專利名稱：1－苯基吡唑化合物類及其藥學(xué)應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的1-苯基吡唑化合物，它們具有黃嘌呤氧化酶抑制活性，可以作為血尿酸過多和痛風的治療藥物以及作為由于產(chǎn)生活性氧而引起的各種疾病的治療或預(yù)防藥物，本發(fā)明還涉及含有該化合物的藥物組合物以及含有該化合物的藥物。
背景技術(shù)：
已公布了以下涉及黃嘌呤氧化酶抑制劑的專利申請。例如，日本公開特許公報95272/1984公開了具有黃嘌呤氧化酶抑制活性的3-苯基吡唑衍生物類，日本公開特許公報85379/1982公開了具有黃嘌呤氧化酶抑制活性的3-苯基異噻唑衍生物類，WO 92/09279公開了具有黃嘌呤氧化酶抑制活性的2-苯基噻唑衍生物類，日本公開特許公報211815/1994公開了具有黃嘌呤氧化酶抑制活性的3-苯基異噁唑衍生物類。雖然日本專利2504659公開了作為藥物合成中間體的1-苯基吡唑羧酸鹽，但是未提到它的黃嘌呤氧化酶抑制活性或作為血尿酸過多和痛風的治療藥物的用途。
血尿酸過多和由其引起的痛風(急性關(guān)節(jié)炎)在中年男性中極其常見。據(jù)說老年及青年患者的數(shù)目由于當今的各式各樣的飲食習(xí)慣而在上升。血尿酸過多的治療藥物包括促尿酸尿藥物和尿酸合成抑制劑要根據(jù)血尿酸過多的疾病狀況來選擇。作為促尿酸尿藥物，使用過溴苯酰苯呋喃、丙磺舒和硫氧唑酮，而作為尿酸合成抑制劑，只用過別嘌呤醇。別嘌呤醇是次黃嘌呤的立體異構(gòu)物，對黃嘌呤氧化酶有抑制作用。這種抑制導(dǎo)致尿酸生成的減少和血中尿酸含量降低。但是，已知別嘌呤醇會產(chǎn)生副作用，例如過敏性癥狀(如皮疹、蕁麻疹等)或腎及肝部疾病。特別是，已報道這些過敏性癥狀是由別嘌呤醇的代謝物，如羥基嘌呤醇造成的〔美國醫(yī)學(xué)雜志(The American Journal ofMedicine)76，p.47(1984)〕。因此，結(jié)構(gòu)與次黃嘌呤不相似的化合物看來有可能避免副作用。
由此提出，一種具有與次黃嘌呤不相似的新結(jié)構(gòu)并顯示出黃嘌呤氧化酶抑制活性的化合物，將會構(gòu)成副作用較小的血尿酸過多和痛風的治療藥物。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于血尿酸過多和痛風的治療藥物，它們具有強的黃嘌呤氧化酶抑制活性和持久的降低血中尿酸含量的作用，與常規(guī)化合物相比，它們的副作用較小。
同時，活性氧的生成已被確認是造成很多疾病的原因，例如各種缺血性灌注障礙，炎癥，糖尿病，惡性腫瘤，動脈硬化，神經(jīng)病等。因此，能抑制活性氧生成的物質(zhì)被認為能有效地治療和預(yù)防這些疾病。由于已發(fā)現(xiàn)黃嘌呤氧化酶與活性氧的生成有關(guān)，所以預(yù)料黃嘌呤氧化酶的抑制劑能抑制活性氧的生成。
別嘌呤醇是黃嘌呤氧化酶抑制劑，且已知是血尿酸過多和痛風的治療藥物，在日本公開特許公報157385/1991中公開了該種黃嘌呤氧化酶抑制劑，已研究別嘌呤醇對于由局部缺血性灌注生成活性氧而造成的器官病的抑制作用。該研究未得到肯定的結(jié)論，因為一些結(jié)果表明它們對于患有缺血性灌注障礙的動物模型有效，而另一些則不然。因此，目前尚未實現(xiàn)一種能抑制活性氧產(chǎn)生的物質(zhì)的實際應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人進行了深入的研究，以試圖發(fā)展一種血尿酸過多和痛風的治療藥物，或因活性氧生成而引起的各種器官病的治療或預(yù)防藥物，發(fā)現(xiàn)了以下化學(xué)式(1)的1-苯基吡唑化合物及其旋光異構(gòu)體和可藥用的鹽對于黃嘌呤氧化酶具有選擇性的強抑制活性，并發(fā)現(xiàn)由于在體內(nèi)試驗中顯示出強而持久的降低血中尿酸含量的作用，它們是對于血尿酸過多和由其引起的痛風有效的藥物，而且是高度安全的治療血尿酸過多和痛風的藥物，與服用常規(guī)的羥基黃嘌呤類治療血尿酸過多和痛風的藥物相比，產(chǎn)生的副作用如過敏性病癥(如皮疹、蕁麻疹等)或腎及肝病較小，這樣就完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明涉及式(1)的1-苯基吡唑化合物、它的旋光異構(gòu)體及其可藥用的鹽

