專利名稱：使用α(2)巨球蛋白－抗原分子復合物治療癌癥和傳染病的方法和組合物的制作方法
本申請要求2003年2月20日提交的美國臨時申請No.60/449,022和2003年2月27日提交的美國臨時申請No.60/450,751的優(yōu)先權，所述申請都被全文并入本文作為參考。
本發(fā)明在國立衛(wèi)生研究院(the National Institutes ofHealth)授予的政府資助號CA A184479的支持下完成。政府在本發(fā)明中享有一定權利。
1.簡介本發(fā)明涉及從哺乳動物血清中分離的α(2)巨球蛋白復合物在治療和預防癌癥和傳染病的方法中的應用。本發(fā)明還包括制備α(2)巨球蛋白復合物的方法。本發(fā)明還包括用于制備衍生自血清的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的組合物和方法。
2.發(fā)明背景2.1.α(2)巨球蛋白α-巨球蛋白為結構相關蛋白的蛋白質超家族，所述結構相關蛋白還包括補體組分C3、C4、和C5。人血漿蛋白質α(2)巨球蛋白(α2M)為720kDa的均四聚蛋白質，主要被稱為蛋白酶抑制因子和血漿和炎性流體蛋白酶清除分子(綜述參見Chu和Pizzo，1994，Lab.Invest.，71792)。α2M合成為具有1474個氨基酸殘基的前體。前23個氨基酸起到信號序列的作用，其斷裂得到具有1451個氨基酸殘基的成熟蛋白(Kan等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，822282-2286)。
α(2)巨球蛋白以共價的方式雜亂地(promiscuously)結合于具有親核性氨基酸側鏈的蛋白質和肽(Chu等人，1994，Ann.N.Y.Acad.Sci.，737291-307)并使它們靶向于表達CD91的細胞(也稱為α2M受體或α2MR；Chu和Pizzo，1993，J.Immunol.，15048)。α2M與CD91的結合由α2M的羧基末端部分介導(Holtet等人，1994，F(xiàn)EBSLett.，344242-246)并且已經(jīng)識別了關鍵殘基(Nielsen等人，1996，J.Biol.Chem.，27112909-12912)。
通常已知對于抑制蛋白酶活性，α2M通過多個結合位點與多種蛋白酶結合(參見例如Hall等人，1981，Biochem.Biophys.Res.Commun.，100(1)8-16)。蛋白酶與α2M相互作用引起復合物結構重排，稱為變形，其為蛋白酶被硫酯“捕獲”之后α2M的“餌”區(qū)域內斷裂的結果。構象變化暴露出受體結合所需的殘基，使α2M-蛋白酶復合物結合于α2MR。甲胺可以誘導由蛋白酶誘導的類似構象變化和斷裂。受體不能識別的α2M的未斷裂形式通常稱為“慢”形式(s-α2M)。斷裂的形式稱為“快”形式(f-α2M)(由Chu等人綜述，1994，Ann.N.Y.Acad.Sci.，737291-307)。近來已經(jīng)表明α2MR可結合至HSP，如gp96、hsp90、hsp70、和鈣網(wǎng)蛋白(Basu等人，2001，Immunity，14(3)303-13)。
研究表明，除了其蛋白酶抑制作用之外，當與抗原形成復合物時，α2M可以提高抗原在體外被抗原呈遞細胞如巨噬細胞攝入并呈遞到T細胞雜交瘤的能力，最高可達兩個數(shù)量級；(Chu和Pizzo，1994，Lab.Invest.，71792)和誘導T細胞增殖的能力(Osada等人，1987，Biochem.Biophys.Res.Commun.，14626-31)。另外的證據(jù)暗示抗原與α2M復合增加了由天然脾臟細胞的體外抗體產(chǎn)生(Osada等人，1988，Biochem.Biophys.Res.Commun.，150883)，引起在實驗兔(Chu等人，1994，J.Immunol.，1521538-1545)和小鼠(Mitsuda等人，1993，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1011326-1331)中的體內抗體應答。α2M-抗原肽復合物還已經(jīng)表現(xiàn)出體內誘導細胞毒性T細胞應答(Binder等人，2001，J.Immunol.，1664698-49720)。
2.2.熱休克蛋白熱休克蛋白(HSP)，也稱為應激蛋白，最初作為由細胞響應熱休克合成的蛋白質而識別。Hsp根據(jù)分子量已經(jīng)分為5個家族，Hsp100、Hsp90、Hsp70、Hsp60、和smHsp。隨后發(fā)現(xiàn)這些家族的許多成員可以應答其它應激刺激而被誘導，包括營養(yǎng)剝奪、代謝中斷、氧自由基和胞內或胞外病原體感染(參見Welch，1993，ScientificAmerican56-64；Young，1990，Annu.Rev.Immunol.，8401-420；Craig，1993，Science，2601902-1903；Gething等人，1992，Nature，35533-45；和Lindquist等人，1988，Annu.Rev.Genetics，22631-677)。
熱休克蛋白為現(xiàn)有的最高度保守蛋白之一。例如，DnaK，來自大腸桿菌(E.coli)的Hsp70，具有約50％的氨基酸序列與來自脫皮的Hsp70蛋白質相同(Bardwell等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.，81；848-852)。Hsp60和Hsp90家族還表現(xiàn)出同樣高的家族內保守水平(Hickey等人，1989，Mol.Cell.Biol.，92615-2626；Jindal，1989，Mol.Cell.Biol.，92279-2283)。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Hsp60、Hsp70和Hsp90家族由序列上與應激蛋白有關的蛋白質組成，例如，具有大于35％的氨基酸同一性，但是其表達水平不因應激而改變。
對細胞對熱休克和其它生理應激的反應的研究顯示，HSP不僅參與對這些不利條件的細胞保護，而且參與無應激細胞所必需的生化和免疫過程中。HSP完成多種伴侶功能。例如，位于細胞質、細胞核、線粒體或內質網(wǎng)的Hsp70家族成員(Lindquist等人，1988，Ann.Rev.Genetics，22631-677)，參與將抗原呈遞到免疫系統(tǒng)的細胞，并且還參與正常細胞中蛋白質的轉運、折疊和裝配。HSP能夠結合蛋白質或肽，并在三磷酸腺苷(ATP)或低pH的存在下釋放結合的蛋白質或肽。
2.3.HSP-肽復合物的免疫原性Srivastava等人證明了對近親繁殖小鼠的甲基膽蒽誘導的免疫應答(1988，Immunol.Today，978-83)。在這些研究中，發(fā)現(xiàn)對這些腫瘤各自不同的免疫原性可應答的分子為96kDa的糖蛋白(gp96)和84到86kDa的細胞內蛋白(Srivastava等人，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，833407-3411；Ullrich等人，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，833121-3125)。用從患特定腫瘤的小鼠分離的gp96或p84/86對小鼠免疫可使小鼠對該特定腫瘤免疫，但是對抗原性不同的腫瘤不免疫。分離和表征編碼gp96和p84/86的基因顯示它們之間存在顯著的同源性，并且表明gp96和p84/86分別為同一熱休克蛋白的內質網(wǎng)和細胞質配對物(Srivastava等人，1988，Immunogenetics 28205-207；Srivastava等人，1991，Curr.Top.Microbiol.Immunol.167109-123)。此外，從腫瘤分離的Hsp70對該腫瘤表現(xiàn)免疫性，但是對抗原性不同的腫瘤沒有免疫性(Udono和Srivastava，1993，J.Exp.Med.1781391-1396)。這些觀察提示熱休克蛋白本身不具有免疫性，但是與抗原肽形成非共價鍵的復合物時，該復合物可以對抗原肽特異性免疫(Srivastava，1993，Adv.Cancer Res.62153-177；Udono等人，1994，J.Immunol.，1525398-5403；Suto等人，1995，Science，2691585-1588)。
從癌細胞純化的HSP和肽的非共價鍵復合物可用于治療和預防癌癥，并且其已經(jīng)在PCT公開1996年4月11日的WO 96/10411、1997年3月20日的WO 97/10001(分別為于1998年4月12日授權的美國專利5,750,119和1998年11月17日授權的美國專利5,837,251，其都被并入本文作為參考)中有所描述。已經(jīng)描述了從例如病原體感染的細胞分離和純化應激蛋白-肽復合物，并且其可用于治療和預防由病原體如病毒和其它胞內或胞外病原體包括細菌、原生動物、真菌和寄生蟲引起的感染(參見例如PCT公開1995年9月21日的WO 95/24923)。也可以通過使應激蛋白和抗原肽體外復合制備免疫原性應激蛋白-肽復合物，并且這種復合物用于治療和預防癌癥和傳染病的應用已經(jīng)在PCT公開1997年3月20日的WO 97/10000(于2000年2月29日授權的美國專利6,030,618)中有所描述。應激蛋白-肽復合物體外用于過繼免疫治療中使抗原呈遞細胞致敏的應用在PCT公開1997年3月20日的WO 97/10002(也參見于1999年11月16日授權的美國專利5,985,270)中有所描述。
2.4.α(2)巨球蛋白受體、或“CD91”α(2)巨球蛋白受體(本文中可互換地稱作“α2MR”或“α2M受體”)，也已知為LDL(低密度脂蛋白)受體-相關蛋白(“LRP”)或CD91，主要在肝臟、腦和胎盤中表達。α2M受體為低密度脂蛋白受體家族成員。人受體的細胞外區(qū)域包括六個50-氨基酸EGF重復(repeat)和31個具有約40-42氨基酸的補體重復。補體重復從氨基末端到羧基末端組織為2、8、10和11個重復的簇，稱為簇I、II、III和IV(Herz等人，1988，EMBOJ.，74119-4127)。一項研究針對包含補體重復3-10(CR3-10)的簇II(C1-II)，作為受體的主要配體結合部分(Horn等人，1997，J.Biol.Chem.，27213608-13613)。α2M受體在多種配體的胞吞作用中起作用。除了α2M之外，α2MR的其它配體包括脂蛋白復合物、乳鐵蛋白、組織型纖溶酶原活化因子(tPA)、尿激酶型纖溶酶活化因子(uPA)和外毒素。α2MR的配體的另外的例子可以在PCT公開WO97/04794和美國專利6,156,311中找到。因此，α2M受體在多種細胞代謝過程中起作用，包括胞吞作用、抗原呈遞、膽固醇調節(jié)、含ApoE的脂蛋白清除和乳糜微粒殘余的除去。
人α2M被合成為1474個氨基酸的前體，前23個氨基酸起到信號序列的作用，其斷裂得到1451個氨基酸的成熟蛋白(Kan等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，822282-2286)。在重組蛋白實驗中，發(fā)現(xiàn)α2M的羧基末端的138個氨基酸(代表成熟蛋白的氨基酸1314-1451)結合受體。這一區(qū)域已經(jīng)被稱為RBD(受體結合區(qū)域；Salvesent等人，1992，F(xiàn)EBS Lett.，313198-202；Holtet等人，1994，F(xiàn)EBS Lett.，344242-246)。RBD變體(RBDv)，包括另外的15個氨基末端殘基的α2M的蛋白酶解片段(代表成熟蛋白的氨基酸1314-1451)以與α2M-蛋白酶幾乎相同的親合力結合受體(Holtet等人，1994，F(xiàn)EBS Lett.，344242-246)。
α2MR配體的序列對比識別了存在于α巨球蛋白RBD中的保守區(qū)域。保守序列包括人α2M的氨基酸1366-1392。這一區(qū)域內的保守殘基為Phe1366、Leu1369、Lys1370、Val1373、Lys1374、Glu1377、Val1382、Arg1384(Nielsen等人，1996，J.Biol.Chem.，27112909-12912)。這其中，Lys1370和LYS1374表現(xiàn)出對于受體結合具有至關重要的作用(Nielsen等人，1996，J.Biol.Chem.，27112909-12912)。
配體與α2MR的結合，包括與α2M的結合，被α2MR相關蛋白(RAP)抑制。RAP為存在于內質網(wǎng)中的39kDa的折疊伴侶蛋白并且為α2MR的正常加工所需。RAP能夠競爭性地抑制所有α2MR與所有受試的α2MR配體的結合。一項研究表明，RAP結合于α2MR的簇II(C1-II)中的補體重復C5-C7(Horn等人，1997，J.Biol.Chem.，27213608-13613)；另一項研究表明RAP結合于C1-II中除C9-C10組件(module)之外的所有的雙補體重復組件(Andersen等人，J.Biol.Chem.，2000年3月24日，PMID10747921；印刷前以電子形式發(fā)表)。在RAP中已經(jīng)識別了三個結構域，分別由氨基酸殘基18-112、113-218和219-323組成。重組RAP域的配體競爭滴定法表明，抑制受試配體的決定簇在域1和3的C末端區(qū)域中(Ellgaard等人，1997，Eur.J.Biochem.，244544-51)。
2001年12月6日公開的PCT公開WO 01/92474中也描述了CD91作為熱休克蛋白受體的應用、表達結合于HSP的CD91的細胞、結合CD91-HSP復合物的抗體和其它分子、識別調節(jié)HSP與CD91相互作用的化合物的篩選分析、使用包括CD91的組合物的方法和用于診斷和治療免疫性疾病和增殖性疾病和傳染病的CD91序列。用于免疫治療中的與抗原分子結合的α(2)巨球蛋白的復合物和用于在增殖性疾病和傳染病的診斷和治療中使用這種組合物的方法在PCT公開2001年12月6日公開的WO 01/91787中也有描述。Binder等人表明，體外重組的α(2)巨球蛋白和抗原肽的復合物引起特異性CTL應答(Binder等人，2001，J.Immunol.，1664968-4972)。
2.5.抗原呈遞主要組織相容性復合物(MHC)分子將抗原呈遞到抗原呈遞細胞的細胞表面上。根據(jù)抗原來源于胞內還是胞外，其通過兩種不同的抗原加工途徑處理。胞內的或內源性蛋白質抗原，即在抗原呈遞細胞內合成的抗原，由MHC的I類(MHC I)分子呈遞到CD8+細胞毒性T淋巴細胞。另一方面，胞外的或外源合成的抗原決定簇在“專門的”或“專業(yè)的”APC(例如巨噬細胞)的細胞表面上由MHC的I I類分子呈遞到CD4+T細胞(通常參見Fundamental Immunology，W.E.Paul(主編)，NewYorkRaven Press，1984)。這種抗原加工途徑的區(qū)分對于防止在免疫應答過程中因不加區(qū)分由于相鄰細胞MHC I抗原釋放而發(fā)生的組織破壞是重要的。
熱休克蛋白有多種肽伴侶，取決于分離HSP的來源(綜述參見Srivastava等人，1998，Immunity，8657-665)。來源于腫瘤的HSP攜帶腫瘤-抗原肽(Ishii等人，1999，J.Immunology，1621303-1309)；來源于病毒感染的細胞的gp96制品攜帶病毒抗原表位(Suto和Srivastava，1995，Science，2691585-1588；Nieland等人，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，951800-1805)，來源于用模型抗原如卵清蛋白或β-半乳糖苷酶轉染的細胞的gp96制品與相應的表位有關(Arnold等人，1995，J.Exp.Med.，182885-889；Breloer等人，1998，Eur.J.Immunol.，281016-1021)。gp96與肽的結合在體內發(fā)生(Menoret和Srivastava，1999，Biochem.Biophys.Research Commun.，262813-818)。HSP-肽復合物，無論是從細胞分離(Tamura等人，1997，Science，278117-120)還是體外重組的(Blachere等人，1997，J.Exp.Med.，1861183-1406)，都是優(yōu)異的免疫原，并且已經(jīng)廣泛地用于激發(fā)對于HSP-伴侶的抗原肽特異性的CD8+T細胞應答。
HSP-肽復合物激發(fā)免疫應答的能力取決于肽向抗原呈遞細胞的MHC I類分子的轉運(參見例如Suto和Srivastava，1995，同前)。由內質網(wǎng)[ER]中gp96陪伴的內源合成的抗原可在體內接觸(prime)抗原特異性CD8+T細胞(或MHC I-限制CTL)；CD8+T細胞的這種接觸抗原需要巨噬細胞。然而，沒有完全理解外源引入的gp96-肽復合物激發(fā)抗原特異性CD8+T細胞應答的過程，因為沒有胞外抗原易位到一型呈遞機構的確定途徑。然而，與HSP有關的胞外來源的抗原肽以某種方式被巨噬細胞捕獲，引導到內源途徑中并由MHC I分子呈遞，由CD8+淋巴細胞識別(Suto和Srivastava，1995，同上；Blachere等人，1997，J.Exp.Med.，1861315-22)。
2.6.HSP-CD91相互作用Basu等人報告的研究表明，熱休克蛋白gp96、hsp90、hsp70和鈣網(wǎng)蛋白為CD91的附加配體(Basu等人，2001，同前)。Gp96嵌入CD91，位于稱為p80片段的氨基末端片段中(Binder等人，2000，Nature immunology，1151-155；WO 01/92474)。人gp96編碼基因已經(jīng)預先由我們在染色體12作圖(q24.2 q24.3)(Maki等人，1993，Somatic Cell Mol.Gen.，1973-81)。關于這點有趣的是，CD91基因已經(jīng)被作圖到相同的染色體上并位于不大遠的部位(q13q14)(Hilliker等人，Genomics，13472-474)。Gp96直接結合CD91，而不是通過其它配體如α2M。在溶液中或交聯(lián)到固體基質的gp96均一制品結合于CD91。實際上，CD91的主要配體，α2M抑制而不是促進gp96與CD91的相互作用，證明gp96為CD91的直接配體。表現(xiàn)為結合gp96的80kDa蛋白，p80，顯而易見為CD91的α亞單位的氨基末端降解產(chǎn)物(Binder等人，2000，Nature immunology，1151-155)。在先前的研究中也觀察到這種大小范圍的CD91的降解產(chǎn)物(Jensen等人，1989，Biochem.Arch.，5171-176)，并且可能表明CD91中可能對蛋白酶解切割特別敏感的離散胞外域的存在。
Basu等人的α2巨球蛋白和抗CD91抗體完全抑制由四種HSP中每一個的再呈遞的觀察表明CD91為四種HSP的唯一受體(Basu等人，2001，同前)。考慮到HSP在先天性(Basu等人，2000，Int.Immunol.，12(11)1539-1546)和獲得性免疫應答中愈加顯而易見的作用，這種觀察結果在某種程度上與直覺相反。然而，通過兩種獨立方式的完全抑制的數(shù)據(jù)是相當引人注目的(PCT公開2001年12月6日的WO01/92474)。Binder報告了hsp70和hsp90/gp96之間在與結合gp96受體的競爭能力的顯著差別(Binder等人，2000，J.Immunol.，1652582-2587)。另一小組也觀察到gp96和hsp70之間的類似差別(Amold-Schild等人，1999，1623757-3760)。這些差別與Basu針對四種HSPs的單個受體的報告并不是不一致。它們只是暗示了不同的HSP以差異較大的親合力與單個受體相互作用。
如Binder等人所示，熱休克蛋白-CD91相互作用為CD91或其片段提供了新作用，即傳感器的作用，不僅是與其預先已知的基于血漿的配體的胞外環(huán)境的傳感器，而且是胞內環(huán)境的傳感器。HSP如gp96為專性胞內分子，其只在壞死性(但不是凋亡性)細胞死亡條件下釋放到胞外環(huán)境中(PCT公開2001年12月6日的WO 01/92474)。因此，CD91可作為壞死性細胞死亡的傳感器，正象清道夫受體CD 36和近來識別的磷脂酰絲氨酸-結合蛋白起到凋亡性細胞死亡的傳感器和凋亡性死亡細胞的受體的作用(Savill等人，1992，J.Clin.Invest.，901513-1522；Fadok等人，2000，Nature，40585-90)。巨噬細胞與凋亡細胞的相互作用引起炎性細胞因子如TNF的下調(Fadok等人，2000，同前)，而gp96-APC相互作用引起gp96伴侶肽由APC的MHC I分子的再呈遞，隨后抗原特異性T細胞興奮(Suto和Srivastava，1995，同前)，并且，前炎性細胞因子如TNF、GM-CSF和IL-12的分泌。有趣的是，α2M，CD91的獨立配體，抑制gp96-伴侶肽由巨噬細胞的再呈遞。Binder的這一觀察結果暗示gp96-陪伴肽的再呈遞在血液中不能生理學地發(fā)生，而只能在組織內由局部壞死性細胞死亡引起。這與在所有測試條件下血液中完全沒有gp96或其它HSP一致?？偟膩碚f，Binder的觀察指出由于嚴重的組織損傷和溶胞引起的血液中HSP的釋放不會引起全身性的和致命的前炎性細胞因子級聯(lián)反應的可能機制。
因此，有可能是CD91賦予APC(i)通過α2M和其它血漿配體到血液的胞外環(huán)境采樣和(ii)通過HSP，特別是gp96家族到組織的胞內環(huán)境樣品中的可能性。前者允許APC實施其原始的吞噬功能，而后者允許其執(zhí)行其先天性和獲得性免疫學功能。從另一個角度看，由APC通過CD36或者磷脂酰絲氨酸識別凋亡細胞產(chǎn)生抗炎信號，而APC通過CD91與壞死細胞的相互作用引起前炎性的先天性和后天性性免疫應答(參見Srivastava等人，1998，Immunity，8657-665)。
不應將本文中對參考文獻的引用或討論認為是對其為本發(fā)明的現(xiàn)有技術的認可。
3.發(fā)明內容本發(fā)明涉及使用α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物治療和預防癌癥和傳染病的方法和組合物，該復合物來源于患有癌癥或傳染病的患者的體液。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物為要治療的患者自體的。本發(fā)明部分基于申請人的以下發(fā)現(xiàn)可以在患有癌癥或傳染病的患者的血流中發(fā)現(xiàn)并從中分離對腫瘤或病原體特異性的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。此外，申請人發(fā)現(xiàn)，可以從患者的血流中分離足夠量的這種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物，用于自體免疫治療。在癌癥治療方面，這一發(fā)現(xiàn)使得能夠制備定向于在每個單獨患者的腫瘤上表達的特異性抗原的高度特異性、個體化的免疫治療劑，而無需首先表征或識別這種抗原。這種使用α(2)巨球蛋白復合物的自體免疫治療在本文中表現(xiàn)為在癌癥的治療和預防中都是高度有效的。此外這種結果可以延伸到治療和預防傳染病的應用中。
