專(zhuān)利名稱(chēng)：：包含β內(nèi)酰胺化合物的組合物的制作方法包含P內(nèi)酰胺化合物的組合物本發(fā)明涉及包含至少95wt%13-內(nèi)酰胺化合物的組合物，以及它們的生產(chǎn)方法，和用于生產(chǎn)半合成抗生素的方法。制備半合成青霉素(SSP's)和半合成頭孢菌素(SSC's)的合成途徑通常從發(fā)酵產(chǎn)物例如青霉素G(PenG)、青霉素V(PenV)和/或頭孢菌素C(CefC)開(kāi)始。這些化合物可以被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物，例如6-氨基青霉烷酸(6-APA)、7-氨基-脫乙酰氧基_頭孢烷酸(7-ADCA)、7-氨基頭孢烷酸(7-ACA)、7-氨基-3-氯-3-頭孢烯-4-羧化物(7-ACCA)、7-氨基-3-[(Z/E)-l-丙烯-l-基]-3-頭孢烯-4-羧化物(7-PACA)等等，如K.Matsumoto，Bioprocess.Techn.，j^，(1993)，67-88，J.G.Shewale&H.Sivaraman，ProcessBiochemistry,August1989,146-154，T.A.Savidge，BiotechnologyofIndustrialAntibiotics(Ed.E.J.Vandamme)MarcelDekker，NewYork,1984，或J.G.Shewaleetal.，ProcessBiochemistryInternational,June1990，97-103中所公開(kāi)。例如，可以通過(guò)苯乙酸側(cè)鏈或羥苯乙酸側(cè)鏈的化學(xué)切割或酶切割分別從PenG或PenV獲得6-APA。PenG和PenV二者均為絲狀真菌Penicilliumchrysoge皿m在大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵方法中生產(chǎn)和分泌的次級(jí)代謝產(chǎn)物(綜述見(jiàn)R.P.ElanderinA卯l.Microbiol.Biotechno1(2003)61:385-392)。這些方法中的一些中，PenG作為中間產(chǎn)物以晶體形式被生產(chǎn)，在其它一些方法中，避免該步驟，在從發(fā)酵液中提取和反提取(backextraction)Pen-G后獲得的水性PenG溶液中直接切除側(cè)鏈——見(jiàn)W098/40839。第一代7-ADCA制品來(lái)自于PenG，其中5_元青霉烯環(huán)成為6_元頭孢烯環(huán)的擴(kuò)展和之后苯乙酰基-7-ADCA的苯乙酸側(cè)鏈的切割均使用化學(xué)反應(yīng)完成。下一代7-ADCA制品仍然得自PenG，但是在化學(xué)環(huán)擴(kuò)展之后，使用合適的(青霉素)?；该复偾谐揭阴；?-ADCA的苯乙酸側(cè)鏈。已開(kāi)發(fā)了其它方法，其中PenG成為苯乙酰基-7-ADCA的擴(kuò)環(huán)也使用合適的擴(kuò)環(huán)酶體外實(shí)現(xiàn)，但是這些方法的工業(yè)重要性很低。最近和最好的7-ADCA生產(chǎn)方法包括培養(yǎng)下述Penicilliumchrysoge皿m，所述Penicilliumchrysoge皿m用編碼合適擴(kuò)環(huán)酶的基因轉(zhuǎn)化并表達(dá)所述基因。在存在作為側(cè)鏈前體的脂肪酸的發(fā)酵罐中培養(yǎng)時(shí)，經(jīng)改造的Penicilliumchrysoge皿m菌株生產(chǎn)并分泌己二?；?7-ADCA——見(jiàn)W093/05158。在該生產(chǎn)方法中，從發(fā)酵液中回收己二?；?7-ADCA,用合適的?；盖懈钪舅醾?cè)鏈，之后對(duì)藉此獲得的7-ADCA進(jìn)行進(jìn)一步純化、結(jié)晶并干燥。其它側(cè)鏈前體公開(kāi)于W095/04148(2-(羧乙基硫代)乙酸和3-(羧甲基硫代)_丙酸)、W095/04149(2-(羧乙基硫代)丙酸)、W096/38580(苯基乙酸)和W098/048034和W098/048035(多種二羧酸)中。擴(kuò)環(huán)酶負(fù)責(zé)多種N_?；嗝雇樗岬?-元環(huán)的擴(kuò)展，從而得到相應(yīng)的N-酰基化的脫乙酰氧基頭孢烷酸。其它P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物例如7-ACA、7-ACCA和7-PACA的生產(chǎn)已充分記錄在專(zhuān)利和科學(xué)文獻(xiàn)中，它們是技術(shù)人員已知的。隨后通過(guò)與合適的側(cè)鏈偶合，將13_內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為期望的SSP或SSC，如EP0339751、JP-A-53005185和CH-A-640240等等中所述。