物 (Illumina，San Diego，CA)產(chǎn)生文庫。采用所推薦的方法，但具有如下不同之處;使用高初 始濃度的DNA并在結(jié)束時(shí)省略有利于qPCR文庫定量的文庫歸一化步驟。使用Kapa BioSytems(Woburm，MA)文庫定量試劑盒(KK4824)在BioRad CFX96循環(huán)儀上進(jìn)行qPCR。將其 中稀釋至4nM標(biāo)準(zhǔn)濃度的文庫與2.5yL的各個(gè)樣品（取決于8至12個(gè)樣品）合并，并用IN NaOH (終濃度0.1N NaOH)變性5分鐘。將足夠的樣品稀釋至600μ1以提供15至20pmol的復(fù)用樣品 (multiplexed sample)。用Illumina MiSeq V2儀器按照2X150末端配對(duì)單個(gè)索引讀取對(duì) 樣品進(jìn)行測序。所有測序均針對(duì)約50倍的覆蓋。
[0454] 使用CLCBio Genomics Workbench v 6.0(Cambridge，MA)儀器外（off-instrument)進(jìn)行序列讀取的組裝和分析。如下所述處理并分析Fastq文件；除去重復(fù)的序 列讀取并修整其余讀取的質(zhì)量和最小長度(50bp)。然后在高嚴(yán)格條件下（片段長度= 0.9， 片段相似性= 0.99)使用默認(rèn)的錯(cuò)配/插入/刪除損失從頭組裝讀取。使用相同的組裝條件 通過將經(jīng)處理的讀取映射為參照親本組裝來完成突變體分離株中SNP/indel的檢測。使用 默認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)在最低頻率為80 %處檢測以質(zhì)量(qual i ty)基礎(chǔ)的SNP。針對(duì)從頭組裝，通過區(qū)域 的BLAST比較驗(yàn)證了相關(guān)的SNP/inde 1以幫助消除由于直接映射組裝(mapping assemb 1 y) 而可能產(chǎn)生的錯(cuò)誤。
[0455] 氮雜吲哚化合物的藥代動(dòng)力學(xué)(PK):
[0456] 在小鼠（健康和被感染）以及大鼠中進(jìn)行了氮雜吲哚化合物的PK。在施用化合物前 兩小時(shí)，用l〇〇mg/kg的ABT預(yù)處理小鼠。來自健康小鼠的PK數(shù)據(jù)用來設(shè)計(jì)用于效力研究的給 藥方案，而來自被感染小鼠的信息用于PK-PD分析。
[0457] BALB/c小鼠或Wi star大鼠通過經(jīng)口管飼施用不同組中的受試化合物3、4、8和17。 所有經(jīng)口施用均以在0.5 % HPMC和0.1 %吐溫80的混懸液進(jìn)行。在不同的組中，受試化合物3 (0.5mg/kg)和17 (2mg/kg)以溶液(在磷酸緩沖鹽水中20 % v/v DMA)靜脈內(nèi)施用。通過隱靜 脈將所有血液樣品收集到涂布有鋰-肝素的Microvette CB300? (Starstedt，Germany) 管中，并且通過離心由所收集的血液制備血漿。
[0458] 單個(gè)小鼠感染的Ρ0ΡΚ:在0.5 %HPMC(羥丙基甲基纖維素)和0.1 %吐溫80的混懸液 中配制化合物和參照藥物。BALB/c小鼠（3只小鼠/組），通過經(jīng)口管飼以50、100和200mg/kg 進(jìn)行施用。在給藥的第24天在被感染小鼠上進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析(Rennard，1986)。在施用 化合物后的第0.5、1.5、3、5、7和24小時(shí)從每個(gè)小鼠中收集血液樣品。通過從所有組中連續(xù) 取樣，通過隱靜脈將約30yL的血液樣品收集到涂布有鋰-肝素的Mi cr〇vetteCB300⑩ (Starstedt，Germany)管中并且離心后以制備血漿（lOyL)。將血漿樣品儲(chǔ)存在-20°C直至使 用LC-MS/MS進(jìn)行分析。
