專利名稱：可用于治療贅生性疾病、炎性和免疫系統(tǒng)病癥的2,4-二(苯氨基)嘧啶的制作方法
可用于治療贅生性疾病、炎性和免疫系統(tǒng)病癥的2,4- 二
(苯氨基)嘧啶本申請是申請日為2004年3月12日、發(fā)明名稱為“可用于治療贅生性疾病、炎性 和免疫系統(tǒng)病癥的2，4-二(苯氨基)嘧啶”的中國專利申請200480013041. 9的分案申請。本發(fā)明涉及新的嘧啶衍生物、它們的制備方法、它們作為藥物的用途以及包含它 們的藥物組合物。更具體而言，本發(fā)明第一方面提供了式I化合物及其鹽 其中每個R°、R1、R2和R3獨立地為氫、CrC8烷基、C2_C8鏈烯基、C2_C8炔基、C3_C8環(huán)烷 基、C3_C8環(huán)焼基C「C8焼基、C5_C10方基C「C8焼基、輕基C「C8焼基、C「C8焼氧基C「C8焼基、 氨基Ci-q烷基、鹵代Ci-q烷基、未取代或取代的C5-C1(1芳基、未取代或取代的包含1、2或 3個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基、羥基、CfC8烷氧基、羥基CfC8烷氧基、CfC8 烷氧基Ci-q烷氧基、鹵代Ci-q烷氧基、未取代或取代的C5-C1(1芳基Ci-q烷氧基、未取代或 取代的雜環(huán)基氧基或未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、Ci-q烷硫 基、crc8烷基亞磺酰基、crc8烷基磺?；5-c10芳基磺?；?、鹵素、羧基、crc8烷氧基羰 基、未取代或取代的氨甲?；⑽慈〈蛉〈陌被酋；?、氰基或硝基；或R°和R1、! 1和R2和/或R2和R3和它們所連接的碳原子一起形成包含0、1、2或 3個選自N、0和S的雜原子的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)；R4是氫或CrC8烷基；每個R5和R6獨立地為氫、CfC8烷基、Ci-Q烷氧基CrC8烷基、鹵代CrC8烷基、CrC8 烷氧基、商素、羧基、crc8烷氧基羰基、未取代或取代的氨甲?；?、氰基或硝基；每個R7、R8、R9和R1Q獨立地為CrC8烷基、c2-c8鏈烯基、c2-c8炔基、c3-c8環(huán)烷基、 C3-C8環(huán)烷基CfC8烷基、c5- "C10方基C「C8焼基、輕基C「C8焼基、C「C8焼執(zhí)基C「C8焼基、孰 基Ci-C；烷基、鹵代Ci-q烷基、未取代或取代的C5-C1(1芳基、未取代或取代的包含1、2或3 個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基、羥基、CrC8烷氧基、羥基Ci-q烷氧基、Ci-q 烷氧基Ci-q烷氧基、鹵代Ci-q烷氧基、未取代或取代的C5-C1(1芳基Ci-q烷氧基、未取代或 取代的雜環(huán)基氧基或未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、Ci-q烷硫 基、crc8烷基亞磺酰基、crc8烷基磺?；?、c5-c10芳基磺?；Ⅺu素、羧基、crc8烷氧基羰 基、未取代或取代的氨甲?；?、未取代或取代的氨磺?；?、氰基或硝基；其中R7、R8和R9彼此 獨立地也可以為氫；或R7和R8、R8和R9和/或R9和R1Q和它們所連接的碳原子一起形成包含0、1、2或3個選自N、0和S的雜原子的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)；A為C或N，最優(yōu)選為C。除非另外指出，上下文中所用的通用術語在本公開的范圍內優(yōu)選具有以下含義。當復數(shù)用于化合物、鹽等時，其也意指單個化合物、鹽等。任何不對稱碳原子可以以(R)_、(S)_或(R，S)-構型存在、優(yōu)選(R)-或(S)_構 型。由此，化合物可以以異構體混合物或純異構體存在，優(yōu)選為對映體純的非對映體。本發(fā)明還涉及式I化合物的可能的互變異構體。Ci-q烷基表示具有1至8個、特別是1至4個碳原子的烷基，所述基團為直鏈或具 有一個或多個分支的支鏈；優(yōu)選地，crc8烷基為丁基如正-丁基、仲-丁基、異丁基、叔-丁 基、丙基如正-丙基或異丙基、乙基或甲基；特別為甲基、丙基或叔丁基。C2-C8鏈烯基表示具有2至8個、特別是2至5個碳原子的鏈烯基，所述基團為直鏈 或具有一個或多個分支的支鏈；優(yōu)選地，c2-c8鏈烯基為戊烯基如3-甲基-2- 丁烯-2-基、 丁烯基如1-或2- 丁烯基或2- 丁烯-2-基、丙烯基如1-丙烯基或烯丙基，或乙烯基。C2-C8炔基表示具有2至8個、特別是2至5個碳原子的炔基，所述基團為直鏈或 支鏈；優(yōu)選地，c2-c8炔基為丙炔基如1-丙炔基或炔丙基，或乙炔基。C3-C8環(huán)烷基表示具有3至8個碳原子的環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己 基、環(huán)庚基或環(huán)辛基，優(yōu)選環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基。Ci-q烷氧基特別是甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔丁氧基。羥基Ci-q烷基特別是羥基甲基、2-羥基乙基或2-羥基-2-丙基。羥基CfC；烷氧基特別是2-羥基乙氧基或3-羥基丙氧基。CrC8烷氧基CrC8烷氧基特別是2-甲氧基乙氧基。CrC8烷氧基CrC8烷基特別是甲氧基甲基、2-甲氧基乙基或2-乙氧基乙基。鹵素優(yōu)選為氟、氯、溴或碘，特別是氟、氯或溴。鹵代Q-Q烷基優(yōu)選為氯代Q-Q烷基或氟代Q-Q烷基、特別是三氟甲基或五氟乙基。鹵代Ci-q烷氧基優(yōu)選為氯代Ci-q烷氧基或氟代Ci-q烷氧基，特別為三氟甲氧基。CrC8烷氧基羰基特別是叔丁氧羰基、異_丙氧基羰基、甲氧基羰基或乙氧基羰基。未取代或取代的氨甲?；鶠楸灰粋€或兩個取代基取代的氨甲?；?，所述取代基選 自S、c「c8燒基、c2-c8鏈烯基、c2-c8炔基、c3-c8環(huán)燒基、c3-c8環(huán)燒基c「c8燒基、c5-c10芳基 CrC8烷基、羥基CfC8烷基、CfC8烷氧基CfC8烷基、鹵代CfC8烷基、未取代或取代的c5-c1Q 芳基或氨基Ci-q烷基，或其中取代基和氨甲酰基的氮原子代表還含有0、1或2個選自N、0 和s的雜原子的5或6元雜環(huán)的氨甲酰基；且優(yōu)選為氨甲酰基、甲基氨甲?；?、二甲基氨甲 ?；⒈奔柞；?、羥基乙基-甲基-氨甲?；⒍?羥基乙基)氨甲?；?、二甲基氨基乙 基氨甲酰基或吡咯烷子基羰基、哌啶子基羰基、N-甲基哌嗪子基羰基或嗎啉代羰基，特別是 氨甲酰基或二甲基氨甲?；?。未取代或取代的氨磺酰基為被一或兩個取代基取代的氨磺?；鋈〈x自 氧、C「C8燒基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3_C8環(huán)燒基、C3_C8環(huán)燒基C「C8燒基、C5-C10芳基 CrC8烷基、羥基CfC8烷基、CfC8烷氧基CfC8烷基、鹵代CfC8烷基、未取代或取代的c5-c1Q芳基或氨基Ci-q烷基，或其中取代基和氨磺?；牡哟磉€含有0、1或2個選自N、0 和S的雜原子的5或6元雜環(huán)的氨磺?；?；且優(yōu)選氨磺?；⒓谆被酋；?、丙基氨磺酰基、 環(huán)丙基甲基-氨磺酰基、2，2，2_三氟乙基氨磺?；?、二甲基氨基乙基氨磺酰基、二甲基氨磺 酰基、羥基乙基-甲基-氨磺?；?、二(羥基乙基)氨磺?；蜻量┩樽踊酋；?、哌啶子 基磺酰基、N-甲基哌嗪子基磺?；騿徇酋；貏e是氨磺?；蚣谆被酋；?。未取代或取代的氨基為被一或兩個取代基取代的氨基，所述取代基選自氫、CrC8 烷基、c2-c8鏈烯基、c2-c8炔基、c3-c8環(huán)烷基、c3-c8環(huán)烷基Ci-Q烷基、c5- "C10方基。1_。8焼基、 羥基Ci-Q烷基、Ci-Q烷氧基Ci-Q烷基、鹵代Ci-Q烷基、未取代或取代的c5-c1(1芳基、氨基 CrC8烷基、酰基例如甲?；?、crc8烷基羰基、c5-c10芳基羰基、crc8烷基磺酰基或c5-c1Q芳 基磺?；覂?yōu)選為氨基、甲基氨基、二甲基氨基、丙基氨基、芐基氨基、羥基乙基-甲基-氨 基、二(羥基乙基)氨基、二甲基氨基乙基氨基、乙酰基氨基、乙酰基-甲基-氨基、苯甲酰 基氨基、甲基磺酰基氨基或苯基磺?；被?，特別是氨基或二甲基氨基。氨基Ci-Q烷基特別為氨基乙基、甲基氨基乙基、二甲基氨基乙基或二甲基氨基丙 基。