專利名稱：丙氟沙星胃腸外用的組合物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及基本上不含弱極性雜質(zhì)的萘啶酮類抗生素丙氟沙星(alatrofloxacin)甲磺酸鹽、所述丙氟沙星甲磺酸鹽的胃腸外用的組合物和純化丙氟沙星甲磺酸鹽的方法。
丙氟沙星甲磺酸鹽是有關(guān)萘啶酮類抗生素托氟沙星(trovafloxacin)的甲磺酸前藥的鹽。用目前的方法制備的丙氟沙星甲磺酸鹽的純度非常高。不過，用這些目前的方法制備的丙氟沙星甲磺酸鹽含有微量弱極性雜質(zhì)，這些雜質(zhì)在經(jīng)過不確定的一段時間后，會從胃腸外用的組合物中沉淀出來。這些弱極性雜質(zhì)不能用工業(yè)上可行的方法充分除去，例如重結(jié)晶、利用閃蒸硅膠的標準色譜法、溶劑/溶劑萃取法，或者用硅藻土處理。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，用聚苯乙烯樹脂處理粗反應(yīng)產(chǎn)物，即用任意目前已知的文獻方法制備的產(chǎn)物，能夠成功地除去這些雜質(zhì)。
以前已知喹諾酮類抗生素環(huán)丙沙星也含有雜質(zhì)，使產(chǎn)物不適用于胃腸外制劑。1988年10月26日出版的歐洲專利公報287926描述了用硅藻土處理環(huán)丙沙星進行純化，以便得到適用于胃腸外制劑的產(chǎn)物。如上所述，用硅藻土處理丙氟沙星甲磺酸鹽不能充分除去弱極性雜質(zhì)。
上述丙氟沙星的抗菌活性和合成方法描述在分別于1992年11月17日和1993年7月20日公告的在此作為參考文獻引用的美國專利5,164,402和5,229,396中。上述專利與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
1997年1月3日出版的國際專利申請公布號WO97/00268要求保護制備丙氟沙星的另一種方法。上述公布的申請在此作為參考文獻引用。
1997年3月6日出版的國際專利申請公布號WO97/08191描述了制備丙氟沙星及其多形體的第三種方法，在此作為參考文獻引用。上述專利公報與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
1995年7月20日出版的國際專利申請公布號WO95/19361、1996年7月9日提交的美國專利申請60/021419和1996年10月31日提交的國際專利申請PCT/EP 96/04782要求保護用于制備丙氟沙星和托氟沙星的新穎中間體，這些文獻均在此引用。上述專利公報和申請與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
1995年12月12日公告的美國專利5,475,116和1993年10月26日公告的美國專利5,256,791要求保護用于合成丙氟沙星和托氟沙星的多種氮雜二環(huán)己烷中間體，運些文獻均在此引用。上述專利與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
1996年12月2日提交的美國專利申請08/764655涉及用丙氟沙星和托氟沙星治療幽門螺桿菌感染的方法，這些文獻均在此引用。上述專利申請與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
1996年12月12日出版的國際專利申請公布號WO96/39406要求保護無水7-([1α，5α，6α]-6-氨基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-3-基)-6-氟-1-(2，4-二氟苯基)-1，4-二氫-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸，甲磺酸鹽的新穎品形、使用所述化合物治療哺乳動物、尤其是人的細菌感染的方法、和藥物組合物，該文獻在此引用。上述公布的專利申請與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
1996年7月29日提交的國際專利申請PCT/IB 96/00756要求保護托氟沙星的兩性離子形式，它可用于以混懸液方式給藥的藥物，該文獻在此引用。上述專利申請與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及純化式I化合物的方法，
包括用一種疏水性樹脂處理含有一定量所述式I化合物和弱極性雜質(zhì)的不純反應(yīng)產(chǎn)物。所述弱極性雜質(zhì)是由它們的高效液相色譜(HPLC)保留時間所定義的，條件是將樣本注入惠普1100型系列高效液相色譜儀，用40％乙腈、0.05M磷酸二氫鉀(KH2PO4)和0.3％高氯酸(V/V)的移動相溶液洗脫，流速約為每分鐘2ml，柱子為Puresil5微米C18二氧化硅HPLC柱(4.6×150mm)，注射體積為20μl，檢測器為惠普1100系列二極管組檢測器，檢測波長為270nm。HPLC柱在環(huán)境溫度(20-25℃)下使用。由上述HPLC條件定義的所述弱極性雜質(zhì)的保留時間為約2.1分鐘至約30分鐘。一種特定的不需要的弱極性雜質(zhì)在上述HPLC條件下的保留時間為9-12分鐘。上述保留時間為9-12分鐘的雜質(zhì)具有式II結(jié)構(gòu)
