專利名稱：制備抗葉酸劑的方法和中間體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成有機化學(xué)。具體地講，本發(fā)明涉及用于合成有價值的抗葉酸化合物的中間體的制備方法。
將具有抗葉酸活性的化合物用作治療癌癥的化療試劑是熟知的。式Ⅴ的一系列N-(6-氨基(吡咯并(2，3-d)嘧啶-3-基?；?-谷氨酸衍生物 其中Y是、O或S；R3是氫原子、氯或氟；R4是羥基、羧基保護基或NHCH*(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5；R5是氫原子或羧基保護基；R6是氫原子或氨基保護基；R7是羥基或氨基；且*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型是S型；及其藥用鹽作為抗葉酸劑或其中間體公開于美國專利4684653和4882334。
公開于美國專利4684653和4882334的式Ⅴ化合物合成的關(guān)鍵步驟是下式Ⅵ化合物的氫化
其中Z1和Z2都是氫原子或一起形成化學(xué)鍵；R4′是羧基保護基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′；R5′是羧基保護基；且R6′是氨基保護基；以式Ⅴ(a)化合物的異構(gòu)體混合物為條件 所得式Ⅴ(a)的化合物選擇性地除去保護基后得到式(Ⅴ)化合物的異構(gòu)體混合物。
美國專利4684653和4882334進一步教導(dǎo)式Ⅴ的單一非對映異構(gòu)體可以通過色譜簡單地拆分或優(yōu)選該單一非對映異構(gòu)體可以通過與手性酸(如樟腦磺酸)形成非對映異構(gòu)鹽，隨后將這些非對映異構(gòu)體之一選擇結(jié)晶來拆分。
美國專利4684653和4882334指出式Ⅵ的化合物可以通過先將式Ⅶ化合物與式Ⅷ化合物偶合得到 其中X是溴或碘；在反應(yīng)在如Sakamoto于Synthesis，1983，312(參照下文)中描述的鈀／三取代的膦催化劑存在下進行。
上述合成具有很多缺陷。就工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)而言，用貴金屬催化劑成本高，需要純化和環(huán)境保證，并可能由于催化反應(yīng)中處于合適氧化態(tài)／復(fù)合物形式的貴金屬量的改變而不穩(wěn)定。此外，如果接著進行如上所述的優(yōu)選的結(jié)晶分離方法，過濾分離非對映異構(gòu)體后，濾液會含有兩種非對映異構(gòu)體的混合物。此濾液常不適于通過結(jié)晶進一步分離，于是如果不借助不必要的色譜分離，分離效果就不好。在某些情況下，例如，當(dāng)Y是S，R3是氫原子，R4是NHCH*(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，而R7是羥基時，在濾液／餾份中可以發(fā)現(xiàn)約80％的所需異構(gòu)體(具有較強抗葉酸活性的)。
對現(xiàn)有技術(shù)的改進將不依賴于貴金屬催化來制備式Ⅵ化合物并將增加式Ⅵ的所需非對映異構(gòu)體從含兩種非對映異構(gòu)體的混合物中通過結(jié)晶分離的絕對收率。
本發(fā)明涉及式Ⅲ化合物或其鹽或溶劑化物 其中Y是、O或S；R是C1-C6烷基；R1和R2獨立地為C1-C6烷基或一起與它們連接的氮原子形成雜環(huán)；R3是氫原子、氯或氟；R4是羥基、羧基保護基或NHCH*(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型為S型；而R5是氫原子或羧基保護基。
本發(fā)明還涉及式Ⅳ的化合物或其鹽或溶劑化物 其中
R6是氫原子或氨基保護基；而R7是羥基或氨基。
此外，本發(fā)明涉及制備式Ⅳ化合物的方法 該方法包括式Ⅲ(a)的化合物 其中R4′是羧基保護基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′，其中*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型為S型；R5′是羧基保護基；與2，4-二氨基-6-羥基嘧啶在適宜的酸和溶劑的存在下反應(yīng)。
此外，本發(fā)明還涉及制備Ⅳ化合物或其鹽或溶劑化物的方法，該方法包括式Ⅴ(b)的化合物或其鹽或溶劑化物
與氧化劑在適宜的溶劑存在下反應(yīng)。
化合物本申請的通式中，一般的化學(xué)術(shù)語具有其常用的含義。例如，術(shù)語“C1-C4烷基”指甲基、乙基、丙基、異丙基、環(huán)丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基和環(huán)丁基。術(shù)語“C1-C6烷基”包括C1-C4烷基中所列舉的，另外還包括脂族的直鏈、支鏈或環(huán)，含5或6個碳原子的單價部分，包括但不限于戊基、環(huán)戊基、己基、環(huán)己基、2-甲基戊基等。術(shù)語“C1-C4烷氧基”指通過氧原子連接的C1-C4烷基。
術(shù)語“鹵素”或“鹵原子”指氯、溴或碘。
術(shù)語“雜環(huán)”指5或6元飽和的、部分飽和的或芳香雜環(huán)，其中含氮原子并可以選擇性地含有其它選自N、S或O的雜原子。
術(shù)語“羧基保護基”指當(dāng)在化合物的其它官能基進行反應(yīng)時常用來封閉或保護羧基官能度的羰基的取代基。當(dāng)與其連接的羰基在一起時，該取代基可以形成酯，例如，C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、取代的C2-C6鏈烯基、芐基、取代的芐基、二苯甲基、取代的二苯甲基、三苯甲基、取代的三苯甲基及三烷基甲硅烷基酯。只要該衍生后的羧基在隨后的反應(yīng)(一個或多個)中穩(wěn)定并可以在不破壞分子的剩余部分的適當(dāng)點除去，對羧基保護基的確切種類就無嚴(yán)格限制。當(dāng)R4含羧基保護基時，保護基優(yōu)選C1-C4烷氧基或芐氧基。最優(yōu)選的保護基是甲氧基、乙氧基和芐氧基?！巴ㄟ^催化氫化除去”的羧基保護基，例如，包括芐基保護基。這些基團的其它實例描述于T．W．Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis，”(John Wileyand Sons，New York，N．Y．，)(2nd ed．，1991)(下文中稱為Greene)，第5章。
術(shù)語“C2-C6鏈烯基”指單不飽和的、單價的、含2至6個碳原子的烴部分，其可以是支鏈或直鏈構(gòu)型。該術(shù)語的實例例如，但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基和戊烯基。
術(shù)語“取代的C1-C6烷基”和“取代的C2-C6鏈烯基”指分別被鹵素、苯基、三(C1-C4烷基)甲硅烷基或取代的苯磺?；毩⒌厝〈?至3次的C1-C6烷基及C2-C6鏈烯基。