其中R1是氫，鹵素或氨基；R2是羧基或C1-C4烷氧羰基；和R5是C4-C6烷基，C3-C6環(huán)烷基或C3-C6環(huán)烷基-C1-C4烷基，它們?nèi)芜x地被選自鹵素、羥基、C1-C4烷氧基、羧基、C1-C4烷氧基羰基和酰氧基的1或2個取代基取代。
本發(fā)明還提供了一種其中含有式(1)的1-苯基吡唑化合物、它的旋光異構(gòu)體或其可藥用的鹽及一種可藥用載體的藥物組合物，以及一種含有式(1)的1-苯基吡唑化合物、它的旋光異構(gòu)體或其可藥用鹽的藥物和黃嘌呤氧化酶抑制劑。
在式(1)中，R1處的鹵素是氟、氯、溴或碘。
R2處的C1-C4烷氧羰基是其中的烷氧基部分有1-4個碳原子的烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、丁氧基羰基、異丁氧基羰基、叔丁氧基羰基等。
R5處的C4-C6烷基是有4-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如2-乙基丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、己基、2-乙基丁基等。C3-C6環(huán)烷基是有3-6個碳原子的環(huán)烷基，其實例為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。C3-C6環(huán)烷基-C1-C4烷基的C3-C6環(huán)烷基部分如以上列舉的實例，C1-C4烷基部分可以是有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，其實例有甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基等。C3-C6環(huán)烷基-C1-C4烷基的實例包括環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、2-環(huán)己基乙基、3-環(huán)己基丙基、4-環(huán)己基丁基等。
作為R5的任選取代基的鹵素的實例包括氟、氯、溴和碘。C1-C4烷氧基是有1-4個碳原子的烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。C1-C4烷氧基羰基是其中的烷氧基部分有1-4個碳原子的烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、丁氧基羰基、異丁氧基羰基、叔丁氧基羰基等。酰氧基的實例包括乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、異丁酰氧基、戊酰氧基、異戊酰氧基、己酰氧基、辛酰氧基、芐酰氧基等。
任選被1或2個選自鹵素、羥基、C1-C4烷氧基、羧基、C1-C4烷氧羰基和酰氧基的取代基取代的C4-C6烷基的實例有3-氟-3-氟甲基丙基、3-氟-2，2-二甲基丙基、2，2-二甲基-3-羥基丙基、2，2-二甲基-3-甲氧基丙基、2-羧基-2-甲基丙基、2-乙酰氧基-2，2-二甲基丙基、3-芐酰氧基-2，2-二甲基丙基等。
作為R1，特別優(yōu)選氫。作為R2，特別優(yōu)選羧基。作為R5，特別優(yōu)選C4-C6烷基。
優(yōu)選的式(1)化合物如下(2)5-氨基-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸，(3)1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，(4)1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸，(8)1-(4-丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸，(10)1-(3-氰基-4-環(huán)丙基甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸，(12)1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，(14)1-(3-氰基-4-(2-乙基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，(16)1-(3-氰基-4-(1-乙基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，(18)1-(3-氰基-4-(3-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，(28)1-(3-氰基-4-((S)-2-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，(32)5-氨基-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，和
(36)5-氯-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，以及它們的旋光異構(gòu)體和可藥用的鹽，其中的數(shù)字是指實施例號。
式(1)化合物的可藥用鹽可以是例如其羧基與金屬(如鈉、鉀、鈣、鋰、鎂、鋁、鋅等)形成的鹽和與有機堿(如二乙醇胺、乙二胺等)形成的鹽。
式(1)化合物及其可藥用鹽可以以水合物或溶劑化物形式存在。這些水合物(如1/2水合物、一水合物、二水合物等)和溶劑化物也屬于本發(fā)明的范圍。當式(1)化合物有一個不對稱的碳原子時，則至少存在兩種旋光異構(gòu)體。這些旋光異構(gòu)體和其外消旋物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式(1)化合物及式(1)范圍內(nèi)的化合物可以用以下方法合成。除非另外說明，以下反應(yīng)式中使用的各種符號均定義如上。方法(1)

式2化合物與2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯在合適的溶劑(如甲醇、乙醇、丁醇、乙二醇及其混合溶劑)中于溶劑的回流溫度下反應(yīng)1至24小時，得到式(3)化合物。此化合物在合適的溶劑(如乙醇、四氫呋喃、水、丙酮、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中與堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋇、碳酸鉀等)或酸(如鹽酸、硫酸、乙酸等)在室溫下或在溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(4)化合物。方法(2)

式(3)化合物與羥胺-O-磺酸在堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)的水溶液在冰冷卻下或在室溫下反應(yīng)1-24小時，或使利用常規(guī)方法通過與亞硝酸鹽反應(yīng)得到的它的重氮鹽與次磷酸在冰冷卻下或在室溫下反應(yīng)1-24小時，或使它與亞硝酸異戊酯在合適的溶劑(如四氫呋喃、甲醇、乙醇、丁醇、乙二醇及其混合溶劑)中于溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(5)化合物。此化合物與堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋇、碳酸鉀等)或酸(如鹽酸、硫酸、乙酸等)在合適的溶劑(如乙醇、四氫呋喃、水、丙酮、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于室溫下或溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(6)化合物。方法(3)

將其中R9是一個不干擾反應(yīng)的保護基(如甲基和芐基)的式(7)化合物與2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯在合適的溶劑(如甲醇、乙醇、丁醇、乙二醇及其混合溶劑)中于溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時得到一化合物。該化合物與羥胺-O-磺酸在堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)的水溶液中于冰冷卻下或室溫下反應(yīng)1-24小時，或與亞硝酸異戊酯在合適的溶劑(如四氫呋喃、甲醇、乙醇、丁醇、乙二醇及其混合溶劑)中于溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(8)化合物。此化合物用催化加氫法或利用Lewis酸(如氯化鋁)去保護，得到式(9)化合物。該化合物與其中L是氯、溴、碘、甲磺酰氧基、對甲苯磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基等的式(10)化合物在對反應(yīng)無不利影響的合適溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于堿(碳酸鉀、氫氧化鈉、三乙胺、吡啶、二甲基氨基吡啶等)存在下在室溫或溶劑回流溫度下反應(yīng)1-24小時，然后與堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋇、碳酸鉀等)或酸(如鹽酸、硫酸、乙酸等)在合適的溶劑(如乙醇、四氫呋喃、水、丙酮、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于室溫或溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(11)化合物。方法(4)

將式(15)化合物和草酰氯在室溫下或在回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(19)化合物。將此化合物加到冰水中并反應(yīng)1-24小時，得到式(18)化合物。方法(5)