通過(guò)制造側(cè)鏈和P_內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物的不同組合，可以獲得多種半合成青霉素和頭孢菌素抗生素，例如阿莫西林、氨芐西林、頭孢氨芐、頭孢羥氨芐、頭孢雷定、頭孢克洛和頭孢丙烯。在側(cè)鏈與e-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物的化學(xué)偶合的情況下，首先硅烷基化e-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物的羧基，從而促進(jìn)不溶性P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物在有機(jī)溶劑體系中的溶解。|3-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物組合物的溶解速度取決于許多因素，例如顆粒大小、13-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物組合物的純度、雜質(zhì)或水的不存在或存在、溫度、有機(jī)溶劑的類(lèi)型等等。我們現(xiàn)已驚訝地發(fā)現(xiàn)，與不含有氯化銨和/或相應(yīng)量有機(jī)胺鹽酸鹽的組合物相比，包含至少95%P_內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物并且還包含0.02和5wt^之間氯化銨和/或相應(yīng)量有機(jī)胺鹽酸鹽(以分子量為基礎(chǔ))的組合物具有更好的溶解速率。在第一方面中，本發(fā)明提供了包含至少90wt%13-內(nèi)酰胺化合物的組合物，其特征在于，其含有0.02和5wt^之間的氯化銨和/或相應(yīng)量的有機(jī)胺鹽酸鹽(以分子量為基礎(chǔ))。優(yōu)選地，e-內(nèi)酰胺化合物是P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物，其可以選自由6-APA、7-ADCA、7-ACA、7-ACCA和7-PACA組成的組。更優(yōu)選地，P_內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物是6-APA或7-ADCA，最優(yōu)選地13_內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物是7-ADCA。本發(fā)明的組合物包含至少90%，優(yōu)選地至少95%，更優(yōu)選地至少96%，更優(yōu)選地至少97%，更優(yōu)選地至少98%和最優(yōu)選地至少99%的13-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物。本發(fā)明的組合物的氯化銨含量在0.02和5wt^之間，更優(yōu)選地在0.02和4wt^之間，更優(yōu)選地在0.03和3wt^之間，更優(yōu)選地在0.04和0.04和2wt^之間和最優(yōu)選地在0.05和lwt^之間。類(lèi)似地，包含有機(jī)胺鹽酸鹽的本發(fā)明的實(shí)施方案具有優(yōu)選對(duì)應(yīng)于氯化銨的量(以分子量為基礎(chǔ))的有機(jī)胺鹽酸鹽含量。既含有氯化銨又含有有機(jī)胺鹽酸鹽的實(shí)施方案含有對(duì)應(yīng)于針對(duì)單獨(dú)的氯化銨所闡述的量(以分子量為基礎(chǔ))。本發(fā)明的組合物的優(yōu)點(diǎn)是，與不含有0.02和5wt^之間的氯化銨和/或相應(yīng)量有機(jī)胺鹽酸鹽(以分子量為基礎(chǔ))的組合物相比，其組合有P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物的非常高的純度和在硅烷基化反應(yīng)中的改進(jìn)的溶解表現(xiàn)。本發(fā)明的組合物還可包含水。優(yōu)選地，水含量等于或少于0.5wt^，更優(yōu)選地等于或少于0.4wt^，更優(yōu)選地等于或少于0.3wt^，最優(yōu)選地等于或少于0.2wt%。對(duì)于其中P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物是頭孢菌素中間產(chǎn)物例如7-ACA、7-ADCA、7-ACCA或7-PACA的優(yōu)選的實(shí)施方案而言，組合物可優(yōu)選地具有非常低的6-APA含量。對(duì)于半合成頭孢菌素的口施用而言，包含頭孢菌素中間產(chǎn)物例如7-ACA、7-ADCA、7-ACCA或7-PACA的本發(fā)明的組合物中的6-APA含量?jī)?yōu)選地少于50卯m，更優(yōu)選地少于40卯m，更優(yōu)選地少于30卯m，更優(yōu)選地少于20卯m和最優(yōu)選地少于10卯m。對(duì)于非腸道(parental)施用而言，包含頭孢菌素中間產(chǎn)物例如7_ACA、7_ADCA、7-ACCA或7-PACA的本發(fā)明的組合物中的6-APA含量?jī)?yōu)選地少于10卯m。