術(shù)語“取代的芐基”、“取代的二苯甲基”及“取代的三苯甲基”指分別被硝基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基或羥基(C1-C6)烷基獨立地取代1至5次的芐基、二苯甲基和三苯甲基。這些取代將只以立體化學(xué)可行的方式存在以便該部分是化學(xué)穩(wěn)定的。
術(shù)語“三烷基甲硅烷基”指被C1-C6烷基獨立地取代3次的單價甲硅烷基。
術(shù)語“取代的苯磺?；敝钙渲斜交糠直籆1-C6烷基、硝基或鹵素在對位取代的苯基部分。
在本說明書中使用的術(shù)語“氨基保護基”指當(dāng)該化合物的其它官能基反應(yīng)時常用來封閉或保護該氨基功能度的氨基的保護基。當(dāng)與其連接的氮原子在一起時，該氨基保護基可以形成環(huán)酰亞胺，例如，鄰苯二甲酰亞氨基和四氯鄰苯二甲酰亞氨基；氨基甲酸酯，例如甲基，乙基和9-氟enyl-甲基氨基甲酸酯；或酰胺，例如，N-甲酰氨基或N-乙酰胺。只要在該中間體分子的其它位置的隨后反應(yīng)(一個或多個)條件下此衍生的氨基是穩(wěn)定的并可以在不破壞此分子的其余部分包括其它氨基保護基(一個或多個)前提下在適當(dāng)?shù)奈稽c除去，所用氨基保護基的確切種類無嚴(yán)格限制。一般來說，優(yōu)選通過酸水解除去的氨基保護基，即對酸不穩(wěn)定的那些氨基保護基是優(yōu)選的。因此，優(yōu)選的氨基保護基是2，2-二甲基-1-氧丙基。上述術(shù)語所指的其它基團的實例和方法描述于Greene，第7章。
本文中所用術(shù)語“藥用鹽”和“鹽”指通過本發(fā)明化合物與無機酸或有機酸(例如，鹽酸、氫溴酸、氫碘酸或?qū)妆交撬?或無機堿(例如，鈉、鉀、鋰和鎂的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)反應(yīng)制備的鹽。這些鹽為酸加成鹽和堿加成鹽。這些鹽的其它實例見，例如，Berge S．M，Bighley，L．D．，and Monkhouse，D．C．，J．Pharm．Sci．，66，1，1977。
術(shù)語“溶劑化物”指含一個或多個溶質(zhì)分子，如式Ⅲ或Ⅳ化合物，和一個或多個溶劑分子的聚集物。
試劑術(shù)語“適宜的溶劑”指對所進行反應(yīng)為惰性的、足以溶解反應(yīng)物得到一種介質(zhì)、在該介質(zhì)中能進行所需反應(yīng)的任何溶劑或溶劑的混合物。
術(shù)語“適宜的酸”指Ka低得能進行所需反應(yīng)而不顯著帶來任何不需要的反應(yīng)的酸。
術(shù)語“氧化劑”指氧化電位高得足以進行所需反應(yīng)而不顯著帶來任何不需要的反應(yīng)的試劑。適宜的氧化劑包括金屬如鎳、鈀、鉑等；固體載體上的金屬如鈀碳或鉑碳等；金屬復(fù)合物如汞(Ⅱ)、二氧化錳或醋酸銅(Ⅱ)及含苯醌的氧化劑如2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)和四氯-1，4-苯醌(氯醌)等。
術(shù)語“熱力學(xué)堿”指使酸性底物進行可逆的脫質(zhì)子反應(yīng)的堿，或者作為給定的副產(chǎn)物產(chǎn)生的質(zhì)子的質(zhì)子捕獲物并其反應(yīng)性足以進行所需的反應(yīng)而不顯著帶來任何不需要的反應(yīng)的堿。熱力學(xué)堿的實例包括但不限于乙酸鹽、乙酸鹽二水合物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、C1-C4醇化物和氫氧化物(例如，鋰、鈉或鉀的乙酸鹽、乙酸鹽二水合物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、C1-C4醇化物或氫氧化物)、三(C1-C4烷基)胺或含芳香氮原子的雜環(huán)(例如，咪唑和吡啶)。
合成如下方案1所示，可以由式Ⅰ和Ⅱ的化合物制備式Ⅲ的化合物，其中Lg是氯、溴、碘、OSO2Me、OSO2-苯基或OSO2-對甲苯基，而R、R1、R2、R3、R4、R4′和Y定義如上。
方案1 可以將式Ⅰ的化合物加入到溶解或懸浮于適宜溶劑中的式Ⅱ化合物中，在熱力學(xué)堿的存在下，形成式(Ⅲa)的化合物。優(yōu)選且便利的溶劑是二氯甲烷。優(yōu)選且便利的堿是三乙胺。較式Ⅱ化合物而言，優(yōu)選使用一當(dāng)量的堿和式Ⅰ化合物，但是稍過量0．01至0．1當(dāng)量是可以允許的。該反應(yīng)可以在-78℃至室溫下進行，但優(yōu)選-25℃至-20℃。該反應(yīng)一般在30分鐘至18小時內(nèi)完成，但是當(dāng)在優(yōu)選的溫度下進行時，其在1至3小時內(nèi)完成。在式Ⅰ化合物中優(yōu)選的鹵代物是氯化物。R優(yōu)選C1-C4烷基，特別是甲基或乙基。R1和R2優(yōu)選C1-C4烷基，但是當(dāng)兩個都為甲基或乙基時是特別優(yōu)選的。優(yōu)選R4′是羧基保護基，其中保護基是C1-C4烷氧基，特別是甲氧基或乙氧基，或是可以通過催化氫化除去的基團，例如，芐氧基(如下述方案3)。在整個說明書中，R3優(yōu)選是氫原子而Y優(yōu)選是或S。
雖然所得式Ⅲ(a)化合物可以如Greene所述除去其羧基保護基，但是為了方案1-3全部方法的進行，當(dāng)進行方案2的反應(yīng)(一個或多個)時，該羧基保護基優(yōu)選是不變的。
通過下述方案2所示的新方法，可以由式Ⅲ(a)的化合物制備式Ⅳ的化合物，其中R、R1、R2、R3、R4、R4′、R6、R7和Y定義如上。
方案2 可以將2，4-二氨基-6-羥基嘧啶或2，4-二氨基嘧啶-6-酮(下文中稱為2，4-二氨基-6-羥基嘧啶)的互變異構(gòu)體混合物加入到溶解或懸浮于適宜溶劑的式Ⅲ(a)化合物中，在適宜酸的存在下，得到式Ⅳ(a)化合物。便利且優(yōu)選的溶劑是乙腈和水的約1∶1(v∶v)的混合物。乙腈和水的比例不是嚴(yán)格的，但是當(dāng)所有的起始物混合時，優(yōu)選此比例適于形成溶液。便利且優(yōu)選的酸是乙酸。該酸一般以摩爾過量使用。例如，較式Ⅲ(a)化合物而言，一般使用約2至4當(dāng)量，優(yōu)選3當(dāng)量。較式Ⅲ(a)化合物而言，2，4-二氨基-6-羥基咪啶的當(dāng)量數(shù)不是嚴(yán)格的但優(yōu)選約1-2當(dāng)量，更優(yōu)選的量是約1至約1．5當(dāng)量，首先約1至約1．1當(dāng)量。此反應(yīng)在室溫至該混合物的回流溫度下進行，但是優(yōu)選在該混合物的回流溫度下進行。此外，根據(jù)反應(yīng)溫度該反應(yīng)可以進行12至約48小時。當(dāng)此反應(yīng)在此混合物的回流溫度下進行時，一般在約18小時內(nèi)基本完成反應(yīng)。R優(yōu)選是C1-C4烷基，特別是甲基或乙基。R1和R2優(yōu)選C1-C4烷基，但是當(dāng)兩個都為甲基或乙基時是特別優(yōu)選的。R3優(yōu)選氫，如上所述，優(yōu)選R4′是羧基保護基，其中保護基是C1-C4烷氧基，特別是甲氧基或乙氧基，或是可以通過催化氫化除去的基團，例如，芐氧基(如下述方案3)。
