專利名稱：用于結(jié)合dna的氧化苯乙烯聚合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于化學(xué)和生物學(xué)測試和試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室制品，更具體地，本發(fā)明涉及一種固定DNA的表面。
背景技術(shù)：
聚合物已經(jīng)被作為容器廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物測試、醫(yī)學(xué)研究和其它用途。某些聚合物如苯乙烯聚合物(更具體的是聚苯乙烯)最適合用作生物測試用專業(yè)產(chǎn)品中的基質(zhì)并且通常被采用。例如，聚苯乙烯價(jià)格便宜，在光學(xué)上透明，并且能在低溫下加工。
將DNA直接固定到基質(zhì)表面對(duì)于分子生物學(xué)中的各種測試系統(tǒng)具有許多用途，例如免疫-PCR或具有特異性標(biāo)記探針的核酸的檢測，即靶標(biāo)捕獲雜交(target capturehybridization)。靶標(biāo)捕獲雜交依靠將捕獲性寡核苷酸分子(通常是能從天然來源分離出來的或通過標(biāo)準(zhǔn)分子生物技術(shù)產(chǎn)生的單鏈DNA或RNA片段，它具有2-40個(gè)核苷酸)固定在支持物表面上，然后使標(biāo)記的互補(bǔ)性靶DNA鏈和固定的分子雜交。
如果胺化的核酸分子被吸附或共價(jià)連接在支持物上，其連接強(qiáng)度足以使其不被水或水性緩沖液從支持物上洗去，則稱該分子“固定”在固體支持物上。在用吸附作為連接方法的系統(tǒng)中，總是會(huì)發(fā)生捕獲性寡核苷酸有一定量的釋放。因此，共價(jià)結(jié)合寡核苷酸是較佳的。
通過共價(jià)鍵固定胺化DNA的一種方法包含將二醛基淀粉(DAS)或N-氧琥珀酰亞胺酯(NOS)連接在聚合物表面上。在具有DAS涂層的表面上，與胺化的捕獲性寡核苷酸連接的NH2通過共價(jià)鍵與DAS的醛基團(tuán)連接，從而通過該涂層將寡核苷酸分子固定在聚苯乙烯表面上。美國專利5,563,215和5,281,660中公開了一種將DAS連接到細(xì)胞培養(yǎng)板表面上的方法。
關(guān)于NOS涂層，具有通過合成或體外操作加入的伯胺的DNA可以直接與NOS表面偶聯(lián)。當(dāng)伯胺在稍偏堿性pH下和NOS基團(tuán)反應(yīng)時(shí)，該酯在胺攻擊羰基基團(tuán)并取代N-氧琥珀酰亞胺基團(tuán)時(shí)經(jīng)歷親核取代。該反應(yīng)的特異性產(chǎn)生了固定效應(yīng)。
將DNA固定到基質(zhì)表面上的另一種技術(shù)是將仲胺共價(jià)接枝到聚苯乙烯表面上。在該技術(shù)中，首先用多核苷酸激酶和ATP使寡核苷酸的5′端磷酸化。然后用碳化二亞胺將磷酸化的DNA 50°下偶聯(lián)表面上的仲胺5小時(shí)。從而通過氨基磷酸酯鍵固定DNA。
表面處理存在的問題涉及涂層如DAS或NOS，以及連接的仲胺。隨著時(shí)間的變化，或當(dāng)其受到不同的環(huán)境應(yīng)力作用，表面將變得不穩(wěn)定，所附涂層的固定性質(zhì)將變差。另外，胺化的DNA結(jié)合到這些經(jīng)處理平板上的偶聯(lián)效率是非常低的，低于0.1％。而且，聚合物基質(zhì)的表面處理也為生產(chǎn)過程增加了一個(gè)步驟，從而增加了最終成品的成本。
