專利名稱：結(jié)合Aβ(1-42)球聚體的人源化抗體及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用于例如診斷、治療和預(yù)防病癥例如淀粉樣變性(如阿爾茨海默 病)和有關(guān)病癥的抗體。背景信息阿爾茨海默病(AD)是一種神經(jīng)變性疾病，具有如下特點(diǎn)進(jìn)行性喪失認(rèn)知能力 和包含淀粉樣蛋白沉積物的特有的神經(jīng)病理學(xué)特征、神經(jīng)纖維纏結(jié)以及在腦的某些區(qū)域 中神經(jīng)元丟失(參見 Hardy 和 Selkoe (Science297, 353 (2002) ；Mattson Nature 431, 7004(2004)。淀粉樣蛋白沉積物的主成分是淀粉樣蛋白肽(Αβ)，具有42個(gè)氨基酸長 度類型(Α β 1-42)是最主要的。具體而言，淀粉樣蛋白β (1-42)蛋白是一種具有42個(gè)氨基酸的多肽，其來源于淀 粉樣蛋白前體蛋白(APP)的蛋白酶解加工。除人變體之外，其還包括存在于非人生物(具 體而言其他哺乳動(dòng)物，特別是大鼠)中的淀粉樣蛋白β (1-42)蛋白的同種型。該蛋白由于 在水相環(huán)境中傾向于聚合，因此可以非常不同的分子形式存在。已證明不溶蛋白的沉積與癡呆病癥如阿爾茨海默病的發(fā)生或進(jìn)展的簡單相關(guān)是 不可信的(Terry 等，Ann. Neurol. 30. 572-580 (1991) ；Dickson 等，Neurobiol. Aging 16， 285-298(1995))。與此相反，突觸和認(rèn)知感覺的喪失似乎與A β (1_42)的可溶形式更相關(guān) (Lue 等，Am. J. Pathol. 155，853-862 (1999) ；McLean 等，Ann. Neurol. 46，860-866 (1999))。盡管在過去已出現(xiàn)抗Αβ (1-42)的多克隆和單克隆抗體，但沒有一種被證明產(chǎn)生 期望的療效并且還沒有在動(dòng)物和/或人中引起嚴(yán)重的副作用。例如，由每周一次持續(xù)5個(gè) 月接受針對(duì)N-端的抗-Αβ (1-42)抗體的非常老的ΑΡΡ23小鼠的臨床前研究引起的被動(dòng)免 疫顯示了治療相關(guān)的副作用。具體而言，與鹽水處理的小鼠相比，這些小鼠顯示在微出血 (microhaemorrhages)量和嚴(yán)重程度上的增加(Pfeifer 等，Science 2002298:1379)。還 針對(duì)非常老(> 24個(gè)月)的Tg2576和PDAPP小鼠描述了相似的出血增加(Wilcock等，J Neuroscience 2003,23 3745-51 ；Racke 等，J Neuroscience 2005,25 629-636) 。 胃 種小鼠中，抗-Αβ (1-42)注射導(dǎo)致了明顯增加的微出血。因此，對(duì)于開發(fā)預(yù)防或減緩疾病 進(jìn)展而不誘導(dǎo)針對(duì)人體的消極效應(yīng)和可能的致死效應(yīng)的生物制劑而言，存在著巨大的、未 滿足的治療需求。鑒于一般人群漸增的壽命，并且隨著壽命的增加，每年診斷有阿爾茨海默 病或相關(guān)病癥的患者數(shù)量也連帶增加，因此這樣的需求格外明顯。此外，這樣的抗體可供在經(jīng)歷阿爾茨海默病癥狀的患者(目前僅可通過尸體解剖來確診)中正確診斷阿爾茨海默病 之用。此外，這樣的抗體可供闡明引起該使人虛弱的疾病的蛋白和其他生物因素的生物學(xué) 特性之用。 所有在本文中引用的專利和出版物以其全文在此并入作為參考。發(fā)明概述本發(fā)明涉及能結(jié)合存在于阿爾茨海默病患者腦中的可溶性寡聚體特別是 A β (1-42)球聚體的結(jié)合蛋白，尤其是抗體(如在本文中對(duì)于小鼠/鼠單克隆抗體稱為術(shù)語 “8F5”以及對(duì)于人源化8F5稱為“8F5hum8”的抗體)。為了本文的目的，這些結(jié)合蛋白以及 尤其是抗體將被稱為“球聚體_表位特異性抗體”。這意味著這些抗體結(jié)合被認(rèn)為是引起阿 爾茨海默病的球聚體或抗原的一個(gè)或更多個(gè)表位(如Αβ (1-42)肽的(1-42)氨基酸區(qū))。 此外，本發(fā)明還提供了生產(chǎn)和使用這些結(jié)合蛋白或其部分的方法。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及包含能結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的抗原結(jié)合域的結(jié)合蛋白 (如抗體)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗原結(jié)合域包含至少一個(gè)包含選自如下的氨基酸序列 CDR CDR-VH1. X1-X2-X3-X4-XjSEQ ID Ν0:5)，其中XjS;Χ2是Y;Χ3 是 G;Χ4 是 Μ;和Χ5 是 S，CDR-VH2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17 (SEQ ID NO 6), 其中X1 是 S ；X2 是 I ；X3 是 N ；X4 是 S ；X5 是 N ；X6 是 G ；X7 是 G ；X8 是 S ；X9 是 Τ;X10 是 Y ；X11 是 Y ；X12 是 P ；X13 是 D ；X14 是 S ；X15 是 V ；X16 是 K ；和X17 是 G,