[0459] 上皮襯液(Epithelial lining fluid，ELF)PK:如先前所述（Solapure等，2013)， 在施用于0.5 %HPMC和0.1 %吐溫80混懸液中配制的100mg/kg單次經(jīng)口劑量的化合物后，在 健康的小鼠（3只小鼠/組）中進(jìn)行ELF PK。給藥0.5、1.5、3、5、7、17和24小時(shí)后，使用異氟烷 麻醉小鼠并通過眶后血管叢(Retro-Orbital Plexus)穿刺收集血液。在氣管切開后，使用 0 · 7mL冰冷的PBS進(jìn)行支氣管肺泡灌洗(Broncho-Alveolar Lavage，BAL)。尿素評(píng)估試劑盒 DIUR_500(Bio-assay Systems，U. S.A)用于進(jìn)行血衆(zhòng)和BAL樣品中的尿素評(píng)估。如在Marry 等，2011中所述的，在將BAL中的尿素濃度與血漿中的尿素濃度歸一化后計(jì)算ELF的體積。將 血漿和BAL樣品儲(chǔ)存在-20°C，直至使用LC-MS/MS進(jìn)行分析。
[0460] 血漿和BAL樣品分析:在二甲基亞砜(DMS0)中制備各個(gè)化合物之lmg/mL的儲(chǔ)備溶 液并用乙腈稀釋兩倍。對(duì)于每種分析物使用16個(gè)點(diǎn)的校正曲線，并且標(biāo)準(zhǔn)曲線為O.OOlyg/ mL至40yg/mL。通過添加含有卡馬西平作為內(nèi)標(biāo)(250yg/mL)的冷卻乙腈（1:10v/v)來沉淀血 漿/BAL樣品。將樣品渦旋，并在10°C下以4000rpm離心30分鐘。將所得的上清液與流動(dòng)相混 合(50 %的乙腈水溶液與0.1 %甲酸）。向耦聯(lián)至三重四極桿質(zhì)譜儀(Waters-ACQUTY-TQD; MS/MS)的液相色譜系統(tǒng)(Waters-ACQUTY UPLC)中進(jìn)樣10yL的樣品。在正離子模式下獲得樣 品并通過多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring，MRM)進(jìn)行檢測。通過將分析物的已 知濃度對(duì)峰面積比(分析物/內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)峰響應(yīng))進(jìn)行繪圖而獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定分析物的濃 度。
[0461 ] 健康和被感染PK數(shù)據(jù)分析：用WinNonlin Phoenix軟件（6 · 2版本；Pharsight，USA) 進(jìn)行血衆(zhòng)濃度-時(shí)間關(guān)系的PK分析。使用非房室(Non-compartmental)分析程序，模型200來 計(jì)算PK參數(shù)。評(píng)估了血漿中藥物的最大濃度(C max)，達(dá)到Cmax的時(shí)間(Tmax)、消除半衰期(t1/2) 和從時(shí)間零至無窮大的AUC(AUCo^)。使用梯形法則(線性上升和log下降)計(jì)算AUC并且只有 當(dāng)外推的AUC不超過原值的20 %時(shí)才認(rèn)為是AUCo-cc值。使用在末端斜率上3個(gè)采樣點(diǎn)的最小 值來評(píng)估計(jì)算半衰期。
[0462] ELF PK的分析：
[0463] 如（Solapure等，2013 ;Marry等，2011)所述，BAL樣品中ELF的體積計(jì)算為BAL的體 積乘以BAL和血漿中尿素濃度之比。通過將BAL樣品中的濃度乘以BAL體積與ELF體積之比來 計(jì)算ELF中的化合物濃度。通過非房室分析WinNonlin Phoenix軟件(6.2版本;Pharsight， USA)計(jì)算ELF和血漿中的AUCo-οο。在將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的濃度乘以血漿中的游離級(jí)分后，計(jì)算游 離血衆(zhòng)AUC。以在相同的時(shí)間間隔內(nèi)ELF中的AUCo-〇〇與游離血漿/總血漿中游離AUCo-〇〇之比來 計(jì)算肺ELF滲透率。假定在單劑量施用后的健康小鼠中測量的該比值在被感染小鼠的多劑 量效力研究過程中保持不變。在WinNonlin中的稀少樣品分析用于評(píng)估與AUC評(píng)估相關(guān)的標(biāo) 準(zhǔn)誤(SE)。
[0464] 體內(nèi)效力研究
[0465] 結(jié)核分枝桿菌感染接種物：如上所述培養(yǎng)對(duì)所有標(biāo)準(zhǔn)的抗分枝桿菌劑均敏感的 Mtb H37Rv(ATCC 27294)。7至10天后，通過離心收集細(xì)胞，在7H9肉湯中清洗兩次并重懸浮 于新鮮的7H9肉湯中。分配成lmL的等分試樣并儲(chǔ)存在-70°C。在動(dòng)物感染的當(dāng)天使冷凍的儲(chǔ) 備液解凍并用作接種物。
