專利名稱：：一種新的天然咪唑甲酸衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新的天然咪唑甲酸衍生物及其制備方法和該化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。技術(shù)背景近年來(lái)，以一些與腫瘤細(xì)胞分化增殖相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵酶作為藥物篩選靶點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)選擇性作用于特定靶點(diǎn)的高效、低毒、特異性強(qiáng)的新型抗癌藥物已成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研究開發(fā)的重要方向。蛋白酪氨酸激酶(ProteinTyrosineKinases,PTKs)是一種能選擇性地使不同底物的酪氨酸殘基磷酸化的一種酶，在許多細(xì)胞調(diào)節(jié)過(guò)程中起著重要作用。但是，如基因突變、基因融合、自分泌和旁分泌循環(huán)等病理機(jī)制，會(huì)導(dǎo)致PTKs的持續(xù)活化，從而阻斷了其對(duì)細(xì)胞分化、生長(zhǎng)和凋亡等的調(diào)節(jié)功能，誘發(fā)腫瘤。已有的資料表明，超過(guò)50%的原癌基因和癌基因產(chǎn)物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它們的異常表達(dá)將導(dǎo)致細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)發(fā)生紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。因而抑制酪氨酸激酶的活性，恢復(fù)生理平衡可以作為一種新的治療手段。目前，已有超過(guò)20多種酪氨酸激酶靶點(diǎn)被應(yīng)用于抗腫瘤藥物的研究中(w/ence2004，305,1163-1167.;"/e固2004，303,1800-1805.)。從自然界尋找具有抑制酪氨酸激酶活性的化合物，將為新藥的設(shè)計(jì)提供更多的功能模版，為藥物合成研究和藥物作用機(jī)理研究提供很好的先導(dǎo)化合物，從而為腫瘤治療藥物的開發(fā)提供廣闊的空間(77^/"^""a"o"a/Jow/72a/o/歷oc/zew/Wo^c&Ce〃5/o/ogy2007，39,1416-1431.)。駱駝?shì)?i>egam^m'ge//aWnwzBunge)是蒺藜科駱駝蓬屬多年生草本植物，該屬植物我國(guó)共有三種，主要分布于我國(guó)西北部地區(qū)的干旱及半干旱地區(qū)。繼1975年報(bào)道了駱駝蓬中的生物堿對(duì)消化道惡性腫瘤有療效以來(lái)，國(guó)內(nèi)相繼報(bào)道了駱駝蓬的化學(xué)成分及抗腫瘤的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果表明駱駝蓬中的生物堿在治療癌癥方面有很好的開發(fā)前景(Ojm^"歷o/77zw2007，6,(8),el-e7.;爿n^尸/zarm/ey2007,30,(7),844-9.)。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)駱駝蓬化學(xué)成分和藥理作用研究較多，在我國(guó)傳統(tǒng)中藥中應(yīng)用較多，也有許多的發(fā)明專利。但是，對(duì)于駱駝?shì)锏幕瘜W(xué)成分研究較少。近年來(lái)，有學(xué)者從駱駝?shì)镏邪l(fā)現(xiàn)了一類具有喹唑啉母核的生物堿，具有和喜樹堿近似的結(jié)構(gòu)特征，也表現(xiàn)出了較好的抗腫瘤活性(/爿MSOC2003，125，(45)，13628-13629.;說(shuō)oorgam'c&Meafc/"a/C/^m/對(duì)o;2007,15,(12),4237-4246.;//W露少c/m2005,65,(9),2203-2219.)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種新的天然咪唑甲酸衍生物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該化合物的制備方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供該化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明提供了一種式(I)所示的化合物，中文名1//-咪唑-4-甲酸-(2'-乙基庚基)酉旨，英文名2-ethylheptyll//-imidazole-4-carboxylate，分子式C13H22N202，分子量238，無(wú)色油狀物。