專(zhuān)利名稱：合成ib-meca的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)領(lǐng)域，更具體而言涉及A3腺苷受體激動(dòng)劑的合成。
背景技術(shù)：
腺苷是普遍存在的嘌呤核苷，其由代謝活性的受脅迫細(xì)胞胞外
分泌的。腺普是一種通過(guò)其結(jié)合到至少4類(lèi)G-蛋白-相關(guān)的細(xì)胞表 面受體(目前分成Ap A2a、 A化和A3 )的重要調(diào)節(jié)分子[Linden B. TIPS 15: 298-306 ( 1994 ); Poulsen S， 5zoorg Med CAem 6: 619-41 (1998 )]。
幾乎所有人體組織表達(dá)1類(lèi)或多類(lèi)腺苷受體，并且這以高密度 包4舌各種腫瘤細(xì)月包[Merighi S, et al. 乂尸/mrmaco/. 134: 1215-1226 (2001 ) ]。 At和A2受體活化引起導(dǎo)致^敫酶PKB/Akt和PKA活性 降4氐以及cAMP形成減少的G-蛋白4言號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；這抑制細(xì)胞生長(zhǎng) [Fishman P ， et al. O腳g匿21: 40604064 ( 2002 )]。
1-脫氧-1-(6-{[ (3-碘苯基)甲基]氨基》9H-噤呤-9-基)-iV-甲基 -(3-d-呋喃核糖羰酰胺(riboforanuronamide )(甲基1-[N6-( 3-石典千基) -腺噪呤-9-基]國(guó)卩"0畫(huà)依菠吹喃酰胺(ibofuronamide )， IB畫(huà)MECA; MW=510.29 Da)是一種對(duì)A3受體具有特異性亞微摩爾效力的口服 活性&良苦受體激動(dòng)劑(Ki = 0.47M)。在體內(nèi)，口服給藥的IB-MECA抑制同基因(黑素瘤，結(jié)腸癌) 和異種移才直(結(jié)腸癌和前列l(wèi)^癌)小鼠才莫型中的月中瘤形成[Fishman P. et al. ^w"謹(jǐn)cerL 23 ( 3A ) : 2077-2083 ( 2003 )]。
人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，向小鼠鼠口服給予IB-MECA經(jīng)由粒細(xì)胞集落 刺激因子(G-CSF)的增加而刺激嗜中性粒細(xì)胞的產(chǎn)生，并且相應(yīng) 地，IB-MECA防止細(xì)胞毒性-誘導(dǎo)的骨髓中毒性[Bar-Yehuda S, et al. 五x/ . //em^o/. 30: 1390—139 ( 2002 ) ]。 口月良IB-MECA還水卩制凈果小 鼠中結(jié)腸癌的進(jìn)展，并在該品系中的細(xì)胞毒性藥物療法之后刺激嗜 中性粒細(xì)胞恢復(fù)。
已經(jīng)積累相當(dāng)多的證據(jù)表明腺苷通過(guò)其受體也在限制炎癥中 起重要作用。腺苷的抗炎作用通過(guò)抑制TNF-a、白介素-l和白介素 -6的產(chǎn)生而被證實(shí)。腺苷涉及到介導(dǎo)若干種抗炎藥如阿司匹林、曱 氨蝶呤和柳氮磺吡咬(sulfasalazin )的效用已經(jīng)進(jìn)行了描述，支持 !^苷在調(diào)節(jié)炎癥過(guò)程中的作用。近來(lái)的研究表明，高選擇性的A3 Ai苷受體(A3AR )激動(dòng)劑IB-MECA在實(shí)-驗(yàn)動(dòng)物才莫型中抑制TNF-a 和MIP-la體外產(chǎn)生，同時(shí)防止月交原質(zhì)和佐劑i秀導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(AIA) 形成(WO2004/045627)。另外，已經(jīng)表明，AsAR在AIA大鼠的滑 液和外周血單核細(xì)胞(PBMNC )中高度表達(dá)，并且其水平在 IB-MECA治療后下調(diào)(WO 2004/038419)。
腺普A3受體選4奪性激動(dòng)劑，特別是腺。票P(pán)令化合物尤其是
IB-MECA的化學(xué)合成，首先由Jacobson K.等在美國(guó)專(zhuān)利5,773,423 中進(jìn)行了描述。
美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)/>開(kāi)No. 2006/0014944描述了用于合成核苦酸的 方法。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的第 一方面，本發(fā)明提供了 一種用于化學(xué)合成具有
下式(I)的IB-MECA的方法
<formula>formula see original document page 9</formula>(I)
才艮據(jù)本發(fā)明的該方法包括:
(i)使下式(II)的6-卣代嘌呤-9-核糖核苷:
<formula>formula see original document page 9</formula>(II)
其中X是選自Cl、 I或Br的鹵素，與二醇保護(hù)劑反應(yīng)，而獲得下 式(III)的二醇受4呆護(hù)的6-卣 。票呤X
(III)
其中所述二醇保護(hù)劑包含直鏈或支鏈的d-C6烷基基團(tuán)；
(ii)將式(III)的所述二醇受保護(hù)的6-卣代嘌呤中的伯醇氧 化成式(IV)的相應(yīng)羧酸衍生物
x
HO'
(IV).
(iii)使式(IV)的衍生物的羧酸基團(tuán)與甲胺反應(yīng)而獲得二醇 受保護(hù)的6-卣代嘌呤(III)的相應(yīng)曱基酰胺衍生物，該甲基酰胺衍 生物具有式(V):MeHN
(V)
(iv)用3-碘千胺取代所述甲基酰胺衍生物(V)的鹵素基團(tuán) 而形成具有式(VI)的二醇受保護(hù)的IB-MECA:
MeHN
(VI)
(v)去除二醇保護(hù)而獲得式(I)的所述IB-MECAc
本發(fā)明還提供了只要是通過(guò)本發(fā)明方法獲4尋的化學(xué)合成的 IB-MECA，以及包含所述化學(xué)合成的IB-MECA的藥物組合物。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明基于用于合成IB-MECA的有效方法的開(kāi)發(fā)，并且發(fā)現(xiàn)， 這種方法也適合IB-MECA的當(dāng)前良好制造生產(chǎn)(當(dāng)前良好制造品， current good manufacturing production ) ( cGMP )。注意到,IB-MECA 有時(shí)也由術(shù)i吾CF101指代。
因此，本文4皮露了一種用于化學(xué)合成具有下式(I)的IB-MECA 的方法
<formula>formula see original document page 12</formula>其中X是選自Cl、 I或Br的卣素，與二醇保護(hù)劑反應(yīng)，而獲得下 式(III)的二醇受保護(hù)的6-卣代噤呤
X
(III)
其中二醇保護(hù)劑包含直鏈或支鏈的d-C6烷基基團(tuán)；
(ii)將式(III)的所述二醇受保護(hù)的6-卣代嘌呤中的伯醇氧 化成式(IV)的相應(yīng)羧酸書(shū)于生物
x
HO'
(IV).
(iii)使式(IV)的衍生物的羧酸基團(tuán)與甲胺反應(yīng)，獲得二醇 受4呆護(hù)的6-鹵^嘌P令(III)的相應(yīng)甲基酰胺書(shū)f生物(methylamide derivative),該甲基酰胺衍生物具有式(V):O
MeHN
N-
O、 ,'
O
X
、N'
(V)
(iv)用3-碘千胺取代甲基酰胺衍生物(V)的鹵素基團(tuán)而形 成具有式(VI)的二醇受保護(hù)的IB-MECA:
MeHN
(VI)
(v)去除二醇^f呆護(hù)而獲4尋式(I)的所述IB-MECA'
在本/>開(kāi)內(nèi)容中，術(shù)i吾"<呆護(hù)劑(protecting reagent)"用于指 通過(guò)化學(xué)修飾官能團(tuán)以在后續(xù)化學(xué)反應(yīng)中獲得化學(xué)選4奪性而#皮引 入到分子中的任何化學(xué)部分。各種保護(hù)劑對(duì)有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域中的技術(shù)
14人員來(lái)說(shuō)是已知的。如本文中使用的，保護(hù)劑與底物分子的官能團(tuán) 發(fā)生反應(yīng)而形成受保護(hù)的底物。這種受保護(hù)的底物對(duì)于該受保護(hù)底 物將要經(jīng)受的反應(yīng)條件是穩(wěn)定的，之后保護(hù)劑在與底物中存在的其 它官能團(tuán)相容的條件下從受保護(hù)底物是可除去的以釋放出該官能
團(tuán)。1,2-二醇的羥基可以單個(gè)地被保護(hù)或可以 一起用環(huán)狀二醇保護(hù)
基團(tuán)被保護(hù)。合適的羥基保護(hù)基團(tuán)和二醇保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例可以在文
獻(xiàn)T.W. Greene et al. "_Pra/e"zVe Grow/w z> (9rgam'c i^wf/^W, 3rd Ed.， John Wiley and c Sons Inc., NY ( 1999)中才戈到，i亥文獻(xiàn)結(jié)合 于此作為參考。
根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容，保護(hù)劑包含d-Ce烷基部分。在本文中7>開(kāi)