[0466] 倫理聲明和動(dòng)物:所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案和用途均經(jīng)過印度政府的機(jī)構(gòu)動(dòng)物倫理委員 會(huì)（Institutional Animal Ethics Committee，IAEC)批準(zhǔn)，向控制和監(jiān)督宗旨委員會(huì) (Committee for the purpose of Control and Supervision，CPCSEA)登記。雄性BALB/c 小鼠購自印度RCC Hyderabad，大鼠購自Bioneeds，Bangalore。將8只大鼠和小鼠（6至8周） 隨機(jī)分組，每個(gè)籠子三或四只，并在開始研究之前經(jīng)一周時(shí)間使其適應(yīng)環(huán)境。在標(biāo)準(zhǔn)條件下 將動(dòng)物以12小時(shí)晝夜循環(huán)進(jìn)行飼養(yǎng)。隨意給予飼料{Nutrilab?)::和水。被感染小鼠均維 持在生物安全級(jí)別3(bi〇-safety level3，BSL_3)設(shè)施的單獨(dú)通風(fēng)籠（Allentown TeChn〇l 〇gieS，USA)中。用于在被感染小鼠上進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)的所有步驟(包括給藥和采集 血樣)均在嚴(yán)格的生物防護(hù)(bio -containment)下進(jìn)行。
[0467] 氣霧劑感染:使用經(jīng)改進(jìn)的Madison氣霧劑設(shè)備(Jayaram等，2003)通過吸入步驟 用結(jié)核分枝桿菌感染小鼠和大鼠。通過在小鼠中灌輸約l〇4CFU/肺的高劑量氣霧劑感染而 建立急性感染模型并在感染后三天開始藥物處理（Schroeder等，2003; Jayaram等，2003)。 與此相反，用遞送約50-100桿菌/肺的低劑量Mtb氣霧劑感染來開發(fā)慢性感染模型（小鼠和 大鼠）（Schroeder等，2003; Jayaram等，2003 ;Kumar等2014)并在感染后28天開始藥物處理。 測定在藥物處理開始時(shí)存在于肺部的細(xì)菌數(shù)目。在處理結(jié)束時(shí)，使小鼠安樂死，無菌地取出 肺，并使用Wheaton Teflon-Glass組織研磨器在3.0ml凝膠鹽水中使其均質(zhì)化。將肺勾衆(zhòng)連 續(xù)稀釋10倍并平板接種于補(bǔ)充有10%ADC的Middlebrook 7H11瓊脂平板上。將平板在37°C 下用5%C02孵育3周以獲得分離的菌落。
[0468] 小鼠體內(nèi)劑量響應(yīng)研究：在施用化合物前兩小時(shí)，用100mg/kg日經(jīng)口劑量的氨基 苯并三唑（aminobenzotriazole，ABT)預(yù)處理被感染小鼠以阻止P450代謝酶。在0.5% (w/v) !^皿(：和0.1%吐溫80(31811^(^6111化&1(3〇.1^4)混懸液中配制氮雜吲哚化合物3和4并通過 經(jīng)口管飼遞送。在急性小鼠模型中，向動(dòng)物給予50mg/kg、100mg/kg的化合物3和4,并給予 3mg/kg的異煙肼作為陽性對(duì)照。在慢性模型中，使用30mg/kg和100mg/kg劑量的化合物3和 4。使用10mg/kg的利福平作為參照藥物對(duì)照。使用兩個(gè)不同的載劑對(duì)照組(具有和沒有ABT) 來排除ABT對(duì)Mtb感染的任何不良作用。所有藥物和受試化合物均經(jīng)口施用4周，給藥形式是 每周6/7天。給藥期結(jié)束后48小時(shí)，用C0 2將動(dòng)物安樂死，無菌地取出肺并如上所述在平板接 種后對(duì)CFU計(jì)數(shù)。