按照常規(guī)方法，使式(4)化合物的水溶液與亞硝酸鹽在酸(如鹽酸、氫溴酸和氫碘酸)存在下反應(yīng)，得到相應(yīng)的重氮鹽溶液。此化合物的水溶液與氯化亞銅溶液、溴化亞銅溶液、碘化鉀或氟硼酸鈉在冰冷卻下或加熱下反應(yīng)1-24小時，得到式(28)化合物，其中X是氯原子、溴原子、碘原子或氟原子。方法(6)

式(2)化合物與式(31)或(32)化合物(其中R11是烷基或芳烷基，R12是氫、烷基或芳烷基)在合適的溶劑(如甲醇、乙醇、丁醇、乙二醇及其混合溶劑)中于催化量的酸存在下在溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(33)化合物。此化合物與堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋇、碳酸鉀等)或酸(如鹽酸、硫酸、乙酸等)在合適的溶劑(如乙醇、四氫呋喃、水、丙酮、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于室溫或溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(6)化合物。方法(7)

式(34)化合物與式(35)化合物在合適的溶劑(如苯、甲苯、四氫呋喃、二氯甲烷、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于氟化鉀和銅粉及堿(如碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鉀等)存在下在溶劑的回流溫度反應(yīng)1-24小時，得到式(1)化合物。方法(8)式(18)化合物與式(40)化合物R13-OH(40)其中R13是C1-C4烷基，在不干擾反應(yīng)的合適溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于冰冷卻下或室溫下反應(yīng)1-24小時，反應(yīng)中有叔胺如三乙胺和縮合劑(如1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺、氰基磷酸二酯等)存在，得到式(41)化合物

其中各符號的定義同前。當使用式(18)化合物的活性衍生物(如酰基氯、?；溥虻?時，反應(yīng)在不干擾反應(yīng)的合適溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿、苯和其混合溶劑)中于叔胺(如三乙胺或吡啶)存在下在冰冷卻或室溫下進行1-24小時。方法(9)式(18)化合物與式(42)化合物R13-L(42)其中R13和L定義同上，在對反應(yīng)無干擾的合適溶劑(如四氫呋喃、二氯甲烷、苯、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于堿(如三乙胺、吡啶、碳酸鉀等)存在下在冰冷卻下或加熱下反應(yīng)1至24小時，得到式(41)化合物。方法(10)

式(3)化合物的水溶液與亞硝酸鹽按常規(guī)方法在酸(如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸等)存在下反應(yīng)，得到相應(yīng)的重氮鹽的溶液。此化合物的水溶液與氯化亞銅溶液、溴化亞銅溶液、碘化鉀或氟硼化鈉在冰冷卻下或加熱下反應(yīng)1-24小時，得到式(43)化合物。此化合物與堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋇、碳酸鉀等)或酸(如鹽酸、硫酸、乙酸等)在合適的溶劑(如乙醇、四氫呋喃、水、丙酮、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于室溫下或溶劑回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到其中X是氯、溴、碘或氟原子的式(28)化合物。方法(11)