未取代或取代的(5_(1(1芳基為例如苯基、茚基、二氫化茚基、萘基或1，2，3，4_四氫 萘基，任選被Ci-Q烷基、crc8烷氧基Ci-Q烷基、鹵代Ci-Q烷基、羥基、crc8烷氧基、亞甲 二氧基、氨基、取代的氨基、商素、羧基、crc8烷氧基羰基、氨甲?；被酋；⑶杌蛳趸?取代；優(yōu)選苯基、甲苯基、三氟甲基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、亞甲二氧基苯基、氯苯 基或溴苯基，其中取代基可以位于鄰位、間位或對位，優(yōu)選間位或對位。C5-C10芳氧基特別為苯氧基或甲氧基苯氧基，例如對_甲氧基苯氧基。C5-C10芳基Ci-q烷基特別為芐基或2-苯基乙基。C5-C10芳基Q-Q烷氧基特別為芐氧基或2-苯基乙氧基。未取代或取代的包含1、2或3個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基可以 是不飽和的、部分不飽和或飽和的，且進一步與苯并基團或5或6元雜環(huán)基稠合，且可通過 雜原子或碳原子連接，例如為吡咯基、吲哚基、吡咯烷基、咪唑基、苯并咪唑基、吡唑基、三唑 基、苯并三唑基、四唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、1，2，3，4-四氫喹啉基、哌啶基、嘧啶基、 吡嗪基、哌嗪基、嘌呤基、四嗪基、，惡’唑基、異，惡唑基、嗎啉基、噻唑基、苯并噻唑基、p惡二 唑基和苯并巧惡二唑基。所涉及的取代基有烷基、羥基烷基、烷氧基 烷基、CrC8烷氧基Ci-q烷氧基、鹵代Ci-q烷基、羥基、氨基、取代的氨基、CrC8烷氧基、鹵 素、羧基、CfC8烷基羰基、CfC8烷氧基羰基、氨甲?；fC8烷基氨甲?；?、氰基、氧代或本 段中所定義的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基。5或6元雜環(huán)優(yōu)選包含1或2個選自N、0 和S的雜原子，且特別為吲哚基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑基、N-甲基咪唑基、苯并咪唑 基、S，S- 二氧代異噻唑烷基、哌啶基、4-乙?；被哙せ?、4-甲基氨甲?；哙せ?、4-哌 啶子基哌啶基、4-氰基哌啶基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、N-(2-羥基乙基)哌嗪基、嗎啉基、 1-氮雜-2，2- 二氧代-2-硫雜環(huán)己基或環(huán)丁砜基。在未取代或取代的雜環(huán)基氧基中，雜環(huán)基具有如上所定義的含義，且特別為N-甲 基-4-哌啶基氧基。在未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基中，雜環(huán)基具有如上所定義的 含義，且特別為2-吡咯烷子基乙氧基、2-嗎啉代乙氧基、3-嗎啉代丙氧基、1-甲基-哌 啶-3-基甲氧基、3-(N-甲基哌嗪子基)丙氧基或2-(1_咪唑基)乙氧基。
在包含0、1、2或3個選自N、0和S的雜原子且由兩個相鄰的取代基與苯環(huán)一起形 成的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)中，所述環(huán)可進一步被例如Ci-q烷基、Ci-q烷氧基、鹵代Ci-q烷 基、羥基、氨基、取代的氨基、CrC8烷氧基、商素、羧基、CrC8烷氧基羰基、氨甲酰基、氰基或 氧代取代。形成所述環(huán)的兩個相鄰的取代基優(yōu)選為亞丙基、亞丁基、1"氮雜-2-亞丙烯基 (propylidene)、3_氮雜-1-亞丙烯基、1，2_ 二氮雜_2_亞丙烯基、2，3- 二氮雜-1-亞丙烯 基、1-氧雜亞丙基、1-氧雜亞丙烯基、亞甲二氧基、二氟亞甲二氧基、2-氮雜-1-氧代亞丙 基、2-氮雜-2-甲基-1-氧代亞丙基、1-氮雜-2-氧代亞丙基、2-氮雜-1，1- 二氧代-1-硫 雜亞丙基或形成6元環(huán)的相應的亞丁基衍生物。鹽特別為式I化合物的可藥用鹽。所述鹽例如以酸加成鹽形成，優(yōu)選用無機或有機酸自具有堿性氮原子的式I化合 物形成，特別是可藥用鹽。適合的無機酸例如有商酸，如鹽酸、硫酸或磷酸。適合的有機酸有 例如羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、羥基乙酸、乳酸、 富馬酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、氨基酸如谷氨 酸或天冬氨酸、馬來酸、羥馬來酸、甲基馬來酸、環(huán)己烷羧酸、金剛烷羧酸、苯甲酸、水楊酸、 4-氨基水楊酸、鄰苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲磺酸或乙磺酸、2-羥基乙磺酸、乙 烷-1，2- 二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘二磺酸、2_、3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙 基硫酸、十二烷基硫酸、N-環(huán)己基氨磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨磺酸，或其他 有機質子酸如抗壞血酸。為了分離或純化目的，也可以使用不可藥用鹽，例如苦味酸鹽或高氯酸鹽。用于治 療時，僅使用可藥用鹽或游離化合物(適用時為藥物制劑形式)，因此優(yōu)選可藥用鹽或游離 化合物。鑒于游離形式或鹽形式、包括那些可用作中間體的鹽例如用于新化合物的純化和 鑒定的鹽的新化合物之間的密切關系，上下文中凡提及游離化合物也應理解為還酌情涉及 相應的鹽。式I化合物具有有價值的藥理學特性，如上下文中所述。在式I中，優(yōu)選以下獨立、聯(lián)合或以任何組合或亞組合形式的定義。在以下每個定 義中，A為C或N，優(yōu)選C:(a)每個R°或R2獨立地為氫、Q-Q烷基例如甲基、乙基或異丙基、羥基Q-Q烷基 例如羥基乙基或羥基丁基、鹵代CfC8烷基例如三氟甲基、未取代或取代的c5-c1(l芳基例如 苯基或甲氧基苯基、未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)， 例如嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或N-甲基哌嗪子基、(^-(8烷氧基例如甲氧基、乙氧基或異 丙氧基、鹵代CfC8烷氧基例如三氟甲氧基、C5-C1(l芳氧基例如苯氧基、未取代或取代的雜環(huán) 基氧基例如1-甲基-4-哌啶基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基例如2-(1_咪唑 基)乙氧基、3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、未取代或取代的氨基例如甲基氨基、二甲 基氨基或乙?；被?^-(8烷基磺?；缂谆酋；?、鹵素例如氟或氯、未取代或取代的 氨甲酰基例如環(huán)己基氨甲?；⑦哙ぷ踊驶?、哌嗪子基羰基、N-甲基哌嗪子基羰基或嗎啉 代羰基、未取代或取代的氨磺酰基，例如氨磺?；?、甲基氨磺?；蚨谆被酋；?；優(yōu)選 氫、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或1-甲基-4-哌啶氧基，尤其是氫；(b) R1為氫、CfC8烷基例如甲基、乙基或異丙基、羥基Q-Q烷基例如羥基乙基或羥基丁基、鹵代烷基例如三氟甲基、未取代或取代的C5_C1Q芳基例如苯基或甲氧基苯基、 未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基例如嗎啉代、哌啶 子基、哌嗪子基或N-甲基哌嗪子基、(^-(8烷氧基例如甲氧基、乙氧基或異丙氧基、鹵代 烷氧基例如三氟甲氧基、C5-C1(l芳氧基例如苯氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基例如1-甲 基-4-哌啶基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基例如2- (1-咪唑基)乙氧基、3-嗎啉 代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、未取代或取代的氨基例如甲基氨基、二甲基氨基或乙酰基氨 基、q-Q烷基磺酰基例如甲基磺?；?、鹵素例如氟或氯、未取代或取代的氨甲?；绛h(huán)己 基氨甲?；⑦哙ぷ踊驶?、哌嗪子基羰基、N-甲基哌嗪子基羰基或嗎啉代羰基、未取代或 取代的氨磺酰基例如氨磺?；?、甲基氨磺?