)行酸化，反應(yīng)混合物在冰箱中放置一夜，并過濾出沉淀的結(jié)晶。于是獲得了1.05g的標(biāo)題化合物。M.p.203-205℃。
IR(KBr)ν＝2550-2650(NH+)，1768(CO)，1639(C＝N)cm-1。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝1.3-1.85(6H，m，哌啶-3，4，5-CH2)，2.11(2H，m，丙基-CH2)，2.82(2H，m，哌啶-CH2)，3.09(2H，m，-CH2-N)，3.36(2H，m，哌啶-CH2)，3.87(2H，m，-O-CH2)，7.12(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.4-7.5(3H，m，Ar-H)，7.60(1H，d，Ar-CH＝CH)，7.8(2H，m，ArH)，10.3 (1H，br，+NH)。
實(shí)施例23-苯乙烯基-4-(3-(1-哌啶基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽A)將2.25g(0.008mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮溶解于10ml的乙醇，向所得溶液中，加入0.68g(0.008mol)的哌啶，將此混合物加熱至50℃，并在攪拌下滴加0.32g(0.008mol)的氫氧化鈉在2ml水中的溶液。反應(yīng)混合物在50-55℃下再攪拌2小時(shí)，過濾出沉淀的結(jié)晶，干燥，然后加熱下溶解于乙醇，并將所得溶液通過加入存在于異丙醇中的氯化氫進(jìn)行酸化。反應(yīng)混合物在冰箱中放置一夜，過濾出沉淀的結(jié)晶并干燥。于是獲得了1.09g的標(biāo)題化合物。M.p.234-235℃。
用作起始物的(3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮通過3-苯乙烯基-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮和環(huán)氧氯丙烷按照文獻(xiàn)[Chem.Ber.，108，1911(1975)]中描述的方法制備。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝1.3-1.9(6H，m，哌啶-3，4，5-CH2)，2.9-3.6(6H，m，3CH2)，3.8(2H，m，丙基-1-CH2)，4.35(1H，m，CH-OH)，6.3(1H，br，OH)，7.19(1H，d，Ar-CH＝CH)，7.37-7.47(3H，m，Ar-H)，7.57(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.84(2H，m，Ar-H)，10.25(1 H，br，+NH)。
B)將0.65g(0.0027mol)的3-苯乙烯基-4-(2，3-環(huán)氧丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮溶解于2ml的甲醇，并向所得溶液中，加入0.24g(0.0028mol)的哌啶。讓變暖的反應(yīng)混合物放置1小時(shí)。過濾出沉淀的結(jié)晶，然后溶解于異丙醇。將此溶液通過加入存在于異丙醇中的氯化氫進(jìn)行酸化。于是獲得了0.38g的標(biāo)題產(chǎn)物結(jié)晶，其與步驟A中獲得的化合物相同。M.p.2 34-2 35℃。
用作起始物的(3-苯乙烯基-4-(2，3-環(huán)氧丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮制備如下將1.5g(0.0053mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮溶解于5ml的丙酮，向所得溶液中，加入0.73g的無(wú)水碳酸鉀，反應(yīng)混合物加熱回流16小時(shí)，然后過濾并減壓下蒸發(fā)。于是獲得了1.41g的3-苯乙烯基-4-(2，3-環(huán)氧丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮，為油狀物。
C)將0.3g(0.0016mol)的3-苯乙烯基-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮溶解于3ml的丙酮，向所得溶液中，加入0.41g(0.0019mol)的3-(1-哌啶基)-2-羥基-1-氯丙烷鹽酸鹽、0.48g的無(wú)水碳酸鉀、1ml的甲醇和0.05g的碘化鉀。反應(yīng)混合物加熱回流40小時(shí)，然后過濾，并減壓下蒸餾掉溶劑。將此殘余物溶解于5％鹽酸，將此溶液過濾并通過加入10％氫氧化鈉水溶液將此濾液變?yōu)閴A性。沉淀的產(chǎn)物用氯仿萃取，將此溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓下蒸發(fā)溶劑。將此殘余物溶解于異丙醇，并將所得溶液通過加入存在于異丙醇中的氯化氫進(jìn)行酸化。得到0.18g的產(chǎn)物結(jié)晶，其與步驟A制備的標(biāo)題產(chǎn)物相同。M.p.234-235℃。
實(shí)施例33-苯乙烯基-4-(3-(1-吡咯烷基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮-鹽酸鹽將8.4g(0.03mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮溶解于30ml的乙醇，向所得溶液中，加入2.55g(0.036mol)的吡咯烷，然后在60℃下，攪拌下滴加存在于8ml水中的1.2g(0.03mol)的氫氧化鈉。將此反應(yīng)混合物在60℃下再攪拌1小時(shí)，然后減壓下蒸餾掉乙醇。加入濃鹽酸酸化此殘余物，將此溶液用炭處理，過濾，并通過加入2N氫氧化鈉水溶液變?yōu)閴A性。沉淀的油狀物用氯仿萃取，有機(jī)溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，并蒸發(fā)。將此殘余物溶解于異丙醇，所得溶液通過加入存在于異丙醇中的氯化氫進(jìn)行酸化。將結(jié)晶過濾并干燥。于是獲得了1.8g的標(biāo)題化合物。M.p.188-189℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝1.8-2.0(4H，m，吡咯烷-3，4-CH2)，3.06-3.55(6H，m，3CH2)，3.82(2H，d，丙基-1-CH2)，4.21(1H，m，-CH-OH)，6.25(1H，d，-OH)，7.14(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.4-7.5(3H，m，Ar-H)，7.58(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.82(2H，m，ArH)，10.3(1H，br，+NH)。