CDR-VH3. X「X2-X3_X4(SEQ ID NO :7)，其中X1 是 S ；X2 是 G ；X3 是 D ；和X4 是 Y，CDR-VL1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16 (SEQ ID NO :8)，其 中X1 是 R ；X2 是 S ；X3 是 S ；X4 是 Q ；X5 是 S ；X6 ^ L ；X7 是 V ；X8 是 Y ；X9 是 S ；X10 是 N ；X11 是 G ；X12 是 D ；X13 是 T ；X14 是 Y ；X15 是 L ；和X16 是 H，CDR-VL2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID Ν0:9)，其中X1 是 K ；X2 是 V ；X3 是 S ；X4 是 N ；X5 是 R ；X6 是 F;和X7 是 S，以及CDR-VL3. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO: 10)，其中X1 是 S ；X2 是 Q ；X3 是 S ；X4 是 T ；X5 是 H ；X6 是 V ；
X7 是 P ；父8是1;和X9 是 T， 優(yōu)選地，該抗原結(jié)合域包含至少一個(gè)包含選自如下的氨基酸序列的⑶R =SEQ ID NO. :1 的殘基 31-35 (艮口 SYGMS (SEQ ID NO 11) ；8F5VHCDR1) ； SEQ ID NO. 1 的殘 基 50-66( BP SINSNGGSTYYPDSVKG(SEQID NO 12) ；8F5VH CDR2) ；SEQ ID NO. :1 的殘 基 98-108 ( BP S⑶ Y(SEQID NO: 13) ； 8F5VH CDR3) ； SEQ ID NO. :2 的殘基 24-39 (艮口 RSSQSLVYSNGDTYLH(SEQ ID NO 14) ；8F5VL CDR1) ；SEQ ID NO. :2 的殘基 55-61 (艮口 KVSNRFS (SEQ ID N0:15) ；8F5VL CDR2)禾口 SEQ IDN0. :2 的殘基 94-102 (即 SQSTHVPWT (SEQ ID N0 16) ；8F5VL⑶R3)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含至少3個(gè)選自上述披露 的序列的⑶R。更優(yōu)選地，該3個(gè)⑶R選自可變域⑶R組，所述可變域⑶R組選自
權(quán)利要求
1. 一種結(jié)合蛋白，包含a)結(jié)合淀粉樣蛋白-β (1-42)球聚體的抗原結(jié)合域，所述抗原 結(jié)合域包含至少一個(gè)包含選自如下的氨基酸序列的CDR CDR-H1. X1-X2-X3-X4-X5 (SEQ ID Ν0:5)，其中X4 是 MjPX5 是 S，CDR-H2.)(1-X2-)(3-X4-)(5-X6-X7-X8-)(9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO :6),其中&是I X3是N X4是s&是6 X7是G X8是S )(9是丁 XlO 是 Y A1是Y X12 是 P X13 是 D Xl4 是 S A5是V X16^K X17 是 G，CDR-HS-X1-X2-X3-X4(SEQ ID Ν0:7)，其中 X1 是 S ； X2 是 G ； X3是D ；和 乂4 是 Y，CDR-L1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16(SEQ ID NO :8)，其中XjR X2是S X3是S X4是Q X5是SX7是 V;X9 是 S ； X10 是 N ； X11 是 G ； )(12 是 D ； 知是T ； ^14 是 Y ； X15是L ；和 Xl6 是 H，CDR-L2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID N0:9)，其中 ；X5 是 R ； X6是F ；和 X7 是 R, 以及CDR-L3. A-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO: 10)，其中 ；X4 是 T ； X5 是 H ；X7 是 P ； 乂8是評(píng);和 X9 是 T，以及2)包含至少一條選自如下的接納體序列的人接納體構(gòu)架SEQID NO. :17,SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、SEQ ID NO. 20, SEQ IDNO. :21、SEQ ID NO. 22, SEQ ID NO. :23 和 SEQ ID NO. :24ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述至少一個(gè)CDR包含選自如下的氨基酸序列 SEQ ID NO. :11、SEQ ID NO. : 12、SEQ ID NO. : 13、SEQ ID NO. : 14、SEQ ID NO. :15 和SEQ ID NO. :16o