的一個(gè)實(shí)施方式中，二醇官能團(tuán)的保護(hù)是在使包含所述二醇基團(tuán)的 分子與保護(hù)劑反應(yīng)時(shí)實(shí)現(xiàn)的，例如但不限于C3-Q二烷氧基烷烴，
由此在底物分子上形成保護(hù)性的環(huán)狀縮醛部分，易于采用本4頁(yè)域已
知的合適反應(yīng)條件除去。優(yōu)選，該二烷氧基烷烴是二曱氧基丙烷。
在另一實(shí)施方式中，二醇保護(hù)是在強(qiáng)酸和極性有機(jī)溶劑存在下 實(shí)現(xiàn)的。強(qiáng)酸可以選自但不限于p-TsOH (對(duì)曱苯石黃酸)、曱石黃酸、 苯磺酸、甲酸、鹽酸、硫酸。根據(jù)另一實(shí)施方式，極性有機(jī)溶劑可 以是水混溶性溶劑。對(duì)于極性有機(jī)溶劑的非限制性實(shí)例是丙酮。其 它可以包4舌乙酸乙酯、曱乙酮、氯4方、乙醇、甲醇等。
本文中4吏用的術(shù)語(yǔ)"官能團(tuán)"是指相對(duì)于其物理性質(zhì)和它可能 經(jīng)歷的與其它試劑發(fā)生的反應(yīng)，分子中負(fù)責(zé)其物理化學(xué)特性的原子 或原子團(tuán)。對(duì)于各種化合物，各種官能團(tuán)是已知的。根據(jù)一個(gè)實(shí)施 方式，官能團(tuán)是在呋喃環(huán)上存在的二醇基團(tuán)。在本文所公開(kāi)的一個(gè) 實(shí)施方式中，"二醇"官能團(tuán)是指連接到相鄰碳原子上的兩個(gè)羥基 基團(tuán)(-OH基團(tuán))。如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)"氧化劑"是指在反應(yīng)中獲得電子并且 其氧化數(shù)降低的任何物質(zhì)。在典型反應(yīng)中，氧化劑易于將氧原子轉(zhuǎn) 移到反應(yīng)物例如式(III)的二醇受保護(hù)的6-卣代噤呤，由此增加其 氧原子的含量。
在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，可以互換-使用的術(shù)語(yǔ)"耳又4戈反應(yīng)" 和"取代"，或"替代"是指在反應(yīng)物分子中的原子、部分、官能 團(tuán)或取^R基獨(dú)立地^皮一種反應(yīng)物分子中的另一原子、部分、官能團(tuán) 或取代基的任何代替。
在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，術(shù)語(yǔ)"親核取代"涉及這樣的反應(yīng)， 其中具有非共用電子對(duì)或帶負(fù)電的部分的富電子試劑(稱為親核
并替代一個(gè)基團(tuán)或原子(也稱為"離去基團(tuán)"，例如連接酰氯底物 的氯陰離子)。
在本文中公開(kāi)的另一實(shí)施方式中，式(III)的二醇受保護(hù)的6-卣代。票呤中的伯醇一皮氧化成對(duì)應(yīng)的羧酸衍生物的氧化是在催化用 量的氧化劑存在下實(shí)施的。
可以適用于將伯醇氧化成對(duì)應(yīng)羧酸的氧化劑的非限制性舉例 包4舌釕金屬(Ru)、 IU匕釕、三氧4匕4各、高石典臥支鈉、重4各l交4甲、高 錳酸鉀、氧化4艮、硝酸、氧化柏/氧、2，2,6,6-四甲基哌口定-1-氧基 (TEMPO )、亞氯酸鈉以及它們的任意組合。優(yōu)選地，所述氧化是 在催化用量的RuCl3和高-輿酸鈉存在下實(shí)施的。
式(IV)的羧酸書(shū)于生物向式(V)的相應(yīng)甲基酰胺書(shū)f生物的轉(zhuǎn) 化是通過(guò)在囟化試劑存在下的親核取代和隨后引入所選親核劑如 甲胺而實(shí)施的。在本/>開(kāi)內(nèi)容的上下文中才是到的術(shù)語(yǔ)"卣化試劑"，是指能夠 用卣素原子取代分子中的基團(tuán)或部分的試劑。在本7>開(kāi)內(nèi)容的上下 文中，卣化試劑取代羧酸部分上的羥基，由此使之更易于與曱胺親 核劑發(fā)生親核取代反應(yīng)，因?yàn)樗〈幕鶊F(tuán)是卣素離子，是已知的 弱路易斯堿，即易于被親核劑取代。卣化劑的非限制性實(shí)例包括亞
石克酰二氯(SOCl2 )、五氯化磷(PC15 )。優(yōu)選卣化試劑是亞石克酰二氯。
最后，去除呋喃環(huán)的二醇部分上的保護(hù)基團(tuán)。典型i也且不受限 于理-論，保護(hù)基團(tuán)的去除是還原性裂解反應(yīng)，是在強(qiáng)酸存在下進(jìn)4亍 的。二醇保護(hù)基團(tuán)的去除是在強(qiáng)酸和極性非質(zhì)子〉容劑存在下實(shí)施
的。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方式，強(qiáng)酸是HC1而溶劑是四氫呋喃(THF)。
使用，包括但不限于二曱基亞石風(fēng)(DMSO)、 二甲基甲酰胺(DMF)、 二氧六環(huán)和六曱基磷酰三胺(HMPA)。
在一個(gè)實(shí)施方式中，生產(chǎn)IB-MECA的方法才艮才居以下方案獲4尋
<formula>formula see original document page 17</formula>
6-氯嘌呤-9^核糖核苷 C10H11CIN4O4 分子量286.67
<formula>formula see original document page 17</formula>本發(fā)明方法的 一 個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于其也可用于大規(guī)P漠生產(chǎn)IB-MECA 。
在本/>開(kāi)內(nèi)容的上下文中，大規(guī)才莫生產(chǎn)是指從幾十克到幾千克 量的最終產(chǎn)品材沖牛。如具體實(shí)施例中所示，不需要中間純化的過(guò)程。 正如本領(lǐng)域^支術(shù)人員所理解的那樣，中間純化步驟導(dǎo)致最終產(chǎn)品收
率降低，因此一般而言是不適合大規(guī)模生產(chǎn)的。本發(fā)明的方法既適 合小規(guī)^莫生產(chǎn)IB-MECA,也適合大規(guī)才莫生產(chǎn)IB-MECA。
而且，已經(jīng)建立了，本發(fā)明的方法適合于IB-MECA的"良好 制造生產(chǎn)，，(Good Maww/a"wn'wg尸rat/wc"ow ) ( GMP )。眾戶斤周^口 ， GMP是指用于生產(chǎn)藥物物質(zhì)(也稱為活性藥學(xué)成分(API))和藥 物產(chǎn)品(在歐洲稱為醫(yī)藥產(chǎn)品)、醫(yī)療器才戒、體內(nèi)和體外i貪斷產(chǎn)品 以及食品的一套法^L、法摔:和準(zhǔn)則。在美國(guó)，GMP稱之為"cGMP" 或"現(xiàn)4亍良好命j造頭見(jiàn)范，，(ct/rre", Good Mawt(/^c,w〃'wg尸rac"ces )。 該術(shù)語(yǔ)對(duì)于藥物產(chǎn)品生產(chǎn)和質(zhì)量控制4全-驗(yàn)的控制和管理一皮全J求i人 可。
在本公開(kāi)內(nèi)容的另 一方面，提供了 一種只要是通過(guò)本發(fā)明任何 方法獲得的化學(xué)合成的式(I) IB-MECA。
在本公開(kāi)內(nèi)容的另一實(shí)施方式中，提供了一種包含只要是通過(guò) 本發(fā)明方法獲得的化學(xué)合成的式(I) IB-MECA的藥物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物可以用于治療或預(yù)防各種疾病。術(shù)語(yǔ)"治 療"等在本文中用來(lái)指獲得所需的藥理學(xué)和生理學(xué)效果。這種效果 可以是#4居預(yù)防或部分預(yù)防疾病、其癥狀或病癥的預(yù)防性作用和/ 或可以4艮據(jù)部分或完全治愈一種疾病、歸因于該疾病的病癥、癥狀 或有害影響的治療性作用。如本文中所用的，術(shù)語(yǔ)"治療"涵蓋了 哺乳動(dòng)物尤其是人類(lèi)的疾病的任何治療作用，并且包括(a)預(yù)防 疾病在主體中發(fā)生，該主體可能對(duì)該疾病預(yù)處置〗旦還沒(méi)有it斷患有該疾病，即， -使該疾病的臨床癥狀不會(huì)在可能對(duì)疾病進(jìn)4亍預(yù)處置但—
還沒(méi)有患有或顯示該疾病癥狀的主體中形成；(b)抑制疾病，即阻 止或降^f氐疾病或其臨床癥一大的形成；或(c)纟爰角罕疾病，即4吏疾病 和/或其癥狀或病癥消退。
通過(guò)本發(fā)明組合物可治療的疾病的非限制性舉例包括發(fā)炎，如 WO 2004/045627、 WO 2005/063246、 WO/2005/111053和WO 2006/059328中所一般描述的；癌癥，如WO2000/040251和美國(guó)臨 時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)No. 60/838,863中一般描述的；干目艮(dryeye)，如PCT 專(zhuān)矛J申i青No. IL2006/000130、 WO2006/011130禾口美國(guó)專(zhuān)矛J申i青No. 11/604,905中一4殳描述的；病毒復(fù)制，如WO02/055085中 一般描述 的；骨關(guān)節(jié)炎，如PCT專(zhuān)利申請(qǐng)No. IL2006/001374 —4殳描述的； 以及如WO 2006/048884中一 4殳描述的力。速骨質(zhì)吸收(bone resorption );以上所有申i青的內(nèi)容結(jié)合于此作為參考。
實(shí)施例
原料
6-氯噤呤-9-核糖(獲自Wilshire Technologies )
p-TsOH H20 (獲自Aldrich )