；蚨谆被酋；粌?yōu)選氫、哌嗪子基、N-甲 基哌嗪子基、嗎啉代、1-甲基-4-哌啶基氧基、3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、尤其是 氫；(c)R3為氫、C「C8烷基例如甲基或乙基、羥基C「C8烷基例如羥基乙基或羥基丁基、 鹵代烷基例如三氟甲基、未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5 或6元雜環(huán)基例如2-吡咯烷酮基或S, S- 二氧代異噻唑烷基、CrC8烷氧基例如甲氧基、取 代的氨基例如乙?；被?、乙酰基_甲基_氨基、苯甲酰氨基、甲基磺?；被虮交酋?基_氨基、CrC8烷基磺?；缂谆酋；?、C5-C10芳基磺酰基例如苯基磺?；?、鹵素例如 氟或氯、羧基、取代或未取代的氨甲?；绨奔柞；?、甲基氨甲酰基或二甲基氨甲?；?、 未取代或取代的氨磺?；绨被酋；?、甲基氨磺酰基、丙基氨磺?；?、異丙基氨磺酰基、 異丁基氨磺?；h(huán)丙基甲基-氨磺?；?、2，2，2-三氟乙基氨磺?；?、二甲基氨磺?；騿?啉代磺酰基；優(yōu)選氨磺?；?、甲基氨磺?；虮被酋；?d)每對相鄰的取代基 R° 和 R1 或 R1 和 R2 或 R2 和 R3 為-CH2-NH-C0-、-CH2-CH2-NH_C
o-、-ch2-co-nh-、-ch2-ch2-co-nh-、-ch2-nh-so2-、-ch2-ch2-nh-so2-、-ch2-so2-nh-、-ch2-ch2-so2
-NH-、-CH2-CH2-S02-、-CH2-CH2-CH2-S02-、-0-CH2-0-或-0-CF2-0-，以及其中 NH 中的 H被 CfQ 烷基替代的所述取代基對；優(yōu)選所述相鄰取代基對R°和R1或R1和R2為-0-CH2-0-，且所述 相鄰取代基對 R2 和 R3 為-CH2-NH-C0-或-CH2-NH-S02-。(e)R4為氫或CfQg基，例如甲基；優(yōu)選氫；(f) R5為氫；CrC8烷基例如甲基或乙基、鹵素例如氯或溴、鹵代CrC8烷基例如三氟 甲基、氰基或硝基；優(yōu)選氫、甲基、乙基、氯、溴、三氟甲基或硝基；尤其是氯或溴；(g)R6 為氫；(h)每個R7和R9獨立地為氫、Q-C；烷基例如甲基、乙基或異丙基、羥基Q-C；烷基 例如羥基乙基或羥基丁基、鹵代CfC8烷基例如三氟甲基、未取代或取代的c5-c1(l芳基例如 苯基或甲氧基苯基、未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)， 例如嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或N-甲基哌嗪子基、(^-(8烷氧基例如甲氧基、乙氧基或異 丙氧基、鹵代CfC8烷氧基例如三氟甲氧基、C5-C1(l芳氧基例如苯氧基、未取代或取代的雜環(huán) 基氧基例如1-甲基-4-哌啶基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基例如2-(1_咪唑 基)乙氧基、3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、未取代或取代的氨基例如甲基氨基、二 甲基氨基或乙酰基氨基、Ci-q烷基磺?；缂谆酋；?、鹵素例如氟或氯、未取代或取代 的氨甲?；绛h(huán)己基氨甲酰基、哌啶子基羰基、哌嗪子基羰基、N-甲基哌嗪子基羰基或嗎 啉代羰基、未取代或取代的氨磺?；绨被酋；?、甲基氨磺?；蚨谆被酋；?；優(yōu)選氫、甲基、異丙基、三氟甲基、苯基、甲氧基苯基、哌啶子基、哌嗪子基、N_甲基哌嗪子基、嗎啉 代、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、苯氧基、3-嗎啉代丙氧基、2-嗎啉代乙氧基、2-(1_咪唑基) 乙氧基、二甲基氨基、氟、嗎啉代羰基、哌啶子基羰基、哌嗪子基羰基或環(huán)己基氨甲酰基；(i) R8為氫、Ci-q烷基例如甲基、乙基或異丙基、羥基Ci-q烷基例如羥基乙基或 羥基丁基、鹵代CfC8烷基例如三氟甲基、c5-c1Q芳基例如苯基或甲氧基苯基、未取代或取代 的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基例如嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子 基或N-甲基哌嗪子基、(；-(；烷氧基例如甲氧基、乙氧基或異丙氧基、鹵代烷氧基例如 三氟甲氧基、C5-C10芳氧基例如苯氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基例如1-甲基-4-哌啶 基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基例如2-(1_咪唑基)乙氧基、3-嗎啉代丙氧基 或2-嗎啉代乙氧基、未取代或取代的氨基例如甲基氨基或二甲基氨基、Q-Q烷基磺?；?如甲基磺?；?、鹵素例如氟或氯、未取代或取代的氨甲酰基例如環(huán)己基氨甲?；⑦哙ぷ踊?羰基、哌嗪子基羰基、N-甲基哌嗪子基羰基或嗎啉代羰基、未取代或取代的氨磺酰基例如氨 磺?；?、甲基氨磺?；蚨谆被酋；?、氰基或硝基；優(yōu)選氫、甲基、哌啶子基、哌嗪子基、 N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、苯氧基、1-甲基-4-哌啶基氧基、 3-嗎啉代丙氧基、2-嗎啉代乙氧基、3-(N-甲基哌嗪子基)_丙氧基、甲基氨基、氟、氯、氨磺 ?；蛳趸?j) R10為Ci-q烷基例如甲基、乙基或丁基、羥基Ci-q烷基例如羥基乙基或羥基丁 基、鹵代烷基例如三氟甲基、crc8烷氧基例如甲氧基或乙氧基、未取代或取代的雜環(huán) 基Ci-Q烷氧基例如2-(1_咪唑基)乙氧基、未取代或取代的氨基例如甲基氨基或二甲基 氨基、鹵素例如氟或氯；羧基、氨甲?；蛭慈〈蛉〈陌被酋；绨被酋；⒓谆?磺?；蚨谆被酋；?；優(yōu)選甲基、丁基、甲氧基、乙氧基、2-(1_咪唑基)乙氧基、甲基氨 基、二甲基氨基或氟；且(k)每對相鄰的取代基R7和R8或R8和R9或R9和R1Q為_NH_CH = CH_、_CH = CH-NH-、-NH-N = CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2_CH2-、-CH2-CH2-CH2_CH2-、-CH2_CH2-0-、_CH = CH-0-、-0-CH2-0-或-0-CF2-0-；優(yōu)選所述相鄰取代基對R7和R8或R8和R9為-0_CH2-0-或 所述相鄰取代基對 R9 和 R1。為-NH-CH = CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2_CH2-CH 2-或-o-cf2-o-。更優(yōu)選以下獨立、聯(lián)合或任何組合或亞組合形式的含義(a’)每個R°或R2獨立地為氫、CrC8烷基例如甲基、乙基或異丙基、鹵代CrC8烷 基例如三氟甲基、未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基 例如嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或N-甲基哌嗪子基、(^-(8烷氧基例如甲氧基、乙氧基或異 丙氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基例如1-甲基-4-哌啶基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基 CrC8烷氧基例如2-(1_咪唑基)乙氧基、3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、未取代或 取代的氨基例如甲基氨基、二甲基氨基或乙?；被?