本發(fā)明提供了由相當(dāng)純的聚苯乙烯制得的共價(jià)結(jié)合胺化DNA的產(chǎn)品的使用方法。該產(chǎn)物象已經(jīng)DAS或NOS處理過的基質(zhì)一樣好地工作，但是沒有加入涂層的成本。本發(fā)明還能經(jīng)受各種環(huán)境應(yīng)力作用而不喪失任何其固定性質(zhì)。另外，由于本發(fā)明的產(chǎn)物通常對(duì)胺基基團(tuán)有活性，因此它能結(jié)合肽、用于免疫試驗(yàn)的低分子量抗原、以及抗體、細(xì)胞附著因子和其它生物活性分子。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種將胺化的DNA固定到基質(zhì)表面上的方法。該表面可廣泛用于各種模制的實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，包括多孔板、細(xì)胞培養(yǎng)皿和生物容器。該方法包括下列步驟提供一個(gè)表面氧含量在0.3至4.0原子百分?jǐn)?shù)之間的聚苯乙烯基質(zhì)，和將經(jīng)胺修飾的寡核苷酸連接到基質(zhì)表面上。所得的產(chǎn)品包含表面氧含量在0.3-4.0原子百分?jǐn)?shù)之間的聚苯乙烯基質(zhì)，以及直接連接在基質(zhì)表面上的大量胺修飾的寡核苷酸。
附圖簡述

圖1顯示了不同表面對(duì)結(jié)合胺化DNA的效應(yīng)。
圖2顯示了NOS涂覆的聚苯乙烯的結(jié)合效應(yīng)和未處理的聚苯乙烯條的結(jié)合效應(yīng)之比較。
圖3顯示了在采用不同pH的結(jié)合溶液時(shí)，聚苯乙烯表面氧含量對(duì)結(jié)合胺化DNA能力的效應(yīng)。
圖4顯示了pH對(duì)結(jié)合胺化DNA能力的效應(yīng)。
圖5顯示了濕度對(duì)結(jié)合胺化DNA能力的效應(yīng)。
圖6比較了未修飾的和胺修飾的cDNA在氧化的聚苯乙烯和NOS涂覆的聚苯乙烯上的固定化作用。
圖7比較了具有不同濃度的胺化DNA的溶液對(duì)光學(xué)透明的和黑色不透明聚苯乙烯的固定化性質(zhì)。
圖8比較了胺化的cDNA在光學(xué)透明和黑色不透明的反應(yīng)性聚苯乙烯上的結(jié)合。
發(fā)明詳述本發(fā)明來自發(fā)明者的偶然發(fā)現(xiàn)。發(fā)明者為探索胺化DNA結(jié)合到不同表面所涉及的機(jī)制而進(jìn)行研究。胺化DNA指經(jīng)過修飾在末端連接伯胺的DNA寡聚物。發(fā)明者用涂覆了NOS和DAS的聚苯乙烯多孔條，并將結(jié)果和作為對(duì)照的未涂覆的聚苯乙烯孔條比較?！岸嗫讞l”或“孔條”由多個(gè)孔(通常是8個(gè))組成，其類型包括在多孔板中的孔，它們相互連接形成線性排列。美國專利3,649,464顯示了一種多孔板，美國專利5.084,246顯示了一種多孔條。令發(fā)明者驚訝的是，未涂覆的未經(jīng)處理的對(duì)照條與DNA的結(jié)合和經(jīng)處理的條一樣好。然后，發(fā)明者開始進(jìn)行研究來解釋這看似異常的結(jié)果。首先，發(fā)明者注意到，用多孔板代替孔條與未處理的聚苯乙烯對(duì)照進(jìn)行的所有其它研究，平板上的檢測結(jié)果顯示沒有顯著的結(jié)合。
在得到該觀察結(jié)果后，發(fā)明者開始研究比較各種基質(zhì)表面，以確定它們結(jié)合胺化DNA的能力。它們選擇的基質(zhì)是(1)平的未經(jīng)處理的聚苯乙烯板和條，以商品名“MEDIUM BIND”購自Corning Costar Corporation，(2)已經(jīng)受3mRadγ輻射的聚苯乙烯平板和條，以商品名“HIGH BIND”購自Corning Costar Corporation，(3)涂覆了NOS的聚苯乙烯板和條，和(4)由已經(jīng)受電暈放電的、聚苯乙烯制成的組織培養(yǎng)板。應(yīng)注意，商品名“HIGH BIND”和“MEDIUM BIND”指產(chǎn)品在ELISA試驗(yàn)中結(jié)合蛋白的傾向性；它并不是指結(jié)合胺化DNA的能力。
用比色檢測生物素化的DNA獲得結(jié)合數(shù)據(jù)的程序如下1.在平板或試條中，加入100微升/孔的胺修飾的探針寡核苷酸(以寡核苷酸結(jié)合緩沖液(50mM Na2PO4，pH8.5，1mM EDTA)配)。使該混合物4℃培育過夜，或37℃培育1小時(shí)。