2,2-二曱氧基丙烷(獲自Aldrich )
氯化釕(III)水合物(獲自Aldrich )
3-碘千胺HC1 (獲自Apollo )
TBAI (獲自Aldrich)
CH3CN (獲自Fisher )
H2NCH3 (獲自Aldrich )
SOCl2 (獲自Aldrich )
NaI04 (獲自Aldrich )方法
實(shí)施例1: IB-MECA的合成
6-氯嘌呤-9-核糖縮丙S同(III )由商購(gòu)獲得的6-氯嘌呤-9-核糖(II) 通過(guò)用2,2-二甲氧基丙烷在催化作用的對(duì)甲苯磺酸存在下進(jìn)行處理 而制備。
核糖核苷(II)轉(zhuǎn)化成縮丙酮(III)在20 25。C下需要約48h 才能達(dá)到反應(yīng)完全。所用的操作以下進(jìn)行凝迷，并且涉及到用氫氧 化鈉水溶液淬滅反應(yīng)，濃縮混合物至干，4妄著混合物水溶液萃取到 二氯甲烷中。然后通過(guò)石克酸鎂干燥、過(guò)濾以除去干燥劑，通過(guò)溶劑 交4灸而進(jìn)入乙腈中以沉淀產(chǎn)物，通過(guò)過(guò)濾收集并在真空下干燥而分 離出縮丙酮(m)。通過(guò)濃縮母液和從乙腈中的料漿分離而獲得第 二l分縮丙酮(III)。 /人6-氯噤呤-9-核糖(II)的縮丙酮(III)的(兩 次)合并后的收率為85.7%。
以下是制備縮丙酮(III)所實(shí)施的合成步驟的棍迷(所有的試 劑、重量和體積當(dāng)量都是相對(duì)于所加入的6-氯-9-核糖核普(II)提 供的):
—式II的核并唐核苷(1 wt當(dāng)量)力。入到丙酉同(23體積)中并 開(kāi)始攪拌反應(yīng)混合物。
一然后向反應(yīng)混合物中加入TsOH ( 0.05當(dāng)量)和2，2-二曱 氧基丙烷(3.5當(dāng)量)。
_在20 25。C下反應(yīng)混合物攪拌48~96h,在此期間耳又樣通過(guò) HPLC4全測(cè)反應(yīng)是否完全。當(dāng)核糖核苷(II)不超過(guò)(NMT) 2%時(shí) 確定為完全條件。一然后通過(guò)加入IN NaOH ( 0.052當(dāng)量)并攪拌lh淬滅反應(yīng)。
一所得混合物然后釆用在30 40。C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行干燥。
一所得殘余物然后在CH2C12 ( 10體積)和水(10體積)之 間分配，攪拌15min并靜置。
一實(shí)施相分離，并且7K相用CH2C12 (2x3體積)萃耳又。
一合并有才幾萃耳又物，并在MgS04 (2.5wt當(dāng)量)上干燥。
一通過(guò)石圭藻土墊過(guò)濾萃取物的混合物而濾餅用CH2C12( 1.5體 積)沖洗。
—濾液通過(guò)30 40'C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干。
一使殘余物在CH3CN (2體積)中于55 65。C下成漿一牛lh。
一漿津+冷卻至0 10°C,然后在0 10。C下陳化至少lh。
一然后產(chǎn)物通過(guò)過(guò)濾并用冷CH3CN (0.5體積)沖洗所得的 濾々并而收集。
一產(chǎn)物(濾餅)在25 35。C下干燥而得到式(III)的縮丙酮(第 一批產(chǎn)物)。預(yù)計(jì)收率為59% 76%;純度為96.6 99.5%。
一為了提高收率，母液回收以獲得第二批產(chǎn)物
—由第二批產(chǎn)物將濾液濃縮至干。
一 4吏殘余物在CH3CN (1.5體積)中于55 65。C下成漿沖牛至 少30min。
—產(chǎn)物冷^卩至0 10°C,然后在0。C下陳^f匕至少lh。
一然后產(chǎn)物通過(guò)過(guò)濾并用冷CH3CN (0.03體積)沖洗后收集 產(chǎn)物(濾餅)。
—產(chǎn)物在25 35。C下干燥而得到式(III)的縮丙酮(第二批產(chǎn) 物)。子貞計(jì)收率為9% 14%;純度為96.2 97.8%。
由兩批產(chǎn)物的預(yù)期收率為73%~85%。/./ a// 煮y務(wù)的工sr說(shuō)'化
采用已經(jīng)建立的條件(以上概述中的步驟1 3 )，式(II)的核 糖核苷(30 g)與2，2-二甲氧基丙烷進(jìn)行反應(yīng)而以在丙酮中的溶液
形式獲得縮丙酮(III)?；旌衔镉?N氫氧化鈉水溶液淬滅中止反應(yīng)
(以上扭克述中步-驟4)并分成多個(gè)部分。 A^^為、離/,丙^^
以上的丙酮溶液通過(guò)在減壓條件下的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)而濃縮到9體 積，然后用水(27體積)稀釋并機(jī)械攪拌20min。物料溫度乂人23 。C升高到28。C,并7見(jiàn)察到一些沉淀?；旌衔锢鋮s至4。C,并在3 5 。C下陳化lh。可以觀察到作為精細(xì)結(jié)晶固體的物料沉淀。通過(guò)過(guò)濾 收集沉淀，用7K-丙酮(2:1, 1.5體積)沖洗并在真空(30in.Hg)室 溫下干燥而獲纟尋淺黃色固體狀的縮丙酮(III),收率68%而純度 98.8% ( AUC, HPLC)。
為了提高縮丙酮(III)的收率，其分離過(guò)程從更濃的丙酮/水混 合物實(shí)施。因此，丙西同;容液;農(nóng)縮到9體積、，3口上所述，然后用7jc(9 體積)稀釋并攪拌10min。混合物進(jìn)一步濃縮至12.5體積(估計(jì)丙 酮-水比率為2.6:1 ),并且產(chǎn)物沉淀成精細(xì)晶體物質(zhì)?；旌衔飻嚢枥?卻至5。C,陳4b30min,然后通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物，用7]C-丙酮(2:1, 1.5體積)沖洗并在室溫、真空下干燥而獲得淺黃色固體狀的縮丙 酮(III),收率80%而純度99.3% (AUC, HPLC)。采用該方法， 縮丙酮(III)的收率和純度都4尋以才是高。
丙酮溶液在減壓下濃縮至6體積，并乂人淬滅的反應(yīng)混合物沉淀 產(chǎn)物。需要乙腈(15體積)以溶解塊狀的固體?；旌衔锍吻?，濾液通過(guò)減壓下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至3體積。所得的漿料在60°C (浴溫)下攪拌 lh。然后冷卻至5。C并陳化lh。通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物，用水-丙酮(2:l， 1.5體積)沖洗并在室溫、真空下干燥而獲得淺黃色固體狀的縮丙 酮2，收率65%而純度98.5% ( AUC, HPLC )。
這些實(shí)馬全清楚表明，相比于丙酮，縮丙酮(III)在水和乙腈中 是相對(duì)不可溶的。通過(guò)從水/丙酮中分離縮丙酮(III)獲得了最佳結(jié) 果。釆用以上描述的改變，重復(fù)反應(yīng)，而由核并唐核香(II) (30g) 制備的縮丙酮(IIi:H欠率為79%(27.1g)，并且純度為99.54%(AUC, HPLC)。優(yōu)化的反應(yīng)條件容許去除液-液萃取步驟、兩次蒸發(fā)至干步 驟和對(duì)分離縮丙酮(III)的第二批產(chǎn)物的需要。工作程序的效率提 高顯著減少了用于分離縮丙酮(III)的周期。
2 斧/#^磁(7F ^工《
縮丙酮(in)通過(guò)采用在含水乙腈中的三氯化釕/高碘酸鈉體系 的氧^匕而轉(zhuǎn)^匕成羧酸(iv)。該反應(yīng)》文熱， 一旦加入高石典酸鈉就相 對(duì)迅速地從5 °c升溫到31 °c 。
以下是制備羧酸(IV)合成步驟的極迷
1. 式III的縮丙酮(lwt當(dāng)量)和乙腈(14.9體積)置于反應(yīng) 器中。
2. 另外，向反應(yīng)器中加入RuCl3 (O.Olwt， 1.6mol%)，然后
加入水(4體積)。
3. 然后，將四丁基硪化4妄(TBAI)加入到反應(yīng)器中(O.Olwt， 1 mol % )o
4. 所獲得的混合物冷卻至<5 。C 。5. 向冷卻的反應(yīng)';昆合物中以逐^f分的方式力cr入NaI04 ( 1.5 wt ， 2當(dāng)量)，維持混合物溫度<30匸。
6. 混合物在15 30。C下進(jìn)行攪拌，并通過(guò)TLC監(jiān)控反應(yīng)是否 完全。
7. 過(guò)濾反應(yīng)產(chǎn)物以除去無(wú)4幾物并用乙腈(6體積)漂洗濾餅。
8. 濾液于30 40。C (浴溫)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上下濃縮至干。在這 個(gè)階段，通過(guò)蒸發(fā)揮發(fā)性的Ru04對(duì)產(chǎn)物脫色。
9. 殘余物在THF ( 1.67體積)中于15 25。C下制成漿料并乂人S走 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器球形瓶轉(zhuǎn)移到干凈的反應(yīng)器中。
10. 向干凈的反應(yīng)器中加入THF ( 18.5體積)并4覺(jué)4半30min。
11. 然后步驟10的產(chǎn)物通過(guò)DE墊過(guò)濾，濾々并用THF ( 0.66體 積)漂洗。
12. 濾液通過(guò)在30 4(TC下^:轉(zhuǎn)蒸發(fā)而濃縮至干。
13. 殘余物在CH3CN ( 2.33體積)中于30 40°C下制成漿料直 至充分可以;危動(dòng)。
14. 步-驟13的產(chǎn)物然后通過(guò)于30 4(TC下;^走轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干。
