由羥基酪醇制成的治療肝損傷的藥物組合物及其制備工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥、天然藥物領(lǐng)域，涉及一種由羥基酪醇、環(huán)維黃楊星D組成的具有 保肝、解酒作用的藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 第一部分羥基酪醇的研宄現(xiàn)狀 羥基酪醇（hydroxytyrosol，HT)化學(xué)名：3, 4-二羥基苯乙醇，具有很強(qiáng)的抗氧化活性， 主要以酯類的形式存在于橄欖的果實(shí)和枝葉中。橄欖苦苷經(jīng)水解后得到HT單體。HT結(jié)構(gòu) 簡單，分子量小，具有良好的藥物和保健功能，受到國內(nèi)外研宄者的廣泛關(guān)注。其藥理作用 及其機(jī)制如下。
[0003] 一、抗癌作用研宄 一般認(rèn)為，腫瘤是由于體內(nèi)多余的自由基和活性氧（ROS)破壞了DNA致使基因異常表 達(dá)造成的，如結(jié)腸癌病人體內(nèi)ROS的量明顯增高。HT具有鄰苯二酚結(jié)構(gòu)，是一個(gè)典型的抗氧 化應(yīng)激物質(zhì)和自由基清除劑，這就使其具有潛在的抗腫瘤活性。研宄資料表明，HT能抑制 腫瘤發(fā)生的多個(gè)階段且具有廣譜性。
[0004] 首先，HT能保護(hù)細(xì)胞內(nèi)DNA和酶免受ROS與自由基的破壞以預(yù)防癌癥的發(fā)生。與 其酯化物橄欖苦苷相比，HT具有更強(qiáng)的抗氧化應(yīng)激作用，研宄證實(shí)在外周血單核細(xì)胞中HT 降低了二噁英誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和DNA破壞，它通過降低過氧化脂質(zhì)、ROS的量和增加抗氧化 酶的活性，抑制細(xì)胞內(nèi)DNA被破壞，并減少細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。另外，HT在較低濃度下即能 抑制丙二醛、H2O2脂肪酸和7-酮基膽固醇的生成，并能有效地阻斷ERK和Akt/Pkb的磷酸 化狀態(tài)發(fā)生改變，還能抑制外來因素(如紫外線B、苯胼芘等）所導(dǎo)致的DNA破壞。
[0005] 其次，HT能抑制癌細(xì)胞增殖與促進(jìn)其凋亡來發(fā)揮抗癌作用。研宄發(fā)現(xiàn)HT在濃度 為50yg/mL時(shí)即能通過抑制增殖和促進(jìn)凋亡作用使乳腺癌細(xì)胞（MCF-7)明顯減少，機(jī)制可 能是增加GO~Gl期的細(xì)胞數(shù)目，阻止Gl~S期的轉(zhuǎn)化。但是有科研人員卻指出HT在正 常生理濃度下對(duì)人乳腺表皮細(xì)胞(MCFlOA)和乳腺癌上皮細(xì)胞(MDA-MB-2312、MCF-7)的增 殖和凋亡均沒有影響，但是HT能預(yù)防3種細(xì)胞中DNA遭破壞，另有人指出HT還能促進(jìn)其他 癌細(xì)胞的凋亡，如結(jié)腸癌、直腸癌等，使細(xì)胞周期停留在S期。
[0006] 再次，HT還能通過抑制癌細(xì)胞的擴(kuò)散來發(fā)揮廣譜的抗癌作用。HT對(duì)惡性腫瘤入侵 結(jié)腸細(xì)胞具有明顯的抑制作用，當(dāng)濃度為25yg/mL時(shí)，HT在人結(jié)腸癌細(xì)胞HT115中表現(xiàn)出 強(qiáng)烈抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用且呈劑量依賴關(guān)系，卻沒有降低細(xì)胞活性，而且對(duì)細(xì)胞的貼壁生 長狀況也沒有明顯影響，提示HT并不是通過細(xì)胞毒性抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。