(以下也稱之為“低聚物雜質(zhì)”)。優(yōu)選地，處理后的弱極性雜質(zhì)占粗產(chǎn)物重量的500ppm以下，更優(yōu)選為60ppm以下。最優(yōu)選地，所述雜質(zhì)占20ppm以下。優(yōu)選地，該疏水性樹脂是一種交聯(lián)聚苯乙烯樹脂，例如DiaionHP-20或Amberchrom CG-161。
本發(fā)明也涉及式I化合物，
它基本上不含弱極性雜質(zhì)，更優(yōu)選為基本上不含式II化合物。
本發(fā)明也涉及胃腸外用的組合物，它包含抗菌有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽和一種藥學上可接受的載體，基本上不含弱極性雜質(zhì)，優(yōu)選為基本上不含式II化合物。優(yōu)選地，該藥學上可接受的載體是水。
本發(fā)明也涉及上述式I化合物是凍干產(chǎn)物的胃腸外用組合物。
本發(fā)明也涉及這樣一種藥物組合物，其中上述式I化合物在單位劑量容器中的含量約10mg至約700mg，優(yōu)選為約275mg至約500mg，最優(yōu)選為約300mg。
本發(fā)明也涉及式II化合物。
本發(fā)明也涉及這樣一種藥物組合物，它包含抗菌有效量的式II化合物或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明也涉及治療細菌感染的方法，它包括將抗菌有效量的式II化合物對被細菌感染的患者給藥。
本發(fā)明也涉及式III化合物。
本發(fā)明還涉及這樣一種藥物組合物，它包含抗菌有效量的式III化合物或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明也涉及治療細菌感染的方法，它包括將抗菌有效量的式III化合物對被細菌感染的患者給藥。
發(fā)明詳述丙氟沙星可以用三種方法制備，這些方法已經(jīng)描述在公布了的專利或?qū)＠暾堉小＞唧w來說，可以通過BOC-(L-Ala-L-Ala)氮雜二環(huán)己烷與活化喹諾酮的偶合反應(yīng)來制備丙氟沙星，如1992年11月17日公告的美國專利5,164,402和1993年7月20日公告的美國專利5,229,396所述。第二種制備丙氟沙星的方法涉及BOC-L-Ala-L-Ala與被保護的氮雜二環(huán)己烷-萘啶核的反應(yīng)，如1997年1月3日出版的國際專利公布號WO97/00268所述。最后，第三種制備丙氟沙星的方法涉及托氟沙星甲磺酸鹽與BOC-L-Ala-L-Ala的偶合反應(yīng)，如1997年3月6日出版的國際專利公布號WO97/08191。上述專利或?qū)＠暾埦诖俗鳛閰⒖嘉墨I引用。上述專利和專利申請與本申請共同轉(zhuǎn)讓。
用任意上述方法制備的丙氟沙星粗產(chǎn)品含有少量弱極性雜質(zhì)。雜質(zhì)的具體種類和數(shù)量取決于所用的方法和條件。按照上述三種方法之一制備的丙氟沙星藥物粗產(chǎn)品的HPLC色譜特征，分別描繪在

圖1-3中，記錄條件如上所述。具體來說，圖1描繪了按照Brighty等人于1992年11月17日公告的美國專利5,164,402和1993年7月20日公告的美國專利5,229,396所述方法制備的丙氟沙星甲磺酸鹽的色譜。這種原始方法中雜質(zhì)的大致濃度折算為已知的低聚物濃度后，列在下表1中。圖2描繪了按照1997年1月3日公開的國際專利申請WO97/00268所述方法制備的丙氟沙星甲磺酸鹽的HPLC色譜。由該第二種方法產(chǎn)生的雜質(zhì)的大致濃度折算為已知的低聚物濃度后，列在下表2中。圖3描繪了按照1997年3月6日公開的國際專利申請WO97/08191所述方法制備的丙氟沙星甲磺酸鹽的HPLC色譜。由該第三種方法產(chǎn)生的雜質(zhì)的大致濃度折算為已知的低聚物濃度后，列在下表3中。如上所述，所述弱極性雜質(zhì)是由它們的保留時間所定義的，條件是將樣本注入惠普1100型系列高效液相色譜儀，用40％乙腈、0.05M磷酸二氫鉀(KH2PO4)和0.3％高氯酸(V/V)的移動相溶液洗脫，流速約為每分鐘2ml，柱子為Puresil5微米C18二氧化硅HPLC柱(4.6×150mm)，注射體積為20μl，檢測器為惠普1100系列二極管組檢測器，檢測波長為270nm。由上述條件定義的所述弱極性雜質(zhì)的保留時間為約2.2分鐘至約30分鐘。一種特定的不需要的雜質(zhì)在上述條件下的保留時間為9-12分鐘(約為10.5分鐘)。上述保留時間為9-12分鐘的雜質(zhì)具有式II結(jié)構(gòu)。