15. 經(jīng)由旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器5求形瓶多份地加入IPAc (乙酸異丙酯) (17.5體積)，并將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到反應(yīng)器中。
16. 向反應(yīng)器中也加入水(5體積)并將反應(yīng)器中的混合物攪 拌2h。
17. 實(shí)施才目分離并用7jc (5體禾只)沖;先有才幾才目。
18. 合并水相并用IPAc ( 3體積)反萃取。
19. 合并有才幾相并在Na2S04 ( 1.67wt當(dāng)量)上干》喿lh。
20. 過(guò)濾產(chǎn)物以除去干燥劑并且濾液(濾餅)用IPAc ( 2體積)漂洗。21. 然后收集濾液并通過(guò)^走轉(zhuǎn)蒸發(fā)(30 40°C)至干。
22. 然后殘余物在真空爐于30 4(TC下干燥至恒重。固體碾成斗分末并繼續(xù)干夂?jiǎn)字敝梁阒亍ｎA(yù)期收率為85%,予貞期純度為92% 93%
(HPLC )。
27 ^于歲^ 的工/，說(shuō)'化
從物料中取出樣品，冷卻到6°C，形成非常稠的漿料。加入乙腈(4體積)，其溶解大多凄t固體物質(zhì)，并將混合物再次濃縮至4體積。在降溫到6。C后，并保持lh,樣品形成良好性能的漿料。通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物，用水沖洗并干燥而獲得灰白色固體狀酸3，純度95.3% (AUC, HPLC)。
反應(yīng)混合物的剩余物按照以上描述的過(guò)程進(jìn)行處理而獲得含7.0 wt % IPAc的羧酸(IV )，收率為77%。并將這與先前制備的85%收率的含7.4 wt % (IPAc)的縮丙酮(III)的cGMP結(jié)果進(jìn)行比較。
重復(fù)氧化反應(yīng)，并按照對(duì)以上樣品進(jìn)行的描述通過(guò)從7K/乙腈中結(jié)晶分離出羧酸(IV)。在這種情況下，反應(yīng)混合物在初始乙腈/水汽提(以上凝迷中的步驟8 )期間不會(huì)脫色，并且分離出的羧酸(IV )呈灰色固體，收率78%,純度97.9。/。(AUC, HPLC )。這種"非脫色"行為(暫時(shí)性地歸屬為在25。C下發(fā)生了氧化反應(yīng))，在制備IB-MECA先前cGMP物一牛期間^見(jiàn)察到并且不會(huì)影響所生產(chǎn)的API的質(zhì)量。Karl Fischer分析表明該物并+含有0.19%的水。
22 賴備哞^送放趟的控賴
縮丙酮(III)的氧化在加入高石典酸鈉之后伴隨著延遲》文熱。主
動(dòng)冷卻的中斷導(dǎo)致物辨-乂人5。C迅速升溫到30°C。這就產(chǎn)生了一個(gè)嚴(yán)重的安全隱患，尤其是到時(shí)候一旦放大規(guī)模到固定生產(chǎn)設(shè)備是更是為了更好地控制》文熱，實(shí)行將底物(縮丙酮(III))反加到三
氯化釕和高碘酸鈉的混合物中?？s丙酮(III) (5g)在作為在乙腈-水中的卩容液在2h內(nèi)力口入到在30 35 °C 7jc中的氧^f匕劑混合物中。4安照通常添加才莫式的定期7見(jiàn)察，16h后反應(yīng)完全。采用改進(jìn)的工藝方法條件^f旦冷卻到20 。C代替5。C，酸3為白色固體，收率62% ，純度99.3%
(AUC, HPLC )。第二批物料通過(guò)進(jìn)一步發(fā)生結(jié)晶的母液過(guò)濾分離，用水沖洗并干燥，而獲得灰白色固體狀的酸3 ，收率19%,純度98.2%
(AUC, HPLC)。兩批酸3合并收率為81%。兩批產(chǎn)物都適合在下一步驟中使用(即制備IB-MECA縮丙酮(VI))。
23凌^ OT^的務(wù)伴的說(shuō)'化
采用將底物反加入氧化混合物中而使縮丙酮(III) ( 25g )轉(zhuǎn)化成羧酉菱(IV)。當(dāng)fU匕反應(yīng)完成時(shí)，過(guò)濾物津+以除去無(wú)才幾雜質(zhì)，濾餅用乙腈(6體積)沖洗。濾液用另外的水(3體積)稀釋而得到羧酸(IV )在乙腈(約21體積)和水(約7體積)中的溶液。該物料在26 36。C下真空蒸餾而濃縮至8體積。在這時(shí)估計(jì)乙腈-水比率分別為40:60。將該物料冷卻至5 10。C以:秀導(dǎo)結(jié)晶，并陳化lh。產(chǎn)物通過(guò)過(guò)濾收集，用水沖洗并干燥，而獲得白色固體狀的酸3，收率75%，純度99.75% ( AUC, HPLC )。
該優(yōu)4b的工藝消除了對(duì)于4吏用THF和IPAc的萃耳又工作、 一個(gè)過(guò)濾步驟和四個(gè)蒸發(fā)至干的需要，分離羧酸(IV) 的周期顯著縮短，并且產(chǎn)物也以易于處理的形式分離出來(lái)。當(dāng)進(jìn)行IPAc含量修正時(shí)，對(duì)于現(xiàn)有和新開(kāi)發(fā)的過(guò)程，這些收率是相當(dāng)?shù)?分別是77%對(duì)75%)，而羧酸(IV )通過(guò)乂人乙腈-水中結(jié)晶以更高純度(97.9%~99.7% )分離。3.斧/務(wù)/5-Af五C4裙丙薪f「/,時(shí)工2T
羧酸(IV) 4姿照以下一既述的三個(gè)步驟轉(zhuǎn)化成IB-MECA縮丙酮(VI)。羧酸(IV)通過(guò)在乙腈中用亞石克酰二氯處理首先轉(zhuǎn)化成酰氯，然后通過(guò)在二異丙基乙胺(DIPEA)存在下與曱胺反應(yīng)而生成酰胺(V)。酰胺(V)與3-石典千胺鹽酸鹽偶合而得到IB-MECA縮丙酉同(VI)。中間體酰氯和酰胺(V)不需要進(jìn)4亍分離。
3.7 3-《4卡應(yīng)_^凝_#的遂^
3-石典千胺鹽酸鹽的質(zhì)量顯著地影響合成結(jié)果。具體而言，3-溴節(jié)胺鹽酸鹽，是存在于3-碘千胺鹽酸鹽中的雜質(zhì)，和由此衍生的雜質(zhì)，已知將會(huì)持續(xù)到包括API的下游處理期間。對(duì)于在3-碘芐胺鹽酸鹽中確立3-溴節(jié)胺鹽酸鹽^).5%的上限，不影響成功制備IB-MECA。由于3-碘千胺鹽酸鹽的合適商業(yè)供應(yīng)對(duì)于優(yōu)化工而言是不可利用的，所以需要研究純〗匕方法。
采用在合成IB-MECA中使用的溶劑對(duì)3-碘千胺鹽酸鹽進(jìn)行溶解性研究，其結(jié)果概述于下表l中。從質(zhì)子溶劑中重結(jié)晶的胺鹽酸鹽但在非質(zhì)子有機(jī)溶劑中是不溶性的。在非質(zhì)子有機(jī)溶劑中熱(回流)漿料期間，沒(méi)有觀察到純度4是高。
表1 -對(duì)3-硪節(jié)胺鹽酸鹽的'溶解性研究
溶劑；容劑體積、2rc下的^于為 回;克下的^亍為
1 MeOH 1不溶 可溶
2 MeCN 5不溶 不溶
3 IPAc 10 不溶 不;容
4 IPA 10 不溶 可溶
5 THF 10 不溶 不溶
注釋
重結(jié)晶，純度未提高熱漿沖+沒(méi)有提高純度熱漿津牛沒(méi)有提高純度重結(jié)晶，純度未纟是高熱漿料沒(méi)有提高純度
/人水(4體積)中重結(jié)晶將3-石典千胺鹽酸鹽中的3-溴節(jié)胺鹽酸鹽含量降低到可接受的水平。為了產(chǎn)生用于保證計(jì)劃運(yùn)行中的供應(yīng)，3-石典千胺鹽酸鹽(150g, ex. Apin)/人水中重結(jié)晶，收率78.6%。3-溴千胺鹽酉吏鹽;農(nóng)度由0.92%卩爭(zhēng){氐到0.38%。
釆用修改后的條件制備的一批羧酸(IV),利用以下所凝迷的過(guò)程轉(zhuǎn)化成IB-MECA縮丙酮(VI)。所有的試劑、重量和體積當(dāng)量都是相對(duì)于加入的羧酸(IV)提供的。
1. 式(IV )羧酸書(shū)亍生物(lwt當(dāng)量)與乙腈(10體積)混合而形成濃厚漿并+，并在20 25'C下4覺(jué)纟半該濃厚漿泮牛；
2. 向攪拌的料漿中加入卣化劑，即亞硫酰二氯(1.6當(dāng)量)，并且混合物至少攪拌lh以形成溶液；
3. 通過(guò)以IPAc-MeOH ( 10:1 )洗脫的TLC監(jiān)控反應(yīng)是否完全。
4. 反應(yīng)溶液通過(guò)在2CTC (浴溫)S走轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮成油狀物(以除去亞-危酰二氯)；
—力口入乙月青(0.5體積0并3奪該-混合物再次;農(nóng)縮成油習(xí)犬4勿。i亥油習(xí)犬物中含有;農(nóng)酰氯。
5. 酰氯再溶于乙腈U0.4體積)并冷卻至〈2。C同時(shí)進(jìn)行攪拌。
6. 加入曱胺(2M的THF-容液，1.05當(dāng)量)，并且混合物溫度維持〈5。C。在反應(yīng)器中觀察到白色沉淀(懷疑是曱胺鹽酸鹽)。
7. 產(chǎn)物在<5匸下攪^半至少15min。
8. 然后加入DIPEA ( 1.5當(dāng)量)，并將該體系的溫度維持在<5。C下。
9. 主動(dòng)冷卻是間斷的，并且允許反應(yīng)混合物在約2h內(nèi)升溫到20°C。
10. 反應(yīng)通過(guò)用IPAc-MeOH ( 10:1 )洗脫的TLC監(jiān)控。當(dāng)反應(yīng)完全時(shí)，獲得酰胺(V)的MeCN/THF溶液。11. 向酰胺(V)的溶液中加入3-石典千胺鹽酸鹽(1.35當(dāng)量)，隨后加入DIPEA (5.0當(dāng)量)。
12. 混合物加熱到70。C,并通過(guò)HPLC監(jiān)控反應(yīng)是否完成。預(yù)計(jì)反應(yīng)時(shí)間為14~16h，并且反應(yīng)完完成的條件是剩余酰胺(V)
13. 當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，產(chǎn)物冷卻到〈40'C，并通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮成油狀物。在此時(shí)尤其應(yīng)避免起泡。