實(shí)施例43-苯乙烯基-4-(3-六亞甲基亞氨基-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽按照實(shí)施例3的描述，2.8g(0.01mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與1.19g(0.012mol)的六亞甲基亞胺反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫在異丙醇溶液這沉淀此鹽酸鹽。于是獲得了1.0g的標(biāo)題化合物。
M.p.202-203℃。
1H-NMR(CDCl3+DMSO-d6)δ＝1.6-2.0(8H，m，六亞甲基亞胺-3，4，5，6-CH2)，3.1-3.6(6H，m，3CH2)，3.8(2H，m，丙基-1-CH2)，4.35(1H，m，-CH-OH)，6.21(1H，d，OH)，7.11(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.4(3H，m，Ar-H)，7.57(1H，d，Ar-CH=CH-)，7.77(2H，m，Ar-H)，10.0(1H，br，+NH)。
實(shí)施例53-苯乙烯基-4-(3-(4-嗎啉基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉5-酮鹽酸鹽4.2g(0.015mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與1.6g(0.018mol)的嗎啉按照實(shí)施例3描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫在乙醇溶液中沉淀此鹽酸鹽。于是獲得了0.67g的標(biāo)題化合物。M.p.232-234℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝3.1-3.55(6H，m，嗎啉-3，5-CH2，丙基-3-CH2)，3.8-4.0(6H，m，嗎啉-2，6-CH2，丙基-1-CH2)，4.37(1H，m，-CH-OH)，6.3(1H，br，OH)，7.12(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.4(3H，m，ArH)，7.6(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.8(2H，m，ArH)，10.6(1H，br，+NH)。
實(shí)施例63-苯乙烯基-4-[3-(叔丁基氨基)-2-羥基丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽6.6g(0.024mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與2.63g(0.036mol)的叔丁基胺按照實(shí)施例3描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫溶液在異丙醇溶液中沉淀此鹽酸鹽。于是獲得了1.8g的標(biāo)題化合物。
M.p.244-246℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝1.3(9H，s，叔丁基)，2.9-3.15(2H，m，丙基-3-CH2)，3.85(2H，m，丙基-1-CH2)，4.15(1H，m，CH-OH)，6.08(1H，d，OH0)，7.12(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.40(3H，m，Ar-H)，7.55(1H，d，Ar-CH＝CH)，7.8(2H，m，Ar-H)，8.55(1H，br，NH)，8.85(1H，br，NH)。
實(shí)施例73-苯乙烯基-4-[3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-羥基丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮二鹽酸鹽8.4g(0.03mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與3.6g(0.036mol)的N-甲基哌嗪按照實(shí)施例3描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫溶液在異丙醇溶液中沉淀此鹽酸鹽。于是獲得了2.08g的標(biāo)題化合物。
M.p.206-208℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝2.77(3H，s，CH3)，3.0-3.1(2H，m，丙基-3-CH2)，3.6(8H，m，哌嗪-CH2)，3.8(2H，m，丙基-1-CH2)，4.23(1H，m，-CH-OH)，6.2(1H，br，OH)，7.03(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.4(3H，m，Ar-H)，7.58(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.77(2H，m，ArH)，11.8(2H，br，2x+NH)。
實(shí)施例83-苯乙烯基-4-[3-(1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基)-2-羥基-丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽2.8g(0.01mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與1.6g(0.012mol)的1，2，3，4-四氫異喹啉按照實(shí)施例3描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫溶液在異丙醇溶液中沉淀此鹽酸鹽。于是獲得了0.83g的標(biāo)題化合物。
