用于炎性疾病的抗-cxcl9、抗-cxcl10、抗-cxcl11、抗-cxcl13、抗-cxcr3和抗-cxcr5試劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本申請(qǐng)主要涉及炎性疾病的檢測(cè)。更具體地說(shuō)，本申請(qǐng)涉及用于使用抗-趨化因 子和/或抗-趨化因子受體檢測(cè)試劑檢測(cè)炎性疾病的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 盡管近來(lái)在與炎癥過(guò)程相關(guān)的研宄中取得進(jìn)展，但是用于診斷和治療慢性炎性疾 病的方法仍然還有很多沒(méi)有弄清楚。這可能是因?yàn)樵谒拗髦幸l(fā)并且維持炎癥狀態(tài)的因 子有很多并且是復(fù)雜的。目前治療具有與它們相關(guān)的缺點(diǎn)，包括免疫系統(tǒng)的抑制可能導(dǎo)致 宿主更容易受到細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)感染。例如，使用類(lèi)固醇是慢性炎癥治療的一種傳統(tǒng)方 法。這種治療可能導(dǎo)致保護(hù)性免疫的抑制和體重的變化。生物技術(shù)中的進(jìn)展已經(jīng)促進(jìn)了具 有很少副作用的靶向生物制品的發(fā)展。為了改善炎性疾病治療，需要發(fā)展改變和控制由先 天性和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)兩者的細(xì)胞生成的因子的技術(shù)。
[0003] 宿主細(xì)胞具有與配體關(guān)聯(lián)的表面受體以轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)并且調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞活性。施用抗 TNF-α抗體或者可溶性TNF-α受體已經(jīng)顯示抑制炎性疾病。不幸的是，與這種治療相關(guān)聯(lián) 的副作用可能通過(guò)沒(méi)有充分了解的機(jī)制導(dǎo)致感染（例如肺結(jié)核）和其他不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)增 加。類(lèi)似的，針對(duì)膜結(jié)合分子樣CD40的抗體治療具有抑制炎癥和移植物-宿主病的特性。 雖然一直在研宄用于預(yù)防炎性疾病的其他靶向宿主細(xì)胞治療，但是仍然沒(méi)有能阻止所有炎 性疾病的已知單獨(dú)表面或分泌因子。因此，需要開(kāi)發(fā)采用新鑒定的特異性宿主細(xì)胞目標(biāo)的 治療。
[0004] 在進(jìn)入粘膜之后不久，各種不同的病原體或毒素激活巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、T 細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞、潘氏和隱窩細(xì)胞以及上皮細(xì)胞。趨化因子是耐受水解的、 促進(jìn)新血管形成或內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排、使淋巴細(xì)胞激活或者失活以及 通過(guò)與G蛋白偶聯(lián)受體相互作用而介導(dǎo)趨藥性的小的細(xì)胞因子樣蛋白的超級(jí)家族。趨化因 子可以介導(dǎo)表達(dá)它們的受體的宿主細(xì)胞的迀移和生長(zhǎng)。負(fù)責(zé)趨化因子的這些功能的細(xì)胞機(jī) 制一般是但是不是全部是Ca 2+流依賴(lài)性的并且是百日咳毒素敏感的。然而，趨化因子介導(dǎo) 事件的準(zhǔn)確機(jī)制仍未清楚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本申請(qǐng)的一個(gè)方面涉及分離的抗-CXCL9、抗-CXCL10、抗-CXCL11、抗-CXCL13、 抗-CXCR3或抗-CXCR5試劑，所述試劑對(duì)炎性疾病具有結(jié)合親和力，Kd值范圍為0.0 lpM至 ΙμΜ。在一個(gè)實(shí)施方式中，本申請(qǐng)涉及一種用于檢測(cè)受試者中的炎性疾病的方法。