14. 然后將殘余物溶解于IPAc ( 8體積)。
15. 向溶解的殘余物中加入々包和NaHC03水溶液(7體積)，混合物4覺(jué)4半至少30min。
16. 然后停止攪拌，靜置，并進(jìn)行相分離。
17. 有才幾相用水(4體積)沖洗。
18. 合并的水相用IPAc (2x3.4體積)反萃耳又。
19. 合并有才幾萃耳又物，并通過(guò)S走專(zhuān)爭(zhēng)蒸發(fā);農(nóng)縮成殘余物。
20. 然后產(chǎn)物在MeOH (4體積)中調(diào)成漿津+，隨后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮成殘余物。
21. 然后向步驟20的產(chǎn)物中加入MeOH (4體積)，并在攪4半下加熱至溶解(約65°C )。
22. 步驟21的產(chǎn)物然后冷卻至〈30。C由誘導(dǎo)結(jié)晶。
23. 結(jié)晶產(chǎn)物然后通過(guò)過(guò)濾收集，而濾々并用冷(13°C )的MeOH(1.8體積)沖洗。
24. 濾餅在30 40。C真空下干燥而獲得IB-MECA縮丙酮(VI )。
25. 根據(jù)需要，重復(fù)從MeOh的重結(jié)晶和干燥以獲得本說(shuō)明書(shū)中的IB-MECA縮丙酮(VI )。預(yù)期收率48%。乂人曱醇中單次重結(jié)晶后，分離出呈白色固體狀的IB-MECA縮丙酮(VI),收率80%,純度99.52% (AUC， HPLC )。所7見(jiàn)察到來(lái)源于3-溴千胺鹽酸鹽的雜質(zhì)濃度為0.21% (規(guī)定^0.5%)，并且所有其它雜質(zhì)<0.1%。這些結(jié)果證實(shí)，用于制備縮丙酮(III)和羧酸(IV )的 丈進(jìn)生產(chǎn)的物沖+適用于制備IB-MECA縮丙酮(VI )。它們也間接表明，使用更高質(zhì)量的酸3 (98.2% 99.3%的純度，先前是92% 93%),無(wú)需多次重結(jié)晶t尤能制備非常高純度的IB-MECA縮丙酉同(VI )。 HPLC凄t才居也表明，酰胺(V )能夠在IB-MECA縮丙酮(VI)分離期間乂人高達(dá)2.3%的IPC濃縮液中成功地吹洗出。
4 斧/務(wù)瓜7^C4 (7, ^工《
IB-MECA (I)利用鹽酸水;容'液通過(guò)IB-MECA縮丙酮(VI)去
保護(hù)而制備。
以上IB-MECA縮丙酮(VI)物一+采用以下y潔迷的方法步驟(步驟1 10 )去保護(hù)，而獲得白色固體狀的IB-MCA (I )，收率90%，純度99.67% (AUC, HPLC)。來(lái)源于3-溴千胺鹽酸鹽的雜質(zhì)濃度為0.18%，并且沒(méi)有濃度>0.1%的其它雜質(zhì)。
1. 向反應(yīng)器中加入IB-MECA縮丙酮(VI)( 1 wt當(dāng)量)和THF(5體積)。
2. 開(kāi)始攪拌，接著加入1N鹽酸(5體積)。混合物從16。C升溫至25 C o
3. 然后，混合物主動(dòng)加熱至50°C,并通過(guò)HPLC監(jiān)控反應(yīng)是否完全。反應(yīng)完全的條件是剩余縮丙酮《1.5%。預(yù)期反應(yīng)時(shí)間為8h。如果8h后反應(yīng)不完全，則將物料溫度降至40°C,以避免生成雜質(zhì)。
4. 產(chǎn)物在4(TC下過(guò)濾。5. 然后，過(guò)濾的產(chǎn)物冷卻到至少15°C，然后在維持溫度在 10 25。C的々包和NaHC03 (15體積)中淬滅。與磁j妄觸則產(chǎn)物發(fā)生 沉淀。
6. 混合物在10 25。C下攪拌至少12h。
7. 通過(guò)過(guò)濾收集固體并將濾餅用H20 ( 5x0.95體積)沖洗。
8. 沖洗后的產(chǎn)物然后在甲醇一K (9:1， 9.9體積、)中于50。C下 調(diào)成漿#+至少30min，然后冷卻至15 25°C 。
9. 通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物，并將濾餅用甲醇-水(9:1, 0.27體積)沖洗。
10. 產(chǎn)物在30 40。C下真空干燥而獲得IB-MECA (I),預(yù)期收 率為81%。
11. 產(chǎn)物再在水(4.14體積)中在35 45。C下調(diào)成漿料至少3h。
12. 再次調(diào)成漿津+的產(chǎn)物然后冷卻到25°C,然后通過(guò)過(guò)濾收集。
13. 濾々并用7jc (2xl體積O沖洗。
14. 濾餅然后在55-65。C下干燥而獲得IB-MECA(1)。預(yù)期回 收率78%。
實(shí)施例2: IB-MECA( I ) ;^^L^^成的^t^"^iiE( proof-of-concept )
為了 i正實(shí)對(duì)于乂人6-氯噤呤-9-核糖核苷(II)合成IB-MECA (I) 而開(kāi)發(fā)的優(yōu)化條件，實(shí)施以上過(guò)程以制備50glB-MECA(1)。因此， 利用以下描述的方法將6-氯嘌呤-9-核糖核苷(II)轉(zhuǎn)化成縮丙酮 (III)。所有的試劑、重量和體積當(dāng)量都是相對(duì)于加入的核糖核苷 提供的。
斜備裙丙銜a//,的說(shuō)'化才法1. 向反應(yīng)器中加入核;瞎核香(II) ( 1 Wt當(dāng)量)，隨后加入丙酮
(23體積)并攪拌。
2. 然后，向反應(yīng)器中加入對(duì)曱苯磺酸(TsOH) (0.05當(dāng)量) 并隨后加入2，2-二甲氧基丙烷(3.5當(dāng)量)。
3. 混合物在20 25。C下攪拌48 96h并通過(guò)HPLC 4全-驗(yàn)反應(yīng)是 否完全。反應(yīng)完全的條件是核糖核香NMT2%。
4. 通過(guò)加入1 NNaOH (0.052當(dāng)量)并攪拌lh4吏反應(yīng)淬滅。
5. 產(chǎn)物通過(guò)^走轉(zhuǎn)蒸發(fā)(30 40°C)而濃縮至9體積。
6. 然后加入水(9體積)。
7. 然后通過(guò)^走轉(zhuǎn)蒸發(fā)(30~40°C )將產(chǎn)物濃縮至12.5體積。
8. 混合物冷卻至0 5。C;并在0 5。C下維持至少lh。
9. 通過(guò)吸濾收集產(chǎn)物，接著用冷(0 5°C ) 1120/丙酮(2:1, 1.5 體積)漂洗。
10. 然后產(chǎn)物在40。C下干燥而獲得縮丙酮(III)。預(yù)期收率為
79%。
作為淡黃色晶體分離出縮丙酮(III)， /人6-氯嘌呤-9-核并唐核苷 (II)的4欠率為82.2% (153.1 g)，純度99.58% (AUC， HPLC )。 反應(yīng)在63h后(以上棍迷中的步驟3 )反應(yīng)完全，并在步驟7結(jié)束 后保持過(guò)夜(14h)。物料溫度在即將進(jìn)行步驟9 (以上凝迷中)的 過(guò)濾之前為2°C，并且干燥時(shí)間為17h。在物津牛運(yùn)行過(guò)程中沒(méi)有遇 到處理問(wèn)題?？s丙酮(III) (147.2 g)采用以下描述的方法繼續(xù)反 應(yīng)并轉(zhuǎn)4匕成酸3。所有的i式劑、重量和體積當(dāng)量都是相對(duì)于加入的 縮丙酮(III) ^是出的。
斜4^歲^ 的說(shuō)'化才法1. 向反應(yīng)器中加入NaK)4 (2.30當(dāng)量)、TBAI (1 mol %)和 水(2體積)并攪拌以形成漿料。
2. 力口入RuCl3 ( 1.6 mol % )并用7jc ( l體積)清洗稱重容器。
3. 反應(yīng)混合物攪拌下加熱到30°C。
4. 縮丙酮(III)作為在乙腈(12體積)和水(1體積)中的溶 液裝入到反應(yīng)混合物中，并將溫度維持在30~35°C。該加料過(guò)程預(yù) 期將會(huì)花費(fèi)2h才能完成。當(dāng)完成加料后，盛裝縮丙酮(III)溶液 的容器用乙腈(3體積)漂洗并加入到產(chǎn)物中。
5. 混合物在30 35。C下冷卻，并通過(guò)TLC監(jiān)控反應(yīng)是否完全。 予貞期反應(yīng)時(shí)間16h。
6. 產(chǎn)物在20 25。C下冷卻并過(guò)濾以除去無(wú)才幾雜質(zhì)。
7. 反應(yīng)器和濾餅用乙腈(6體積)漂洗，而濾液用水(3體積)稀釋。
8. 濾液通過(guò)25 35。C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)而濃縮至8體積。在這個(gè)階段 通過(guò)蒸發(fā)揮發(fā)性Ru04使產(chǎn)物脫色。
9. 產(chǎn)物冷卻至5 10。C以i秀導(dǎo)結(jié)晶，并陳化至少lh。
10. 然后通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物，濾餅用水(3x3體積)沖洗。
11. 產(chǎn)物在35 45。C下真空干燥而獲得酸(IV)。預(yù)期收率為
75%。
縮丙酮(III)在3h內(nèi)加料到反應(yīng)混合物內(nèi)并達(dá)到最大物料溫 度36°C 。 14h后氧化反應(yīng)完成(TLC分析)。在冷卻到20~25°C (以 上概述中步驟6)后，物料意想不到地顏色變深，由4登色變成綠色， 表明釕物種的氧化態(tài)從Ru^變成了 Ru111。而且，物料在降低乙腈濃 度的濃縮期間并不脫色。最后分離出的酸(IV)呈深綠色固體，收 率63% (96.2g)而純度98.9% ( AUC， HPLC )。由于先前的研究已 經(jīng)表明，產(chǎn)生雜質(zhì)的顏色在下游處理期間除凈，因jt匕產(chǎn)物無(wú)需進(jìn)一步純化就可以繼續(xù)向前反應(yīng)。羧酸(IV)(75g)采用實(shí)施例1中描 述的方法轉(zhuǎn)4匕成IB-MECA縮丙酮(VI )。