申請人發(fā)現(xiàn)，使用從雄性小鼠純化的α(2)巨球蛋白復合物免疫雌性C57BL/6小鼠，使其具有抗雄性反應(Binder等人，2002，CancerImmunity，第2卷16)。得到α(2)巨球蛋白-雄性抗原復合物并用于引發(fā)免疫應答。Binder等人證明，可以從正常雄性小鼠的血清分離在雄性小鼠中表達的Y抗原，其為與α(2)巨球蛋白的復合物形式。Binder等人然后將這種基本概念應用到癌癥免疫上，并證明由體外重組的α(2)巨球蛋白-肽復合物引起的免疫性在預防腫瘤中是有效的(Binder等人，2002，同前)。
大多數(shù)腫瘤不產(chǎn)生α(2)巨球蛋白，并且即使產(chǎn)生α(2)巨球蛋白的那些如肝細胞來源的腫瘤也只在胞內產(chǎn)生α(2)巨球蛋白。本發(fā)明部分基于申請人的以下發(fā)現(xiàn)腫瘤或帶有病原體的細胞將抗原釋放到體液如血液中，在那里它們可以與α(2)巨球蛋白形成復合物。
本發(fā)明提供治療或預防患者的癌癥或傳染病的方法，所述方法包括對需要所述治療或預防的患者施用有效治療或預防患者的癌癥或傳染病的量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物，其中所述復合物分離自患有癌癥或傳染病的哺乳動物的體液。
本發(fā)明另外還提供治療或預防患者癌癥或傳染病的方法，其包括步驟a)從患有所述癌癥或傳染病的哺乳動物的體液分離α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物；和b)對所述患者施用有效治療或預防所述癌癥或傳染病的量的所述分離的復合物。在一個具體的實施方案中，復合物為與不同抗原分子結合的α(2)巨球蛋白的復合物的群體，其中不同的抗原分子包括對所述癌癥或傳染病特異性抗原具有抗原性的抗原分子。在另一個具體的實施方案中，該方法用于治療癌癥和患有癌癥的患者，并且抗原分子來源于腫瘤。在本發(fā)明的另一個具體實施方案中，該方法用于治療癌癥和患有癌癥的患者，并且通過患者腫瘤尺寸縮小或腫瘤數(shù)目的減少評價所述癌癥治療的效果。在另一個具體實施方案中，該方法用于預防癌癥并且患者需要這種預防，并且所述抗原分子表現(xiàn)為對所述癌癥特異性抗原具有抗原性的抗原。在另一個具體的實施方案中，該方法用于預防傳染病并且患者需要這種預防，并且所述抗原分子表現(xiàn)為對所述傳染病相關病原體的特異性抗原具有抗原性的抗原。在另一個實施方案中，該方法用于治療癌癥和患有癌癥的患者，并且該方法另外在步驟(b)之前或同時包括對所述患者施用化療劑的步驟。在另一個具體的實施方案中，該方法用于治療癌癥和患有癌癥的患者，并且該方法另外在步驟(a)之前或同時包括在所述哺乳動物中誘導腫瘤壞死的步驟。在另一個具體的實施方案中，誘導腫瘤壞死的步驟包括對所述哺乳動物施用腫瘤壞死藥物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供在患者中刺激針對癌癥或傳染病免疫應答的方法，其包括a)從哺乳動物的體液分離α(2)巨球蛋白復合物，和b)對患者施用所分離的α(2)巨球蛋白復合物，以刺激免疫應答。在一個具體的實施方案中，患者為人類患者。在另一個具體的實施方案中，α(2)巨球蛋白復合物為與不同抗原分子結合的α(2)巨球蛋白的復合物的群體，其中不同的抗原分子包括對所述癌癥或傳染病特異性抗原所具有抗原性的抗原分子。在另一個具體的實施方案中，該方法用于刺激免疫應答對抗患有癌癥的患者中的抗癌，并且該方法另外在步驟(a)之前或同時包括在所述哺乳動物中誘導腫瘤壞死的步驟。在另一個具體的實施方案中，誘導腫瘤壞死的步驟包括對所述哺乳動物施用腫瘤壞死藥物。
本發(fā)明另外還提供預防哺乳動物癌癥的方法，所述方法包括施用有效量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物，所述復合物分離自所述哺乳動物的體液，所述哺乳動物患有癌前病變或息肉。在該方法的一個具體實施方案中，哺乳動物為人。
本發(fā)明另外還提供預防第一哺乳動物的癌癥的方法，所述方法包括施用有效量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物，所述復合物分離自第二哺乳動物的體液，所述第二哺乳動物患有癌前病變或息肉。在一個具體實施方案中，復合物為與一種或多種不同抗原分子結合的α(2)巨球蛋白的復合物的群體，其中不同的抗原分子包括至少一種對所述癌癥或傳染病特異性抗原具有抗原性的抗原分子。在另一個具體的實施方案中，復合物為所述患者自體的。在另一個具體的實施方案中，在施用之前純化所述復合物。在另一個具體實施方案中，所述體液為脈管流體。在另一個具體的實施方案中，脈管流體為來自血液的血清。在另一個具體的實施方案中，體液為脈管外的腹水或腦脊液。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供藥物組合物，其包括(a)從患有癌癥或傳染病的哺乳動物的體液分離的多種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物，所述多種復合物包括至少一種以下復合物其包括α(2)巨球蛋白和抗原分子，該抗原分子表現(xiàn)為具有腫瘤或傳染物特異性抗原的抗原性的抗原；和(b)有效量的藥用載體。在一個具體的實施方案中，體液為脈管流體血清。在另一個具體的實施方案中，脈管流體為來自血液的血清。在另一個具體的實施方案中，體液為脈管外的腹水或腦脊液。
本發(fā)明另外還提供疫苗，其包括(a)從患有癌前病變或息肉的哺乳動物的體液分離的多種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物，所述多種復合物包括至少一種以下復合物其包括α(2)巨球蛋白和抗原分子，該抗原分子表現(xiàn)為具有腫瘤或傳染物特異性抗原的抗原性的抗原；和(b)有效量的藥用載體。在具體的實施方案中，將多種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物純化。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供藥物組合物，其包括(a)包括α(2)巨球蛋白和具有腫瘤或傳染病抗原性的抗原分子；(b)選自以下的藥物HSP-肽復合物、抗腫瘤藥、抗體、細胞因子、抗病毒藥、抗真菌藥、抗生素、和化療劑；和(c)有效量的藥用載體。在一個具體的實施方案中，藥物為化療劑。在另一個具體的實施方案中，將α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物純化。
本發(fā)明另外還提供增加哺乳動物的體液中包括α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物的方法，所述方法包括在所述哺乳動物中誘導腫瘤壞死。在一個具體的實施方案中，誘導腫瘤壞死的步驟包括對哺乳動物施用腫瘤壞死藥物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供藥盒，其在一個或多個容器中包括藥學可接受形式的治療或預防有效量的共價或非共價的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
本發(fā)明另外還提供增加哺乳動物體液中包括α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物的存在的方法，所述方法包括在所述哺乳動物中誘導腫瘤壞死。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供制備包括α(2)巨球蛋白和具有癌前病變、腫瘤或傳染病抗原性的抗原分子的復合物的方法，其包括a)從患有癌前病變、腫瘤或傳染病的患者抽取血清；和b)從所述血清回收α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。在一個具體的實施方案中，該方法用于治療或預防癌癥，并且所述方法另外包括對所述患者施用治療或預防癌癥有效量的所回收復合物的步驟。在該方法一個具體的實施方案中，從所述血清回收α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的步驟包括a)使包含α(2)巨球蛋白結合分子的固相與血清接觸足夠使α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物結合于固相的時間；b)除去未結合于所述固相的物質；和c)從固相洗脫結合的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。在一個具體的實施方案中，α(2)巨球蛋白結合分子為α(2)巨球蛋白特異性抗體。在另一個具體的實施方案中，α(2)巨球蛋白結合分子為CD91的配體結合片段。
本發(fā)明另外還提供制備包括α(2)巨球蛋白和具有癌前病變、腫瘤或傳染病抗原性的抗原分子的復合物的方法，其包括a)從患有癌前病變、腫瘤或傳染病的患者抽取血清；和b)分級分離血清以富集α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。在一個具體的實施方案中，使血清與試劑接觸的步驟促進在α(2)巨球蛋白和抗原分子之間共價鍵的形成。在另一個具體的實施方案中，試劑為蛋白酶、氨、甲胺或乙胺。
在各個實施方案中，本發(fā)明方法的體液為脈管流體。在其它實施方案中，脈管流體為來自血液的血清。在其它實施方案中，體液為脈管外的腹水或腦脊液。
如本文中使用的，“α(2)巨球蛋白”是指α(2)巨球蛋白多肽，及其肽結合片段、衍生物、模擬物和類似物。
術語“包括α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物”或“α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物”在本文中可互換地使用，是指結合于抗原分子的α(2)巨球蛋白蛋白質或多肽、或其肽結合片段。結合可為α(2)巨球蛋白蛋白質或多肽與抗原分子之間的共價或非共價結合。
如本文中使用的，術語“體液”是指可用于制備α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的任何體液。體液包括脈管流體和脈管外流體。脈管外流體包括但不限于腹水液、腦液、組織淋巴液、初乳和精液。在一個優(yōu)選實施方案中，體液為血液。在一個具體的優(yōu)選實施方案中，體液為從血液分離的血清。
4.附圖簡述

圖1表示在使用α(2)巨球蛋白復合物免疫的小鼠組中在18天期間腫瘤生長尺寸(mm3)的圖。對首次用于實驗的小鼠免疫以檢測復合物是否會提供預防作用。A，使用PBS免疫的小鼠作為陰性對照，稱為PBS1；B，使用輻照過的Meth A腫瘤細胞免疫的小鼠；C-F，使用從患有皮內Meth A腫瘤的小鼠血清分離的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物免疫的3組小鼠(標記為“腹水1-3”)(每組5只小鼠)；G-I，使用其中腫瘤用漂白劑處理的患有腫瘤的小鼠的血清分離的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物免疫的3組小鼠(標記為“漂白劑1-3”)(每組5只小鼠)；J，使用從無腫瘤小鼠的血清分離的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物免疫的小鼠；K，使用MethA衍生的gp96免疫的小鼠；L，使用與MethA10(來源于MethA腫瘤溶解產(chǎn)物的＜10kDa的肽)復合的α2M免疫的小鼠；M，使用肝臟來源的gp96免疫的小鼠；N使用與MethA10復合的gp96(稱為gp96-MethA10)免疫的小鼠；和0，使用PBS(稱為PBS2)免疫的小鼠。
5.發(fā)明詳述本發(fā)明涉及在治療和預防癌癥或傳染病中使用從哺乳動物的血清分離的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的組合物和方法。本發(fā)明包括來源于患有癌癥或傳染病的患者的體液的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物用于治療或預防所述癌癥或傳染病的方法。這種方法包括癌癥和傳染病的自體治療方法和用于預防癌癥和傳染病的疫苗。本發(fā)明還包括含多種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的藥物組合物，并且藥物組合物包括與用于治療癌癥或傳染病的治療劑在一起的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。本發(fā)明還包括增加哺乳動物血清中α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的量方法。
5.1.本發(fā)明的藥物組合物本發(fā)明提供包括可用于治療和/或預防癌癥或傳染病的從哺乳動物血清分離的α(2)巨球蛋白復合物的藥物組合物，這種組合物還可任選地包括通常用于治療癌癥和傳染病的藥物，例如但不限于，HSP-肽復合物、抗腫瘤藥、抗體、細胞因子、抗病毒藥、抗真菌藥、抗生素或化療劑。本發(fā)明的藥物組合物也可包括部分5.4中用于定向癌癥、部分5.5中用于定向傳染病和部分5.3.3中定向癌癥和傳染病的聯(lián)合治療中所述的藥物。本發(fā)明的藥物組合物還包括部分5.9中所述的那些藥用載體。本發(fā)明的藥物組合物對于自體治療特別有效。這種藥物組合物也可包括助劑和/或誘導或增加抗原分子產(chǎn)生的藥物。在某些實施方案中，藥物引起腫瘤壞死。本文描述了制備這種藥物組合物的方法。本文還描述了在分離這種復合物之前或同時增加血清中抗原分子和/或α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的存在量的方法。
本發(fā)明的藥物組合物和方法包括α(2)巨球蛋白與抗原肽群體的復合物。藥物組合物表現(xiàn)出可以在誘導腫瘤部位的炎性反應并可最終引起被治療的癌癥患者中腫瘤負荷的退化。通過本發(fā)明方法制備的組合物可以提高個體的免疫能力并引起對傳染物的特異性免疫或對前腫瘤細胞和腫瘤細胞的特異性免疫。這些組合物具有預防傳染病的發(fā)病和發(fā)展和抑制腫瘤細胞生長和發(fā)展的能力。
在具體的實施方案中，將α2M復合物對正接受用于治療癌癥或傳染病的另一種治療模式的患者施用，其中該患者對于單獨治療模式的治療可能無應答或具有難治性，即至少一些關鍵部分的癌細胞或病原體沒有被殺死或它們的細胞分裂沒有被抑制。可以使用本領域中已知的方法體內或體外分析檢測治療模式的有效性。本領域接受的難治性的含義為癌癥領域中已知的。在一個實施方案中，其中癌癥或傳染病分別為難治性的或無應答的，癌細胞或病原體的數(shù)目沒有顯著地減少，或有所增加。這些正接受治療的患者為正接受化療或放療的那些。
在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物包括經(jīng)過純化的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。在這些實施方案中，α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的純度至少為30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
5.2.α(2)巨球蛋白復合物的制備通常，可以通過已知方法從哺乳動物的血清回收并純化本發(fā)明的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物，包括硫酸銨沉淀、酸萃取、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素(phosphocellulose)層析、免疫親和層析、羥磷灰石層析和凝集素層析。
在一個實施方案中，使用親和純化技術從血清純化α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。蛋白質的層析分級方法如親和層析為本領域中公知的。簡單說來，親和層析在結合反應中利用固定的結合配偶體特異性地捕捉蛋白質。親和捕捉試驗的結合配偶體分子可包括例如α(2)巨球蛋白的抗體或其它配體如特異性地結合α(2)巨球蛋白的CD91結合域?；蛘撸瑸V膜結合試驗利用裝置如固相表面如過濾器或柱，基于復合物和未結合反應物之間的某些物理或化學差別非特異性地保持蛋白質或蛋白質復合物。親和層析和/或濾膜結合分離技術可用于從本文所述的血清或其它體液分離α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
在本發(fā)明的一個具體實施方案中，根據(jù)如下方式從血清分離α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物使血清接觸固相如瓊脂糖柱，其包含α(2)巨球蛋白的結合配偶體，即α(2)巨球蛋白結合分子。使血清在固相上培養(yǎng)足夠使α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物與固相結合的一段時間。然后從固相除去未結合的物質；并從固相洗脫結合的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
α(2)巨球蛋白的結合配偶體可為特異性結合于α(2)巨球蛋白的任何分子。在一個優(yōu)選實施方案中，α(2)巨球蛋白結合分子為α(2)巨球蛋白特異性的抗體。優(yōu)選α(2)巨球蛋白特異性抗體為單克隆抗體。在另一個優(yōu)選實施方案中，α(2)巨球蛋白結合分子為CD91的配體結合片段。
固相可為任何表面或基質，例如但不限于聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、玻璃、硝化纖維素、右旋糖酐、尼龍、聚丙烯酰胺和瓊脂糖。載體結構可包括小珠；膜；微粒；反應容器如微量滴定板、試管或其它反應容器的內表面。
在一個優(yōu)選實施方案中，α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物從小鼠血清分離。通過用0.04M Tris pH 7.6、0.15M NaCl以1∶1稀釋血清，然后將混合物施用于用相同的緩沖液平衡并洗脫的Sephacryl S300R(Sigma)柱。65ml柱用于約10ml血清。通過斑點印跡檢測α(2)巨球蛋白陽性級分并使用PD-10柱將緩沖液變?yōu)閜H為7.5的0.01M磷酸鈉緩沖液。在選擇性的方法中，可在65ml柱中使用pH7.5的0.01M磷酸鈉緩沖液作為緩沖液以省去更換緩沖液的步驟。將含復合物的級分施用于伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠柱。用0.2M甲基甘露糖吡喃糖苷或5％甲基甘露糖吡喃糖苷洗脫結合的復合物，并用于PD-10柱改變緩沖液為pH6.0的0.05M乙酸鈉緩沖液，并施用于用pH6.0的0.01M乙酸鈉緩沖液平衡的DEAE柱。用0.13M乙酸鈉緩沖液洗脫α(2)巨球蛋白為純形式，并用SDS-PAGE和免疫印跡法分析。
上述實施方案可用于從哺乳動物細胞例如包含本發(fā)明的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的血液的血清回收和純化α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。該方法可用于實施中到大量的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的純化。最優(yōu)選不需要降低pH或變性條件的方法用于α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的純化。該方法可用于從真核細胞如癌細胞、組織、分離細胞；或用胞內或胞外病原體感染的永生真核細胞系；或得自病原體感染的患者的細胞分離α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
在應用上述分離和純化方法時，本領域技術人員會知曉使用過于苛刻的試劑及條件可能使復合物解離。
在另一個實施方案中，在將其對患者施用之前處理從血清分離的α2M多肽和抗原分子的復合物，以使α2M多肽與抗原肽共價復合。本文詳細描述了形成這種共價的α2M-抗原分子復合物的方法。
通常，當α2M與蛋白酶混合時，發(fā)生α2M的“餌”區(qū)域的斷裂，蛋白酶被硫酯“捕捉”并發(fā)生構象變化，使得α2M復合物可結合于CD91。在α2M的蛋白水解活化過程中，未蛋白水解的配體可共價結合于活化的硫酯。未蛋白水解的配體也可在使用加熱親核活化的反轉過程中由氨或甲胺結合到活化的α2M分子中(Gron和Pizzo，1998，Biochemistry，37；6009-6014)?？捎搔?M不規(guī)則捕捉肽的這種條件用于制備本發(fā)明的α2M-抗原復合物。這種共價結合的方法先前已經(jīng)有所描述(Osada等人，1987，同前；Osada等人，1988，同前；Chu和Pizzo，1993，同前；Chu等人，1994，同前；Mitsuda等人，1993，同前)。
例如，在一個具體的實施方案中，在蛋白酶、氨或其它小的胺親核體如甲胺和乙胺的存在下將富集α2M多肽的血清級分與抗原分子(其可共價結合或未共價結合)混合?？墒褂玫牡鞍酌傅姆窍拗菩岳影ㄒ鹊鞍酌?、豬胰彈性蛋白酶(PEP)、人嗜中性彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、S.aureus V-8蛋白酶胰蛋白酶、a-胰凝乳蛋白酶、V8蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K(參見Ausubel等人，(編輯)，在“Current Protocolsin Molecular Biology”中，Greene Publishing Associates andWiley Interscience，New York，17.4.6-17.4.8)。本文提供了使存在于血清中的α2M多肽和抗原分子共價復合的優(yōu)選示例性方案。在一個具體的實施方案中，以下方案可用于增加α2M-抗原分子共價復合物的數(shù)量。用甲胺或蛋白酶如胰蛋白酶(在約500ml PBS(磷酸緩沖鹽水)中的0.92mg胰蛋白酶)處理包括α2M抗原分子復合物(1μg-20mg)的血清級分(100μl-5ml)。然后在37℃培養(yǎng)混合物5-15分鐘。如果使用胰蛋白酶，則向溶液加入500ml的4mg/ml對-脒基苯基甲烷磺酰氟(p-APMSF)以抑制胰蛋白酶活性并在25℃培養(yǎng)2小時。任選地，可通過膠凝滲透柱除去游離的抗原分子。