[0469] 大鼠體內(nèi)劑量響應(yīng)研究：在0.5%(￥八）耶1\^和0.1%吐溫80(51611^ chemical co.USA)混懸液中配制氮雜吲哚化合物8、17、30和34并通過經(jīng)口管飼遞送。在慢性大鼠模型 中，向動(dòng)物給予30mg/kg、100mg/kg的化合物8、17、30和34。使用1〇11^/1^利福平作為參照藥 物對(duì)照。所有藥物和受試化合物均經(jīng)口施用4周，給藥形式是每周6/7天。給藥期結(jié)束后48小 時(shí)，用C0 2對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂死，無菌地取出肺并如上所述在平板接種后對(duì)CFU計(jì)數(shù)。
[0470]統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:將從平板接種得到的菌落數(shù)轉(zhuǎn)換為Logl0(X+l)，其中X等于存在于給 定樣品中的活桿菌總數(shù)。使用Prism軟件，版本4(Graph Pad Software，Inc.，San Diego， 〇311：1；'〇1'1113)進(jìn)行藥效作用的繪圖。使用〇11111161：'8多重對(duì)比檢驗(yàn)來區(qū)分經(jīng)處理的與未處理 的小鼠肺CFU中的統(tǒng)計(jì)差異。
[0471] 溶解度測定
[0472] 如上所述測定了化合物在0.1M磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中的溶解度，在測定中使用 格列本脲作為QC標(biāo)準(zhǔn)。簡言之，將化合物在ACN/水(40:60)中稀釋以達(dá)到期望的濃度，使用 Genevac將樣品干燥4小時(shí)，隨后添加800μ1的緩沖液。在25°C下在Eppendorf Thermomix R 上將含化合物的平板以750rpm攪拌24小時(shí)。最后，使用UV和MS分析評(píng)估化合物濃度。
[0473] 血楽;蛋白結(jié)合測定
[0474] 使用平衡透析技術(shù)測量蛋白結(jié)合。將化合物添加到10 %的血漿中得到20μΜ的濃度 并在37°C下用等滲緩沖液透析18小時(shí)。使用通用LCUVMS分析血漿和緩沖液并且推導(dǎo)出化合 物的第一表觀結(jié)合常數(shù)。然后使用結(jié)合常數(shù)來測定在100%血漿中的游離％。
[0475] 代謝穩(wěn)定性測定(小鼠/人微粒體Clint)
[0476] 在37°C下，將ΙμΜ化合物與lmg/mL微粒體(具有20mg/mL蛋白質(zhì)濃度之合并的HLM/ MLM)在含2mM NADPH溶液的166yL緩沖液（100mM磷酸鹽緩沖液，pH7.4)中進(jìn)行孵育。在新的 96孔板中，在不同的時(shí)間點(diǎn)（即0、2、5、10、20和30分鐘），用4體積冷卻的乙腈使20yL的孵育 混合物淬滅。將淬滅板以4000rpm離心15分鐘。用水中的50%乙腈將30yL的上清液稀釋至 300yL，使用LC-MS/MS分析底物消耗。
[0477] 代謝穩(wěn)定性測定(大鼠/人肝細(xì)胞Clint)
[0478] 使用臺(tái)盼藍(lán)來測定冷凍保存的肝細(xì)胞的生存力并用緩沖液(KHB緩沖液)將細(xì)胞濃 度調(diào)節(jié)至1〇6個(gè)細(xì)胞/mL。在NUNC板中用500yL肝細(xì)胞（1百萬個(gè)細(xì)胞/mL)孵育ΙμΜ化合物(在 乙腈;0.01%DMS0中）。在不同的時(shí)間點(diǎn)（0、5、15、30、60、90和120分鐘）通過向10(^1^的反應(yīng) 混合物中添加3倍體積的冷卻乙腈停止反應(yīng)并在4 °C下離心15分鐘。使用LC-MS/MS分析上清 液以分析底物消耗。
[0479] l〇gD
[0480] 已經(jīng)如下所述測量了以搖瓶原理為基礎(chǔ)的辛醇-水分配系數(shù)（log D)。使用的水溶 液是10mM磷酸鈉緩沖液，pH 7.4。將溶解于DMS0中的20yL的10mM化合物溶于玻璃小瓶板中。 使用GeneVac除去DMS0。使用Tomtec添加435yL的辛醇，攪拌5分鐘以使其溶解。通過在25°C 下反轉(zhuǎn)5小時(shí)，隨后在3000RPM下離心30分鐘完成進(jìn)一步混合。進(jìn)行水層和辛醇層兩者的LC/ UV/APPI/MS定量。根據(jù)下面的等式測定Log D值。
[0482] 已經(jīng)證實(shí)該方法的log D為-2至5.0。
[0483] hERG 測定