為了制備酰氯的氯化反應(yīng)，在70min后完成(實(shí)施例1中扭克述 的步驟3 ),而物料在濃縮(實(shí)施例1中的步驟4和5 )期間大量起 泡。在16min內(nèi)向酰氯;:容液加入甲基胺(2M的THF溶液)，并且 最大物料溫度為5。C。酰氯向酰胺(V)的轉(zhuǎn)化在2h之后完成，在 此期間物料乂人5。C升溫到17°C (實(shí)施例1中的步驟IO和11 )。 千胺鹽酸鹽與酰胺(V)的偶耳關(guān)反應(yīng)需要16h以達(dá)到反應(yīng)完全(實(shí) 施例1的步驟13)。在萃取過(guò)程期間，觀察到大量的固體物質(zhì)。在 步驟17 (實(shí)施例1中)，過(guò)量的NaHC03會(huì)/人混合物中沉淀出來(lái)， 并且可以通過(guò)在步驟18 (實(shí)施例1中)期間加入更多的水克月良。產(chǎn) 物沉淀，并需要加入水(5體積)和IPAc( 5體積)以再;容解IB-MECA 縮丙酮(VI)。在步驟18 (實(shí)施例1中)結(jié)束時(shí)，水層的HPLC分 析表明，IB-MECA縮丙酉同(VI)并未以顯著濃度存在。這才羊，省 略了用IPAc反萃取水相(實(shí)施例1中的步驟19)。最后分離出的 IB-MECA縮丙酮(VI)呈淺纟錄色固體，收率為75.2% (91.6g)而 純度為99.79%。在3-碘千胺鹽酸鹽中以0.38%的濃度存在的"溴-雜質(zhì)"，觀察到的相對(duì)濃度為0.21%。在分離過(guò)程結(jié)束時(shí)，物料顯著 脫色但是沒(méi)有完全脫色(加入的羧酸(IV)為深綠色)。
IB-MECA縮丙酮(VI) (85 g)釆用實(shí)施例1中概述的方法去 保護(hù)，而獲得白色固體狀的IB-MECA (I),收率84.5% ( 67 g )而 純度99.83%?？s丙酮裂解在9.5h后完成(實(shí)施例1的步-驟3 ),并 且產(chǎn)物在甲醇-水調(diào)成漿料之后的收集期間脫色(實(shí)施例1中的步驟 9)。在水中成漿料以除去曱醇之后，非常緩慢地過(guò)濾產(chǎn)物并4艮困難 地轉(zhuǎn)移到干燥器中。在從曱醇-水中進(jìn)行其初始分離和從水中在形成 漿斗+后之間，IB-MECA純度;殳有變4匕。實(shí)施例3: IB-MECA ( I )的cGMP生產(chǎn)
6-瘋?cè)鹿?9-甴—潛^"芬/,丙4^的cGM尸
向帶有適度攪拌的200L反應(yīng)器中加入丙酮(115L, 23體積) 和6-氯。票呤-9-核糖核苷(5.0kg, 17.4 mol, 1.0 wt/1.0體積)。隨后， 力口入/ -TsOH.H20 ( 166 g， 0.88 mol， 0.05當(dāng)量，0.033 wt)禾口 2,2-二甲氧基丙烷(7.6L, 62mol, 3.54當(dāng)量，1.52體積)，并在室溫 下攪拌所得的黃色懸浮液。45h后，對(duì)所得的黃綠色溶液取樣并通 過(guò)HPLC進(jìn)行分析，表明經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化起始原料以0.42% (總純度96.9 面積％)存在。物津+通過(guò)加入1NNaOH(900mL， 0.90 mol, 0.05當(dāng) 量，0.18體積)進(jìn)4亍中和。該加入才喿作花約2min的時(shí)間；最終的 pH為7。物4'+4覺(jué)4半lh。所得的渾濁黃色混合物在減壓下于35 ± 5 。C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮8h的時(shí)間，直至達(dá)到體積為45L ( 9.0體積)。 濃縮液在2 8 °C的N2下儲(chǔ)存。
濃縮液轉(zhuǎn)移到200-L的反應(yīng)器并開(kāi)始攪拌。加入水(45 L， 9.0 體積)，并且所得稀懸浮液攪拌55min。物料逐份地轉(zhuǎn)移到組裝到配 備用于真空蒸餾的加熱套中的72-L反應(yīng)器中。在35 士5。C下開(kāi)始蒸 餾并繼續(xù)直至物料體積達(dá)到62L ( 12.4體積)(蒸餾才喿作實(shí)施2天， 并且包4舌一旦完成后在^3(TC下陳^ft的15h)。物辨—t移到組裝在冷 卻浴中的72-L反應(yīng)器中。物料在41/2 h的時(shí)間內(nèi)驟卩令直至溫度^5 。C ， 并攪拌另外lh。固體采用Sharkskin濾紙過(guò)濾，濾々并用冷的2:1水/ 丙酮(7.5 L, 1.5體積)漂洗(總過(guò)濾時(shí)間約lh40min,并且包括 用氮?dú)獯祾邽V餅以助其干燥)。濕固體(5.99 kg)轉(zhuǎn)移到6個(gè)玻璃 干燥用托盤(pán)中，并在40士5。C烘箱中真空下進(jìn)行干燥。干燥47h后， 物料在N2下包裝在4-mil LDPE (雙層袋)中并儲(chǔ)存在纖維制圓筒 中。這4尋到6-氯噤p令-9-沖亥灃唐4亥普縮丙酉同(4505 g, 79%)。向支撐在冷卻浴中的72-L反應(yīng)器中，裝入CH3CN (37L， 14.8 體積)。在室溫下開(kāi)始攪拌。向其中加入6-氯噤呤縮丙酮(2234g和 266 g,總i十=2500 g= 1.0 wt= 1.0體積"7.65 mol )、 ！U匕4了 (III) 7K合4勿(25 g， 0.121 mol, 0.016當(dāng)量，O.OlOwt)、 7jc ( 10 L， 4.0 體積O禾口 TBAI (25 g, 0.068 mol， 0.009當(dāng)量，0.010 wt)。戶斤4尋〉'昆 合物采用;水7jc冷卻浴在lh內(nèi)冷卻至5°C,并在2min內(nèi)加入NaI04
(3750g, 17.5 mol， 2.3當(dāng)量，1.5wt),同時(shí)維持內(nèi)吾卩物^^顯度<10 。C 。冰/溶劑浴在50min后倒空，而物一+允i午升溫至室溫(物 顯度 在2h的時(shí)間內(nèi)達(dá)到最大33。C,采用冷水浴防止物沖牛溫度超過(guò)該溫 度)。所得的稠褐色-橙色懸浮液在15 30。C下攪拌21h。通過(guò)TLC
(IPAc， UV才企測(cè))分析表明，6-氯噤p令-9-核糖核普縮丙酮消失。 黃色懸浮液(21。C )過(guò)濾30min直至液滴停止滴落；用CH3CN (15 L， 6.0體積)漂洗反應(yīng)器和濾々并。濾液分三份在帶有i殳置為40± 5 匸的水浴的i走轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮llh。
向72-L反應(yīng)器中裝入所得的殘余物(7.7kg)和純水(22.5L, 9體積)。室溫下開(kāi)始攪拌。lh之后，物料(23 。C)進(jìn)行過(guò)濾，反 應(yīng)器和濾餅用純水(7.5 L, 3體積)沖洗。濕濾餅(4.7 kg )轉(zhuǎn)移到 6個(gè)干燥用托盤(pán)中，并在4(TC烘箱中真空干燥6天。IPC KF (賴L 定^殳定在<0.6% )和& NMR ( DMSO-A )表明是可接受的物質(zhì)。 這獲得6-氯噤呤酸(2145 g， 82%),將其在N2下^f諸存在帶有特氟 隆內(nèi)襯的塞子的玻璃瓶中。
向72-L反應(yīng)器中裝入6-氯。票呤酸[2600g， 7.63 mol， 1.0wt=1.0 體積],采用CH3CN (31.7L, 12.2體積)以實(shí)施這個(gè)轉(zhuǎn)移過(guò)程，并 開(kāi)始攪4半。向稠的灰色漿料中加入亞石克酰二氯(889mL, 12.2 mol，1.60當(dāng)量，0.342體積)，混合物在〈30。C下4覺(jué)拌4h。向MeOH( 2 mL, HPLC級(jí)，F(xiàn)isher)中加入約0.5mL所得深色溶液并通過(guò)TLC ( UV 才企測(cè)，IPAc/MeOH， 10:1 )分沖斤表明原#+消失。在6.5h內(nèi)，物泮牛溶 液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上真空下濃縮直至蒸餾停止(水浴初始設(shè)置為25 土5。C并對(duì)此逐漸升高到35 ±5°C );用CH3CN ( 825 mL， 0.32體積) 漂洗反應(yīng)器。關(guān)閉水浴熱源，并將CH3CN (7.6L, 2.9體積)力口入 到5求形瓶的殘余物中。無(wú)需真空，球形瓶旋轉(zhuǎn)直至物料開(kāi)始完全流 動(dòng)，然后轉(zhuǎn)移到位于鋼管內(nèi)的72-L反應(yīng)器中。開(kāi)始攪拌并加入另 外的CH3CN ( 25.5 L， 9.8體積)。物料采用冰水/溶劑浴冷卻直至內(nèi) 部物一+溫度為〈2。C (這將花lh);然后經(jīng)由5-L加津+漏斗在52min 的時(shí)間內(nèi)加入2M曱胺的THF 〉容液(4004mL, 8.01 mol, 1.05當(dāng) 量，1.54體積)，同時(shí)維持內(nèi)部物料溫度〈7。C。隨后，經(jīng)由5-L力口 津牛漏斗在lh的時(shí)間內(nèi)加入DIPEA ( 1976mL, 11.3 mol， 1.5當(dāng)量， 0.76體積)；在〈7。C下繼續(xù)攪拌最低lh，冷卻浴排干，繼續(xù)攪拌llh， 同時(shí)物津+允許升溫至室溫(物津牛pH 9)。典型地，用于這些才喿作的 物泮+最低溫度為0。C。通過(guò)TLC(UV才企測(cè)，IPAc/MeOH， 10:1 )分 析表明6-氯。票呤^/酰氯消失，而形成一種更高流動(dòng)的主產(chǎn)物。