式(2)化合物與按照美國化學(xué)會志(J.Am.Chem.Soc.)75，4048(1953)中所述方法得到的式(44)化合物(其中R13定義同前)在合適的溶劑(如乙醚、四氫呋喃、甲苯、水及其混合溶劑)中于酸(如乙酸、鹽酸、硫酸等)存在下在室溫或溶劑回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(45)化合物。該化合物與堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋇、碳酸鉀等)或酸(如鹽酸、硫酸、乙酸等)在合適的溶劑(如乙醇、四氫呋喃、水、丙酮、二甲基甲酰胺及其混合溶劑)中于室溫或溶劑的回流溫度下反應(yīng)1-24小時，得到式(6)化合物。
式(1)化合物可以通過用金屬氫氧化物(如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋰、氫氧化鎂、氫氧化鋁、氫氧化鋅等)、堿金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽(如碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)或有機堿(如二乙醇胺、乙二胺等)處理，轉(zhuǎn)化成鹽。
這樣得到的本發(fā)明化合物可以用常規(guī)方法如重結(jié)晶法和柱層析法分離和純化。當這樣得到的產(chǎn)物是外消旋物時，可以利用與旋光活性酸或堿成鹽的制備型重結(jié)晶或通過一個用旋光性載體填充的柱子拆分成所要的旋光活性化合物。各個非對映異構(gòu)體可以用例如制備性結(jié)晶和柱層析法等方法分離。它們也可以通過使用旋光性起始化合物來得到。立體異構(gòu)體可以用重結(jié)晶法和柱層法分離。
本發(fā)明的1-苯基吡唑化合物，它的旋光異構(gòu)體和其可藥用的鹽是對于黃嘌呤氧化酶具有選擇性的強抑制活性的黃嘌呤氧化酶抑制劑。由于在活體內(nèi)試驗中具有強而持久的降低血尿酸值的作用，它們可作為對血尿酸過多和由此引起的痛風有效的藥物。此外，預(yù)期它們是高度安全的治療血尿酸過多和痛風的藥的，該藥物引起的副作用如過敏性癥狀(如皮疹、蕁麻疹等)或腎病及肝病較小，而這些癥狀是施用常規(guī)的次黃嘌呤類治療血尿酸過多及痛風藥物時常見的。本發(fā)明化合物預(yù)期能作為諸如血尿酸過多、痛風等疾病的治療藥物，它顯示出一天施用一次的長的作用時間。本發(fā)明化合物被用于治療和預(yù)防由各種與器官和組織內(nèi)活性氧產(chǎn)生有關(guān)的失調(diào)造成的疾病。例如，它可以用于和各種器官內(nèi)因產(chǎn)生活性氧而造成的缺血性灌注障礙有關(guān)的疾病。具體實例包括心肌梗塞、腦梗塞，肺血栓形成，腎和肝的缺血性器官病，以及與很可能會產(chǎn)生暫時性缺血狀態(tài)的經(jīng)皮和經(jīng)子宮頸的冠狀動脈成形術(shù)、血管分流術(shù)或器官移植術(shù)有關(guān)的手術(shù)后或治療后病況惡化。
當本發(fā)明化合物作為藥物使用時，將本發(fā)明化合物與藥物制劑中可接受的載體(例如賦形劑、粘合劑、崩解劑、摻和劑、矯味劑、乳化劑等)，稀釋劑、增溶劑等混合以得到藥物組合物。將此組合物用常規(guī)方法制成可以口服或非腸道給藥的片劑、膠囊、粒劑、粉劑、漿劑、懸浮劑、溶液、注射劑、輸注液或栓劑。
當使用口服給藥的片劑時，一般用蔗糖、乳糖、甘露糖醇、麥芽糖醇、葡聚糖、玉米淀粉等作為載體，通常還加入潤滑劑如硬脂酸鎂，防腐劑如對羥基苯甲酸鹽、山梨酸及其鹽等，抗氧化劑如抗壞血酸、α-生育酚、胱氨酸等，崩解劑，粘合劑等?？梢詫⑵瑒┻M行腸溶包衣。當使用口服給藥的膠囊時，有效的稀釋劑是乳糖和干玉米淀粉?？诜囊后w藥劑的實例是糖漿、懸浮液、溶液等，它們可以含有此領(lǐng)域中通常使用的惰性稀釋劑，例如水。制劑中可含有甜味劑和/或風味劑。
在非腸道給藥的情形，例如皮下注射、靜脈內(nèi)注射、肌內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射和輸注，一般的做法是制備含有活性成分的無菌溶液，調(diào)節(jié)此溶液的pH并進行緩沖?？捎糜诖四康牡妮d體及可作為溶劑的包括水、Ringer溶液、等滲鹽水等。當用于靜脈內(nèi)注射時，溶質(zhì)的總濃度要調(diào)節(jié)成使其溶液等滲。
栓劑可通過將藥物與合適的無刺激性賦形劑混合來制備，這些賦形劑的實例有可可脂和聚乙二醇，它們在常溫下是固體，而在腸內(nèi)的溫度下是液體并在直腸內(nèi)熔化而釋放出藥物。
劑量要根據(jù)年齡、體重、用藥時間、用藥途徑、與其它藥物的組合、接受治療的患者的疾病狀態(tài)及其它因素來決定。本發(fā)明化合物、它的旋光異構(gòu)體及其可藥用的鹽是低毒性的，可以安全地使用。日劑量根據(jù)患者的狀況和體重、化合物的種類、用藥途徑等而變。對于口服用藥，約為0.01-150mg/患者/天，優(yōu)選0.1-100mg/患者/天；對于皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或直腸內(nèi)等非腸道用藥，約為0.01-50mg/患者/天，優(yōu)選0.01-20mg/患者/天。
通過起始物合成實施例、實施例、制劑實施例和實驗實施例的方式對本發(fā)明作更詳細的解釋，但本發(fā)明不受這些實施例的限制。起始物合成實施例1

在冰冷卻和攪拌下，向3-氰基-4-甲氧基苯胺鹽酸鹽(72g)的150ml水溶液中加入29.7g亞硝酸鈉、二水合氯化亞錫(266g)和濃鹽酸(437ml)。反應(yīng)完成后，過濾收集沉淀的晶體。將晶體加入水中，混合物用氫氧化鈉水溶液中和，用甲苯和叔丁醇混合溶劑萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。將溶劑減壓蒸發(fā)，得到44g 3-氰基-4-甲氧基苯肼。起始物合成實施例2

在冰冷卻和攪拌下，向3-氰基-4-異丁氧基苯胺鹽酸鹽(20g)的34ml水溶液中加入6.8g亞硝酸鈉、61g二水合氯化亞錫和100ml濃鹽酸。反應(yīng)完成后，過濾收集沉淀的晶體。將晶體加入水中，混合物用氫氧化鈉水溶液中和，用甲苯和叔丁醇混合溶劑萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。將溶劑減壓蒸發(fā)，得到15g 3-氰基-4-異丁氧基苯肼。起始物合成實施例3

向21g 3-氰基-4-新戊氧基苯胺鹽酸鹽的33ml水溶液中，在冰冷卻和攪拌下加入6.7g亞硝酸鈉、59.5g二水合氯化亞錫和100ml濃鹽酸。反應(yīng)完成后，過濾收集沉淀出的晶體。將晶體加入水中，用氫氧化鈉水溶液中和該混合物，用甲苯和叔丁醇混合溶劑萃取，用水洗和用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，得到17g 3-氰基-4-新戊氧基苯肼。起始物合成實施例4

在攪拌下向在起始物合成實施例1中得到的44g 3-氰基-4-甲氧基苯肼的300ml乙醇溶液中加入2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(45g)，混合物在加熱下回流2小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物冷卻，沉淀出的晶體自二氯乙烷中重結(jié)晶，得到67.2g 5-氨基-1-(3-氰基-4-甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點195-196℃。

然后，在攪拌下向5-氨基-1-(3-氰基-4-甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(28.6g)的四氫呋喃溶液(286ml)加入亞硝酸異戊酯(35g)，混合物加熱回流7小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物冷卻，過濾收集沉淀出的晶體，得到24g 1-(3-氰基-4-甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點192-193℃。

在攪拌下向1-(3-氰基-4-甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(28g)的二氯乙烷溶液(280ml)中加入氯化鋁(47.6g)，將混合物在70℃下加熱4小時。反應(yīng)完成后將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取，用水洗后用硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，得到的殘余物自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到22.5g 1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點233-234℃。實施例1

在攪拌下向起始物合成實施例1中得到的3-氰基-4-異丁氧基苯肼(5g)的乙醇溶液(50ml)加入2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(4.2g)，將混合物加熱回流2小時。冷卻后，過濾收集沉淀出的晶體，得到5.1g 5-氨基-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點115-117℃。實施例2