2.用PBS洗滌平板三次，除去未偶聯(lián)的寡核苷酸。
3.每孔加200微升配制在寡核苷酸結(jié)合緩沖液內(nèi)的3％BSA，封閉未反應(yīng)的活性基團(tuán)。然后37℃培育平板或試條30分鐘，然后傾析。
4.加入100微升/孔含有目標(biāo)核酸的雜交溶液。然后49℃培育平板或試條1小時(shí)。
5.用預(yù)熱的2XSSC(3.0M NaCl；0.3M檸檬酸鈉，pH7.0)0.1％SDS洗滌孔兩次，再49℃浸泡5分鐘。
6.加入100微升/孔含有1∶1000稀釋的鏈霉親和素-過氧化物酶偶聯(lián)物的封閉液。37℃培育平板或試條30分鐘。
7.用PBS洗滌孔三次。
8.加入100微升/孔新鮮的底物溶液。在10、20和30分鐘讀取405nm的OD讀數(shù)。OD讀數(shù)不作校正，作為本底吸收值。
在產(chǎn)生圖1所示結(jié)果的試驗(yàn)中，將胺化DNA施加到平板上至濃度為1.0pmol/孔，并在37℃培育1小時(shí)。加入新鮮的底物溶液后20分鐘，記錄結(jié)果。所取的讀數(shù)是四個(gè)不同孔的讀數(shù)平均值。噪聲是DNA探針沒有連接時(shí)讀取的讀數(shù)，信號(hào)是有DNA探針時(shí)測得的讀數(shù)。本底噪聲讀數(shù)通過按照上述所有列出的制備步驟只是不加入任何探針DNA來獲得。從加入探針DNA獲得的信號(hào)中減去該噪聲水平，就可以消除所有非特異性的結(jié)合信號(hào)，獲得結(jié)合效率的真實(shí)測定值。
從圖1可以觀察到，未經(jīng)處理的聚苯乙烯條(Med St.)與胺化DNA的結(jié)合比未經(jīng)處理的平板(Med Pl.)或任何經(jīng)處理的表面都更為有效。
作為進(jìn)一步的描述，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果顯示在圖2中。將不同濃度的胺化DNA(以寡核苷酸結(jié)合緩沖液(對(duì)于NOS涂覆的平板，pH8.5，1M NaCl，50mM磷酸；對(duì)于未經(jīng)處理的試條，0.1M磷酸，pH11.0)配制)施加到NOS涂覆的聚苯乙烯平板和未經(jīng)處理的聚苯乙烯試條上，37℃培育1小時(shí)。加入底物溶液后20分鐘，讀取405nm的OD讀數(shù)，取4個(gè)孔的平均值。如結(jié)果所示，未經(jīng)處理的聚苯乙烯試條表現(xiàn)出更多信號(hào)，尤其在較低濃度下，因此結(jié)合性質(zhì)比在這些條件下的NOS涂覆的表面更佳。
然后，發(fā)明者試圖確定未經(jīng)處理的聚苯乙烯平板與未經(jīng)處理的相同聚苯乙烯試條相比有何不同。發(fā)現(xiàn)用于本實(shí)驗(yàn)的多孔試條由一模塑過程產(chǎn)生，該過程與用來形成多孔板的模塑過程稍有不同。第一，在模塑試條過程中，模具中沒有用潤滑劑。相反，模塑平板時(shí)需要在模具空腔內(nèi)有潤滑劑(例如硬脂酸鋅)以便將器具適當(dāng)?shù)臄D出。第二，試條模塑采用的通氣比平板模塑更多?？紤]到這些，發(fā)明者開始密切關(guān)注未經(jīng)處理的試條和平板的表面化學(xué)性質(zhì)，更具體地說，是聚苯乙烯的表面氧含量。
發(fā)現(xiàn)制備孔條的方法產(chǎn)生了一種表面氧含量約為0.6％的產(chǎn)物，而用潤滑劑和較少通氣制得的平板的表面氧少大約4倍。隨后的測試揭示，存在一個(gè)產(chǎn)生有效結(jié)合或固定胺化DNA的基質(zhì)的表面氧最適水平。