M.p.208-210℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝3.0-3.6(8H，m，異喹啉-CH2，丙基-3-CH2)，3.84(2H，m，丙基-1-CH2)，4.4(1H，m，-CH-OH)，6.3(1H，br，OH)，7.13(1H，d，Ar-CH-CH-)，7.2-7.5(7H，m，ArH)，7.60(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.8(2H，m，Ar-H)，10.6(1H，br，+NH)。
實(shí)施例93-苯乙烯基-4-[3-(2，6-二甲基苯氨基)-2-羥基丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽8.4g(0.03mol)的3-苯乙烯基-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與4.36g(0.036mol)的2，6-二甲基苯胺，用50ml的甲醇代替乙醇，按照實(shí)施例3描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫在異丙醇溶液中沉淀此鹽酸鹽，然后用1體積的異丙醇和1體積的乙醇的混合物重結(jié)晶。于是獲得了1.62g的標(biāo)題化合物。
M.p.182-184℃。
1H-NMR(DMSO-d6)6＝2.44(6H，s，CH3)，3.16-3.53(2H，m，丙基-3-CH2)，3.86(2H，m，丙基-1-CH2)，4.21(1H，m，CH-OH)，6.0(1H，br，OH)，7.10(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.14(3H，m，ArH)，7.4-7.5(3H，m，ArH)，7.59(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.78(2H，m，ArH)，9.0(2H，br，+NH2)。
實(shí)施例103-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(3-(1-哌啶基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽3.4g(0.01mol)的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與1.02g(0.012mol)的哌啶按照實(shí)施例3描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫在乙醇溶液中沉淀此鹽酸鹽。于是獲得了1.8g的標(biāo)題化合物。
M.p.187-188℃。
1H-NMR(CDCl3+DMSO-d6)δ＝1.4-2.0(6H，m，哌啶3，4，5-CH2)，3.18-3.31(6H，m，哌啶-2，6-CH2，丙基-3-CH2)，3.85-3.92(2H，m，丙基-1-CH2)，3.89(3H，s，-OCH3)，3.96(3H，s，-OCH3)，4.45(1H，m，CH-OH)，6.27(1H，br，OH)，6.93(1H，m，ArH)，6.98(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.21(1H，m，ArH)，7.42(1H，m，ArH)，7.48(1H，d，Ar-CH＝CH-)，9.8(1H，br，+NH)。
用作起始物的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮由3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與環(huán)氧氯丙烷按照文獻(xiàn)[Chem.Ber.，108，1911(1975)]中已知的方法制備。
實(shí)施例113-苯乙烯基-4-[3-(1-甲基-4-哌嗪基)-2-羥基丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮二鹽酸鹽2.0g(0.0059mol)的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與0.71g(0.0071mol)的N-甲基哌嗪按照實(shí)施例3描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入存在于異丙醇中的氯化氫溶液在異丙醇溶液中沉淀此鹽酸鹽。于是獲得了0.8g的標(biāo)題化合物。M.p.192-193℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝2.8(3H，s，N-CH3)，3.2-3.8(10H，m，哌嗪-CH2，丙基-3-CH2)，3.80(3H，s，甲氧基)，3.83(2H，m，丙基-1-CH2)，3.86(3H，s，OCH3)，4.31(1H，m，-CH-OH)，6.3(1H，br，OH)，7.0(1H，m，ArH)，7.03(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.30(1H，m，ArH)，7.50(1H，m，ArH)，7.51(1H，d，Ar-CH＝CH-)，11.8(2H，br，2x+NH)。
實(shí)施例12N-(3-(1-哌啶基)-2-羥基丙基)肉桂酸偕胺肟向按照實(shí)施例2所述方法制備的1.91g(0.006mol)的3-苯乙烯基-4-(3-(1-哌啶基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮中，加入10ml乙醇和10ml的10％氫氧化鈉水溶液，并將反應(yīng)混合物加熱回流2小時(shí)。將乙醇減壓下蒸發(fā)，通過加入氫氯酸將殘余物的pH調(diào)節(jié)至8。從部分固體產(chǎn)物中傾析出液相，并將殘余物溶解于甲醇。用水稀釋時(shí)，結(jié)晶出0.79g的標(biāo)題化合物。M.p.114-11 5℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝1.7-1.9(6H，m，哌啶-3，4，5-CH2)，2.1-2.3(6H，m，哌啶-2，6-CH2，丙基-3-CH2)，3.2-3.33(2H，m，丙基-1-CH2)，3.83(1H，m，CH-OH)，5.6(1H，br，OH)，6.55(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.15(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.8-7.32(3H，m，ArH)，7.44(2H，m，ArH)。