復合之后，可以使用例如如下所述的混合淋巴細胞靶細胞分析(MLTC)任選地體外分析免疫原性α2M-抗原分子復合物。一旦已經(jīng)分離免疫原性復合物，可在將它們施用之前使用以下討論的優(yōu)選的給藥方案和賦形劑任選地在動物模型中進一步對其表征。
在一個優(yōu)選實施方案中，α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物從小鼠血清分離。通過用0.04M Tris pH 7.6、0.15M NaCl以1∶1稀釋血清，然后將混合物施用于用相同緩沖液平衡并洗脫的Sephacryl S300R(Sigma)柱。65ml柱用于約10ml血清。通過斑點印跡檢測α(2)巨球蛋白陽性級分并使用PD-10柱將緩沖液變?yōu)閜H7.5的0.01M磷酸鈉緩沖液。在選擇性的方法中，可在65ml柱中使用pH7.5的0.01M磷酸鈉緩沖液作為緩沖液以省去更換緩沖液的步驟。將含復合物的級分施用于伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠柱。用0.2M甲基甘露糖吡喃糖苷或5％甲基甘露糖吡喃糖苷洗脫結合的復合物，并施用于PD-10柱以改變緩沖液為pH6.0的0.05M乙酸鈉緩沖液，并施用于用pH6.0的0.01M乙酸鈉緩沖液平衡的DEAE柱。用0.13M乙酸鈉緩沖液洗脫使α(2)巨球蛋白純化，并通過SDS-PAGE和免疫印跡法分析。也可使用本領域中已知的分離復合物的其它方法(Dubin等人，1984，Biochem.International，8(4)589-596；Okubo等人，1981，Biochem.et Biophys.Acta，688257-267；Nieuwenhuizen等人，1979，Biochem.et Biophysica.Acta，580129-139)。
5.3.治療應用5.3.1.治療和預防癌癥的方法根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的治療和預防癌癥的方法包括從需要治療的個體分離α2M復合物，和將這種復合物以自體治療形式對患者施用。根據(jù)給藥途徑，將α2M復合物分離和純化并對個體自體施用(如治療原發(fā)癌或其轉移癌)，或對需要治療類似組織型的癌癥的其他個體施用，或對由于家族史或環(huán)境危險因素而具有增加的癌癥危險的個體施用。在5.4部分中描述的癌癥可通過本發(fā)明的藥物組合物和方法治療或預防。
例如，可在手術之后的任何時間開始使用包括從患者的血清分離并如上制備的的α2M復合物的本發(fā)明組合物進行治療。在其它實施方案中，治療可以在手術之前或過程中開始。然而，如果患者接受化療，通常在至少四周的間隔后施用α2M復合物，使得免疫系統(tǒng)可恢復。治療方案可包括每周注射包括溶解于鹽水或其它生理相容性溶液中的α2M復合物的本發(fā)明的組合物。每次改變注射途徑和部位，例如，第一次注射在左臂皮下，第二次注射在右臂，第三次在左腹部，第四次在右腹部，第五次在左股，第六次在右股，等等。相同注射部位在一個和多個注射間隔之后重復。另外，注射劑被一分為二，同一天在不同的部位施用劑量的一半?？偟恼f來，前四到六次注射以周為間隔進行。隨后二到五十次注射以兩周為間隔進行，隨后以每月為間隔注射。
或者，可使用從患者血清分離的α2M復合物作為預防癌癥的疫苗。這種疫苗可用于通過注射到患者體內以促進免疫應答對抗腫瘤細胞、帶有腫瘤抗原的細胞。優(yōu)選自體α2M多肽-抗原分子復合物。本發(fā)明的疫苗可在化療之前、過程中或之后施用。
在一個具體的實施方案中，癌癥為轉移癌。在另一個具體的實施方案中，癌癥為腫瘤。
可通過本領域技術人員已知的任何方法監(jiān)測α2M多肽-抗原分子復合物對腫瘤疾病的發(fā)展的免疫治療效果，其包括但不限于a)測量遲發(fā)型過敏反應，作為細胞免疫的評價；b)體外測量細胞溶解型T-淋巴細胞的活性；c)測量腫瘤特異抗原如癌胚抗原(CEA)的水平；d)使用計算機斷層(CT)掃描技術測量腫瘤形態(tài)和密度的改變；e)使用CT掃描測量腫瘤直徑的改變；f)在高危險個體中測量特定癌癥危險的推定生物標志物水平的改變；g)在治療前后測量腫瘤壞死組織的百分比；h)使用聲波圖測量腫瘤形態(tài)的改變；i)使用磁共振成像(MRI)測量腫瘤形態(tài)的改變；j)使用正電子發(fā)射斷層成象(PET)測量腫瘤形態(tài)的改變；和k)使用超聲波測量腫瘤形態(tài)的改變?？墒褂玫钠渌夹g包括閃爍掃描術和內窺鏡檢查法。
也可通過檢測特定癌癥危險的推定生物標志物的水平評價使用α2M多肽-抗原分子復合物進行免疫治療的預防效果。例如，對患前列腺癌癥危險增加的個體，通過Brawer等人，1992，J.Urol.，147841-845和Catalona等人，1993，JAMA，270948-958中所述的方法測量血清前列腺特異性抗原(PSA)；或對有患結腸直腸癌癥危險的個體通過本領域中已知的方法測量CEA；和對患乳腺癌危險增加的個體通過Schneider等人，1982，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，793047-3051中所述的方法測量雌二醇的16-羥基化。上述參考文獻都被全文并入本文作為參考。
在一個具體的實施方案中，本發(fā)明的預防和治療應用旨在增加手術之前、手術時或手術之后癌癥患者的免疫能力，和誘導對癌細胞的腫瘤特異性免疫，目的是抑制癌癥，并且最終的臨床目的是癌癥的全面退化和根除。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的組合物包括抗原肽的復合物，所述抗原肽來源于抗原細胞消化的胞質蛋白質和/或來源于膜的蛋白質。將α(2)巨球蛋白對患有癌癥的患者施用。在一個實施方案中，“治療”是指癌癥或其至少一個可識別癥狀的改善。在另一個實施方案中，“治療”是指與癌癥有關的至少一個可測量物理參數(shù)的改善，不一定是患者可識別的。在另一個實施方案中，“治療”是指抑制癌癥的進展，或是例如物理地穩(wěn)定可識別的癥狀、或是例如生理學地穩(wěn)定物理參數(shù)、或是二者同時存在。
在某些實施方案中，將本發(fā)明的組合物作為對抗這種癌癥的預防手段對主體施用。如本文中使用的，“預防”是指降低患上所指癌癥的危險。在實施方案的一個模式中，將本發(fā)明的組合物作為預防手段對具有癌癥遺傳傾向的主體施用。在實施方案的另一種模式中，將本發(fā)明的組合物作為預防手段對接觸包括但不限于化學品和/或輻射的致癌物質的主體施用。
例如，在某些實施方案中，與不用本發(fā)明組合物相比，本發(fā)明組合物使腫瘤細胞生長抑制或降低至少99％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％、或至少10％。
由本發(fā)明方法制備的組合物包括α-2-巨球蛋白與抗原肽群體復合得到的復合物。組合物表現(xiàn)出誘導腫瘤尺寸的減小，并可最終引起被治療癌癥患者腫瘤負荷的退化。由發(fā)明方法制備的組合物可增加主體的免疫能力和引起對前腫瘤細胞和腫瘤細胞的特異性免疫。這些組合物具有預防腫瘤細胞生長和發(fā)展的能力。
在本發(fā)明方法的某些實施方案中，將α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物對具有家族性癌癥病史的患者施用，或對由于環(huán)境因素處在患上癌癥危險下的主體施用。在其它實施方案中，使用本發(fā)明的方法作為預防手段治療治療患有癌前病變或息肉的患者，基于申請人對從有效對抗有可能形成的癌癥的血清分離復合物的發(fā)現(xiàn)。在其它實施方案中，使用本發(fā)明的方法治療患者，基于對不能探測的早期癌癥引起可用于預防癌癥發(fā)展的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的出現(xiàn)的發(fā)現(xiàn)。在其它實施方案中，使用本發(fā)明的方法作為預防手段治療其中尚未檢測到癌癥的患者。
5.3.2.治療和預防傳染病的方法為了治療和預防傳染病，從患有傳染病的哺乳動物的體液分離α2M-抗原分子復合物并用作抗傳染病的疫苗。如本領域技術人員理解的，本文中所述的方案可用于從存在α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的任何體液分離α2M多肽-抗原分子復合物。例如，細胞可被傳染物自身感染。在一個實施方案中，可以從包括來源于傳染物感染細胞的抗原的血清分離α2M-抗原分子復合物。在另一個實施方案中，可以從包括來源于胞內或胞外病原體的抗原的血清分離本發(fā)明的α2M-抗原分子復合物。本發(fā)明不限于治療或預防由胞內或胞外病原體引起的傳染病。已經(jīng)在文獻中廣泛地描述了許多醫(yī)學相關的微生物，例如參見G.L.Mandell，J.E.Bennet，和R.Dolin，Mandell，Douglas，和Bennetfs Principles and Practice of Infectious Diseases，Churchill Livingstone，Philladelphia，Pennsylvania 2000，其被全文并入本文作為參考。
治療或預防傳染病的優(yōu)選方法包括從患者的血清分離α(2)巨球蛋白復合物并在患者需要治療時將分離的復合物對患者施用。從血清純化共價或非共價結合傳染物的抗原分子的α2M多肽的復合物。
在本發(fā)明優(yōu)選的方面中，純化的α2M-抗原分子復合物疫苗可在治療由胞內或胞外病原體引起的人疾病中有特別的用途。然而，應該理解，使用本文所述原理開發(fā)的疫苗可用于治療類似地由胞內或胞外病原體引起的其它哺乳動物的疾病，所述哺乳動物例如農畜，包括牛、馬、綿羊、山羊和豬；和家庭寵物，包括貓和狗。
疫苗可制備為促進對5.5部分中所述任何傳染病病原體的免疫應答?？梢酝ㄟ^本領域技術人員已知的任何方法監(jiān)測改性的α2M多肽-抗原分子復合物對傳染病發(fā)展的免疫治療效果。
由發(fā)明方法制備的組合物包括α(2)巨球蛋白與抗原肽群體的復合物。由本發(fā)明方法制備的組合物可增加主體的免疫能力并引起對傳染物的特異性免疫。這些組合物具有預防傳染病發(fā)病和發(fā)展的能力。
在一個實施方案中，“治療”是指傳染病或其至少一個可識別癥狀的改善。在另一個實施方案中，“治療”是指與傳染病有關的至少一個可測量物理參數(shù)的改善，但不一定是主體可識別的。在另一個實施方案中，“治療”是指抑制傳染病的發(fā)展，或是例如物理地穩(wěn)定可識別癥狀、或是例如生理學地穩(wěn)定物理參數(shù)、或是兩者同時存在。
由本發(fā)明方法制備的組合物包括α-2-巨球蛋白與抗原肽群體的復合物。由本發(fā)明方法制備的組合物可增加主體的免疫能力并引起對傳染物的特異性免疫。這些組合物具有預防傳染病發(fā)病和發(fā)展的能力。
在某些實施方案中，將本發(fā)明的組合物作為對抗這種傳染病的預防手段對主體施用。如本文中使用的，“預防”是指降低獲得所指傳染病的危險。在實施方案的另一種模式中，本發(fā)明的組合物作為預防手段對接觸傳染病的傳染物的主體施用。
例如，在某些實施方案中，與不用本發(fā)明組合物相比本發(fā)明的組合物，使傳染物生長抑制或降低至少99％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％、或至少10％。
5.3.3.治療和預防癌癥和傳染病的聯(lián)合治療本發(fā)明的使用α(2)巨球蛋白復合物的組合物和方法可與其它治療劑一起作為聯(lián)合治療方案施用。其它治療劑包括但不限于熱休克蛋白-肽復合物、抗腫瘤藥、抗體、細胞因子、抗病毒藥、抗真菌藥、抗生素和助劑。
聯(lián)合治療是指將本發(fā)明的α2M復合物與預防或治療癌癥和/或傳染病的另一種模式一起施用。在治療和預防癌癥時，聯(lián)合治療是指將本發(fā)明的α2M復合物與預防或治療癌癥的另一種模式一起施用。本發(fā)明的復合物的施用可增強抗癌藥物的作用，反之亦然。在治療和預防傳染病時，本發(fā)明復合物的施用可增強抗感染藥物的作用，反之亦然。優(yōu)選地，這種附加形式的模式為非α2M系模式，即該模式不包括α2M作為組分。該方法通常稱為聯(lián)合治療、輔助治療或結合治療(上述術語在本文中可互換地使用)。對于聯(lián)合治療，可觀察到相加效力或相加治療作用。也可以期望治療效力大于相加效力的協(xié)同結果。聯(lián)合治療的應用也可提供比單獨施用治療模式、或單獨施用α2M復合物更好的治療特征。相加作用或協(xié)同作用可調低任一種或兩種模式的劑量和/或劑量給藥頻率或避免不希望的或不利的作用。
在多個具體實施方案中，聯(lián)合治療包括將α2M-抗原分子復合物對使用治療模式治療的主體施用，其中單獨施用的治療模式臨床上不足以治療主體，使得主體需要額外的有效治療，例如，在沒有施用α2M復合物時對治療模式無應答的主體。這種實施方案中包括的方法包括對正接受其中所述主體對治療有應答但經(jīng)歷副作用、復發(fā)、形成耐藥性等的治療模式的主體施用α2M復合物。這種主體可對單獨的治療模式無應答或具有難治性，即至少某些關鍵部分的癌細胞沒有被殺死或沒有抑制它們的細胞分裂或至少某些關鍵部分的病原體或傳染物沒有被殺死。當如本發(fā)明方法所預期施用時，對使用單獨的治療模式難治療的主體施用α2M復合物的本發(fā)明的方法也可改善治療模式的療效。治療模式的療效檢測可使用本領域中已知的方法體內或體外分析。
本領域接受的難治性的含義為癌癥和傳染病范圍中公知。在一個實施方案中，癌癥分別為難治的或無應答的，其中癌細胞的數(shù)目沒有顯著地減少，或有所增加。在另一個實施方案中，傳染病分別為難治的或無應答的，其中病原體的數(shù)目沒有顯著地減少，或有所增加。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的復合物可用于與多種不同類型的治療模式組合。這種模式中的一些模式特別用于特定類型的癌癥或傳染病，它們分別在5.4和5.5部分中討論。許多其它模式對免疫系統(tǒng)功能有影響并通常適用于腫瘤和傳染病。
在一個實施方案中，本發(fā)明的復合物用于與一種或多種生物應答調節(jié)劑組合，以治療癌癥或傳染病。一類生物應答調節(jié)劑為細胞因子。在一個這種實施方案中，對接受α2M復合物的主體施用細胞因子。在多個實施方案中，可使用一種或多種細胞因子，其選自IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IFNα、IFNβ、IFNγ、TNFα、TNFβ、G-CSF、GM-CSF、TGFβ、IL-15、IL-18、GM-CSF、INF-γ、INF-α、SLC、內皮單核細胞激活蛋白-2(EMAP2)、MIP-3α、MIP-3β或MHC基因如HLA-B7。另外，其它示例性的細胞因子包括TNF家族的其它成員，包括但不限于TNF-α相關凋亡誘導配體(TRAIL)、TNF-α相關活化誘導細胞因子(TRANCE)、TNF-α相關凋亡弱誘導物(TWEAK)、CD40配體(CD40L)、淋巴細胞毒素α(LT-α)、淋巴細胞毒素β(LT-β)、OX40配體(OX40L)、Fas配體(FasL)、CD27配體(CD27L)、CD30配體(CD30L)、41BB配體(41BBL)、APRIL、LIGHT、TL1、TNFSF16、TNFSF17和AITR-L，或其功能性部分。TNF家族的總綜述參見例如Kwon等人，1999，Curr.Opin.Immunol.，11340-345。優(yōu)選地，在治療模式之前施用α2M復合物。在一個具體的實施方案中，將本發(fā)明的復合物施用于正接受用環(huán)磷酰胺與IL-12組合治療癌癥的患者。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物用于與一種或多種生物應答調節(jié)劑組合，所述生物應答調節(jié)劑為多種配體、受體和信號轉導分子的激動劑或拮抗劑。例如，生物應答調節(jié)劑包括但不限于toll樣(Toll-like)受體(TLR-2、TLR-7、TLR-8和TLR-9)；LPS；41BB、OX40、ICOS、和CD40的激動劑；Fas配體、PD1、和CTLA-4的拮抗劑。這些激動劑和拮抗劑可為抗體、抗體片段、肽、擬肽化合物和多糖。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物用于以一種或多種作為免疫刺激性核酸的生物應答調節(jié)劑組合。這些核酸中的許多為包括未甲基化CpG基序的低聚核苷酸，促進脊椎動物淋巴細胞有絲分裂，并且已知增強免疫應答。參見Woolridge等人，1997，Blood，892994-2998。這種低聚核苷酸在國際專利公開WO 01/22972、WO 01/51083、WO98/40100和WO 99/61056中有所描述，所述公開都全文并入本文作為參考，以及在美國專利公開6,207,646、6,194,388、6,218,371、6,239,116、6,429,199和6,406,705中有所描述，所述公開都全文并入本文作為參考。其它種類的免疫刺激性低聚核苷酸如包含YpG-基序和CpR-基序的硫代磷酯寡脫氧核糖核苷酸已經(jīng)由Kandimalla等人在“Effect of Chemical Modifications of cytosine and Guanine ina CpG-Motif of OligonucleotidesStructure-ImmunostimulatoryActivity Relationships.”，Bioorganic&Medicinal Chemistry，9807-813(2001)中描述，其全文并入本文作為參考。還包括不含CpG二核苷酸的免疫刺激性低聚核苷酸，其在通過粘膜途徑施用(包括小劑量施用)或通過腸胃外途徑高劑量施用時增強抗體應答，經(jīng)常與CpG核酸的作用一樣，然而，該應答為偏Th2-傾向的(IgG1＞＞IgG2a)。參見美國專利公開20010044416 A1，其全文并入本文作為參考?？梢杂蒙鲜鰧＠凸_中所述進行檢測免疫刺激性低聚核苷酸活性的方法。此外，免疫刺激性低聚核苷酸可以在磷酸鹽骨架、糖、核苷酸堿基和核苷酸連接合內修飾，以調節(jié)活性。這種修飾為本領域技術人員已知的。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物用于與一種或多種助劑組合。助劑可單獨施用或與本發(fā)明復合物混合存在于組合物中。全身性助劑為可以非腸道施用的助劑。全身性助劑包括產(chǎn)生貯存(depot)作用的助劑、刺激免疫系統(tǒng)的助劑和對兩者都有用的助劑。如本文所使用的，產(chǎn)生貯存作用的助劑為使抗原在體內緩慢釋放從而延長免疫細胞對抗原接觸的助劑。這類助劑包括但不限于明礬(如氫氧化鋁、磷酸鋁)；或乳液系制劑，包括礦物油、非礦物油、油包水或油-水-油乳液、水包油乳劑如Montanide助劑的Seppic ISA系列(如Montanide ISA720、AirLiquide，Paris，F(xiàn)rance)；MF-59(用司盤85和吐溫80穩(wěn)定的水包角鯊烯乳液，Chiron Corporation，Emeryville，Calif.)；和PROVAX(包含穩(wěn)定去污劑和膠束成形劑的水包油乳液，IDEC，Pharmaceuticals Corporation，San Diego，Calif.)。
其它助劑刺激免疫系統(tǒng)，例如使免疫細胞產(chǎn)生并分泌細胞因子或IgG。這類助劑包括但不限于免疫刺激性核酸，如CpG低聚核苷酸；從Q.肥皂草樹的樹皮純化的皂甙，如QS21；聚[二(羧化苯氧基)磷腈](PCPP聚合物；Virus Research Institute，USA)；脂多糖(LPS)的衍生物如單磷酰脂質A(MPL，Ribi ImmunoChem Research，Inc.，Hamilton，Mont.)、胞壁酰二肽(MDP，Ribi)和蘇氨酰-胞壁酰二肽(t-MDP，Ribi)；OM-174(與脂質A有關的葡糖胺二糖，OM Pharma SA，Meyrin，Switzerland)；和利什曼原蟲延長因子(純化的利什曼原蟲蛋白質，Corixa Corporation，Seattle，Wash.)。在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的復合物用于與QS21和另一種免疫刺激性核酸例如但不限于CG低聚核苷酸組合。
其它全身性助劑為產(chǎn)生貯存作用和刺激免疫系統(tǒng)的助劑。這些化合物為兼?zhèn)渖鲜鋈硇灾鷦┑囊炎R別功能的化合物。這類助劑包括但不限于ISCOM(免疫刺激性復合物，其包含混合皂甙、脂質并形成具有可容納抗原的孔的病毒大小的顆粒，CSL，Melbourne，Australia)；SB-AS2(SmithKline Beecham助劑系統(tǒng)#2，其為包含MPL和QS21的水包油乳液，SmithKline Beecham Biologicals[SBB]，Rixensart，Belgium)；SB-AS4(SmithKline Beecham助劑系統(tǒng)#4，其包含明礬和MPL，SBB，Belgium)；形成膠束如CRL 1005的非離子型嵌段共聚物(這些包含由聚氧化乙烯鏈形成側鏈的直鏈疏水性聚氧化丙烯，Vaxcel，Inc.，Norcross，Ga.)；和Syntex Adjuvant Formulation(SAF，包含吐溫80和非離子型嵌段共聚物的水包油乳液，Syntex Chemicals，Inc.，Boulder，Colo.)。