在攪拌下向5-氨基-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1g)的乙醇溶液(10ml)中加入1ml 5N鹽酸水溶液，將混合物在加熱下回流2小時。反應(yīng)完成后將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸將混合物中和。沉淀出的晶體自二噁烷和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到0.4g 5-氨基-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點204℃(分解)。實施例3

隨后，在攪拌下向?qū)嵤├?中得到的5-氨基-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.64g)的四氫呋喃溶液(16ml)中加入亞硝酸異戊酯(1.75g)，將混合物加熱回流1.5小時。反應(yīng)完成后，減壓蒸發(fā)溶劑，得到的殘余物自乙醇中重結(jié)晶，得到1.38g 1-(3-氰基-4-異丁氧苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點138-139℃。實施例4

在攪拌下向1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.38g)的乙醇溶液(15ml)加入1.75N的氫氧化鈉水溶液(3ml)，將混合物在80℃下加熱30分鐘。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中用乙酸中和。沉淀出的晶體自二噁烷和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到0.7g 1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點192-194℃。實施例5

在攪拌下向起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.5g)在二甲基甲酰胺中的溶液(10ml)加入碳酸鉀(1.2g)和己基溴(1.25g)，混合物在100℃加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用甲苯萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。將溶劑減壓蒸發(fā)，得到的殘余物自異丙醚中重結(jié)晶，得到1.8g1-(3-氰基-4-己氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點93-94℃。實施例6

在攪拌下向1-(3-氰基-4-己氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.8g)的乙醇溶液(20ml)加入1N氫氧化鈉水溶液(6ml)，將混合物在50℃加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，混合物用乙酸中和。沉淀出的晶體自二噁烷和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到1.2g 1-(3-氰基-4-己氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點164-165℃。實施例7

在攪拌下向在起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.5g)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)加入碳酸鉀(1.2g)和丁基溴(1.04g)，將混合物在100℃加熱1小時。反應(yīng)完成后將反應(yīng)混合物倒入水中，沉淀出的晶體自乙醇中重結(jié)晶，得到1.5g 1-(4-丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點132℃。實施例8

在攪拌下向1-(4-丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.5g)的乙醇溶液(15ml)中加入1.5N氫氧化鈉水溶液(4ml)，將混合物在80℃加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，混合物用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到0.75g 1-(4-丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點200-202℃。實施例9

在攪拌下向在起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.5g)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)加入碳酸鉀(1.2g)和環(huán)丙基甲基溴(1.03g)，將混合物在100℃下加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，沉淀出的晶體自乙醇中重結(jié)晶，得到1.6g 1-(3-氰基-4-環(huán)丙基甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點147-149℃。實施例10

在攪拌下向1-(3-氰基-4-環(huán)丙基甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.6g)的乙醇溶液(15ml)中加入1.5N氫氧化鈉水溶液(4ml)，將混合物在80℃下加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到0.7g 1-(3-氰基-4-環(huán)丙基甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點210-211℃。實施例11

在攪拌下向?qū)嵤├?9中得到的5-氨基-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(5g)的四氫呋喃溶液(50ml)中加入亞硝酸異戊酯(5.1g)，將混合物加熱回流2小時。反應(yīng)完成后，將溶劑蒸發(fā)，得到的殘余物自乙醇中重結(jié)晶，得到4.4g 1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點154-155℃。實施例12

在攪拌下向1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(2g)的乙醇溶液(20ml)加入2N氫氧化鈉水溶液(3.7ml)，將混合物在80℃加熱30分鐘。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙醇和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到0.7g 1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點199-200℃。實施例13

在攪拌下向起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.5g)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)加入碳酸鉀(1.2g)和1-氯-2-乙基丁烷(1.4g)，將混合物在100℃下加熱2小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，混合物用甲苯萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，得到的殘余物自異丙醚中重結(jié)晶，得到0.88g 1-(3-氰基-4-(2-乙基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點114-115℃。實施例14

在攪拌下向1-(3-氰基-4-(2-乙基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(0.88g)的乙醇溶液(10ml)加入2N氫氧化鈉水溶液(1.5ml)，將混合物在70℃下加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中。用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到0.21g 1-(3-氰基-4-(2-乙基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，熔點180-182℃。實施例15

在攪拌下向起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1g)的二甲基甲酰胺溶液(15ml)加入碳酸鉀(1.2g)和3-溴戊烷(1.15g)，將混合物在90℃下加熱2小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，混合物用甲苯萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，得到的殘余物自異丙醚中重結(jié)晶，得到0.8g 1-(3-氰基-4-(1-乙基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點104℃。實施例16

在攪拌下向1-(3-氰基-4-(1-乙基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(0.8g)的乙醇溶液(10ml)加入2N氫氧化鈉水溶液(1.5ml)，將混合物在80℃下加熱30分鐘。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中。用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙醇和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到0.6g 1-(3-氰基-4-(1-乙基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，熔點142-144℃。實施例17

在攪拌下向在起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.5g)的二甲基甲酰胺溶液(15ml)加入碳酸鉀(1.2g)和1-溴-3-甲基丁烷(1.15g)，將混合物在90℃下加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，過濾收集沉淀出的晶體。自乙醇中重結(jié)晶，得到1.6g 1-(3-氰基-4-(3-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點125-126℃。實施例18

在攪拌下向1-(3-氰基-4-(3-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.6g)的乙醇溶液(15ml)加入1.5N氫氧化鈉水溶液(4ml)，將混合物在80℃加熱30分鐘。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到0.97g1-(3-氰基-4-(3-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，熔點210-211℃。實施例19

用在起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯和1-溴戊烷，進行與實施例5中同樣的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯。實施例20

用1-(3-氰基-4-戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯進行與實施例6中同樣的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯。實施例21