、鹵素例如氟或氯；優(yōu)選氫、哌嗪子基、 N-甲基哌嗪子基或1-甲基-4-哌啶基氧基，尤其是氫；(b，)Ri為氫、CrC8烷基例如甲基、乙基或異丙基、鹵代CrC8烷基例如三氟甲基、 未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基例如嗎啉代、哌啶 子基、哌嗪子基或N-甲基哌嗪子基、(^-(8烷氧基例如甲氧基、乙氧基或異丙氧基、未取代或 取代的雜環(huán)基氧基例如1-甲基-4-哌啶基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基例如2-(1_咪唑基)乙氧基、3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、未取代或取代的氨基例如甲 基氨基、二甲基氨基或乙酰基氨基、鹵素例如氟或氯；優(yōu)選氫、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、 嗎啉代、1-甲基-4-哌啶基氧基、3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基，尤其是氫；(c’ )R3為氫、烷基例如甲基或乙基、鹵代烷基例如三氟甲基、未取代或 取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基例如2-吡咯烷酮基或S, S-二氧代異噻唑烷基、CrC8烷氧基例如甲氧基、取代的氨基例如乙?；被?、乙酰基-甲 基-氨基、苯甲?；被⒓谆酋；被虮交酋；被?、(^-(8烷基磺酰基例如甲基磺 ?；5-C10芳基磺?；绫交酋；?、鹵素例如氟或氯、羧基、取代或未取代的氨甲酰基 例如氨甲?；?、甲基氨甲?；蚨谆奔柞；?、未取代或取代的氨磺酰基例如氨磺?；?、 甲基氨磺酰基、丙基氨磺?；惐被酋；?、異丁基氨磺?；?、環(huán)丙基甲基_氨磺?；?、 2,2,2-三氟乙基氨磺?；?、二甲基氨磺?；騿徇酋；?；優(yōu)選氨磺?；?、甲基氨磺酰 基或丙基氨磺?；?；(d，)每對相鄰的取代基 R° 和 R1 或 R1 和 R2 或 R2 和 R3 為-CH2-NH-C0-、-CH2-NH-S0
2-、-CH2-CH2-S02-、-0-CH2-0-或-0-CF2-0-以及其中NH中的H被CrC8烷基替代的所述取代 基對；優(yōu)選地，相鄰的取代基對R°和R1或R1和R2為-0-CH2-0-，且相鄰的取代基對R2和R3 為-ch2-nh-co-或-ch2-nh-so2-；(e，)R4 為氫；(f’)R5為氫、鹵素例如氯或溴、鹵代(「(8烷基例如三氟甲基，或硝基；優(yōu)選氫、氯、 溴、三氟甲基或硝基；尤其是氯或溴；(g，)R6 為氫；(h’)每個R7和R9獨立地為氫、CrC8烷基例如甲基、乙基或異丙基、鹵代CrC8烷 基例如三氟甲基、未取代或取代的c5-c1(l芳基例如苯基或甲氧基苯基、未取代或取代的含有 1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)，例如嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或N-甲 基哌嗪子基、Ci-q烷氧基例如甲氧基、乙氧基或異丙氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基例如 1-甲基-4-哌啶基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基例如2-(1_咪唑基)乙氧基、
3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、未取代或取代的氨基例如甲基氨基、二甲基氨基或 乙酰基氨基、鹵素例如氟或氯、未取代或取代的氨甲酰基例如環(huán)己基氨甲?；?、哌啶子基羰 基、哌嗪子基羰基、N-甲基哌嗪子基羰基或嗎啉代羰基、未取代或取代的氨磺?；绨被??；⒓谆被酋；蚨谆被酋；粌?yōu)選氫、甲基、異丙基、三氟甲基、苯基、鄰_、間-或 對_甲氧基苯基、哌啶子基、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、甲氧基、乙氧基、異丙氧 基、苯氧基、3-嗎啉代丙氧基、2-嗎啉代乙氧基、2-(1_咪唑基)乙氧基、二甲基氨基、氟、嗎 啉代羰基、哌啶子基羰基、哌嗪子基羰基或環(huán)己基氨甲?；?；(I，)R8為氫、CrC8烷基例如甲基、乙基或異丙基、鹵代CrC8烷基例如三氟甲基、 C5-C10芳基例如苯基或甲氧基苯基、未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子 的5或6元雜環(huán)基例如嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或N-甲基哌嗪子基、CrC8烷氧基例如 甲氧基、乙氧基或異丙氧基、鹵代CfC8烷氧基例如三氟甲氧基、C5-C10芳氧基例如苯氧基、 未取代或取代的雜環(huán)基氧基例如1-甲基-4-哌啶基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷 氧基例如2-(1_咪唑基)乙氧基、3-嗎啉代丙氧基或2-嗎啉代乙氧基、未取代或取代的氨 基例如甲基氨基或二甲基氨基、鹵素例如氟或氯、未取代或取代的氨磺?；绨被酋；?、甲基氨磺?；蚨谆被酋；?，或硝基；優(yōu)選氫、甲基、哌啶子基、哌嗪子基、N-甲基哌嗪 子基、嗎啉代、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、苯氧基、1-甲基-4-哌啶基氧基、3-嗎啉代丙氧 基、2-嗎啉代乙氧基、3-(N_甲基哌嗪子基)_丙氧基、甲基氨基、氟、氯、氨磺?；蛳趸?j，)R1Q為烷基例如甲基、乙基或丁基、鹵代CfQ烷基例如三氟甲基、CrC8 烷氧基例如甲氧基或乙氧基、未取代或取代的雜環(huán)基烷氧基例如2- (1-咪唑基)乙氧 基、未取代或取代的氨基例如甲基氨基或二甲基氨基、鹵素例如氟或氯；優(yōu)選甲基、丁基、甲 氧基、乙氧基、2-(1_咪唑基)乙氧基、甲基氨基、二甲基氨基或氟；且(k，)每對相鄰的取代基R7和R8或R8和R9或R9和R1Q為-NH-CH = CH-、-CH = CH-NH-、-NH-N = CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2_CH2-CH2-、-0-CH2-0-或-0_CF2-0-；優(yōu)選相鄰的取代基對R7和R8或R8和R9為-0-CH2-0-或相鄰的取代基對R9和R1Q為-NH-CH =CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2_CH2-或-0_CF2-0-。最優(yōu)選的式I化合物是其中取代基具有實施例中所給出含義的那些化合物。本發(fā)明還提供了制備式I化合物的方法，包括使式II化合物 其中I^R1、! 2、! 3、! 4、! 5和R6如上所定義且Y為離去基團、優(yōu)選鹵素如溴、碘，或尤 其是氯，與式III化合物反應， 其中R7、R8、R9和R1Q如上所定義；并且如果需要將其中取代基具有如上所定義含義的式I化合物轉化為另一種所 定義的式I化合物；并且以游離或鹽形式回收所得式I化合物，并且當需要時將所得游離形式的式I 化合物轉化為所需的鹽，或將所得的鹽轉化為游離形式。該反應可以按照本身已知的方式進行，反應條件特別取決于離去基團Y的反應性 和式III苯胺中氨基的反應性，通常在適合的溶劑或稀釋劑或其混合物存在下且必要時在 酸或堿存在下，冷卻或優(yōu)選加熱，例如在約_30°C至約+150°C、特別是約0°C至+100°C、優(yōu)選 室溫(約+20°C )至+80°C的溫度范圍內，在開放或封閉的反應容器中和/或在惰性氣體例如氮氣氛下。如果在式II或III化合物中，一個或多個其他官能團例如羧基、羥基或氨基被保 護或需要保護，因為它們不應參加反應，這些是肽化合物、頭孢菌素和青霉素以及核酸衍生 物和糖的合成中通常使用的基團。保護基可已經(jīng)存在于前體中并應該保護所涉及的官能團以免于不需要的次級反 應，如取代反應或溶劑分解。保護基的特征是它們自身易于除去，即無不可取的次級反應， 通常通過溶劑分解、還原、光解或還通過酶活性除去，例如在類似于生理條件的條件下，并 且它們不會出現(xiàn)在終產(chǎn)物中。專業(yè)人員了解或能夠容易地確定哪些保護基適合于以上所提 及的反應。具有成鹽基團的式I化合物的鹽可以以本身已知的方式制備。由此式I化合物的 酸加成鹽可以通過用酸或用適合的陰離子交換劑處理而獲得。通常可將鹽轉化為游離形式的化合物，例如通過用適合的堿性試劑、例如用堿金 屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氫鹽或堿金屬氫氧化物、通常為碳酸鉀或氫氧化鈉處理。立體異構混合物例如非對映體混合物可以以本身已知的方式、借助適合的分離方 法分離為它們相應的異構體。非對映體混合物例如可以借助分步結晶、色譜、溶劑分配和類 似方法分離為它們的單個非對映體。該分離可在起始化合物階段或對式I化合物自身進 行。對映體可以通過形成非對映鹽、例如通過與對映體純的手性酸成鹽或借助色譜法、例如 通過HPLC、使用具有手性配體的色譜底物進行分離。應該強調的是類似于本章所述轉化的反應也可以在適合的中間體階段進行。式I化合物、包括它們的鹽，也可以以水合物的形式獲得，或它們的晶體可以包括 例如用于結晶的溶劑(以溶劑合物存在)。用作原料的式II化合物可以如下獲得使式IV化合物