如上述美國專利4882334所述，其中R7是氨基的式Ⅳ化合物可以由式Ⅳ(a)化合物制備，但是優(yōu)選R7是羥基。
R6是氨基保護基的式Ⅳ化合物可以如Greene所教導(dǎo)的或如下文中制備例8所述，由式Ⅳ(a)化合物制備。此外，氨基保護基，優(yōu)選如下述方案5所述通過酸水解可除去的，例如，存在于R6中的2，2-二甲基-1-氧丙基，或氨基在進行下述方案3所述氫化反應(yīng)前質(zhì)子化，這些是必要的。此外，雖然式Ⅳ(a)化合物可以如Greene所指出的那樣除去羧基保護基，但是為了進行方案2-3的整體反應(yīng)，當(dāng)進行方案3的反應(yīng)時優(yōu)選該羧基保護基保持不變。
如下述方案3所示，式Ⅴ(b)化合物的異構(gòu)體混合物可以由式Ⅳ(b)化合物制備，其中R3、R4、R6′、R7和Y定義如上。 如方案1和2所述制備的式Ⅳ(b)化合物，可以基本如美國專利4684653和4882334所述進行氫化，將其中教導(dǎo)引入作為參考。為了與這兩篇參考文獻銜接，本發(fā)明的式Ⅳ(b)化合物相應(yīng)于美國專利4684653的式Ⅲ化合物和美國專利4882334的式Ⅱ化合物。優(yōu)選R6′上的氨基保護基如Greene所指出的方法除去，但是在下述方案4和5所述繼續(xù)進行分離時保持不變。
如果用R4位帶有優(yōu)選基團即羧基保護基的式Ⅳ(b)化合物進行方案3的方法，且該保護基通過催化氫化除去時，則此保護基將通過方案3的氫化反應(yīng)條件除去。除去后形成的R4是羥基的式Ⅴ(b)化合物有利于抗葉酸劑終產(chǎn)物即手性谷氨酸中R4基團的合成，具體討論如下。
具有抗葉酸活性的式Ⅴ化合物為R4是NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5而R6是氫原子(此后稱為“終產(chǎn)物”)的化合物，因此這些化合物是優(yōu)選的。雖然在本發(fā)明的整體方法中谷氨酸的側(cè)鏈可以在任何時間點合成，但是當(dāng)方案1、2、3的方法順序進行時，就上述優(yōu)選的基團而言，合成谷氨酸殘基的優(yōu)選時間是在如方案3所述進行氫化反應(yīng)之后。這通過將R4是羥基的式Ⅴ或Ⅴ(b)化合物與羧基保護的谷氨酸衍生物式NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′偶合來完成，其反應(yīng)方式總體上描述于PCT申請WO86／05181，使用的是形成肽鍵的常規(guī)縮合技術(shù)。這些技術(shù)包括通過形成混合酸酐或酰氯將羧基活化，用二環(huán)己基碳二亞胺處理，或使用二苯基氯代磷酸鹽。形成此酰胺鍵的總方法的進一步教導(dǎo)，例如見Badanszky，M．，Principles of Peptide Synthesis，第二版，Springer-Verlag，Berlin，Heidelberg，1993。當(dāng)進行方案4和5的方法時，優(yōu)選存在此谷氨酸側(cè)鏈，而兩個方案中該側(cè)鏈上的R5基團都是羧基保護基，例如，C1-C6烷氧基。有關(guān)下述方案4和5的所有討論和結(jié)構(gòu)與如下情況有關(guān)，其中在R4位存在優(yōu)選的取代基，但是這些取代基對于方案4和5方法的操作是不需要的。
終產(chǎn)物式Ⅴ化合物中，優(yōu)選如下所示的式Ⅴ(c)(R)化合物，這是由于其較式Ⅴ(c)(S)而言抗葉酸活性高。如上所述制備的或在上述引入的參考文獻美國專利4684653和4882334中制備的這些單一非對映異構(gòu)體的終產(chǎn)物，可以按照那些專利中的教導(dǎo)分離，即通過色譜或優(yōu)選重結(jié)晶的方式。例如，可以使用適當(dāng)選擇的手性酸形成更適于對一種非對映異構(gòu)體有選擇性的重結(jié)晶的非對映體鹽的混合物，如方案4所示，其中R3、R5′、R6、R7和Y如上所述。
方案4 為了進行方案4的分離，需要在式Ⅴ(c)化合物中R6是氫原子。如果方案4的方法如用R6是優(yōu)選取代基，即被酸水解除去的保護基如2，2-二甲基-1-氧丙基，則此保護基可通過加入手性酸除去，且不需要分離步驟。因此，R6是氫原子的式Ⅴ(c)化合物不需要必須在進行方案4的拆分方法前包括分離的制備步驟。將此額外步驟的除去是因為優(yōu)選的酸是不穩(wěn)定保護基。
方案4的第一個步驟是向溶解或懸浮于適宜溶劑中式Ⅴ(c)化合物中加入手性酸。此加入有兩個作用此手性酸除去R6位的氨基保護基，并形成式Ⅴ(d)化合物的非對映異構(gòu)酸加成鹽。當(dāng)Y是時，為此目的優(yōu)選的酸是(1S)-(-)-樟腦磺酸。當(dāng)Y是O或S時，優(yōu)選的酸是(1R)-(-)-樟腦磺酸。除去此保護基并形成鹽的優(yōu)選溶劑是低級醇，優(yōu)選乙醇。
一旦形成鹽，步驟2的分離和重結(jié)晶是通過將式Ⅴ(d)的化合物懸浮于適宜溶劑中，將此混合物加熱直到形成溶液，然后讓此溶液冷卻以便讓所需的異構(gòu)體沉淀。一般來說，手性拆分以及當(dāng)拆分式Ⅴ(d)化合物時，重要參數(shù)是溶劑系統(tǒng)、攪拌速率和溫度。優(yōu)選的溶劑系統(tǒng)是低級醇(優(yōu)選乙醇)和水的混合物。乙醇和水的體積比可以是約0．33至約3比1，但是優(yōu)選1∶1的混合物。溶劑和溶質(zhì)的比例可以是約10至約20比1，但是優(yōu)選15∶1。結(jié)晶期間攪拌的速率可能對拆分產(chǎn)生顯著的作用，優(yōu)選一旦形成鹽并通過加熱溶解于重結(jié)晶溶劑中進行攪拌，當(dāng)冷卻時就不再攪拌樣品。溫度也影響拆分冷卻至室溫以下可以增加產(chǎn)品的收率，但是降低了分離效率。優(yōu)選讓此結(jié)晶發(fā)生在約20℃至34℃，首選室溫(約22℃)下。
為了避免拆分的酸性水溶液條件下的對谷氨酸殘基上的酯的水解，優(yōu)選使用緩沖液如醋酸鈉。在氨基酸保護基的溶劑水解作用完成后，優(yōu)選加入用量約等于過量的酸的醋酸鈉。
方案4中制備的濾液會含有式Ⅴ(d)非對映異構(gòu)體的混合物。此混合物中式Ⅴ(d)(S)的非對映異構(gòu)體，即Ⅴ(d)(S)的酸加成鹽的含量提高，該酸加成鹽不結(jié)晶。此混合物通常不適于通過結(jié)晶進一步分離。因此，所需異構(gòu)體的大部分到此時沒有通過進一步結(jié)晶回收。下述方案5，其中R3、R4′、R6、R7和Y定義如上，給出了制備式Ⅳ化合物的新方法，其有利于此混合物通過結(jié)晶進一步分離。
方案5