實(shí)施例13N-(3-(4-嗎啉基)-2-羥基丙基)肉桂酸偕胺肟二氫馬來(lái)酸鹽向按照實(shí)施例5所述方法制備的2.76g(0.0075mol)的3-苯乙烯基-4-(3-(4-嗎啉基)-2-羥基-丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮中，加入10ml的乙醇和10ml的10％氫氧化鈉溶液，并將反應(yīng)混合物加熱回流2小時(shí)。將乙醇減壓下蒸發(fā)，通過加入氫氯酸將殘余物的pH調(diào)節(jié)至8。將沉淀的油狀產(chǎn)物用二氯甲烷萃取，有機(jī)溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸發(fā)溶劑。通過加入馬來(lái)酸在丙酮溶液中沉淀馬來(lái)酸鹽。于是獲得了1.1g的標(biāo)題化合物。M.p.128-130℃。
1H-NMR(CDCl3+DMSO-d6)δ＝2.8-3.2(6H，嗎啉-3，5-CH2，丙基-3-CH2-)，3.3-3.8(6H，m，嗎啉-2，6-CH2，丙基-1-CH2)，4.10(1H，m，CH-OH)，6.05(4H，s，馬來(lái)酸CH)，6.75(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.30(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.3(3H，m，ArH)，7.50(2H，m，ArH)。
實(shí)施例14N-[3-(1-甲基-4-哌嗪基)-2-羥基丙基]肉桂酸偕胺肟三氫馬來(lái)酸鹽按照實(shí)施例7所述方法制備的1.17g(0.0025mol)的3-苯乙烯基-4-[3-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-羥基丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與氫氧化鈉按照實(shí)施例13描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。通過加入馬來(lái)酸在丙酮中沉淀馬來(lái)酸鹽。于是獲得了0.63g的標(biāo)題化合物。M.p.142-143℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝2.7(3H，s，CH3)，2.5-3.2(10H，m，哌嗪-CH2，丙基-3-CH2)，3.31-3.42(2H，m，丙基-1-CH2)，3.81(1H，m，CH-OH)，6.14(6H，s，馬來(lái)酸CH)，6.90(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.28(1H，d，Ar-CH＝CH)，7.4(3H，m，ArH)，7.65(2H，m，ArH)。
實(shí)施例15N-(3-(4-嗎啉基)-2-羥基丙基)-3，4-二甲氧基肉桂酸偕胺肟
3.91g(0.01mol)的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(3-(4-嗎啉基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮與氫氧化鈉按照實(shí)施例13描述的方法進(jìn)行反應(yīng)。于是獲得了1.2g的標(biāo)題化合物，為油狀物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝3.18-3.35(6H，嗎啉-3，5-CH2，丙基-3-CH2)，3.60(2H，m，丙基-1-CH2)，3.82(3H，s，OCH3)，3.86(3H，s，OCH3)，3.92(4H，m，嗎啉-2，6-CH2)，4.34(1H，m，-CH-OH)，6.3(1H，br，-CH-OH)，6.98(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.02(1H，m，Ar-3H)，7.24(1H，m，Ar-2H)，7.35(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.40(1H，m，Ar-6H)。
實(shí)施例163-苯乙烯基-6-(哌啶子基甲基)-4H-5，6-二氫-1，2，4-噁二嗪向1.65g(0.0043mol)的3-苯乙烯基-4-(3-(1-哌啶基)-2-氯-丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽中，加入33ml的乙醇和33ml的2N氫氧化鈉水溶液的混合物，攪拌下將反應(yīng)混合物加熱回流30分鐘，然后減壓下蒸發(fā)，并將此殘余物懸浮于10ml的水中。將結(jié)晶過濾，用水洗滌，并干燥。于是獲得了1.06g的標(biāo)題化合物。M.p.147-149℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝1.3-1.7(6H，m，哌啶-3，4，5-CH2)，2.3-2.7(6H，m，哌啶-2，6-CH2，6-CH2)，3.253.6(2H，m，噁二嗪-5-CH2)，3.95(1H，m，噁二嗪-6-CH)，5.0(1H，br，噁二嗪-4-NH)，6.5(1H，d，Ar-CH＝CH-)，6.9(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.2-7.5(5H，m，ArH)。
用作起始物的3-苯乙烯基-4-(3-(1-哌啶基)-2-氯丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽由3-苯乙烯基-4-(3-(1-哌啶基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽(按照實(shí)施例2所述制備)與亞硫酰氯按照文獻(xiàn)[Chem.Ber.，108，1911(1975)]中已知的方法制備。