該雜質(zhì)占按照上述第三種方法制備的反應(yīng)產(chǎn)物的約700ppm。雜質(zhì)的絕對含量取決于所用方法和條件。經(jīng)過純化后，該雜質(zhì)占反應(yīng)產(chǎn)物的約100ppm以下，優(yōu)選為50ppm以下，最優(yōu)選為20ppm以下。
按照上述條件，其他雜質(zhì)的保留時間為約23.0、20.1、13.6、11.7、11.0、10.9、9.8、8.4、7.6、7.1、6.2、5.5、5.0、4.8、3.9、3.6、3.1、2.8、2.5和2.1分鐘。由于ppm濃度較低，對應(yīng)于這些保留時間的化合物還沒有進行過特征鑒別。
這些雜質(zhì)可以用樹脂色譜法除去，用一種極性溶劑洗脫。具體來說，將反應(yīng)產(chǎn)物溶于少量水。然后將溶解了的粗反應(yīng)產(chǎn)物加入到一種聚苯乙烯樹脂柱中，例如水合Amberchrom CG-161聚苯乙烯樹脂(TosohaasChemicals 156 Keystone Drive，Montgomeryville，PA 18936)、AmberliteXAD-4或XAD-16(Rohm and Haas)或Diaion HP-20(Mitsubishi Chemical Co.)，優(yōu)選為水合Amberchrom CG-161聚苯乙烯樹脂。聚苯乙烯樹脂是疏水性大孔苯乙烯類聚合物珠粒型樹脂，它提供了用于吸收的非極性芳族表面。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解的是，可以得到不同粒徑、孔徑和表面積的非離子型聚合物樹脂，這些參數(shù)影響了分離條件。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員也將理解的是，可以通過改變樹脂參數(shù)來優(yōu)化具體應(yīng)用結(jié)果。粗反應(yīng)產(chǎn)物(千克)與干樹脂重量(千克)的重量比為約8至約15千克粗反應(yīng)產(chǎn)物比約一千克干樹脂。優(yōu)選地，粗反應(yīng)產(chǎn)物重量與干樹脂重量之比約為10-12千克粗反應(yīng)產(chǎn)物每千克干樹脂。環(huán)境溫度下，洗脫液體積(升)與粗藥物物質(zhì)重量(千克)之比為約1至約70升溶劑每千克粗藥物物質(zhì)，優(yōu)選為10至40升水每千克藥物物質(zhì)。最優(yōu)選地，在環(huán)境溫度下，約25升水每千克藥物物質(zhì)用來洗脫純產(chǎn)物。洗脫液通過柱子的流速在1-10床體積每小時范圍內(nèi)(即，所需洗脫液的量在一小時內(nèi)充滿和流空樹脂床)。優(yōu)選地，洗脫溶液的流速為3-5床體積每小時。
按照上述方法制備的產(chǎn)物基本上不含弱極性雜質(zhì)，適合用作胃腸外用的組合物。用上述三種方法制備的粗丙氟沙星藥物產(chǎn)品為原料得到的純丙氟沙星甲磺酸鹽的HPLC色譜分別描繪在圖4-6中，記錄條件如上所述。具體來說，圖4描繪了按照Brighty等人于1992年11月17日公告的美國專利5,164,402和1993年7月20日公告的美國專利5,229,396所述方法制備的粗丙氟沙星甲磺酸鹽經(jīng)過樹脂處理后，所得純丙氟沙星甲磺酸鹽的色譜。純化后雜質(zhì)的大致濃度折算為已知的低聚物含量后，列在下表1中。圖5描繪了按照1997年1月3日公布的國際專利申請WO97/00268所述方法制備的粗丙氟沙星甲磺酸鹽經(jīng)過處理后，所得純丙氟沙星甲磺酸鹽的HPLC色譜。純化后雜質(zhì)的大致濃度折算為已知的低聚物含量后，列在下表2中。圖6描繪了按照1997年3月6日公布的國際專利申請WO97/08191所述方法制備的粗丙氟沙星甲磺酸鹽經(jīng)過處理后，所得純丙氟沙星甲磺酸鹽的HPLC色譜。純化后雜質(zhì)的大致濃度折算為已知的低聚物含量后，列在下表3中。
表1
表2
表3
胃腸外用組合物比其他藥物組合物更易受痕量污染物的影響。這是因為胃腸外用組合物無論是稀釋的還是重組的，都是液體劑型，其質(zhì)量標準易為目檢確定。胃腸外用組合物的目檢能夠檢測出低至10ppm的弱極性雜質(zhì)?？梢婋s質(zhì)的存在影響公眾對產(chǎn)品安全性、穩(wěn)定性和使用的信心。因此，從胃腸外用組合物中除去盡可能多的弱極性雜質(zhì)是很重要的，因為弱極性雜質(zhì)的水溶性一般較差，很可能從制劑中沉淀出來。而且，大多數(shù)工業(yè)國家要求，按照藥物準許的角度考慮，胃腸外用組合物應(yīng)當滿足純度和沒有微粒污染的最低標準。美國的最低標準是胃腸外用組合物“基本上不含目檢能夠觀察到的粒子”，《美國藥典》R-246(1994)。美國藥典(USP)沒有對滿足該標準的微粒狀物、即雜質(zhì)的最小量提供具體說明。USP提供了若干試驗，列舉亞可見的外來粒子，這有助于定量微粒狀物質(zhì)。