專利名稱：一種抑制VEGF表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抑制VEGF表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移需要生成新的血管。在腫瘤形成的早期，腫瘤細(xì)胞主要通過擴(kuò)散作用獲得營養(yǎng)和氧氣，但這樣僅能長至2～3mm3。為了進(jìn)一步的生長和遷移，必須有新的血管的生成，新生成的血管把還在生長的腫瘤和循環(huán)系統(tǒng)直接連接起來，使其供腫瘤生長的物質(zhì)得以交換。除此之外，腫瘤還利用新生血管通過血液循環(huán)將原發(fā)癌細(xì)胞輸送至轉(zhuǎn)移靶器官。因此，血管新生與腫瘤生長、轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。血管的生成是復(fù)雜的過程。它是由內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)以及正負(fù)調(diào)控因子相互作用的多步驟過程。其中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)作為血管生成的正性調(diào)控因子在血管生成過程中起到關(guān)鍵作用。VEGF具有增加微血管的通透性、促進(jìn)不同來源的內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖和血管構(gòu)建、促使內(nèi)皮細(xì)胞的遷移等多種作用，是已知的最強(qiáng)的血管生成因子。在許多腫瘤中VEGF的表達(dá)均上調(diào)，這使VEGF成為通過抑制腫瘤血管的生成來治療腫瘤的重要靶點(diǎn)。
RNA干擾技術(shù)的發(fā)展，提供了一種通過抑制病毒、癌基因等疾病相關(guān)基因的表達(dá)來治療疾病的新的基因治療方法。RNA干擾(RNAi)是植物以及其它一些生物使用的抵御病毒的古老防御機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)RNA干擾可能也存在于哺乳動(dòng)物中。所謂的小干擾RNA(siRNA)，即用20多個(gè)核苷酸組成的短的雙鏈RNA(siRNA)代替?zhèn)鹘y(tǒng)反義核酸進(jìn)行特異性的轉(zhuǎn)錄后基因沉默，已經(jīng)迅速而廣泛地應(yīng)用到基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究等熱門領(lǐng)域，和抗病毒、抗腫瘤等治療領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抑制VEGF表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的抑制VEGF表達(dá)的siRNA，是下述VEGF-siRNA-2’-deoxy1或VEGF-siRNA-2’-deoxy2；所述VEGF-siRNA-2’-deoxy1由正義鏈和反義鏈組成，它的正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列，序列3和序列4的自5′端的第1至19位核苷酸均為核糖核苷酸、自5′端的第20和21位核苷酸均為胸腺嘧啶脫氧核苷酸；所述VEGF-siRNA-2’-deoxy2由正義鏈和反義鏈組成，它的正義鏈具有序列表中序列5的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列6的核苷酸序列，序列5和序列6的自5′端的第1至19位核苷酸均為核糖核苷酸、自5′端的第20和21位核苷酸均為胸腺嘧啶脫氧核苷酸。
序列表中的序列3、4、5和6均由21個(gè)核苷酸組成，序列的方向從左至右均為5′端→3′端。
VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2可化學(xué)合成。
所述VEGF-siRNA-2’-deoxy1的作用靶序列具有序列表中序列1的核苷酸序列；所述VEGF-siRNA-2’-deoxy2的作用靶序列具有序列表中序列2核苷酸序列。
用VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞株Hela、肝癌細(xì)胞株HepG2、乳腺癌細(xì)胞株MCF7、肺癌等腫瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2能在mRNA和蛋白水平有效抑制VEGF的表達(dá)，抑制VEGF mRNA的表達(dá)和蛋白水平的表達(dá)達(dá)到60-90％以上。VEGF-siRNA-2’-deoxy1的效應(yīng)半衰期的測(cè)試結(jié)果表明，與未去羥基修飾的VEGF-siRNA1相比，VEGF-siRNA-2’-deoxy1抑制VEGF表達(dá)的效應(yīng)半衰期由去羥基修飾前的2.5天延長到5天。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種抑制腫瘤的藥物。
本發(fā)明所提供的抑制腫瘤的藥物，它的活性成分為VEGF-siRNA-2’-deoxy1和/或VEGF-siRNA-2’-deoxy2。
VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2可與體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑RNAi-mate混合后一起使用。
VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2通過抑制宮頸癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤細(xì)胞的VEGF mRNA的表達(dá)和蛋白水平的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)抑制宮頸癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤的血管生成和腫瘤的生長。
將Hela細(xì)胞接種裸鼠，形成腫瘤后用VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2治療的實(shí)驗(yàn)證明VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2能在體內(nèi)有效抑制腫瘤生長。
作為和其他siRNA不同的一種新型的抗腫瘤藥物，VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2不易被降解，有較長的半衰期，能用于體外實(shí)驗(yàn)，更能用于體內(nèi)治療。能有效抑制腫瘤細(xì)胞VEGF的表達(dá)和阻止腫瘤血管的生成，抑制腫瘤，用于宮頸癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤的治療。


圖1為ELISA方法檢測(cè)VEGF表達(dá)水平結(jié)果柱形圖。
圖2為RT-PCR方法檢測(cè)VEGF的mRNA表達(dá)水平結(jié)果電泳和柱形圖。
圖3為RT-PCR檢測(cè)化學(xué)修飾對(duì)siRNA效應(yīng)半衰期的影響。
圖4為VEGF-siRNA-2’-deoxy1治療宮頸癌的效果圖。
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。
下述實(shí)施例中的百分含量，如無特別說明，均為質(zhì)量百分含量。
實(shí)施例1、VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy1的合成根據(jù)Reynolds的原則自己編寫了siRNA的預(yù)測(cè)程序。從http//www.ncbi.nlm.nih.gov/上獲得VEGF的cDNA序列(GenBANK號(hào)NM_003376.4)，然后使用預(yù)測(cè)程序預(yù)測(cè)siRNA。在對(duì)比預(yù)測(cè)的siRNA的結(jié)果之后選擇一些siRNAs。對(duì)這些選定的siRNAs的兩條鏈都進(jìn)行一次Blast搜索(數(shù)據(jù)庫選用NBCI的nr數(shù)據(jù)庫)，這樣可以確保siRNA只對(duì)這一個(gè)靶基因起作用。最后選定VEGF的mRNA序列的第612-630位的19個(gè)核苷酸序列為VEGF-siRNA-2’-deoxy1所針對(duì)的靶序列，其針對(duì)的靶基因VEGF的mRNA序列為5’-CGAACGUACUUGCAGAUGU-3’(SEQ ID No.1)；VEGF的mRNA序列的第189-207位的19個(gè)核苷酸序列為VEGF-siRNA-2’-deoxy2所針對(duì)的靶序列，該針對(duì)的靶基因VEGF的mRNA序列為5’-GGAGUACCCUGAUGAGAUC-3’(SEQ ID No.2)。其中VEGF-siRNA-2’-deoxy1的正義鏈為5’-CGAACGUACUUGCAGAUGUTT-3’(SEQ ID No.3)；反義鏈為3’-TTGCUUGCAUGAACGUCUACA 5′(SEQ ID No.4)。VEGF-siRNA-2’-deoxy2的正義鏈為5’-GGA GUA CCC UGA UGA GAU CTT-3’(SEQ ID No.5)；反義鏈為3’-TTCCU CAU GGG ACU ACU CUA G-5’(SEQ ID No.6)。選用一條隨機(jī)序列作為陰性對(duì)照(NC-deoxy)，NC-deoxy的正義鏈序列為5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’，反義鏈序列為5’-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’。VEGF-siRNA-2’-deoxy1、VEGF-siRNA-2’-deoxy2和NC-deoxy序列中的A、G、C、U表示腺嘌呤核糖核苷酸、鳥嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸和尿嘧啶核糖核苷酸，T表示胸腺嘧啶脫氧核苷酸。
VEGF-siRNA-2’-deoxy1、VEGF-siRNA-2’-deoxy2和NC-deoxy均購自上海吉瑪(GenePharma)公司。
實(shí)施例2、VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2的體外轉(zhuǎn)染及抑制腫瘤細(xì)胞表達(dá)VEGF的效率檢測(cè)使用Invitrogen的lipofectamineTM2000脂質(zhì)體進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后的30小時(shí)進(jìn)行RNA干擾效果的測(cè)定。所有操作均按Invitrogen提供的操作規(guī)程。具體步驟為將實(shí)施例1得到的VEGF-siRNA-2’-deoxy1、VEGF-siRNA-2’-deoxy2以及NC-deoxy粉末分別溶解于沒有RNA酶的無菌水中，配成終濃度為20μmol/L的溶液。