根據(jù)本發(fā)明可使用的粘膜助劑為當與本發(fā)明的復合物一起施用于粘膜表面時能夠誘導主體的粘膜免疫應答的助劑。粘膜助劑包括但不限于CpG核酸(如PCT公開的專利申請WO 99/61056)、細菌毒素如霍亂毒素(CT)、CT衍生物包括但不限于CTB亞單位(CTB)(Wu等人，1998；Tochikubo等人，1998)；CTD53(Val到Asp)(Fontana等人，1995)；CTK97(Val到Lys)(Fontana等人，1995)；CTK104(Tyr到Lys)(Fontana等人，1995)；CTD 53/K63(Val到Asp，Ser到Lys)(Fontana等人，1995)；CTH54(Arg到His)(Fontana等人，1995)；CTN107(His到Asn)(Fontana等人，1995)；CTE114(Ser到Glu)(Fontana等人，1995)；CTE112K(Glu到Lys)(Yamamoto等人，1997a)；CTS61F(Ser到Phe)(Yamamoto等人，1997a，1997b)；CTS106(Pro到Lys)(Douce等人，1997，F(xiàn)ontana等人，1995)；和CTK63(Ser到Lys)(Douce等人，1997，F(xiàn)ontana等人，1995)，小帶連結毒素(Zonula occludentstoxin)、zot、大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素、不穩(wěn)定毒素(LT)、LT衍生物包括但不限于LTB亞單位(LTB)(Verweij等人，1998)；LT7K(Arg到Lys)(Komase等人，1998，Douce等人，1995)；LT61F(Ser到Phe)(Komase等人，1998)；LT112K(Glu到Lys)(Komase等人，1998)；LT118E(Gly到Glu)(Komase等人，1998)；LT146E(Arg到Glu)(Komase等人，1998)；LT192G(Arg到Gly)(Komase等人，1998)；LTK63(Ser到Lys)(Marchetti等人，1998，Douce等人，1997，1998，DiTommaso等人，1996)；和LTR72(Ala到Arg)(Giuliani等人，1998)，百日咳毒素，PT.(Lycke等人，1992，Spangler BD，1992，F(xiàn)reytag和Clemments，1999，Roberts等人，1995，Wilson等人，1995)包括PT-9K/129G(Roberts等人，1995，Cropley等人，1995)；毒素衍生物(見以下)(Holmgren等人，1993，Verweij等人，1998，Rappuoli等人，1995，F(xiàn)reytag和Clements，1999)；脂質A衍生物(如單膦?；|A，MPL)(Sasaki等人，1998，Vancott等人，1998；胞壁酰二肽(MDP)衍生物(Fukushima等人，1996，Ogawa等人，1989，Michalek等人，1983，Morisaki等人，1983)；細菌外膜蛋白質(如伯氏疏螺旋體菌(Borrelia Burgdorferi)的外表面A蛋白(OspA)脂蛋白、腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)的外膜蛋白)(Marinaro等人，1999，Van de Verg等人，1996)；水包油乳劑(如MF59)(Barchfield等人，1999，Verschoor等人，1999，O′Hagan，1998)；鋁鹽(Isaka等人，1998，1999)；和皂甙(如QS21)Aquila Biopharmaceuticals，Inc.，Worster，Me.)(Sasaki等人，1998，MacNeal等人，1998)，ISCOMs，MF-59(用司盤85和吐溫80穩(wěn)定的水包角鯊烯乳液；ChironCorporation，Emeryville，Calif.)；Montanide助劑的Seppic ISA系列(如Montanide ISA 720；AirLiquide，Paris，F(xiàn)rance)；PROVAX(包含穩(wěn)定的去污劑和膠束賦成形劑的水包油乳液；IDECPharmaceuticals Corporation，San Diego，Calif.)；SyntextAdjuvant Formulation(SAF；Syntex Chemicals，Inc.，Boulder，Colo.)；聚[二(羧基化苯氧基)磷腈](PCPP聚合物；Virus ResearchInstitute，USA)和利什曼原蟲延長因子(Corixa Corporation，Seattle，Wash.)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物與一種或多種免疫治療藥物如抗體和疫苗結合施用。在一個優(yōu)選實施方案中，抗體具有對抗癌癥和/或傳染病的體內治療和/或預防作用。治療和預防抗體的例子包括但不限于MDX-010(Medarex，NJ)，其為目前用于臨床治療前列腺癌的人源化抗-CTLA-4抗體；SYNAGIS(Medlmmune，MD)，其為用于治療RSV感染患者的人源化抗呼吸道合胞病毒(RSV)單克隆抗體；HERCEPTIN(Trastuzumab)(Genentech，CA)，其為用于治療轉移性乳腺癌患者的人源化抗HER2單克隆抗體。其它例子為人源化抗-CD18F(ab′)2(Genentech)；CDP860，其為人源化抗CD18F(ab′)2(Celltech，UK)；PR0542，其為與CD4融合的抗HIV gp120抗體(Progenics/Genzyme Transgenics)；Ostavir，其為人抗乙型肝炎病毒抗體(Protein Design Lab/Novartis)；PROTOVIRTM，其為人源化抗CMV IgG1抗體(Protein Design Lab/Novartis)；MAK-195(SEGARD)，其為鼠抗TNF-αF(ab′)2(Knoll Pharma/BASF)；IC14，其為抗CD14抗體(ICOS Pharm)；人源化抗VEGF IgG1抗體(Genentech)；OVAREXTM，其為鼠抗CA 125抗體(Altarex)；PANOREXTM，其為鼠抗17-IA細胞表面抗原IgG2a抗體(GlaxoWellcome/Centocor)；BEC2，其為鼠抗獨特型(GD3表位)IgG抗體(ImClone System)；IMC-C225，其為嵌合的抗EGFR IgG抗體(ImCloneSystem)；VITAXINTM，其為人源化抗-αVβ3整聯(lián)蛋白抗體(AppliedMolecular Evolution/MedImmune)；Campath 1H/LDP-03，其為人源化抗CD52 IgG1抗體(Leukosite)；Smart M195，其為人源化抗CD33IgG抗體(Protein Design Lab/Kanebo)；RITUXANTM，其為嵌合的抗CD20 IgG1抗體(IDEC Pharm/Genentech，Roche/Zettyaku)；LYMPHOCIDETM，其為人源化抗CD22 IgG抗體(Immunomedics)；Smart ID10，其為人源化抗HLA抗體(Protein Design Lab)；ONCOLYMTM(Lym-1)，為放射標記的鼠抗HLA DIAGNOSTIC REAGENT抗體(Techniclone)；ABX-IL8，為人抗IL8抗體(Abgenix)；抗CD11a，為人源化IgG1抗體(Genentech/Xoma)；ICM3，為人源化抗ICAM3抗體(ICOS Pharm)；IDEC-114為靈長源化抗CD80抗體(IDECPharm/Mitsubishi)；ZEVALINTM，為放射標記的鼠抗CD20抗體(IDEC/Schering AG)；IDEC-131，為人源化抗CD40L抗體(IDEC/Eisai)；IDEC-151為靈長源化抗CD4抗體(IDEC)；IDEC-152為靈長源化抗CD23抗體(IDEC/Seikagaku)；SMART抗CD3，為人源化抗CD3IgG(Protein Design Lab)；5G1.1為人源化抗補體因子5(C5)抗體(Alexion Pharm)；D2E7為人源化抗TNF-α抗體(CAT/BASF)；CDP870為人源化抗-TNF-αFab片段(Celltech)；IDEC-151，為靈長源化抗CD4IgG1抗體(IDEC Pharm/SmithKline Beecham)；MDX-CD4為人抗CD4 IgG抗體(Medarex/Eisai/Genmab)；CDP571為人源化抗TNF-αIgG4抗體(Celltech)；LDP-02為人源化抗α4β7抗體(LeukoSite/Genentech)；OrthoClone OKT4A為人源化抗CD4 IgG抗體(Ortho Biotech)；ANTOVATM，為人源化抗CD40L IgG抗體(Biogen)；ANTEGRENTM為人源化抗VLA-4 IgG抗體(Elan)；MDX-33為人抗CD64(FcγR)抗體(Medarex/Centeon)；SCH55700為人源化抗IL-5 IgG4抗體(Celltech/Schering)；SB-240563和SB-240683分別為人源化抗IL-5和IL-4抗體(SmithKline Beecham)；rhuMab-E25為人源化抗IgE IgG1抗體(Genentech/Norvartis/Tanox Biosystems)；ABX-CBL為鼠抗CD-147 IgM抗體(Abgenix)；BTI-322為大鼠抗CD2 IgG抗體(Medimmune/Bio Transplant)；Orthoclone/OKT3為鼠抗CD3 IgG2a抗體(ortho Biotech)；SIMULECTTM為嵌合的抗CD25 IgG1抗體(Novartis Pharm)；LDP-01為人源化抗β2-整聯(lián)蛋白IgG抗體(LeukoSite)；抗LFA-1為鼠抗CD18F(ab′)2(Pasteur-Merieux/Immunotech)；CAT-152為人抗TGF-β2抗體(Cambridge AbTech)；和Corsevin M為嵌合的抗第七因子抗體(Centocor)。在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的復合物與抗CTLA4抗體組合施用。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的復合物與抗41BB抗體組合施用。上述列舉的免疫活性藥物以及任何其它免疫活性藥物可根據(jù)本領域技術人員已知的任何方案，包括免疫活性藥物供應商推薦的方案施用。
在治療或預防傳染病時，將α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物對由于環(huán)境或家族性因素處在患上傳染病危險下的患者施用。在其它實施方案中，基于可以從有效對抗可能發(fā)展的傳染病的血清分離復合物的觀念，使用本發(fā)明的方法作為預防手段治療具有傳染病早期癥狀的患者。在其它實施方案中，基于不可檢測的病原體早期感染可能引起可用于預防傳染病發(fā)展的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的出現(xiàn)的信念，使用本發(fā)明的方法治療沒有傳染病癥狀的患者。在其它實施方案中，基于患者可能患有尚未檢測出的傳染病的觀念，使用本發(fā)明的方法作為預防手段治療健康的患者。
為確定本發(fā)明的組合物和方法的有效性，本領域技術人員可使用檢測感染的各種標準分析法，包括但不限于抗體滴定分析、使用PCR技術如檢測病毒特異性核酸測量病毒負荷、血細胞分析、噬菌斑檢測、噬菌體分析或細菌樣品培養(yǎng)。用于檢測和測量感染水平的這種方法是本領域技術人員公知的。
在另一個實施方案中，在癌癥的治療和預防方法的情況中，每個上述方法包括對正接受治療癌癥的治療模式的組合的主體施用α2M復合物，優(yōu)選施用純化的α2M復合物。優(yōu)選地，α2M復合物結合于表現(xiàn)出對正治療的癌癥類型有抗原性的抗原分子。
5.4.目標癌癥在一個實施方案中，本發(fā)明的方法及其聯(lián)合治療包括施用本發(fā)明的組合物，組合物包括有助于預防或治療癌癥的輔助應用的一種或多種模式，模式包括但不限于化療劑、免疫治療劑、抗血管生成劑、細胞因子、激素、抗體、多核苷酸、輻射和光動力學治療劑。在具體的實施方案中，涉及施用本發(fā)明的藥物組合物的聯(lián)合治療可用于預防癌癥復發(fā)、抑制癌癥轉移、或抑制癌癥或轉移性癌癥生長和/或擴散。
可由本發(fā)明的方法和藥物組合物治療或預防的癌癥類型包括但不限于人的肉瘤和癌，如纖維肉瘤；粘液肉瘤；脂肉瘤；軟骨肉瘤；骨源性肉瘤；脊索瘤；血管肉瘤；內皮肉瘤；淋巴管肉瘤；淋巴管內皮肉瘤(lymphangioendothelio sarcoma)；滑膜瘤；間皮瘤；尤因氏肉瘤；平滑肌肉瘤；橫紋肌肉瘤；結腸癌；胰腺癌；乳腺癌；卵巢癌；前列腺癌；鱗狀細胞癌；基底細胞癌；腺癌；汗腺癌；皮脂腺癌；乳頭狀癌；乳頭狀腺癌；囊腺癌；髓樣癌；支氣管癌；腎細胞癌；肝瘤；膽管癌；絨毛膜癌；精原細胞瘤；胚胎性癌；維爾姆斯瘤(wilms’tumor)；宮頸癌；睪丸癌；肺癌；小細胞肺癌；膀胱癌；上皮癌；膠質瘤；星形細胞瘤；成神經(jīng)管細胞瘤；顱咽管瘤；室管膜瘤；松果體瘤；成血管細胞瘤；聽神經(jīng)瘤；少突神經(jīng)膠質細胞瘤；腦膜瘤；黑素瘤；成神經(jīng)細胞瘤；成視網(wǎng)膜細胞瘤；白血病如急性淋巴細胞性白血病和急性髓細胞性白血病(成髓細胞性白血病、早幼粒細胞性白血病、骨髓單核細胞性白血病、單核細胞性白血病和紅白血病)；慢性白血病(慢性髓細胞(粒細胞性)白血病和慢性淋巴細胞性白血病)；和真性紅細胞增多癥、淋巴瘤(何杰金氏病和非何杰金氏病)、多發(fā)性骨髓瘤、Waldenstrm′s巨球蛋白血癥、和重鏈病。
本發(fā)明提供的免疫治療是癌癥患者所需的多種原因有，第一，如果癌癥患者受到免疫抑制，則麻醉手術和隨后的化療可能使免疫抑制惡化。在外科手術前期間的適當?shù)拿庖咧委熆深A防或逆轉這種免疫抑制。這可能使傳染并發(fā)癥更少和加速傷口愈合。第二，手術后腫瘤體積為最小的，因此在這種情況下免疫治療很可能有效。第三，在手術時腫瘤細胞可能釋放到循環(huán)中，這時應用有效的免疫治療可除去這些細胞。
本發(fā)明的預防和治療方法是針對在手術之前、手術時或手術之后增加癌癥患者的免疫能力，并誘導針對癌細胞的腫瘤特異性免疫，其目的是抑制癌癥，其最終的臨床目的是癌癥的全面退化和根除。本發(fā)明的方法和藥物組合物也可用于例如由于家族史或者環(huán)境危險因素而處于特定類型癌癥危險增加的個體。
在多個實施方案中，除了本發(fā)明的復合物之外，施用一種或多種抗癌藥物來治療癌癥患者。抗癌藥物是指有助于腫瘤或癌癥治療的任何分子或化合物。用于本發(fā)明的方法中的抗癌藥物的例子包括但不限于阿西維辛；阿克拉霉素；鹽酸阿考達唑；阿克羅寧；阿多來新；白細胞間介素-2；甲嘧啶；安波霉素；醋酸阿美蒽；氨魯米特；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；門冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴馬司他；苯佐替派；比卡魯胺；鹽酸比生群；雙奈法德二甲磺酸酯；比折來新；硫酸博來霉素；布喹那鈉；溴匹立明；白消安；放線菌素C；卡普睪酮；卡醋胺；卡貝替姆；卡鉑；卡莫司?。畸}酸卡柔比星；卡折來新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西羅霉素；順鉑；克拉屈濱；甲磺酸克立那托；環(huán)磷酰胺；阿糖胞苷；達卡巴嗪；更生霉素；鹽酸柔紅霉素；地西他濱；右奧馬鉑；地扎胍寧；甲磺酸地扎胍寧；地吖醌；多西他賽；阿霉素；鹽酸阿霉素；屈洛昔芬；枸櫞酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；偶氮霉素；依達曲沙；鹽酸依氟鳥氨酸；依沙蘆星；恩洛鉑；恩普氨酯；依匹哌啶；鹽酸表柔比星；厄布洛唑；鹽酸依索比星；雌莫司??；雌莫司汀磷酸鈉；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；鹽酸法倔唑；法扎拉濱；芬維A胺；5-氟尿嘧啶脫氧核苷；磷酸氟達拉濱；氟尿嘧啶；氟西他濱；磷喹酮；福司曲星鈉；吉西他濱；鹽酸吉西他濱；羥基脲；鹽酸伊達比星；異環(huán)磷酰胺；伊莫福新；白介素II(包括重組白介素II、或rIL2)；干擾素α-2a；干擾素α-2b；干擾素α-n1；干擾素α-n3；干擾素β-Ia；干擾素γ-Ib；異丙鉑；鹽酸伊立替康；生長妥林；來曲唑；醋酸亮丙瑞林；鹽酸利阿唑；洛美曲索鈉；羅莫司??；鹽酸洛索蒽醌；馬索羅酚；美登素；鹽酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美侖孕酮；美法侖；美諾立爾；巰嘌呤；氨甲喋呤；氨甲喋呤鈉；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；mitocarcin；絲裂紅素；米托潔林；米托馬星；絲裂霉素；米托司培；米托坦；鹽酸米托蒽醌；霉酚酸；諾考達唑；諾加霉素；奧馬鉑；奧昔舒侖；紫杉醇；培門冬酶；培利霉素；奈莫司??；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；鹽酸吡羅蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆鈉；泊非霉素；松龍苯芥；鹽酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；鹽酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；羅谷亞胺；沙芬戈；鹽酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；斯帕磷酸鈉；司帕霉素；鹽酸螺旋鍺；螺莫司??；螺鉑；鏈黑霉素；鏈脲佐菌素；磺氯苯脲；他利霉素；替可加蘭鈉；替加氟；鹽酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替羅昔??；睪內酯；硫咪嘌呤；2-氨基-6-巰基嘌呤；塞替派；噻唑呋啉；替拉扎明；枸櫞酸托瑞米芬；醋酸曲托龍；磷酸曲西立濱；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；鹽酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；烏瑞替派；伐普肽；維替泊芬；硫酸長春堿；硫酸長春新堿；長春地辛；硫酸長春地辛；硫酸長春匹定；硫酸長春甘酯；硫酸長春羅新；酒石酸長春瑞濱；硫酸長春羅定；硫酸長春利定；伏羅唑；折尼拉??；新制癌菌素；鹽酸佐柔比星。
可使用的其它抗癌藥物包括但不限于20-表-1，25-二羥基維生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龍；阿克拉霉素；acylfulvene；adecypenol；阿多來新；白介素-2；ALL-TK拮抗劑；六甲嘧啶；氨莫司?。籥midox；阿米斯丁；氨基酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心蓮內酯；血管生成抑制劑；拮抗劑D；拮抗劑G；安雷利克斯；抗背部化形態(tài)形成蛋白-1；抗雄激素物質前列腺癌(prostatic carcinoma)；抗雌激素；抗腫瘤形成；反義寡核苷酸；甘氨酸艾菲地可寧；凋亡基因調節(jié)劑；凋亡控制劑；無嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脫氨酶；asulacrine；阿他美坦；阿莫司?。话⑽骷{司汀(axinastatin)1；阿西納司汀2；阿西納司汀3；阿扎司瓊；azatoxin；重氮酪氨酸；漿果赤霉素III衍生物；balanol；巴馬司他；BCR/ABL拮抗劑；benzochlorins；benzoylstaurosporine；β內酰胺衍生物；β-alethine；β克拉霉素B；樺木酸；bFGF抑制劑；比卡魯胺；比生群；bisaziridinylspermine；雙奈法德；bistratene A；比折來新；breflate；溴匹立明；布度鈦；丁基硫堇亞胺；卡泊三醇；鈣感光蛋白(calphostin C)；喜樹堿衍生物；金絲雀痘IL-2；卡培他濱；甲酰胺-氨基-三唑；羧基氨基咪唑；CaRest M3；CARN 700；軟骨衍生的抑制劑；卡折來新；酪蛋白激酶抑制劑(ICOS)；粟精胺；天蠶抗菌肽B；西曲瑞克；chlorlns；氯喹喔啉；氨苯磺胺；西卡前列素；順卟啉；克拉屈濱；氯米芬類似物；克霉唑；考林霉素A；考林霉素B；考布他汀A4；考布他汀類似物；conagenin；地中海海綿816；克雷斯托；隱藻素(cryptophycin)8；隱藻素A衍生物；香豆素A；環(huán)戊蒽醌；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷ocfosfate；溶細胞因子；磷酸己烷雌酚；達佐必利；地西他濱；脫氫膜海鞘素B；地洛瑞林；地塞米松；右異環(huán)磷酰胺；右雷佐生；右維拉帕米；地吖醌；代代寧B；didox；二乙基norspermine；二氫-5-氮雜胞嘧啶；9-二氫紫杉醇；dioxamycin；二苯基螺莫司?。欢辔魉?；二十二烷醇；多拉司瓊(dolasetron)；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；duocarmycin SA；依布硒；依考莫司??；依地福新；依決洛單抗；依氟鳥氨酸；欖香烯；乙嘧替氟；表柔比星；愛普列特；雌莫司汀類似物；雌激素激動劑；雌激素拮抗劑；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法倔唑；法扎拉濱；芬維A胺；非格司亭；非那司提(finasteride)；flavopiridol；氟卓斯?。籪luasterone；氟達拉濱；鹽酸fluorodaunorunicin；福酚美克；福美司坦；福司曲星；福莫司汀；texaphyrin釓；硝酸鎵；加洛他濱；加尼瑞克；明膠酶抑制劑；吉西他濱；谷胱甘肽抑制劑；hepsulfam；heregulin；六甲撐二乙酰胺；金絲桃素；伊班膦酸；伊達比星；艾多昔芬；伊決孟酮；伊莫福新；伊洛馬司他；咪唑吖啶酮；咪喹莫特；免疫刺激性肽；胰島素樣生長因子1受體抑制劑；干擾素激動劑；干擾素；白介素；碘芐胍；碘阿霉素；4-甘薯苦醇；伊羅普拉；伊索拉定；伊本加唑；isohomohalicondrin B；伊他司瓊；jasplakinolide；kahalalide F；片螺素-N三乙酸鹽；緩釋蘭樂肽；leinamycin；來格司亭；硫酸香菇多糖；leptolstatin；來曲唑；白細胞過多癥抑制因子；白細胞α干擾素；亮丙瑞林+雌激素+黃體酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；線性聚胺類似物；親脂性二糖肽；親脂性鉑化合物；lissoclinamide 7；洛鉑；蚯蚓磷脂(lombricine)；洛美曲索；氯尼達明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立濱；勒托替康；lutetium texaphyrin；lysofylline；解離多肽；美坦新；mannostatin A；馬馬司他；馬索羅酚；maspin；基質分解素抑制劑；基質金屬蛋白酶抑制劑；美諾立爾；美巴龍；美特曲林(meterelin)；蛋氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制劑；美服培酮；米特福辛；mirimostim；錯配雙鏈RNA；米托胍腙；二溴衛(wèi)矛醇；絲裂霉素類似物；米托萘胺；mitotoxin成纖維細胞生長因子皂草素(-saporin)；米托蒽醌；莫法羅??；莫拉司亭；單克隆抗體，人絨毛膜促性腺激素；單磷酸類脂質A+myobacterium細胞壁sk；莫哌??