專利名稱：一種下田菊酸b的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種下田菊酸B的制備方法。
背景技術(shù)：
下 田菊為菊科下田菊屬植物下田菊Afe/raste·)0. Ktze的全草，為一年生草本，又名白龍須(云南思茅)、水胡椒、風(fēng)氣草、汗蘇麻等，主產(chǎn)于長(zhǎng)江流域以南以及沿海和西南各地，具有清熱利濕，解毒消腫的功效，用于感冒高熱、支氣管炎、咽喉炎、扁桃體炎、黃疸型肝炎的治療，外治癰疥瘡瘍、蛇咬傷等。下田菊的化學(xué)成分主要有揮發(fā)油及二萜類化合物。其中下田菊酸B是從下田菊中分離得到的一種二萜化合物，分子量348. 44，分子式C2tlH28O5,為無(wú)色針晶(氯仿-甲醇)，mp. 273-274°C。藥理研究表明下田菊酸B具有細(xì)胞毒活性，對(duì)L-5178Y細(xì)胞毒呈細(xì)胞毒作用。現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有適用于大量制備下田菊酸B的工藝報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種下田菊酸B的制備方法，采用超臨界CO2萃取、聚酰胺柱層析、氧化鋁柱層析及重結(jié)晶等步驟，從下田菊中分離得到叫高純度的下田菊酸B，該方法提取的下田菊酸B純度高、可規(guī)?；a(chǎn)。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種下田菊酸B的制備方法，其特征在于包括以下步驟
1)超臨界萃取取下田菊藥材粉碎，投入到超臨界CO2萃取釜中，再加入適量有機(jī)溶劑作為夾帶劑，通入CO2，在萃取壓力20-35MPa，萃取溫度30_50°C條件下進(jìn)行萃取，CO2流速為 10-30L/h，進(jìn)行萃取l_3h，收集萃取物；
2)聚酰胺柱層析將萃取物加入聚酰胺樹(shù)脂柱中，控制流速0.5-1. 5BV/h，先用水洗脫至無(wú)色，再用30-90%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮至相對(duì)密度1. 08-1. 12，得下田菊酸B 粗提物；
3)氧化鋁柱層析將下田菊酸B粗提物用3-4倍量的酸性氧化鋁吸附，50°C以下低溫烘干，干法裝柱，用混合溶劑梯度洗脫，收集含高含量下田菊酸B的流分，減壓濃縮至小體積， 結(jié)晶，得粗晶；
4)重結(jié)晶將粗晶用乙酸乙酯-丙酮混合溶液重結(jié)晶，得到高純度的下田菊酸B單體化合物。步驟(1)所述夾帶劑為60-90%的乙醇或丙酮溶液，加入量為相當(dāng)于原料重量的 5-15%ο步驟(3)所述的混合溶劑為石油醚、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、乙醇的混合溶液。本發(fā)明的特點(diǎn)在于本發(fā)明方法采用超臨界流體萃取，條件溫和，避免了傳統(tǒng)方法局部高溫對(duì)產(chǎn)品活性的不利影響，工藝合理，可實(shí)現(xiàn)快速提取、分離、純化，是一種適于規(guī)模化生產(chǎn)的方法。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，下列實(shí)施例旨在舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1
將下田菊藥材粉碎，取5kg投入超臨界萃取罐內(nèi)，加入體積百分比為80%的乙醇溶液作為夾帶劑，加入量為0. 3kg (原料重量的6%)，在萃取壓力25MPa，萃取溫度45°C，CO2流量 18L/h條件下萃取2h，得下田菊萃取物，萃取物用熱水分散，上聚酰胺樹(shù)脂柱，流速1. OBV/ h，先用水洗至水洗液無(wú)色，再用30%乙醇洗脫，最后用80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液， 將洗脫液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 08，得到下田菊酸B粗提物，將下田菊酸B粗提物用3倍量的酸性氧化鋁吸附，于50°C低溫烘干，干法上柱，用不同比例的石油醚、石油醚-乙酸乙酯、乙醇梯度洗脫，薄層層析檢查，收集高含量下田菊酸B流分，減壓濃縮至小體積，結(jié)晶， 將粗晶用乙酸乙酯_丙酮重結(jié)晶，得到548mg下田菊酸B單體化合物，其含量為98. 7%。
實(shí)施例2:
將下田菊藥材粉碎，取5kg投入超臨界萃取罐內(nèi)，加入體積百分比為70%的乙醇溶液作為夾帶劑，加入量為0. 6kg (原料重量的12%)，在萃取壓力20MPa，萃取溫度35°C，CO2流量 20L/h條件下萃取lh，得下田菊萃取物，萃取物用熱水分散，上聚酰胺樹(shù)脂柱，流速1. 5BV/ h，先用水洗至水洗液無(wú)色，再用30%乙醇洗脫，最后用90%乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液， 將洗脫液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10，得到下田菊酸B粗提物，將下田菊酸B粗提物用4倍量的酸性氧化鋁吸附，于45°C低溫烘干，干法上柱，用不同比例的石油醚、乙酸乙酯-丙酮溶液梯度洗脫，薄層層析檢查，收集高含量下田菊酸B流分，減壓濃縮至小體積，結(jié)晶，將粗晶用乙酸乙酯_丙酮重結(jié)晶，得到526mg下田菊酸B單體化合物，其含量為99. 2%。實(shí)施例3:
將下田菊藥材粉碎，取5kg投入超臨界萃取罐內(nèi)，加入體積百分比為90%的丙酮溶液作為夾帶劑，加入量為0. 75kg (原料重量的15%)，在萃取壓力32MPa，萃取溫度30°C，C02流量 10L/h條件下萃取3h，得下田菊萃取物，萃取物用熱水分散，上聚酰胺樹(shù)脂柱，流速1. 2BV/ h，先用水洗至水洗液無(wú)色，再用30%乙醇洗脫，最后用70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液， 將洗脫液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 12，得到下田菊酸B粗提物，將下田菊酸B粗提物用3倍量的酸性氧化鋁吸附，于40°C低溫烘干，干法上柱，用不同比例的石油醚、石油醚-乙酸乙酯、甲醇梯度洗脫，薄層層析檢查，收集高含量下田菊酸B流分，減壓濃縮至小體積，結(jié)晶， 將粗晶用乙酸乙酯_丙酮重結(jié)晶，得到532mg下田菊酸B單體化合物，其含量為98. 6%。實(shí)施例4:
將下田菊藥材粉碎，取5kg投入超臨界萃取罐內(nèi)，加入體積百分比為60%的丙酮溶液作為夾帶劑，加入量為0. 5kg (原料重量的10%)，在萃取壓力35MPa，萃取溫度50°C，CO2流量 30L/h條件下萃取2h，得下田菊萃取物，萃取物用熱水分散，上聚酰胺樹(shù)脂柱，流速0. 5BV/ h，先用水洗至水洗液無(wú)色，再用40%乙醇洗脫，最后用90%乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液， 將洗脫液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 11，得到下田菊酸B粗提物，將下田菊酸B粗提物用4倍量的酸性氧化鋁吸附，于45°C低溫烘干，干法上柱，用不同比例的乙酸乙酯-甲醇混合溶液梯度洗脫，薄層層析檢查，收集高含量下田菊酸B流分，減壓濃縮至小體積，結(jié)晶，將粗晶用乙酸乙酯-丙酮重結(jié)晶，得 到514mg下田菊酸B單體化合物，其含量為98. 2%。
權(quán)利要求
1.一種下田菊酸B的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)超臨界萃取取下田菊藥材粉碎，投入到超臨界CO2萃取釜中，再加入適量有機(jī)溶劑作為夾帶劑，通入CO2，在萃取壓力20-35MPa，萃取溫度30_50°C條件下進(jìn)行萃取，CO2流速為 10-30L/h，進(jìn)行萃取l_3h，收集萃取物；2)聚酰胺柱層析將萃取物加入聚酰胺樹(shù)脂柱中，控制流速0.5-1. 5BV/h，先用水洗脫至無(wú)色，再用30-90%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮至相對(duì)密度1. 08-1. 12，得下田菊酸B 粗提物；3)氧化鋁柱層析將下田菊酸B粗提物用3-4倍量的酸性氧化鋁吸附，50°C以下低溫烘干，干法裝柱，用混合溶劑梯度洗脫，收集含高含量下田菊酸B的流分，減壓濃縮至小體積， 結(jié)晶，得粗晶；4)重結(jié)晶將粗晶用乙酸乙酯-丙酮混合溶液重結(jié)晶，得到高純度的下田菊酸B單體化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種下田菊酸B的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述夾帶劑為60-90%的乙醇或丙酮溶液，加入量為相當(dāng)于原料重量的5-15%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種下田菊酸B的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的混合溶劑為石油醚、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、乙醇的混合溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種下田菊酸B的制備方法，其特征在于包括超臨界萃取、聚酰胺柱層析、氧化鋁柱層析以及重結(jié)晶等步驟。本發(fā)明方法條件溫和，避免了傳統(tǒng)方法局部高溫對(duì)產(chǎn)品活性的不利影響，工藝合理，可實(shí)現(xiàn)快速提取、分離、純化，是一種適于規(guī)?；a(chǎn)的方法。
文檔編號(hào)C07C51/42GK102320959SQ20111026399
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月8日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司