(IV)與式V化合物反應，
(V)其中R1、R2、R3、R4、R5和R6如上所定義，且Y1和Y2為相同或不同的如上對Y所定 義的離去基團。反應條件是以上對式II化合物與式III化合物的反應所提及的那些。式IV和V化合物是已知的或可以按照已知方法制備。
式I化合物及它們的可藥用鹽當在體外于無細胞激酶試驗和細胞試驗中測試時 顯示有價值的藥理學特性，因此可用作藥物。具體而言，本發(fā)明化合物是粘著斑激酶的抑制 劑，可用作治療與粘著斑激酶相關聯(lián)的信號級聯(lián)功能障礙所導致病癥的藥物，尤其是以下 所述的腫瘤。粘著斑激酶FAK是整聯(lián)蛋白介導的外_內信號級聯(lián)中的一種關鍵酶 (D. Schla印fer 等，Prog Biophys Mol Biol 1999，71，435-478)。細胞和細胞外基質(ECM) 蛋白之間的相互作用通過細胞表面受體、整聯(lián)蛋白被轉化為對生長、存活和遷移重要的細 胞內信號。FAK在這些整聯(lián)蛋白介導的外-內信號級聯(lián)中扮演必不可少的角色。該信號轉 換級聯(lián)由Y397的自磷酸化觸發(fā)。磷酸化的Y397是Scr家族酪氨酸激酶的SH2?？奎c。結 合的c-Src激酶可磷酸化FAK中其他酪氨酸殘基。其中，磷酸化Y925成為Grb2小銜接蛋 白的SH2位點的結合部位。Grb2與FAK的直接結合是激活下游靶點如Ras_ERK2/MAP激酶 級聯(lián)的關鍵步驟之一。抑制內源性FAK信號傳導導致運動性減低并在某些情況下誘導細胞死亡。另一方 面，通過外源性表達增強FAK信號傳導可增加細胞運動性并傳達來自ECM的細胞存活信號。 此外，F(xiàn)AK在侵襲性和轉移性上皮、間葉細胞、甲狀腺和前列腺癌中過度表達。因此，F(xiàn)AK抑 制劑可能成為抗腫瘤生長和轉移的藥物。本發(fā)明的化合物因此適用于例如預防和/或治療 患有贅生性疾病的脊椎動物且更具體為哺乳動物，所述贅生性疾病特別是乳腺癌、腸(結 腸和直腸)癌、胃癌和卵巢和前列腺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝癌、黑素瘤、膀胱腫 瘤和頭頸癌。FAK抑制和免疫系統(tǒng)之間的關系在例如G. A. van Seventer等，Eur. J. Immunol. 2001，31，1417-1427中述及。因此，本發(fā)明化合物可例如用于預防和/或治療脊 椎動物且更具體為哺乳動物，其患有免疫系統(tǒng)病癥、由T淋巴細胞、B淋巴細胞、肥大細胞和 /或嗜酸性粒細胞介導的疾病或病癥，例如急性或慢性器官或組織同種或異種移植物排斥、 動脈粥樣硬化、由于血管損傷如血管成型術導致的血管阻塞、再狹窄、高血壓、心衰、慢性阻 塞性肺病、CNS疾病如阿爾茨海默病或肌萎縮性側索硬化、癌癥、感染性疾病如AIDS、膿毒 性休克或成人呼吸窘迫綜合征、缺血/再灌注損傷例如心肌梗死、中風、消化道缺血、腎衰 或出血性休克或創(chuàng)傷性休克。本發(fā)明的活性劑也可用于治療和/或預防急性或慢性炎性疾 病或病癥或自身免疫疾病，例如類風濕性疾病、骨關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、橋本甲狀腺炎、 多發(fā)性硬化、重癥肌無力、糖尿病(I型和II型)和與其有關的病癥、呼吸系統(tǒng)疾病如哮喘 或炎性肝損傷、炎性腎小球損傷、免疫學介導的病癥或疾病的皮膚癥狀、炎性和高增殖性皮 膚疾病(如銀屑病、特應性皮炎、過敏性接觸性皮炎、刺激性接觸性皮炎和濕疹性皮炎、脂 溢性皮炎)、炎性眼病例如Sjoegren綜合征、角膜結膜炎或葡萄膜炎、炎性腸病、局限性回 腸炎或潰瘍性結腸炎。本發(fā)明化合物在實施例所述的FAK試驗系統(tǒng)中具有活性，并顯示抑制IC5(1在InM 至lOOnM范圍內。尤其具有活性的是以下所述的實施例3-12和3-17的化合物，顯示IC5(I 值在1至5nM范圍內。本發(fā)明的一些化合物還具有ZAP_70(70kD的zeta鏈-相關蛋白)蛋白酪氨酸激酶 抑制活性。本發(fā)明活性劑的ZAP-70蛋白酪氨酸激酶相互作用可通過其防止例如LAT-11 (活 化T細胞的連接物)被人ZAP-70蛋白酪氨酸激酶在水溶液中磷酸化的能力得到證實，如實施例所述。本發(fā)明的化合物因此適用于預防或治療其中ZAP-70抑制發(fā)揮作用的病癥或疾病。本發(fā)明的化合物在實施例所述的ZAP-70試驗系統(tǒng)中具有活性，并顯示抑制IC5tl在 ΙμΜ至IOyM范圍內，例如以下所述的實施例2和3-2的化合物。本發(fā)明化合物還是優(yōu)良的IGF-IR(胰島素樣生長因子受體1)抑制劑，因此可用于 治療IGF-IR介導的疾病，例如包括增殖性疾病的疾病，如腫瘤，例如乳腺、腎、前列腺、結直 腸、甲狀腺、卵巢、胰、神經(jīng)元、肺、子宮和胃腸道腫瘤以及骨肉瘤和黑素瘤。本發(fā)明化合物作 為IGF-IR酪氨酸激酶活性抑制劑的功效可使用細胞“捕獲ELISA”證實。在該試驗中，測定 了本發(fā)明化合物對胰島素樣生長因子I(IGF-I)誘導的IGF-IR自磷酸化的活性。本發(fā)明化合物還顯示對NPM-ALK融合蛋白和間變型(anaplastic)淋巴瘤激 酶(ALK)的酪氨酸激酶活性的強大抑制作用。該蛋白酪氨酸激酶來自于核仁磷酸蛋白 (nucleophosmin) (NPM)和間變型淋巴瘤激酶(ALK)的基因融合，使蛋白酪氨酸激酶活性與 ALK配體無關。NPM-ALK在眾多導致血液學或贅生性疾病的造血和其他人細胞中的信號傳 導中扮演關鍵角色，例如在間變型大細胞淋巴瘤(ALCL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)中、尤其 在ALK+NHL或Alkomas中、在炎性肌成纖維細胞腫瘤(IMT)和成神經(jīng)細胞瘤中(Duyster J 等，2001 Oncogene 20，5623-5637)。除NPM-ALK外，在人造血和贅生性疾病中已鑒定了其 他基因融合，主要是TPM3-ALK (非肌肉原肌球蛋白與ALK的融合)。對ALK酪氨酸激酶活性的抑制可采用已知方法、例如采用ALK的重組激酶域、類似 于 J.Wood 等，Cancer Res. 60, 2178-2189 (2000)所述的 VEGF-R 激酶試驗證實。使用 GST-ALK 蛋白酪氨酸激酶的體外酶試驗作為過濾結合試驗在96孔板中于20mM Tris ·Ηα，ρΗ = 7. 5、 3mM MgCl2UOmM MnCl2UmM DTT、0. 1 μ Ci/試驗(=30 μ 1) [ y-33P]-ΑΤΡ.2 μ M ΑΤΡ,3μ g/ ml 聚(Glu,Tyr 4 1)聚-EY(Sigma P-0275)、1 % DMS0、25ng ALK 酶中進行。將試驗物在 環(huán)境溫度下孵育10分鐘。加入50 μ 1 125mM EDTA終止反應，并將反應混合物轉移至MAIP Multiscreen板上(Millipore，Bedford, MA, USA)，該板預先用甲醇潤濕并用H2O再水合5 分鐘。洗滌(0.5% H3PO4)后，將板在液閃計數(shù)器中計數(shù)。通過對百分抑制進行線性回歸分 析，計算IC5tl值。與無抑制劑的對照相比，式I化合物例如在濃度為0. 001至0. 5 μ Μ、尤其 是0. 01至0. 1 μ M時可將酶活性抑制50% (IC50)。式I化合物可強有力地抑制過度表達人NPM-ALK的鼠BaF3細胞的生長(DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH, Braunschweig,德國)。 NPM-ALK 的表達是通過用編碼 NPM-ALK 的表達載體 pCIneo (Promega Corp.，Madison WI, USA)轉染BaF3細胞系、隨后選擇耐G418細胞獲得。未轉染的BaF3細胞依賴于IL-3存活。 相比之下，表達NPM-ALK的BaF3細胞(以下稱為BaF3_NPM_ALK)可在IL-3不存在時增殖， 因為它們通過NPM-ALK激酶獲得增殖信號。因此，NPM-ALK激酶的假定抑制劑消除生長信 號并導致抗增殖活性。但是，NPM-ALK激酶的假定抑制劑的抗增殖活性可通過加入IL-3加 以克服，其通過與NPM-ALK無關的機制提供生長信號。[就使用FLT3激酶的類似細胞系統(tǒng) 而言，請參見E Weisberg等，Cancer Cell ；丄，433-443 (2002)]。