鐵筷子總皂苷在制備防治肝損傷藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于肝膽科治療領(lǐng)域，涉及鐵筷子總皂苷在制備保護(hù)急性肝損傷的藥物中 的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝損傷是由多種病因引起且有多種因素參與的復(fù)雜過程。肝損傷引發(fā)的肝臟疾病 已成為常見病、多發(fā)病，更為嚴(yán)重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率 高，極大地威脅著人類的健康。很多因素可引起肝損傷，體內(nèi)模型特別是化學(xué)性肝損傷模 型，在形態(tài)學(xué)、病理生理學(xué)的某些方面與人慢性肝病較為相似。腹腔注射CCl 4植物油溶液是 目前常用的肝炎模型。CCl4引起肝損傷的機(jī)制是CCl 4在肝微粒體細(xì)胞色素 P450激活下生 成自由基CCl3 ?及Cl ·，這些自由基可與肝細(xì)胞內(nèi)大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，也可攻擊膜下不 飽和脂質(zhì)，引起脂質(zhì)過氧化，使肝細(xì)胞損傷，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)GPT、GOT滲入血液，結(jié)果血清中GPT、 GOT的活性升高，SOD活性及MDA含量?？煞从丑w內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度，間接反映機(jī)體組 織、細(xì)胞損傷的程度。通過檢測(cè)小鼠肝勻漿中的SOD活性及MDA含量可反映出藥物對(duì)肝細(xì) 胞的保護(hù)作用。因此本申請(qǐng)以血清GPT、G0T、肝組織SOD活性及MDA含量作為指標(biāo)來探討 鐵筷子總皂苷對(duì)肝損傷的保護(hù)作用。
[0003]目前，肝損傷的治療方法有很多，雖然均有一定的療效，但也存在著明顯的不足。 首先，西藥具有較大的毒副作用，且療效并不確切。其次，實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，中藥在抗菌 抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能以及抗肝纖維化等方面顯示出良 好的療效，安全、可靠、有效，進(jìn)一步顯示出中醫(yī)辨證論治的合理性，突顯了中藥在治療肝損 傷，尤其是內(nèi)毒素性急性肝損傷方面的良好前景。國(guó)內(nèi)外尚未見到有關(guān)于鐵筷子總皂苷對(duì) 急性肝損傷小鼠保護(hù)作用的報(bào)道。
[0004] 鐵筷了（H elleborus、thabetanus Franch.)為毛莨科鐵筷子屬多年生草本植物， 又名嚏根草、小桃兒七等。鐵筷子屬植物約有20余種，主要分布在歐洲東南部和亞洲西部， 其中，H elleborus thabetanus Franch.為我國(guó)西部特產(chǎn)種，主要分布于秦嶺和大巴山區(qū)。 其根莖為主要藥用部位，具活血散癖、消腫止痛、清熱解毒之功效，民間主要用于治療膀胱 炎、尿道炎、瘡癤腫毒及跌打損傷等癥。國(guó)內(nèi)外的研究表明，鐵筷了屬植物含有留體皂苷、黃 酮、木質(zhì)素、多糖、氨基酸等成分。其中鐵筷了總皂苷因具有增大心肌收縮力和心搏出量、減 低心律、消除水腫與呼吸道困難的強(qiáng)心作用，促進(jìn)糖元產(chǎn)生以抑制乳酸生成的胰島素樣作 用，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，促進(jìn)白細(xì)胞增多以及提高人體系統(tǒng)免疫力等多種生理功能而受 到人們的關(guān)注。然未見關(guān)于鐵筷子總皂苷有保護(hù)肝損傷作用的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的在于提供一種鐵筷子總皂苷，該提取物具有保肝護(hù)肝作用，可用來制 備保護(hù)肝損傷的藥物。
[0006] 所述鐵筷子總皂苷在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用，尤其是在制備保護(hù)急性肝損 傷藥物方面的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包含有效量的鐵筷子總皂苷和一種或多種藥學(xué) 上可接受的輔料，所述藥物組合物含有重量比為1~99%的鐵筷子總皂苷。
[0008] 所述藥物組合物還可以包含其他治療肝損傷的活性成分，包括中藥和西藥組分。
[0009] 優(yōu)選的，所述藥物組合物含有重量比為10~60%的鐵筷子總皂苷。
[0010] 本發(fā)明的應(yīng)用中，所述鐵筷子總皂苷制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑或口 服液制劑中的一種，為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥學(xué)可接受的輔料， 例如：填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑等，填充劑包括：淀 粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等，崩解劑包括：淀粉、預(yù)膠化淀 粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維 素鈉等，潤(rùn)滑劑包括：硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等，助懸劑包括：聚乙 烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等，粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡 咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等，甜味劑包括：糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等， 矯味劑包括：甜味劑及各種香精，防腐劑包括：尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽 類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等。
[0011] 本發(fā)明所述藥物的使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、 性別、自然健康狀況、營(yíng)養(yǎng)狀況、化合物的活性強(qiáng)度、服用時(shí)間、代謝速率、病程嚴(yán)重程度以 及診治醫(yī)師的主觀判斷。本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述因素可以容易地決定使用劑量和使用 方法。本發(fā)明的活性成分鐵筷子總皂苷制成各種劑型的口服藥物，成人口服，常用劑量一次 0·l_50mg/kg。