不過，這些試驗都不足以滿足組合物應(yīng)當“基本上不含目檢能夠觀察到的粒子”這一標準。盡管沒有一種試驗可以證明組合物的純度，不過，濁度分析是一種普遍接受的用于定量微粒狀物的測量方法，見W.J.Passl等《分析員》105，512-515(1980)。根據(jù)標準濁度測量法，若比濁法濁度單元(NTU)值為0-0.45，則可以認為溶液是不含微粒狀物的。本發(fā)明產(chǎn)物用普通濁度儀分析，如Hellige濁度儀(Hellige，Inc.877Stewart Avenue，Garden City，New York 11530)，所測濁度通?？傻椭?.3NTU。按照國際專利公布號WO97/08191所述方法制備的粗原料的濁度測量結(jié)果高達約1NTU。圖7顯示濁度與雜質(zhì)濃度(相對于粗原料的低聚物ppm)之間的函數(shù)關(guān)系。本發(fā)明方法包括所有濁度測量結(jié)果小于0.5NTU的組合物。
如此純化的產(chǎn)物可以配制成用于胃腸外給藥(例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下)的劑型，用于治療哺乳動物、包括人的細菌感染，方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的或者是下述方法。一般來說，式I化合物的給藥劑量為約0.5至約16mg/kg/天，優(yōu)選為約4-7mg/kg/天，最優(yōu)選為4.5mg/kg/天。不過，根據(jù)所治療患者的狀況，也可對劑量進行某些必要的調(diào)整。無論如何，負責給藥的人員將針對個體患者確定適當劑量。
本發(fā)明的丙氟沙星甲磺酸鹽可以以多種不同的劑型給藥，一般來說，本發(fā)明治療上有效的化合物在這些劑型中所含的濃度范圍為約0.5重量％至約70重量％(凍干產(chǎn)物為100重量％)。對胃腸外給藥(肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi))來說，通常制成活性成分的無菌、不含熱源的可注射溶液?；旧喜缓鯓O性雜質(zhì)、優(yōu)選為不含式II化合物的式I化合物溶液可以在一種溶劑中制得，例如芝麻油、花生油、水或含水丙二醇。優(yōu)選地，該溶液是不被緩沖的水。如果必要和液體稀釋劑首先賦予了等滲性，水溶液也可以進行適當調(diào)整和緩沖。這些水溶液適用于靜脈內(nèi)注射。油溶液適用于動脈內(nèi)、肌內(nèi)和皮下注射。所有這些溶液均在無菌條件下制備，按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的標準藥學工藝，這一點是容易實現(xiàn)的。在治療動物的情況下，化合物可以肌內(nèi)或皮下給藥，劑量水平為約0.1至20mg/kg/天，優(yōu)選為約0.2至約10mg/kg/天，分一次或最多3次給藥。
式II化合物體外水解除去L-Ala-L-Ala二肽基后，也具有抗菌活性。該水解了的化合物具有式III結(jié)構(gòu)。
式III化合物的抗菌活性可以按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法測定，例如E.Steers等《抗生素與化療》9，307(1959)所述。按照上述方法測定時，式III化合物對化膿鏈球菌的最低抑制濃度(MIC)為6.25μg/ml，對多數(shù)金黃色葡萄球菌菌株的MIC為12.5-25μg/ml。
式III化合物可用常規(guī)方式利用一種或幾種藥學上可接受的載體進行配制。因此，可以被制成用于經(jīng)口、頰或直腸給藥的劑型。
對口服給藥來說，式III化合物的藥物組合物例如可以采取片劑或膠囊的劑型，通過常規(guī)方法與下列藥學上可接受的賦形劑制備，例如粘合劑(例如預凝膠化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或二氧化硅)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或淀粉羥乙酸鈉)；或潤濕劑(例如月桂基硫酸鈉)。片劑可以用本領(lǐng)域的熟知方法進行包衣?？诜o藥的液體制劑例如可以采取溶液、糖漿或混懸液的劑型，或者它們可以以干燥產(chǎn)物形式存在，使用前與水或其他適當?shù)妮d體構(gòu)成液體。該液體制劑可以通過常規(guī)方法，與下列藥學上可接受的添加劑制備，例如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、甲基纖維素或氫化食用脂)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；不含水的載體(例如杏仁油、油性酯或乙醇)；和防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯、或山梨酸)。