如果方案5的方法是用方案4的濾液作為起始物來源進行的，則優(yōu)選先從此混合物中萃取式Ⅴ(c)化合物的游離堿。這可以通過用與水不混溶的有機溶劑稀釋混合物，并用溶解于水的弱堿如碳酸氫鈉的水溶液處理該混合物容易地完成。二氯甲烷和碳酸氫鈉水溶液是為此目的優(yōu)選的試劑。例如，用二氯甲烷(約0．33ml／g濾液)和約2當(dāng)量的1M碳酸氫鈉水溶液將此濾液室溫下處理約30分鐘，將得到兩個清澈的、容易分離的相。分離有機相并在處理前優(yōu)選用常用的干燥劑(一種或多種)干燥。用鹽水和1M碳酸氫鈉水溶液依次洗滌是優(yōu)選的干燥程序。
一旦進行了萃取方法，R6的保護基必須再合成或此保護基必須在進行方案5所示方法前質(zhì)子化。優(yōu)選脫保護并可以按照如上所述Greene教導(dǎo)的方法完成或按照如下制備例9所述進行。優(yōu)選此氨基保護基通過酸水解除去，例如，2，2-二甲基-1-氧丙基保護基。所得式Ⅴ(e)化合物再進行如下分離。
式Ⅴ(e)化合物的任何比例的單一非對映異構(gòu)體或混合物可以溶解或懸浮于適宜的溶劑中并加入氧化劑，以得到式Ⅳ(b)化合物。溶劑、反應(yīng)溫度和時間的總體選擇將依賴于所用的氧化劑。
DDQ是優(yōu)選的氧化劑。當(dāng)DDQ或氯醌用作氧化劑時，烴如戊烷、己烷和甲苯等，低級醇如甲醇、乙醇、異丙醇等，或氯代烴如氯仿、二氯甲烷等是適宜的。優(yōu)選氯代烴，特別是二氯甲烷。當(dāng)該氧化反應(yīng)在優(yōu)選的條件下用優(yōu)選的式Ⅴ(e)化合物進行時，對所得式Ⅳ(b)化合物進行色譜純化一般是不必要的。見，例如，下述實施例6。
此反應(yīng)一般在0至200℃下進行約30分鐘至約24小時。此反應(yīng)優(yōu)選在15至80℃下進行。更優(yōu)選此反應(yīng)在20至40℃下進行時，特別是在室溫下反應(yīng)20分鐘至1小時。
氧化劑的用量將依賴于所用氧化劑變化，但是一般為式Ⅴ(e)化合物的約0．1至約5當(dāng)量。當(dāng)使用DDQ時，優(yōu)選約1．1至約3當(dāng)量。更優(yōu)選約1．8至約2．2當(dāng)量，而1．9至2．1當(dāng)量是首選的。
式Ⅳ(b)中的羧基和／或氨基保護基優(yōu)選不是按照Greene教導(dǎo)的方法除去。相反，優(yōu)選的方法是將式Ⅳ(b)的化合物還原為式Ⅴ(e)化合物的50∶50的非對映異構(gòu)體混合物，以便進行方案4教導(dǎo)的手性酸分離。
通過將式Ⅳ(b)的化合物溶解或懸浮于適宜的溶劑中，在氫化催化劑的存在下，并讓此混合物接觸氫氣氛，進行氫化反應(yīng)。便利的且優(yōu)選的溶劑是四氫呋喃和乙醇的體積比約4∶1的混合物。便利且優(yōu)選的氫化催化劑是5％的鈀碳。相對于式Ⅳ(b)化合物的重量，一般使用的催化劑的量為約10％至約200％。優(yōu)選為約20％至約75％，其中優(yōu)選約25％。一般優(yōu)選的氫氣氛的壓力等于或大于常壓。典型的壓力是約常壓至約100psi的氫氣。更優(yōu)選的氫氣壓為40psi至約60psi，首選50psi。該反應(yīng)可以在室溫至該混合物的回流溫度下進行。當(dāng)氫氣壓為50psi時，優(yōu)選的反應(yīng)溫度是約100℃，該反應(yīng)一般在4小時內(nèi)基本完成。
一旦按照方案5所述形成式Ⅴ(e)化合物的1∶1的混合物時，其適于進一步按照上述方案4所述分離。此循環(huán)可以按照操作者的希望重復(fù)多次，以便將式Ⅴ(d)(R)的非對映異構(gòu)體的收率最大化。
2，4-二氨基-6-羥基咪啶，式NH*CH(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′的被保護的谷氨酸及式Ⅰ和Ⅱ的化合物是本領(lǐng)域已知的，并且如果商購的可能性小，可以通過本領(lǐng)域常用的標(biāo)準(zhǔn)合成方法容易地制備。例如，見下述制備例1-6。
進行方案1-5反應(yīng)的最佳時間可以通過常規(guī)色譜技術(shù)監(jiān)控反應(yīng)進程確定。溶劑的選擇一般是不嚴(yán)格的，只要所用溶劑對進行的反應(yīng)是惰性的并足以溶解反應(yīng)物得到一種介質(zhì)，在其中進行所需的反應(yīng)。除非特別說明，本文中描述的所有反應(yīng)優(yōu)選在惰性氣體氛下進行。優(yōu)選的惰性氣體是氮氣。
下列制備例和實施例只是用來舉例說明，不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。除非特別說明，在本發(fā)明實施例中使用的術(shù)語和縮略語具有其通常的含義。例如“℃”、“mmol”、“g”、“mg”、“d．e．”、“mL”、“M”、“HPLC”、“mp”、“EA”、“MS(FD)”、“MS(HR)”、“IR”和“1H MNR”分別指攝氏溫度、常規(guī)或普通、毫摩爾、克、毫克、非對映異構(gòu)體過量、毫升、摩爾或摩爾濃度、高壓液相色譜、熔點、元素分析、場解析質(zhì)譜、高分辨質(zhì)譜、紅外色譜和質(zhì)子核磁共振光譜。此外，IR光譜列出的吸收最大值只是感興趣的而不是觀察到的所有最大值。
制備例15-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸在25分鐘內(nèi)，向已冷卻至-15℃的64．9g(640mmol，83．9m1)的二異丙基胺于400ml四氫呋喃溶液中，滴加存在于己烷中400ml的1．6M正丁基鋰(640mmol)，維持反應(yīng)溫度低于-5℃。攪拌15分鐘后，在30分鐘內(nèi)，滴加5-甲基-2-噻吩甲酸(41．4g，291mmol)于150ml四氫呋喃中的溶液，再將溫度保持在-5℃以下。將所得暗綠色雙陰離子溶液在-15℃至-10℃下攪拌90分鐘。向此溶液中在15分鐘內(nèi)滴加2-(2-溴乙基)-1，3-二噁烷(57．9g，320mmo1)，并將此洋紅色混合物在-10℃至-5℃下攪拌3小時。此時HPLC分析(30％乙腈／70％的1％乙酸水溶液，2mL／分鐘，30cm C-18柱，λ=280nm)，顯示9．0％5-甲基-2-噻吩甲酸和88．5％標(biāo)題化合物。用600ml水停止反應(yīng)并用6N鹽酸酸化至pH=3。用500ml叔丁基甲基醚將此黃色混合物萃取3次，并用硫酸鎂干燥合并的有機萃取物，過濾并濃縮。將此粗品用300ml庚烷研磨并將此固體過濾，用庚烷洗滌，并將其在過濾器上抽干，得到58．21g(82．5％)的標(biāo)題化合物，其中含有小于3％的起始物。1H NMR．1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1．81(m，4H)，2．91(t，J=7．4Hz，2H)，3．92(m，4H)，4．90(t，J=4．4Hz，1H)，6．84(d，J=3．7Hz，1H)，7．72(d，J=3．7Hz，1H)。