實(shí)施例173-苯乙烯基-6-(4-嗎啉基)-甲基-4H-5，6-二氫-1，2，4-噁二嗪二氫馬來(lái)酸鹽向1.5g(0.0039mol)的3-苯乙烯基-4-(3-(4-嗎啉基)-2-氯-丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽中，加入9ml的乙醇和9ml的10％氫氧化鈉水溶液，并將反應(yīng)混合物加熱回流半小時(shí)。將乙醇減壓下蒸發(fā)，殘余物用5％鹽酸酸化。將所得溶液用炭處理，過濾，并通過加入10％氫氧化鈉水溶液變?yōu)閴A性。沉淀的油狀物用氯仿萃取，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，并蒸發(fā)溶劑。將此殘余物溶解于乙酸乙酯，并加入0.66g的馬來(lái)酸的乙酸乙酯溶液。于是獲得了1.0g的標(biāo)題化合物。M.p.137℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝3.1-3.44(8H，m，5-CH2，6-CH2，嗎啉-3-和-5-CH2)，3.83(4H，m，嗎啉-2-和-6-CH2)，4.08(1H，m，6-CH)，6.18(4H，s，馬來(lái)酸CH)，6.43(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.25(1H，br，4H)，7.33-7.51(5H，m，5 Ar-H)，13-14(br，馬來(lái)酸OH)。
用作起始物的3-苯乙烯基-4-(3-(4-嗎啉基)-2-氯丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽由3-苯乙烯基-4-(3-(4-嗎啉基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽(按照實(shí)施例5制備)，通過將其與亞硫酰氯加熱，然后蒸發(fā)反應(yīng)混合物來(lái)制備。
實(shí)施例183-苯乙烯基-6-(1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基)-甲基-4H-5，6-二氫-1，2，4-噁二嗪二氫馬來(lái)酸鹽向1.1g(0.0025mol)的3-苯乙烯基-4-[3-(1，2，3，4-四氫-2-異喹啉基)-2-氯丙基-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽中，加入8ml的乙醇和8ml的10％氫氧化鈉，并將反應(yīng)混合物加熱回流半小時(shí)。將乙醇減壓下蒸發(fā)，并將此殘余物溶解于5％鹽酸中。將此溶液用炭處理，過濾，通過加入10％氫氧化鈉水溶液變?yōu)閴A性，并用乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，并蒸發(fā)。將此殘余物溶解于乙酸乙酯，并向所得溶液中加入0.36g的馬來(lái)酸。于是獲得了0.55g的標(biāo)題化合物。M.p.151-153℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝3.10(2H，m，異喹啉-4-CH2)，3.15-3.50(2H，m，噁二嗪-5-CH2)，3.28-3.39(2H，m，噁二嗪6-CH2-N＝)，3.44-3.6(2H，m，異喹啉-3-CH2)，4.2(1H，m，噁二嗪-6-CH)，4.4(2H，s，異喹啉-1-CH2)，6.13(4H，s，馬來(lái)酸CH)，6.44(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.15(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.2-7.33(4H，m，異喹啉Ar-H)，7.33-7.52(5H，m，苯基Ar-H)。
實(shí)施例193-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-[3-(叔丁基氨基)-2-羥基-丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽將8.54g(0.025mol)的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(3-氯-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮溶解于40ml的丙酮中，并向所得溶液中加入3.46g(0.025mol)的無(wú)水碳酸鉀。將反應(yīng)混合物加熱回流6小時(shí)，然后冷卻，過濾除去無(wú)機(jī)鹽，減壓下蒸發(fā)溶劑。用25ml甲醇研磨蒸發(fā)后的殘余物誘發(fā)結(jié)晶。于是獲得了6.5g的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(2，3-環(huán)氧丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮。M.p.113-115℃。
向3.04g(0.01mol)的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(2，3-環(huán)氧丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮中，加入15ml的甲醇和0.73g(0.01mol)的叔丁基胺，將反應(yīng)混合物加熱回流4小時(shí)，然后減壓下蒸發(fā)溶劑。將此殘余物溶解于10ml的5％鹽酸，并從不溶的殘余物中傾析出溶液。此水溶液通過加入10％氫氧化鈉水溶液變?yōu)閴A性，將所形成的油狀物溶解于二氯甲烷，將此溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)溶劑。得到1.7g的油狀物，通過加入含氯化氫的異丙醇將此油狀物從乙醇中沉淀。于是獲得了1.0g的標(biāo)題化合物。M.p.225-227℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝1.3(9H，s，3xCH3)，2.93-3.17(2H，m，丙基-3-CH2)，3.80(3H，s，-OCH3)，3.85(3H，s，-OCH3)，3.9(2H，d，丙基-1-CH2)，4.16(1H，m，-CH-OH)，6.12(1H，d，-OH)，7.03(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.51(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.00(1H，m，ArH)，7.29(1H，m，ArH)，7.49(1H，m，ArH)，8.58(1H，br，NH)，8.86(1H，br，NH)。
