專利名稱：一種生長抑制激素肽衍生物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物，尤其是指一種生長抑制激素肽的衍生物及其 制備方法。
自從生長抑制激素上世紀(jì)被發(fā)現(xiàn)以來，生長抑制激素五種亞型受體和許多 腫瘤的關(guān)系也逐漸被發(fā)現(xiàn)。其中，生長抑制激素第二、第三及第五亞型受體的 過度表達(dá)和多種腫瘤有密切的關(guān)聯(lián)。世界上許多制藥廠都投入了相當(dāng)?shù)牧α垦?發(fā)以生長抑制激素衍生物為基礎(chǔ)的抗腫瘤藥物。
在2007年的秋季，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了第二代以生長抑制激素肽衍生物為基礎(chǔ)的抗 癌藥物，來自于法國 Ipsen 公司的蘭瑞肽 {Lanreotide, H—DNal (2， )一c[Cys-Tyr-DTrp—Lys—Val-Cys]-Thr—NH2, Murphy,
WA, VA Lance， S Moreau， et al. "Inhibition of Rat Prostate Tumor—Growth
by an Octap印tide Analog of Somatostatin. 〃 Life Sci. 40:2515—2522， 1987.
該藥物對生長抑制激素第二及第五亞型受體的親和力有選擇性。
由于蘭瑞肽難以區(qū)分這兩種亞型受體的親和力，靶向性不明顯，導(dǎo)致了不 少毒副作用，使得該藥的臨床應(yīng)用受到限制。
本發(fā)明的目的在于提供一種在氨基酸側(cè)鏈引入甲基，以此增加生長抑制激 素第二或第五亞型受體的親和力，提高新藥靶向性的生長抑制激素肽衍生物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種在氨基酸側(cè)鏈引入甲基，以此增加生長 抑制激素第二或第五亞型受體的親和力，提高新藥靶向性的生長抑制激素肽衍 生物的制備方法。
本發(fā)明的構(gòu)思是這樣的 本發(fā)明的通用結(jié)構(gòu)式如下圖示
背景技術(shù)：
發(fā)明內(nèi)容<formula>formula see original document page 5</formula>其中，8位的R為羧基(C00H)、酰胺基(C0NH2)或羥甲基(CH20H)中的一種;
4位的B-甲基色氨酸可以有以下四種立體異構(gòu)
(2S, 3R) (2R, 3S)
本發(fā)明一種生長抑制激素肽衍生物的制備方法如下所述
所述的生長抑制激素肽衍生物可以通過多肽固相法合成，也就是首先把C-端的蘇氨酸或蘇氨醇接到固相載體即樹脂上，然后按照多肽合成的通用方法從
C-端向N-端把其余的七個(gè)氨基酸用肽鍵連接起來(見下圖，R = C00H)，所合成 的直鏈八肽從樹脂上被切下來，然后第2位的半胱氨酸和第7位半胱氨酸在碘 的氧化下通過二硫鍵關(guān)環(huán)成環(huán)狀多肽，最后除去所有氨基酸支鏈保護(hù)基團(tuán)，粗 品經(jīng)過純化即得到所設(shè)計(jì)的藥物分子；<formula>formula see original document page 6</formula>另外，也可采用下述的方法合成直鏈八肽在樹脂上合組裝完后，可以直 接把所有氨基酸支鏈保護(hù)基團(tuán)除去，然后在稀溶液中第2位的半胱氨酸和第7 位半胱氨酸在氧化劑(如氧氣，鐵(III)氰酸鉀)的存在下通過二硫鍵關(guān)環(huán)成環(huán)
狀多肽(見下圖，R=C00H)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下
由于色氨酸的側(cè)鏈引入甲基，適當(dāng)增加空間張力，有利于藥物分子和生長 抑制激素第二或第五亞型受體的結(jié)合產(chǎn)生更有效的腫瘤抑制作用，減少藥物分 子和其它亞型受體的結(jié)合，因此可同時(shí)降低毒副作用，增加療效。<formula>formula see original document page 7</formula>