對頰部給藥采說，式III化合物的組合物可以采取片劑或錠劑的劑型，用常規(guī)方法制備。
式III化合物也可以被制成直腸用組合物，例如栓劑或保留灌腸劑，例如含有常規(guī)的栓劑基質(zhì)，例如可可脂或其他甘油酯。
用于治療普通成年人細菌感染的口服、直腸或頰給藥的式III化合物的建議劑量為約0.1至約500mg/kg/天、優(yōu)選為約0.5至約50mg/kg/天的活性成分每單位劑量，例如每天可以分1至4次給藥。
下列實施例舉例說明本發(fā)明化合物和組合物的制備。熔點未經(jīng)校正。NMR數(shù)據(jù)以百萬分濃度(δ)記錄，并參照來自樣本溶劑(除非另有說明，為氘代二甲基亞砜)的氘阻信號。所用商品試劑不經(jīng)進一步純化。DMF指的是N，N-二甲基甲酰胺。色譜法指的是高效液相色譜法，條件是在惠普1100型系列高效液相色譜儀上，用40％乙腈、0.05M磷酸二氫鉀(KH2PO4)和0.3％高氯酸(V/V)的移動相溶液洗脫，流速約為每分鐘2ml，柱子為Puresil5微米C18二氧化硅HPLC柱(4.6×150mm)，注射體積為20μl，檢測器為惠普1100系列二極管組檢測器，檢測波長為270nm。HPLC柱在環(huán)境溫度下使用。室溫或環(huán)境溫度指的是20-25℃。為了方便和使產(chǎn)率最高，所有不含水的反應(yīng)均在氮氣下進行。減壓下的濃度指使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。
實施例1丙氟沙星甲磺酸鹽的成批樹脂處理將除了其他弱極性雜質(zhì)以外還含有700ppm低聚物雜質(zhì)的丙氟沙星甲磺酸鹽(50g)溶于0.05％甲磺酸水溶液(714ml)，然后加入MitsubishiDiacon HP-20疏水性樹脂(50g)。在黑暗中攪拌樹脂懸液24小時后，懸液過濾，溶液用高效液相色譜法(HPLC)分析(HPLC條件如上所述)。過濾了的溶液含有19ppm低聚物雜質(zhì)，丙氟沙星甲磺酸鹽的收率為80％。低聚物具有下列NMR (1NMR DMSO d6)δ9.98(d，1H)；8.79(s，1H)；8.51(s，1H)，8.45(d，1H)，8.16(d 1H)，8.03(d 1H)，7.92(d1H)，7.76(m 2H)，7.61(m 2H)，7.33(m 2H)，4.18(q 1H)，3.77(q 1H)，3.60(m 8H)，2.54(s 1H)，2.34(s 1H)，2.27(s 3H)，1.92(b.s.2H)，1.72(b.s.2H)，1.28(d 3H)，1.17(d 3H).
實施例2丙氟沙星甲磺酸鹽的樹脂柱處理在環(huán)境溫度下，將丙氟沙星甲磺酸鹽溶于10至40升水每千克藥物物質(zhì)。溶液過濾，然后通過含有水合Amberchrom CG-161聚苯乙烯樹脂的柱子(大約10-12kg粗反應(yīng)產(chǎn)物每千克干樹脂)(3-5床體積每小時)。柱子用水洗滌(3L/kg粗反應(yīng)產(chǎn)物)，然后合并洗脫液和洗液。經(jīng)過處理的丙氟沙星甲磺酸鹽溶液用HPLC分析。經(jīng)過聚苯乙烯樹脂柱處理，使式II雜質(zhì)含量從500ppm減小到30ppm以下，以藥物物質(zhì)計。另外，藥物從樹脂中的回收產(chǎn)率為95％。
實施例3兩性離子的分離向含有用樹脂處理過的丙氟沙星甲磺酸鹽(10g)(由實施例1或2制備)、去離子水(154ml)和乙醇(31ml)的溶液中滴加10％苛性劑水溶液，中和至pH為6.5-7.5。將混懸液在24℃下?；?0分鐘后，過濾。所過濾的固體用乙醇(30ml)沖洗后，兩性離子在40℃真空下干燥大約16小時?；厥盏玫奖承?800g)，產(chǎn)率為95％，為白色梯形晶體。
實施例4丙氟沙星甲磺酸鹽的生成將丙氟沙星兩性離子(濕塊重25g)濕塊或干燥產(chǎn)物與10％乙醇水溶液(242ml)混合，然后向漿液中加入甲磺酸(1.9ml)，調(diào)節(jié)pH為3.5-4.5。反應(yīng)混合物然后加熱回流，過濾，然后在大氣壓下濃縮至約原始體積的一半。溶液然后冷卻至0-5℃，所得固體?；?小時。固體過濾并用乙醇(39ml)洗滌后，將丙氟沙星甲磺酸鹽在40℃下干燥24小時。分離得到適用于胃腸外制劑的丙氟沙星甲磺酸鹽(17.7g)，產(chǎn)率為90％。
實施例5小瓶裝的胃腸外用組合物將丙氟沙星甲磺酸鹽(314.46mg，按照實施例4制備)溶于少量符合美國藥典標準的注射用水(WFI)。用下列溶液將所得溶液的pH調(diào)至4符合美國國家藥品集標準(NF)的鹽酸在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液、和/或符合美國國家藥品集標準的氫氧化鈉在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液，并稀釋至濃度為7.86mg/ml。所得溶液(40.12g)過濾，裝入40ml小瓶中，用塞子基住。密封的小瓶在115℃高壓滅菌器中滅菌15分鐘。
