以200Xg離 心5分鐘。在樣品置于離心分離機(jī)中的同時(shí)，用洗脫液（800 ul+3200 ul)稀釋儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)品 1-5。將約I ml的各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品移入兩個(gè)自動(dòng)進(jìn)樣瓶的每一個(gè)中并蓋帽。離心的樣品1-10的 上（含水）層用洗脫液（100 ul+900 ul)稀釋。將如下的小瓶裝載到自動(dòng)進(jìn)樣器托盤中： 空白品、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和第二標(biāo)準(zhǔn)品。將托盤置于Hitachi自動(dòng)進(jìn)樣器中。使用自動(dòng)進(jìn)樣器 前部的鍵使要運(yùn)行的小瓶的總數(shù)目進(jìn)入自動(dòng)進(jìn)樣程序并運(yùn)行樣品。結(jié)果指明了蛋白質(zhì)的分 子量分布。
[0090] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)〃衍生自牛乳的肽〃定義具有氨基酸序列的肽，所述氨基酸序 列是牛乳蛋白的部分氨基酸序列。這樣的肽可以如上概述的通過(guò)水解獲得，或可以通過(guò)技 術(shù)人員已知的和本公開(kāi)內(nèi)容的實(shí)施例中描述的方法經(jīng)體外合成。
[0091] 術(shù)語(yǔ)〃水解產(chǎn)物的含肽部分〃指包含至少2種、優(yōu)選至少5種、更優(yōu)選至少10種 和最優(yōu)選至少20種肽的混合物，其已通過(guò)技術(shù)人員已知的過(guò)濾技術(shù)，從本公開(kāi)內(nèi)容的水解 產(chǎn)物分離。此外，從本公開(kāi)內(nèi)容的水解產(chǎn)物分離肽的技術(shù)在下文描述。
[0092] 本文根據(jù)本領(lǐng)域提供的定義使用術(shù)語(yǔ)〃兒童〃或術(shù)語(yǔ)〃青少年"。因此，術(shù)語(yǔ)〃兒 童〃意指出生階段和約10歲之間的人受試者，和術(shù)語(yǔ)〃青少年〃意指約10歲和青春期（性 成熟前）之間的人受試者。
[0093] 本文根據(jù)本領(lǐng)域提供的定義使用術(shù)語(yǔ)〃成人"。因此，該術(shù)語(yǔ)意指青春期后（性成 熟后）的人受試者。本公開(kāi)內(nèi)容的更優(yōu)選的實(shí)施方案涉及本公開(kāi)內(nèi)容的營(yíng)養(yǎng)制劑，其中人 受試者具有牛乳過(guò)敏。
[0094] 術(shù)語(yǔ)〃牛乳過(guò)敏〃描述了食物過(guò)敏，即在人受試者中對(duì)牛乳中含有的一種或多種 蛋白質(zhì)的免疫不利反應(yīng)。主要癥狀是胃腸、皮膚和呼吸癥狀。這些可轉(zhuǎn)化為皮疹、蕁麻疹、 嘔吐、腹瀉、便秘和不良應(yīng)激。臨床譜延伸到不同的疾?。哼^(guò)敏反應(yīng)、特應(yīng)性皮炎、喘鳴、小兒 疝氣、胃食管反流疾?。℅ERD)、食道炎、結(jié)腸炎、胃腸炎、頭痛/偏頭痛和便秘。
[0095] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，炎性疾病選自1型糖尿病、 克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、代謝綜合征、HLA-DQ8相關(guān)疾病、HLA-DQ2相關(guān)疾病、腹腔疾病。 更優(yōu)選地，炎性疾病選自1型糖尿病、代謝綜合征、HLA-DQ8相關(guān)疾病、HLA-DQ2相關(guān)疾病。 甚至更優(yōu)選，炎性疾病選自1型糖尿病、HLA-DQ8相關(guān)疾病和HLA-DQ2相關(guān)疾病。更優(yōu)選地， 炎性疾病是1型糖尿病。
[0096] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，促炎細(xì)胞因子選自IL-1、 IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β、IL20 家族的成員、IL33、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、TGF-β、 61-〇5?、11^11、11^12、11^-17和11^18。優(yōu)選地，促炎細(xì)胞因子選自11^-1、幾-6、11^-8和了陬-〇。
[0097] 有兩種IL_1基因，α和β。IL_1 α占通過(guò)激活人單核細(xì)胞制得的IL_1蛋白質(zhì)的 約10%，和IL-I β占90%。它們被制備為細(xì)胞質(zhì)前體。在經(jīng)IL-I-轉(zhuǎn)化酶、ICE (也稱為半 胱天冬酶1)處理后，從細(xì)胞釋放IL-I β。有兩種TNF，TNFa由巨噬細(xì)胞制得，和主要地通 過(guò)激活T細(xì)胞制得的相關(guān)淋巴毒素 a (也稱為TNF β )。IL-I a、IL-I β和TNF在它們的 炎性作用方面是極其類似的。它們的生物作用的主要差別是TNF，除了與炎性細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳 導(dǎo)途徑有關(guān)外，還經(jīng)由p55 TNFR的死亡域與細(xì)胞凋亡途徑關(guān)聯(lián)。IL-6由T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 分泌以刺激免疫反應(yīng)，如在感染期間和在創(chuàng)傷后，特別是燒傷或?qū)е卵装Y的其它組織損傷 后。IL-6還在與對(duì)抗感染中起作用，因?yàn)镮L-6在小鼠中已顯示對(duì)于抵抗細(xì)菌肺炎鏈球菌是 需要的。IL-6也被認(rèn)為是肌因子（myokine)，一種從肌肉產(chǎn)生的細(xì)胞因子，并在響應(yīng)肌肉收 縮時(shí)升高。它隨著鍛煉而顯著地升高，且先于其它細(xì)胞因子出現(xiàn)于循環(huán)中。在鍛煉期間，它 被認(rèn)為以激素-樣方式起作用以動(dòng)用細(xì)胞外基質(zhì)和/或增強(qiáng)基質(zhì)傳遞。此外，成骨細(xì)胞分 泌IL-6以刺激破骨細(xì)胞形成。IL-6作為抗炎細(xì)胞因子的作用通過(guò)其對(duì)TNF-α和IL-I的 抑制作用，和IL-Ira (IL-1受體拮抗劑）和IL-10的激活被介導(dǎo)。IL-6與許多疾病例如糖 尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、抑郁、阿爾茨海默氏病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、前列腺癌、貝 切特氏?。╞ehcet's disease)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)。晚期/轉(zhuǎn)移癌患者在它們的血液 中具有較高水平的IL-6。因此，在開(kāi)發(fā)作為對(duì)抗許多這些疾病的治療的抗-IL-6藥物方面 具有意義。第一個(gè)這樣的藥物是托珠單抗（tocilizumab)，其已批準(zhǔn)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。 另一個(gè)是ALD518,正處于臨床試驗(yàn)中。
