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氯霉素在制備治療惡性漿細(xì)胞疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:914003閱讀:286來源:國知局
專利名稱:氯霉素在制備治療惡性漿細(xì)胞疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種化合物的新用途,特別涉及氯霉素在制備治療惡性漿細(xì)胞疾病,特別是多發(fā)性骨髓瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
惡性漿細(xì)胞病是以多發(fā)性骨髓瘤為主的,包括多發(fā)性骨髓瘤、孤立性骨髓瘤、髓外骨髓瘤(髓外漿細(xì)胞病)、原發(fā)性巨球蛋白血癥、重鏈病及原發(fā)性淀粉樣變等不同臨床分型的漿細(xì)胞病。其發(fā)病共性均為惡性漿細(xì)胞異常增殖及分泌異常免疫球蛋白或免疫球蛋白片段,導(dǎo)致多種多樣的臨床表現(xiàn)和臨床分型。惡性漿細(xì)胞病發(fā)展和復(fù)發(fā)的最根本原因是惡性漿細(xì)胞的存在,即骨髓瘤細(xì)胞存在。多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是最常見的惡性衆(zhòng)細(xì)胞克隆性疾病,臨床常表現(xiàn)為貧血、腎功能不全及骨損害。在美國,MM發(fā)病率已經(jīng)超越急性白血病,在血液腫瘤中居第二位,僅次于惡性淋巴瘤。在我國,隨著醫(yī)務(wù)人員對該病認(rèn)識及檢測手段的提高,臨床上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)越來越多的MM患者。因此,MM已經(jīng)是我國最常見的惡性血液腫瘤之一。目前除了除了以長春堿、烷化劑、糖皮質(zhì)激素組成為主的常規(guī)化療方案外,可以聯(lián)合新藥蛋白酶體抑制劑(硼替咗米)、血管生成抑制劑(沙利度胺、雷那度胺)、免疫抑制劑(雷帕霉素(rapamycin)及其類似物)等藥物,以及聯(lián)合骨髓移植等治療,取得令人鼓舞的效果,但仍然是一種不可治愈的疾病,有部分患者治療效果不佳,絕大部分患者最終會(huì)復(fù)發(fā)。因此其是一種嚴(yán)重危害人民身體健康的血液惡性腫瘤。對于多發(fā)性骨髓瘤治療,雖然目前取得了世人矚目的效果,但仍然是一種不可治愈的疾病,需要尋找新的治療藥物,旨改善患者生存,延長生命,甚至達(dá)到疾病的治愈。另夕卜,對于目前多發(fā)性骨髓瘤患者治療而言,除了馬法蘭、強(qiáng)的松、沙利度胺、雷那度胺、雷帕霉素等少部分藥物可以口服,家庭維持治療很不方便,并且目前治療藥物價(jià)格昂貴,給患者家庭及社會(huì)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此,有必要改善目前多發(fā)性骨髓瘤治療現(xiàn)狀。氯霉素是一種廣譜抗生素,對很多不同種類的微生物均起作用。氯霉素在體內(nèi)會(huì)引致致命的再生不良性貧血。現(xiàn)在,醫(yī)療上主要使用氯霉素的外用制劑,如醫(yī)治細(xì)菌性結(jié)膜炎的眼藥水或藥膏。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供氯霉素在制備治療惡性漿細(xì)胞疾病,特別是多發(fā)性骨髓瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)證明,氯霉素作用于骨髓瘤細(xì)胞,其抑制腫瘤細(xì)胞增殖有劑量及時(shí)間依賴性,即隨著藥物劑量增加或者藥物作用時(shí)間延長,抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用越明顯,其48小時(shí)半數(shù)致死量為142. 45 μ g/ml (RPMI8266)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明氯霉素能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。


圖I是氯霉素作用于骨髓瘤細(xì)胞的劑量和時(shí)間依賴的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖2 :是氯霉素抑制腫瘤細(xì)胞集落形成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖3是氯霉素劑量與骨髓瘤細(xì)胞早期凋亡和晚期凋亡率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖4 :氯霉素抑制原代惡性漿細(xì)胞細(xì)胞活性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步說明本發(fā)明。骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn) 骨髓瘤細(xì)胞株RPMI8266及U266細(xì)胞于含10%胎牛血清RPMI1640完全培養(yǎng)基中,鋪板于96孔板中(細(xì)胞量1 X IO4個(gè)/孔),在37°C飽和濕度、5% CO2條件下孵育,分別加入不同劑量氯霉素治療,為劑量依賴性細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn),終濃度分別為50 μ g/ml、100 μ g/ml、200 μ g/ml, 300 μ g/ml, 400 μ g/ml,其中以加和不加溶媒乙醇為對照,同時(shí)以健康成人外周血單個(gè)核細(xì)胞作為對照;以氯霉素終濃度為100μ g/ml,作用于腫瘤細(xì)胞12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí),即為時(shí)間依賴性細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。磁珠分選原代惡性漿細(xì)胞以同樣的方法行藥物濃度依賴性細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn),但腫瘤細(xì)胞的量為IXIO5/個(gè)孔