3.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含至少3個(gè)CDR。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的結(jié)合蛋白，其中所述至少3個(gè)⑶R是選自由如下組成的可變域⑶R組
5.根據(jù)權(quán)利要求4的結(jié)合蛋白，兩個(gè)可變域CDR組。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的結(jié)合蛋白，其中所述兩個(gè)可變域⑶R組是VH8F5⑶R組&VL8F5 CDR 組。
7.根據(jù)權(quán)利要求3的結(jié)合蛋白，進(jìn)一步包含人接納體構(gòu)架。
8.根據(jù)權(quán)利要求4的結(jié)合蛋白，進(jìn)一步包含人接納體構(gòu)架。
9.根據(jù)權(quán)利要求5的結(jié)合蛋白，進(jìn)一步包含人接納體構(gòu)架。
10.根據(jù)權(quán)利要求6的結(jié)合蛋白，進(jìn)一步包含人接納體構(gòu)架。
11.根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含選自如下的氨基酸序列選SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、SEQ IDN0. 20,SEQ ID NO. :21、SEQ ID NO. :22, SEQ ID NO. :23 和 SEQ IDNO. :24。
12.根據(jù)權(quán)利要求8的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含選自如下的氨基酸序列 SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、SEQ IDN0. 20,SEQ ID NO. :21、SEQID NO. 22、SEQ ID NO. :23 和 SEQ IDN0. :24。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含選自如下的氨基酸序列 SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、SEQ IDN0. 20,SEQ ID NO. :21、SEQID NO. 22、SEQ ID NO. :23 和 SEQ IDN0. :24。
14.根據(jù)權(quán)利要求10的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含選自如下的氨基酸序列SEQ ID NO. 17、SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19、SEQ IDN0. 20,SEQ ID NO. :21、SEQ ID NO. 22、SEQ ID NO. :23 和 SEQ IDN0. :24。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)具有選自SEQID NO. :1和SEQ ID NO. :2的氨基酸序列的可變域。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含兩個(gè)可變域，其中所述兩個(gè) 可變域具有選自SEQ ID NO. :1和SEQ ID NO. :2的氨基酸序列。
17.根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架在關(guān)鍵殘基處包含至少一個(gè) 構(gòu)架區(qū)氨基酸取代，所述關(guān)鍵殘基選自鄰接CDR的殘基； 糖基化位點(diǎn)殘基； 稀有殘基；能與Αβ (1-42)球聚體相互作用的殘基； 能與CDR相互作用的殘基； 規(guī)范殘基；在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基； 游標(biāo)區(qū)中的殘基；和在Chothia-定義的可變重鏈⑶Rl與Kabat-定義的第一重鏈構(gòu)架之間重疊區(qū)中的殘基。
18.根據(jù)權(quán)利要求10的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架在關(guān)鍵殘基處包含至少一個(gè) 構(gòu)架區(qū)氨基酸取代，所述關(guān)鍵殘基選自鄰接CDR的殘基； 糖基化位點(diǎn)殘基； 稀有殘基；能與Αβ (1-42)球聚體相互作用的殘基； 能與CDR相互作用的殘基； 規(guī)范殘基；在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基； 游標(biāo)區(qū)中的殘基；和在Chothia-定義的可變重鏈⑶Rl與Kabat-定義的第一重鏈構(gòu)架之間重疊區(qū)中的殘基。