所述方 法包括如下步驟：(a)檢測(cè)獲自所述受試者的生物樣品中的一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物 的表達(dá)水平；和（b)比較所述生物樣品中的所述一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的表達(dá)水平 和所述一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的正常表達(dá)水平，其中，高于所述多個(gè)炎性疾病標(biāo)記 物中的一種或者多種在所述生物樣品中的正常表達(dá)水平指示所述受試者中存在炎性疾病， 其中所述多個(gè)炎性疾病標(biāo)記物的所述正常表達(dá)水平是預(yù)定值，并且其中所述一種或者多種 炎性疾病標(biāo)記物包括選自由CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5組成的組中的 一種或者多種標(biāo)記物。
[0006] 本申請(qǐng)的另一個(gè)方面涉及一種用于監(jiān)測(cè)受試者中炎性疾病治療過(guò)程的方法。所 述方法包括如下步驟：測(cè)定在治療過(guò)程中或者治療之后獲自所述受試者的一種或者多種生 物樣品中的一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的表達(dá)水平；和比較所述一種或者多種生物樣 品中的所述一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的表達(dá)水平和所述一種或者多種炎性疾病標(biāo)記 物的對(duì)照表達(dá)水平，其中，所述一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的所述對(duì)照表達(dá)水平是預(yù)定 參考水平或者所述受試者中的所述一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的治療前水平，其中，如 果在所述治療過(guò)程中或者所述治療之后獲自所述受試者的所述一種或者多種生物樣品中 的所述一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的表達(dá)水平類(lèi)似于或者低于所述對(duì)照表達(dá)水平，那么 認(rèn)為所述治療是有效的，其中，所述一種或者多種炎癥標(biāo)記物包括選自由CXCL9、CXCL10、 CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5組成的組中的一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物。
[0007] 本申請(qǐng)的另一個(gè)方面涉及一種用于檢測(cè)受試者中的炎性疾病的試劑盒。所述試劑 盒包括用于測(cè)定選自由CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL13、CXCR3和CXCR5組成的組中的一種 或者多種炎性疾病標(biāo)記物的表達(dá)的試劑；用于測(cè)定生物樣品中的選自由致輕素、腫瘤壞死 因子 a (TNFa)、干擾素 -γ (IF-γ)、白介素 -Ia (IL-Ια )、IL_10、IL-6、IL-12、IL_17 和 IL-23組成的組中的一種或者多種炎性疾病標(biāo)記物的表達(dá)的試劑；和關(guān)于如何使用所述試 劑的說(shuō)明書(shū)。
【附圖說(shuō)明】
[0008] 圖1顯示了 IFN-γ，IP-10，MIG，I-TAC和CXCR3mRNA在小鼠結(jié)腸炎過(guò)程中的表達(dá)。
[0009] 圖2顯示了通過(guò)過(guò)繼性轉(zhuǎn)移而接受⑶45RBHI或CXCR3 +⑶4+T細(xì)胞的TCR β X δ +小 鼠中的IBD的組織學(xué)分析。
[0010] 圖3顯示了 IL-10+小鼠的結(jié)腸炎的發(fā)展和SAA水平。大于200 μ g/ml的SAA濃 度與第〇周無(wú)癥狀性結(jié)腸炎的發(fā)作相關(guān)聯(lián)。