圖3顯示了表面氧和結(jié)合胺化DNA能力之間的關(guān)系。將四種不同pH水平的結(jié)合溶液配制的、以1.0pmol/孔濃度的胺化DNA施加到聚苯乙烯表面上，并于37℃培育1小時(shí)。通過從有效結(jié)合表面的標(biāo)記的寡核苷酸收回的信號(hào)量測定結(jié)合胺化DNA的能力。這些結(jié)果是在加入底物溶液后20分鐘讀取405nm讀數(shù)獲得的，它們表示從四個(gè)不同孔讀數(shù)的平均值。表1顯示了圖3所示的測試結(jié)果。
表1<
>從圖3看出，結(jié)合胺化DNA的條件在約0.3-2.0原子百分?jǐn)?shù)下的未處理聚苯乙烯條中最優(yōu)，其隨結(jié)合溶液的pH稍有變化。在調(diào)查的四個(gè)pH水平中，用pH為11的寡核苷酸結(jié)合緩沖液在每個(gè)測試點(diǎn)提供了最佳的結(jié)合效果。
當(dāng)聚苯乙烯條經(jīng)過磨蝕以致接觸模具的表面被刮去，氧含量和結(jié)合能力均下降，從而證實(shí)了表面上的氧的重要性。當(dāng)用1.5mRadγ消毒照射聚苯乙烯平板時(shí)，氧原子含量以及平板的結(jié)合能力均顯著增加。然而，當(dāng)聚苯乙烯經(jīng)受更高劑量的γ輻照(即3.0mRad)后，表面氧含量增加，而結(jié)合能力卻漸漸減少。該數(shù)據(jù)提示了一個(gè)結(jié)合胺化DNA最優(yōu)水平的表面氧含量。
應(yīng)當(dāng)注意，盡管最優(yōu)的表面氧原子百分?jǐn)?shù)大約在0.3-4.0之間，但是當(dāng)用pH3、6或11的結(jié)合溶液時(shí)，表面氧原子百分?jǐn)?shù)在4.0-8.0之間的結(jié)合能力仍有一定程度的增強(qiáng)(如圖3所示)。另外，表面氧原子百分?jǐn)?shù)在0.2-0.3之間的聚苯乙烯有一些有利的結(jié)合。結(jié)合信號(hào)低于0.5的聚苯乙烯基本上喪失了其作為制品用于需要固定胺化DNA的試驗(yàn)中的用途。
除了用制備孔條的方法來模制聚苯乙烯制品，還可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的幾種方法來提高表面氧含量。一個(gè)例子是用合適量的γ輻射處理。影響表面氧含量的其它已知方法包括UV輻照、臭氧處理和電暈放電。表面氧含量可以根據(jù)這些處理的強(qiáng)度和時(shí)間而不同。
圖4描述了pH對(duì)具有最優(yōu)表面氧原子百分?jǐn)?shù)的未涂覆的聚苯乙烯板的結(jié)合能力的效應(yīng)。在產(chǎn)生圖4所示結(jié)果的實(shí)驗(yàn)中，將胺化DNA以1.0pmol/孔的濃度施加到板上，并和不同pH的緩沖液一起在37℃下培育1小時(shí)。在加入新鮮的底物溶液后20分鐘，讀取405nm的OD讀數(shù)，獲得結(jié)果。圖示的數(shù)值是四個(gè)不同孔的結(jié)果的平均值。這些結(jié)果表明，與DAS或NOS涂覆的表面不同，胺化DNA將在不同pH水平下和該表面結(jié)合。
圖5描述了濕度在一段時(shí)間內(nèi)對(duì)胺化DNA結(jié)合的效應(yīng)。在試驗(yàn)前，將未處理的聚苯乙烯條以及涂覆了NOS的條和板于25℃、85％濕度下保藏4周。將胺化DNA以1.0pmol/孔的濃度施加到板上，并于37℃培育1小時(shí)。在加入新鮮的底物溶液后20分鐘，讀取405nm下的OD讀數(shù)，獲得結(jié)果。圖示數(shù)值為四個(gè)不同孔的結(jié)果的平均值。從圖5可以看出，在各測試點(diǎn)上，未處理的聚苯乙烯條與胺化DNA的結(jié)合比涂覆了NOS的試條更佳。