用1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯和1-溴-1-甲基丙烷進行與實施例5中同樣的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-仲丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯。實施例22

用1-(3-氰基-4-仲丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯進行與實施例6相同的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-仲丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸。實施例23

用1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯和環(huán)戊基溴進行與實施例5相同的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-環(huán)戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯。實施例24

用1-(3-氰基-4-環(huán)戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯進行與實施例6相同的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-環(huán)戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸。實施例25

使用1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯和環(huán)己基溴進行與實施例5相同的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-環(huán)己氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯。實施例26

用1-(3-氰基-4-環(huán)己氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯進行與實施例6相同的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-環(huán)己氧基苯基)吡唑-4-羧酸。實施例27

在攪拌下向1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.5g)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)加入碳酸鉀(0.91g)和(S)-(+)-1-溴-2-甲基丁烷(1g)，將混合物在90℃加熱2小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，得到的殘余物自異丙醚中重結(jié)晶，得到1.7g 1-(3-氰基-4-((S)-2-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點105-106℃。實施例28

在攪拌下向1-(3-氰基-4-((S)-2-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.7g)的乙醇溶液(10ml)加入1N氫氧化鈉溶液(6.3ml)，將混合物在80℃加熱30分鐘。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙醇和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到0.8g 1-(3-氰基-4-((S)-2-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，熔點184-186℃。[α]D25+10.49°(c＝0.5，甲醇)。實施例29

用1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯進行與實施例5相同的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-(1-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯。實施例30

用1-(3-氰基-4-(1-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯進行與實施例6相同的反應(yīng)和處理，得到1-(3-氰基-4-(1-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸。實施例31

在攪拌下向在起始物合成實施例3中得到的3-氰基-4-新戊氧基苯肼(17g)的乙醇溶液(100ml)加入2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(14.4g)，將混合物加熱回流2小時。冷卻后，過濾收集沉淀出的晶體，得到18g 5-氨基-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點160-162℃。實施例32

在攪拌下向5-氨基-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.7g)的乙醇溶液(17ml)中加入2N氫氧化鈉水溶液(3ml)，將混合物加熱回流2小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸中和。沉淀出的晶體自二噁烷和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到0.64g 5-氨基-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點212℃(分解)。實施例33

在冰冷卻和攪拌下向?qū)嵤├?中得到的5-氨基-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(2g)的濃鹽酸溶液(15ml)加入亞硝酸鈉(0.62g)水溶液(4ml)。在冰冷卻下向此重氮鹽溶液中逐漸地加入氯化亞銅(1.49g)。滴加完成后，將反應(yīng)混合物在60℃下加熱1小時。反應(yīng)完成后，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物，用水洗，用硫酸鎂干燥。將溶劑減壓蒸發(fā)，得到的殘余物進行硅膠柱層析，得到0.76g 5-氯-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點87℃。實施例34

在攪拌下向5-氯-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.05g)的乙醇溶液(10ml)中加入1N氫氧化鈉水溶液(3.6ml)，將混合物在60℃加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙酸乙酯重結(jié)晶，得到0.5g 5-氯-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點216-218℃。實施例35

在冰冷卻和攪拌下，向?qū)嵤├?1中得到的5-氨基-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(2.09g)的濃鹽酸溶液(15ml)加入亞硝酸鈉(0.62g)水溶液(4ml)。在冰冷卻下向此重氮鹽溶液中逐漸加入氯化亞銅(1.49g)。滴加完畢后，將反應(yīng)混合物在60℃加熱1小時。反應(yīng)完成后，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物，用水洗，用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，得到的殘余物進行硅膠柱層析，得到0.74g 5-氯-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點90-92℃。實施例36

在攪拌下向5-氯-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.01g)的乙醇溶液(10ml)加入1N氫氧化鈉水溶液(3.4ml)，將混合物在60℃加熱1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用乙酸中和。沉淀出的晶體自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到0.46g5-氯-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點212℃。實施例37

在攪拌下向起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(2.6g)的二甲基甲酰胺溶液(25ml)加入碳酸鉀(1.66g)和苯甲酸2，2-二甲基3-碘代丙酯(1g)，將混合物在90℃加熱回流2小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，得到的殘余物進行硅膠柱層析，得到2.89g 1-(4-(3-苯甲酰氧基-2，2-二甲基丙氧基)-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點112-114℃。實施例38

在攪拌下向?qū)嵤├?7中得到的1-(4-(3-苯甲酰氧基-2，2-二甲基丙氧基)-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(2.89g)的乙醇溶液(20ml)加入1N氫氧化鈉水溶液(14.2ml)，將混合物在50℃加熱3小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用1N鹽酸(15ml)中和。沉淀出的晶體自乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到0.3g 1-(3-氰基-4-(2，2-二甲基-3-羥基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，熔點188-190℃。實施例39

在攪拌下向起始物合成實施例4中得到的1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(1.0g)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)加入碳酸鉀(0.81g)和2，2-二甲基-3-碘代丙酸甲酯(1.9g)，將混合物在130℃下加熱回流1小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗，用硫酸鎂干燥。將溶劑減壓蒸發(fā)，得到的殘余物進行硅膠柱層析，得到0.64g 1-(3-氰基-4-(2-甲基-2-甲氧羰基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，熔點95-96℃。實施例40

在攪拌下向?qū)嵤├?9中得到的1-(3-氰基-4-(2-甲基-2-甲氧羰基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸乙酯(0.64g)的乙醇溶液(6.4ml)加入2N氫氧化鈉水溶液(2.15ml)，將混合物在50℃加熱8小時。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水中，用1N鹽酸(3.8ml)中和。沉淀出的晶體自乙醇和水的混合溶劑中重結(jié)晶，得到0.26g 1-(4-(2-羧基-2-甲基丙氧基)-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸，熔點230-233℃。實施例41

用1-(3-氰基-4-羥基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯和1-溴-1，1-二甲基乙烷進行與實施例5相同的反應(yīng)和處理，得到1-(4-叔丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯。實施例42