[0098] 白介素8 (IL-8)是由巨噬細(xì)胞和其它細(xì)胞類型例如上皮細(xì)胞產(chǎn)生的趨化因子。它 也可由內(nèi)皮細(xì)胞合成，內(nèi)皮細(xì)胞在其貯存囊泡（Weibel-Palade小體）中儲(chǔ)存IL-8。在人體 中，白介素-8蛋白質(zhì)由IL8基因編碼。有許多表面膜的受體能夠結(jié)合IL-8 ;最常見(jiàn)的研究 類型是G蛋白質(zhì)-偶聯(lián)的蛇形受體CXCRl和CXCR2。兩種受體的表達(dá)和對(duì)IL-8的親和力是 不同的（CXCR1 > CXCR2)。Toll-樣受體是先天免疫系統(tǒng)的受體。這些受體識(shí)別抗原形式 (像革蘭氏陰性菌中的LPS)。通過(guò)生物化學(xué)反應(yīng)的鏈，IL-8被分泌且是先天免疫系統(tǒng)反應(yīng) 中的免疫反應(yīng)的重要介質(zhì)。IL-8,也稱為中性粒細(xì)胞趨化因子，具有兩種主要功能。它誘導(dǎo) 靶細(xì)胞（主要是中性粒細(xì)胞但也包括其它粒細(xì)胞）的趨化性，使它們向感染部位迀移。在 它們到達(dá)時(shí)，IL-8還誘導(dǎo)噬菌作用。還已知IL-8是血管生成的有效促進(jìn)劑。在靶細(xì)胞中， IL-8誘導(dǎo)迀移和噬菌作用所需的一系列生理反應(yīng)，例如增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+、胞外分泌（如組胺 釋放）和呼吸爆發(fā)（respiratory burst)。IL-8可由參與先天免疫反應(yīng)的具有toll-樣受 體的任何細(xì)胞分泌。通常，巨噬細(xì)胞首先看到抗原，因此是釋放IL-8以募集其它細(xì)胞的第 一種細(xì)胞。已報(bào)道IL-8的單體和同型二聚體兩種形式是趨化因子CXCRl和CXCR2的有效 誘導(dǎo)劑。同型二聚體是更加有效的，但Leu25的甲基化可阻斷二聚體的活性。相信IL-8在 細(xì)支氣管炎（一種由病毒感染引起的常見(jiàn)呼吸道疾病）的發(fā)病機(jī)理中起作用。IL-8是CXC 趨化因子家族的成員。編碼IL-8和CXC趨化因子家族的其它10個(gè)成員的基因在映射到染 色體4q的區(qū)域中形成簇。白介素-8常常與炎癥有關(guān)。作為實(shí)例，它已被列為牙齦炎和銀 肩病的促炎介質(zhì)。白介素-8分泌經(jīng)氧化應(yīng)激增加（其由此引起炎性細(xì)胞的募集）的事實(shí)， 誘導(dǎo)氧化應(yīng)激介質(zhì)的進(jìn)一步增加，使得其為局部炎癥中的重要參數(shù)。
[0099] 優(yōu)選地，促炎細(xì)胞因子的血漿水平減少至健康個(gè)體的正常水平。技術(shù)人員熟知促 炎細(xì)胞因子的正?；蚪】笛獫{水平。以下提供的血漿水平可以用作參考點(diǎn)： IL-I α 20-40 pg/ml IL-Iβ ：1-5 pg/ml IL-6 :3_15 pg/ml IL-8 :3-30 pg/ml TNF a ：5-25 pg/ml) IL-18 :100-180 pg/ml 本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)酪蛋白水解產(chǎn)物對(duì)抑制促炎反應(yīng)具有有益作用。還發(fā)現(xiàn)，特別地， 含有廣泛水解的牛乳肽的水解產(chǎn)物對(duì)炎性疾病且特別是1型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)因素具有積極 作用。合適的水解產(chǎn)物是酪蛋白水解產(chǎn)物。而且發(fā)現(xiàn)具有500 Da的截止值（cut-off)的 水解產(chǎn)物的透析使得水解產(chǎn)物部分具有對(duì)抑制促炎反應(yīng)的甚至更好作用。因此，在特定的 實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有分子量超過(guò)500 Da的肽，和在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，水解產(chǎn) 物包含分子量在500-2000 Da的范圍內(nèi)的肽。在其它實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物由分子量超過(guò) 500 Da的肽組成，和在另外的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物由分子量在500-2000 Da范圍內(nèi)的肽組 成。
[0100] 以下肽已在水解產(chǎn)物中被鑒定并可對(duì)炎性反應(yīng)具有有益作用： 表1 :在水解產(chǎn)物中鑒定的肽：
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在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 1的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 2-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選 地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0101] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 2的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 3-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽，優(yōu) 選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0102] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 3的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-2和SEQ ID NO: 4-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽， 優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0103] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 4的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-3和SEQ ID NO: 5-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽， 優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0104] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 5的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-4和SEQ ID NO: 6-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽， 優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0105] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 6的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-5和SEQ ID NO: 7-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽， 優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0106] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 7的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-6和SEQ ID NO: 8-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽， 優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0107] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 