；多耐藥基因抑制劑；基于多腫瘤抑制劑1-的治療；氮芥類抗癌藥；印度洋海綿B；分枝桿菌細胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰地那林；N-取代苯甲酰胺類；萘瑞林；那瑞替噴(nagrestip)；納絡酮+噴他佐辛；napavin；naphterpin；納布啡；萘達鉑；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性肽鏈內切酶；尼魯米特；nisamycin；一氧化氮調節(jié)劑；一氧化二氮抗氧化劑；nitrullyn；06-芐基胍；奧曲肽；okicenone；寡聚核苷酸；奧那司酮；昂丹司瓊；昂丹司瓊oracin；口服細胞因子誘導劑；奧馬鉑；奧沙特隆；奧沙利鉑；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇類似物；紫杉醇衍生物；palauamine；palmitoylrhizoxin；帕米膦酸；人參三醇；帕諾米芬；副菌鐵素；帕折普汀；培門冬酶；培得星；戊聚糖多硫酸鈉；噴司他丁；pentrozole；潘氟?。慌嗔柞０?；紫蘇子醇(perillyl alcohol)；phenazinomycin；醋酸苯酯；磷酸酶抑制劑；溶血鏈球菌；鹽酸毛果蕓香堿；吡柔比星；吡曲克辛；placetin A；placetin B；纖維蛋白溶酶原激活物抑制劑；鉑復合物；鉑化合物；鉑-三胺復合物；卟吩姆鈉；泊非霉素；潑尼松；丙基二吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶體抑制劑；基于蛋白A的免疫調節(jié)劑；蛋白激酶C抑制劑；蛋白激酶C抑制劑，微藻(microalgal)；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑；嘌呤核苷膦化酶抑制劑；紅紫素；吡唑并吖啶；吡醇羥乙酯化(pyridoxylated)血紅蛋白多氧化烯共軛物；raf拮抗劑；雷替曲塞；雷莫司瓊；ras法呢基蛋白轉運酶抑制劑；ras抑制劑；ras-GAP抑制劑；去甲基瑞替普??；銠Re 186依替膦酸鹽；根霉素；核酶；RII雷替酰胺；羅谷亞胺；rohitukine；羅那莫肽；羅喹美克；rubiginone B1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙莫司亭；Sdi 1模擬物；司莫司?。凰ダ涎苌囊种苿?；正義寡核苷酸；信號轉導抑制劑；信號轉導調節(jié)劑；單鏈抗原結合蛋白；西佐糖；索布佐生；硼[10B]卡鈉；苯基醋酸納；solverol；生長調節(jié)素結合蛋白；索納明；膦門冬酸；spicamycin D；螺莫司??；splenopentin；海綿素1；鯊烯胺；干細胞抑制劑；干細胞分裂抑制劑；stipiamide；基質降解酶抑制劑；sulfinosine；超活性血管活性腸肽拮抗劑；suradista；蘇拉明；苦馬豆堿；合成糖胺多糖；tallimustine；他莫昔芬甲碘化物；?；悄就。凰袅_?。惶婵杉犹m鈉；替加氟；tellurapyrylium；端粒酶抑制劑；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；tetrachlorodecaoxide；四唑胺；thaliblastine；噻可拉林(thiocoraline)；血小板生成素；血小板生成素模擬物；胸腺法新；胸腺生成素受體激動劑；胸腺曲南；促甲狀腺激素；初卟啉乙基錫；替拉扎明；二氯鈦烯；topsentin；托瑞米芬；全能干細胞因子；翻譯抑制劑；維甲酸；三乙酰基尿苷；曲西立濱；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司瓊；妥羅雄脲；酪氨酸激酶抑制劑；酪氨酸磷酸化抑制劑(tyrphostins)；UBC抑制劑；烏苯美司；泌尿生殖系統(tǒng)竇衍生的生長抑制因子；尿激酶受體拮抗劑；伐普肽；variolin B；載體系統(tǒng)，紅細胞基因治療；維拉雷瑣；vermine；verdins；維替泊芬；長春瑞賓；vinxaltine；vitaxin；伏羅唑；扎諾特??；折尼拉??；亞芐維；和新制癌菌素酯。
抗癌藥物可為化療劑，其包括但不限于以下化合物細胞毒性抗生素、抗代謝物、抗有絲分裂藥、烷化劑、鉑化合物、砷化合物、DNA拓撲異構酶抑制劑、紫杉烷類藥物(taxanes)、核苷類似物、植物生物堿和毒素；及其合成衍生物。表1列舉了示例性的化合物表1烷化劑氮芥類環(huán)磷酰胺異環(huán)磷酰胺曲磷胺苯丁酸氮芥亞硝基脲卡莫司汀(BCNU)羅莫司汀(CCNU)烷基磺酸鹽白消安曲奧舒凡三氮烯達卡巴嗪含鉑化合物順鉑卡鉑阿絡鉑(Aroplatin)奧沙利鉑植物生物堿長春花生物堿長春新堿長春堿長春地辛長春瑞賓紫杉烷類紫杉醇多西紫杉醇DNA拓撲異構酶抑制劑Epipodophyllins依托泊苷替尼泊苷拓樸替康9-氨基喜樹堿喜樹堿克雷斯托絲裂霉素絲裂霉素C抗葉酸類DHFR抑制劑甲氨喋呤三甲曲沙IMP脫氫酶抑制劑霉酚酸噻唑呋啉利巴韋林EICAR核苷酸還原酶抑制劑羥基脲去鐵胺嘧啶類似物尿嘧啶類似物5-氟尿嘧啶氟尿脫氧核苷去氧氟尿苷雷替曲塞胞嘧啶類似物阿糖胞苷(ara C)胞嘧啶阿糖胞苷氟達拉濱嘌呤類似物巰嘌呤2-氨基-6-巰基嘌呤DNA抗代謝物3-HP2′-脫氧-5-氟脲嘧啶5-HPα-TGDR甘氨酸阿非迪霉素ara-C5-氮雜-2′-脫氧胞嘧啶β-TGDR環(huán)胞苷胍唑次黃嘌呤糖二醛macebecin II吡唑并咪唑抗有絲分裂劑allocolchicine軟海綿素(Halichondrin B)秋水仙堿秋水仙堿衍生物dolstatin 10美登素根霉素硫代秋水仙堿三苯甲基半胱氨酸其它異戊二烯化抑制劑多巴胺能的神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基吡啶離子細胞周期抑制劑十字孢堿(Staurosporine)
放線菌素放線菌素D更生霉素博來霉素博來霉素A2博來霉素B2培洛霉素蒽環(huán)類抗生素柔紅霉素多柔比星(阿霉素)伊達比星表柔比星吡柔比星佐柔比星米托蒽醌MDR抑制劑維拉帕米Ca2+ATP酶抑制劑毒胡蘿卜素本發(fā)明還考慮了包括一種或多種化療劑(如FLAG、CHOP)的組合物。FLAG包括氟達拉濱、阿糖胞苷(Ara-C)和G-CSF。CHOP包括環(huán)磷酰胺、長春新堿、多柔比星和潑尼松。上述列舉的都是說明性的，而不是限制性的。
在一個實施方案中，乳腺癌可使用包括本發(fā)明的復合物與5-氟尿嘧啶、順鉑、多西他賽、多柔比星、Herceptin、吉西他濱、IL-2、紫杉醇和/或VP-16(依托泊苷)的組合的藥物組合物治療。
在另一個實施方案中，前列腺癌可使用包括本發(fā)明的復合物與紫杉醇、多西他賽、米托蒽醌和/或雄激素受體拮抗劑(如氟他胺)的組合的藥物組合物治療。
在另一個實施方案中，白血病可用包括本發(fā)明的復合物與氟達拉濱、阿糖胞苷、吉姆單抗(gemtuzumab)(MYLOTARG)、柔紅霉素、氨甲喋呤、長春新堿、6-巰基嘌呤、伊達比星、米托蒽醌、依托泊苷、天冬酰胺酶、潑尼松和/或環(huán)磷酰胺的組合的藥物組合物治療。作為另一個例子，骨髓瘤可使用包括本發(fā)明的復合物與地塞米松的組合的藥物組合物治療。優(yōu)選地，白血病為慢性髓細胞樣白血病(CML)，HSP復合物包括hsp70-肽復合物，并且治療模式為甲磺酸依馬替尼或GleevecTM。
在另一個實施方案中，黑素瘤可使用包括本發(fā)明的復合物與達卡巴嗪的組合的藥物組合物治療。
在另一個實施方案中，結腸直腸癌可使用包括本發(fā)明的復合物與伊立替康的組合的藥物組合物治療。
在另一個實施方案中，肺癌可使用包括本發(fā)明的復合物與紫杉醇、多西他賽、依托泊苷和/或順鉑的組合的藥物組合物治療。
在另一個實施方案中，非霍奇金淋巴瘤可使用包括本發(fā)明的復合物與環(huán)磷酰胺、CHOP、依托泊苷、博來霉素、米托蒽醌和/或順鉑的組合的藥物組合物治療。
在另一個實施方案中，胃癌可使用包括本發(fā)明的復合物與順鉑的組合的藥物組合物治療。
在另一個實施方案中，胰腺癌可使用包括本發(fā)明的復合物與吉西他濱的組合的藥物組合物治療。
根據(jù)本發(fā)明，可在抗癌藥物之前、之后、或同時施用本發(fā)明的復合物，用于預防或治療癌癥。根據(jù)癌癥的類型、主體的病史和狀況和所選擇的抗癌藥物，使本發(fā)明復合物的使用與化療的劑量和時間相協(xié)調。
使用本發(fā)明的復合物可附加到化療方案中。在一個實施方案中，化療劑為劑量從100到1000mg/m2/周期的吉西他濱。在一個實施方案中，化療劑為劑量從200到4000mg/m2/周期的達卡巴嗪。在優(yōu)選實施方案中，達卡巴嗪的劑量為700到1000mg/m2/周期。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從25到50mg/m2/周期的氟達拉濱。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從200到2000mg/m2/周期的阿糖胞苷(Ara-C)。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從1.5到7.5mg/kg/周期的多西他賽。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從5到15mg/kg/周期的紫杉醇。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從5到20mg/kg/周期的順鉑。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從5到20mg/kg/周期的5-氟尿嘧啶。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從2到8mg/kg/周期的多柔比星。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從40到160mg/kg/周期的鬼臼乙叉甙。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從50到200mg/kg/周期的環(huán)磷酰胺。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從50到75、75到100、100到125或125到150mg/kg/周期的伊立替康。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從3.7到5.4、5.5到7.4、7.5到11、或11到18.5mg/kg/周期的長春堿。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從0.7到1.4、或1.5到2mg/m2/周期的長春新堿。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從3.3到5、5到10、10到100或100到1000mg/m2/周期的氨甲喋呤。
在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還包括使用低劑量的化療劑作為聯(lián)合治療方案的一部分。例如，使用本發(fā)明復合物進行起始治療增加了腫瘤對隨后一定劑量的化療劑的攻擊的敏感性，該劑量接近或低于當沒有本發(fā)明的復合物時施用的化療劑劑量的下限。
在一個實施方案中，將本發(fā)明的復合物和低劑量(如6到60mg/m2/天或更低)的多西他賽對癌癥患者施用。在另一個實施方案中，將本發(fā)明的復合物和低劑量(如10到135mg/m2/天或更低)的紫杉醇對癌癥患者施用。在另一個實施方案中，將本發(fā)明的復合物和低劑量(如2.5到25mg/m2/天或更低)的氟達拉濱對癌癥患者施用。在另一個實施方案中，將本發(fā)明的復合物和低劑量(如0.5到1.5g/m2/天或更低)的阿糖胞苷(Ara-C)對癌癥患者施用。在另一個實施方案中，化療劑為劑量范圍10到100mg/m2/周期的吉西他濱。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從5到10、10到20、20到40或40到75mg/m2/周期的順鉑，如PLATINOL或PLATINOL-AQ(Bristol Myers)。在另一個實施方案中，將7.5到75mg/m2/周期的劑量的順鉑對膀胱癌患者施用。在另一個實施方案中，將5到50mg/m2/周期的劑量的順鉑對膀胱癌患者施用。在另一個實施方案中，化療劑為2到4、4到8、8到16、16到35或35到75mg/m2/周期的卡鉑，如PARAPLATIN(Bristol Myers)。在另一個實施方案中，對卵巢癌患者施用7.5到75mg/m2/周期的卡鉑。在另一個實施方案中，對膀胱癌患者施用5到50mg/m2/周期的劑量的卡鉑。在另一個實施方案中，對睪丸癌患者施用2到20mg/m2/周期的卡鉑。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從6到10、10到30或30到60mg/m2/周期的多西紫杉醇，如TAXOTERE(Rhone Poulenc Rorer)。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從10到20、20到40、40到70或70到135mg/m2/周期的紫杉醇，如TAXOL(Bristol Myers Squibb)。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從0.5到5mg/m2/周期的5-氟尿嘧啶。在另一個實施方案中，化療劑為劑量從2到4、4到8、8到15、15到30或30到60mg/m2/周期的多柔比星，如ADRIAMYCIN(Pharmacia&Upjohn)、DOXIL(Alza)、RUBEX(Bristol Myers Squibb)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物與一種或多種抗血管生成藥聯(lián)合給藥，其包括但不限于，血管緊張素、沙立度胺、kringle 5、內皮他丁、Serpin(絲氨酸蛋白酶抑制劑)抗凝血因子、纖連蛋白的29kDa氨基末端和40kDa羧基末端的蛋白水解片段、催乳素的16kDa蛋白水解片段、血小板因子-4的7.8kDa蛋白水解片段、對應于血小板因子-4的片段的13氨基酸的肽(Maione等人，1990，Cancer Res.，512077-2083)、對應于I型膠原的片段的14氨基酸的肽(Tolma等人，1993，J.Cell Biol.，122497-511)、對應于血栓收縮蛋白I的片段的19氨基酸的肽(Tolsma等人，1993，J.Cell Biol.，122497-511)、對應于SPARC片段的20氨基酸的肽(Sage等人，1995，J.Cell.Biochem.，571329-1334)、或任何片段、家族成員、或其變體，包括其藥學可接受的鹽。
還已經(jīng)描述了抑制血管生成和對應于層粘連蛋白、纖連蛋白、前膠原和EGF的片段的其它肽(參見例如Cao，1998，Prog Mol SubcellBiol.，20161-176)。已經(jīng)證明阻斷結合RGD蛋白的某些整聯(lián)蛋白的單克隆抗體和環(huán)狀五肽(即具有肽基序Arg-Gly-Asp)具有抗血管形成活性(Brooks等人，1994，Science，264569-571；Hammes等人，1996，Nature Medicine，2529-533)。此外，受體拮抗體抑制尿激酶纖溶酶原激活物受體抑制了血管生成、腫瘤生長和轉移(Min等人，1996，Cancer Res.，562428-33；Crowley等人，1993，Proc Natl AcadSci.，905021-25)。本發(fā)明還考慮了這種抗血管生成藥物與復合物的組合應用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物與激素治療組合使用。激素治療包括激素激動劑、激素拮抗劑(如氟他胺、比卡魯胺、三苯氧胺、雷洛西芬、醋酸亮丙瑞林(LUPRON)、LH-RH拮抗劑)、激素生物合成和加工的抑制劑和甾體(如地塞米松、類視黃醇、deltoids、倍他米松、氫化可的松、可的松、潑尼松、2-去氫睪酮、糖皮質激素、鹽皮質激素、雌激素、睪丸素、孕酮)、維生素A衍生物(如全反式維生素A酸(ATRA))；維生素D3類似物；抗黃體制劑(如美服培酮、奧那司酮)和抗雄激素(如醋酸環(huán)丙孕酮)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物用于與癌癥治療中的基因治療程序組合。在一個實施方案中，將分泌白介素-2的重組細胞的基因治療與本發(fā)明的復合物組合，用于預防或治療癌癥，特別是乳腺癌(參見例如Deshmukh等人，2001，J.Neurosurg.，94；287-92)。在其它實施方案中，使用多核苷酸化合物進行基因治療，多核苷酸化合物例如但不限于反義多核苷酸、核酶、RNA干擾分子、三螺旋多核苷酸等等，其中這種化合物的核苷酸序列與腫瘤或癌癥的發(fā)生、發(fā)展和/或病理學相關基因的DNA和/或RNA的核苷酸序列有關。例如，其許多為致癌基因、生長因子基因、生長因子受體基因、細胞周期基因、DNA修復基因，并且是本領域中公知的。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物與放療方案一起施用。對于放療，放射線可為γ射線或X-射線。該方法包括涉及放療的癌癥治療，如外束輻射治療、放射性同位素(I-125、鈀、銥)的組織間插植治療、放射性同位素如鍶-89、胸部放療、腹膜內磷-32放療和/或全腹部和骨盆的放療。對于放療的全面綜述，參見Hellman，第16章Principlesof Cancer ManagementRadiation Therapy，第六版，2001，DeVita等人編著，J.B.Lippencott Company，Philadelphia。在優(yōu)選實施方案中，放療作為外束輻射或遠距放射療法進行，其中輻射直接來自遠距離的放射源。在多個優(yōu)選實施方案中，放療以內部治療或淺部治療進行，其中放射源位于身體內部、靠近癌細胞或腫瘤物。還包括本發(fā)明的復合物與光動力學治療的組合應用，所述光動力學治療包括施用光敏劑如血卟啉及其衍生物、Vertoporfin(BPD-MA)、酞菁、光敏劑Pc4、去甲氧基竹紅菌甲素A；和2BA-2-DMHA。
在多個實施方案中，將本發(fā)明的復合物與至少一種化療劑的組合對待治療癌癥的癌癥患者施用短的治療周期。使用化療劑治療的持續(xù)時間可根據(jù)所用特定癌癥治療劑的不同而不同。本發(fā)明還考慮了間斷施用或將每日劑量分成若干小份施用。對于特定癌癥治療劑的適當?shù)闹委煏r間可由本領域技術人員掌握，并且本發(fā)明考慮了對每種癌癥治療劑的最佳治療計劃的持續(xù)評價。本發(fā)明考慮了其中施用單個治療或連續(xù)治療的至少一個周期，優(yōu)選多于一個周期。可由本領域技術人員掌握一個治療周期的適當長度，以及周期總數(shù)、周期間的間隔。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的復合物用于與改善癌癥癥狀(例如但不限于疼痛)和由本發(fā)明的復合物產(chǎn)生的副作用(例如但不限于流感樣癥狀、發(fā)燒等)的化合物組合。因此，可將已知減少疼痛、流感樣癥狀和發(fā)燒的許多化合物用于與本發(fā)明的復合物組合或用于與本發(fā)明復合物混合。這種化合物包括鎮(zhèn)痛藥(如對乙酰氨基酚)、解充血藥(如偽麻黃堿)、抗組胺藥(如馬來酸氯苯那敏)和止咳藥(如右美沙芬)。
5.5.目標傳染病可通過本發(fā)明的方法治療或預防的傳染病由包括但不限于病毒、細菌、真菌、原生動物、蠕蟲和寄生蟲的傳染物引起。本發(fā)明不限于治療或預防由胞內或胞外病原體引起的傳染病。聯(lián)合治療包括除了施用本發(fā)明的藥物組合物之外還使用有助于預防或治療傳染病的一種或多種模式，該模式包括但不限于抗生素、抗病毒藥、抗原生動物化合物、抗真菌化合物和驅蠕蟲藥?？捎糜谥委熁蝾A防傳染病的其它治療模式包括如上所述的免疫治療劑、多核苷酸、抗體、細胞因子和激素。
人和非人脊椎動物的傳染性病毒包括逆轉錄酶病毒、核糖核酸病毒和脫氧核糖核酸病毒。已經(jīng)在人中發(fā)現(xiàn)的病毒的例子包括但不限于逆轉錄病毒科(如人免疫缺陷病毒，如HIV-1(也稱為HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV、或HIV-III；和其它分離物如HIV-LP；小核糖核酸病毒科(如脊髓灰質炎病毒、甲型肝炎病毒；腸道病毒、人柯薩奇病毒、鼻病毒、艾柯病毒)；杯狀病毒科(如引起胃腸炎的菌株)；披膜病毒科(如馬腦炎病毒、風疹病毒)；豬瘟病毒屬(如登革熱病毒、腦炎病毒、黃熱病毒)；冠狀病毒科(如冠狀病毒)；彈狀病毒科(如水泡性口膜炎病毒、狂犬病病毒)；線病毒科(如埃博拉病毒)；副粘病毒科(如副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)；正粘液病毒科(如流感病毒)；布尼亞病毒科(如漢坦病素、寄生性野菰病毒、白蛉病毒(phleboviruses)和Nairo病毒)；沙病毒科(Arena viridae)(出血熱病毒)；呼腸病毒科(如呼腸孤病毒、環(huán)狀病毒(orbiviurses)和輪狀病毒)；雙核糖核酸病毒科；肝病毒科(乙型肝炎病毒)；細小病毒科(細小病毒)；乳多空病毒科(乳頭狀瘤病毒、多形瘤病毒)；腺病毒科(大多數(shù)腺病毒)；皰疹病毒科(單純皰疹病毒(HSV)1和2、水痘帶狀皰疹病毒、巨細胞病毒(CMV)、皰疹病毒；痘病毒科(天花病毒、牛痘病毒、痘病毒)；和虹彩病毒科(如非洲豬瘟病毒)；和未分類的病毒(如海綿狀腦病的病原體、丁型肝炎的病原體(認為是乙型肝炎病毒缺陷性附屬物、非甲非乙型肝炎的媒介物(1類＝體內傳播的；2類＝非腸道傳播的(即丙型肝炎)；諾沃克和相關病毒和星狀病毒)。
上述逆轉錄酶病毒包括單純逆轉錄酶病毒和復雜逆轉錄酶病毒。單純逆轉錄酶病毒包括B型逆轉錄酶病毒、C型逆轉錄酶病毒和D型逆轉錄酶病毒亞群。B型逆轉錄酶病毒的例子為小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)。C型逆轉錄酶病毒包括C型A組亞群(包括勞氏肉瘤病毒(RSV)、禽白血病病毒(ALV)和禽類成髓細胞瘤病毒(AMV))和C型B組亞群(包括鼠科白血病毒(MLV)、貓白血病毒(FeLV)、鼠肉瘤病毒(MSV)、長臂猿白血病毒(GALV)、脾臟壞死病毒(SNV)、網(wǎng)狀內皮組織增生病毒(RV)和猿肉瘤病毒(SSV))。D型逆轉錄酶病毒包括梅-帕猴病毒(MPMV)和1型猿逆轉錄酶病毒(SRV-1)。復雜逆轉錄酶病毒包括慢病毒、T細胞白血病病毒和泡沫病毒亞群。慢病毒包括HIV-1，而且包括HIV-2、SIV、綿羊髓鞘脫落病毒、貓科免疫缺陷病毒(FIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)。T細胞白血病病毒包括HTLV-1、HTLV-II、猿T細胞白血病毒(STLV)和牛白血病病毒(BLV)。泡沫病毒包括人泡沫病毒(HFV)、猿泡沫病毒(SFV)和牛泡沫病毒(BFV)。