另外，有研宄者 將HT與間碘芐胍（I-MIBG)合用治療嗜鉻細(xì)胞瘤，不僅誘導(dǎo)了去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（NET) 的快速表達(dá)，而且增強(qiáng)了NET的活性，同時(shí)還降低了去甲腎上腺素的釋放，實(shí)驗(yàn)表明HT能影 響和NET有關(guān)的細(xì)胞膜，而不是以一種新型的去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)分子納入到細(xì)胞中，將HT 和I-MIBG合用治療嗜鉻細(xì)胞瘤是一種新穎而有效的方法。基于以上研宄，可以將HT開發(fā) 成一種綠色的抗癌藥物，它避開了傳統(tǒng)抗癌藥的固有威脅，對(duì)正常細(xì)胞沒有殺傷作用，因而 大大提升了其安全性和有效性。
[0007] 最后，HT通過抑制血管的生成發(fā)揮治療癌癥的作用。美國學(xué)者提出了腫瘤血管 生成的概念，他認(rèn)為只有刺激新生血管的形成，惡性腫瘤才能生長和轉(zhuǎn)移，只要能阻止新血 管的形成，就能餓死腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到治療惡性腫瘤的目的。研宄證明HT在血管形成不 同階段均能發(fā)揮作用，且具有多個(gè)靶點(diǎn)，在人工基底膜上試驗(yàn)中HT抑制了血管內(nèi)皮細(xì)胞的 增殖、轉(zhuǎn)移和"管狀"結(jié)構(gòu)的形成，而且改變了上皮細(xì)胞增殖周期細(xì)胞的分布，明顯增加了 subGl亞群的量，提示癌細(xì)胞凋亡增加。
[0008] 通過以上抗腫瘤機(jī)制的研宄可知，HT能在多個(gè)階段預(yù)防癌癥的發(fā)生，并在腫瘤的 治療中發(fā)揮明顯作用。但是已發(fā)表文獻(xiàn)之間也存在著一定的矛盾，以MCF-7細(xì)胞為例，有研 宄證明HT對(duì)其具有抑制增殖和促進(jìn)凋亡作用，而另有研宄者認(rèn)為HT僅對(duì)MCF-7細(xì)胞的活 性氧有清除作用，對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡幾乎沒有影響。因此，HT的抗腫瘤作用仍然是值得深 入探討的一個(gè)問題，可能還有別的作用機(jī)制有待發(fā)現(xiàn)。
[0009] 二、抗血栓、調(diào)血脂和抗動(dòng)脈硬化作用研宄 研宄發(fā)現(xiàn)食用橄欖油能大大降低心血管疾病的發(fā)病率，其中HT發(fā)揮了重要的作用。有 研宄指出，HT抗心血管疾病的作用與抑制血小板凝集密切相關(guān)，研宄人員以水楊酸作參比 考察了HT對(duì)大鼠體外血的抗凝集作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明它能抑制血栓素B的合成，并能提高 氧化亞氮的生成量，從而達(dá)到抗凝作用。有科研人員則以人血細(xì)胞為研宄對(duì)象考察了HT的 抗凝集作用，當(dāng)濃度為l〇〇mg/L時(shí)，蛋白質(zhì)組學(xué)研宄表明它參與調(diào)節(jié)9種蛋白發(fā)揮抗凝集作 用，如血小板結(jié)構(gòu)、活性和整合素allb/b3的轉(zhuǎn)導(dǎo)等。由結(jié)果可知，HT能抑制血小板的活性 和粘連，可用于預(yù)防血栓的形成。