產(chǎn)生的數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，連接伯胺和DNA分子的連接臂是DNA結(jié)合表面氧原子百分?jǐn)?shù)在0.3-4.0之間的未處理的聚苯乙烯所必需的。如本文所述實(shí)驗(yàn)中所采用的，用長度在6和12個(gè)碳原子之間的碳鏈分子作為連接臂。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與有連接臂時(shí)的結(jié)合結(jié)果相比，沒有連接臂時(shí)獲得的信號(hào)低25％。還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，連接臂的長度不會(huì)顯著地影響DNA結(jié)合。此數(shù)據(jù)提示，胺化DNA固定到具有最佳表面氧含量的聚苯乙烯上非?？赡苁峭ㄟ^NH2和聚苯乙烯表面之間的化學(xué)或物理鍵而發(fā)生的。它還消除了連接臂中非極性碳-碳鏈和非極性聚苯乙烯表面之間疏水性結(jié)合有強(qiáng)促進(jìn)作用的可能性。
圖4所示的pH實(shí)驗(yàn)結(jié)果還一定程度地顯示了聚苯乙烯和胺化DNA之間的結(jié)合機(jī)制。該結(jié)果顯示有兩個(gè)最大峰，在pH6和pH11處。這提示可能有兩種不同的機(jī)制涉及胺化DNA與表面氧含量在0.3-4.0原子百分?jǐn)?shù)之間的聚苯乙烯表面的結(jié)合。pH6時(shí)的最大值可能表示物理或化學(xué)鍵合—胺化DNA上的NH3+基團(tuán)和氧化的聚苯乙烯表面上的羧酸酯基團(tuán)之間的離子鍵或胺化DNA上的NH2基團(tuán)和氧化的聚苯乙烯上的羰基基團(tuán)之間的化學(xué)反應(yīng)。pH11上的pH最大值可能是由于胺化DNA上的胺基團(tuán)和氧化的聚苯乙烯表面上的羧基之間化學(xué)鍵合。
然而，實(shí)施本發(fā)明不需要知道胺化DNA與具有必需表面氧含量的聚苯乙烯表面結(jié)合背后的機(jī)制的知識(shí)。
另外，如圖6所示，當(dāng)采用pH11的結(jié)合溶液時(shí)，表面氧含量為0.62原子百分?jǐn)?shù)的聚苯乙烯與胺修飾的cDNA的結(jié)合顯著優(yōu)于NOS涂覆的聚苯乙烯或未修飾的cDNA。這表明，即使是100個(gè)以上核苷酸(cDNA)的胺化DNA也能有效地固定在具有最佳表面氧含量的聚苯乙烯上。另外，甚至未修飾的cDNA分子與氧化聚苯乙烯的結(jié)合都要優(yōu)于修飾的cDNA分子與NOS涂覆表面的結(jié)合。這可能提示，在cDNA分子中，來自多個(gè)個(gè)別核苷酸的氨基參與了固定作用。
應(yīng)當(dāng)理解，具有最佳表面氧水平的聚苯乙烯表面的所述結(jié)合效應(yīng)不局限于胺化的DNA。該表面通常對(duì)胺基團(tuán)有反應(yīng)。這暗示可以用各類側(cè)基如羧基、胺、生物素等來衍生這些反應(yīng)性的聚苯乙烯。因此，可共價(jià)連接更大的生物活性分子如抗原、抗體和細(xì)胞附著因子，從而將它們固定在聚苯乙烯表面上。實(shí)際上，反應(yīng)的聚苯乙烯將和細(xì)胞附著肽反應(yīng)，為內(nèi)皮細(xì)胞系提供有效的細(xì)胞生長表面。該方法還可延用包括束縛肽的聚環(huán)氧乙烷。
本發(fā)明的一個(gè)應(yīng)用是設(shè)計(jì)聚苯乙烯上的圖案，用結(jié)合細(xì)胞和不結(jié)合細(xì)胞的交替區(qū)域、或結(jié)合DNA和不結(jié)合DNA的交替區(qū)域形成測試陣列。個(gè)別結(jié)合區(qū)可以是獨(dú)立測試的對(duì)象。交替區(qū)域例如可以這樣制得提供具有非結(jié)合性質(zhì)的聚苯乙烯(表面氧含量最好在0.3-8.0原子百分?jǐn)?shù)范圍外)，僅選出部分表面用γ輻射處理來產(chǎn)生結(jié)合性質(zhì)(表面氧含量最好在0.3-4.0原子百分?jǐn)?shù)之間)。指定為非結(jié)合性的表面區(qū)域例如可以用有圖案的掩模來屏蔽輻射。