制備例25-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸甲酯向5-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸(58．0g，239mmol)于300ml二甲基甲酰胺溶液中，加入碳酸鉀(41．4g，299mmol)，隨后加入碘代甲烷(51．0g，359mmol)。將此漿狀物在室溫下攪拌17小時，然后倒入到600ml水中。用500ml叔丁基甲基醚將所得懸浮液萃取2次，并用水洗滌合并的萃取物，用硫酸鎂干燥，過濾，并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到57．84g(94．3％)的標(biāo)題化合物，其純度足以進行制備例3的反應(yīng))。
IR(CHCl3，cm-1)3021，1707，1541，1463，1296，1101．1H NMR(300MHz，CDCl3)d1．75(m，4H)，2．84(t，J=7．4Hz，2H)，3．81(s，3H)，3．82(m，2H)，3．92(m，2H)，4．84(t，J=4．3Hz，1H)，6．76(d，J=3．9Hz，1H)，7．58(d，J=3．7Hz，1H)。
制備例35-(丁-4-醛基)-2-噻吩甲酸甲酯將5-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸甲酯(10．0g，39．0mmol)和1．0ml濃鹽酸溶解于120ml的2∶1的乙酸／水中，并將所得黃色溶液在60℃油浴中加熱2小時。讓此溶液冷卻至25℃并倒入到120ml水中。攪拌15分鐘后，將此混合物用125ml叔丁基甲基醚萃取2次。用水洗滌此合并的有機萃取物2次，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌2次，然后用硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮得到8．24g(99．5％)的標(biāo)題化合物，其純度足以用于制備例4。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2．01(m，2H)，2．50(t，J=7．4Hz，2H)，2．87(t，J=7．5Hz，2H)，3．84(s，3H)，6．79(d，J=3．7Hz，1H)，7．61(d，J=4．0Hz，1H)，9．75(s，1H)。
制備例45-(4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻吩甲酸甲酯攪拌下將5-(丁-4-醛基)-2-噻吩甲酸甲酯(16．7g，78．6mmol)冷卻至0℃至-5℃，并用二乙胺(11．5g，157mmol)處理5分鐘。移出冷卻浴并一批加入27．6g碳酸鉀。在60℃將此桔黃色混合物加熱1小時并再冷卻至25℃。用50ml二氯甲烷稀釋此反應(yīng)混合物，并通過Hyflo過濾，用過量的二氯甲烷清洗。將此濾液濃縮得到19．6g(93．4％)的標(biāo)題化合物，其純度足以用于制備例5。
1H NMR (300 MHz，CDCl3)δ1．01(t，J=7．1Hz，6H)，2．28(q，J=7．4Hz，2H)，2．68(m，2H)，2．91(q，J=7．1Hz，4H)，3．89(s，3H)，4．12(m，1H)，5．84(d，J=13．9Hz，1H)，7．23(d，J=8．1Hz，2H)，7．94(d，J=8．1Hz，2H)。
制備例5羥基亞甲基-氰基乙酸甲酯鈉鹽將金屬鈉(11．8g，0．511mol)溶解于450ml甲醇中，向此溫溶液中在2分鐘內(nèi)加入甲酸乙酯(104g，1．41mol)和氰基乙酸甲酯(43．8g，0．440mol)的溶液。在加入過程中生成小量的沉淀。將此反應(yīng)混合物加熱至回流并保持1．5小時。讓此粘稠的白色懸浮液冷卻至20至25℃，并將沉淀過濾，用乙醚洗滌，并在45℃下真空干燥，得到40．4g(61．6％)的標(biāo)題化合物，其純度足以用于制備例6。
制備例6氯亞甲基-氰基乙酸甲酯往羥基亞甲基-氰基乙酸甲酯鈉鹽(19．0g，127mmol)在200ml二氯甲烷中的懸浮液中，一批加入五氯化磷(26．5g，127mmol)。讓此反應(yīng)混合物放熱至回流并在攪拌下維持回流4小時。讓所得淡黃色懸浮液冷卻至23℃，然后倒入到400ml冷水中。將此混合物攪拌15分鐘，并進行相分離。用100ml二氯甲烷萃取水層，用水將合并的有機層洗滌兩次，用硫酸鎂干燥，濃縮得到16．8g標(biāo)題化合物，其純度足以用于實施例1。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3．88(s，3H)，7．58(s，0．35H)，8．04(s，0．65H)。
制備例7N-[[5-[2-[(6R)-2-氨基-3，4，5，6，7，8-六氫-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯(1R)-(-)-10-樟腦磺酸鹽(R-R-L)
將N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基]氨基-3，4，5，6，7，8-六氫-4-氧代吡啶并-(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯(456．1g，0．748mol)和無水(1R)-(-)-10-樟腦磺酸(197．6g，0．84mol)在3．4L無水乙醇中的混合物加熱回流。28小時后，通過HPLC分析(C28柱，在40℃下，40∶60乙腈∶緩沖液，流速2．0ml／分鐘，在280nm檢測，緩沖液=1∶0．3∶100冰醋酸∶三乙胺∶水)發(fā)現(xiàn)該反應(yīng)完成。讓此混合物冷卻至68℃，并加入6．34g醋酸鈉、3．4L水和23g活性炭。通過加入將此混合物冷卻至46℃，并攪拌20分鐘，然后通過Hyflo過濾。攪拌所得溶液，冷卻至34℃，并加入晶種。不攪拌下讓此混合物在室溫放置12小時，讓結(jié)晶形成。過濾收集結(jié)晶并干燥。將此濾液放置過夜，又產(chǎn)生結(jié)晶。收集得自濾液的結(jié)晶，與第一批沉淀合并并干燥，得到292．2g R-R-L的標(biāo)題化合物。用15倍的1∶1乙醇-水將部分純化的鹽重結(jié)晶兩次。得到101．9g(理論產(chǎn)率的35．6％)的標(biāo)題化合物，為單水合物，通過HPLC分析95．4％d．e．。
mp 207℃-210℃，MS(FD)m／z 505(M+)；[a]589-52．8°，[a]365-267．7°(C1．0，DMSO)。EA計算值for C33H47N5O10S2·H2O(755．90)C，52．44；H，6．53N，19．26測定值C，52．31；H，6．35；N，19．20。