作為脊椎動物抗原的核糖核酸病毒的例子包括但不限于以下呼腸病毒科成員，包括正呼腸病毒屬(哺乳動物和鳥類的逆轉錄酶病毒的多血清型)、環(huán)狀病毒屬((藍舌病病毒、Eugenangee病毒、Kemerovo病毒、非洲馬病病毒和科洛拉多蜱傳熱病毒)、輪狀病毒屬(人輪狀病毒、內布拉斯加牛腹瀉病毒、鼠科輪狀病毒、猿輪狀病毒、牛或羊輪狀病毒、禽類輪狀病毒)；小核糖核酸病毒科成員，包括腸道病毒屬(脊髓灰質炎病毒、柯薩奇病毒A和B、腸道細胞病變孤兒(ECHO)病毒、甲型肝炎病毒、猿腸道病毒、鼠科腦脊髓炎(ME)病毒、鼠脊髓灰質炎病毒、牛腸道病毒、豬腸道病毒、心病毒屬(腦炎心肌炎病毒(EMC)、門戈病毒)、鼻病毒屬(人鼻病毒包括至少113個亞型；其它鼻病毒)、口蹄疫病毒屬(口蹄疫(FMDV)；杯狀病毒科成員，包括豬水泡性泡疹病毒、San Miguel海獅病毒、貓科細小核糖核酸病毒和諾沃克病毒；披膜病毒科成員，包括甲病毒屬(東方馬腦炎病毒、塞姆利基森林病毒、辛德畢斯病毒、基孔肯雅熱病毒、奧尼翁尼翁病毒、羅斯河病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒)、蚊傳播的病毒屬(蚊傳播的黃熱病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易斯腦炎病毒、墨萊溪谷腦炎病毒、西尼羅河病毒、庫京病毒、中歐蜱傳播的病毒、遠東蜱傳播的病毒、科薩努爾森林病毒、Louping III病毒、玻瓦桑病毒、鄂木斯克出血熱病毒)、風疹病毒屬(風疹病毒)、瘟病毒屬(粘膜病病毒、豬瘟病毒、邊境病病毒)；本揚病毒科成員，包括Bunyvirus屬(布尼安維拉和相關病毒、加利福尼亞腦炎組病毒)、靜脈病毒屬(白蛉熱西西里島病毒、立夫特山谷熱病毒)、內羅病毒屬(克里米亞-剛果出血熱病毒、內羅畢綿羊病病毒)、和Uukuvirus屬(Uukuniemi和相關病毒)；正粘病毒科成員，包括流感病毒屬(流感病毒A型、多種人亞型)；豬流感病毒、和鳥類和馬流感病毒；流感B型(多種人亞型)和流感C型(可能為單獨的屬)；副粘病毒科科成員，包括副粘病毒屬(1型副流感病毒、仙臺病毒、血細胞吸附病毒、2到5型副流感病毒、新城疫病病毒、腮腺炎病毒)、麻疹病毒屬(麻疹病毒、亞急性硬化性全腦炎病毒、瘟熱病毒、牛瘟病毒)、肺炎病毒屬(呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)；森林病毒、辛德畢斯病毒、基孔肯雅病毒、奧尼翁尼翁病毒、羅斯河病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒)、蚊傳播的病毒屬(蚊傳播的黃熱病毒、登革熱病毒、日本腦炎病毒、圣路易斯腦炎病毒、墨萊溪谷腦炎病毒、西尼羅河病毒、庫京病毒、中歐蜱傳播的病毒、遠東蜱傳播的病毒、科薩努爾森林病毒、Louping III病毒、玻瓦桑病毒、鄂木斯克出血熱病毒)、風疹病毒屬(風疹病毒)、瘟病毒屬(粘膜病病毒、豬瘟病毒、邊境病病毒)；本揚病毒科成員，包括Bunyvirus屬(布尼安維拉和相關病毒、加利福尼亞腦炎組病毒)、靜脈病毒屬(白蛉熱西西里島病毒、里夫特山谷熱病毒)、內羅病毒屬(克里米亞-剛果出血熱病毒、內羅畢綿羊病病毒)、和吳孔(Uukuvirus)屬(Uukuniemi和相關病毒)；正粘病毒科成員，包括流感病毒屬(流感病毒A型、多種人亞型)；豬流感病毒和鳥類和馬流感病毒；流感B型(多種人亞型)和流感C型(可能為單獨的屬)；副粘病毒科科成員，包括副粘病毒屬(1型副流感病毒、仙臺病毒、血細胞吸附病毒、2到5型副流感病毒、新城疫病毒、腮腺炎病毒)、麻疹病毒屬(麻疹病毒、亞急性硬化性全腦炎病毒、瘟熱病毒、牛瘟病毒)、肺炎病毒屬(呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)、彈狀病毒科成員，包括水泡病毒屬(VSV)、錢迪普拉病毒、Flanders-Hart Park virus)、狂犬病毒屬(狂犬病病毒)、魚彈狀病毒和兩種可能的彈狀病毒(馬爾堡病毒和埃博拉病毒)；沙粒病毒科成員，包括淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCM)、塔卡里伯病毒復合體和拉沙熱病病毒；Coronoaviridae科成員，包括傳染性支氣管炎病毒(IBV)、小鼠肝炎病毒、人腸道冠狀病毒和貓科傳染性腹膜炎(貓科冠狀病毒)。
為脊椎動物抗原的說明性的核糖核酸病毒的例子包括但不限于以下痘病毒科，包括正痘病毒屬(重型天花、輕型天花、猴痘、牛痘、水牛痘、兔痘、缺肢畸形)、兔痘病毒屬(粘液瘤、纖維瘤)、禽痘病毒屬(禽痘、其它鳥類痘病毒)、山羊痘病毒屬(綿羊痘、山羊痘)、豬痘病毒屬(豬痘)、副痘病毒屬(傳染性小膿包皮炎病毒、偽牛痘、牛丘疹性口炎病毒)、虹彩病毒科科(非洲豬瘟病毒、蛙病毒2和3、魚的淋巴囊腫病毒)；皰疹病毒科，包括α皰疹病毒(單純性皰疹1和2型、水痘-帶狀皰疹、馬流產(chǎn)病毒、馬皰疹病毒2和3、偽狂犬病病毒、傳染性牛角膜結膜炎病毒、牛傳染性鼻氣管炎病毒、貓鼻氣管炎病毒、傳染性喉氣管炎病毒)β-皰疹病毒(人巨細胞病毒，和豬、猴和嚙齒類的巨細胞病毒)；γ皰疹病毒(埃-巴二氏病毒(EBV)、馬立克氏病病毒、松鼠猴病毒、皰疹病毒蛛猴屬、皰疹病毒棉尾兔屬、豚鼠皰疹病毒、盧克腫瘤病毒)；腺病毒科，包括哺乳動物腺病毒屬(人的A、B、C、D、E和未分組的亞群；猿腺病毒(至少23種血清型)、犬傳染性肝炎、和牛、豬、綿羊、蛙和許多其它物種的腺病毒，禽腺病毒屬(禽腺病毒)；和不可馴養(yǎng)的腺病毒；Papoviridae科，包括乳頭瘤病毒屬(人乳頭瘤病毒、牛乳頭瘤病毒、肖普兔乳頭瘤病毒和其它物種的多種致病的乳頭瘤病毒)，多瘤病毒屬(多瘤病毒、猿猴空泡病毒(SV-40)、兔空泡病毒(RKV)、K病毒、BK病毒、JC病毒、和其它靈長類動物多形瘤病毒如嗜淋巴細胞的(淋巴性)乳頭瘤病毒)；細小病毒科，包括腺病毒相關病毒屬、細小病毒屬(貓全白細胞減少癥病毒、牛細小病毒、犬細小病毒、阿留申貂病病毒等)。最后，DNA病毒可包括不符合上述科的病毒如庫魯病毒和克雅氏病病毒和慢性傳染性神經(jīng)病媒介物。
可用于與本發(fā)明的復合物組合的抗病毒化合物的許多例子為本領域種已知的，其包括但不限于利福平、核苷逆轉錄酶抑制劑(如AZT、ddI、ddC、3TC、d4T)、非核苷逆轉錄酶抑制劑(如依法韋侖、奈韋拉平)、蛋白酶抑制劑(如aprenavir、茚地那韋、利托那韋和沙奎那韋)、碘苷、西多福韋、阿昔洛韋、更昔洛韋、扎那米韋、金剛烷胺、和帕利珠單抗(Palivizumab)。抗病毒藥的其它例子包括但不限于醋孟南(Acemannan)；阿昔洛韋；阿昔洛韋鈉；阿德福韋；阿洛夫定；阿韋舒托；鹽酸金剛烷胺；阿拉諾??；阿立酮；甲磺酸阿替韋啶；阿夫立定；昔多福韋；西潘茶堿；鹽酸阿糖胞苷；甲磺酸德拉韋定；地昔洛韋；去羥肌苷；二沙利；依度尿苷；恩韋拉登；恩韋肟；泛昔洛韋；鹽酸法莫??；非西他濱；非阿尿苷；膦利酯；膦甲酸鈉；膦乙醇鈉；更昔洛韋；更昔洛韋鈉；碘苷；去氧丁酮醛；拉米夫定；洛布卡韋；鹽酸美莫?。幻捞嫔畴?Methisazone)；奈韋拉平；噴昔洛韋；吡羅達韋；力巴韋林；鹽酸金剛乙胺；甲磺酸沙奎那韋；鹽酸索金剛胺；索立夫定；維司托隆(statolon)；司他呋啶；鹽酸替洛??；三氟胸腺嘧啶核苷；鹽酸伐昔洛韋；阿糖腺苷；磷酸阿糖腺苷；阿糖腺苷磷酸二鈉；韋羅肟；扎西他濱；齊多夫定；凈韋肟。
可通過本發(fā)明的方法治療或預防的細菌感染或疾病由細菌引起，其包括但不限于在其生命周期中具有胞內寄生階段的細菌如分枝桿菌(如肺結核分枝桿菌(Mycobacteria tuberculosis)、牛分支桿菌(M.Bovis)、鳥分支桿菌(M.Avium)、麻風分枝桿菌(M.Leprae)、或非洲結核菌(M.Africanum))、立克次氏體、支原體、衣原體和軍團菌。考慮的細菌感染的其它例子包括但不限于由革蘭氏陽性桿菌(如李斯特桿菌(Listeria，Bacillus)如炭疽桿菌(Bacillus anthracis)、丹毒絲菌屬(Erysipelothrixspecies))、革蘭氏陰性桿菌(如巴爾通體桿菌(Bartonella)、布魯氏桿菌(Brucella)、彎曲桿菌(Campylobacter)、腸桿菌(Enterobacter)、埃希氏桿菌(Escherichia)、弗朗西斯氏菌屬(Francisella)、嗜血桿菌(Hemophilus)、克雷伯氏桿菌(Klebsiella)、摩根氏桿菌(Morganella)、變形桿菌(Proteus)、普羅威登斯菌(Providencia)、假單胞菌(Pseudomonas)、沙門氏菌(Salmonella)、沙雷氏菌(Serratia)、志賀氏桿菌(Shigella)、弧菌(Vibrio)和耶爾森氏菌(Yersinia))、螺旋體細菌(如疏螺旋菌(Borrelia)，包括引起萊姆癥的博氏疏螺旋菌(Borreliaburgdorferi))、厭氧菌(如放線菌(Actinomyces)和梭狀芽孢桿菌(Clostridium))、革蘭氏陽性和陰性球菌、腸球菌(Enterococcus)類、鏈球菌(Streptococcus)類、肺炎球菌(Pneumococcus)類、葡萄球菌(Staphylococcus)類、奈瑟氏球菌屬(Neisseria gonorrhoeae)類。感染菌的例子包括但不限于幽門螺旋桿菌(Helicobacterpyloris)、博氏疏螺旋菌(Borelia burgdorferi)、嗜肺性軍團菌(Legionella pneumophilia)、結核分枝桿菌(Mycobacteriatuberculosis)、鳥分支桿菌(M.Avium)、胞內分支桿菌(M.Intracellulare)、堪薩分枝桿菌(M.kansaii)、戈登氏分枝桿菌、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)、單核細胞增多性利斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)(A組鏈球菌)、無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)(B組鏈球菌)、草綠色鏈球菌(Streptococcus viridans)、糞鏈球菌(Streptococcus faecalis)、牛鏈球菌(Streptococcus bovis)、肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、Bacillusantracis、白喉棒狀桿菌(corynebacterium diphtheriae)、紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、梭狀芽孢桿菌(Clostridium perfringers)、破傷風桿菌(Clostridium tetani)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、克雷伯氏肺炎菌(Klebsiella pneunaomae)、巴氏桿菌(Pasturella multocida)、具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum)、念珠狀鏈桿菌(Streptobacillus moniliformis)、蒼白密螺旋體(Treponemapallidium)、細弱密螺旋體(Treponema pertenue)、鉤端螺旋體(Leptospira)、立克次氏體(Rickettisa)和以色裂放線菌(Actinomyces israelli)引起的感染。
可用于與本發(fā)明的復合物組合的抗菌劑或抗生素包括但不限于氨基糖苷類抗生素(如安普霉素、阿貝卡星、班貝霉素、布替羅星、地貝卡星、新霉素、新霉素、十一碳烯酸鹽、奈替米星、巴龍霉素、核糖霉素、紫蘇霉素和壯觀霉素)、amphenicol抗生素(如疊氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考和甲砜氯霉素)、安莎霉素抗生素(如利福米特和利福平)、碳頭孢烯類(如氯碳頭孢)、碳青霉烯類(如比阿培南和亞胺培南)、頭孢菌素(如頭孢克洛、頭孢羥氨芐、頭孢羥唑、羥胺唑頭孢菌素、頭孢西酮、頭孢唑蘭、頭孢咪唑、頭孢匹胺和頭孢匹羅)、頭霉素(如頭孢拉宗、頭孢美唑(cefmetazole)和頭孢米諾)、單環(huán)β-內酰胺類(如氨曲南、卡蘆莫南和替吉莫南)、氧頭孢(如氟氧頭孢、拉氧頭孢)、青霉素(如氮卓脒青霉素、氮卓脒青霉素匹酯、阿莫西林、巴氨西林、芐基青霉烷酸、芐青霉素鈉、依匹西林、芬貝西林、氟氯青霉素、培那西林、氫碘酸噴沙西林、盤尼西林o-苯乙芐胺、盤尼西林0、盤尼西林V、盤尼西林V芐星青霉素、哈胺盤尼西林V、青哌環(huán)素和phencihicillin鉀)、林肯胺類(如克林霉素和林肯霉素)、大環(huán)內酯(如阿奇霉素、碳霉素、克拉霉素、羅紅霉素、紅霉素和醋硬脂紅霉素)、安福霉素、桿菌肽、卷曲霉素、粘菌素、持久殺菌素、結核放線菌素、四環(huán)素(如阿哌環(huán)素、氯四環(huán)素、羥甲金霉素和地美環(huán)素)、2，4-二氨基嘧啶(如溴莫普林)、硝基呋喃(如呋嗎唑酮和呋唑氯銨)、喹諾酮及其類似物(如西諾沙星、環(huán)丙沙星、克林沙星、氟甲喹和grepagloxacin)、磺胺(如乙酰基磺胺甲氧吡嗪、芐磺胺、苯丙磺胺二磺酸鈉、酞磺醋胺、磺胺柯定和磺胺乙胞嘧啶)、砜(如地百里砜、葡糖砜鈉、和苯丙砜)、環(huán)絲氨酸、莫匹羅星和馬鈴薯球蛋白。
抗菌劑的另外的例子包括但不限于醋氨苯砜；醋胺磺胺苯砜鈉；阿來霉素；阿來西定；氮卓脒青霉素；氮卓脒青霉素匹酯；阿米環(huán)素；氨氟沙星；甲磺酸氨氟沙星；阿米卡星；硫酸阿米卡星；氨基水楊酸；氨基水楊酸鈉；阿莫西林；安福霉素；氨芐西林；氨芐西林鈉；阿帕西林鈉；安普霉素；門冬托星；硫酸阿司米星；阿維霉素；阿伏霉素；阿奇霉素；阿洛西林；阿洛西林鈉；鹽酸巴氨西林；桿菌肽；枯亞甲基雙水楊酸桿菌肽；桿菌肽鋅；黃霉素；苯沙酸鈣；紅霉素B；硫酸倍他米星；比阿培南；比尼霉素；鹽酸苯柳胺酯；硫酸鎂雙巰氧吡啶；布替卡星；硫酸布替羅星；硫酸卷曲霉素；卡巴多司；羧芐青霉素二鈉；卡茚西林鈉；卡非西林鈉；羧芐西林鉀；卡蘆莫南鈉；頭孢克洛；頭孢羥氨芐；頭孢孟多酯；頭孢孟多酯鈉；頭孢孟多酯鈉；頭孢帕羅；頭孢曲嗪；頭孢氟唑鈉；頭孢唑啉；頭孢唑啉鈉；頭孢拉宗；頭孢地尼；頭孢吡肟；鹽酸頭孢吡肟；頭孢替考；頭孢克肟；CefmnenoximeHydrochloride；頭孢美唑；頭孢美唑鈉；頭孢尼西單鈉；頭孢尼西鈉；頭孢哌酮鈉；頭孢雷特；頭孢噻肟鈉；頭孢替坦；頭孢替坦二鈉；鹽酸頭孢替安；頭孢西??；頭孢西丁鈉；頭孢咪唑；頭孢咪唑鈉；頭孢匹胺；頭孢匹胺鈉；硫酸頭孢匹羅；頭孢泊肟酯；頭孢丙烯；頭孢沙定；頭孢磺啶鈉；頭孢他定；頭孢布烯；頭孢唑肟鈉；頭孢曲松鈉；頭孢呋辛；頭孢呋辛肟酯；頭孢呋辛匹賽酯；頭孢呋辛鈉；頭孢乙腈鈉；頭孢氨芐；鹽酸頭孢氨芐；頭孢甘酸；頭孢噻啶；頭孢噻吩鈉；頭孢匹林鈉；頭孢拉定；鹽酸西托環(huán)素；乙酰霉素；氯霉素；棕櫚酸氯霉素；氯霉素泛酸復合物；氯霉素琥珀酸鈉；氨基苯磷酸氯己定；氯二甲酚；二硫酸金霉素；鹽酸金霉素；西諾沙星；環(huán)丙沙星；鹽酸環(huán)丙沙星；西羅霉素；克拉霉素；鹽酸克林沙星；克林霉素；鹽酸克林霉素；鹽酸氯林可霉素棕櫚酸酯；磷酸克林霉素；氯法齊明；芐星氯唑西林；氯唑西林鈉；氯羥喹(Cloxyquin)；多粘菌素E甲磺酸鈉；硫酸粘菌素；庫馬霉素；庫馬霉素鈉；環(huán)西林；環(huán)絲胺酸；達福普汀(Dalfopristin)；氨苯砜；達托霉素；去甲環(huán)素；鹽酸去甲環(huán)素；去甲環(huán)素；地奴真菌素(Denofungin)；二氨藜蘆啶；雙氯西林；雙氯西林鈉；硫酸雙氫鏈霉素；雙吡硫翁；地紅霉素；多西環(huán)素；多西環(huán)素鈣；多西環(huán)素Fosfatex；鹽酸多西環(huán)素；屈克沙星鈉；依諾沙星；依匹西林；鹽酸差向四環(huán)素；紅霉素；醋硬脂紅霉素；依托紅霉素；琥乙紅霉素；葡庚糖酸紅霉素；乳糖紅霉素；丙酸紅霉素；硬脂酸紅霉素；鹽酸乙胺丁醇；乙硫異煙胺；氟羅沙星；氟氯西林；氟氘丙氨酸；氟甲喹；磷霉素；磷霉素氨丁三醇；呋莫西林；呋唑氯銨；酒石酸呋噻咪唑；夫西地酸鈉；夫西地；硫酸慶大霉素；格洛莫南；短桿菌肽(Gramicidin)；碘氯苯炔醚；海他西林；海他西林鉀；?？宋鞫?；依巴沙星；亞胺培南(Imipenem)；異康唑；異帕米星；異煙肼；交沙霉素；硫酸卡那霉素；吉他霉素；左呋喃他酮；左普匹西林鉀；來紅霉素；林可霉素；鹽酸林可霉素；洛美沙星；鹽酸洛美沙星；甲磺酸洛美沙星；氯碳頭孢；磺胺米隆；甲氯環(huán)素；磺基水楊酸甲氯環(huán)素；巨霉素磷酸二氫鉀；美喹多司；美洛培南；甲烯土霉素；鹽酸甲烯土霉素；烏洛托品；馬尿酸烏洛托品；孟得立酸烏洛托品；甲氧西林鈉；美替普林；鹽酸甲硝唑；磷酸甲硝唑；美洛西林；美洛西林鈉；美諾四環(huán)素；鹽酸美諾四環(huán)素；鹽酸米林可霉素；莫能菌素；莫能菌素鈉；萘夫西林鈉；萘啶酸鈉；萘啶酸；納他霉素；暗霉素；棕櫚酸新霉素；硫酸新霉素；十一碳烯酸新霉素；硫酸奈替米星；中性霉素；硝呋拉定；硝呋地腙；硝呋太爾；硝呋??；硝呋達齊；硝呋米特；硝呋吡醇；硝呋奎唑；硝呋噻唑；硝環(huán)素；呋喃妥因；硝米特；諾氟沙星；新生霉素鈉；氧氟沙星；奧美普林；苯唑西林鈉；肟莫南；肟莫南鈉；奧索利酸；土霉素；土霉素鈣；鹽酸土霉素；帕地霉素；對氯酚；保洛霉素；培氟沙星；甲磺酸培氟沙星；培那西林；盤尼西林G芐星青霉素；盤尼西林G鉀；盤尼西林G普魯卡因；盤尼西林G鈉；盤尼西林V；盤尼西林V芐星青霉素；哈胺盤尼西林V；盤尼西林V鉀；戊胺唑酮鈉；對氨基水楊酸苯酯；哌拉西林鈉；吡芐西林鈉；吡地西林鈉；鹽酸吡利霉素；鹽酸匹氨西林；雙羥萘酸匹氨西林；匹氨西林丙苯酸；硫酸多粘菌素B；泊非霉素；普匹卡星；吡嗪酰胺；吡硫翁鋅；乙酸喹地卡明；喹奴普??；消旋甲砜霉素(Racephenicol)；雷莫拉寧；雷尼霉素；雷洛霉素；瑞普米星；利福布汀；利福美坦；利?？宋?；利福米特；利福平；利福噴?。焕Ｎ裘?；羅利環(huán)素；硝酸羅利環(huán)素；羅沙米星；丁酸羅沙米星；丙酸羅沙米星；羅沙米星磷酸酯鈉；硬脂酸羅沙米星；羅索沙星；羅沙胂；羅紅霉素；山環(huán)素；山費培南鈉；沙莫西林；沙匹西林；司可芬凈(Scopafingin)；紫蘇霉素；硫酸紫蘇霉素；司帕沙星；鹽酸大觀霉；螺旋霉素；鹽酸司他霉素；司替霉素；硫酸鏈霉素；鏈霉素異煙肼(Streptonicozid)；磺胺苯；磺胺苯酰；磺胺醋酰；磺胺醋酰鈉；磺胺西??；磺胺嘧啶；磺胺嘧啶鈉；磺胺多辛；磺胺林；磺胺甲基嘧啶；磺胺對甲氧嘧啶；磺胺二甲嘧啶；磺胺甲二唑；磺胺甲基異唑；磺胺間甲氧嘧啶；磺胺唑；磺胺酸鋅；磺胺硝苯；柳氮磺吡啶；磺胺異噻唑；磺胺噻唑；磺胺吡唑；磺胺異唑；乙?；前樊慂冗?；磺胺異唑二乙醇胺鹽(Diolamine)；磺粘菌素；硫培南；舒他西林；森西林鈉；鹽酸酞氨西林；替考拉寧；鹽酸替馬沙星；替莫西林；四環(huán)素；鹽酸四環(huán)素；四環(huán)素磷酸酯復合物；四氧普林；甲砜霉素；Thiphencillin鉀；替卡西林甲苯酯鈉；替卡西林二鈉；替卡西林鈉；替克拉酮；氯化氯苯噻碘(TiodoniumChloride)；妥布霉素；硫酸妥布霉素；妥舒沙星；甲氧芐啶；硫酸甲氧芐啶；三磺嘧啶(Trisulfapyrimidines)；醋竹桃霉素；硫酸丙大觀霉素；短桿菌素；萬古霉素；鹽酸萬古霉素；維吉霉素；佐爾博霉素。
可由本發(fā)明的方法治療或預防的真菌病包括但不限于曲霉病、隱球菌病、孢子絲菌病、球孢子菌病、巴西芽生菌病、組織胞漿菌病、芽生菌病、接合菌病和念珠菌病。
可用于與本發(fā)明的復合物組合分抗真菌化合物包括但不限于多烯(如兩性霉素B、殺念珠菌素、美帕曲星、游霉素和制霉菌素)、烯丙胺(如布特萘芬和萘替芬)、咪唑(如聯(lián)苯芐唑、布康唑、氯登妥因、氟曲康唑、異康唑、酮康唑和蘭諾康唑)、硫代氨基甲酸酯(如托西拉酯、托林達酯和托萘酯)、三唑(如氟康唑、伊曲康唑、沙康唑和特康唑)、溴柳氯苯胺、丁氯柳胺丙酸鈣、氯酚醚、環(huán)吡司、偶氮絲氨酸、灰黃霉素、寡霉素、新霉素十一碳烯酸酯、吡咯尼群、干蠕孢菌素、殺結核菌素和綠膠霉素。
抗真菌化合物的另外的例子包括但不限于吖啶瑣辛；安布替星；兩性霉素B；阿扎康唑；偶氮絲氨酸；巴西芬凈；聯(lián)苯芐唑；鹽酸苯柳胺酯；硫酸鎂雙巰氧吡啶(Bispyrithione Magsulfex)；硝酸布康唑；十一碳烯酸鈣；殺念珠菌素；石炭酸品紅；氯登妥因；環(huán)吡司；環(huán)吡酮胺；西洛芬凈；順康唑；克霉唑；銅邁星；地奴真菌素(Denofungin)；雙吡硫；多康唑；益康唑；硝酸益康唑；恩康唑；硝酸依托南；硝酸芬替康唑；非律平(Filipin)；氟康唑；氟胞嘧啶；真菌霉素；灰黃霉素；哈霉素；異康唑；伊曲康唑；卡拉芬凈；酮康唑；Lomofingin；利迪霉素；美帕曲星；咪康唑；硝酸咪康唑；莫能菌素；莫能菌素鈉；鹽酸萘替芬；新霉素十一碳烯酸酯；硝呋太爾；硝呋美??；鹽酸硝拉明；制霉菌素；辛酸；硝酸奧康唑；硝酸奧昔康唑；鹽酸奧昔芬凈；鹽酸帕康唑；帕曲星；碘化鉀；丙氯諾；吡硫翁鋅；吡咯尼群；蘆他霉素；血根氯銨；沙康唑；司可芬凈；二硫化硒；西奈芬凈；硝酸硫康唑；特比萘芬；特康唑；福美雙；替克拉酮；噻康唑；托西拉酯；托林達酯；托萘酯；三醋精；Triafuigin；十一碳烯酸；Viridoflilvin；十一碳烯酸鋅；和鹽酸齊諾康唑。
可由本發(fā)明分方法治療或預防的寄生蟲病包括但不限于變形蟲病、瘧疾、利什曼原蟲病、球蟲病、賈第鞭毛蟲病、隱孢球蟲病、弓形體病和錐蟲病。還包括多種蠕蟲的感染，例如但不限于蛔蟲病、鉤蟲病、鞭蟲病、類圓線蟲病、toxoccariasis、旋毛蟲病、盤尾絲蟲病、絲蟲病和惡絲蟲病。還包括多種吸蟲的感染，例如但不限于血吸蟲病、肺吸蟲病和支睪吸蟲病。引起這些疾病的寄生蟲可根據(jù)它們是否為胞內寄生或胞外寄生分類。如本文中使用的，“胞內寄生蟲”為其整個生命周期在細胞內的寄生蟲。人胞內寄生蟲的例子包括利什曼原蟲(Leishnzania spp.)、瘧原蟲(Plasmodium spp.)、南美洲錐蟲、鼠弓形蟲、Babesia spp.和旋毛蟲。如本文中使用的“胞外寄生蟲”為其整個生命周期在細胞外的寄生蟲。能夠感染人的胞外寄生蟲包括痢疾內變形蟲、腸蘭伯鞭毛蟲、比氏腸胞蟲(Enterocytozoonbieneusi)、耐格里原蟲(Naegleria)和棘阿米巴蟲(Acantlaamoeba)以及大部分蠕蟲。另一類寄生蟲定義為主要為胞外的，但在其生命周期的關鍵階段在強制在細胞內存在。這種寄生蟲在本文中稱為“強制的胞內寄生蟲”。這些寄生蟲可在胞外環(huán)境中度過其大部分生命或小部分生命，但在其生命周期中至少有一段強制胞內期。后者的這一類寄生蟲包括羅德西亞錐蟲和岡比亞錐蟲(Trypanosoma gambiense)、等孢子球蟲(Isospora spp.)、隱孢子球蟲(Cryptosporidium spp.)、愛美球蟲(Eimeria spp.)、新孢蟲(Neospora spp.)、肉胞子蟲(Sarcocystis spp.)和血吸蟲(Schistosoma spp.)。
可用于本發(fā)明的復合物組合治療寄生蟲病的抗原生動物化合物的許多例子為本領域中已知的，其包括但不限于奎寧、氯喹、甲氟喹、氯胍、乙胺嘧啶、甲硝噠唑、二氯尼特、替硝唑、兩性霉素、葡萄糖酸銻鈉、復方新諾明和噴他脒?？捎糜谂c本發(fā)明的復合物組合治療寄生蟲病的殺寄生蟲藥物的許多例子為本領域中已知的，其包括但不限于甲苯咪唑、左旋咪唑、氯硝柳胺、吡喹酮、丙硫咪唑、伊維菌素、乙胺嗪和噻苯咪唑?？辜纳x化合物的其它例子包括但不限于醋氨苯砜；鹽酸氨酚喹；氨喹酯；阿替夫林；氯喹；鹽酸氯喹；磷酸氯喹；雙羥萘酸環(huán)氯胍；磷酸恩哌羅林；鹽酸氯氟非烷；硫酸羥氯喹；鹽酸甲氟喹；美諾克酮；鹽酸米林霉素；磷酸伯氨喹；乙胺嘧啶；硫酸奎寧；和替布喹。