[0484] 使用中等吞吐量電生理學(xué)IonWorks?裝置在電壓門控離子通道上測試化合物。關(guān) 于IonWorks?運(yùn)行的詳細(xì)方法已經(jīng)出版(Schroeder 2013)。為了進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在IonWorks?儀 器的"細(xì)胞"位置的船（boat)中裝入細(xì)胞混懸液，并將96孔PBS目標(biāo)平板置于"板Γ位置。 384-孔PatchPlate?放置于IonWorks?增壓室中并使用增壓夾(plenum clamp)保持在一定 位置。從這點(diǎn)開始，自動(dòng)化地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)并最終報(bào)告受試化合物的非累積濃度-效應(yīng)曲線。
[0485] 總結(jié)
[0486] 雖然對(duì)于Mtb和恥垢分枝桿菌(Msm)有殺菌性，所公開的化合物沒有表現(xiàn)出針對(duì)廣 譜病原體的活性，從而表明優(yōu)良的靶病原體特異性(表2,圖25)。該系列化合物保留了對(duì)Mtb 之藥物敏感和單藥抗性臨床分離株的MIC(表3,圖26)，表明其用于藥物敏感和MDR TB治療 的可能性。該化合物顯示出對(duì)復(fù)制中Mtb的時(shí)間依賴性殺傷動(dòng)力學(xué)，在第10天在1至4倍的 MIC濃度時(shí)，菌落形成單位(CFU)降低約41ogl0(圖1)。這些化合物也對(duì)細(xì)胞內(nèi)的Mtb有活性， 在比被感染Mtb的THP1細(xì)胞中MIC的濃度高1至4倍時(shí)，CFU降低約lloglO(圖2)。除了其對(duì)復(fù) 制中細(xì)菌的有效活性，所述系列分子的亞組在低氧條件下顯示出對(duì)非復(fù)制Mtb的中度活性 (在韋恩模型中以HBC測量的殺菌性），由化合物3表示(表4)。發(fā)現(xiàn)在處理72小時(shí)后，該系列 中的化合物對(duì)A549人肺腺癌上皮細(xì)胞系(ΜΜΙΟ100μΜ，表4)沒有細(xì)胞毒性。我們還觀察到 化合物以32μΜ最大值暴露7天后，>95%的ΤΗΡ-1巨噬細(xì)胞有生存力(表4)。
[0487] 圖25示出了表2,病原體特異性。
[0488] 圖26示出了表3,針對(duì)藥物敏感性和抗藥性Mtb的活性。
[0489] 表4.化合物的微生物學(xué)特性
[0491] 在8XMIC濃度時(shí)以2.9ΧΠΓ9的頻率出現(xiàn)對(duì)1，4-氮雜吲哚具有降低易感性的自發(fā) 抗性突變體(表5)。抗性Mtb突變體的全基因組測序揭示了在dprEl(Rv 3790)中的單核苷酸 改變，導(dǎo)致在314位的氨基酸替換(Tyr-His)，但沒有觀察到顯著的次要靶標(biāo)。而該系列中 的化合物對(duì)突變株(Tyr314His)具有交叉抗性，沒有觀察到對(duì)包括BTZ043在內(nèi)的參照藥物 的抗性。半胱氨酸387DprEl突變(Cys-Ser，Cys-Gly)，賦予了對(duì)BTZ043的抗性(Makarov， V.等，3(^611〇6,324,801-804(2009))，并沒有顯示出對(duì)1，4-氮雜吲哚的交叉抗性(表6)。此 外，通過對(duì)DprEl過表達(dá)的MIC調(diào)整再次確認(rèn)了靶標(biāo)特異性，如也可見于BTZ043(表6)。
[0492] 表5.抗性頻率
[0493]
[0494] 表6.系列中化合物與參照化合物的交叉抗性
[0495]
[0496]描述了該系列中的化合物的體外藥物代謝和藥代動(dòng)力學(xué)(drug metabolism and pharmacokinetics，DMPK)性質(zhì)，代表性的化合物示于表7中?；衔?、4和8在無水〇]\^0中的 溶解度比化合物17低;改善的溶解度可能是由于羥乙基酰胺側(cè)鏈?；衔?-4、8和17的蛋白 質(zhì)結(jié)合(游離％ )值在5%至22%。通過使用人微粒體、人肝細(xì)胞和大鼠肝細(xì)胞評(píng)估的化合物 3-4、8和17的預(yù)測清除率為肝血流量（％LBF)的4%至18%。與此相反，由小鼠微粒體預(yù)測的 清除率更高(表8)，這表明了物種特異性清除機(jī)制。通過Caco-2測定測量的滲透性表明這些 化合物是高度可滲透的，沒有觀察到顯著的流出。該系列中的化合物在50μΜ時(shí)沒有顯示出 對(duì)CYP酶的抑制(表7 )，表明其用于組合治療的可能性?；衔?-4、8和17對(duì)一系列人靶標(biāo)和 心臟通道的體外安全性分析顯示沒有與這一系列相關(guān)的重大安全責(zé)任(表7)。