對(duì)于其中P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物是頭孢菌素中間產(chǎn)物例如7-ACA、7-ADCA、7-ACCA或7-PACA的優(yōu)選的實(shí)施方案而言，本發(fā)明的組合物優(yōu)選地不含有苯乙酸。這表示通過(guò)應(yīng)用本領(lǐng)域已知的用于檢測(cè)苯乙酸的分析方法來(lái)測(cè)定本發(fā)明組合物的苯乙酸含量，所述分析方法的應(yīng)答保持低于所述化合物的檢出極限。這意味著包含頭孢菌素中間產(chǎn)物例如7-ACA、7-ADCA、7-ACCA或7-PACA作為P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物的本發(fā)明組合物優(yōu)選地包含等于或少于4ppm的苯乙酸。在第二方面中，本發(fā)明提供了用于生產(chǎn)本發(fā)明組合物的方法，包括使包含13-內(nèi)4酰胺化合物并且不含有氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽的組合物與氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽接觸。優(yōu)選地，P-內(nèi)酰胺化合物是P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物，其可以選自由6-APA、7-ADCA、7-ACA、7-ACCA和7-PACA組成的組。更優(yōu)選地，P_內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物是6-APA或7-ADCA，最優(yōu)選地13_內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物是7-ADCA。優(yōu)選地，包含至少90%，優(yōu)選地至少95%13-內(nèi)酰胺化合物并且不含有氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽的組合物是晶體形式，用氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽的水性溶液對(duì)其洗滌一次或多次，隨后任選地干燥。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用一倍或多倍床體積的合適濃度的氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽的水溶液，對(duì)晶體洗滌一次或若干次。這些濃度優(yōu)選地在O.25和5wt^之間，更優(yōu)選地在0.5和2.5wt^之間?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行對(duì)洗滌過(guò)的晶體的干燥，直至達(dá)到如上文針對(duì)本發(fā)明的組合物所述的水含量。在第三方面中，本發(fā)明提供了用于生產(chǎn)半合成抗生素的方法，所述方法包括對(duì)本發(fā)明的組合物進(jìn)行硅烷基化。就半合成青霉素的生產(chǎn)而言，本發(fā)明的組合物包含6-APA，而就半合成頭孢菌素的生產(chǎn)而言，本發(fā)明的組合物可以包含任何頭孢菌素中間產(chǎn)物，例如7-ADCA、7-ACA、7-ACCA或7-PACA。在第四方面中，本發(fā)明提供了本發(fā)明的組合物用于對(duì)半合成13-內(nèi)酰胺抗生素進(jìn)行化學(xué)合成的用途。包含6-APA作為P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物的本發(fā)明的組合物可用于對(duì)半合成青霉素的生產(chǎn)，而包含頭孢菌素中間產(chǎn)物例如7-ADCA、7-ACA、7-ACCA或7-PACA的本發(fā)明的組合物可用于對(duì)半合成頭孢菌素的生產(chǎn)。優(yōu)選的半合成青霉素是氨芐西林和阿莫西林。優(yōu)選的半合成頭孢菌素為頭孢氨芐、頭孢羥氨芐、頭孢雷定、頭孢克洛和頭孢丙烯。實(shí)施例實(shí)施例11制備包含7-ADCA和氯化銨的組合物如W093/05158中所述，使用改造的Penicilliumchrysoge皿m菌株，在發(fā)酵方法中生產(chǎn)己二?；鵢7-ADCA。如W098/48035和W098/48036中所述回收己二?；鵢7_ADCA，將其脫?；癁?-ADCA，并結(jié)晶7-ADCA。使用真空泵將5升7-ADCA結(jié)晶的水性懸浮液(40-50g/L7-ADCA之間)濾過(guò)直徑為13cm的G3濾器。用一倍床體積的1.5wt^氯化銨(NH4C1)水性溶液將7-ADCA結(jié)晶沖洗兩次。第二次沖洗后，將結(jié)晶在G3濾器上干燥20分鐘。將約100克結(jié)晶在烘箱中于102t:干燥2小時(shí)。由濾器上晶體團(tuán)塊的高度和濾器直徑來(lái)計(jì)算床體積。表l實(shí)驗(yàn)組分含量(wt。/。)