^-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。本化合物是唯一具有2-乙基庚基的咪唑甲酸酯。該化合物易溶于有機(jī)溶劑。(I)表l式(I)化合物的'H-NMR和'3C-NMR數(shù)據(jù)(300MHz,500/4MHz，CD3C1)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>式(I)所示的化合物可以以光學(xué)異構(gòu)體的形式存在，因此其光學(xué)異構(gòu)體及混合物也構(gòu)成本發(fā)明的一個(gè)方面。同時(shí)，它們的藥用鹽、溶劑合物也是本發(fā)明的一部分。本發(fā)明還提供了該化合物的制備方法，包括如下步驟(1)駱駝?shì)锏厣喜课挥萌軇┨崛〉媒啵?2)將浸膏與大孔樹脂拌樣，上樣于大孔樹脂柱上，用溶劑洗脫，得到洗脫物；(3)低極性溶劑洗脫物以石油醚-醋酸乙酯為洗脫系統(tǒng)進(jìn)行硅膠層析，然后進(jìn)行SephadexLH-20和ODS柱層析，得到該化合物。步驟(1)中所述的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、水中的一種或多種。步驟(2)中所述的洗脫溶劑為石油醚、環(huán)己垸、甲苯、二氯甲垸中的一種或多種。根據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員熟知的成熟的篩選酶水平對(duì)酪氨酸激酶EGFR活性有抑制作用的化合物的方法，研究人員發(fā)現(xiàn)式(I)所示的化合物、光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物對(duì)EGFR活性有一定的抑制活性，在10|Limol/L時(shí)抑制率為33.06%。因此，本發(fā)明涉及的式(I)所示的化合物、光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物具有制備抗腫瘤藥物的用途，它們可以以其自身的形式施用，也可以和藥學(xué)上可以接受的載體組成藥物組合物而應(yīng)用。采用有效劑量的本發(fā)明所述的式(I)所示的化合物、光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物的一種或多種作為活性成分與常規(guī)藥用載體制備成藥物組合物，可以按常規(guī)方法制備成口服或注射用途的常規(guī)劑型。通常的，載體包括稀釋劑、填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、著色劑、調(diào)味劑或其他常規(guī)添加劑中的一種或多種。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明公開了一種新的天然咪唑甲酸衍生物及其制備方法。本發(fā)明還提供了該化合物的藥用鹽、溶劑合物。這些化合物可用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明提供的制備方法簡(jiǎn)單易行，制備的化合物純度高。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。本發(fā)明中沒(méi)有具體描述的提取、分離方法均為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以根據(jù)說(shuō)明書的提示釆用藥典規(guī)定的方法或其他操作規(guī)程限定的方法結(jié)合使用儀器的說(shuō)明書進(jìn)行操作，即可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。實(shí)施例1:式(I)化合物的提取分離駱駝?shì)锏厣喜糠指稍锖笾亓繛?0kg，用95%乙醇加熱回流提取3小時(shí)"次，提取液減壓回收乙醇，得浸膏14kg。取其中的lkg浸膏與大孔樹脂拌樣，上樣于大孔樹脂柱上，依次用石油醚、氯仿、甲醇洗脫，得到石油醚洗脫物244g，以石油醚-醋酸乙酯-甲醇為洗脫系統(tǒng)進(jìn)行硅膠層析，然后進(jìn)行S印hadexLH-20和ODS柱層析。SephadexLH-20柱層析以氯仿-甲醇(2:1)為洗脫系統(tǒng)，ODS柱層析以甲醇-水-氨水(60:20:1)為洗脫系統(tǒng)，分離得到該化合物65.5mg。實(shí)施例2:測(cè)定式(I)化合物對(duì)酪氨酸激酶EGFR活性抑制作用EGFR檢測(cè)kit(含激酶、1.25MDTT、底物肽、ATP、P-Tyr-100及4xHTScan激酶緩沖液等)購(gòu)于CellSignalingTechnology公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠抗體購(gòu)于ProteinTech公司；TMB購(gòu)于Pierce公司；Streptavidin包被酶標(biāo)板購(gòu)于GreinerBio-one公司；InfiniteM200檢測(cè)儀購(gòu)于Tecan公司。