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的一種生長抑制激素肽衍生物，其化合物的通用結(jié)構(gòu)式如下:
其中，8位的R可以是羧基(C00H)、酰胺基(C0NH2)或羥甲基(CH20H)中的任 意一種；且其中的4位的B-甲基色氨酸也可是以下四種立體異構(gòu)的任意一種， 即
<formula>formula see original document page 7</formula>(2S, 3R) (2R, 3S)
該生長抑制激素肽衍生物是在法國蘭瑞肽的基礎(chǔ)上特定的位置上適當(dāng)
引入甲基，即在該類分子和受體結(jié)合關(guān)鍵部位之一的D或L-色氨酸(D/L-Trp)
支鏈的(3-位上引入甲基(S或R構(gòu)型)。
上述的生長抑制激素肽衍生物的基本制備方法有以下兩種方式 第一種方式為A)、合成氨基酸支鏈全部保護(hù)的線性多肽；B)、 2位半胱氨
酸和7位半胱氨酸通過二硫鍵關(guān)環(huán)成環(huán)狀多肽；C)、最后除去所有氨基酸支鏈
保護(hù)基團(tuán)。
第二種方式為A)、合成氨基酸支鏈全部保護(hù)的線性多肽；B)、最后除去 所有氨基酸支鏈保護(hù)基團(tuán)；C)、 2位半胱氨酸和7位半胱氨酸通過二硫鍵關(guān)環(huán) 成環(huán)狀多肽。
實(shí)施例一 (R=C00H，環(huán)狀多肽合成方法A):
2-氯-三苯甲基樹脂(1克，取代度0. 7mmo1每克)，加入二氯甲烷(20毫升)， 在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下溶漲兩個(gè)小時(shí)，過濾，用二氯甲烷再洗兩次，然后加入 Fmoc-Thr(0tBu)-0H (2.1 mmol)，二異丙基乙胺(DIPEA， 8.4 mmol),反應(yīng)兩 小時(shí)后，過濾，用二氯甲烷再洗兩次后，得到Fmoc-Thr(0tBu)-0-2-氯-三苯甲基樹脂。接下去使用多肽合成步驟，如下
用哌啶(25。/。的N,N-二甲基甲酰胺溶液)脫去Fmoc保護(hù)基(20分鐘)；所得 到的H-Thr(0tBu)-0-2-氯-三苯甲基樹脂用二氯甲垸和N，N-二甲基甲酰胺各洗 滌兩次，每次兩分鐘；然后加入Fmoc保護(hù)的氨基酸[此處是第7位的 Fmoc-Cys (Trt) -0H， 2. 1 mmol] ;H0Bt (2.1 mmol) ; HBTU (2.1 mmol) ; 二異丙基 乙胺(DIPEA， 4.2mmo1)以及N，N-二甲基甲酰胺(15毫升)，反應(yīng)30分鐘后， 過濾。所得到的Fmoc-Cys(Trt)-Thr(0tBu)-0-2-氯-三苯甲基樹脂用二氯甲烷和 N,N-二甲基甲酰胺各洗滌兩次(每次兩分鐘)。
然后，重復(fù)上段的第一步，直到設(shè)計(jì)的多肽序列全部組裝完畢。 接下來，用三氟乙酸把多肽從所得到的固體樹脂上切割下來。減壓出去溶 劑，所得到的固體殘留物中加入碘溶液(1.0醒ol，20毫升)，兩小時(shí)后，除去 未反應(yīng)的碘。除去溶劑后，所得到的殘?jiān)萌宜崦撊キh(huán)狀多肽分子上所有 的保護(hù)基團(tuán)，用時(shí)2小時(shí)，在此溶液中加入乙醚(200毫升)，白色沉淀用乙醚 再洗兩次(100毫升每次)。所得到的白色固體用高效液相色譜(HPLC)分離， 得到純的產(chǎn)物為白色粉末，重量536毫克{(lán)分子式C55H7。RA&;計(jì)算分子量 1111.33;實(shí)測分子量1134.40 [C55H7()Nu)0nS2Na， ESI， (M + Na)+]}。 實(shí)施例二 (R二 COOH，環(huán)狀多肽合成方法B):