簡言之，式I化合物的抑 制活性如下測定將BaF3-NPM-ALK細胞(15，000微升/板孔)轉移至96-控微量滴定板 中。將供試化合物[溶于二甲亞砜(DMSO)]以一系列濃度(稀釋系列)加入，加入的方式可 使DMSO的終濃度不大于(ν/ν) 0加入后，將板孵育兩天，期間無供試化合物的對照培養(yǎng)物能夠經(jīng)歷兩次細胞分裂周期。BaF3-NPM-ALK細胞的生長借助Yopro 染色[T Idziorek 等，J. Immunol. Methods ；185 :249_258 (1995)]測量將由 20mM 檸檬酸鈉 pH4. 0,26. 8mM 氯 化鈉、0. 4% NP40、20mM EDTA和20mM組成的25 μ 1溶解緩沖液加入各孔。細胞溶解在室 溫下于60分鐘內完成，與DNA結合的Yopro的總量通過使用Cytofluor II 96-孔讀數(shù)儀 (PerSeptive Biosystems)測量確定，設置如下激發(fā)(nm) 485/20，發(fā)射(nm) 530/25。IC5tl值通過計算機輔助系統(tǒng)、使用以下公式確定IC50 = [ (ABS 供試-ABS 起始)/ (ABS 對照-ABS 起始)]χ 100，(ABS =吸收)這些試驗中的IC5tl值以導致細胞計數(shù)較使用無抑制劑的對照所獲得的計數(shù)低 50%的所涉及供試化合物的濃度表示。式I化合物顯示抑制活性，IC50約0. 01至1 μ Μ。式I化合物的抗增殖作用也可使用與以上對BaF3-NPM_ALK細胞系所述相同的方 法在人 KARPAS-299 淋巴瘤細胞系(DSMZ DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig，德國)[WG Dirks 等，Int. J. Cancer 100,49-56(2002) 述及]中確定。式I化合物可顯示抑制活性，ICM約0. 01至1 μ Μ。式I化合物對ALK自磷酸化的作用可以在人KARPAS-299淋巴瘤細胞系中、借助免 疫印跡確定，如WG Dirks等，Int. J. Cancer 100,49-56(2002)所述。在該試驗中，式I化 合物具有約0. 001至1 μ M的IC5tl。在式I化合物中，2- [5-氯-2- (2-甲氧基_4_嗎啉_4_基-苯基氨基)-嘧啶_4_基 氨基]-N-甲基-苯甲酰胺是尤其強效的ALK抑制劑，因為該化合物抑制BaF3-NPM-ALK細 胞生長的IC5tl為97nM。更加優(yōu)選的抑制間變型淋巴瘤激酶(ALK)酪氨酸激酶活性的化合 物是以下實施例7A和7B以及7-2、7-15、7-36、7-39、7-44和7_52所述的化合物，所有它們 的IC5tl均處于< 0. 5至200nM范圍內。就以上治療贅生性疾病和免疫系統(tǒng)病癥的用途而言，所需的劑量當然隨施用方 式、待治療的具體病癥和所需效果而異。通常，約0. 1至約100mg/kg體重的日劑量適合于 獲得全身性滿意結果。較大的哺乳動物、例如人的適用日劑量處于約0. 5mg至約2000mg范 圍內，方便地例如以不超過每天4次的分劑量或以延遲形式施用。本發(fā)明化合物可通過任何常規(guī)途徑施用，特別是胃腸外，例如以可注射溶液或混 懸液形式；腸內、優(yōu)選口服，例如以片劑或膠囊形式；局部，例如以洗液、凝膠、軟膏或霜劑 形式，或以鼻用或栓劑形式。包含本發(fā)明化合物以及至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物 組合物可以按照常規(guī)方式、通過與可藥用載體或稀釋劑混合而制備。用于口服施用的單位 劑量形式含有例如約0. Img至約500mg活性物質。局部施例如用于皮膚。局部施用的另一 種形式是用于眼部。本發(fā)明的藥物組合物以本身已知的方式制備，例如借助常規(guī)的混合、制粒、包衣、 溶解或凍干方法。優(yōu)選使用活性成分的溶液，還有混懸液或分散體，尤其是等滲水溶液、分散體或混 懸液，其例如就包含單獨的活性成分或還含有載體例如甘露糖醇的凍干組合物而言，可于 使用前配制。藥物組合物可以是滅菌的或可包含賦形劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑和/ 或乳化劑、增溶劑、調節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑，并以本身已知的方式制備，例如借助常 規(guī)的溶解和凍干方法。所述溶液或混懸液可包含增稠劑，通常為羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖 維素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明膠，或還有增溶劑，例如Tween 80 (聚氧乙烯(20)脫水山梨醇單油酸酯)。油中混懸液包含常規(guī)用于注射目的的植物、合成、半合成油作為油性組分。在這 方面，可特別提及液體脂肪酸酯，其含有作為酸性組分的具有8至22、特別是12至22個 碳原子的長鏈脂肪酸，例如月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕櫚酸、十七烷酸、硬脂 酸、花生酸、二十二酸或相應的不飽和酸，例如油酸、反油酸、芥子酸、巴西烯酸或亞油酸，如 果需要，加入抗氧化劑，例如維生素Ε、胡蘿卜素或3，5_ 二-叔丁基-4-羥基甲苯。這 些脂肪酸酯的醇組分具有最多6個碳原子且為單價或多價、例如單價、二價或三價醇，例如 甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或其異構體，但特別是乙二醇或甘油。因此，提及以下脂肪 酸酯油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、“Labrafil M 2375”(聚氧乙烯甘油)、 "Labrafil M1944CS” (通過醇解杏仁油而制備的不飽和聚乙二醇化甘油酯，由甘油酯和聚 乙二醇酯組成)、“Labrasol” (通過醇解TCM而制備的飽和聚乙二醇化甘油酯，由甘油酯和 聚乙二醇酯組成，均得自Gattef0SS6，法國)和/或“Miglyol 812”(鏈長C8至C12的飽和 脂肪酸的甘油三酯，來自HUls AG，德國)，但特別是植物油如棉子油、杏仁油、橄欖油、蓖麻 油、芝麻油、大豆油，更特別為花生油?？勺⑸渲苿┑闹苽渫ǔＴ跓o菌條件下進行，例如灌裝至安瓿或小瓶中以及容器的 密封。用于口服施用的藥物組合物可例如如下獲得將活性成分與一種或多種固體載體 合并，如果需要將所得混合物制粒，并且如需要或必要通過摻入額外的賦形劑加工混合物 或顆粒，以形成片劑或片芯。適合的載體特別為填充劑如糖，例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇、纖維素制 品和/或磷酸鈣、例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；還有粘合劑如淀粉、例如玉米、小麥、稻米或馬 鈴薯淀粉、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或如 果需要崩解劑，如以上提及的淀粉，還有羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸或其鹽 如海藻酸鈉。其他賦形劑特別為流動調節(jié)劑和潤滑劑，例如硅酸、滑石、硬脂酸或其鹽如硬 脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇或其衍生物。片芯可具有適合的任選腸溶的包衣，通過使用尤其是濃縮糖溶液，其可包含阿拉 伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦，或使用適合的有機溶劑或溶劑混 合物中的包衣溶液，或為了制備腸溶包衣使用適合的纖維素制品溶液，如醋酸纖維素酞酸 酯或羥丙甲基纖維素酞酸酯?？蓪⑷玖匣蛏丶尤肫瑒┗蚱瑒┌拢绯鲇阼b別目的或 指示活性成分的不同劑量。用于口服施用的藥物組合物還可包括由明膠組成的硬膠囊，還有由明膠和增塑劑 如甘油或山梨糖醇組成的軟密封膠囊。硬膠囊可含有顆粒形式的活性成分，例如與填充劑 如玉米淀粉、粘合劑和/或助流劑如滑石或硬脂酸鎂以及任選的穩(wěn)定劑的混合物。在軟膠 囊中，活性成分優(yōu)選溶解或混懸于適合的液體賦形劑中，如脂肪油、石蠟油或液體聚乙二醇 或乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯，也可向其中加入穩(wěn)定劑和清潔劑，例如聚氧乙烯脫水山梨 糖醇酐脂肪酸酯型。