19.根據(jù)權(quán)利要求16的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架在關(guān)鍵殘基處包含至少一個(gè) 構(gòu)架區(qū)氨基酸取代，所述關(guān)鍵殘基選自鄰接CDR的殘基； 糖基化位點(diǎn)殘基； 稀有殘基；能與Αβ (1-42)球聚體相互作用的殘基； 能與CDR相互作用的殘基； 規(guī)范殘基；在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基； 游標(biāo)區(qū)中的殘基；和在Chothia-定義的可變重鏈⑶Rl與Kabat-定義的第一重鏈構(gòu)架之間重疊區(qū)中的殘基。
20.根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含至少一個(gè)構(gòu)架區(qū)氨基酸 取代，其中構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列至少65%同一于所述人接納體構(gòu)架的序列并包含至少52 個(gè)相同于所述人接納體構(gòu)架的氨基酸殘基。
21.根據(jù)權(quán)利要求10的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含至少一個(gè)構(gòu)架區(qū)氨基酸 取代，其中構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列至少65%同一于所述人接納體構(gòu)架的序列并包含至少52 個(gè)相同于所述人接納體構(gòu)架的氨基酸殘基。
22.根據(jù)權(quán)利要求16的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含至少一個(gè)構(gòu)架區(qū)氨基酸 取代，其中構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列至少65%同一于所述人接納體構(gòu)架的序列并包含至少52 個(gè)相同于所述人接納體構(gòu)架的氨基酸殘基。
23.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)具有選自SEQID NO. :1和SEQ ID NO. :2的氨基酸序列的可變域，以及與原纖維形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先 結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含兩個(gè)可變域，其中所述兩個(gè) 可變域具有氨基酸序列SEQ ID NO. :1和SEQ IDNO· :2。
25.根據(jù)權(quán)利要求20的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)具有選自SEQID NO. :1和SEQ ID NO. :2的氨基酸序列的可變域，以及與原纖維形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先 結(jié)合A β (1-42)球聚體的可溶性形式。
26.根據(jù)權(quán)利要求21的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)具有選自選自SEQ ID NO. :1和SEQ ID NO. :2的氨基酸序列的可變域。
27.根據(jù)權(quán)利要求22的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含至少一個(gè)具有選自選自SEQID NO. :1和SEQ ID NO. :2的氨基酸序列的可變域。
28.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
29.根據(jù)權(quán)利要求4的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
30.根據(jù)權(quán)利要求6的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
31.根據(jù)權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
32.根據(jù)權(quán)利要求11的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合A β (1-42)球聚體的可溶性形式。
33.根據(jù)權(quán)利要求15的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
34.根據(jù)權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
35.根據(jù)權(quán)利要求20的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