朋2-三苯甲基樹脂(1克，取代度0. 7腿ol每克)，加入二氯甲垸(20毫升)，在 氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下溶漲兩個(gè)小時(shí)，過濾，用二氯甲垸再洗兩次，然后加入 Fmoc-Thr (0tBu) -0H (2.1 mmol) ; HOBt (2.1 ramol) ; HBTU (2.1 mmol);二異丙 基乙胺(DIPEA， 8.4 ramol)，反應(yīng)兩小時(shí)后，過濾，用二氯甲院再洗兩次后，得到Fmoc-Thr(OtBu)-NH-三苯甲基樹脂。接下去使用多肽合成步驟，如下
用哌啶(25。/。的N，N-二甲基甲酰胺溶液)脫去Fmoc保護(hù)基(20分鐘)；所得 到的H-Thr(OtBu)-NH-三苯甲基樹脂用二氯甲烷和N, N-二甲基甲酰胺各洗滌兩 次，每次兩分鐘；然后加入Fmoc保護(hù)的氨基酸[此處是第7位的 Fmoc-Cys (Trt) -0H， 2. 1 ramol] ; HOBt (2.1 mmol) ; HBTU (2.1 ramol) ; 二異丙 基乙胺(DIPEA， 4.2 mmol)以及N，N-二甲基甲酰胺(15毫升)，反應(yīng)30分鐘 后，過濾。所得到的Fmoc-Cys(Trt)-Thr(OtBu)-NH-三苯甲基樹脂用二氯甲烷和 N, N-二甲基甲酰胺各洗滌兩次(每次兩分鐘)。
然后，重復(fù)上段的第一步，直到設(shè)計(jì)的多肽序列全部組裝完畢。 接下來，用三氟乙酸脫去多肽分子固體樹脂上所有的保護(hù)基團(tuán)同時(shí)把多肽 切割下來，用時(shí)2小時(shí)，在此溶液中加入乙醚(200毫升)，白色沉淀用乙醚再 洗兩次(100毫升每次)。所得到的白色固體殘?jiān)芙庥诩状?10毫升)，緩慢 加入到鐵(III)氰酸鉀的溶液中(10 mraol， 200毫升)，5小時(shí)后，除去溶劑。 殘留物進(jìn)行高效液相色譜(HPLC)分離，得到純的產(chǎn)物為白色粉末，重量410 毫克{(lán)分子式C5晶凡A&;計(jì)算分子量1110.35;實(shí)測分子量1133.36 [C5;;H71Nn010S2Na， ESI， (M + Na)+]}。
權(quán)利要求
1、一種生長抑制激素肽衍生物，其特征在于該化合物的通用結(jié)構(gòu)式如下。其中8位的R可以是羧基(COOH)、酰胺基(CONH2)或羥甲基(CH2OH)中的任意一種。
2、如權(quán)利要求1所述的一種生長抑制激素肽衍生物。其特征在于4位的 13-甲基色氨酸可以是可以是以下四種立體異構(gòu)的任意一種，四種結(jié)構(gòu)分別如下
3、 一種生長抑制激素肽衍生物的制備方法，包括以下步驟A)、合成氨基 酸支鏈全部保護(hù)的線性多肽；B)、 2位半胱氨酸和7位半胱氨酸通過二硫鍵關(guān)環(huán) 成環(huán)狀多肽；C)、最后除去所有氨基酸支鏈保護(hù)基團(tuán)。
4、 如權(quán)利要求l所述的一種生長抑制激素肽衍生物的制備方法，包括以下 步驟A)、合成氨基酸支鏈全部保護(hù)的線性多肽；B)、最后除去所有氨基酸支鏈保護(hù)基團(tuán)；C)、 2位半胱氨酸和7位半胱氨酸通過二硫鍵關(guān)環(huán)成環(huán)狀多肽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種生長抑制激素肽衍生物及其制備方法，該化合物的通用結(jié)構(gòu)式如右，該化合物可作為抗腫瘤藥物的主要組分，有利于藥物分子和生長抑制激素第二或第五亞型受體的結(jié)合產(chǎn)生更有效的腫瘤抑制作用，減少藥物分子和其它亞型受體的結(jié)合，因此可同時(shí)降低毒副作用，增加療效。
文檔編號C07K1/14GK101298472SQ20081012416
公開日2008年11月5日 申請日期2008年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月25日
發(fā)明者韓國霞 申請人:韓國霞