一種基于miRNA491調(diào)節(jié)DAT基因表達(dá)的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種調(diào)節(jié)細(xì)胞中的多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)的方法，其特征在于，包括以下步驟：提高所述細(xì)胞中的微小RNA?491(miRNA?491)(SEQ ID NO:1)量從而下調(diào)所述DAT基因的表達(dá)；或降低所述細(xì)胞中的miRNA?491量，從而上調(diào)所述DAT基因的表達(dá)。miRNA?491在制備調(diào)節(jié)人細(xì)胞攝取多巴胺的藥物中的用途。一種用于調(diào)節(jié)人細(xì)胞攝取多巴胺的組合物，其包含miRNA?491或其抑制劑，以及藥學(xué)可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑、佐劑中的一種或多種。
【專利說明】
一種基于mi RNA491調(diào)節(jié)DAT基因表達(dá)的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)藥領(lǐng)域。更特別地，涉及調(diào)節(jié)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(DAT)的基 因表達(dá)的微小RNA(miRNA)。
【背景技術(shù)】
[0002] 多巴胺是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，通過激活多巴胺受體，參與運(yùn)動(dòng) 調(diào)節(jié)、情感、認(rèn)知、藥物成癮、神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等生命活動(dòng)。再攝取是神經(jīng)遞質(zhì)通過突觸前膜 從突觸間隙消除的正常機(jī)制，精神活性物質(zhì)作用的一個(gè)重要機(jī)制是阻斷神經(jīng)遞質(zhì)從突觸前 膜釋放后的再攝取。阻斷再攝取，神經(jīng)遞質(zhì)的正常效應(yīng)被放大。多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的細(xì)胞膜 鈉依賴性再攝取過程實(shí)現(xiàn)多巴胺信號(hào)的終斷，這對(duì)神經(jīng)細(xì)胞多巴胺穩(wěn)態(tài)的維持發(fā)揮著至關(guān) 重要的作用。DAT基因3 ' UTR含有3至11個(gè)拷貝的可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列(VNTR)，VNTR拷貝數(shù) 的變化與特發(fā)性癲癇、注意力缺陷多動(dòng)障礙、酒精和可卡因依賴、帕金森病易感性以及抵抗 尼古丁依賴的保護(hù)作用等關(guān)系密切。
[0003] miRNA是一類高度保守的單鏈非編碼小RNA，由約20-22個(gè)單核苷酸組成，廣泛存在 于真核生物中，參與轉(zhuǎn)錄后水平或翻譯水平的調(diào)控。miRNA在真核生物基因調(diào)控中起著重要 作用，廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育、代謝、凋亡以及其他多種生命活動(dòng)。miRNA具有高度保 守性、時(shí)序性和組織特異性等特征，通過與靶基因不完全互補(bǔ)結(jié)合，一種miRNA可調(diào)節(jié)多種 靶基因表達(dá)。目前，已在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)數(shù)百種miRNA并已知其序列。
[0004] 本發(fā)明正是通過尋找參與神經(jīng)細(xì)胞攝取多巴胺的基因調(diào)控通路中的miRNA，并調(diào) 節(jié)神經(jīng)細(xì)胞中這樣的miRNA的量來實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞對(duì)多巴胺的攝取進(jìn)而調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞中 的多巴胺的量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：
[0006] -種調(diào)節(jié)細(xì)胞中的多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(DAT)基因表達(dá)的方法，其特征在于，包括提高所 述細(xì)胞中的微小RNA-491 (miRNA-491)(SEQ ID NO: 1)含量從而下調(diào)所述DAT基因的表達(dá);或 降低所述細(xì)胞中mi RNA-491的量，從而上調(diào)所述DAT基因的表達(dá)。通過調(diào)控細(xì)胞中的DAT基因 表達(dá)，可調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)多巴胺的攝取。