7-ADCA氯化銨*水對(duì)照~98n.d.0.2用氯化銨洗滌的7-ADCA結(jié)晶980.630.2n.d.=不可檢出(低于0.02%的檢出極限)*作為氯化物含量測(cè)量5在對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，用一倍床體積的去礦質(zhì)水將7-ADCA結(jié)晶沖洗兩次，并進(jìn)一步處理，如針對(duì)用氯化銨洗滌的結(jié)晶所述。獲得的結(jié)果列于表l中。實(shí)施例2如實(shí)施例1中制備的纟目合物的硅烷某化時(shí)間如下文所述測(cè)量7-ADCA的硅烷基化時(shí)間。借助于粉末漏斗，向500ml的三頸圓底燒瓶(DuranScottNS29.2/32)中添加約16克按照實(shí)施例1所述制備的7-ADCA結(jié)晶和約19克雙-三甲基硅烷基-尿素(BSU)。將帶有特氟隆槳片的攪拌棒(型號(hào)SovirelCN29/32)和控制溫度計(jì)(裝在玻璃塞29/32中的LET5450DIN12778)置于燒瓶中。將燒瓶置于調(diào)節(jié)至25.5±0.5°C(得到25.0士0.5t:的反應(yīng)溫度)的水浴中。隨后添加277mlDMF(化學(xué)級(jí))。攪拌棒與攪拌器(JankeandKunkel，IKAwerk，型號(hào)RW20DZM)相連，并將攪拌速度調(diào)節(jié)為205和215rpm之間。向燒瓶中添加0.1mlTMCA(三甲基氯硅烷)并用橡膠塞蓋上燒瓶，所述橡膠塞中裝有光纖探頭(fiberopticprobe)。光纖探頭與Metrohm662型光度計(jì)連接，所述光度計(jì)被調(diào)節(jié)至625nm的波長(zhǎng)。以規(guī)則的間隔(約10分鐘)測(cè)量反應(yīng)混合物的吸光度。初始反應(yīng)混合物的吸光度值非常高02AU二吸光度單位)。隨著硅烷基化反應(yīng)的進(jìn)行，不溶的7-ADCA溶解，這導(dǎo)致吸光度的降低。硅烷基化時(shí)間被定義為反應(yīng)開(kāi)始和吸光度降至O.1的AU-值的時(shí)間點(diǎn)之間的時(shí)間。表2顯示，根據(jù)實(shí)施例1用氯化銨水性溶液洗滌的7-ADCA結(jié)晶具有約2小時(shí)的硅烷基化時(shí)間。在使用對(duì)照結(jié)晶(用水洗滌)的實(shí)驗(yàn)中，AU在〉2的初始值下保持至少4小時(shí)。表2-如實(shí)施例1中制備的7-ADCA組合物的硅烷基化時(shí)間<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求包含至少90wt％β-內(nèi)酰胺化合物的組合物，其特征在于，其含有0.02和5wt％之間的氯化銨和/或相應(yīng)量的有機(jī)胺鹽酸鹽。2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述內(nèi)酰胺化合物是選自由6-APA、7-ADCA、7-ACA、7-ACCA和7-PACA組成的組的P-內(nèi)酰胺中間產(chǎn)物。3.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述13-內(nèi)酰胺化合物是7-ADCA。4.用于生產(chǎn)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的組合物的方法，所述方法包括將包含至少95wt%13-內(nèi)酰胺化合物并且不含有氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽的所述組合物與氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽接觸。5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中將包含至少95wt^晶體形式的e-內(nèi)酰胺化合物的組合物用氯化銨和/或有機(jī)胺鹽酸鹽的水性溶液洗滌一次或多次，以及，任選地，加以干燥。6.用于生產(chǎn)半合成抗生素的方法，包括對(duì)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的組合物進(jìn)行硅烷基化。7.權(quán)利要求l-3中任一項(xiàng)所述的組合物用于生產(chǎn)半合成e-內(nèi)酰胺抗生素的用途。全文摘要本發(fā)明涉及包含至少90wt％β-內(nèi)酰胺化合物的組合物，其特征在于，其含有0.02和5wt％之間的氯化銨和/或相應(yīng)量的有機(jī)胺鹽酸鹽。文檔編號(hào)C07D499/42GK101772505SQ200880101545公開(kāi)日2010年7月7日申請(qǐng)日期2008年7月29日優(yōu)先權(quán)日2007年7月30日發(fā)明者卡雷爾·亨德里克·柯伊伯斯,威廉·普魯吉,約翰尼斯·艾伯特·扎爾姆·范德?tīng)柹暾?qǐng)人:帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司