也相信，在0.3-8.0原子百分?jǐn)?shù)范圍內(nèi)的表面氧含量所顯示的獨(dú)特的固定化性質(zhì)能延用到其它苯乙烯聚合物，例如苯乙烯丙烯腈共聚物(SAN)、ABS(丙烯腈-丁二烯-苯乙烯)、丁二烯-苯乙烯共聚物(HIP和MIP，K-resin和Kraton(R))、聚對(duì)甲基苯乙烯、苯乙烯-丙烯酸共聚物、聚α甲基苯乙烯和含有苯乙烯為基的聚合物的聚合混合物。目前，對(duì)這些聚合物的初步測試已經(jīng)確認(rèn)了這一觀點(diǎn)。
還應(yīng)注意，表面氧含量為0.62原子百分?jǐn)?shù)的光學(xué)上透明的聚苯乙烯(MEDIUMBIND)與表面氧含量為0.62原子百分?jǐn)?shù)的黑色不透明苯乙烯-丁二烯共聚物(MIPS)的寡核苷酸結(jié)合效應(yīng)的比較。從圖7和圖8所示的固定數(shù)據(jù)可以推斷，黑色不透明的和光學(xué)上透明的聚苯乙烯之間的結(jié)合胺化DNA或cDNA的能力之間沒有顯著不同。這提示，用來形成不透明MIPS的顏料對(duì)表面結(jié)合沒有不利影響。這與在依賴不透明基質(zhì)限制背景噪聲的化學(xué)發(fā)光或熒光固定試驗(yàn)中不透明聚苯乙烯的潛在用途有很大的關(guān)系。
盡管本發(fā)明出于描述目的作了詳細(xì)描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，這些詳細(xì)描述只是為了這個(gè)目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員能在不脫離下列權(quán)利要求確定的本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)對(duì)其作各種變化，例如改變其它聚合物的表面氧含量。
權(quán)利要求
1.一種將DNA固定在表面上的方法，該方法包括a)提供表面氧含量在0.2至8.0原子百分?jǐn)?shù)之間的苯乙烯聚合物基質(zhì)，和b)將DNA連接到該基質(zhì)表面上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述DNA是胺修飾的寡核苷酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述DNA是胺修飾的cDNA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述DNA是未經(jīng)修飾的cDNA。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述苯乙烯聚合物基質(zhì)具有0.3-4.0原子百分?jǐn)?shù)之間的表面氧含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述苯乙烯聚合物基質(zhì)具有0.3-2.0原子百分?jǐn)?shù)之間的表面氧含量。
7.一種用于化學(xué)和生物分析的制品，它包含表面氧含量在0.2-8.0原子百分?jǐn)?shù)之間的苯乙烯聚合物基質(zhì)，和直接連接在所述基質(zhì)表面上的多個(gè)DNA分子。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述DNA分子是胺修飾的寡核苷酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述DNA分子是胺修飾的cDNA。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述DNA分子是未經(jīng)修飾的cDNA。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制品，其中所述苯乙烯聚合物基質(zhì)的表面氧含量在0.3-4.0原子百分?jǐn)?shù)之間。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制品，其中所述苯乙烯聚合物基質(zhì)的表面氧含量在0.3-2.0原子百分?jǐn)?shù)之間。