制備例8從制備例7的濾液中回收N-[[5-[2-[-2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氫-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯的R-L和S-L非對映異構(gòu)體的2∶3的混合物將1M碳酸氫鈉水溶液加入到制備例7的濾液(1000g，約1．93％標(biāo)題化合物(w／w))和二氯甲烷(333g)的攪拌的混合物中。再用1M碳酸氫鈉水溶液(50．0g)將PH調(diào)節(jié)至5．0至約7。將所得混合物攪拌1小時。進行相分離得到392．9g清澈的、黃色有機相。用0．5M碳酸氫鈉水溶液(50g)將此溶液洗滌30分鐘。進行相分離得到341．3g略顯絮狀的黃色有機相。移出5g保留樣品并用10％氯化鈉水溶液(100g)將剩余的溶液洗滌15分鐘。1小時后進行相分離，分離出293．4g略呈絮狀的黃色有機相。移出5g保留樣品并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將此溶液濃縮至泡沫。將殘余物再溶解于二氯甲烷(100g)中，并再次濃縮為泡沫。在45℃／5Torr下真空干燥18小時，得到17．86g黃色泡沫(標(biāo)題化合物36．8∶63．2的混合物的90．6％效力，基于原濾液效力檢測的回收率為88．7％，基于在水或有機相中產(chǎn)物質(zhì)量平衡的回收率為90．0％)。此物質(zhì)進入實施例6和7的循環(huán)方法中，不用經(jīng)過純化。
制備例9N-[[5-[2-[-2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基)-3，4，5，6，7，8-六氫-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯的R-L和S-L非對映異構(gòu)體的2∶3的混合物將無水吡啶(50．9g，642．9gmmol)加入到制備例8的N-[[5-[2-[-2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氫-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯的R-L和S-L非對映異構(gòu)體的2∶3的混合物(24．7g，49．0mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1．49g，12．2mmol)中。攪拌下加熱至100℃后，得到黃色溶液。在4分鐘內(nèi)加入新戊酸酸酐(19．0g，102．8mmol)；每滴入一滴都形成白色固體，然后擴散。在4．5小時，將此反應(yīng)冷卻至50℃(注意在較低溫度下固化)，將其轉(zhuǎn)移至分液漏斗中并加入二氯甲烷(500ml)，然后加入1N鹽酸(660ml)。分離有機相并用1N鹽酸(250ml)加二氯甲烷(100ml)萃取以防止絮狀沉淀。將所得有機層用鹽水(200ml)洗滌，還需要加入二氯甲烷(100ml)防止絮狀沉淀，然后用硫酸鎂干燥。在26．5英寸Hg真空和40℃下部分除去溶劑直到蒸發(fā)幾乎停止。向剩余的溶液中，在35分鐘內(nèi)加入無水乙醚(300ml)，得到白色混合物。攪拌15分鐘后，通過真空過濾收集固體，用乙醚(100ml)洗滌兩次。注意此過濾需要15-30分鐘，且在每次加入乙醚后攪拌。在40℃／5Torr下真空干燥2小時，得到27．88g粗品。將此殘余物在乙酸乙酯(700ml)中回流直到得到淡黃色溶液。讓此物質(zhì)在室溫下攪拌1小時以達(dá)到平衡。將此白色混合物置于冰浴中并攪拌1．5小時。通過真空過濾分離此產(chǎn)物，用冷乙酸乙酯(50ml)洗滌三次，用乙醚(100ml)洗滌一次。在40℃／5Torr下真空干燥，得到19．40g(68％)的標(biāo)題化合物，為白色固體。
mp 169℃-170℃。[a]20D-0．2°(C1．01，MeOH)。EA計算值forC28H39N5O7SC，57．03；H，6．67；N，11．88；O，18．99；S，5．44。測定值C，57．05；H，6．47；N，11．66；O，19．16；S，5．66。
實施例15-(3-[2-氰基-2-乙氧羰基乙烯基]-4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻吩甲酸甲酯向冷卻至-25℃的5-(4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻吩甲酸甲酯(19．4g，72．4mmol)和三乙胺(7．3g，72．4mmol)于160ml二氯甲烷中的溶液中，在25分鐘內(nèi)滴加氯亞甲基-氰基乙酸甲酯(10．5g，72．4mmol)于40ml二氯甲烷中的溶液，維持該反應(yīng)器的溫度在-20℃以下。在-25℃至-20℃下攪拌此絮狀桔黃色溶液2小時，然后升溫至20℃。用150ml水稀釋此反應(yīng)混合物并將此兩層一起攪拌幾分鐘并分離。用硫酸鎂干燥有機層，過濾并濃縮為桔黃色油狀物。用乙醚研磨此油狀物，引起所需產(chǎn)物結(jié)晶。將所得固體過濾，用乙醚洗滌并干燥得到19．6g(72％)的標(biāo)題化合物，其純度足以用于實施例2。MS m／z 377(M+H)。C19H24N2O4S的理論值C，60．62；H，6．43；N，7．44。實測值C，61．67；H，6．85；N，7．33。
實施例22-氨基-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-甲氧羰基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶向5-(3-[2-氰基-2-乙氧羰基乙烯基]-4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻吩甲酸甲酯(10．0g，26．56mmol)于50ml乙腈中的溶液中，加入2，4-二氨基-6-羥基嘧啶(3．35g，26．56mmol)、45ml水和5ml乙酸。將所得懸浮液加熱回流18小時，然后冷卻至25℃。用2N氫氧化鈉水溶液中和此反應(yīng)混合物至pH6．7，引起沉淀至粘稠狀。濾出此固體，用1∶1乙腈／水洗滌，并在50℃下真空干燥得到5．96g(68％)的標(biāo)題化合物。
實施例32-氨基-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-羧基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶將2-氨基-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-甲氧羰基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶(5．4g，16．35mmol)溶解于54ml2N氫氧化鈉水溶液中，并在攪拌下加熱至40℃。HPLC分析(30％乙腈／70％的1％乙酸水溶液，1ml／分鐘，C8 25cm柱，1=280nm)顯示甲酯完全水解。用81ml乙醇稀釋此溶液并用6N鹽酸水溶液酸化至PH3。將所得沉淀過濾，用1∶1乙醇／水洗滌，并在50℃下真空干燥得到5．02g(97％)的標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2．97(t，J=7．2Hz，2H)，3．15(t，J=7．2Hz，2H)，6．89(d，J=3．6Hz，1H)，7．50(d，J=3．6Hz，1H)，8．05(d，J=2．3Hz，1H)，8．45(d，J=1．8Hz，1H)。