36.根據(jù)權(quán)利要求23的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白結(jié)合Αβ(1-42)球聚體，以及與原纖維 形式相比所述結(jié)合蛋白優(yōu)先結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的可溶性形式。
37.根據(jù)權(quán)利要求觀的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)Αβ(1-42)球聚體的生物學(xué)功能。
38.根據(jù)權(quán)利要求33的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)Αβ(1-42)球聚體的生物學(xué)功能。
39.根據(jù)權(quán)利要求36的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)Αβ(1-42)球聚體的生物學(xué)功能。
40.根據(jù)權(quán)利要求觀的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白中和Αβ(1-42)球聚體。
41.根據(jù)權(quán)利要求33的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白中和Αβ(1-42)球聚體。
42.根據(jù)權(quán)利要求36的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白中和Αβ(1-42)球聚體。
43.根據(jù)權(quán)利要求觀的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白對(duì)所述靶標(biāo)具有選自如下的解 離常數(shù)(Kd)至多約10_7Μ、至多約IOl、至多約101、至多約ΙΟ,Μ、至多約10_"M、至多約 10—M和至多約IO-13M0
44.根據(jù)權(quán)利要求33的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白對(duì)所述靶標(biāo)具有選自如下的解 離常數(shù)(Kd)至多約10_7M、至多約IOl、至多約101、至多約ΙΟ,Μ、至多約10_"M、至多約 10—M和至多約IO-13M0
45.根據(jù)權(quán)利要求35的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白對(duì)所述靶標(biāo)具有選自如下的解 離常數(shù)(Kd)至多約10_7M、至多約IOl、至多約101、至多約ΙΟ,Μ、至多約10_"M、至多約 10—M和至多約IO-13M0
46.根據(jù)權(quán)利要求36的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白對(duì)所述靶標(biāo)具有選自如下的解 離常數(shù)(Kd)至多約10_7M、至多約IOl、至多約101、至多約ΙΟ,Μ、至多約10_"M、至多約 10—M和至多約IO-13M0
47.一種包含權(quán)利要求1-46任一項(xiàng)的所述結(jié)合蛋白的抗體構(gòu)建體，所述抗體構(gòu)建體進(jìn) 一步包含連接多肽或免疫球蛋白恒定域。
48.根據(jù)的權(quán)利要求47抗體構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白選自 免疫球蛋白分子，單克隆抗體， 嵌合抗體， ⑶R-嫁接抗體， 人源化抗體， Fab, Fab', F(ab，)2, Fv,二硫鍵連接的Fv， scFv, 單區(qū)抗體， 雙抗體， 多特異性抗體， 雙重特異性抗體， 同種型抗體， 突變的抗體， 雙可變區(qū)抗體 禾口雙特異性抗體。
49.根據(jù)權(quán)利要求47的抗體構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白包含選自如下的重鏈免疫球蛋 白恒定域人IgM恒定域， 人IgGl恒定域， 人IgG2恒定域， 人IgG3恒定域， 區(qū)，人IgG4恒定域， 人IgE恒定域， 禾口人IgA恒定域。
50.根據(jù)權(quán)利要求47的抗體構(gòu)建體，包含具有選自如下的氨基酸序列的免疫球蛋白恒 定域SEQ ID NO. :25, SEQ ID NO. 26, SEQ IDNO. :27 禾口 SEQ ID NO. :28。
51.一種包含權(quán)利要求47-50任一項(xiàng)所述的抗體構(gòu)建體的抗體綴合物，所述抗體綴合 物進(jìn)一步包含選自如下的劑免疫粘附分子、顯像劑、治療劑和細(xì)胞毒性劑。
52.根據(jù)的權(quán)利要求51抗體綴合物，其中所述劑是顯像劑，選自放射性標(biāo)記、酶、熒光 標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、磁性標(biāo)記和生物素。
53.根據(jù)權(quán)利要求52的抗體綴合物，其中所述放射性標(biāo)記選自3H、14C、35S、9°Y、99Tc、ιηΙη, 1251 , 131 1 , 177Lu^166Ho 和 153Sm。
