專利名稱:通過高效液相色譜法檢測奧硝唑光學(xué)對(duì)映體的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及通過高效液相色譜法檢測奧硝唑光學(xué)對(duì)映體的方法,更具體的說是檢測奧硝唑生產(chǎn)過程中或者是奧硝唑產(chǎn)品中左、右旋奧硝唑的方法。
背景技術(shù):
奧硝唑(Ornidazole,CAS 16773-42-5)為硝基咪唑類衍生物,其化學(xué)名為1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑,分子式C7H10ClN3O3,分子量219.6,是一種強(qiáng)力抗厭氧菌及抗原蟲感染的藥物。奧硝唑的抗微生物作用是通過其分子中的硝基在無氧環(huán)境中還原成氨基,或通過自由基的形成與細(xì)胞成分相互作用,從而導(dǎo)致微生物的死亡。很多消旋體通過高效液相色譜法分離的方法是已知的,但流動(dòng)相、溶劑、柱溫、色譜柱等因素對(duì)于拆分結(jié)果有很大影響或不適用于目標(biāo)消旋體。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供通過高效液相色譜法檢測在奧硝唑消旋體手性合成中所得奧硝唑光學(xué)對(duì)映體的方法,以控制合成樣品的純度。
本發(fā)明采用纖維素酯類為固定相的手性柱進(jìn)行拆分,奧硝唑手性碳原子上有一個(gè)羥基和一個(gè)氯甲基,而纖維素酯類結(jié)構(gòu)中的空穴和通道與對(duì)映體選擇性的形成了對(duì)映體包合物,從而達(dá)到分離。
流動(dòng)相對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中左、右旋奧硝唑分離度及峰形均有很大影響,經(jīng)發(fā)明人實(shí)驗(yàn)摸索,確定以正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸(75~100∶2~15∶0.1~8∶0.1~1.5,優(yōu)選為85~95∶6~10∶0.5~3∶0.2~0.8,更優(yōu)選為90∶8∶2∶0.5)為流動(dòng)相效果很好。其中加入甲基叔丁基醚可以提高左、右旋奧硝唑分離度,冰醋酸可以改善峰形。
溶劑的選擇與左、右旋奧硝唑分離度有關(guān)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定采用正丙醇、異丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇或甲基叔丁基醚作為溶解用溶劑,優(yōu)選以甲基叔丁基醚為溶劑。
本發(fā)明提供的通過高效液相色譜法檢測左、右旋奧硝唑的方法的具體條件如下1.色譜條件色譜柱采用纖維素酯類為固定相的手性柱;流動(dòng)相為正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸(75~100∶2~15∶0.1~8∶0.1~1.5,優(yōu)選為85~95∶6~10∶0.5~3∶0.2~0.8,更優(yōu)選為90∶8∶2∶0.5);檢測波長為280nm~340nm(優(yōu)選為300nm~320nm,更優(yōu)選為約310nm);柱溫為20~45℃(優(yōu)選為35~45℃,更優(yōu)選為40℃);流動(dòng)相流速為0.5~2.0ml/min(優(yōu)選為0.8-1.2ml/min,更優(yōu)選為約1.0ml/min)。
2.樣品溶液的配置采用有機(jī)溶劑(優(yōu)選選自正丙醇、異丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇或甲基叔丁基醚,更優(yōu)選為甲基叔丁基醚),將樣品配制為含奧硝唑消旋體0.05~0.5mg/ml(優(yōu)選0.1~0.3mg/ml,更優(yōu)選為0.2mg/ml)的溶液。
3.測定將溶液注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,并進(jìn)行分析。
采用此色譜條件測定奧硝唑消旋體中左、右旋奧硝唑分離度可達(dá)1.5~2.3,符合中國藥典要求。此色譜條件同時(shí)可用于奧硝唑光學(xué)對(duì)映體的定量。
圖1按照實(shí)施例1的條件分離左、右旋奧硝唑的高效液相色譜圖。
圖2按照實(shí)施例2的條件分離左、右旋奧硝唑的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1.