將HeLa細(xì)胞接種到6孔板中(300,000個(gè)細(xì)胞/孔)，用含10％胎牛血清的RPMI1640或DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)16-24小時(shí)后，將細(xì)胞培養(yǎng)液換成含2.5％胎牛血清的無抗生素的RPMI1640或DMEM培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染時(shí)，分別將5μl siRNA溶液(20μM的VEGF-siRNA-2’-deoxy1或20μM的VEGF-siRNA-2’-deoxy2或20uM的NC-deoxy溶液)和5μl的lipofectamine 2000分別稀釋于250μl無血清培養(yǎng)培養(yǎng)液(Opti-MEM)中，并在室溫下孵育20分鐘，然后將上述s iRNA溶液與脂質(zhì)體溶液混合，復(fù)合物于室溫靜置20分鐘后，把500μl的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物加到細(xì)胞培養(yǎng)板中(細(xì)胞生長融合率為50-70％)，然后37℃培養(yǎng)30小時(shí)，收集培養(yǎng)液和細(xì)胞進(jìn)行ELISA和RT-PCR檢測(cè)。
用人VEGF的ELISA檢測(cè)試劑盒(R&D)(晶美生物)測(cè)試轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA-2’-deoxy1或VEGF-siRNA-2’-deoxy2或NC-deoxy的HeLa細(xì)胞的VEGF的蛋白含量。其具體做法是A、溶液準(zhǔn)備(1)洗液按25倍稀釋洗液待用；(2)標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解標(biāo)準(zhǔn)品(VEGF)，對(duì)倍稀釋，從1000pg/ml至15.6pg/ml共做7個(gè)稀釋梯度；(3)顯色底物使用前15分鐘將顯色劑A和顯色劑B等量混合后用。B、操作(1)加樣測(cè)試前將微孔板恢復(fù)至室溫，加測(cè)試緩沖液50ul/孔，然后按200ul/孔上樣量將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品(轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA-2’-deoxy1或VEGF-siRNA-2’-deoxy2或NC-deoxy的HeLa細(xì)胞培養(yǎng)液)加入，室溫放置2小時(shí)；(2)洗板用洗液洗板3次；(3)二抗每孔加二抗200ul，室溫置2小時(shí)；(4)洗板用洗液洗板3次；(5)顯色每孔加顯色底物200ul，室溫置20分鐘(避光)；(6)中止每孔加中止液50ul；(7)讀板30分鐘內(nèi)以450nm(參考波長為540或570nm)。C、計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品吸光度和濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品濃度。結(jié)果如圖1所示，圖1表明，轉(zhuǎn)染NC-deoxy的細(xì)胞VEGF含量比未轉(zhuǎn)染siRNA的沒有明顯降低，而轉(zhuǎn)染VEGF特異的VEGF-siRNA-2’-deoxy1或VEGF-siRNA-2’-deoxy2處理的細(xì)胞VEGF含量明顯降低，說明VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的VEGF在蛋白水平的表達(dá)。圖1中，1，2，3，4分別表示NC-deoxy轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，VEGF-siRNA-2’-deoxy1轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和VEGF-siRNA-2’-deoxy2轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
RT-PCR檢測(cè)的步驟為用1ml TRIzol(GIBCOL)裂解轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA-2’-deoxy1或VEGF-siRNA-2’-deoxy2或NC-deoxy的HeLa細(xì)胞，并按TRIzol產(chǎn)品說明的操作規(guī)程提取總RNA。由于RNA干擾的效果可能被潛在的少量的基因組DNA影響，實(shí)驗(yàn)采用DNase I(RNase-free)(TaKaRa)來進(jìn)一步消化降解總RNA中殘留的DNA。在用DNase I 37℃消化30分鐘后，按照DNase I產(chǎn)品說明重新提純總RNA并對(duì)RNA進(jìn)行定量和質(zhì)量鑒定。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)是使用Promega公司的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶體系，將1ug的總RNA與0.5ug的Oligo dT混合，加熱5分鐘，迅速冷卻至0℃。按產(chǎn)品說明加入緩沖液，42℃孵育1小時(shí)。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后的cDNA，作為PCR反應(yīng)的模板進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，上游引物為5’-GAGGGCAGAATCATCACGAA-3’，下游引物為5’-GGGAACGCTCCAGGACTTAT-3’。PCR反應(yīng)溫度條件為先94度5分鐘；再94度1分鐘，60度1分鐘，72度1分鐘，共28個(gè)循環(huán)。