適合于直腸施用的藥物組合物有例如由活性成分組合栓劑基質組成的栓劑。適合 的栓劑基質有例如天然或合成的甘油三酯、烷屬烴、聚乙二醇或高級鏈烷醇。對于胃腸外施用，特別適合的有水溶性形式、例如水溶性鹽形式的活性成分的水溶液，或含有增稠物質以及需要時的穩(wěn)定劑的注射水懸液，所述增稠物質例如羧甲基纖維 素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖。活性成分、任選以及賦形劑也可呈凍干物的形式并可于胃腸 外施用前通過加入適合的溶劑制成溶液。如用于例如胃腸外施用的溶液也可用作輸注溶液。優(yōu)選的防腐劑有例如抗氧化劑如抗壞血酸，或殺微生物劑如山梨酸或苯甲酸。本發(fā)明化合物可作為唯一的活性成分施用或與其他可用于對抗贅生性疾病或 可用于免疫調節(jié)方案的藥物一起施用。例如，根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的活性劑可與對上 述各種疾病有效的藥學成分組合使用，例如環(huán)磷酰胺、5_氟尿嘧啶、氟達拉濱、吉西他 濱、順鉬、卡鉬、長春新堿、長春堿、依托泊苷、伊立替康、紫杉醇、多西他賽、單克隆抗體 IDEC-G2B8(rituxan)、阿霉素、gefitinib或伊馬替尼(imatinib)，或還有環(huán)孢菌素、雷帕 霉素、子囊霉素或它們的免疫抑制類似物例如環(huán)孢菌素A、環(huán)孢菌素G、Π(-506、西羅莫司或 everoIimus,皮質類固醇例如潑尼松，環(huán)磷酰胺、咪唑巰嘌呤、甲氨蝶呤、金鹽、柳氮磺吡啶、 抗瘧疾藥、白瑞夸爾、來氟洛米、咪唑立賓、霉酚酸、霉酚酸酯(麥考酚酸嗎啉乙酯)、15-脫 氧斯潘格寧、免疫抑制單克隆抗體、例如白細胞受體的單克隆抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、 CD7、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86、CD152、CD137、CD154、I COS、LFA-1、VLA-4 或 它們的配體，或其他免疫調節(jié)化合物，例如CTLA4Ig。依據(jù)以上所述，本發(fā)明還提供了 (1)用作藥物的本發(fā)明化合物；(2)用作FAK抑制劑、ALK抑制劑和/或ZAP-70抑制劑、例如用于任何以上所列具 體適應征的本發(fā)明化合物；(3)例如用于任何以上所列適應征的藥物組合物，包含作為活性成分的本發(fā)明化 合物以及一種或多種可藥用稀釋劑或載體；(4)在有需要的個體中治療以上所列任何具體適應征的方法，包括施用有效量的 本發(fā)明化合物或包含本發(fā)明化合物的藥物組合物；(5)本發(fā)明化合物在制備用于治療或預防其中FAK、ALK和/或ZAP-70的活化扮 演角色或被牽涉的疾病或病癥的藥物中的用途；(6)以上(4)下所定義的方法，包括共同施用、例如并行或相繼施用治療有效量的 本發(fā)明化合物和一種或多種其他藥物物質，所述其他藥物物質可用于任何以上所列具體適 應征；(7) 一種組合產(chǎn)品，包含治療有效量的本發(fā)明化合物和一種或多種其他藥物物質， 所述其他藥物物質可用于任何以上所列具體適應征；(8)本發(fā)明化合物在制備用于治療或預防對抑制間變型淋巴瘤激酶有響應的疾病 的藥物中的用途；(9)根據(jù)⑶的用途，其中所要治療的疾病選自間變型大細胞淋巴瘤、非霍奇金淋 巴瘤、炎性成肌纖維細胞瘤和成神經(jīng)細胞瘤；(10)根據(jù)⑶或(9)的用途，其中的化合物為2-[5_氯-2-(2_甲氧基-4-嗎 啉-4-基-苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-苯甲酰胺或其可藥用鹽，或任何以下 實施例所述化合物或任何這些化合物的可藥用鹽；(11)治療對抑制間變型淋巴瘤激酶有響應的疾病、特別是選自間變型大細胞淋巴
21瘤、非霍奇金淋巴瘤、炎性成肌纖維細胞瘤和成神經(jīng)細胞瘤的疾病的方法，包括施用有效量 的本發(fā)明化合物、特別是2-[5-氯-2- (2-甲氧基-4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基 氨基]-N-甲基-苯甲酰胺或其可藥用鹽。其他優(yōu)選的如此前所述有用的本發(fā)明化合物是實施例中具體提及的化合物。可用作FAK抑制劑、ALK抑制劑或用于抑制二者且可基本上按照此前所述的方法 制備的其他優(yōu)選的本發(fā)明化合物有以下化合物2-[5-氯-2-(2-甲氧基_4_嗎啉_4_基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨基]_N_甲 基-苯甲酰胺，N2-(4-[1,4']聯(lián)哌啶基-1'-基-2-甲氧基-苯基)-5-氯-N4-[2-(丙烷-1-磺 ?；?-苯基]-嘧啶-2，4-二胺，2-{5-氯-2-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪基)_苯基氨基]-嘧啶_4_基氨 基}-N-異丙基-苯磺酰胺，2-[5-溴-2-(2-甲氧基_5_嗎啉_4_基-苯基氨基)_嘧啶_4_基氨基]_N_甲 基_苯磺酰胺，2-{2-[5-(1-乙?；?哌啶-4-基氧基)-2_甲氧基-苯基氨基]_5_溴-嘧 啶-4-基氨基} -N-甲基-苯磺酰胺，N- [5-溴-2- (2，5_ 二甲氧基-苯基氨基)-嘧啶_4_基]-N- (4_嗎啉_4_基-苯 基)_甲磺酰胺，5-溴-N-4_(4-氟-苯基)-N * 2 * _(2_甲氧基_4_嗎啉_4_基-苯基)-嘧 啶-2，4-二胺，2-[5-氯-2-(2-甲氧基_4_哌嗪基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨基]_N_甲 基_苯磺酰胺，2-[5-溴-2-(5-氟-2-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨基]_N_甲基-苯磺酰 胺，2- [5-氯-2- (5-氟_2_甲氧基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨基]-N-異丁基-苯磺 酰胺，和2- {5-氯-2- [2-甲氧基_5_ (4_甲基-哌嗪基甲基)_苯基氨基]-嘧啶_4_基 氨基}-N-甲基-苯磺酰胺。本發(fā)明還提供了下式化合物2-{5_氯-2-[4-(3-甲基氨基-吡咯烷基)-苯 基氨基]-嘧啶-4-基氨基}-N-異丙基-苯磺酰胺。以下實施例用于闡述本發(fā)明而非限制本發(fā)明的范圍。
實施例MMAcOH =乙酸，ALK =間變型淋巴瘤激酶，ATP =腺苷5，-三磷酸，鹽水=飽和氯化 鈉溶液，BSA =牛血清白蛋白，DIAD =偶氮二羧酸二異丙酯，DIP⑶I = N，N’ - 二異丙基碳 二亞胺，DMAP = 4- 二甲基氨基吡啶，DMF = N，N- 二甲基甲酰胺，DTT = 1,4- 二硫代-D， L-蘇糖醇，EDTA =乙二胺四乙酸，Et =乙基，EtOAc =乙酸乙酯，EtOH =乙醇，Eu_PT66 = LANCE 銪-W1024-標記的抗磷酸酪氨酸抗體(Perkin Elmer)，F(xiàn)AK =粘著斑激酶，F(xiàn)RET =熒光共振能量轉移，HEPES = N-2-羥基乙基哌嗪-N，-2-乙磺酸，HOAt = 1-羥基-7-氮雜 苯并三唑，Me =甲基，RT-PCR =逆轉錄聚合酶鏈反應，SA-(SL)APC =與SuperLight 別藻 藍蛋白(Perkin Elmer)綴合的抗生物素蛋白鏈菌素，subst.=取代的，TBTU = 0-(苯并三 唑-1-基)-N, N，N，，N，-四甲基四氟硼酸銨，THF =四氫呋喃。實施例1 :2_「2-(2, 5-二甲氧基-苯基氨基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基I-N-甲 基_苯磺酰胺 在室溫下向2-(2_氯-5-硝基-嘧啶-4-基氨基)_N_甲基-苯磺酰胺(lOOmg， 0. 29mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中加入2，5-二甲氧基苯胺(49mg，0. 32mmol)。將該混合 物在78°C加熱5小時。蒸發(fā)溶劑，混合物經(jīng)反相HPLC純化，得到標題產(chǎn)物。Rf = 0. 47(正己燒乙酸乙酯=1 1)。1H-WrGOOMHz, CDCl3)，δ (ppm) 2. 36 (d, 3H)，3. 57 (s, 3H)，3. 