實(shí)施例203-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(3-(4-嗎啉基)-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽3.04g(0.01mol)的3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-4-(2，3-環(huán)氧丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮(按照實(shí)施例19所述制備)與0.96g(0.011mol)的嗎啉以實(shí)施例19所述的方法進(jìn)行反應(yīng)。于是獲得了0.8g的標(biāo)題化合物。M.p.228-230℃。
1H-NMR(DMSO-d6)δ＝3.2-3.34(6H，m，嗎啉-3，5-CH2，丙基-3-CH2)，3.82(3H，s，-OCH3)，3.86(2H，d，丙基-1-CH2)，3.88(3H，s，-OCH3)，3.90(4H，m，嗎啉-2，6-CH2)，4.43(1H，m，-CH-OH)，6.4(1H，br，-OH)，7.0(1H，d，ArH)，7.03(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.29(1H，m，ArH)，7.48(1H，m，ArH)，7.50(1H，d，Ar-CH＝CH-)，10.7(1H，br，+NH)。
實(shí)施例21N-[3-(2，6-二甲基苯氨基)-2-羥基丙基]-肉桂酸偕胺肟按照實(shí)施例12的方法，不同的是1.5g(0.004mol)的3-苯乙烯基-4-[3-(2，6二甲基苯氨基)-2-羥基丙基]-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮(按照實(shí)施例9制備)用作起始物。于是獲得了0.55g的標(biāo)題化合物。
M.p.143-144℃。
1H-NMR(DMSO-d，)δ＝2.20(6H，s，2xCH3)，2.82-3.03(2H，m，丙基-3-CHz)，3.15-3.27(2H，m，丙基-1-CH2)，3.64(1H，m，-CH-OH)，3.80(1H，m，NH-苯胺)，5.15(1H，br，-CH-OH)，5.58(1H，br，NH-偕胺肟)，6.68(1H，d，Ar-CH＝CH-)，6.69(1H，m，ArH)，6.90(2H，m，ArH)，7.01(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.25-7.55(5H，m，ArH)，9.57(1H，S，＝N-OH)。
實(shí)施例22N-(3-(1-吡咯烷基)-2-羥基丙基)-肉桂酸偕胺肟按照實(shí)施例12的方法，不同的是1.23g(0.0035mol)的3-苯乙烯基-4-(3-吡咯烷-2-羥基丙基)-Δ2-1，2，4-噁二唑啉-5-酮鹽酸鹽(按照實(shí)施例3制備)用作起始物。于是獲得了0.65g的標(biāo)題化合物。M.p.139-141℃(由96％乙醇結(jié)晶)。
1H-NMR(CDCl3+DMSO-d5)δ＝1.75(4H，m，吡咯烷-3，4-CH2)，2.50-2.64(6H，m，吡咯烷-2，5-CH2，丙基-3-CH2)，3.2-3.35(2H，m，丙基-1-CH2)，3.75(1H，m，CH-OH)，5.6(1H，t，NH)，6.58(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.08(1H，d，Ar-CH＝CH-)，7.25-7.45(5H，m，Ar-H)，9.0(1H，br，＝N-OH)。
權(quán)利要求
1.下式的新的丙烯羧酸偕胺肟衍生物及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物 其中R表示C1-C20烷基、苯基，其中后者被1-3個(gè)取代基任選地取代--其中取代基是鹵原子和/或C1-C2烷基和/或C1-C2烷氧基和/或氨基和/或(C1-C4烷基)氨基和/或二(C1-C4烷基)氨基和/或(C1-C4烷?；?氨基--，此外還表示5-或6-員飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)，其中含有一個(gè)或兩個(gè)氮原子或一個(gè)硫原子作為雜原子且所述雜環(huán)基團(tuán)任選地與一個(gè)或多個(gè)苯環(huán)和/或一個(gè)或多個(gè)雜環(huán)基團(tuán)稠合，而R′表示氫原子，或R與R′一起形成C5-C7環(huán)烷基，其任選地與苯環(huán)稠合，R4和R5獨(dú)立地表示氫原子、C1-C5烷基、C1-C5烷酰基或苯基，其中后者被1-3個(gè)取代基任選地取代--其中取代基是鹵原子和/或C1-C2烷基和/或C1-C2烷氧基--，或R4和R5與相鄰的氮原子一起形成5-或6-員飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)，其可以含有另一個(gè)氮原子和/或氧原子和/或硫原子作為雜原子并可以與苯環(huán)稠合，且此雜環(huán)基團(tuán)和/或此苯環(huán)可以帶有一個(gè)或兩個(gè)取代基，其中該取代基是鹵原子和/或C1-C2烷基和/或C1-C2烷氧基，R1和R2表示氫原子，而R3指氫原子、羥基或C1-C5烷氧基，或R1與R2一起形成羰基或硫羰基，其中的碳原子與比鄰R1的氧原子和比鄰R2的氮原子結(jié)合，而R3表示氫原子，鹵原子，羥基，C1-C5烷氧基，C1-C5烷硫基，C1-C20烷酰氧基，含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的C3-C22鏈烯酰氧基，甲磺酰氧基，苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，或R2是氫原子，而R1與R3一起在比鄰R1的氧原子和比鄰R3的碳原子之間形成一個(gè)價(jià)鍵。