實施例42-[(2，2-二甲基-1-氧代丙基)氨基]-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-羧基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶向2-氨基-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-羧基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶(0．93g，2．94mmol)于20ml新戊酸酐中的懸浮液中加入二甲基氨基吡啶(0．036g，0．294mmol)，并將此混合物加熱至150℃，維持18小時，在此期間將此反應(yīng)混合物適當(dāng)稀釋。讓此反應(yīng)冷卻至25℃，并通過加入100ml乙醚沉淀產(chǎn)物。抽濾出此沉淀并用乙醚洗滌。將所得固體懸浮于10ml水中并用1N氫氧化鈉水溶液處理直到形成溶液。用6N鹽酸將此溶液酸化至pH4，引起產(chǎn)物沉淀。濾出此固體，用水洗滌，然后用甲醇洗滌，在50℃真空干燥得到0．84g(71％)的標(biāo)題化合物，為黃褐色固體。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1．23(s，9H)，3．14(m，4H)，6．90(d，J=3．6Hz，1H)，7．48(d，J=3．6Hz，1H)，8．27(s，1H)，8．70(s，1H)，11．37(bs，1H)，12．25(s，1H)。
實施例5N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基]-1，4-二氫-4-氧代吡啶-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯向2-[(2，2-二甲基-1-氧代丙基)氨基]-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-羧基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶(0．54g，1．35mmol)和N-甲基嗎啉(0．41g，4．05mmol)在5ml二甲基甲酰胺中的混合物中，一批加入2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪(0．31g，1．75mmol)。將所得懸浮液室溫下攪拌16小時。此時，加入L-谷氨酸二乙酯(0．36g，1．48mmol)并在室溫下繼續(xù)攪拌3小時。將此反應(yīng)混合物在30ml二氯甲烷和30ml水之間分配，并將此兩層一起攪拌并任其分層。將此有機層濃縮為琥珀色油狀物，將其用乙醇研磨，引起固體沉淀的形成。將此固體過濾，用乙醇洗滌并在50℃下真空干燥得到0．59g(75％)的標(biāo)題化合物。
mp 72℃-76℃．1H NMR(300MHz，DMSO-d6)d1．14(m，6H)，1．22(s，9H)，2．04(m，2H)，2．38(t，J=7．3Hz，2H)，3．12(m，4H)，4．05(m，4H)，4．34(m，1H)，6．88(d，J=3．6Hz，1H)，7．63(d，J=3．7Hz，1H)，8．24(s，1H)，8．61(d，J=7．3Hz，1H)，8．72(s，1H)，10．85(vbs，2H)。
實施例6N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基]-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯將二氯甲烷(350ml)加入到制備例9的N-[[5-[2-[-2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基)-3，4，5，6，7，8-六氫-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯的R-L和S-L非對映異構(gòu)體的2∶3的混合物(17．0g，28．9mmol)中，并攪拌30分鐘直到形成淡黃色溶液。加入2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)固體。該溶液開始變?yōu)樽仙?，然后在室溫下攪?0分鐘，其變?yōu)榈凵旌衔?。濾出粉色固體，用二氯甲烷(25ml)洗滌3次。將此濾液與飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)攪拌3次，每次30分鐘，并分離。將最終的有機層與碳酸氫鈉(100ml)和水(100ml)攪拌30分鐘并分離。用鹽水(100ml)洗滌此有機層并用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑得到14．7g(87．1％)的標(biāo)題化合物。
mp 57℃-87℃．IR(CHCl3)3690-3025，2978，3000，1736，1677，1629，1558，1449，1245，1147，1022，811 cm-1．MS(HR)計算值for C28H35N5O7S586．234100。測定值586．233546。
實施例7N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基)-3，4，5，6，7，8-六氫-4-氧代吡啶并-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯的R-L和R-S非對映異構(gòu)體的1∶1的混合物將N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基]-1，4-二氫-4-氧代吡啶并-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯(1．0g，1．8mmol)、5％鈀碳催化劑(0．26g)、乙醇(4．0ml)和四氫呋喃(16．0ml)加入到氫化反應(yīng)器中。將所得混合物用氮氣(10psig)加壓三次并排空。然后將此混合物用氫氣(50psig)加壓三次并排空。然后，將氫氣壓調(diào)節(jié)至50psig并將此溫度升高至100℃。22小時后，通過HPLC檢測顯示殘留7％的起始物，將此反應(yīng)平衡至室溫并通過Celite過濾除去催化劑，用4∶1四氫呋喃／乙醇洗滌。將此濾液蒸發(fā)，再溶解于二氯甲烷(25ml)中，用碳酸氫鈉水溶液(25ml)萃取，用硫酸鎂干燥，并蒸發(fā)。將此殘余物在乙酸乙酯(10ml)中回流攪拌。1小時后，讓此混合物冷卻至室溫并再在冰浴中攪拌30分鐘。在冷卻下攪拌后，將此反應(yīng)過濾并用冷乙酸乙酯(3ml)洗滌此濾餅。將此濾餅在40℃／5Torr下真空干燥得到940mg(83％)的標(biāo)題化合物，為白色固體。mp 169-170℃。C28H39N5O7S的理論值C，57．03；H，6．67；N，11．88；0，18．99；S．5．44。實測值C，57．26；H，6．45；N，11．86；0，18．73，S，5．74。