[0007] 進(jìn)一步地，提高所述細(xì)胞中的miRNA-491的量可通過將miRNA-491模擬物（SEQ ID NO: 2)轉(zhuǎn)染至所述細(xì)胞中來進(jìn)行；降低所述細(xì)胞中的miRNA-491的量可通過將miRNA-491抑 制劑(SEQ ID NO:3)轉(zhuǎn)染至所述細(xì)胞中來進(jìn)行。
[0008] 進(jìn)一步地，所述細(xì)胞可為人神經(jīng)細(xì)胞。
[0009] 本發(fā)明還提供了 miRNA-491在制備降低人細(xì)胞攝取多巴胺的藥物中的用途，所述 miRNA-491可體現(xiàn)為miRNA-491模擬物，或miRNA-491基因與強(qiáng)啟動(dòng)子構(gòu)建成的遺傳構(gòu)建體。
[0010] 本發(fā)明還提供了miRNA-491抑制劑在制備增加人細(xì)胞攝取多巴胺的藥物中的用 途，所述miRNA-491抑制劑可體現(xiàn)為miRNA-491反義序列，或miRNA-491反義序列基因與強(qiáng)啟 動(dòng)子構(gòu)建成的遺傳構(gòu)建體。
[0011]本發(fā)明還提供了一種用于調(diào)節(jié)人細(xì)胞攝取多巴胺的量的組合物，其包含miRNA-491或其抑制劑，并且還包含藥學(xué)可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑、佐劑中的一種或多種。
【附圖說明】
[0012] 圖1為PsiCHECK2質(zhì)粒圖譜，DAT基因的3'UTR VNTR序列順著轉(zhuǎn)錄方向插在多克隆 位點(diǎn)Xho I與Not I之間；
[0013] 圖2為表征轉(zhuǎn)染了帶有DAT基因 3'UTR VNTR序列psiCHECK2質(zhì)粒并且分別轉(zhuǎn)染了 miRNA-491模擬物(miR-491)、miRNA_491 抑制劑(anti-miR-491)或?qū)φ誱iRNA(ctl-miR)的 細(xì)胞中的相對(duì)熒光素酶活性的柱狀圖；
[0014] 圖 3 為表征分別轉(zhuǎn)染了miRNA-491 模擬物(miR-491 )、miRNA-491 抑制劑(anti-miR-491) 或?qū)φ?miRNA(ctl-miR) 的細(xì)胞中相對(duì) mRNA 活性的柱狀圖；
[0015] 圖 4 為分別轉(zhuǎn)染了miRNA-491 模擬物(miR-491 )、miRNA-491 抑制劑（anti-miR-491) 和對(duì)照m i RNA (c 11 -m i R)的細(xì)胞的總蛋白以抗DAT抗體為一抗做的we s t ern印跡；
[0016] 圖 5 為表征分別轉(zhuǎn)染了miRNA-491 模擬物(miR-491 )、miRNA-491 抑制劑(anti-miR-491) 和對(duì)照 miRNA(ctl-miR) 的細(xì)胞中相對(duì)多巴胺水平的柱狀圖。
[0017] 在以上附圖的柱狀圖中，*p〈0 · 05，#p〈0 · 01，*#p〈0 · 001。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并 非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0019] 在本發(fā)明中，發(fā)明人使用miRanda(http://www.microrna.org)得至丨」關(guān)于人類、果 蠅和斑馬魚基因組的miRNA靶基因的預(yù)測(cè)信息以及miRNA在不同組織的表達(dá)譜，使用 TargetScan(http://www. targetscan · org)基于革EmRNA序列的進(jìn)化保守等特征預(yù)測(cè)動(dòng)物的 miRNA靶基因，出乎意料地發(fā)現(xiàn)，DAT基因的3 ' UTR的VNTR中存在miRNA-491可能的作用靶點(diǎn)。 在這基礎(chǔ)上，通過熒光素酶表達(dá)活性分析、mRNA及蛋白質(zhì)水平分析、功能水平分析，最終證 實(shí)可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞中miRNA-491的量來調(diào)節(jié)DAT基因的表達(dá)，進(jìn)而控制細(xì)胞內(nèi)的多巴胺濃 度。