2.權(quán)利要求1所述的下式的丙烯羧酸偕胺肟衍生物 其中R1和R2表示氫原子，R3表示氫原子、羥基或C1-C5烷氧基，R，R′，R4和R5定義如權(quán)利要求1，及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。
3.權(quán)利要求1所述的下式的噁二唑啉衍生物 其中R1與R2一起形成羰基或硫羰基，其中的碳原子與比鄰R1的氧原子和比鄰R2的氮原子結(jié)合，R3表示氫原子、鹵原子、羥基、C1-C5烷氧基、C1-C5烷硫基、C1-C20烷酰氧基、含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的C3-C22鏈烯酰氧基、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，X表示氧原子或硫原子，R，R′，R4和R5定義如權(quán)利要求1，及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。
4.權(quán)利要求1所述的下式的噁二嗪衍生物 其中R2是氫原子，而R1與R3一起在比鄰R1的氧原子和比鄰R3的碳原子之間形成一個(gè)價(jià)鍵，R、R′、R4和R5定義如權(quán)利要求1，及其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。
5.式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，及其N-氧化物、藥用酸加成鹽和季銨鹽衍生物的制備方法，其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如權(quán)利要求1，其特征在于a)為了制備式Ia的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R1、R2和R3表示氫原子，R、R′、R4和R5定義如式I，下式的丙烯衍生物 其中R、R′、R3、R4和R5定義如上，Y表示鹵原子或式-SR6的基團(tuán)，其中R6指氫原子或C1-C4烷基，與羥胺反應(yīng)；或b)為了制備式Ia的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R1和R2表示氫原子，R3表示氫原子或羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R、R′、R3、R4和R5定義如上，X表示氧原子或硫原子，與堿金屬氫氧化物的水溶液反應(yīng)；或c)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示氫原子，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，下式的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物 其中R和R′定義如上，與下式的氨基烷基鹵化物反應(yīng) 其中Z指鹵原子，R3、R4和R5定義如上；或d)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示氫原子或羥基，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與下式的1，3-二鹵代丙烷反應(yīng) 其中Z和Z1獨(dú)立地表示鹵原子，R3定義如上，并將所得下式的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基鹵化物 其中R、R′、R3和Z定義如上，與下式的胺反應(yīng) 其中R4和R5定義如上；或e)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示羥基，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式I II的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)，并將所形成的下式的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基氯 其中R和R′定義如上，與式VII的胺反應(yīng)，其中R4和R5定義如上；或f)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示羥基，X表示氧原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式VIII的Δ2-1，2，4-噁二唑啉基烷基氯，其中R和R′定義如上，與酸結(jié)合劑反應(yīng)，并將所形成的下式的環(huán)氧化物 其中R和R′定義如上，與式VII的胺反應(yīng)，其中R4和R5定義如上；或g)為了制備式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R3表示氫原子或羥基，X表示氧原子或硫原子，R、R′、R4和R5定義如式I，式Ia的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R、R′、R3、R4和R5定義如上，與下式的碳酸衍生物反應(yīng) 其中X定義如上，Z2和Z3獨(dú)立地表示鹵原子、C1-C4烷氧基或C1-C4烷巰基；或h)為了制備式Ic的噁二嗪衍生物，其中R、R′、R4和R5定義如式I，式Ib的噁二唑啉衍生物，其中R、R′、R4和R5定義如上，X表示氧原子或硫原子，R3指鹵原子、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，在水的存在下與堿金屬氫氧化物反應(yīng)；或i)為了制備式Ic的噁二嗪衍生物，其中R、R′、R4和R5定義如式I，下式的環(huán)化合物 其中R和R′定義如上，R7表示鹵原子、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基，與式VII的胺反應(yīng)，其中R4和R5定義如上；或j)為了制備下式的季銨鹽衍生物 其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如式I，R8表示C1-C4烷基或苯基(C1-C4烷基)基團(tuán)，Y表示鹵原子或式R8-SO4的基團(tuán)，其中R8定義如上，式III的Δ2-1，2，4-噁唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與下式的季銨烷基鹵化物反應(yīng) 