CCK-8方法測定細(xì)胞增殖試驗(yàn)
根據(jù)活細(xì)胞可以代謝試劑CCK-8為甲瓚的原理(此物質(zhì)在450nm處吸光度最大),活細(xì)胞數(shù)與吸光度成正比。CCK8 (20 μ I/孔)在37°C飽和濕度、5%C02孵箱中培養(yǎng)2 — 4 h,用酶標(biāo)儀檢測波長450 nm時(shí)的吸光度(A)值,參比波長為630 nm,結(jié)果取均值。算腫瘤細(xì)胞抑制指數(shù)(PI)。PI 二 I —A貧盤空Z A對照孔。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖I所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示氯霉素作用于骨髓瘤細(xì)胞,其抑制腫瘤細(xì)胞增殖有劑量及時(shí)間依賴性,即隨著藥物劑量增加或者藥物作用時(shí)間延長,抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用越明顯,其48小時(shí)半數(shù)致死量分別為142. 45 μ g/ml (RPMI8266)??寺?集落)形成抑制實(shí)驗(yàn)同樣以劑量依賴性實(shí)驗(yàn)觀察藥物都腫瘤細(xì)胞克隆形成的影響。集落培養(yǎng)體系為含O. 9 %甲基纖維素RPMI1640培養(yǎng)液,終濃度30%的胎牛血清(FCS)、2 mmol/L L-谷氨酰胺、20 μ g/ml雙抗。于35_mm2培養(yǎng)皿集落培養(yǎng)體系中,每組設(shè)重復(fù)4個(gè)培養(yǎng)皿(腫瘤細(xì)胞,10,000/皿)。氯霉素終濃度分別為O μ g/ml、25 μ g/ml、50 μ g/ml,100 μ g/ml, 200 μ g/ml, 300 μ g/ml,并以溶媒 Alcohol 作為對照。在 37°C飽和濕度、5%C02孵箱中培養(yǎng)3周,然后將培養(yǎng)容器置于倒置顯微鏡下計(jì)數(shù),觀察集落形成。大于40個(gè)細(xì)胞者為一個(gè)集落。流式細(xì)胞儀測定腫瘤細(xì)胞凋亡,實(shí)驗(yàn)如圖3所示。測定結(jié)果提示藥物劑量越大,腫瘤細(xì)胞早期凋亡及晚期凋亡率越來越高。參照上述骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和細(xì)胞增殖試驗(yàn)的操作,驗(yàn)證氯霉素對不同患者原代惡性漿細(xì)胞活性的抑制作用,試驗(yàn)結(jié)果如圖4所述。由圖4可知,氯霉素可以很好的抑制惡性漿細(xì)胞的細(xì)胞活性。惡性漿細(xì)胞的細(xì)胞活性與氯霉素的用量成反比。綜上所述,可知,氯霉素可以很好地治療惡性漿細(xì)胞疾病,特別是多發(fā)性骨髓瘤。氯霉素價(jià)格極其低廉,即可靜脈用藥,也可以口服用藥,特別適用于維持治療。氯霉素本身對革蘭氏陽性菌,包括大部份的抗藥性金黃色葡萄球菌、革蘭氏陰性菌及 厭氧性生物具有很好的抗性,這使得其特別適用于腫瘤合并細(xì)菌感染的治療。
權(quán)利要求
1.氯霉素在制備治療惡性漿細(xì)胞疾病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用,其特征在于惡性漿細(xì)胞疾病為多發(fā)性骨髓瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開了氯霉素在制備治療惡性漿細(xì)胞疾病,特別是多發(fā)性骨髓瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)證明,氯霉素作用于骨髓瘤細(xì)胞,其抑制腫瘤細(xì)胞增殖有劑量及時(shí)間依賴性,即隨著藥物劑量增加或者藥物作用時(shí)間延長,抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用越明顯,其48小時(shí)半數(shù)致死量為142.45μg/ml(RPMI8266)、315.22μg/ml(U266)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明氯霉素能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。
文檔編號A61K31/7072GK102697797SQ20121015338
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者田發(fā)青 申請人:田發(fā)青
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