實施例6安瓿裝的胃腸外用組合物將丙氟沙星甲磺酸鹽(314.4mg，按照實施例4制備)溶于少量符合美國藥典標準的注射用水(WFI)。用下列溶液將所得溶液的pH調(diào)至4符合美國國家藥品集標準(NF)的鹽酸在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液、和/或符合美國國家藥品集標準的氫氧化鈉在注射用水中的1％重量/重量(w/w)溶液，并稀釋至濃度為7.86mg/ml。所得溶液(40.12g)過濾，裝入40ml安瓿中，密封。密封的安瓿在115℃高壓滅菌器中滅菌15分鐘。
實施例7凍干物將丙氟沙星甲磺酸鹽(314.46mg，按照實施例4制備)和乳糖(500mg，美國國家藥品集)溶于足量符合美國藥典標準的注射用水，得到最終重量為10000mg。所得溶液過濾，裝入20ml小瓶中。將該小瓶在0.1大氣壓的真空下凍干24小時，然后用塞子塞住小瓶密封。密封的小瓶在115℃高壓滅菌器中滅菌15分鐘。
實施例8小瓶裝的等滲胃腸外用組合物將葡萄糖(500mg，美國藥典)和丙氟沙星甲磺酸鹽(314.46mg，按照實施例4制備)溶于少量注射用水(美國藥典)，用下列溶液調(diào)pH為4鹽酸(美國國家藥品集)在注射用水中的1％(w/w)溶液、和/或氫氧化鈉在注射用水(美國藥典)中的1％(w/w)溶液，并稀釋至濃度為3.14mg/ml。所得溶液(101.7g)過濾，裝入100ml小瓶中，用塞子塞住。密封的小瓶在115℃高壓滅菌器中滅菌15分鐘。
實施例9安瓿裝的等滲胃腸外組合物將葡萄糖(500mg，美國藥典)和丙氟沙星甲磺酸鹽(314.4mg，按照實施例4制備)溶于少量注射用水(美國藥典)，用下列溶液調(diào)pH為4鹽酸(美國國家藥品集)在注射用水中的1％(w/w)溶液、和/或氫氧化鈉在注射用水(美國藥典)中的1％(w/w)溶液，并稀釋至濃度為3.14mg/ml。所得溶液(101.7g)過濾，裝入100ml安瓿中，密封。密封的安瓿在115℃高壓滅菌器中滅菌15分鐘。
實施例10L-丙氨酰-N-[3-[6-[[[3-[6-羧基-8-(2，4-二氟苯基)-3-氟-5，8-二氫-5-氧-1，8-萘啶-2-基]-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基]氨基]羰基]-8-(2，4-二氟苯基)-3-氟-5，8-二氫-5-氧-1，8-萘啶-2-基]-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基]-L-丙氨酰胺，甲磺酸鹽將250ml單頸圓底燒瓶裝上回流冷凝器和磁攪拌棒。凈化燒瓶，然后使其保持在干燥氮氣下。向該燒瓶中加入(1α，5α，6α)-7-(6-氨基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-1，4-二氫-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸乙酯(2.50g，5.62mmol)(按照國際專利公布號WO97/00268所述方法制備)、(1α，5α，6α)-N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-L-丙氨酰-N-[3-[8-(2，4-二氟苯基)-6-羧基-3-氟-5，8-二氫-5-氧-1，8-萘啶-2-基]-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-6-基]-L-丙氨酰胺(3.37g，5.11mmol)(按照國際專利公布號WO97/08191所述方法制備)和100ml二氯甲烷，得到白色漿液。向反應(yīng)混合物中加入4-二甲氨基吡啶(0.37g，3.07mmol)和溴-三吡咯烷鏻六氟磷酸鹽(2.86g，6.14mmol)后，歷時30分鐘緩慢加入1.8ml二異丙基乙胺(10.2mmol)。反應(yīng)混合物在25-30℃下攪拌過夜，然后用薄層色譜法(Merck Kieselgel60 F254二氧化硅板(5×10cm)，洗脫液為氫氧化銨/甲醇/二氯甲烷(1∶10∶90))確認反應(yīng)完全。稠漿液過濾，濾餅用二氯甲烷洗滌(2×20ml)，然后在25-30℃真空下干燥，得到4.63g(83％產(chǎn)率)去保護的中間體，是式II化合物前體。
1H NMR(CDCl3)δ8.58(s，1H)，8.35(s，1H)，8.02(d，J＝12.7Hz，1H)，7.96(d，J＝12.5Hz，1H)，7.33(m，2)，7.05(m，6H)，6.70(m，1H)，5.24(m，1H)，4.39(q，J＝7.26Hz，1H)，4.33(q，J＝7.26Hz，2H)，4.03(q，J＝1.7Hz，1H)，3.87(m，4H)，3.55(m，4H)，2.66(s，1H)，2.40(s，1H)，1.87(m，4H)，1.41(s，9H)，and 1.35(m，9H)；FABMSm/z 1086(MH+).