物料 轉(zhuǎn)移到另 一安裝于加熱套中且配備有水冷冷凝器的72-L反應(yīng)器中； 采用CH3CN(1.3L， 0.5體積)輔助該轉(zhuǎn)移。開(kāi)始攪:拌，并力口入3-石典千胺'HC1 (2777g， 10,30mol, 1.35當(dāng)量，1.068 wt)。卩逭后，力口 入DIPEA (6656 mL， 38 mol, 5.0當(dāng)量，2.56體積)，并將混合物 在70 士5。C下加熱25h。通過(guò)HPLC分析表明，通過(guò)轉(zhuǎn)化剩余0.70% 的6-氯嘌呤酰胺，由此正好滿足^0.70%的^見(jiàn)定。關(guān)閉熱源，并允許 物料冷卻過(guò)夜。在8h的時(shí)間內(nèi)，物料在40士5。C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上 真空濃縮直至蒸餾停止；采用CH3CN ( 1650mL， 0.63體積)漂洗 反應(yīng)器。在IPAc (5.36 L， 2.1體積)輔助下，殘余物轉(zhuǎn)移到72-L 反應(yīng)器中。向反應(yīng)器內(nèi)加入另外的IPAc (20.4 L, 7.85體積)并開(kāi) 始攪拌。向這個(gè)反應(yīng)體系中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(22.2 L, 8.5 體積)。攪拌30min后，允許該兩相體系靜置10min，收集下層水相(力口入另夕卜的水(5 L)以溶解兩相混合物中少量的剩余固體)。剩 余的有才幾相用水(12.7 L, 4.9體積)采取25-min攪4半時(shí)間和38-min 靜置時(shí)間進(jìn)行清洗。合并有機(jī)相并在40士5。C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上真空 濃縮直至蒸餾停止(在6h的時(shí)間內(nèi))。細(xì)口并瓦用IPAc ( 825 mL, 0.32 體積)漂洗。在這些階^:，所獲得的殘余物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的燒瓶?jī)?nèi) 用MeOH (12.7L, 4.9體積)調(diào)成漿料并濃縮至蒸餾停止(4.5h )。 獲得的粗IB-MECA縮丙酮(7.2 kg)為濕的米色固體，其儲(chǔ)存以備 進(jìn)一步處理和物津牛合并。HPLC分4斤表明，IB-MECA縮丙酮為91.3 峰面積％純度。
斗且MeOH潤(rùn)濕的IB-MECA縮丙酮(15 kg， 91峰面積％ ) /人 60 65。C的MeOH(34L)中重結(jié)晶。所獲得的濾餅用冷MeOH( 15.3 L)漂洗并轉(zhuǎn)移至8個(gè)干燥用托盤(pán)(物料重10kg)中。HPLC分析 表明，濾液中IB-MECA縮丙酮以65峰面積％純度存在。由峰高估 計(jì)，在該操作過(guò)程中將損失lkg該物質(zhì)。該批物料在設(shè)置為40。C的 真空烘箱中千燥約22h (7945 g)。 HPLC分析表明，99.0峰面積％ 純度的期望產(chǎn)物一皮兩種在RRT 0.64 (0.32峰面積％ )和RRT 1.30 (0.58峰面積％)的主要雜質(zhì)污染。這些峰的質(zhì)譜為
RRT= 0.64 MW = 424.19
m/e: 424.19 ( 100% )， 425.19 ( 23.9% ), 426.19 ( 4.0% )， 425.18 (2.2% )
C, 59.42; H, 5.70; N, 19.80; O， 15.08。 RRT 1.30
MW=752.34 g/molm/e: 752.01 ( 100.0% )， 753.01 (32.4%), 754.02 (4.5%), 754.01 ( 1.5%)C, 43.10; H， 3.48; I， 33.74; N 11.17; 0 8.51。該物質(zhì)再次乂人60 65。C的MeOH (23.8 L)重結(jié)晶。所獲得的 濾々并用冷MeOH (2 x 8L)漂洗。總過(guò)濾時(shí)間為85min。濾々并在氮 氣流下儲(chǔ)存。濾餅通過(guò)HPLC分析表明，99.77峰面積％純度的期望 產(chǎn)物-故兩種在RRT 0.64 ( 0.07峰面積％ )和RRT 1.30 ( 0.16峰面積 %)的主要少量雜質(zhì)污染。該批物料轉(zhuǎn)移至6個(gè)干燥用托盤(pán)(物料 重7.4kg)中而不是實(shí)施第3次可選的重結(jié)晶。物料在設(shè)定40。C的 真空烘箱中干燥約60h。獲得的IB-MECA縮丙酮(7097 g )為白色 固體，包裝到4個(gè)琥珀色玻璃并瓦中之后，在室溫下4諸存。向72-L反應(yīng)器中裝入THF ( 18.1 L， 5.1體積)、IB-MECA縮 丙酉同(3.55 kg， 6.45 mol, 1.0 wt/1.0體積、)禾口 IN HC1 7K;容液(17.8 L， 17.8 mol， 2.76當(dāng)量，5.0體積)。所獲得的淺綠色攪拌漿料在 50 士5。C下加熱約8h，此時(shí)的HPLC分對(duì)斤表明，相對(duì)于IB-MECA剩 余1.16%的IB-MECA縮丙酮(因此滿足頭見(jiàn)定^1.5%)。物#+冷卻至 約4(TC,然后經(jīng)由傳送泵通過(guò)在線過(guò)濾器過(guò)濾。空的反應(yīng)器和傳送 管^^用THF( 600 mL， 0.17體積)沖洗。所得到的濾液于冷藏室(2 8 。C ) ^f諸存過(guò);^。向200-L反應(yīng)器中通過(guò)在線過(guò)濾器加入冷的々包和 NaHC03水溶液(53.6 L， 15體積，16°C )并開(kāi)始攪拌。富含IB-MECA 的濾液(15°C)在30min內(nèi)經(jīng)由配備在線過(guò)濾器的傳送泵加入到 200-L反應(yīng)器中。所獲得的白色沉淀攪拌過(guò)夜以陳化(在20士2。C發(fā) 生沉淀期間，幾乎不存在溫度波動(dòng)，不需要采用冷卻，且〗又有少量 起泡。漿料pH為pH7.5)。物料采用尼龍過(guò)濾布過(guò)濾；空的反應(yīng)器 和濾餅用水(5 x 3.4 L， 4.8體積)清洗。濾餅在N2流下引流(總過(guò)濾時(shí)間5.5h)，包裝以備進(jìn)一步處理，且儲(chǔ)存于冷藏室。該批料 (9.2kg濕重)通過(guò)HPLC分析表明為99.5峰面積％純度，沒(méi)有任 <可單個(gè)雜質(zhì)〉0.20峰面積％純度。實(shí)施例4: IB-MECA千克^j"照cGMP生產(chǎn)方法^庫(kù)/表示根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容和如所附權(quán)利要求限定的用于千克 級(jí)制備IB-MECA的過(guò)程(典型收率和HPLC純度如所示)。在圖解 1中表示的生產(chǎn)步驟類(lèi)似于以上實(shí)施例1中詳細(xì)描述的制備 IB-MECA的生產(chǎn)工藝。采用該工藝單批生產(chǎn)的IB-MECA達(dá)6kg之 多(HPLC: 99.5峰面積％純度，無(wú)單雜質(zhì)>0.18%)。 cGMP生產(chǎn)/人 商購(gòu)的6-氯。票呤-9-核糖核苷(10kg)開(kāi)始，并獲得IB-MECA(6kg, 34%總理論收率(60wt%))。恩,2表示IB-MECA生產(chǎn)工藝的變形(典型收率和HPLC純 度也如所示)。差別在于才喿作過(guò)程、反應(yīng)順序、裝入的試劑當(dāng)量、 所用溶劑和隨后的收率。在圖解2中的過(guò)程采用了硅膠柱色譜和反 相Biotage純化。圖解2的工藝以3 50-g和2-kg告見(jiàn)才莫實(shí)施，并分別 獲4尋(32g, 9wt%)禾口 (414g， 21wt%)的IB-MECA。步驟A:H(5 6.H 6"氯嘌呤-核糖蹄丙酮(23體積),p-TsOH'H20 (5 mol%), 2,2-二甲氧基丙烷(3.5 室溫, 45h.鄉(xiāng)逆論欲率HOfr氯嘌呤縮丙酮CH3CN(15休積)， 氯化釕(III)水合物(1.6moiyo), 水(4.0體積),TBAI (0.9 mol%),然后 Nal04(2.3當(dāng)量)，-21 h.鄉(xiāng)艦靜HO'6-氯嘌呤酸步驟c1) CH3CN (2體積)，SOCl2 (1.60當(dāng)^), <30'C , 4h,然后S!;ii. "2) CH3CN (13鵬),MeNH2的TH嘴液(1.05當(dāng)S)， 然后DIPEA(1.5當(dāng)量),7'C. O3) 3-碘芐胺'HCl (1.35當(dāng)量)， MeHN DIPEA (5.0當(dāng)量)，70'C卜20 h)._6-氯嘌呤酸4)兩次連續(xù)MeOH重結(jié)晶 4ff%艦攻率服i 雄,J %汰畢個(gè)染i5^. W %義ffu 7CF101縮丙酮步驟D:CF101縮丙酮1) THF (5體積)，1 N HC1 (5體積), i 50'C， ~8 h._2) 從飽和NaHCO, (15體積)沉淀3) 室溫水調(diào)成漿料，艦脾 服5耀浙銜％ (^f単個(gè)雜處〉0. W ff " <■ pW圖解1:生產(chǎn)IB-MECA(CF101)的工藝歩驟A:CI步驟B:ho'H(5 t)H 6-氯嘌呤-9-核糖核苷a《l J 力、N八n乂O、6-氯嘌呤縮丙酮丙酮(19體積)， 2，2-二甲氧基丙烷(2.3當(dāng)量)， /j-TsOH'H20(1.5 mol%)， _室溫， 90h. ，朋％潘論欲#離微水(4.0體積)，CH3CN (15體積>， 氯化釘(III)水合物(1.6鵬1%)， TBA1 (0.9mol。/i,),然后 NaI04(2.3p' ~24h.b/遂一步府諒:Cl《1 JHO一。x。