專利名稱：一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物有效成分提取分離技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法。
背景技術(shù)：
格里風(fēng)素(Griffonin)分子式為C14H19NO8，分子量為329. 31，是從豆科植物單葉格 MMGriffonia simplicifolia Bai 11. > ^Μ^^Μ,^^κΜSemiaquiIegia adoxoides (DC.) Makino等植物中分離得到的一種氰苷類化合物，具有提高紅細(xì)胞鈉容量，作為抗鐮狀細(xì)胞藥物治療鐮狀細(xì)胞疾病危象，并且具有抗腫瘤促進(jìn)作用，在Raji細(xì)胞中，對(duì)TPA有道的 EBV-EA活化有強(qiáng)的抗腫瘤促進(jìn)作用。目前格里風(fēng)素的提取工藝研究報(bào)道甚少，尚未發(fā)現(xiàn)制備高含量格里風(fēng)素的方法報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在提供一種從單葉格里風(fēng)中提取制備格里風(fēng)素的方法，以得到高純度的格里風(fēng)素。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法，其特征在于包括以下步驟取單葉格里風(fēng)根粉碎，用40-95%乙醇回流或恒溫浸漬提取，反復(fù)提取2-4次，合并提取液后進(jìn)行濃縮、干燥得粗提物A ；將粗提物A與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的14-30目粗聚酰胺樹(shù)脂按重量比1-3:1混勻， 裝入層析柱，然后用50-75%乙醇洗脫，洗脫流速為0. 2-0. 5BV/h，收集洗脫液，濃縮，低溫干燥，得到格里風(fēng)素粗提物B ；將格里風(fēng)素粗提物B與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的50-150目細(xì)聚酰胺樹(shù)脂按重量比2-5 1混勻，裝入層析柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1 6 3)混合溶液進(jìn)行洗脫， 洗脫流速為0. 03-0. lBV/h,收集洗脫液，濃縮，低溫干燥得格里風(fēng)素粗品；將粗品加入甲醇溶解，再經(jīng)制備液相進(jìn)一步分離純化得到純度98%以上的格里風(fēng)素成品。所述粗提取物A與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的粗聚酰胺樹(shù)脂混勻先將粗提物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌粗聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。所述格里風(fēng)素粗提物B與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的細(xì)聚酰胺樹(shù)脂混勻先將粗提物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌細(xì)聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。所述制備液相填料為C18，柱規(guī)格為30mmX 250mm，檢測(cè)波長(zhǎng)262nm，流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水，所述流動(dòng)相甲醇的體積百分比為25-50%，所述流動(dòng)相乙腈的體積百分比為 15-30%ο本發(fā)明方法所用溶劑毒性較小，環(huán)保，經(jīng)濟(jì)效益好，能進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，且工序簡(jiǎn)單，易于控制，分離效率高，產(chǎn)品純度高。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于格里風(fēng)素的分離純化研究報(bào)道較少， 聚酰胺樹(shù)脂柱層析與高效制備液相色譜結(jié)合用于格里風(fēng)素的分離純化也屬首次，本發(fā)明方法為格里風(fēng)素的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了藥理原料和理論支持。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1
取單葉格里風(fēng)根粉碎，加50%乙醇在70°C條件下恒溫浸漬提取4小時(shí)，過(guò)濾，反復(fù)提取 4次，合并濾液，濃縮、干燥得粗提取物A，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的14-30目粗聚酰胺樹(shù)脂裝柱，粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌粗聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。粗提物A與粗聚酰胺樹(shù)脂重量比為1.5:1，拌樣粗聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用50%乙醇洗脫，洗脫流速為0. 2BV/h,收集洗脫液，濃縮，低溫干燥，得到格里風(fēng)素粗提物B，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的50-100目細(xì)聚酰胺樹(shù)脂裝柱，格里風(fēng)素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌細(xì)聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。格里風(fēng)素粗提物B與細(xì)聚酰胺樹(shù)脂重量比為2:1，拌樣細(xì)聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1:6:3)混合溶液洗脫，洗脫流速為0. 05BV/h，收集洗脫液，濃縮，低溫干燥得格里風(fēng)素粗品；將粗品加入甲醇溶解，再經(jīng)制備高效液相分離得到含量98. 5%的格里風(fēng)素。所述制備高效液相填料為C18，柱規(guī)格為 30mmX250mm，檢測(cè)波長(zhǎng)262nm，流動(dòng)相為甲醇-水(3070)。實(shí)施例2:
取單葉格里風(fēng)根粉碎，加40%乙醇加熱回流提取2小時(shí)，過(guò)濾，反復(fù)提取2次，合并濾液，濃縮、干燥得粗提取物A，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的14-30目粗聚酰胺樹(shù)脂裝柱，粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌粗聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。粗提物A 與粗聚酰胺樹(shù)脂重量比為1:1，拌樣粗聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用65%乙醇洗脫，洗脫流速為 0. 4BV/h,收集洗脫液，濃縮，低溫干燥，得到格里風(fēng)素粗提物B，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的50-100目細(xì)聚酰胺樹(shù)脂裝柱，格里風(fēng)素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌細(xì)聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。格里風(fēng)素粗提物B與細(xì)聚酰胺樹(shù)脂重量比為4:1，拌樣細(xì)聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1 6 3)混合溶液洗脫，洗脫流速為0. lBV/h,收集洗脫液，濃縮，低溫干燥得格里風(fēng)素粗品；將粗品加入甲醇溶解，再經(jīng)制備高效液相分離得到含量98. 3%的格里風(fēng)素。所述制備高效液相填料為C18，柱規(guī)格為30mmX 250mm，檢測(cè)波長(zhǎng)26211111，流動(dòng)相為乙腈-水(30:70)。實(shí)施例3:
取單葉格里風(fēng)根粉碎，加95%乙醇在70°C條件下恒溫浸漬提取3小時(shí)，過(guò)濾，反復(fù)提取2次，合并濾液，濃縮、干燥得粗提取物A，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的14-30目粗聚酰胺樹(shù)脂裝柱， 粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌粗聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。粗提物A與粗聚酰胺樹(shù)脂重量比為3:1，拌樣粗聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用75%乙醇洗脫，洗脫流速為0. 5BV/h，收集洗脫液，濃縮，低溫干燥，得到格里風(fēng)素粗提物B，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的50-100目細(xì)聚酰胺樹(shù)脂裝柱，格里風(fēng)素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌細(xì)聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。格里風(fēng)素粗提物B與細(xì)聚酰胺樹(shù)脂重量比為5:1，拌樣細(xì)聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1:6:3)混合溶液洗脫，洗脫流速為0. 08BV/h，收集洗脫液，濃縮，低溫干燥得格里風(fēng)素粗品；將粗品加入甲醇溶解，再經(jīng)制備高效液相分離得到含量98. 8%的格里風(fēng)素。所述制備高效液相填料為C18，柱規(guī)格為 30mmX250mm，檢測(cè)波長(zhǎng)262nm，流動(dòng)相為甲醇-水(5050)。實(shí)施例4:取單葉格里風(fēng)根粉碎，加75%乙醇加熱回流提取2小時(shí)，過(guò)濾，反復(fù)提取3次，合并濾液，濃縮、干燥得粗提取物A，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的14-30目粗聚酰胺樹(shù)脂裝柱，粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌粗聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。粗提物A 與粗聚酰胺樹(shù)脂重量比為2:1，拌樣粗聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用60%乙醇洗脫，洗脫流速為 0. 25BV/h,收集洗脫液，濃縮，低溫干燥，得到格里風(fēng)素粗提物B，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的50-100目細(xì)聚酰胺樹(shù)脂裝柱，格里風(fēng)素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌細(xì)聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。格里風(fēng)素粗提物B與細(xì)聚酰胺樹(shù)脂重量比為3 1，拌樣細(xì)聚酰胺樹(shù)脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1:6:3)混合溶液洗脫，洗脫流速為0. 03BV/h，收集洗脫液，濃縮，低溫干燥得格里風(fēng)素粗品；將粗品加入甲醇溶解，再經(jīng)制備高效液相分離得到含量99. 2%的格里風(fēng)素。所述制備高效液相填料為C18，柱規(guī)格為30mmX 250mm，檢測(cè)波長(zhǎng)26211111，流動(dòng)相為乙腈-水(15:85)。
權(quán)利要求
1.一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法，其特征在于包括以下步驟取單葉格里風(fēng)根粉碎，用40-95%乙醇回流或恒溫浸漬提取，反復(fù)提取2-4次，合并提取液后進(jìn)行濃縮、 干燥得粗提物A ；將粗提物A與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的14-30目粗聚酰胺樹(shù)脂按重量比1-3:1混勻， 裝入層析柱，然后用50-75%乙醇洗脫，洗脫流速為0. 2-0. 5BV/h，收集洗脫液，濃縮，低溫干燥，得到格里風(fēng)素粗提物B ；將格里風(fēng)素粗提物B與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的50-150目細(xì)聚酰胺樹(shù)脂按重量比2-5 1混勻，裝入層析柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1 6 3)混合溶液進(jìn)行洗脫， 洗脫流速為0. 03-0. lBV/h，收集洗脫液，濃縮，低溫干燥得格里風(fēng)素粗品；將粗品加入甲醇溶解，再經(jīng)制備液相進(jìn)一步分離純化得到純度98%以上的格里風(fēng)素成品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法，其特征在于所述粗提取物A與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的粗聚酰胺樹(shù)脂混勻先將粗提物A溶于甲醇制成溶液，在 70-85 °C條件下邊加溶液邊攪拌粗聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法，其特征在于所述格里風(fēng)素粗提物B與經(jīng)過(guò)預(yù)處理的細(xì)聚酰胺樹(shù)脂混勻先將粗提物A溶于甲醇制成溶液，在 70-85°C條件下邊加溶液邊攪拌細(xì)聚酰胺樹(shù)脂直至混合均勻。
4.如權(quán)利要求1所述的一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法，其特征在于所述制備液相填料為C18，柱規(guī)格為30mmX250mm，檢測(cè)波長(zhǎng)262nm，流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水，所述流動(dòng)相甲醇的體積百分比為25-50%，所述流動(dòng)相乙腈的體積百分比為15-30%。
全文摘要
一種從單葉格里風(fēng)中制備格里風(fēng)素的方法，單葉格里風(fēng)根經(jīng)粉碎，用40-95%乙醇提取，再經(jīng)粗聚酰胺樹(shù)脂和細(xì)聚酰胺樹(shù)脂分離，得格里風(fēng)素洗脫液，過(guò)氧化鋁柱，下注液經(jīng)濃縮，最后經(jīng)制備液相精制，得格里風(fēng)素純品。本發(fā)明可大量制備格里風(fēng)素純品，收率高、產(chǎn)品純度好，易于推廣使用。
文檔編號(hào)C07H15/203GK102286038SQ20111026398
公開(kāi)日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月8日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司