向去保護的中間體(4.63g，4.28mmol)在135ml 1-甲基-2-吡咯烷酮中的混懸液中加入甲磺酸(1.4ml)和水(3.1ml)。反應(yīng)混合物在80-85℃下加熱15分鐘后形成溶液，額外在80-85℃下加熱48-58小時后則基本上反應(yīng)完全。溶液冷卻至室溫，緩慢加入270ml二氯甲烷。所得漿液在室溫下攪拌2天，然后過濾。固體在減壓下干燥，得到4.0g粗產(chǎn)物。顆粒狀固體用研缽和研棒研磨，然后與160ml二氯甲烷制漿。漿液在室溫下攪拌24小時后，固體過濾，然后風干，得到式II化合物的甲磺酸鹽(3.20g，75％產(chǎn)率)。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.98(d，1H)，8.79(s，1H)，8.51(s，1H)，8.45(d，1H)，8.16(d，1H)，8.03(d，J＝12.6Hz，1H)，7.92(d，J＝12.9Hz，1H)，7.76(m，2H)，7.61(m，2H)，7.33(m，2H)，4.18(q，J＝6.85Hz，1H)，3.77(q，J＝7.06Hz，1H)，3.60(m，8H)，2.54(s，1H)，2.34(s，1H)，2.27(s，3H)，1.92(s，2H)，1.72(s，2H)，1.28(d，J＝6.85Hz，3H)，and 1.17(d，J＝7.06Hz，3H)；FABMSm/z 957(M-CH3SO3H).
實施例11(1α，5α，6α)-7-(6-[7-(6-氨基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-4-氧-1，4-二氫-1，8-萘啶-3-甲酰氨基]-(1α，5α，6α)-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-4-氧-1，4-二氫-1，8-萘啶-3-羧酸，甲磺酸鹽向裝有回流冷凝器、磁攪拌棒和氮氣入口的20ml圓底燒瓶中加入(1α，5α，6α)-1-(2，4-二氟苯基)-7-[6-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-3-基)-6-氟-1，4-二氫-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸(232mg，0.45mmol)(按照美國專利5,164,402所述方法制備)、三乙胺(1.14g，11.3mmol)、2.0ml的1-丙烷磷酸環(huán)酐(1.43g，4.50mmol)在乙酸乙酯中的2.0ml 50％(w/w)溶液和10ml四氫呋喃(THF)。所得淡黃色混懸液保持在惰性惰性氮氣下。在另一只裝有磁攪拌棒和壓力均衡加液漏斗的燒瓶中，制備(1α，5α，6α)-7-(6-氨基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-1，4-二氫-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸乙酯(200mg，0.45mmol)(按照國際專利公布號WO97/00268所述方法制備)在5ml THF中的混懸液。向加液漏斗中傾入含有三乙胺的黃色混懸液，然后歷時20分鐘緩慢加入到含有(1α，5α，6α)-7-(6-氨基-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己-3-基)-1-(2，4-二氟苯基)-6-氟-1，4-二氫-4-氧-1，8-萘啶-3-羧酸乙酯的燒瓶中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，用薄層色譜法(Merck Kieselgel 60 F254二氧化硅板(5×10cm)，洗脫液為甲醇/二氯甲烷(1∶9))確認反應(yīng)完全。將黃色混懸液傾入70ml水中，用2N鹽酸調(diào)pH為3.0。水溶液用70ml二氯甲烷萃取，二氯甲烷溶液然后用水(70ml)洗滌。在減壓下除去二氯甲烷，得到粗固體(449mg)，用6ml乙醇研制6小時。漿液過濾，固體用2ml乙醇洗滌，然后在45℃真空下干燥18小時，得到304mg(72％產(chǎn)率)式III化合物的二保護中間體，為白色晶狀固體。
Mp 248-251℃；1H NMR(CDCl3)δ10.0(d，2H)，8.60(s，1H)，8.35(s，1H)，8.05(d，1H)，7.96(d，1H)，7.33(m，2)，7.05(m，4H)，4.70(m，1H)，4.36(q，2H)，3.92(m，3H)，3.05(m，3H)，2.68(s，1H)，2.23(s，1H)，1.86(m，2H)，1.77(m，2H)1.59(s，9H)，and 1.38(t，3H)；FABMSm/z 943(M+).