在一些實施方案中，可使用抗體治療和/或預防傳染病。在一個不太優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的復合物可用于與非α2M系疫苗組合物組合。這種人用疫苗的例子在The Jordan Report 2000，AcceleratedDevelopment of Vaccines，National Institute of Health中有所描述，其全文并入本文作為參考。用于治療非人脊椎動物的許多疫苗在Bennett，K.，Compendium of Veterinary Products，第三版，North American Compendiums，Inc.，1995中有所公開，其全文并入本文作為參考。
5.6.治療方案對于上述用于治療或預防癌癥和傳染病的任何聯(lián)合治療，本發(fā)明的藥物組合物可在聯(lián)合模式施用之前、同時、或之后施用。所聯(lián)合模式可為上述用于治療或預防癌癥或傳染病的模式中的任一項。
在一個實施方案中，將本發(fā)明的藥物組合物在合理的時間與另一種模式同時對主體施用。該方法規(guī)定兩種施用在彼此少于一分鐘到約五分鐘或最大為約六十分鐘的時間范圍內施用，例如，在同一次訪視內。
在另一個實施方案中，恰好同時施用本發(fā)明的藥物組合物和聯(lián)合模式。在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物與聯(lián)合模式依次施用并在使本發(fā)明的藥物組合物與模式可以同時起作用以提供比它們單獨施用時的利益增加的時間間隔施用。在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物與聯(lián)合模式的施用在時間上充分接近，以提供所需的治療或預防結果。各自可以以任何適當?shù)男问胶屯ㄟ^任何適合途徑同時或分別施用。在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物與模式通過不同的給藥途徑施用。在選擇性的實施方案中，二者各自通過相同的給藥途徑施用。本發(fā)明的藥物組合物可在相同或不同部位施用，如臂和腿。當同時施用時，本發(fā)明的藥物組合物和聯(lián)合模式可以以混合物或不以混合物的形式施用或通過相同的給藥途徑在相同的部位施用。
在多個實施方案中，本發(fā)明的復合物和聯(lián)合模式以少于1小時的間隔、約1小時的間隔、1小時到2小時的間隔、2小時到3小時的間隔、3小時到4小時的間隔、4小時到5小時的間隔、5小時到6小時的間隔、6小時到7小時的間隔、7小時到8小時的間隔、8小時到9小時的間隔、9小時到10小時的間隔、10小時到11小時的間隔、11小時到12小時的間隔、不超過24小時的間隔或不超過48小時的間隔施用。在其它實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物和疫苗組合物以2到4天的間隔、4到6天的間隔、1周的間隔、1到2周的間隔、2到4周的間隔、一個月的間隔、1到2個月的間隔、或超過2個月的間隔施用。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的復合物和聯(lián)合模式在其中兩者都仍具有活性的時間范圍中施用。本領域技術人員能夠通過檢測各個施用組分的半衰期確定這種時間范圍。
在一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物和聯(lián)合模式在同一次就醫(yī)訪視中施用。在一個具體的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物在所述模式之前施用。在選擇性的具體實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物在所述模式之后施用。
在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物和模式周期地對主體施用。周期治療包括施用本發(fā)明的藥物組合物一段時間，然后施用模式一段時間，并重復這種順序式施用。周期治療可以減少對一種或多種治療形成抗藥性、避免或減少其中一種治療的副作用和/或改善治療效果。在這種實施方案中，本發(fā)明考慮了本發(fā)明的藥物組合物在4到6天后、優(yōu)選2到4天后、更優(yōu)選1到2天后交替施用所述模式，其中這種循環(huán)可以依照需要重復任意多次。在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物和模式以少于3周、每二周一次、每10天一次或每周一次交替地施用。在某些實施方案中，約每1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10天對患者施用本發(fā)明的組合物。
在一個具體的實施方案中，在施用模式之后一小時到二十四小時對主體施用本發(fā)明的藥物組合物。如果使用了緩釋或持續(xù)釋放型的模式給藥系統(tǒng)，則時間范圍可以再延長至少幾天。在某些實施方案中，如上所述，在患者余生的整個過程中定期對主體施用本發(fā)明的藥物組合物。
5.7.CD91活性分析在其純化之后，可以進一步表征α2M-抗原分子復合物，以測量其對CD91活性和CD91信號轉導途徑的影響。例如，可以通過測試α2M-抗原分子復合物對CD91細胞活性的作用表征α2M-抗原分子復合物。這種分析包括下游信號轉導分析、抗原呈遞分析、細胞毒性T細胞的抗原特異性活化分析等等。這種分析可用于測試和/或測量免疫應答。
在多個實施方案中，可測試α2M復合物測試對先天CD91信號轉導活性的作用。例如，可以分析的CD91活化的下游信號轉導作用包括但不限于巨噬細胞的增加的移動和趨化性(Forrester等人，1983，Immunology，50251-259)、蛋白酶合成的負調節(jié)、和細胞內鈣、肌醇磷酸和環(huán)腺苷酸的上升(Misra等人，1993，Biochem.J.，290885-891)?？梢詼y試的其它先天免疫應答為細胞因子(即IL-12、IL1β、GMCSF、和TNFα)的釋放。
例如，在一個實施方案中，可使用趨化性試驗進一步表征從哺乳動物血清分離的α2M復合物候選物。已知由蛋白酶相互作用改性的α2M可誘導細胞向其配體定向移動。有許多技術可用于試驗體外趨化性移動(參見例如Leonard等人，1995，“MeasurementαandβChemokines”，在Current Protocols inImmunology中，6.12.1-6.12.28Coligan等人編，John Wiley&Sons，Inc.，1995)。例如，在一個實施方案中，可以在多孔Boyden趨化室中使用趨化因子梯度測試候選化合物調節(jié)誘導表達α2MR受體的細胞移動的能力的能力。在這種方法的具體例子中，將在初步篩選中的確定的α2M復合物的一系列稀釋物置于Boyden趨化性箱的底層孔中。還向稀釋物系列中加入恒量配體。作為對照，至少一個等分液只包含配體(如α2M)。通過比較只包含配體(如α2M)的等分液移動到膜濾器下表面上的細胞數(shù)量與包含α2M多肽和配體(如α2M)的等分液中的細胞數(shù)量測量α2M復合物對α2MR的趨化性活性的貢獻。如果向配體(如α2M)溶液中加入α2M復合物引起被測細胞數(shù)相對于使用只包含配體(如α2M)的溶液引起被測細胞數(shù)減少，則確定了表達α2M細胞的趨化性活性的配體(如α2M)誘導的拮抗劑。
細胞內的離子鈣([Ca2+]i)濃度上升也是α2MR活化的標志(Misra等人，1993，同前)。因此，在另一個實施方案中，鈣流分析可用作進一步表征α2M復合物作用的二次篩選。在配體的存在下、在有或沒有α2M復合物的存在下測量表達CD91的細胞的細胞內鈣離子濃度。例如，可以通過流式細胞計標記細胞內捕捉的熒光染料而檢測和測量鈣流動。熒光染料，如Indo-1，在結合鈣時表現(xiàn)出發(fā)射光譜改變，由鈣結合染料產(chǎn)生的熒光對未結合染料產(chǎn)生的熒光的比可用于評價細胞內鈣濃度。在具體的實施方案中，在包含Indo-1的介質中在37℃下在小杯中培養(yǎng)細胞并將其激發(fā)，使用熒光計(Photon TechnologyCorporation，International)測量熒光。在有或沒有α2M復合物的存在下在特定時間點加入配體，向小杯中加入EGTA以釋放并螯合全部的鈣并測量應答。配體的結合引起表達α2MR的細胞中細胞內Ca2+濃度增加。激動劑引起細胞內Ca2+濃度相對增加，而拮抗劑引起細胞內Ca2+濃度相對降低。
在其它實施方案中，為了檢測或測量α2M-抗原分子復合物的活性，可進行抗原呈遞試驗以預測α2M-抗原分子復合物在體內如何發(fā)生作用。
這種再呈遞試驗為本領域中已知的，其已經(jīng)在先前描述過(Suto和Srivastava，1995，Science，2691585-1588)。例如，在一個實施方案中，在介質中將抗原呈遞細胞如巨噬細胞系(如RAW264.7)與抗原特異性T細胞混合，使用約1∶1比的每個類型的約10,000個細胞。向細胞加入α2M和肽抗原的復合物并培養(yǎng)約20小時。在一個實施方案中，IFN-γ釋放試驗可用于測量或檢測T細胞應答。水洗后將細胞固定，透化并和可與人IFN-γ反應的染料標記的抗體(PE-抗-IFN-γ)反應。使用標準技術通過流式細胞計分析樣品。或者，可使用過濾免疫檢測、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附檢測)或酶聯(lián)免疫印跡檢測(ELISPOT)檢測由激活的T細胞產(chǎn)生的特異性細胞因子。在一個實施方案中，例如，用純化的細胞因子特異性一級抗體，即抗-IFN-γ包被硝化纖維素背襯的微量滴定板，并將板封閉以避免由于其它蛋白質的非特異性結合產(chǎn)生的背景。在微量滴定板的孔上稀釋用抗原刺激的APC細胞樣品。加入標記的，如生物素標記的二級抗細胞因子抗體。從而能夠通過例如酶共軛的鏈親和素等方法檢測，細胞因子分泌細胞會在視覺、顯微鏡、或電子檢測方法下表現(xiàn)為“斑點”而檢測抗體細胞因子復合物。在另一個實施方案中，可使用“四聚物染色”試驗(Altman等人，1996，Science，27494-96)識別抗原特異性T-細胞。例如，將包含特異性肽抗原的MHC分子多聚，制成可溶性肽四聚物并通過例如復合于鏈親和素進行標記。然后將MHC-肽抗原復合物與刺激后的T細胞群體混合。然后使用生物素染色T-細胞，T-細胞識別并結合于MHC-抗原復合物。
5.8.誘導腫瘤細胞壞死在本發(fā)明的某些實施方案中，在從動物分離α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物之前在哺乳動物中誘導腫瘤壞死可能是有利的。申請人已經(jīng)證明在分離復合物之前誘導腫瘤壞死可以增加復合物在治療和預防癌癥中的有效性。參見第6部分實施例結果。申請人相信，本身不限于任一種理論，壞死的腫瘤細胞釋放腫瘤特異性抗原。釋放的抗原分子然后進入體液如血液并與α(2)巨球蛋白形成復合物。
許多方法可用于誘導腫瘤壞死。施用誘導腫瘤細胞壞死的藥物為癌癥治療中常見的。腫瘤壞死藥物的例子包括但不限于漂白劑、順鉑/腎上腺素可注射膠凝(Vogl等人，2002，British Journal of Cancer，86(4)524-529)、ONO-4007，脂質A合成類似物(Satoh等人，2002，Cancer Immunol.Immunother，50(12)653-662)、腫瘤壞死因子(TNF)、可溶性乙醇(Burgener等人，1987、Invest Radiol.，22(6)472-478)、抗表皮生長因子受體(αEGFr)抗體(Wersall等人，1997，Cancer Immunol.Immunother.，44(3)157-164)、OK-432，用青霉素處理的凍干鏈球菌(Ishiko等人，1997，Int.J.Immunopharmacol.，19(7)405-412)、腺病毒(ONYX-015)(Ganly等人，2000，Clin.Cancer Res.，6(3)798-806)、IL4-PE嵌合蛋白(Rand等人，2000，Clin.Cancer Res.，6(6)2157-2165)，尼莫司汀(ACNU)(Wakabayashi等人，2001，18(1)23-28)。
也可以使用其它方法實現(xiàn)腫瘤壞死，例如但不限于，包括使用hypercin的光動力學治療的腫瘤光敏化(Blank等人，2001，Oncol.Res.，12(9-10409-418))、美國專利6,131,577中所述的組織選擇性微波照射、美國專利5,928,159中所述的對腫瘤組織施加加熱以誘導壞死、美國專利5,897,549中所述的表面下方肉體的激光加熱、美國專利5,895,356和5,843,144中描述的引起前列腺腫瘤壞死的經(jīng)尿道聚焦超聲療法、美國專利5,891457中所述的將硝酸銀和右旋糖酐糊用于子宮癌以實現(xiàn)體腔里層壞死、美國專利5,776,175中所述的脈沖磁幅射、美國專利5,527,352中所述的非電離輻射、美國專利5,492,529中所述的具有加熱設備的導管、美國專利5,487,740中所述的激光能的內窺鏡引導、美國專利5,318,564、4,186,729和4,237,898中所述的用電極加熱選擇性組織的裝置、美國專利5,186,181、4,154,246、4,119,102、3,991,770和4,230,129中所述的射頻溫熱療法、美國專利5,159,925中所述的用于治療內組織里層的可加熱的可膨脹裝置、美國專利5,149,527中所述的免疫增強組合物、美國專利4,983,159和4,392,040和4,545,368中所述的在腫瘤組織附近注射鐵磁性顆粒、美國專利4,763,671中所述的用導管對組織施加加熱和放射、和美國專利3,674,031中所述的使用液化氣冷卻介質治療組織。
在某些實施方案中，誘導壞死可以在分離α(2)巨球蛋白復合物之前的一小時到二個月之間進行。在具體的實施方案中，誘導可為在分離α(2)巨球蛋白復合物之前的1小時、12小時、1天、3天、1周、3周、5周、1個月或2個月進行。如熟練的醫(yī)師可以理解的，根據(jù)需要，可以重復誘導壞死。
在某些實施方案中，在分離α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物之前對患者施用化療劑。在這種實施方案中，可使用例如以上5.4部分中所述的那些化療劑。
上述描述誘導腫瘤壞死的參考文獻全文并入本文作為參考。
5.9.給藥方案和制劑可將本發(fā)明的α2M多肽和抗原分子的共價或非共價復合物配置成用于對哺乳動物給藥、用于以免疫治療有效量治療或預防癌癥或傳染病的藥物制劑。藥物溶出度和吸收部位為在選擇治療劑的給藥途徑時應該考慮的因素。
可以通過標準藥學方法在細胞培養(yǎng)或實驗動物中例如檢測LD50(群體的半數(shù)致死量)和ED50(群體的半數(shù)治療有效劑量)檢測這種包括α2M復合物的組合物的毒性和治療效力。毒性和治療效力之間的劑量比為治療指數(shù)，其可以表示為LD50/ED50。優(yōu)選表現(xiàn)出大的治療指數(shù)的α2巨球蛋白復合物。雖然也可使用表現(xiàn)出毒性副作用的化合物，但應該注意設計給藥系統(tǒng)，使包括α2M復合物的這種組合物定向于治療組織部位，從而對非治療細胞的潛在損害最小化，由此減少副作用。
優(yōu)選接受治療的主體或患者為哺乳動物，其包括但不限于家養(yǎng)動物，如貓和狗；野獸，包括狐貍和浣熊；家畜和家禽，包括馬、牛、羊、火雞和雞，以及任何嚙齒類動物。最優(yōu)選地，主體為人。
得自細胞培養(yǎng)試驗和動物研究的數(shù)據(jù)可用于推算人用的多種劑量。包括α2M復合物的這種組合物的劑量優(yōu)選處在包括很少或沒有毒性的ED50的循環(huán)濃度范圍內。根據(jù)所用劑型和給藥途徑，劑量可以在這一范圍內改變。對于本發(fā)明方法中使用的包含α2M復合物的任何組合物，可以首先從細胞培養(yǎng)試驗評價治療有效劑量?？梢栽趧游锬Ｐ椭杏嬎阋粋€劑量以實現(xiàn)包括如細胞培養(yǎng)中確定的IC50(即實現(xiàn)癥狀的半數(shù)最大抑制的包括α2M復合物的組合物的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。這種信息可用于更精確地確定人用劑量。血漿水平可通過例如高效液相層析法測量。
優(yōu)選的有效劑量的選擇由本領域技術人員根據(jù)本領域技術人員所知的多種因素的考慮而決定。這種因素包括含α2M復合物的組合物的具體形式、及其藥代動力學參數(shù)如生物利用度、代謝、半衰期等，其在典型地用于得到藥學化合物的當局批準中所用的常規(guī)開發(fā)方法過程中確定。劑量考慮中的其它因素包括在正常個體中要治療的狀況和疾病或要實現(xiàn)的利益；患者的體重；給藥途徑；施用是短期的還是長期的；伴隨藥物；和公知影響所給藥物效力的其它因素。因此，精確的劑量應根據(jù)醫(yī)師的判斷和每位患者的情況而決定，如根據(jù)患者個體的狀況和免疫狀態(tài)、根據(jù)標準的臨床技術。
本發(fā)明的α(2)巨球蛋白復合物可任選地與一種或多種助劑一起施用，以增強免疫應答。例如，根據(jù)宿主種類不同，可使用的助劑包括但不限于無機鹽或礦物凝膠如氫氧化鋁、磷酸鋁和磷酸鈣；表面活性物質如溶血卵磷脂、聚醚型多元醇(pluronic polyol)、聚陰離子、肽、油乳劑、鑰孔血藍素和二硝基酚；免疫刺激分子，如細胞因子、皂甙(如QS-21)、胞壁酰二肽和三肽衍生物、CpG二核苷酸、CpG低聚核苷酸、單磷脂酰脂質A和聚磷腈；顆粒和微粒子助劑，如乳液、脂質體、病毒顆粒、蝸形體(cochleates)；或免疫刺激復合粘膜助劑，弗氏佐劑(完全和不完全的，和可能使用的人用助劑如BCG(卡介苗)和短小棒狀桿菌(corynebacterium parvum))。此外，以下專利和出版的文獻公開了包括可用于本發(fā)明組合物中的CpG低聚核苷酸的免疫刺激性低聚核苷酸美國專利6,207,646；6,339,068；6,239 116；6,429,199；和PCT專利公開，Krieg等人的WO 0122972、WO 00/06588；Agrawal的WO 01/12804；WO 01/83503、WO 01/55370；Fearon等人的WO 02/052002；Tuck等人的WO 01/35991；Van Nest的WO01/12223；Schwartz的WO 99/62923；WO 98/55495；Davis等人的美國專利6,406,705；和Kandimalla等人的PCT專利公開WO02/26757，上述全部都全文并入本文作為參考?？捎糜诒景l(fā)明中的其它適合的助劑可以在A Compendium of Vaccine Adjuvants andExcipients(第二版)，Vogel，F(xiàn).、Powell，M.、和Alving，C.中；在Vaccine Design-The Subunit and Adjuvant Approach，Powell，M.、Newman，M.、Burdman，J.，Editors，Plenum Press，New York，1995，第141-227頁和2nd Meeting on Novel Adjuvants CurrentlyIn/Close to human Clinical Testing，World HealthOrganization-Organization Mondiale de 1a Sante FoundationMerieux，Annecy，F(xiàn)rance，5-7 June 2000，Kenney，R.，Rabinovich，N.R.，Pichyangkul，S.，Price，V.，和Engers，H.，Vaccine，20(2002)2155-63。其全部都并入本文作為參考。
可使用任何所需的給藥途徑施用本發(fā)明的α(2)巨球蛋白復合物，其包括但不限于例如皮下注射、靜脈內注射或肌內注射，雖然優(yōu)選皮內或經(jīng)粘膜施用。皮內或經(jīng)粘膜施用的優(yōu)點分別包括使用的劑量低和吸收迅速。經(jīng)粘膜給藥途徑包括但不限于口服、直腸和經(jīng)鼻施用。經(jīng)粘膜施用的制劑在如下所述的多種制劑中是適合的?？梢栽谥委熯^程中改變給藥途徑。
上述劑量優(yōu)選每周一次，施用約4-6周，并且優(yōu)選給藥方案與部位隨每次施用而變化。在優(yōu)選的實施例中，采用皮下給藥，每次施用的部位順序地變化。因此，例如但不限于第一次注射可在左臂皮下給藥，第二次在右臂，第三次在左腹部、第四次在右腹部，第五次在左股、第六次在右股，等等?？稍谝淮位蚨啻巫⑸涞拈g隔之后重復相同的部位。同樣，可分開注射給藥。因此，例如，可將同一天的一半劑量在一個部位施用，而另一半在其它部位施用。
或者，給藥方式順序地變化，如以連續(xù)的皮下、肌內、靜脈內或腹膜內方式每周注射。
在4-6周之后，優(yōu)選在一個月和多個月的時間段內以二周為間隔施用。隨后的注射可每月施用。隨后的注射間隔可取決于患者的臨床進展和對免疫治療應答而改變。
可以使用一種或多種生理學可接受的載體或賦形劑以常規(guī)的方式配制本發(fā)明中使用的藥物組合物。
可以制備、包裝和標明配制在藥學相容載體中的包括含α2M復合物的共價或非共價組合物的組合物，標明用于治療的癌癥或傳染病。在優(yōu)選方面中，對人施用的包括α2M復合物的組合物的量為約1μg到5mg，優(yōu)選10到200μg，優(yōu)選10、20、25、50、100或200μg。在優(yōu)選實施方案中，包括α2M復合體的本發(fā)明的組合物每周施用一次，持續(xù)約4-6周，皮內施用，施用部位順序地變化。在優(yōu)選實施方案中，包括α2M復合體的本發(fā)明的組合物作為初步治療施用、或在體內治療患病組織以誘導組織壞死之后的十二小時到一周之后施用。
如果復合物為水溶性的，則可將其配制在適當?shù)木彌_液如磷酸鹽緩沖鹽水或其它生理相容性溶液中?；蛘?，如果得到的復合物在水性溶劑中溶出度差，則可將其用非離子型表面活性劑如吐溫或聚乙二醇進行配制。由此，可將共價或非共價的和/或α2M復合物及其生理學可接受的溶劑化物配制為用于通過吸入或吹入(通過口或鼻)施用，或經(jīng)口服、經(jīng)頰、腸胃外、直腸施用，或在腫瘤的情況中直接注射到實體瘤中。
在優(yōu)選實施方案中，包括α(2)巨球蛋白的本發(fā)明的組合物另外包括9％蔗糖、5-10mM磷酸鉀。在有關的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的組合物的pH為7。