用1-(4-叔丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯進行與實施例6相同的反應(yīng)和處理，得到1-(4-叔丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸。制劑實施例1將本發(fā)明化合物(50mg)與乳糖(98mg)、玉米淀粉(45mg)和羥丙基纖維素(3mg)在捏和機中充分混合。將捏和后的產(chǎn)物通過200目篩，在50℃下干燥后，通過24目篩。所得的產(chǎn)物與3mg滑石粉和1mg硬脂酸鎂混合，用9mm直徑的搗具制成重200mg的片劑。該片劑必要時可用糖或薄膜包衣。
具有優(yōu)越藥理活性的式(1)化合物能夠用下列試驗說明。實驗實施例1對黃嘌呤氧化酶的抑制活性向0.136M Tris-HCl緩沖液(pH8.1，0.95ml)中依次加入樣品溶液(0.15ml)、黃嘌呤氧化酶溶液(0.10ml)和黃嘌呤溶液(0.3ml)，形成酶反應(yīng)溶液。將此酶反應(yīng)溶液在37℃下培養(yǎng)。培養(yǎng)開始后30分鐘時，加入20％的三氯乙酸溶液(1.5ml)使反應(yīng)停止。將此溶液轉(zhuǎn)移到石英池中，用分光光度計(Japan Spectroscopic Co.，LTD)測定290nm下的吸光度。利用得到的測定值，由以下公式計算黃嘌呤氧化酶抑制百分數(shù)，由其確定黃嘌呤氧化酶抑制劑活性的IC50。
抑制(％)＝(1-有樣品時吸光度/無樣品時吸光度)×100結(jié)果，別嘌呤醇的IC50為300nM，而本發(fā)明化合物的IC50不超過30nM，顯示出很強的抑制活性。實驗實施例2降低小鼠血清中尿酸值將懸浮在0.5％羥丙基甲基纖維素(HPMC)水溶液中的樣品用一只口腔探條以0.3mg/kg的劑量強制性地施加在4-6周齡的雄性ICR小鼠的胃中(每組4只)。施用樣品2和6小時后，用三氟溴氯乙烷將小鼠麻醉。由兩側(cè)的頸動脈抽取血樣并將小鼠放血。將血在室溫下存放20-30分鐘，在2000×g下離心15分鐘以得到血清。用尿酸測定盒(Wako Pure Chemicals Co.制造)利用磷鎢酸法測定尿酸值。所得數(shù)值用以下公式得到在服用樣品2和6小時后的尿酸值減少百分數(shù)。

結(jié)果，施用別嘌呤醇2和6小時后的尿酸值減少(％)分別為33％和14％。與之對照，本發(fā)明化合物顯示出強的尿酸值減少，在施用2小時后減小不少于40％，在服用6小時后減小不少于20％。實驗實施例3降低用氧嗪酸處理的大鼠血清尿酸值氧嗪酸是一種尿酸酶抑制劑，在服用樣品前1小時和服用樣品后3和9小時將其皮下注射到6-8周齡的雄性SD大鼠的背上，使接受的劑量為250mg/kg，從而血中尿酸值增高。
用口腔探條以1mg/kg的劑量將懸浮在0.5％羥丙基甲基纖維素(HPMC)水溶液中的樣品強制地施加到大鼠(4只一組)的胃中。在服用樣品前和服用后0、2、4、6和12小時由大鼠眶上靜脈抽取血樣。將血在室溫下存放20-30分鐘，在2000×g下離心15分鐘以得到血清。用尿酸測定盒(Wako Pure Chemicals Co.制造)以磷鎢酸法測定尿酸值。所得的數(shù)值用以下公式得出在服用樣品2、4、6和12小時后的尿酸值減小百分數(shù)。

結(jié)果，本發(fā)明化合物各次的尿酸值減小(％)為37％、36％、20％和18％，它在12小時后仍顯著減小尿酸值。實驗實施例4降低美洲猴(狨)的血清尿酸值用口腔探條以10mg/kg的劑量將懸浮在0.5％羥丙基甲基纖維素(HPMC)水溶液中的樣品強制地施加到成年雄狨的胃中。在服用樣品后6和24小時自尾靜脈抽取血樣。將血在室溫下存放20-30分鐘，在2000×g下離心15分鐘以得到血清。用尿酸測定盒(Wako PureChemicals Co.制造)以磷鎢酸法測定尿酸值。所得數(shù)值用以下公式得出服用樣品6和24小時后的尿酸值減少百分數(shù)。

結(jié)果，本發(fā)明化合物在服用后24小時的尿酸值減小仍不少于20％，從而顯示出對血液中尿酸值的持久的降低作用。實驗實施例5對于由黃嘌呤氧化酶造成的超氧化物自由基生成的抑制作用向含有10μM光澤精、10μM黃嘌呤和0-10μM樣品的50mM Tris-HCl緩沖液(pH7.5)中加入濃度為20mU/ml的由奶衍生的黃嘌呤氧化酶，測定化學(xué)發(fā)光。用以下公式計算，評價樣品對超氧化物自由基生成的抑制作用。

實驗實施例6對缺血性再灌注障礙的抑制作用使用雄性SD大鼠(7-8周齡，4-5只大鼠)。在腎局部缺血之前60分鐘以10、30和100mg/kg的劑量口服樣品。對照組和假手術(shù)組則按2ml/kg的劑量口服0.5％羥甲基纖維素水溶液。在戊巴比妥麻醉下將鼠開刀，用夾子使兩側(cè)腎動脈的血流完全停止以造成腎局部缺血。在缺血60分鐘后放開夾子使血液流通，將腹部縫合。使大鼠自由接近食物和水。在腎部血液重新流動24小時之后，在乙醚麻醉下由腹側(cè)主動脈抽血，分離出血清。用自動分析儀(Hitachi，Ltd)測定血尿素氮(BUN)和血清肌酸酐(CRE)作為腎功能障礙的標志。
通過用以下公式計算來評價樣品對于腎缺血再灌注障礙的抑制作用。