[0010] HT抗心血管疾病的作用可能與降低血糖和脂類氧化物濃度有關(guān)。實(shí)驗(yàn)證明HT 能降低糖尿病大鼠血漿中的血糖濃度和血清中三酰甘油、總膽固醇的量，并能增強(qiáng)肝腎內(nèi) S0D、過氧化氫酶（CAT)和谷胱甘肽（GSH)過氧化物酶活性，降低堿性磷酸酶和硫代巴比妥 酸反應(yīng)物等含量，從而表現(xiàn)出降低肝腎器官毒性的作用，其機(jī)制可能與HT和LDL結(jié)合有關(guān)。 還有資料表明，HT可以治療由糖尿病引起的高血糖及氧化應(yīng)激病癥。HT還能預(yù)防動(dòng)脈粥樣 硬化的發(fā)生。研宄證明HT可以降低豬肺動(dòng)脈上皮細(xì)胞內(nèi)過氧化氫誘導(dǎo)的ROS的水平，并增 強(qiáng)mRNA酶、蛋白質(zhì)活性和細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子3a(F0X03a)的水平，誘導(dǎo)磷酸腺苷-激活蛋 白激酶使F0X03a向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移。其中F0X03a是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，主要存在于心臟組織， 其活化狀態(tài)對(duì)抑制血管平滑肌增殖、心肌細(xì)胞增生肥大和抗氧化應(yīng)激具有明顯作用，但當(dāng) 其由細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)便發(fā)生失活。HT通過誘導(dǎo)腺苷酸活化蛋白激酶和激活F0X03a酶 活性的表達(dá)，保護(hù)機(jī)體上皮細(xì)胞中免受氧化破壞，且可以預(yù)防動(dòng)脈硬化的發(fā)生。此外，HT也 是一種強(qiáng)效的腦內(nèi)抗氧化劑，實(shí)驗(yàn)證明它能降低紋狀體和腦其余部位過氧化脂產(chǎn)物水平， 阻礙GSH的消耗，攝取含有HT的食物能降低腦神經(jīng)病變的風(fēng)險(xiǎn)。以上研宄均表明HT可以 降低腦內(nèi)和血管內(nèi)皮細(xì)胞活性氧的量，為治療心腦血管疾病提供了分子依據(jù)。
[0011] 三、抗病原微生物作用研宄 HT可能開發(fā)成一種治療腸道和呼吸道感染的藥物，它具有高效和廣譜的特點(diǎn)。以幽 門螺旋桿菌為例，其在世界范圍內(nèi)存在多種耐抗生素的菌株，但是HT對(duì)耐藥和非耐藥菌株 均具有強(qiáng)力的殺傷作用。另有研宄HT對(duì)5種標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC9006、ATCC8176、ATCC6539、 ATCC17802、ATCC25923)和臨床上得到的44種菌株最低抑菌濃度分別為0. 24~7. 85yg/ mL、0. 97~31. 25yg/mL，抑菌濃度明顯低于其他植物提取物，而且對(duì)抑制革蘭陽性菌的活 性高于革蘭陰性菌。
[0012] 值得注意的是，其抗菌活性不僅表現(xiàn)在腸道內(nèi)有害菌種方面，還對(duì)嗜乳酸菌和雙 歧桿菌具有抑制作用。HT也可以抑制多種病毒的活性，包括HIV-1、H1N1、H3N2、H5N1*H9N2 亞型和新城雞瘟病毒等，但是對(duì)牛輪狀病毒和腺病毒無效。研宄發(fā)現(xiàn)HT能降低HIV-I融合 酶的活性，并能通過與病毒包膜外層的疏水基團(tuán)形成氫鍵等阻礙gp41活性核心的融合。實(shí) 驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用HT預(yù)處理狗腎細(xì)胞（MDCK)后，不影響H9N2在MDCK上的增殖情況，但向細(xì)胞內(nèi)灌 輸HT和滅活H9N2后，結(jié)果顯示病毒的DNA和蛋白均無法檢測到，而且電鏡觀測HT處理后 的H9N2病毒形態(tài)學(xué)發(fā)生變化，由此可知其靶點(diǎn)是病毒自身的包膜或其他部位，而不是宿主 細(xì)胞。由此，HT不僅可以作為抗菌、抗病毒的藥物，而且還可以增強(qiáng)機(jī)體的防御功能，凸顯 了其開發(fā)為抗病原微生物藥物的潛力。