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，并利用軟件對(duì)其濃度進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果如圖2所示，圖2表明轉(zhuǎn)染NC-deoxy的細(xì)胞的PCR產(chǎn)物比未轉(zhuǎn)染siRNA的處理沒有明顯降低，而VEGF特異的VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2轉(zhuǎn)染處理的細(xì)胞PCR產(chǎn)物明顯降低，說明VEGF-siRNA-2’-deoxy1和VEGF-siRNA-2’-deoxy2能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的VEGF在mRNA水平的表達(dá)。圖2中，1，2，3，4分別表示未轉(zhuǎn)染細(xì)胞，VEGF-siRNA-2’-deoxy1轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，VEGF-siRNA-2’-deoxy2轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和NC-deoxy轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
實(shí)施例3、VEGF-siRNA-2’-deoxy的效應(yīng)半衰期測(cè)試用2ml含10％胎牛血清的RPMI1640或DMEM培養(yǎng)液在6孔板中培養(yǎng)Hela細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞融合率達(dá)到50-70％時(shí)，按照實(shí)施例2的方法轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA-2’-deoxy1或VEGF-siRNA1(正義鏈為5’-CGAACGUACUUGCAGAUGU-3’；反義鏈為3’-GCUUGCAUGAACGUCUACA 5′；購自上海吉瑪(GenePharma)公司)或NC-deoxy。分別于轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、2.5天后、5天和10天時(shí)，用1ml TRIzol(GIBCOL)裂解細(xì)胞，提取總RNA。用DNase I(RNase-free)(TaKaRa)來進(jìn)一步消化降解總RNA中樣本殘留的DNA后，重新提純RNA并對(duì)RNA進(jìn)行定量和質(zhì)量鑒定。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)是使用Promega公司的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶體系，將1微克的總RNA與0.5ug的Oligo dT混合，加熱5分鐘，迅速冷卻至0℃。按產(chǎn)品說明加入緩沖液，42℃孵育1小時(shí)。然后以逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后的cDNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR所用的引物和PCR反應(yīng)溫度同實(shí)施例2。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，并利用軟件對(duì)其濃度進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果如圖3所示，圖3表明，化學(xué)修飾使VEGF siRNAs干擾VEGF mRNA表達(dá)的效應(yīng)半衰期從2.5天延長到5天。圖3中，1，2，3，4分別為VEGF-siRNA-2’-deoxy 1轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、2.5天、5天和10天時(shí)的RT-PCR產(chǎn)物，5，6，7，8分別為VEGF-siRNA1轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、2.5天、5天和10天時(shí)的RT-PCR產(chǎn)物，9，10，11分別為NC-deoxy轉(zhuǎn)染后24小時(shí)、2.5天、5天的RT-PCR產(chǎn)物。
實(shí)施例4、VEGF-siRNA-2’-deoxy對(duì)腫瘤生長的抑制作用用含10％胎牛血清的PRM 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)Hela細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度4×107個(gè)細(xì)胞/ml。在8周齡的雄性裸鼠的背側(cè)翼部皮下注射0.1ml細(xì)胞懸液。當(dāng)腫瘤長到50mm3開始用VEGF-siRNA-2’-deoxy1治療。將裸鼠腫瘤大小、體重等因素搭配后隨機(jī)分為三組，一組為生理鹽水對(duì)照組，一組為VEGF-siRNA-2’-deoxy1治療組，一組為NC-deoxy對(duì)照組。具體方法為用不含RNA酶的無菌水分別溶解VEGF-siRNA-2’-deoxy1、NC-deoxy(上海吉瑪制藥有限公司)和一種體內(nèi)轉(zhuǎn)染劑RNAi-Mate(上海吉瑪制藥有限公司)，VEGF-siRNA-2’-deoxy1和NC-deoxy的濃度均為10μg/μl，而RNAi-Mate的濃度為44μg/μl，室溫孵育30分鐘后，將0.8ug/0.8ulVEGF-siRNA-2’-deoxy1或NC-deoxy，24ug/0.55ulRNAi-Mate和0.65ul不含RNA酶的無菌水混合起來，總體積2ul，再室溫孵育30分鐘進(jìn)行腫瘤局部注射，每三天注射一次。