向二保護的中間體(240mg，0.25mmol)在7ml 1-甲基-2-吡咯烷酮中的混懸液中加入甲磺酸(0.07ml)和水(0.16ml)。反應(yīng)混合物在80-85℃下加熱50-58小時。溶液然后冷卻至室溫，緩慢加入14ml二氯甲烷。所得懸液在室溫下攪拌2天，然后過濾。固體在減壓下干燥，得到110mg粗產(chǎn)物。粗固體用3ml二氯甲烷/甲醇(1∶1)研制4小時，然后過濾。固體在45℃真空下干燥，得到式III化合物的甲磺酸鹽(105mg，45％產(chǎn)率)。熔點大于230℃；在三氟乙酸中記錄的1H NMR顯示，不存在BOC和乙基酯保護基團，其結(jié)構(gòu)與式III化合物一致；FABMSm/z 815(M-CH3SO3H)。
權(quán)利要求
1.純化式I化合物的方法，
該方法包括用一種疏水性樹脂處理含有一定量所述式I化合物和弱極性雜質(zhì)的不純反應(yīng)產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述弱極性雜質(zhì)的保留時間為約2.1至約30分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述弱極性雜質(zhì)的保留時間為約9至約12分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述弱極性雜質(zhì)之一具有式II結(jié)構(gòu)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中處理后所述雜質(zhì)的含量相對于純產(chǎn)物總重的約60ppm以下。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中處理后所述雜質(zhì)的含量相對于純產(chǎn)物總重的約20ppm以下。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述疏水性樹脂是一種交聯(lián)的聚苯乙烯樹脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述疏水性樹脂是Diaion HP-20或Amberchrom CG-161。
9.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述疏水性樹脂是Diaion HP-20或Amberchrom CG-161。
10.基本上不含弱極性雜質(zhì)的式I化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中所述式I化合物基本上不含式II化合物。
12.胃腸外用的組合物，包含抗菌有效量的基本上不含弱極性雜質(zhì)的式I化合物或其藥學上可接受的鹽和一種藥學上可接受的載體。
13.胃腸外用的組合物，包含抗菌有效量的基本上不含式II化合物的式I化合物或其藥學上可接受的鹽和一種藥學上可接受的載體。
14.根據(jù)權(quán)利要求10的胃腸外用的組合物，包含式I化合物和水。
15.根據(jù)權(quán)利要求10的胃腸外用的組合物，其中式I化合物是凍干產(chǎn)物。
16.根據(jù)權(quán)利要求11的胃腸外用的組合物，其中式I化合物在單位劑量容器中包含約10mg至約700mg化合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求11的胃腸外用的組合物，其中式I化合物在單位劑量容器中包含約275mg至約500mg化合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求10的胃腸外用的組合物，其中式I化合物在單位劑量容器中包含約10mg至約700mg化合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求10的胃腸外用的組合物，其中式I化合物在單位劑量容器中包含約275mg至約500mg化合物。
20.式II化合物。
21.藥物組合物，包含抗菌有效量的根據(jù)權(quán)利要求20的化合物或其藥學上可接受的鹽。
22.治療細菌感染的方法，包括將抗菌有效量的根據(jù)權(quán)利要求20的化合物對細菌感染患者給藥。
23.式III化合物。
24.藥物組合物，包含抗菌有效量的根據(jù)權(quán)利要求23的化合物或其藥學上可接受的鹽。
25.治療細菌感染的方法，包括將抗菌有效量的根據(jù)權(quán)利要求23的化合物對細菌感染患者給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及基本上不含弱極性雜質(zhì)的丙氟沙星甲磺酸鹽、丙氟沙星甲磺酸鹽的胃腸外用的組合物和純化丙氟沙星甲磺酸鹽的方法。
文檔編號C07K5/062GK1265671SQ98807829
公開日2000年9月6日 申請日期1998年7月23日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月1日
發(fā)明者羅伯特·M·吉恩, 約翰·F·蘭伯特, 薩布拉瑪尼恩·S·古漢, 斯坦利·W·瓦林斯基 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司