[0497] 表7.化合物的DMPK和安全性
[0498]
[0499] [a]:在測試培養(yǎng)基中的動(dòng)力學(xué)溶解度 >100yM，[b]:CYPlA2，CYP2C9，CYP2C19， CYP2D6，CYP3A4。
[0500] 表8.小鼠微粒體的高內(nèi)在清除率
[0502]基于體外性質(zhì)，描述了化合物3-4、8和17在小鼠和大鼠體內(nèi)的PK以評(píng)估經(jīng)口暴露 (oral exposure)。在氨基苯并三唑(ABT)存在下，測量了小鼠中的PK暴露，使用CYP同種型 的泛抑制劑(Pan-inhibitor)來阻礙小鼠特異性清除率。在大鼠和小鼠二者中對(duì)于化合物 3-4、8和17均觀察到顯著的經(jīng)口暴露（圖3,表9)。在大鼠中，觀察到在體外和體內(nèi)清除率之 間有良好的相關(guān)性，對(duì)于化合物17有92 %的生物利用度(表9)。在BALB/c小鼠的"急性"和 "慢性TB模型"中評(píng)估了兩種代表性化合物（3和4)的體內(nèi)效力（Jayaram等，2003;Marry等 2011;Kumar等2014)。在急性模型中，感染后3天開始處理，而在慢性模型中在第28天開始處 理。化合物3和4進(jìn)行4周的處理將肺部的細(xì)菌負(fù)荷降低>1.51oglOCFU并且觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)上 顯著的劑量依賴效力（圖1)。從被感染動(dòng)物評(píng)估的化合物3和4的經(jīng)口暴露，顯示AUC為200-700μΜ. h且在每次給藥后將濃度維持高于MIC達(dá)約10小時(shí)（％T>約10小時(shí)的MIC)，這導(dǎo)致在 慢性小鼠模型中產(chǎn)生效力（圖4;表10)。有趣的是，對(duì)于這兩種化合物，在健康小鼠肺上皮襯 液(ELF PK)測量的化合物3和4的水平與游離血漿水平相當(dāng)（圖4，表11 )，證明在靶位點(diǎn)處有 顯著暴露。因此，血漿和/或ELF水平和藥學(xué)效應(yīng)之間觀察到良好的相關(guān)性。在急性和慢性小 鼠模型中，動(dòng)物耐受1個(gè)月的施用劑量，在體重和大體病理學(xué)方面沒有觀察到不良作用。 [0503]表9.在健康BALB/c小鼠和Wistar大鼠中單次劑量施用后化合物的藥代動(dòng)力學(xué)參 數(shù)(數(shù)據(jù)是平均值土SD，除非另有說明，否則n = 3)。
[0504]
[0505] ND:未測定;a化合物5 (η = 2);b化合物6對(duì)于大鼠 IvPK(η = 2);對(duì)于所有的化合物(η =2)
[0506] 表10.在健康BALB/c小鼠中經(jīng)口單劑量施用后，1，4_氮雜吲哚的ELF滲透率(數(shù)據(jù) 是平均值土 SD，除非另有說明，否則η = 3)。
[0507]
[0508] *基于Hu PPB游離％計(jì)算;在95%置信區(qū)間內(nèi)計(jì)算的ELF滲透率
[0509] 表11.在被感染BALB/c小鼠中多次經(jīng)口劑量后，1，4_氮雜吲哚的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) (數(shù)據(jù)是平均值土SD，除非另有說明，否則n = 3)。
[0510]
[0511] a化合物 3(n = 2);b化合物 4(n=l)
[0512] 表12.被Mtb感染的雄性Wistar大鼠中在多次經(jīng)口劑量（lOOmg/kg)之后，1，4-氮雜 吲哚化合物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(平均值±30)。
[0513]
[0514] 參考文獻(xiàn)