54.根據(jù)權(quán)利要求51的抗體綴合物，其中所述劑是治療劑或細(xì)胞毒素劑，選自抗代謝 物、烷化劑、抗生素、生長因子、細(xì)胞因子、抗-血管發(fā)生劑、抗有絲分裂劑、蒽環(huán)類、毒素和 細(xì)胞凋亡劑。
55.根據(jù)權(quán)利要求49的抗體構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白具有人糖基化模式。
56.根據(jù)權(quán)利要求51的抗體綴合物，其中所述結(jié)合蛋白具有人糖基化模式。
57.根據(jù)權(quán)利要求3的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白以晶體形態(tài)存在。
58.根據(jù)權(quán)利要求47的抗體構(gòu)建體，其中所述抗體構(gòu)建體以晶體形態(tài)存在。
59.根據(jù)權(quán)利要求51的抗體綴合物，其中所述抗體構(gòu)建體以晶體形態(tài)存在。
60.根據(jù)權(quán)利要求57的結(jié)合蛋白，其中所述晶體是無載體藥物控制釋放晶體。
61.根據(jù)權(quán)利要求58的抗體構(gòu)建體，其中所述晶體是無載體藥物控制釋放晶體。
62.根據(jù)權(quán)利要求59的抗體綴合物，其中所述晶體是無載體藥物控制釋放晶體。
63.根據(jù)權(quán)利要求57的結(jié)合蛋白，其中與所述結(jié)合蛋白的可溶性對(duì)應(yīng)物相比所述結(jié)合 蛋白具有更長的體內(nèi)半衰期。
64.根據(jù)權(quán)利要求58的抗體構(gòu)建體，其中與所述抗體構(gòu)建體的可溶性對(duì)應(yīng)物相比所述 抗體構(gòu)建體具有更長的體內(nèi)半衰期。
65.根據(jù)權(quán)利要求59的抗體綴合物，其中與所述抗體綴合物的可溶性對(duì)應(yīng)物相比所述 抗體綴合物具有更長的體內(nèi)半衰期。
66.根據(jù)權(quán)利要求57的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白保留生物活性。
67.根據(jù)權(quán)利要求58的抗體構(gòu)建體，其中所述抗體構(gòu)建體保留生物活性。
68.根據(jù)權(quán)利要求59的抗體綴合物，其中所述抗體綴合物保留生物活性。
69.一種編碼結(jié)合蛋白的分離的核酸分子，其中所述結(jié)合蛋白的所述可變重鏈的氨基 酸序列與SEQ ID NO 1具有至少70%同一性。
70.一種編碼結(jié)合蛋白的分離的核酸分子，其中所述結(jié)合蛋白的所述可變輕鏈的氨基 酸序列與SEQ ID NO 2具有至少70%同一性。
71.—種編碼權(quán)利要求1-46任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白氨基酸序列的分離的核酸分子。
72.—種編碼權(quán)利要求47-50任一項(xiàng)的抗體構(gòu)建體氨基酸序列的分離的核酸分子。
73.—種編碼權(quán)利要求51-53任一項(xiàng)的抗體綴合物氨基酸序列的分離的核酸分子。
74.—種包含權(quán)利要求71-73任一項(xiàng)的所述核酸分子的載體。
75.—種包含權(quán)利要求74的所述載體的宿主細(xì)胞。
76.權(quán)利要求75的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞。
77.根據(jù)權(quán)利要求76的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌。
78.根據(jù)權(quán)利要求75的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。
79.根據(jù)權(quán)利要求78的宿主細(xì)胞，其中所述真核細(xì)胞選自原生生物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞、植 物細(xì)胞和真菌細(xì)胞.
80.根據(jù)權(quán)利要求79的宿主細(xì)胞，其中所述動(dòng)物細(xì)胞選自哺乳動(dòng)物細(xì)胞、禽類細(xì)胞和 昆蟲細(xì)胞。
81.根據(jù)權(quán)利要求80的宿主細(xì)胞，其中所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞是CHO細(xì)胞。
82.根據(jù)權(quán)利要求80的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是COS。
83.根據(jù)權(quán)利要求80的宿主細(xì)胞，其中所述真菌細(xì)胞是酵母細(xì)胞。
84.根據(jù)權(quán)利要求83的宿主細(xì)胞，其中所述酵母細(xì)胞是釀酒酵母。
85.根據(jù)權(quán)利要求80的宿主細(xì)胞，其中所述昆蟲細(xì)胞是Sf9。