其中R3、R4、R5、R8和Y定義如上，Z表示鹵原子；或k)為了制備下式的N-氧化物 其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如式I，式III的Δ2-1，2，4-噁二唑啉衍生物，其中R和R′定義如上，與下式的化合物反應(yīng) 其中R3、R4和R5定義如上，Z表示鹵原子；且如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與鹵化試劑反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3是鹵原子；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與C1-C20烷基酰鹵化物或含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的C3-C22烯基酰鹵化物反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3表示C1-C20烷酰氧基或C3-C22烯酰氧基；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與C1-C5烷基鹵化物反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3表示C1-C5烷氧基；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示鹵原子，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與C1-C5烷醇或C1-C5硫代烷醇的堿金屬鹽反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3指C1-C5烷氧基或C1-C5烷硫基；或如果需要，所得式Ib的化合物，其中R3表示羥基，R、R′、R4和R5定義如式I，X表示氧原子或硫原子，與甲基磺?；u化物、苯磺?；u化物或甲苯磺?；u化物反應(yīng)得到式Ib的化合物，其中R3表示甲基磺酰氧基，苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基；且如果需要，所得式I的化合物與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)得到藥用酸加成鹽，或由酸加成鹽得到游離堿，和/或用烷基化試劑將式I化合物的一個(gè)或多個(gè)氮原子季銨化，和/或式I的化合物與氧化劑反應(yīng)將其一個(gè)或多個(gè)氮原子轉(zhuǎn)變?yōu)镹-氧化物。
6.藥物組合物，其中含有式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物或其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物作為活性組分，其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如權(quán)利要求1，還含有一種或多種常規(guī)載體。
7.權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中含有式Ia的丙烯-羧酸偕胺肟衍生物或其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物作為活性組分，其中R、R′、R3、R4和R5定義如權(quán)利要求2。
8.權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中含有式Ib的噁二唑啉衍生物或其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物作為活性組分，其中R、R′、R3、R4、R5和X定義如權(quán)利要求3。
9.權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中含有式Ic的噁二嗪衍生物或其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物作為活性組分，其中R、R′、R4和R5定義如權(quán)利要求4。
10.式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物的藥物用途，包括給患有與氧和/或能量缺乏有關(guān)的病癥、或基于PARP抑制的疾病特別是自身免疫性或神經(jīng)變性疾病和/或病毒疾病、和/或中毒引起的疾病的患者，使用無(wú)毒量的式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如權(quán)利要求1，或其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。
11.式I的丙烯羧酸偕胺肟衍生物，其中R、R′、R1、R2、R3、R4和R5定義如權(quán)利要求1，或其N-氧化物或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物，在制備適于治療與氧和/或能量缺乏有關(guān)的病癥、或基于PARP抑制的疾病特別是自身免疫性或神經(jīng)變性疾病和/或病毒疾病、和/或中毒引起的疾病的藥物組合物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的丙烯羧酸偕胺肟衍生物及其N－氧化物和/或幾何異構(gòu)體和/或旋光異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽和/或季銨鹽衍生物。這些新的化合物適于治療與氧和/或能量缺乏有關(guān)的病癥、或基于PARP抑制的疾病特別是自身免疫性或神經(jīng)變性疾病和/或病毒疾病、和/或中毒引起的疾病。
文檔編號(hào)C07D413/06GK1426392SQ01808440
公開日2003年6月25日 申請(qǐng)日期2001年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月20日
發(fā)明者P·利特拉迪納吉, B·蘇米基, K·塔卡克斯 申請(qǐng)人:N基因研究實(shí)驗(yàn)室公司