[0020] miRNA模擬物是一種合成的雙鏈寡核糖核苷酸，其中一條鏈為具有相應(yīng)miRNA的序 列的鏈，另一條鏈反向互補(bǔ)鏈，并且，在具有相應(yīng)miRNA序列的鏈上具有末端修飾的核苷酸 類似物。當(dāng)將miRNA模擬物轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中后，反向互補(bǔ)鏈立刻被細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中存在的RNA酶 降解，而具有miRNA序列的鏈因?yàn)檫@樣的修飾而保持長(zhǎng)時(shí)間不被降解，由此增大了 miRNA的 半衰期，提高了 miRNA的有效濃度。
[0021] miRNA抑制劑與miRNA模擬物正好相反，其在反向互補(bǔ)鏈上具有末端修飾的核苷酸 類似物。將miRNA模擬物轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中后，具有miRNA序列的鏈立刻被細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中存在的 RNA酶降解，而反向互補(bǔ)鏈因?yàn)檫@樣的修飾而保持長(zhǎng)時(shí)間不被降解，由此增大了反向互補(bǔ)鏈 的半衰期，提高了反向互補(bǔ)鏈的有效濃度。反向互補(bǔ)鏈結(jié)合細(xì)胞中相應(yīng)的內(nèi)源miRNA，使其 不能發(fā)揮功能，從而降低了miRNA的有效濃度。
[0022] 在本文以及所附權(quán)利要求書和序列表中，針對(duì)miRNA-491模擬物和miRNA-491抑制 劑所示出的序列都為其有效序列，即，在轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中后未被分解的那條鏈的序列。
[0023] 在本發(fā)明中，通過將miRNA-491模擬物或miRNA-491抑制劑轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，以提高 或降低細(xì)胞中的miRNA-491的量，由此來下調(diào)或上調(diào)DAT基因的表達(dá)，從而影響細(xì)胞對(duì)多巴 胺的攝取。
[0024] miRNA模擬物和抑制劑在許多生化試劑公司有售，或可提供序列讓生化公司合成， 例如天根生化科技公司、廣州市銳博生物科技有限公司等。本發(fā)明實(shí)施例中使用的miRNA-491 模擬物和抑制劑購(gòu) 自廣州市銳博生物科技有限公司。
[0025]材料與方法
[0026]以下方法是實(shí)驗(yàn)的一般方法，在具體實(shí)驗(yàn)過程中可進(jìn)行一些必要的修改。
[0027] 1.細(xì)胞培養(yǎng)
[0028]將SK-N-SH神經(jīng)母細(xì)胞瘤(得自美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)，ATCC HTB-Il)接種于添加 了 10%胎牛血清和0. lg/L的丙酮酸鈉的MEM培養(yǎng)基中，在37°C和5%CO2下培養(yǎng)。
[0029] 2.質(zhì)粒構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
[0030] 使用細(xì)胞基因組為模板，通過PCR擴(kuò)增得到DAT基因的3'UTR VNTR(SEQ ID N0:4) 的片段（約2kb)，將該片段插入psiCHECK2質(zhì)粒（Pr〇mega，MadiS〇n，WI，USA)(圖1)熒光素酶 報(bào)告基因 hRluc上游的多克隆位點(diǎn)XhoI與NotI之間。按照制造商的說明書，使用 Lipof ectamine 2000 (Invitrogen，Carlsbad，CA ,USA)試劑將帶有DAT基因的3 ' UTR VNTR的 序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SK-N-SH神經(jīng)母細(xì)胞瘤中。
[0031] 3 .miRNA-491模擬物或抑制劑的轉(zhuǎn)染
[0032] miRNA-491模擬物和抑制劑購(gòu)自廣州市銳博生物科技有限公司。根據(jù)制造商的說 明書，使用Lipofectamine RNAiMAX試劑（Invitrogen)將miRNA-491模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染至 上述具有psiCHECK2質(zhì)粒的SK-N-SH神經(jīng)母細(xì)胞瘤中。轉(zhuǎn)染方法如下：
[0033] 1)轉(zhuǎn)染前一天用不含抗生素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基接種細(xì)胞，細(xì)胞密度5 X IO4Ail，100μ1/ 孔(以96孔板為例），使轉(zhuǎn)染時(shí)的平坦單層細(xì)胞密度能夠達(dá)到約70% ;
[0034] 2)按每孔10μ1的量用Opti-MEM減血清培養(yǎng)液稀釋miRNA，使其在最終孵育時(shí)的工 作濃度為50-250nM;