8的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-7和SEQ ID NO: 9-68的肽，優(yōu)選地至少2種肽， 優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0108] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 9的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-8和SEQ ID NO: 10-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0109] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 10的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-9和SEQ ID NO: 11-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0110] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 11的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-10和SEQ ID NO: 12-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0111] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 12的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-11和SEQ ID NO: 13-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0112] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 13的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-12和SEQ ID NO: 14-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0113] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 14的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-13和SEQ ID NO: 15-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0114] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 15的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-14和SEQ ID NO: 16-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0115] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 16的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-15和SEQ ID NO: 17-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0116] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 17的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-16和SEQ ID NO: 18-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0117] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 18的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-17和SEQ ID NO: 19-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0118] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 19的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-18和SEQ ID NO: 20-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0119] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 20的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-19和SEQ ID NO: 21-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0120] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 21的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-20和SEQ ID NO: 22-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0121] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 22的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-21和SEQ ID NO: 23-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0122] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 23的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-22和SEQ ID NO: 24-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0123] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 24的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1-23和SEQ ID NO: 25-68的肽，優(yōu)選地至少2種 肽，優(yōu)選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0124] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 1的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 2-24的肽，優(yōu)選地至少2種肽，優(yōu)選地至少3種肽， 優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
[0125] 在本公開(kāi)內(nèi)容和/或其實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，水解產(chǎn)物包含具有SEQ ID NO: 2的肽和至少一種選自SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 3-24的肽，優(yōu)選地至少2種肽，優(yōu) 選地至少3種肽，優(yōu)選地至少4種肽，優(yōu)選地至少5種肽。
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