13.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制品，其中所述基質(zhì)是多孔板。
14.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制品，其中所述基質(zhì)是有多個(gè)孔的條。
15.一種將胺化的生物分子固定在表面上的方法，該方法包括a)提供表面氧含量在0.2至8.0原子百分?jǐn)?shù)之間的苯乙烯聚合物基質(zhì)，和b)將攜帶生物分子的胺連接到該基質(zhì)表面上。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述苯乙烯聚合物基質(zhì)的表面氧含量在0.3-4.0原子百分?jǐn)?shù)之間。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述苯乙烯聚合物基質(zhì)的表面氧含量在0.3-2.0原子百分?jǐn)?shù)之間。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述生物分子是肽。
19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述生物分子是抗原。
20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述生物分子是抗體。
21.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述生物分子是細(xì)胞附著因子。
22.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制品，其中所述結(jié)合區(qū)的表面氧含量在0.3-2.0原子百分?jǐn)?shù)之間。
23.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制品，其中所述生物分子是胺修飾的寡核苷酸。
24.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制品，其中所述生物分子是肽。
25.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制品，其中所述抗原分子是抗原。
26.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制品，其中所述生物分子是抗體。
27.根據(jù)權(quán)利要求29所述的制品，其中所述生物分子是細(xì)胞附著因子。
28.一種用于化學(xué)或生物測試的基質(zhì)的制備方法，該方法包括a)提供具有一個(gè)表面的苯乙烯聚合物基質(zhì)，和b)使所述表面受0.1-3.0mRad之間的γ消毒作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種將胺化DNA固定在基質(zhì)表面上用于DNA雜交試驗(yàn)的方法。該表面可廣泛用于各種模制實(shí)驗(yàn)室制品,包括多孔板、細(xì)胞培養(yǎng)皿和生物容器。該方法包括下列步驟:提供表面氧含量在0.3—4.0原子百分?jǐn)?shù)之間的聚苯乙烯基質(zhì),以及將胺修飾的寡核苷酸連接到該基質(zhì)表面。本發(fā)明還公開了所得的制品,該制品包含表面氧含量在0.3—4.0原子百分?jǐn)?shù)之間的聚苯乙烯基質(zhì),以及多個(gè)直接連接在基質(zhì)表面上的胺修飾的寡核苷酸。
文檔編號(hào)C07K16/00GK1265666SQ98807810
公開日2000年9月6日 申請(qǐng)日期1998年7月30日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月30日
發(fā)明者D·C·布克班德, L·S·赫什, X·謝 申請(qǐng)人:康寧股份有限公司