當(dāng)腫瘤的容積增大到200mm3時(shí)，治療劑量加倍。每三天用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長徑(L)和橫徑(S)，計(jì)算腫瘤的近似體積。計(jì)算公式為V(mm3)＝0.5×L×S2。給藥6次后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，處死裸鼠，取出腫瘤稱重。結(jié)果如圖4所示，表明在宮頸癌移植腫瘤裸鼠模型上，VEGF-siRNA-2’-deoxy1治療的裸鼠腫瘤明顯比其他兩種對(duì)照處理小，說明VEGF-siRNA-2’-deoxy1能明顯抑制腫瘤的生長。圖4中A為生理鹽水治療的鼠；B為NC-deoxy治療的鼠；C為VEGF-siRNA-2’-deoxy 1治療的鼠；D為A、B、C中的腫瘤最后的重量比較。圖4D中的NC為NC-deoxy治療對(duì)照組；NS為生理鹽水治療對(duì)照組；siRNA為VEGF-siRNA-2’-deoxy 1治療組。
按照上述實(shí)驗(yàn)方法，又進(jìn)行了VEGF-siRNA-2’-deoxy2對(duì)腫瘤生長的抑制作用，結(jié)果表明VEGF-siRNA-2’-deoxy2對(duì)腫瘤的抑制效果與VEGF-siRNA-2’-deoxy1的抑制效果相同。
序列表<160>6<210>1<211>19<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>1cgaacguacu ugcagaugu 19<210>2<211>19<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>2ggaguacccu gaugagauc 19<210>3<211>21<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>3cgaacguacu ugcagaugut t21<210>4<211>21<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>4acaucugcaa guacguucgt t21<210>5<211>21<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>5ggaguacccu gaugagauct t21<210>6<211>21<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>
<400>6gaucucauca ggguacucct t 2權(quán)利要求
1.一種抑制VEGF表達(dá)的siRNA，是下述VEGF-siRNA-2’-deoxy1或VEGF-siRNA-2’-deoxy2；所述VEGF-siRNA-2’-deoxy1由正義鏈和反義鏈組成，它的正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列，序列3和序列4的自5′端的第1至19位核苷酸均為核糖核苷酸、自5′端的第20和21位核苷酸均為胸腺嘧啶脫氧核苷酸；所述VEGF-siRNA-2’-deoxy2由正義鏈和反義鏈組成，它的正義鏈具有序列表中序列5的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列6的核苷酸序列，序列5和序列6的自5′端的第1至19位核苷酸均為核糖核苷酸、自5′端的第20和21位核苷酸均為胸腺嘧啶脫氧核苷酸。。
2.一種抑制腫瘤的藥物，它的活性成分為權(quán)利要求1所述的VEGF-siRNA-2’-deoxy1和/或VEGF-siRNA-2’-deoxy2。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于所述腫瘤為宮頸癌、肝癌、乳腺癌和肺癌。
4.權(quán)利要求1所述的抑制VEGF表達(dá)的siRNA的作用靶序列，其特征在于所述VEGF-siRNA-2’-deoxy1的作用靶序列具有序列表中序列1的核苷酸序列；所述VEGF-siRNA-2’-deoxy2的作用靶序列具有序列表中序列2核苷酸序列。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抑制VEGF的siRNA及其應(yīng)用。該siRNA是下述VEGF－siRNA－2′－deoxy1或VEGF－siRNA－2′－deoxy2；所述VEGF－siRNA－2′－deoxy1由正義鏈和反義鏈組成，它的正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列；所述VEGF－siRNA－2′－deoxy2由正義鏈和反義鏈組成，它的正義鏈具有序列表中序列5的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列6的核苷酸序列。VEGF－siRNA－2′－deoxy1和VEGF－siRNA－2′－deoxy2不易被降解，有較長的半衰期，能用于體外實(shí)驗(yàn)，更能用于體內(nèi)治療。能有效抑制腫瘤細(xì)胞VEGF的表達(dá)和阻止腫瘤血管的生成，抑制腫瘤，用于宮頸癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤的治療。
文檔編號(hào)C07H21/00GK1804038SQ20051013009
公開日2006年7月19日 申請(qǐng)日期2005年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月12日
發(fā)明者張雅鷗, 蔡國平, 蔣宇揚(yáng), 何永紅 申請(qǐng)人:清華大學(xué)深圳研究生院