對于口服施用，藥物制劑可為液態(tài)，例如溶液、糖漿或懸浮液，或可作為在使用之前與水或其它適當媒介物重構的藥物產(chǎn)品?？赏ㄟ^常規(guī)方法與藥學可接受的添加劑制備這種液體制劑，添加劑如助懸劑(如山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂)；乳化劑(如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水性介質(如杏仁油、油性酯、或精餾植物油)；和防腐劑(如對羥基苯甲酸或山梨酸的甲酯或丙酯)。藥物組合物可為例如通過常規(guī)方法與藥學可接受的賦形劑制備的片劑或膠囊劑形式，賦形劑如粘合劑(如預膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石或二氧化硅)；崩解劑(如馬鈴薯淀粉或羥乙酸淀粉鈉)；或潤濕劑(十二烷基硫酸鈉)?？赏ㄟ^本領域中公知的方法對片劑包衣。
可適當?shù)嘏渲瓶诜苿┮钥刂漆尫虐é?M復合物的組合物。這種組合物可為以常規(guī)方式配制的片劑或錠劑形式。
對于吸入施用，包括α2M復合物的組合物可方便地使用適當?shù)耐七M劑如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當氣體從加壓包裝或噴霧器中以氣霧劑噴射的形式施用。在加壓氣霧劑的情況中，可通過提供釋放計量的量的閥決定劑量單位。吸入器或吹入器中使用的膠囊和藥盒如凝膠可配制為包括含α2M復合物的組合物與適當?shù)姆勰┗缛樘腔虻矸鄣姆勰┗旌衔铩?br> 包括α2M復合物的組合物可配制為用于通過注射如通過彈丸注射或連續(xù)輸注的腸胃外給藥。注射制劑可以單元劑型存在，如在安瓿中或多劑量容器中，并加有防腐劑。組合物可為例如在油性或水性介質中的懸浮液、溶液或乳液的形式，并且可包含配料如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘撸钚猿煞挚蔀榉勰┬问?，使用之前用適當?shù)慕橘|如經(jīng)過滅菌的無熱原水配制。
包括α2M復合物的組合物也可配制為直腸用組合物如栓劑或滯留灌腸劑，如包含常規(guī)栓劑基質如可可脂或其它甘油酯。
除了前述制劑之外，包括α2M復合物的組合物也可配制為長效制劑。這種長效制劑可通過植入(例如皮下或肌內)或通過肌內注射施用。因此，例如包括α2M復合物的組合物可與適當?shù)木酆衔锘蚴杷晕镔|(例如作為在可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂、或作為微溶的衍生物例如作為微溶的鹽一起配制。脂質體和乳液為親水性藥物的遞送介質或載體的公知例子。
如果需要，包括α2M復合物的組合物可作為可包含一個或多個包含共價或非共價的α2M和抗原分子的復合物的單元劑型的包裝或分配裝置存在。包裝可包括例如金屬或塑料薄膜，例如泡罩包裝。包裝或分配裝置可隨附使用指導。
5.10.測量疫苗效力可通過監(jiān)測使用本發(fā)明組合物免疫之后的試驗動物的免疫應答或使用本領域中已知的任何免疫試驗檢測本發(fā)明組合物的免疫效力。體液(抗體)應答和/或細胞介導免疫的產(chǎn)生可作為免疫應答的指標。試驗用動物可包括小鼠、倉鼠、狗、貓、猴、兔、黑猩猩等，最終為人主體。接種疫苗的方法可包括口服、腦內、皮內、經(jīng)皮、肌內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內或任何其它免疫標準途徑?？梢酝ㄟ^多種方法分析受試主體的免疫應答，例如通過已知的技術如免疫吸附試驗(ELISA)、免疫印跡、放射免疫沉淀法等，或通過保護免疫的宿主對抗癌或抗傳染病分析所得免疫血清對感興趣的抗原的反應性。
作為疫苗保護性疾病的適當?shù)膭游镌囼灥囊粋€例子，可在兔中試驗本發(fā)明的疫苗誘導對抗原分子的抗體應答的能力。可使用雄性的無特異性病原(SPF)的年輕成年新西蘭白兔。試驗組每只接受固定濃度的疫苗。對照組接受不合抗原分子的1mM Tris-HCl pH 9.0的注射劑。可每一周或兩周從兔抽取血樣并分析血清中對抗原分子的抗體?？墒褂美鏓LISA試驗分析抗原特異性抗體的存在。
5.11.藥盒本發(fā)明還提供用于實施本發(fā)明治療方案的藥盒。這種藥盒包括在一個或多個容器中的治療或預防有效量的藥學可接受形式的共價或非共價的α2M復合物。本發(fā)明藥盒的小瓶中的α2M復合物可為藥學可接受的溶液形式，例如與無菌鹽水、葡萄糖溶液、或緩沖溶液、或其它藥學可接受的無菌液的組合?；蛘?，復合物可為凍干形式或干粉形式；在這種情況下，藥盒任選地另外在容器中包括藥學可接受的溶液(如鹽水、葡萄糖溶液等)，優(yōu)選為無菌溶液，用于使復合物重構成注射用溶液。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥盒另外包括針或注射器，優(yōu)選為無菌形式包裝的，用于注射復合物、和/或封裝的醇墊(packagedalcohol pad)。任選地包括說明書，用于臨床醫(yī)生或患者進行α2M復合物的施用。
6.實施例腫瘤的抑制和減少以下結果表明，可以從患腫瘤動物的血清完整地純化α(2)巨球蛋白復合物并用于防治癌癥。使用近親繁殖小鼠作為模型，以檢查與來自腫瘤的抗原分子復合在一起的α(2)巨球蛋白的復合物對活腫瘤細胞隨后攻擊的免疫作用。以下結果支持了本發(fā)明在自體治療中特別有效，包括施用從患腫瘤的哺乳動物分離的α(2)巨球蛋白復合物。使用的近親繁殖小鼠的免疫系統(tǒng)相同或接近相同，因此，該結果可以推廣到癌癥治療的自體治療。
材料和方法為了純化α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物，將來自小鼠的血清用0.04M Tris pH 7.6、0.15M NaCl以1∶1稀釋。然后將混合物施用于用相同緩沖液平衡并洗脫的65ml Sephacryl S300R(Sigma)柱。65ml柱用于約10ml血清。通過斑點印跡檢測α(2)巨球蛋白陽性級分并使用PD-10柱將緩沖液變?yōu)閜H7.5的0.01M磷酸鈉緩沖液。或者，可在65ml柱中使用pH7.5的0.01M磷酸鈉緩沖液作為緩沖液以省去更換緩沖液的步驟。將含復合物的級分施用于伴刀豆球蛋白A瓊脂糖凝膠柱。用0.2M甲基甘露糖吡喃糖苷或5％甲基甘露糖吡喃糖苷洗脫結合的復合物，并施用于PD-10柱以改變緩沖液為pH 6.0的0.05M乙酸鈉緩沖液，并施用于用pH 6.0的0.01M乙酸鈉緩沖液平衡的DEAE柱。用0.13M乙酸鈉緩沖液洗脫α(2)巨球蛋白成純形式，并通過SDS-PAGE和免疫印跡法分析。
在一些實驗中，α2M購自SIGMA。BALB/c小鼠得自Jackson Labs(BarHarbor，ME)，并在6-8周齡使用。
為了試驗免疫原性α2M復合物是否能夠用作抗腫瘤形成的預防手段，除非另作說明，用7μg分離的α2M復合物對每組包括5只小鼠的首次用于實驗的小鼠免疫。所有的免疫以100μl PBS皮內進行。
用于免疫的α2M抗原分子復合物的來源包括1)具有皮內2cmMethA腫瘤的小鼠的血清；2)在將50％漂白劑直接注射到2cm腫瘤中24小時之后的小鼠(15只小鼠)的血清；3)通過腹腔內注射活腫瘤細胞誘導腹水的小鼠(15只小鼠)的血清；4)作為陰性對照的沒有腫瘤的小鼠血清；5)用復合于Meth A10(得自MethA腫瘤溶解產(chǎn)物的＜10kDa的肽)的α2M免疫的小鼠的血清，因為這種復合物以前表現(xiàn)出防止MethA腫瘤細胞攻擊的保護作用(Binder，2002，CancerImmunity，同前)；6)作為陽性對照的使用復合于Meth A10(稱為gp96-MethA10)的gp96免疫的小鼠的血清，gp96-MethA10以前也表現(xiàn)出防止MethA腫瘤細胞攻擊的保護作用(Binder，2002，CancerImmunity，同前)；7)使用PBS免疫的小鼠的血清，作為陰性對照，稱為PBS1；8)使用PBS免疫的小鼠的血清，作為陰性對照，稱為PBS2；9)使用作為陰性對照的來自肝臟的gp96免疫的小鼠的血清；10)使用作為陽性對照的來自MethA的gp96免疫的小鼠的血清，因為已知gp96與抗原分子復合并刺激免疫(Srivastava等人，1986，同前)；和11)使用全部經(jīng)輻照的MethA腫瘤細胞免疫的小鼠的血清，用于檢測這種細胞是否可以作為陽性對照提供保護作用。
然后在最后一次免疫一周之后用100,000活腫瘤細胞皮內攻擊動物。測量腫瘤的面積。使用平均值的一半作為腫瘤的半徑計算腫瘤體積(mm3)。在第7、9。12、15和18天進行觀察并記錄觀察值。
結果免疫結果如圖1和表2中所示。陰性對照組的小鼠PBS 1和PBS 2表明腫瘤發(fā)展沒有停止或減少，而已經(jīng)用得自患腫瘤動物的α(2)巨球蛋白復合物免疫的動物在第12天表現(xiàn)出腫瘤發(fā)展的下降。在第15天，對照組和使用來自患腫瘤動物的α(2)巨球蛋白復合物免疫的動物之間腫瘤體積的明顯差別顯而易見。從患腫瘤動物的血清或從患腹水小鼠的血清分離的復合物在受攻擊的小鼠中都有效預防腫瘤生長。從具有注射到腫瘤中以誘導腫瘤壞死的漂白劑的患腫瘤小鼠分離的復合物表現(xiàn)出特別有效的保護，觀察到?jīng)]有腫瘤體積超過280mm3。也發(fā)現(xiàn)來自于患有皮內腫瘤小鼠血清的α(2)巨球蛋白復合物比來自于患腹水小鼠血清的復合物更有效地抑制腫瘤生長。
來自于正常小鼠的α(2)巨球蛋白沒有作用或保護作用最小。
表2PBS07 9 12151810120.25117.62314.63687.10715.732043.23 44.43 185.34263.95881.903064.83 181.43167.47372.05696.5640204.8481.27 733.28764.17927.175048.01 46.74 230 820.0 41136.55
全細胞07912 1518100000 0200000 0300000 0400000 0500000 0A2M腹水107 9 12151810249.31328.820 0 02032.251327.10349.99369.56641.1130194.52303.580 0 040201.92183.38199.84353.61492.5650140.10156.700 0 0A2M腹水207 9 12151810130.55232.92209.93243.60387.9020331.13237.530 0 03095.65 102.90464.46950.291217.3840108.8583.56 0 0 05091.17 128.38132.42234.29350.59
A2M腹水307 9 1215181019.76 231.09160.95293.33407.512098.46 130.55180.27560.63143.7230139.78115.320 0 040139.13253.640 0 0A2M漂白劑107 9 1215 1810106.66209.0756.80 65.02118.7920104.7767.60 0 003064.44 87.78 25.89 0040217.27211.640 0050134.00216.390 00A2M漂白劑207 9 1215 1810172.29149.430 0020192.90185.340 0030157.75280.190 0040177.21270.970 005086.12 301.950 00
A2M漂白劑3079 1215181024.7282.86 180.270 0206.97 0 0 0 03060.2642.05 0 0 0404.38 7.70 0 0 0A2M患腫瘤107 9 12151810132.42136.230 0 020144.72184.940 0 030243.60285.390 0 0403.052 93.89 0 0 050117.33128.690 0 0A2M未患腫瘤07 9 12151810149.09255.58331.71507.79605.8220103.1773.37 65.42 0 030123.22203.17346.40527.27605.8240117.62297.08119.96158.11220.7850101.84129.31249.78382.78448.69
從Meth A腫瘤細胞分離的Gp9607 9 12151810179.50140.43 0 0 020128.69256.56 0 0 030190.09125.94 0 0 0400127.46 0 0 0 050148.0891.66 85.65 350.59523.33與A2M復合的10kDa肽07 9 1215181079.91 98.20 29.06 0 02026.40 117.04 0 0 030170.43276.07 0 0 040174.17266.4470 0 05097.43 220.79 0 0 0從正常肝臟分離的gp96復合物07 9 1215181096.41 180.27 399.59528.85795.9220137.19274.02 318.56650.14795.9230150.80235.68 327.67503.19696.5640142.40124.12 305.77650.141022.1450140.76348.79 651.04893.061149.76
與gp96復合的10kDa肽07 9 12151810150.45168.210 0 020223.44312.960 0 03095.14 173.420 0 040212.07138.160 0 050145.3984.72 0 0 0PBS 207 9 12151810213.36227.47175.31305.22605.8220157.0544.43 362.75550.48696.563019.15 181.43317.44881.901022.1440146.3981.27 379.61428.46605.825073.16 46.74 229.73806.351149.76結論實驗結果表明α(2)巨球蛋白復合物有助于有效地治療或預防癌癥。腫瘤體積減小證明了治療方法有效。在用腫瘤細胞攻擊前對動物施用復合物的預防作用是明顯的。對動物施用來自于首先用引起腫瘤細胞壞死的漂白劑處理的動物的復合物觀察到的有效程度是特別出乎意料并且有前途的。腫瘤細胞的壞死促進了腫瘤特異性抗原分子的釋放，其然后與體液中的α(2)巨球蛋白復合。
本發(fā)明不限于所述具體實施方案的范圍，其只是作為本發(fā)明個別方面的個別例證，其功能等效的方法和組分在本發(fā)明的范圍內。除了本文中表示和描述的之外，對于本領域技術人員來說，根據(jù)上述說明書和附圖，實際上本發(fā)明的各種變更是顯而易見的。這種變更也在附加的權利要求范圍內。
本文中引用的所有參考文獻、專利和其它公開都全文并入本文作為參考。
權利要求
1.治療或預防患者癌癥或傳染病的方法，所述方法包括對需要所述治療或預防的患者施用有效治療或預防患者癌癥或傳染病的量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物，其中所述復合物從患有癌癥或傳染病的哺乳動物的體液分離。
2.治療或預防患者癌癥或傳染病的方法，其包括步驟a)從患有所述癌癥或傳染病的哺乳動物的體液分離出α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物；和b)施用有效治療或預防所述患者的所述癌癥或傳染病的量的所述分離出的復合物。
3.權利要求1或2的方法，其中復合物為與不同抗原分子結合的α(2)巨球蛋白的復合物的群體，其中不同抗原分子包括一種對所述癌癥或傳染病特異性抗原具有抗原性的抗原分子。
4.權利要求1或2的方法，其用于治療癌癥并且其中患者患有癌癥，其中抗原分子來自于腫瘤。
5.權利要求1或2的方法，其用于治療癌癥并且其中患者患有癌癥，其中所述癌癥治療的效力通過患者腫瘤尺寸減小或腫瘤數(shù)目減少進行評價。
6.權利要求1或2的方法，其用于預防癌癥并且其中患者需要這種預防，其中所述抗原分子表現(xiàn)為對所述癌癥特異性抗原具有抗原性的抗原。
7.權利要求1或2的方法，其用于預防傳染病并且患者需要這種預防，其中所述抗原分子表現(xiàn)為對所述傳染病相關病原體特異性抗原具有抗原性的抗原。
8.權利要求2的方法，其用于治療癌癥并且其中患者患有癌癥，并且該方法另外包括在步驟(b)之前或同時對所述患者施用化療劑的步驟。
9.權利要求2的方法，其用于治療癌癥并且其中患者患有癌癥，并且該方法另外包括在步驟(a)之前或同時誘導所述哺乳動物腫瘤壞死的步驟。
10.權利要求9的方法，其中誘導腫瘤壞死的步驟包括對所述哺乳動物施用腫瘤壞死藥物。
11.刺激患者對抗癌癥或傳染病的免疫應答的方法，其包括a)從哺乳動物的體液分離出α(2)巨球蛋白復合物，和b)對患者施用分離出的α(2)巨球蛋白復合物從而刺激免疫應答。
12.權利要求1、2、或11的方法，其中所述患者為人類患者。
13.權利要求11的方法，其中α(2)巨球蛋白復合物為與不同抗原分子結合的α(2)巨球蛋白的復合物的群體，其中不同抗原分子包括一種對所述癌癥或傳染病特異性抗原具有抗原性的抗原分子。
14.權利要求11的方法，其用于刺激抗癌免疫應答并且其中患者患有癌癥，該方法另外包括在步驟(a)之前或同時誘導所述哺乳動物腫瘤壞死的步驟。
15.權利要求14的方法，其中誘導腫瘤壞死的步驟包括對所述哺乳動物施用腫瘤壞死藥物。
16.預防哺乳動物癌癥的方法，所述方法包括施用有效量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物，所述復合物分離自所述哺乳動物的體液，所述哺乳動物患有癌前病變或息肉。
17.權利要求1、2、11、或16的方法，其中哺乳動物為人。
18.預防第一哺乳動物癌癥的方法，所述方法包括施用有效量的α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物，所述復合物分離自第二哺乳動物的體液，所述第二哺乳動物患有癌前病變或息肉。
19.權利要求16或18的方法，其中復合物包括與一種或多種不同抗原分子結合的α(2)巨球蛋白的多種復合物，其中不同抗原分子包括至少一種對所述癌癥或傳染病特異性抗原具有抗原性的抗原分子。
20.權利要求1、2、11、16、或18的方法，其中所述復合物為所述患者自體的。
21.權利要求1、2、11、16、或18的方法，其中所述復合物在施用之前經(jīng)過純化。
22.權利要求1、2、11、16、或18的方法，其中所述體液為脈管流體。
23.權利要求22的方法，其中脈管流體為來自血液的血清。
24.權利要求1、2、11、16、或18的方法，其中體液為脈管外的腹水或腦脊液。
25.藥物組合物，其包括(a)從患有癌癥或傳染病的哺乳動物的體液分離出的多種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物，所述多種復合物包括至少一種包括α(2)巨球蛋白和表現(xiàn)為對腫瘤或傳染物特異性抗原具有抗原性的抗原分子的復合物；和(b)有效量的藥用載體。
26.權利要求25的藥物組合物，其中所述體液為脈管流體。
27.權利要求26的藥物組合物，其中所述脈管流體為來自血液的血清。
28.權利要求25的藥物組合物，其中所述體液為脈管外的腹水或腦脊液。
29.疫苗，其包括(a)從患有癌前病變或息肉的哺乳動物的體液分離出的多種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物，所述多種復合物包括至少一種包括α(2)巨球蛋白和表現(xiàn)為對腫瘤特異性抗原具有抗原性的抗原分子的復合物；和(b)有效量的藥用載體。
30.權利要求29的疫苗，其中多種α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物經(jīng)過純化。
31.藥物組合物，其包括(a)包括α(2)巨球蛋白和具有腫瘤或傳染病抗原性的抗原分子的復合物；(b)選自以下的藥物HSP-肽復合物、抗腫瘤藥、抗體、細胞因子、抗病毒藥、抗真菌藥、抗生素和化療劑；和(c)有效量的藥用載體。
32.權利要求31的藥物組合物，其中藥物為化療劑。
33.權利要求31的藥物組合物，其中α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物經(jīng)過純化。
34.增加哺乳動物體液中包括α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物存在量的方法，所述方法包括誘導所述哺乳動物的腫瘤壞死。
35.權利要求34的方法，其中誘導腫瘤壞死的步驟包括對哺乳動物施用腫瘤壞死藥物。
36.藥盒，其在一個或多個容器中包括藥學可接受形式的治療或預防有效量的共價或非共價的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
37.增加哺乳動物體液中包括α(2)巨球蛋白和抗原分子的復合物存在量的方法，所述方法包括誘導所述哺乳動物的腫瘤壞死。
38.制備包括α(2)巨球蛋白和具有癌前病變、腫瘤或傳染病抗原性的抗原分子的復合物的方法，其包括a)從患有癌前病變、腫瘤或傳染病的患者抽取血清；和b)從所述血清回收α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
39.權利要求38的方法，其用于治療或預防癌癥，所述方法另外包括對所述患者施用有效治療或預防癌癥的量的回收復合物的步驟。
40.權利要求38的方法，其中從所述血清回收α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物的步驟包括a)使包含α(2)巨球蛋白結合分子的固相與血清接觸足夠使α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物結合于固相的時間；b)除去未結合于固相的物質；和c)從固相洗脫結合的α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
41.權利要求39的方法，其中α(2)巨球蛋白結合分子為α(2)巨球蛋白特異性抗體。
42.權利要求39的方法，其中α(2)巨球蛋白結合分子為CD91的配體結合片段。
43.制備包括α(2)巨球蛋白和具有癌前病變、腫瘤或傳染病抗原性的抗原分子的復合物的方法，其包括a)從患有癌前病變、腫瘤或傳染病的患者抽取血清；和b)分級分離血清以富集α(2)巨球蛋白-抗原分子復合物。
44.權利要求38或43的方法，其另外包括使血清與促進α(2)巨球蛋白和抗原分子之間形成共價鍵的藥物接觸的步驟。
45.權利要求44的方法，其中藥物為蛋白酶、氨、甲胺或乙胺。
46.權利要求38或43的方法，其中所述體液為脈管流體。
47.權利要求46的方法，其中脈管流體為來自血液的血清。
48.權利要求38或43的方法，其中體液為脈管外的腹水或腦脊液。
全文摘要
本發(fā)明涉及從哺乳動物血清分離出的α(2)巨球蛋白復合物的應用。本發(fā)明還涉及制備這種包括從哺乳動物血清分離的α(2)巨球蛋白的復合物以及包括從哺乳動物血清分離的α(2)巨球蛋白的復合物和組合物的方法，其中所述組合物用于治療和預防癌癥和傳染病的方法中。本發(fā)明還涉及使用這種從哺乳動物的血清分離的復合物治療和預防癌癥和傳染病的方法。本發(fā)明還包括制備α(2)巨球蛋白復合物的方法。
文檔編號C07K16/00GK1942199SQ200480010229
公開日2007年4月4日 申請日期2004年2月20日 優(yōu)先權日2003年2月20日
發(fā)明者P·K·斯里瓦斯塔瓦, R·J·賓德 申請人:康涅狄格大學健康中心