[0013]四、對(duì)視網(wǎng)膜黃斑變性防治作用研宄 HT可以預(yù)防由丙烯醛、環(huán)境毒性、氧化脂肪粒和年齡增長等因素造成的視網(wǎng)膜上皮細(xì) 胞氧化破壞，特別適用于老年人維持眼的健康和高分辨率，改善視力。在人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞 APRE-19中，HT同時(shí)保護(hù)Nrf2細(xì)胞通路和活化輔酶PPARGC1a受體，Nrf2能激活I(lǐng)I期的凈 化酶，如y-谷?；?半胱氨酰連接酶、NADPH-醌氧化還原酶1、紅細(xì)胞合酶1等抗氧化酶， II期凈化酶將和自由基"結(jié)合"并將其他毒性化合物轉(zhuǎn)化為活性較弱的分子；而PPARGC1a 則對(duì)蛋白質(zhì)和線粒體復(fù)合物進(jìn)行解鏈，以增強(qiáng)線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)因子A的表達(dá)免受線粒體功能減 退，提高細(xì)胞生存能力。因此HT能誘導(dǎo)II期凈化酶的活性和增強(qiáng)線粒體的生成，從而預(yù)防 或治療黃斑變性。
[0014]五、保護(hù)軟骨和抗骨質(zhì)疏松作用研宄 軟骨是一種由成骨軟細(xì)胞或軟骨細(xì)胞等組成的致密結(jié)締組織，包埋在細(xì)胞外基質(zhì)中， 是骨骼的一種重要組成成分，因其具有低代謝的特點(diǎn)，所以受傷或破損后的軟骨恢復(fù)較慢。 HT能誘導(dǎo)和增強(qiáng)軟骨細(xì)胞增殖，提高其產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)組分的能力，進(jìn)而促進(jìn)軟骨修復(fù)和 再生。研宄人員以成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞為對(duì)象，考察了HT對(duì)骨形成以及切除卵巢后骨流失 的影響，當(dāng)濃度達(dá)到10~100umol/L時(shí)，HT能刺激鈣的沉積且成劑量依賴關(guān)系，但是對(duì)原 成骨細(xì)胞膠原蛋白和堿性磷酸酶沒有影響，當(dāng)濃度為50~100ymol/L時(shí)，HT能阻礙多核 破骨細(xì)胞的形成且成劑量依賴關(guān)系。HT在去卵巢股骨小梁骨細(xì)胞中表現(xiàn)出抑制骨流失的作 用，而且還能降低原成骨細(xì)胞中H202的水平，因此能預(yù)防由氧化應(yīng)激造成的骨質(zhì)疏松。HT 在骨的形成和維持骨健康方面起到關(guān)鍵的作用，可以作為治療骨質(zhì)疏松的有效藥物，適用 于誘導(dǎo)或增強(qiáng)軟骨修復(fù)或軟骨再生，尤其適用于運(yùn)動(dòng)員和具有活躍生活方式的人群。
[0015]六、其他保健作用研宄 HT能減少細(xì)胞內(nèi)C0X-2的生成和5-氧脂化酶的表達(dá)，降低前列腺素E-2的合成，可用 于抗炎、鎮(zhèn)痛。HT有助于修復(fù)由于過度運(yùn)動(dòng)或勞累損害的線粒體，能使體能快速恢復(fù)，并能 增強(qiáng)抵抗力和運(yùn)動(dòng)能力，還能降低小鼠C3H10T1/2細(xì)胞內(nèi)脂肪滴的形成，從而達(dá)到減肥的 目的。
[0016]七、展望 國外學(xué)者對(duì)HT在抗癌、抗血栓、調(diào)血脂和抗動(dòng)脈硬化、抗病原微生物、防治視網(wǎng)膜黃斑 變性、保護(hù)軟骨和抗骨質(zhì)疏松等多方面的藥理作用進(jìn)行了很好的研宄，部分研宄還在分子 水平上探討了HT的藥理作用機(jī)制。國內(nèi)對(duì)HT的研宄主要表現(xiàn)在保健品和食品添加劑方面， 對(duì)其藥用方面研宄較少，目前有針對(duì)HT治療前列腺癌申請(qǐng)了專利。隨著對(duì)HT藥理作用的 深入研宄，其藥用價(jià)值亟待開發(fā)，不失時(shí)機(jī)地