86.—種產(chǎn)生能結(jié)合Αβ (1-42)球聚體的蛋白的方法，包括在足以產(chǎn)生能結(jié)合 Αβ (1-42)球聚體的結(jié)合蛋白的時(shí)間和條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求75-85任一項(xiàng)的宿主細(xì)胞。
87.一種根據(jù)權(quán)利要求86的方法產(chǎn)生的分離的蛋白。
88.一種用于釋放結(jié)合蛋白的組合物，所述組合物包含(a)一種制劑，其中所述制劑包含根據(jù)權(quán)利要求57-68任一項(xiàng)的結(jié)晶的結(jié)合蛋白和組 分；以及(b)至少一種聚合物載體。
89.根據(jù)權(quán)利要求88的組合物，其中所述聚合物載體是至少一種選自如下的聚合物 聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(氨基酸)、聚(酐)、聚(酯肽)、聚(酯)、聚(乳 酸)、聚(乳酸乙醇酸共聚物)或PLGA、聚(b-羥基丁酸酯)、聚(已內(nèi)酯)、聚(二氧雜環(huán) 己酮)；聚(乙二醇)、聚((羥丙基)甲基丙烯酰胺)、聚[(有機(jī))膦腈]、聚(原酸酯)、 聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、馬來酸酐-烷基乙烯醚共聚物、pluronic多元醇、白 蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、血纖蛋白、明膠、透明質(zhì)酸、低聚糖、糖 胺聚糖、硫酸多糖、它們的混合物和共聚物。
90.根據(jù)權(quán)利要求87的組合物，其中所述組分選自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明 膠、羥丙基-環(huán)糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
91.一種治療懷疑患有淀粉樣變性的哺乳動(dòng)物的方法，包括以足以實(shí)現(xiàn)所述治療的量 向哺乳動(dòng)物施用權(quán)利要求88的所述組合物。
92.一種包含權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
93.權(quán)利要求91的藥物組合物，其中所述藥學(xué)上可接受的載體起佐劑作用，用于增加 所述結(jié)合蛋白的吸收或分散。
94.權(quán)利要求92的藥物組合物，其中所述佐劑是透明質(zhì)酸酶。
95.權(quán)利要求91的藥物組合物，進(jìn)一步包含至少一種用于治療其中Aβ (1-42)球聚體 的存在是有害的病癥的附加治療劑。
96.權(quán)利要求95的方法，其中所述至少一種附加治療劑選自膽固醇酶抑制劑、TNF拮 抗劑、細(xì)胞因子拮抗劑、部分NMDA受體阻斷劑、糖胺聚糖模擬物、γ分泌酶抑制劑或別構(gòu)調(diào) 節(jié)劑、黃體生成素阻斷促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑、5-羥色胺5-ΗΤ1Α受體拮抗劑、螯合劑、 神經(jīng)元選擇性L-型鈣離子通道阻斷劑、免疫調(diào)節(jié)劑、淀粉樣蛋白原纖維形成抑制劑或淀粉 樣蛋白沉積抑制劑、PDE4抑制劑、組胺激動(dòng)劑、高級(jí)聚糖化終產(chǎn)物受體蛋白、PARP刺激物、 5-羥色胺6-受體拮抗劑、5-ΗΤ4受體激動(dòng)劑、人類固醇、增強(qiáng)神經(jīng)元代謝的葡萄糖攝取刺激 物、選擇性CBl拮抗劑、苯并二吖庚因受體部分激動(dòng)劑、淀粉樣蛋白β產(chǎn)生拮抗劑或抑制 劑、淀粉樣蛋白β沉積抑制劑、NNRa-7部分拮抗劑、治療靶向PDE4、RNA翻譯抑制劑、毒蕈 堿性激動(dòng)劑、神經(jīng)生長因子受體激動(dòng)劑、NGF受體激動(dòng)劑和基因治療調(diào)節(jié)劑。
97.一種降低Αβ (1-42)球聚體活性的方法，包括將Αβ (1-42)球聚體與權(quán)利要求1的 結(jié)合蛋白接觸，使得Αβ (1-42)球聚體活性降低。
98.一種降低患有其中Αβ (1-42)球聚體是有害的病癥的人個(gè)體中人Αβ (1-42)球聚體活性的方法，包括向該人個(gè)體施用權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，使得該人個(gè)體中的人 Αβ (1-42)球聚體活性降低。
99.一種通過以足以實(shí)現(xiàn)所述治療的量向個(gè)體施用權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，治療個(gè)體 的其中Αβ (1-42)球聚體活性是有害的疾病或病癥的方法。