[0012] 為證實(shí)上述提取物的保肝護(hù)肝作用，本發(fā)明以聯(lián)苯雙酯為陽(yáng)性對(duì)照，分別考察了 鐵筷子總皂苷對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的治療作用。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鐵 筷子總皂苷對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠有較好的治療作用。
[0013] 在現(xiàn)有文獻(xiàn)中記載了鐵筷子總皂苷的制備方法，例如ZL201410550317,《西北農(nóng)業(yè) 學(xué)報(bào)》2008年17(6) :262-266,在此將它們?nèi)恳氡疚摹１景l(fā)明的鐵筷子總皂苷可以是 由這些方法制備，或者采用已知的其他方法。
[0014] 下面用具體的實(shí)施例來證明鐵筷子總皂苷的效果。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 效果試驗(yàn)
[0016] 以ZL201410550317的實(shí)施例2制各鐵筷子總皂苷，測(cè)定其試驗(yàn)結(jié)果。
[0017] (一）主要試劑與儀器：
[0018] 四氯化碳（分析純）購(gòu)自煙臺(tái)三和化學(xué)試劑公司；橄欖油購(gòu)自上海衛(wèi)輝化學(xué)試劑 廠；聯(lián)苯雙酯購(gòu)自浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)：090205 ;考馬斯亮藍(lán)G250購(gòu)自上?；瘜W(xué)試 劑公司分裝廠，批號(hào)：20050115 ;牛清蛋白購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)： 20100526 ;其它試劑均為分析純。
[0019] 谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT)試劑盒（20110613)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT)試劑盒（20110808)、丙 二醛（MDA)試劑盒（20110803)、超氧化物歧化酶（SOD)測(cè)定試劑盒（20110802)均購(gòu)于中生 北控生物科技股份有限公司。
[0020] 〇· 4V% CCl4油溶液：取四氯化碳分散到橄欖油中，用磁力攪拌器強(qiáng)力攪拌2h ;現(xiàn) 用現(xiàn)配。
[0021] UV 2000型紫外可見分光光度計(jì)（尤尼可上海儀器有限公司）；Multiskan MK3酶 標(biāo)儀（Thermo Electron) ;LRH-150恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）。
[0022] (二）實(shí)驗(yàn)方法：
[0023] 取健康的成年雄性昆明小鼠（4~6周齡，體重20±2g)90只，隨機(jī)分為9組，每 組10只。分別為空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯陽(yáng)性對(duì)照組（70mg/kg)、鐵筷子總皂苷高、中、 低劑量組（400、200、100mg/kg)。除模型組外，空白組用0.5%的羥甲基纖維素鈉水溶液 (CMC-Na)灌胃，其它試驗(yàn)組用0. 5 % CMC-Na分別配制成相應(yīng)濃度灌胃給藥，1次/天，連續(xù) 給藥8天。于末次給藥2h后對(duì)小鼠進(jìn)行造模（空白組除外）。禁食不禁水12h后，摘除小鼠 眼球取血，血漿室溫靜置30min，待血清分離后離心得到血清，置于冰箱0-3°C保存，測(cè)GPT 和GOT?？焖俜蛛x肝臟，制備10%和1 %的肝臟組織勻漿液，離心取上清液0-3°C保存測(cè)MDA 和S0D，并用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定10%和1 %組織勻漿液的蛋白含量。
[0024] (三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
[0025] 表 1
[0027] 與空白組比較，Δ Δ Δρ < 〇· 001 ;與模型組比較，*p < 〇· 05, **p < 0· 001，***p < 0. 001
[0028] 從表1可以看出，模型組與空白組相比，血清中⑶P和GOT含量升高，且具有極顯 著性差異（P < 0. 001)，說明造模成功。鐵筷子總皂苷）高、中、低劑量組均能夠顯著的降低 急性肝損傷小鼠血清中的GPT和GOT含量（P < 0. 001)。由此表明鐵筷子總皂苷對(duì)化學(xué)性 肝損傷有很強(qiáng)的保護(hù)作用。
[0029] 表 2

[0031] 與空白組比較，Δ Δ Δρ < 〇· 001 ;與模型組比較，*p < 〇· 05, **p < 0· 001，***p < 0. 001
[0032] 表2顯示，模型組小鼠 SOD含量顯著低于空白對(duì)照組（P < 0. 001)，MDA含量顯著 高于空白對(duì)照組（P < 0. 001)，說明造模成功。與模型組相比，鐵筷子總皂苷高、中、低劑量 組均能顯著降低四氯化碳致急性肝損傷小鼠肝組織中MDA的含量（P < 0. 001)，并顯著升高 SOD 含量（P < 0· 05)。
[0033] 綜上說明，鐵筷子總皂苷具有較好的保肝護(hù)肝作用，可以用來制備保肝護(hù)肝藥物， 尤其是制備具有保護(hù)急性肝損傷的藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 鐵筷子總皂苷在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用。2. 鐵筷子總皂苷在制備保護(hù)肝損傷藥物方面的應(yīng)用。3. 鐵筷子總皂苷在制備保護(hù)急性肝損傷藥物方面的應(yīng)用。4. 一種保肝護(hù)肝的藥物組合物，包含有效量的鐵筷子總皂苷和一種或多種藥學(xué)上可接 受的輔料，所述藥物組合物含有重量比為1~99%的鐵筷子總皂苷。5. 權(quán)利要求4的藥物組合物，還可以包含其他治療肝損傷的活性成分。6. 權(quán)利要求4的藥物組合物，含有重量比為10~60%的鐵筷子總皂苷。
【專利摘要】本發(fā)明涉及鐵筷子總皂苷的一種新用途，具體涉及鐵筷子總皂苷在保護(hù)肝臟功能上的新用途。通過對(duì)鐵筷子總皂苷的研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)采用四氯化碳制備的小鼠急性肝損傷模型具有保護(hù)作用，進(jìn)而將其用于防治多種原因引起的肝損傷。
【IPC分類】A61P1/16, A61K36/185
【公開號(hào)】CN104997818
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510471597
【發(fā)明人】宮琳, 施露
【申請(qǐng)人】宮琳, 施露
【公開日】2015年10月28日
【申請(qǐng)日】2015年8月5日