6-氯嘌呤縮丙酮hoN、《JNO、 乂()6"氯嘌呤酸一步驟C:Cl《L入T """、 - /-氯嘌呤酸1) 2-丙醇(15體積r,3鋪芐,HCl(U當(dāng)勤， Et^N (2.3當(dāng)量)，回窳~110 h濃鬼2) THF(12體積),(M0 。C， SOCl2 (1 2騷)-3) MeNH2 ,F溶液(4.0當(dāng)量)，<15 3C, 22 h.4) 硅膠柱色譜* EtOH初始采用厲,力〃辨教基f效乾加A/ ^-襲標(biāo)砂裙斥廁 #微層％靴淑-總機(jī)m麟鵬％MeHNHN〈il JCF101縮丙酮步驟D:MeHNHN〈"A J6x&CF101縮丙酮1)N HC1 (5體積)，THF (5體積)， 50 。C， 6-8 h._2) 從飽和NaHC03 (15體積)沉淀3) Biotage純化.47%邀微, 峰,砂FINH(5 f)HCF101圖解2:生產(chǎn)IB-MECA(CF101)的工藝的變形在用于IB-MECA cGMP生產(chǎn)的圖解1和圖解2的工藝步-驟之 間注釋了許多主要不同之處，如下步"^爿 6-襲嚷冷/,丙#/￥的^/務(wù).-在才艮據(jù)圖解2的工藝中，,TsOH*H20和2，2-二曱氧基丙烷的 加泮牛量增加是為了加快反應(yīng)速率同時(shí)不會(huì)有損收率和質(zhì)量。這乂人成 本上使反應(yīng)-容器停留時(shí)間減半。在規(guī)模上，初始過(guò)程不一致而導(dǎo)致 反應(yīng)不完全。為了促使反應(yīng)完全，不得不在高達(dá)3周的時(shí)間內(nèi)分份 添加另外的試劑，導(dǎo)致總反應(yīng)體積顯著增加。這些加料也進(jìn)行優(yōu)化， 以使可能的副反應(yīng)保持最低。根據(jù)圖解l的工藝，其也是所述權(quán)利要求的主題，作為單次產(chǎn) 物獲得與如方案圖解2的工藝實(shí)現(xiàn)的收率類(lèi)似的高質(zhì)量物質(zhì)。,黎^ 6-歲禁哈凌的*備沖艮據(jù)圖解l中詳述的工藝，為了獲得IB-MECA縮丙酮的后續(xù) 試劑和溶劑的加入，都基于分離的酸重量。然而根據(jù)圖解2的工藝， 試劑和溶劑的加入是相對(duì)于分離的前體中間體(6-氯噤呤縮丙酮) 的重量。因此，漿料、萃取IPAc/H20操作和Na2S04千燥操作每一 步在圖解1的工藝中都可以省略。圖解l中的酸乂人水中以易于處理的形式分離出，以至于能夠在 烘箱中干燥而滿足殘余水含量的規(guī)定(隨后的酰氯生成對(duì)水^艮每文 感)。在該酸中殘余的水的可^妄受上限確定為<0.6 wt %。這通過(guò)簡(jiǎn) 單的真空烘箱干燥就能始終滿足，而不會(huì)損害質(zhì)量。通過(guò)增加濾餅 的沖洗體積以及通過(guò)消除前述的多余處理步驟，能夠^是高回收率。兩個(gè)圖解之間的3個(gè)合成轉(zhuǎn)化步驟(與3-碘千胺的反應(yīng)，然后 生成酰氯，最后與MeNH2反應(yīng)生成酰胺)的次序上有顯著差異。 相對(duì)于6-氯噤呤酸加入，優(yōu)化各種試劑的加入(參見(jiàn)以上步-驟B )。 在圖解1中^f吏用單一反應(yīng)溶劑(CH3CN)。這消除了當(dāng)采用圖解2的工藝時(shí)遇到的酯雜質(zhì)生成(未顯示)的情況。另夕卜，才艮據(jù)圖解1 中該步驟的工藝次序，在合成的最后階段采用了成本最昂貴的物質(zhì)
(3-碘千胺)。在圖解2的工藝中硅膠柱色譜純化條件用MeOH重 結(jié)晶(圖解1)代替。在該處還存在鑒定的其它幾種可能的工藝雜質(zhì)。
步潔D /S畫(huà)認(rèn)C4的斜備,
在圖解2的工藝中采用的Biotage純化才喿作就不再需要，因?yàn)?前體IB-MECA縮丙酮的純度在圖解1中通過(guò)甲醇重結(jié)晶而4尋以改 進(jìn)。在兩種方案中縮丙酮去保護(hù)(酸性條件)期間確定發(fā)生熱分解， 因此反應(yīng)時(shí)間限制為8h (不會(huì)有損于收率)。
權(quán)利要求
1.一種用于化學(xué)合成具有下式的IB-MECA的方法，所述方法包括(i)使下式(II)的6-鹵代嘌呤-9-核糖核苷其中X是選自Cl、I或Br的鹵素，與二醇保護(hù)劑發(fā)生反應(yīng)以獲得下式(III)的二醇受保護(hù)的6-鹵代嘌呤其中所述二醇保護(hù)劑包含直鏈或支鏈的C1-C6烷基基團(tuán)；(ii)將所述式(III)的二醇受保護(hù)的6-鹵代嘌呤中的伯醇氧化成式(IV)的相應(yīng)羧酸衍生物(iii)使所述式(IV)的衍生物的羧酸基團(tuán)與甲胺反應(yīng)以獲得所述二醇受保護(hù)的6-鹵代嘌呤(III)的相應(yīng)甲基酰胺衍生物，所述甲基酰胺衍生物具有式(V)(iv)用3-碘芐胺取代所述甲基酰胺衍生物(V)的鹵素基團(tuán)以形成具有式(VI)的二醇受保護(hù)的IB-MECA(v)去除二醇保護(hù)而獲得所述式(I)的IB-MECA。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述卣素是氯。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述保護(hù)基團(tuán)是C3-C6 二烷氧基烷烴。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述二烷氧基烷烴是2,2-二 曱氧基丙烷。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述二醇保 護(hù)是在強(qiáng)酸和極性有機(jī)溶劑存在下實(shí)現(xiàn)的。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述強(qiáng)酸選自p-TsOH、 曱石黃酸、苯磺酸、曱酸、鹽酸、 >琉酸。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述極性有機(jī)溶劑是水混 :^容寸生〉容劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述極性有機(jī)溶劑是丙酮。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1~8中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述式(III) 的二醇受^f呆護(hù)的6-卣代。票。令中的伯醇向?qū)?yīng)的羧酸書(shū)于生物的 所述氧化是在催化量的氧化劑存在下實(shí)施的，其中所述氧化劑 選自釕金屬、氯化釕、三氧化鉻、高硪酸鈉、重鉻酸鉀、高錳 酸鐘、氧化4艮、硝酸、氧化賴/氧、2,2,6,6-四曱基p底口定-l-氧基(TEMPO )、亞氯酸鈉以及它們的4壬意組合。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述氧化是在催化量的 RuCl3和高石典酸鈉存在下實(shí)施的。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述式(IV) 的羧酸衍生物向所述式(V)的相應(yīng)曱基酰胺衍生物的轉(zhuǎn)化是施的。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述卣化劑選自SOCl2 和PC15。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1 12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述二醇保 護(hù)基團(tuán)的去除是在強(qiáng)酸和極性非質(zhì)子溶劑存在下實(shí)施的。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述強(qiáng)酸是HC1，而所 述溶劑是四氪吹喃(THF)。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1 14中任一項(xiàng)所述的方法，允許大規(guī)模合成 IB國(guó)MECA。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1 15中任一項(xiàng)所述的方法，用于IB-MECA的"良好制造生產(chǎn)"(GMP)。
17. —種化學(xué)合成的IB-MECA，其是通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求1 16中任 一項(xiàng)所述的方法獲得的。
18. —種藥物組合物，包含才艮據(jù)權(quán)利要求17所述的IB-MECA。
全文摘要
本披露內(nèi)容提供了一種合成IB-MECA的方法。更具體而言，本披露內(nèi)容提供了一種用于IB-MECA“良好制造生產(chǎn)”(GoodManufacturing Production)(GMP)的簡(jiǎn)單高收率方法。本方法涉及6-鹵代嘌呤-9-核糖核苷與二醇保護(hù)劑的反應(yīng)；在二醇受保護(hù)的6-鹵代嘌呤中的伯醇的氧化；二醇受保護(hù)的6-鹵代嘌呤與親核試劑(例如，甲胺)的反應(yīng)；用碘芐胺取代鹵素基團(tuán)和去除二醇保護(hù)基團(tuán)。
文檔編號(hào)C07H19/16GK101646685SQ200880007952
公開(kāi)日2010年2月10日 申請(qǐng)日期2008年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月14日
發(fā)明者佩德羅·埃爾南德斯-阿巴德, 保羅·布魯齊恩斯基, 劉學(xué)軍, 卡梅倫·吉布 申請(qǐng)人:坎-菲特生物藥物有限公司