現(xiàn)已對本發(fā)明，包括其優(yōu)選的實施方式進行的詳細(xì)闡述。但是，應(yīng)領(lǐng)會本領(lǐng)域技術(shù)人員基于本發(fā)明的公開內(nèi)容，可以作出修飾和／或改進，這些都在下述權(quán)利要求給出的本發(fā)明的范圍和實質(zhì)內(nèi)容內(nèi)。
雖然式Ⅲ和Ⅲ(a)的化合物在說明書中給出的結(jié)構(gòu)就其雙鍵似乎只有一個特定的取向，但是所有可能的異構(gòu)體包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1．本發(fā)明涉及式Ⅲ化合物或其鹽或溶劑化物 其中Y是、O或S；R是C1-C6烷基；R1和R2獨立地為C1-C6烷基或一起與它們連接的氮原子形成雜環(huán)；R3是氫原子、氯或氟；R4是羥基、羧基保護基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型為S型；而R5是氫原子或羧基保護基。
2．權(quán)利要求1的化合物或其鹽或溶劑化物，其中Y是或S，R是C1-C4烷基，R1和R2獨立地為C1-C4烷基，R3是氫原子，而R4是C1-C4烷氧基或芐氧基。
3．權(quán)利要求2的化合物或其鹽或溶劑化物，其中R是甲基或乙基，R1和R2都是甲基或乙基，而R4是甲氧基、乙氧基或芐氧基。
4．式Ⅳ的化合物或其鹽或溶劑化物 其中Y是、O或S；R3是氫原子、氯或氟；R4是羥基、羧基保護基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型為S型；而R5是氫原子或羧基保護基；R6是氫原子或氨基保護基；而R7是羥基或氨基。
5．權(quán)利要求4的化合物或其鹽或溶劑化物，其中Y是或S，R3是氫原子。
6．權(quán)利要求5的化合物或其鹽或溶劑化物，其中R4是甲氧基、乙氧基、芐氧基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5；R5是C1-C6烷基；R6是氨基保護基；而R7是羥基。
7．權(quán)利要求6的化合物或其鹽或溶劑化物，其中R4是NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5。
8．制備式Ⅳ化合物其鹽或溶劑化物的方法 其中Y是、O或S；R3是氫原子、氯或氟；R4是羥基、羧基保護基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型為S型；而R5是氫原子或羧基保護基；R6是氫原子或氨基保護基；而R7是羥基或氨基。該方法包括a)式Ⅲ(a)的化合物 其中R是C1-C6烷基；R1和R2獨立地為C1-C6烷基或一起與它們連接的氮原子形成雜環(huán)；R4′是羧基保護基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′，其中*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型為S型；R5′是羧基保護基；與2，4-二氨基-6-羥基嘧啶在適宜的酸和溶劑的存在下反應(yīng)；b)選擇性地在R6位加入氨基保護基；和c)選擇性地除去在R4′位上的任何羧基保護基。
9．權(quán)利要求8的方法，其中式Ⅳ化合物或其鹽或溶劑化合是其中R7是羥基，Y是或S，R3是氫的化合物。
10．權(quán)利要求9的方法，其中式Ⅲ(a)的化合物或其鹽或溶劑化物是其中R4′是甲氧基、乙氧基或芐氧基的化合物；且進行權(quán)利要求7的步驟b)。
11．權(quán)利要求10的方法，其中式Ⅳ的化合物或其鹽或溶劑化物是其中R6是2，2-二甲基-1-氧丙基的化合物。
12．權(quán)利要求8的方法，其中所述酸是乙酸，而所述溶劑是乙腈。
13．制備Ⅳ化合物或其鹽或溶劑化物的方法， 其中Y是、O或S；R3是氫原子、氯或氟；R4是羥基、羧基保護基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*標(biāo)記的碳原子構(gòu)型為S型；而R5是氫原子或羧基保護基；R6是氫原子或氨基保護基；而R7是羥基或氨基。該方法包括a)式Ⅴ(b)的化合物或其鹽或溶劑化物 其中R4′是羧基保護基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′；和R5′是羧基保護基；與氧化劑在適宜的溶劑存在下反應(yīng)；和b)選擇性地除去在R4′和／或R6位上的任何羧基保護基；其條件是如果式Ⅴ(b)化合物中的R6是氫原子，則式Ⅴ(b)的化合物必須是酸加成鹽。
14．權(quán)利要求13的方法，其中式Ⅳ的化合物或其鹽或溶劑化物是Y是或S，而R3是氫原子的化合物。
15．權(quán)利要求14的方法，其中式Ⅴ(b)的化合物或其鹽或溶劑化物是R4′為NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′，R5′是C1-C6烷基；R6是氨基保護基；而R7是羥基的化合物。
16．權(quán)利要求15的方法，其中式Ⅴ(b)化合物或其鹽或溶劑化物是R5′是甲基或乙基，而R6是2，2-二甲基-1-氧丙基的化合物。
17．權(quán)利要求13的方法，其中氧化劑是2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌而溶劑是二氯甲烷。
18．權(quán)利要求15的方法，還包括式Ⅳ(d)化合物在適宜溶劑中的氫化步驟 以形成含有式Ⅴ(f)(R)和Ⅴ(f)(S)的化合物或其各自的鹽或溶劑化物的混合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及中間體及其制備方法,以及由這些中間體制備式(V)的系列嘧啶衍生物的方法,它們是可利用的抗葉酸化合物的中間體,或者它們本身是可利用的抗葉酸化合物。
文檔編號C07D333/40GK1290247SQ99802883
公開日2001年4月4日 申請日期1999年1月27日 優(yōu)先權(quán)日1998年2月11日
發(fā)明者C·J·巴尼特, S·E·敦拉普, M·E·科比爾斯基, J·A·維爾納 申請人:伊萊利利公司