[0011] 圖4顯示了 IL-10+小鼠的體重變化。
[0012] 圖5顯示了血清IL-6和SAA水平與小鼠結(jié)腸炎的關(guān)聯(lián)。
[0013] 圖6顯示了 IL-10+小鼠中的總的糞便和血清Ab (抗體）水平。
[0014] 圖 7 顯示 了患有 IBD 的 IL-10+小鼠中的血清 IL-12, IFN-γ，IL-2, TNF-a， IL-I a 和 IL-I β 水平。
[0015] 圖8顯示了由IL-10+小鼠所呈現(xiàn)的結(jié)腸炎的組織學(xué)特性。
[0016] 圖9顯示了抗-CXCLlO抗體消除了嚴(yán)重結(jié)腸炎。
[0017] 圖10顯示了粘膜組織在嚴(yán)重結(jié)腸炎過(guò)程中的Thl細(xì)胞因子、CXCLlO和CXCR3mRNA 表達(dá)。
[0018] 圖11顯示了嚴(yán)重結(jié)腸炎進(jìn)展過(guò)程中血清中的Thl和炎性細(xì)胞因子水平。
[0019] 圖12顯示了抗-CXCLlO抗體對(duì)結(jié)腸炎病理學(xué)的影響。
[0020] 圖13顯示了 CD患者的結(jié)腸中的CXCL9、CXCL10、CXCLll和TNF- a的組織學(xué)和免 疫熒光定位。
[0021] 圖14顯示了自發(fā)性結(jié)腸炎過(guò)程中IL-10+小鼠中的副結(jié)核桿菌鳥(niǎo)結(jié)核分枝桿菌 亞種（M.avium subsp.paratuberculosis(MAP))特異性血清 Ab 反應(yīng)。
[0022] 圖15顯示了使用副結(jié)核桿菌鳥(niǎo)結(jié)核分枝桿菌亞種（MAP)挑戰(zhàn)的IL-10+小鼠中 的組織學(xué)特性。
[0023] 圖16顯示了 MAP挑戰(zhàn)之后IL-10+小鼠的體重變化
[0024] 圖17顯示了 MAP挑戰(zhàn)之后IL-10+小鼠的血清細(xì)胞因子水平。
[0025] 圖18顯示了來(lái)自IL-10+小鼠的CD4+T細(xì)胞的抗-肽#25Ag(來(lái)自MPT59)誘導(dǎo)的 增殖和IL-2生成。
[0026] 圖19顯示了 IBD患者中的血清CXCR3配體和分枝桿菌特異性Ab反應(yīng)。
[0027] 圖20顯示了分枝桿菌挑戰(zhàn)后IL-10+小鼠和IBD患者中的SAA水平變化
[0028] 圖21顯示了使用分枝桿菌挑戰(zhàn)的IL-IO+小鼠的腸組織學(xué)特性。
[0029] 圖22顯示了 IC患者中的血清CXCL9、CXCLlO和CXCLll濃度。
[0030] 圖23顯示了 CYP誘導(dǎo)膀胱炎之后的組織學(xué)變化。
[0031] 圖 24 顯示了 CYP 處理的小鼠中的 CXCR3、CXCL9、CXCLlO 和 CXCLllmRNA 表達(dá)。
[0032] 圖25顯示了活動(dòng)性⑶過(guò)程中的上調(diào)的CXCLlO表達(dá)。
[0033] 圖26顯示了活動(dòng)性⑶過(guò)程中CXCLll和CXCL9的上調(diào)表達(dá)。
[0034] 圖27顯示了⑶患者中的血清淀粉樣蛋白A (SAA)和IL-6的上調(diào)的血清濃度。
[0035] 圖28顯不了⑶過(guò)程中血清IL-12p40和IFN-γ水平相關(guān)。
[0036] 圖29顯示了活動(dòng)性⑶過(guò)程中炎性細(xì)胞因子水平。
[0037] 圖30顯示了正常和具有高血清CXCR3配體濃度的⑶患者中的結(jié)腸炎的組織學(xué)特 性。
[0038] 圖31顯示了通過(guò)組織學(xué)檢查得到的正常和⑶患者的結(jié)腸中的CXCR3配體和 TNFa表達(dá)。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 提供如下詳細(xì)說(shuō)明以使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)嵤┖褪褂帽旧暾?qǐng)。為了解釋目的， 給出具體術(shù)語(yǔ)以充分地理解本申請(qǐng)。但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)清楚的是，實(shí)施本申請(qǐng)不需 要這些具體細(xì)節(jié)。具體申請(qǐng)的