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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式(I)的化合物或其可藥用鹽：其中 R1選自氫、氟、溴、-〇CH3和甲基； R2是氫或甲基； R3是氫或甲基； X是N或CR4; R4選自氫、氟和-0CH3; R5選自氫、氟、-CF3和-CN; Y是N或CR6; R6是氫或甲基； Z是N或CR7; R7選自氫、氟、-〇CH3、-〇CHF2、-〇CH2CF 3 和-N( CH3) 2; R8選自氫、氟、甲基和-OCH3; η是1或2; R9選自氟、環(huán)丙基、-0CH3、-OH、-0CF3、CHF2、-CH (F) CH3 和-CH (OH) CH3 〇2. 權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物選自：或其可藥用鹽。3. 藥物組合物，其包含權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽，以及可藥用載體或稀釋 劑。4. 藥物組合物，其包含權(quán)利要求2所述的化合物或其可藥用鹽，以及可藥用載體或稀釋 劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽，其用于治療結(jié)核病或分枝桿菌 (Mycobacterium)感染。6. 權(quán)利要求2所述的化合物或其可藥用鹽，其用于治療結(jié)核病或分枝桿菌感染。7. 權(quán)利要求1所述的化合物，其用于制備用于治療結(jié)核病或分枝桿菌感染的藥物。8. 權(quán)利要求2所述的化合物，其用于制備用于治療結(jié)核病或分枝桿菌感染的藥物。9. 治療結(jié)核病或分枝桿菌感染的方法，其包括向有此需要的對(duì)象施用治療有效量的權(quán) 利要求1所述的化合物或其可藥用鹽。10. 治療結(jié)核病或分枝桿菌感染的方法，其包括向有此需要的對(duì)象施用治療有效量的 權(quán)利要求2所述的化合物或其可藥用鹽。11. 包含權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，其用于治療結(jié)核病或分 枝桿菌感染。12. 包含權(quán)利要求2所述的化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，其用于治療結(jié)核病或分 枝桿菌感染。13. 權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽，其用于抑制DprEl。14. 權(quán)利要求2所述的化合物或其可藥用鹽，其用于抑制DprEl。15. 權(quán)利要求1所述的化合物，其用于制備用于抑制DprEl的藥物。16. 權(quán)利要求2所述的化合物，其用于制備用于抑制DprEl的藥物。17. 抑制DprEl的方法，其包括施用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用 鹽。18. 抑制DprEl的方法，其包括施用治療有效量的權(quán)利要求2所述的化合物或其可藥用 鹽。19. 包含權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，其用于抑制DprEl。20. 包含權(quán)利要求2所述的化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，其用于抑制DprEl。
【專利摘要】本發(fā)明提供了式(I)的化合物以及用其治療分枝桿菌感染或結(jié)核病或者抑制DprE1的方法。
【IPC分類】C07D403/12, A61K31/437, A61P31/06, C07D471/04
【公開號(hào)】CN105636646
【申請?zhí)枴緾N201480046182
【發(fā)明人】馬魯?shù)佟·奈克, 沙胡爾·哈米德·皮爾穆罕默德, 拉達(dá)·K·尚迪爾, 維卡斯·納達(dá)揚(yáng)·欣德, 普拉溫·S·希魯?shù)? 莫納利薩·查特吉
【申請人】全球結(jié)核病藥物研發(fā)聯(lián)盟, 被忽視疾病研究基金會(huì)
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2014年7月10日
【公告號(hào)】CA2918487A1, EP3021947A1, US9163020, US20150025087, WO2015009525A1