[0035] 3)轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine RNAiMAX使用前先輕輕混合，然后按每孔10μ1的量用 Opti-MEM減血清培養(yǎng)液稀釋0.2μ1轉(zhuǎn)染試劑，輕柔混合；
[0036] 4)將稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑和miRNA混合在一起，總體積20μ1，輕柔混合，室溫孵育10 至20分鐘；
[0037] 5)向含有細(xì)胞和培養(yǎng)基的培養(yǎng)板中每孔加入20μ1混合物，輕輕擺動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)板混 合均勻；
[0038] 6)恒溫37°C的⑶2培養(yǎng)箱中孵育24至72小時(shí)后完成轉(zhuǎn)染，收集細(xì)胞用于進(jìn)一步分 析。
[0039] 實(shí)施例
[0040]實(shí)施例1.焚光素酶報(bào)告基因表達(dá)活性分析
[0041 ]使用Dual-luciferase Reporter Assay System(Promega，E1910)，根據(jù)制造商說 明書來分析其中轉(zhuǎn)染了帶有0六1'基因3'17^￥階1?的？以〇^〇(2質(zhì)粒并且分別轉(zhuǎn)染了1^1?·-491模擬物、mi RNA-491抑制劑和陰性對(duì)照雙鏈mi RNA (也購(gòu)自廣州市銳博生物科技有限公 司，轉(zhuǎn)染方法與miRNA-491模擬物或抑制劑相同）的SK-N-SH神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的相對(duì)熒光素 酶活性。
[0042] 結(jié)果如圖2所示，轉(zhuǎn)染了miRNA-491模擬物的細(xì)胞(miR-491)中，熒光素酶活性是對(duì) 照（ctl-miR)中的50%左右(？〈0.01)，而轉(zhuǎn)染了1^1?嫩-491抑制劑的細(xì)胞(31^丨11丨1?-491) 中，熒光素酶活性是對(duì)照(ctl-miR)中的1.1倍左右(p〈0.05)。該結(jié)果說明miRNA-491模擬物 通過DAT基因3'UTR VNTR抑制熒光素酶的表達(dá);并且miRNA-491抑制劑促進(jìn)該酶的表達(dá)。
[0043] 實(shí)施例2.mRNA水平分析
[0044] 使用熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SK-N-SH細(xì)胞，孵育5小時(shí)，然后分別用 miRNA-491模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染，孵育48小時(shí)。轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)24小時(shí)，然后通過使用SV Total RNAIsolation System(Promega)提取RNAJij^GoScript Reverse Transcription System 將尺財(cái)反轉(zhuǎn)錄成〇0財(cái)，所得的〇0嫩稀釋10倍，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量？0?，0?乂961^31-1:;[1116 35^七6111 (Bio-Rad, California, USA)，使用SYBR Premix Ex Taq Kit(TAKARA，Dalian，China)，用 GAPDH作為內(nèi)標(biāo)，分析mRNA表達(dá)水平。
[0045] 結(jié)果如圖3所示，轉(zhuǎn)染了miRNA-491模擬物的細(xì)胞(miR-491)中，DAT基因 mRNA表達(dá) 水平是對(duì)照（ctl-miR)中的30%左右(p〈0.001)，而轉(zhuǎn)染了miRNA-491抑制劑的細(xì)胞(anti-miR-491)中，mRNA表達(dá)水平是對(duì)照（ctl-miR)中的約1.8倍左右（p〈0.01)。該結(jié)果說明 miRNA-491模擬物降低該mRNA的活性;并且miRNA-491抑制劑提高該mRNA的表達(dá)。
[0046] 實(shí)施例3. DAT蛋白表達(dá)水平分析
[0047] 培養(yǎng)24小時(shí)后，用RIPA細(xì)胞裂解液（25mM Tris-HCl，150mM 恥(：1，1%陬-40，1%脫 氧膽酸鈉，0.1 % SDS，pH 7.6)處理細(xì)胞樣品，進(jìn)行12 %的SDS-PAGE電泳，