儀器SHIMADZU LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10A紫外檢測器,HT-230A柱溫箱;色譜柱Daicel Chralcel OB-H色譜柱(0.46×25cm,5μm);流動(dòng)相正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸(90∶8∶2∶0.5)柱溫40℃;流速1.0ml/min;檢測波長310nm。
定位溶液1的配置精密稱取左旋奧硝唑適量,用甲基叔丁基醚溶解并稀釋成0.1mg/ml;定位溶液2的配置精密稱取右旋奧硝唑適量,用甲基叔丁基醚溶解并稀釋成0.1mg/ml;樣品溶液的配置精密稱取奧硝唑消旋體適量,用甲基叔丁基醚溶解并稀釋成0.2mg/ml;測定各取定位溶液1、定位溶液2、樣品溶液20μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,譜圖見圖1。奧硝唑消旋體中左、右旋奧硝唑分離度為2.3。其中奧硝唑消旋體中左旋奧硝唑含量為44%,右旋奧硝唑含量為56%。
實(shí)施例2.
儀器SHIMADZU LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10A紫外檢測器,HT-230A柱溫箱;色譜柱Hibar RT Cellulose Triacetate色譜柱(0.46×25cm,10μm);流動(dòng)相正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸(90∶8∶5∶0.6)柱溫40℃;流速1.5ml/min;
檢測波長300nm。
定位溶液1的配置精密稱取左旋奧硝唑適量,用乙醇溶解并稀釋成0.1mg/ml;定位溶液2的配置精密稱取右旋奧硝唑適量,用乙醇溶解并稀釋成0.1mg/ml;樣品溶液的配置精密稱取奧硝唑消旋體適量,用乙醇溶解并稀釋成0.2mg/ml;測定各取定位溶液1、定位溶液2、樣品溶液20μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,圖譜見圖2。奧硝唑消旋體中左、右旋奧硝唑分離度為2.0。其中奧硝唑消旋體中左旋奧硝唑含量為45%,右旋奧硝唑含量為55%。
權(quán)利要求
1.通過高效液相色譜法檢測奧硝唑光學(xué)對(duì)映體的方法,具體如下1)色譜條件色譜柱采用纖維素酯類為固定相的手性柱;流動(dòng)相為正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸(75~100∶2~15∶0.1~8∶0.1~1.5);檢測波長為280nm~340nm;柱溫為20~45℃;流動(dòng)相流速為0.5~2.0ml/min;2)樣品溶液的配置采用有機(jī)溶劑將樣品配制成為含奧硝唑消旋體0.05~0.5mg/ml的溶液,所述有機(jī)溶劑選自正丙醇、異丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇和甲基叔丁基醚;3)測定將溶液注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖并進(jìn)行分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于所述流動(dòng)相為正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸(85~95∶6~10∶0.5~3∶0.2~0.8),更優(yōu)選為正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸(90∶8∶2∶0.5)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于檢測波長優(yōu)選為300nm~320nm,更優(yōu)選為310nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于柱溫優(yōu)選為35~45℃,更優(yōu)選為40℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于流動(dòng)相流速優(yōu)選為0.8~1.2ml/min,更優(yōu)選為1.0ml/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于樣品溶液的配置中采用的有機(jī)溶劑為甲基叔丁基醚。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于將樣品溶液配制為優(yōu)選含奧硝唑消旋體0.1~0.3mg/ml,更優(yōu)選為0.2mg/ml的溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過高效液相色譜法檢測奧硝唑光學(xué)對(duì)映體的方法的方法,具體如下(1)色譜條件色譜柱采用纖維素酯類為固定相的手性柱;流動(dòng)相為正己烷-甲基叔丁基醚-異丙醇-冰醋酸;檢測波長為280nm~340nm。(2)采用有機(jī)溶劑將樣品配為含奧硝唑消旋體0.05~0.5mg/ml的溶液。(3)測定,記錄色譜圖。本發(fā)明測定方法達(dá)到的左、右旋奧硝唑分離度可達(dá)1.5~2.3,符合中國藥典要求。本發(fā)明提供方法同時(shí)可用于奧硝唑光學(xué)對(duì)映體的定量。
文檔編號(hào)G01N30/06GK1752749SQ20051000594
公開日2006年3月29日 申請(qǐng)日期2005年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月1日
發(fā)明者張倉, 錢金葉 申請(qǐng)人:南京圣和藥業(yè)有限公司