100.權(quán)利要求99的方法，其中所述疾病或病癥選自甲抗胰蛋白酶缺乏癥、Cl-抑制劑 缺乏血管性水腫、抗凝血酶缺乏血栓栓塞性疾病、庫魯病、Creutzfeld-Jacob病/羊瘙癢 癥、牛綿狀腦病、Gerstmarm-Straussler-kheinker病、家族致命性失眠癥、亨廷頓病、脊髓 小腦性共濟(jì)失調(diào)、Machado-Joseph萎縮、齒狀核紅核蒼白球丘腦下核萎縮、額顳癡呆、鐮狀 細(xì)胞貧血、不穩(wěn)定性血紅蛋白包含體溶血、藥物性包含體溶血、帕金森氏病、全身性AL型淀 粉樣變性、小結(jié)節(jié)性AL淀粉樣變性、全身性AA淀粉樣變性、前列腺淀粉樣、血液透析淀粉樣 變性、遺傳性(冰島人)大腦血管病、亨廷頓病、家族性內(nèi)臟淀粉樣、家族性內(nèi)臟多神經(jīng)病、 家族性內(nèi)臟淀粉樣變性、老年全身性淀粉樣變性、家族性淀粉樣神經(jīng)病、家族性心臟淀粉 樣、阿爾茨海默病、唐氏綜合征、甲狀腺髓樣癌和2型糖尿病(T2DM)。
101.一種治療患有其中Αβ (1-42)球聚體是有害的病癥的患者的方法，包括在施用至 少一種第二藥劑之前、同時(shí)或之后施用權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白的步驟，其中所述至少一種 第二藥劑選自膽固醇酶抑制劑、部分NMDA受體阻斷劑、糖胺聚糖模擬物、TNF拮抗劑、細(xì)胞 因子拮抗劑、Y分泌酶抑制劑或別構(gòu)調(diào)節(jié)劑、黃體生成素阻斷促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑、 5-羥色胺5-ΗΤ1Α受體拮抗劑、螯合劑、神經(jīng)元選擇性L-型鈣離子通道阻斷劑、免疫調(diào)節(jié)劑、 淀粉樣蛋白原纖維形成抑制劑或淀粉樣蛋白沉積抑制劑、PDE4抑制劑、組胺激動(dòng)劑、高級(jí)聚 糖化終產(chǎn)物受體蛋白、PARP刺激物、5-羥色胺6-受體拮抗劑、5-ΗΤ4受體激動(dòng)劑、人類固醇、 增強(qiáng)神經(jīng)元代謝的葡萄糖攝取刺激物、選擇性CBl拮抗劑、苯并二吖庚因受體部分激動(dòng)劑、 淀粉樣蛋白β產(chǎn)生拮抗劑或抑制劑、淀粉樣蛋白β沉積抑制劑、NNRa-7部分拮抗劑、治 療靶向PDE4、RNA翻譯抑制劑、毒蕈堿性激動(dòng)劑、神經(jīng)生長因子受體激動(dòng)劑、NGF受體激動(dòng)劑 和基因治療調(diào)節(jié)劑。
102.權(quán)利要求101的方法，其中所述膽固醇酶抑制劑選自他克林、多奈哌齊、利斯的明 和加蘭他敏。
103.權(quán)利要求101的方法，其中所述部分NMDA受體阻斷劑是美金剛。
104.根據(jù)權(quán)利要求98的方法，其中所述施用于個(gè)體是通過至少一種選自如下的方式 進(jìn)行的腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、 小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、大腸內(nèi)、子宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜 內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、推注、 陰道、直腸、含服、舌下、鼻內(nèi)和透皮。
105.一種在懷疑患有阿爾茨海默病的患者中診斷該疾病的方法，包括步驟a.從所述患者分離生物樣品；b.在足以形成球聚體/結(jié)合蛋白復(fù)合物的時(shí)間和條件下，將所述生物樣品與權(quán)利要求 1的所述結(jié)合蛋白接觸；和c.檢測(cè)所述樣品中所述球聚體/結(jié)合蛋白復(fù)合物的存在，所述復(fù)合物的存在指示在所 述患者中診斷了阿爾茨海默病。
106.一種在懷疑患有阿爾茨海默病的患者中診斷該疾病的方法，包括步驟a.從所述患者分離生物樣品；b.在足以形成球聚體/結(jié)合蛋白復(fù)合物的時(shí)間和條件下，將所述生物樣品與權(quán)利要求 1的所述結(jié)合蛋白接觸；c.在足以使得所述綴合物與已結(jié)合的結(jié)合蛋白結(jié)合的時(shí)間和條件下，添加綴合物至所 得到的球聚體/結(jié)合蛋白復(fù)合物，其中所述綴合物包含連接有能產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)的信號(hào) 產(chǎn)生化合物的抗-結(jié)合蛋白抗體；和d.通過檢測(cè)所述信號(hào)產(chǎn)生化合物產(chǎn)生的信號(hào)，檢測(cè)其可存在于所述生物樣品中的所述 結(jié)合蛋白的存在，所述信號(hào)指示在所述患者中診斷了阿爾茨海默病。
全文摘要
本發(fā)明涉及結(jié)合蛋白以及特別是可例如在阿爾茨海默病和相關(guān)病癥的診斷、治療和預(yù)防中使用的人源化抗體。
文檔編號(hào)C07K16/18GK102076714SQ200880101482
公開日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2008年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月30日
發(fā)明者A·R·斯特里賓格, B·拉科維斯基, H·希倫, P·R·欣頓, P·凱勒, S·巴格霍恩, U·埃伯特, V·M·胡安 申請(qǐng)人:艾博特股份有限兩合公司, 雅培制藥有限公司