[0048] 然后進(jìn)行western印跡，將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜(Mi llipore ,Bedford，MA) 上，封閉。一抗使用鼠抗人 DAT 抗體（I: I 000-1:2 000, Abeam ,USA，Product code:ab5990， ablll468)，二抗使用山羊抗鼠（1:1，000;Cell Signaling Technology Inc. ,Beverly, Massachusetts ,USA)。等體積混合 Luminol 和 Peroxide 試劑（Thermo Fisher Scientific) 配制發(fā)光液，向轉(zhuǎn)印有蛋白質(zhì)的一面P V D F膜上滴加發(fā)光液，凝膠成像儀C h e m i D o c M P Imaging System(Bi〇-Rad,Hercules ,CA,USA)中曝光顯色。
[0049] 結(jié)果如圖4所示，與轉(zhuǎn)染了對(duì)照miRNA的細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染了miRNA-491的細(xì)胞中，DAT 蛋白量降低，并且轉(zhuǎn)染了miRNA-491抑制劑的細(xì)胞中，DAT蛋白量升高。該結(jié)果說明，miRNA-491 模擬物降低 DAT 蛋白 的表達(dá)，并且 miRNA 抑制劑提高 DAT 蛋白的表達(dá)。
[0050] 實(shí)施例4.多巴胺濃度的分析
[0051 ] 將細(xì)胞涂布于24孔培養(yǎng)皿(200，000細(xì)胞/孔），用miRNA-491模擬物、miRNA-491抑 制劑和陰性對(duì)照雙鏈miRNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染，孵育48小時(shí)。然后將細(xì)胞與5μg/ml鹽酸多巴胺孵育5 小時(shí)，使用多巴胺ELISA試劑盒（Elabscience ,Wuhan,Hubei ,China,Product code:E-EL-0046c)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)多巴胺濃度。
[0052] 結(jié)果如圖5所示，轉(zhuǎn)染了miRNA-491模擬物的細(xì)胞(miR-491)中，多巴胺是對(duì)照 (ctl-miR)中的 50%左右(ρ〈0·001)，而轉(zhuǎn)染了miRNA-491 抑制劑的細(xì)胞(anti-miR-491)中， 多巴胺略高于對(duì)照（ctl-miR)，但是沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。該結(jié)果說明miRNA-491模擬使神經(jīng) 細(xì)胞SK-N-SH中的多巴胺濃度降低;而miRNA-491抑制劑對(duì)多巴胺濃度影響不大。
[0053]通過以上實(shí)施例，證明了miRNA-491模擬物的轉(zhuǎn)染能夠降低細(xì)胞對(duì)多巴胺的攝取， 因此miRNA-491模擬物可用于降低人細(xì)胞攝取多巴胺，并且可用于制備降低人細(xì)胞攝取多 巴胺的藥物；同時(shí)證明了miRNA-491抑制劑的轉(zhuǎn)染能夠增加細(xì)胞對(duì)多巴胺的攝取，因此 miRNA-491抑制劑可用于增加人細(xì)胞攝取多巴胺，并且可用于制備降低人細(xì)胞攝取多巴胺 的藥物。
[0054]本發(fā)明還設(shè)想了用于降低人細(xì)胞攝取多巴胺的組合物，其包含miRNA模擬物，并且 還可包含藥學(xué)可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑或佐劑。
[0055]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和 原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。 <110>北京大學(xué)深圳醫(yī)院；深圳北京大學(xué)香港科技大學(xué)醫(yī)學(xué)中心 <120> 一種基于miRNA49〖調(diào)節(jié)DAT基因表達(dá)的方法 <160> 4 <170> PatentIji version 3,5 <210 1 <211> 22 <212> RNA <213> 智人
[0056] <400> 1 aguggggaac ccuuccauga gg 22 <210> 2 <211> 22 <212> RNA <21:3：>人工序列 <400> 2
[0057] agugggg.a:a.cj ccuuecauga gg 22 <210> 3 ^211 > 22 <212> RNA <213>人工序列 <400〉3 ccucauggaa ggguiicccca cu 22 <210> 4 <211> 993 <212> Ι)ΝΛ <213> 智人 <400> 4 agcgtgtact accccaggac gcatgcaggg cGcccacagg agcgtgtcct aiccccggac 60 cggacgcatg cagggcccec acaggagcgt gtactacccc aggacgcatg cagggceccc 120 acaggagcgt gtaetaGCGC aggatgcatg cagggccccc acaggagcgt gtaGtacccG 180