實驗實施例7對白三烯-B4(LTB4)生成的抑制作用將RBL-1細胞(1×106細胞/ml，DAINIPPON PHARMACEUTICALCO.，LTD.)在補加10％胎牛血清蛋白的Dulbecco改進的Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)，加入溶在二甲基甲酰胺中的樣品，使最終濃度為0-10μM。將混合物在37℃下培養(yǎng)5分鐘，在冰中放置10分鐘。然后加入A23187(Ca離子載體)使最終濃度為25nM，將混合物在37℃培養(yǎng)15分鐘。培養(yǎng)之后，再在冰中放置10分鐘。然后將上清液在3000rpm下離心10分鐘，用酶免疫分析法定量確定上清液中釋放出的LTB4。LTB4被認為是與缺血性再灌注障礙有關(guān)的因素之一，用以下公式計算和評價對LTB4生成的抑制作用。

實驗實施例8急性毒性將本發(fā)明化合物(300mg/kg)一次性給予四只小鼠監(jiān)測5天。未觀察到死亡情況。
工業(yè)應(yīng)用性本發(fā)明的1-苯基吡唑化合物，它的光學(xué)異構(gòu)體和其可藥用的鹽是對于黃嘌呤氧化酶具有選擇性強抑制活性的黃嘌呤氧化酶抑制劑，并且由于在體內(nèi)試驗中顯示出強而持久的降低血尿酸值的作用，而是對于血尿酸過多和由其引起的痛風有效的適用藥物。預(yù)期它們是極其安全的血尿酸過多和痛風的治療藥物，與服用常規(guī)的次黃嘌呤類治療血尿酸過多和痛風的藥物時看到的相比，它產(chǎn)生的副作用如過敏性癥狀(例如皮疹、蕁麻疹等)或腎及肝部疾病較輕。此外，本發(fā)明化合物預(yù)期可很好地作為例如血尿酸過多和痛風等疾病的治療藥物，它顯示出每天只需服用一次的長效作用。
本發(fā)明化合物可用于治療和預(yù)防由與器官和組織內(nèi)生成活性氧有關(guān)的各種失調(diào)引起的疾病。例如，它可以用于與各種器官內(nèi)由活性氧生成造成的缺血性灌注障礙有關(guān)的疾病。具體的實例包括心肌梗塞，腦梗塞，肺血栓形成，腎和肝缺血性器官病，以及與很可能會產(chǎn)生暫時性缺血狀態(tài)的經(jīng)皮和經(jīng)子宮頸的冠狀動脈成形術(shù)、血管分流術(shù)或器官移植術(shù)有關(guān)的手術(shù)后或治療后病況惡化。
此外，本發(fā)明化合物快速地遷移到血中。但是，它不容易代謝，并顯示高的生物利用率。本發(fā)明化合物對光和熱穩(wěn)定，并具有優(yōu)異的物理性質(zhì)。
本發(fā)明是以在日本提交的專利申請284479/1996、55786/1997和261305/1997為基礎(chǔ)，這些申請的內(nèi)容并入本申請中作為參考。
權(quán)利要求
1.一種式(1)的1-苯基吡唑化合物、其旋光異構(gòu)體或其可藥用的鹽
其中R1是氫，鹵素或氨基；R2是羧基或C1-C4烷氧基羰基；和R5是C4-C6烷基，C3-C6環(huán)烷基或C3-C6環(huán)烷基-C1-C4烷基，它們可任選地被選自鹵素、羥基、C1-C4烷氧基、羧基、C1-C4烷氧基羰基和酰氧基的1或2個取代基取代。
2.權(quán)利要求1的1-苯基吡唑化合物，它們的旋光異構(gòu)體或其或可藥用的鹽，其中R5是C4-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基或C3-C6環(huán)烷基-C1-C4烷基。
3.權(quán)利要求1的1-苯基吡唑化合物，它們的旋光異構(gòu)體或其或可藥用的鹽，該化合物選自5-氨基-1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸，1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸乙酯，1-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)吡唑-4-羧酸，1-(4-丁氧基-3-氰基苯基)吡唑-4-羧酸，1-(3-氰基-4-環(huán)丙基甲氧基苯基)吡唑-4-羧酸，1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，1-(3-氰基-4-(2-乙基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，1-(3-氰基-4-(1-乙基丙氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，1-(3-氰基-4-(3-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，1-(3-氰基-4-((S)-2-甲基丁氧基)苯基)吡唑-4-羧酸，5-氨基-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸，和5-氯-1-(3-氰基-4-新戊氧基苯基)吡唑-4-羧酸。
4.一種藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1的1-苯基吡唑化合物，它的旋光異構(gòu)體或其可藥用的鹽，以及一種可藥用的載體。
5.一種藥物，其中含有權(quán)利要求1的1-苯基吡唑化合物，它的旋光異構(gòu)體或其可藥用的鹽。
6.一種黃嘌呤氧化酶抑制劑，其中含有權(quán)利要求1的1-苯基吡唑化合物，它的旋光異構(gòu)體或其可藥用的鹽。
全文摘要
式(1)的1－苯基吡唑化合物,它的旋光異構(gòu)體及其可藥用的鹽,其實例是5－氨基－1－(3－氰基－4－異丁氧基苯基)吡唑－4－羧酸。這些化合物具有黃嘌呤氧化酶抑制活性,可用來作為例如血尿酸過多和痛風等疾病的治療藥物。
文檔編號C07D231/14GK1240432SQ97180548
公開日2000年1月5日 申請日期1997年10月22日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月25日
發(fā)明者石渕正剛, 森本浩司, 福成篤, 井上浩義, 中洋一 申請人:吉富制藥株式會社