本次試驗(yàn)釆用的陽(yáng)性藥物為埃羅替尼。用DMSO將化合物配成10—2M的母液，-2(TC保存，臨用前用無(wú)菌水稀釋至所需濃度；酶活測(cè)定立即將酶從一80。C移至冰上，待融化后在4。C短暫離心至管底，并迅速放回冰上；加lOplDTT(1.25M)到2.5ml的4xHTScan激酶緩沖液中(200mMHEPES，pH7.5，20mMMgCl2，20mMMnCl2,12(aMNa3V04)。取0.6mL加入上述酶管，取12.5pL，并加入12.5|aL不同濃度的化合物，同時(shí)設(shè)立blank孔、無(wú)酶對(duì)照孔、陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔，在室溫下孵育5分鐘；力PlO(aLmMATP至U1.25mL6pM底物肽中，用dH20稀釋至2.5mL，取25至上述體系中，室溫下孵育30分鐘；加50pL/孔終止液(50mMEDTA，pH8)終止反應(yīng)，每孔取25jxL，并加入75nLdH20至Streptavidin包被的酶標(biāo)板中，室溫下孵育60分鐘。用2f)0iaL/孔PBS/T(lxPBS，0.05%Tween—20)洗三次；加100pL含1%BSA的PBS/T1:500稀釋的P—Tyr-100(Phospho-TyrsinemAb)，室溫下孵育60分鐘。用200(iL/孔PBS/T(lxPBS，0.05%Tween—20)洗三次；力t]100含1%BSA的PBS/T1:500稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體，室溫下孵育30分鐘。用200nL/孔PBS/T(lxPBS，0.05%Tween—20)洗五次；力n100pL/孔TMB,顯色1-10分鐘，力卩50的2MH2S04終止反應(yīng)，用InfiniteM200測(cè)定乂450-^630值；列公式求得抑制率樣品的抑制率％=(1化合物OD值一無(wú)酶對(duì)照孔OD值_)xl00%一陰性對(duì)照OD值一無(wú)酶對(duì)照孔OD值得該化合物在10(amol/L時(shí)對(duì)EGFR的抑制率為33.06%,埃羅替尼為92.45%。權(quán)利要求1.一種新的天然咪唑甲酸衍生物，其特征在于，該化合物是式(I)所示的化合物、光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物。2.—種藥物組合物，其特征在于，該組合物以權(quán)利要求1所述的式(I)所示的化合物、光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物的一種或多種作為活性成分，并含有常規(guī)藥用載體。3.權(quán)利要求1所述的式(I)所示的化合物、光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物在制備抑制EGFR活性藥物中的應(yīng)用。4.權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于包括如下歩驟(1)駱駝?shì)锏厣喜课挥萌軇┨崛〉媒啵?2)將浸膏與大孔樹脂拌樣，上樣于大孔樹脂柱上，用溶劑洗脫，得到洗脫物；(3)洗脫物以石油醚-醋酸乙酯為洗脫系統(tǒng)進(jìn)行硅膠層析，然后進(jìn)行SephadexLH-20和ODS柱層析，得到該化合物。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、水中的一種或多種。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的洗脫溶劑為石油醚、環(huán)己烷、甲苯、二氯甲烷中的一種或多種。全文摘要本發(fā)明公開了一種新的天然咪唑甲酸衍生物及其制備方法和用途。該衍生物是式(I)所示的化合物、光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物。該化合物的制備方法包括采用溶劑提取，采用柱層析分離純化而得。該化合物及其光學(xué)異構(gòu)體、藥用鹽、溶劑合物可用于制備抗腫瘤藥物。該化合物是一種新的天然咪唑甲酸衍生物，制備方法簡(jiǎn)單、易行。文檔編號(hào)C07D233/00GK101397274SQ20081015597公開日2009年4月1日申請(qǐng)日期2008年10月22日優(yōu)先權(quán)日2008年10月22日發(fā)明者飛楊,王冬春,鳳邵,榮陳申請(qǐng)人:江蘇先聲藥物研究有限公司