[0058] aggacgcatg cagggccccc atgcaggcag cctgcagace acaetctgcc tggccttgag 24€ ccgtgacctc caggaaggga ccccactgga attttatttc tctcaggtgc gtgccacatc .3::0.0. aataacaaca gtttttatgt ttgcgaatgg ctttttaaaa tcatatttac ctgtgaatca 360 aaacaaattc aagaatgcag tatccgcgag cctgcttgct gatattgcag tttttgttta 42Q. caagaataat tagcaatacr gagtgaagga tgttggccaa aagctgctlt ccatggcaca 480 ctgccctctg ccactgacag gaaagtggat gccatagttt gaattcatgc ctcaagtcgg 540 tgggcctgcc tacgtgctgc CCgaggSiL ig gggccgtgca gggccagtca tggctgtccc 600 ctgeaagtgg acgtgggctc cagggactgg agtgtaatgc tcggtgggag ccgtcagcct 660 gtgaactgec aggcagctgc agttagcaca gaggatggct tccccattgc cttctgggga 720 gggacacaga ggacggcttc cccatcgcct tctggccgct gcagtcagca cagagagcgg 780 cttccccatt gccttctggg gagggacaca gaggacagct tccccatcgc cttctggctg 840 ctgcagtcag cacagagagc ggcttcccca tcgccttctg gggaggggct ccgtgtagca 900
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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種調(diào)節(jié)細(xì)胞中的多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)的方法，其特征在于，包括以下步驟:提高 所述細(xì)胞中的miRNA-491的量從而下調(diào)所述多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因的表達(dá);或降低所述細(xì)胞中 的miRNA-491量，從而上調(diào)所述多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因的表達(dá)，所述miRNA-491的序列如SEQ ID NO: 1所示。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述提高所述細(xì)胞中的miRNA-491的量通 過將miRNA-491模擬物轉(zhuǎn)染至所述細(xì)胞中來進(jìn)行，所述miRNA-491模擬物的序列如SEQ ID NO: 2所示。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述降低所述細(xì)胞中的miRNA-491的量通 過將miRNA-491抑制劑轉(zhuǎn)染至所述細(xì)胞中來進(jìn)行，所述miRNA-491的序列如SEQ ID NO:3所 不。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞為人神經(jīng)細(xì)胞。 5. miRNA-491及其抑制劑在制備調(diào)節(jié)人細(xì)胞攝取多巴胺的藥物的應(yīng)用。6. -種用于調(diào)節(jié)人神經(jīng)細(xì)胞攝取多巴胺的組合物，其特征在于，包含miRNA-491或其抑 制劑，以及藥學(xué)可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑、佐劑中的一種或多種。
【文檔編號(hào)】C12N15/63GK105861532SQ201610219113
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月8日
【發(fā)明人】陳蕓, 陸林, 賈曉健, 王峰, 韓盈, 劉俐, 石宇, 孫德勝, 張蒂榮, 李明華, 劉漢清, 胡阿珍, 吳決連
【申請(qǐng)人】北京大學(xué)深圳醫(yī)院, 深圳北京大學(xué)香港科技大學(xué)醫(yī)學(xué)中心