73 (s, 3H)，6. 72 (d, 1H)，6. 99 (d, 1H)，7. 17 (s, 1H)，7. 35 (t, 1H)， 7. 4-7. 6 (m, 1H) ,7. 63 (d, 1H)，7. 81 (d, 1H) ,8. 0-8. 2 (m, 1H) ,9. 13 (s，1H)，9· 41 (br. s, 1H)， 11. O (S，1H)。2- (2-氯,-5-硝某-嘧啶-4-某氨某)-N-甲某-苯磺酰胺的制各將2，4_ 二氯-5-硝基-嘧啶(1. 94g，IOmmol)和2_氨基-N-甲基-苯磺酰胺 (1. 86g, IOmmol)溶于CHCl3(30mL)。將該反應混合物在61°C加熱2小時。蒸發(fā)溶劑并將殘 余物用醚洗滌，得到標題產(chǎn)物。Rf = O. 5 (正己烷乙酸乙酯=1 Dtj1H-WRGOOMHzADCl3), δ (ppm) 2. 67 (d, 3H)，4. 6-4. 7 (m, 2H)，7. 41 (dd, 1H)，7. 7 (dd, 1H)，8. 04 (d, 1H)，8. 15 (d, 1H)，9. 21 (s，1H)， 11. 2 (s，1H)。實施例2 :2-Γ5~溴-2-(2,4- 二甲氧基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨基1_Ν_甲 基_苯磺酰胺 向2-(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-N-甲基-苯磺酰胺(300mg，0. 79mmol)、2， 4-二甲氧基苯胺(181. 5mg,l. 18mmol)在乙醇(3mL)中的溶液中加入IN鹽酸(0. 03mL)，并 在回流條件下攪拌5小時。將該反應混合物冷卻至室溫、傾入水中并用乙酸乙酯萃取兩次。將有機層連續(xù)用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并在真空中蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化 (正己烷乙酸乙酯=5 1至1 1)，得到標題化合物。1H-NMR(CDCl3), δ (ppm) :8· 95 (s，1H)，8. 44 (d，1H)，8. 20 (s，1H)，7. 98 (dd，1H)， 7. 58 (ddd, 1H)，7. 22-7. 32 (m, 1H)，6. 51 (d, 1H)，6. 40 (d, 1H)，4. 56-4. 48 (m, 1H)，3. 86 (s, 3H)，3.81(s，3H)，2.64(d，3H)。Rf (正己烷乙酸乙酯=1 1) :0.31。2- (5-、遼-2-氯,-嘧啶-4-某氨某)-N-甲某-苯磺酰胺的制各將5-溴-2，4-二氯嘧啶(684mg，3. Ommo 1)和2_氨基-N-甲基-苯磺酰胺(559mg， 3. Ommo])在含有碳酸鉀(830mg，6. Ommol)的N，N-二甲基甲酰胺(IOmL)中的溶液在室溫 下攪拌23小時。加入飽和氯化銨水溶液，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯萃取兩次。將有 機層用鹽水洗滌、經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空中蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷-乙 酸乙酯梯度)，得到標題化合物，為淺黃色固體。1H-NMR (CDCl3), δ (ppm) :2· 67 (d，3H)，4. 79 (q，1H)，7. 26 (s，1H)，7. 29 (ddd，1H)， 7. 66 (ddd, 1H)，7· 95 (dd, 1H)，8· 37 (s, 1Η)，8· 48 (d, 1Η)，9· 52 (s, 1Η)。Rf (正己燒乙酸乙酯 =10 3) 0. 33。實施例3 按照實施例2的步驟，自2- (5-溴-2-氯-嘧啶_4_基氨基)-N-甲基-苯磺酰胺 和相應的苯胺制備以下2-[5-溴-2-(取代的苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-苯 磺酰胺 實施例4 :2-Γ5-溴-2-(取代的苯某氨某)_嘧啶~4~某氨某1_Ν_丙某-苯磺酰 胺這些化合物類似于實施例2制備，使用2- (5-溴-2-氯-嘧啶_4_基氨基)_Ν_丙 基_苯磺酰胺和相應的苯胺，得到化合物4-1至4-31，所述化合物具有實施例3下對化合物3-1至3-31所列的取代基Rx。2- (5-、遼-2-氯,-嘧啶-4-某氡某)-N-丙某-苯磺酰胺的制各向5-溴-2，4-二氯嘧啶(90μ L，0. 70mmol)和2_氨基_N_丙基-苯磺酰胺(lOOmg， 0. 47mmol)的溶液中加入DMS0(1. OmL)中的氫化鈉(54. 2mg，0. 56mmol)并將所得溶液在 80°C下攪拌3.0小時。將該混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取三次。用水、然后用鹽水洗 滌有機層、經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷乙酸乙酯= 5 1)，得到標題化合物，為淺黃色固體。1H-NMR ( δ，ppm) 0. 89(t，3H)，1. 41 (q，2H)，3. 56(t，2H)，4. 92 (br. s，2H)， 6. 71(dd，lH)，6. 77(dd，lH)，7. 33(dd，lH)，7. 54(dd，lH)，8. 79 (s, 1H) Rf (己烷乙酸乙酯= 1 1) 0.64。實施例5 2~Γ5-三氟甲基-2-(取代的苯基氨基)-嘧啶基氨基1 ~N~甲基-苯 磺酰胺這些化合物類似于實施例2制備，使用2-(2_氯-5-三氟甲基-嘧啶_4_基氨 基)-N-甲基-苯磺酰胺和相應的苯胺，得到化合物5-1至5-31，所述化合物具有實施例3 下對化合物3-1至3-31所列的取代基Rx。
_0] 2- (2-氯,-5-三氟甲某-嘧啶-4-某氨某)-N-甲某-苯磺酰胺的制各在環(huán)境溫度下向2，4-二氯-5-三氟甲基-嘧啶(386mg，l. 79mmol)的乙腈(IOmL) 溶液相繼加入2-氨基-N-甲基-苯磺酰胺(333mg, 1. 79mmol)和1，8_ 二氮雜[5.4.0] 雙環(huán)-7-i烯(280μ ，1.88πιπιΟ1)。在室溫下攪拌15小時后，向混合物加入二氯甲烷 (30mL)，將溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌、經(jīng)硫酸鎂干燥并真空蒸 發(fā)。所得固體經(jīng)快速色譜純化。1H NMR(CDCl3) δ 3. 73 (s，3H)，6. 67—6. 69 (m，1H)，6. 72—6. 73 (m，1H)，7. 27—7. 31 (m， 1H)，7. 78(dd，1H)，8. 60(s，1H)。Rf (己燒乙酸乙酯=1 1) :0· 28。實施例6 2-「5-溴-2-(2，3-「二氟亞甲二氧基1苯基氨基)-嘧啶基氨基苯 磺酰胺 按照實施例2的方法，在2- (5-溴-2-氯嘧啶_4_基氨基)_Ν_甲基-苯磺酰胺與 2，3-( 二氟亞甲二氧基)苯胺反應時經(jīng)N-脫甲基化作用，得到該化合物，為副產(chǎn)物。其也可 以通過2-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺與2，3-( 二氟亞甲二氧基)苯胺反應而 制備。Rf (正己烷乙酸乙酯=1 1) :0. 46。1H-NMR (CDCl3) 4. 83 (bs, 2Η)，6. 77 (dd, 1H)，6. 86 (s, 1H)，6. 97 (dd, 1H)， 7. 31-7. 24 (m, 1H)，7. 57 (dd, 1H) ,7. 81 (d, 1H) ,8. 02 (dd, 1H) ,8. 28 (d, 1H) ,8. 29 (s，1H)，8. 88 (s，1H)。2-(5-、遼-2-氯,嘧啶-4-某氡某)苯磺酰胺的制各向5-溴-2，4- 二 氯嘧啶(300mg，1. 32mmol)和 2_ 氨基-苯磺酰胺(340mg， 1. 97mmol)的2-丙醇(3mL)溶液中加入濃鹽酸(0. 06mL)，將混合物在90°C攪拌4. 5小時。 將混合物倒入碳酸氫鈉水溶液中并用乙酸乙酯萃取三次。有機層用水洗滌、經(jīng)硫酸鈉干燥、 真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)柱色譜純化(己烷乙酸乙酯=2 1)，得到標題化合物。Rf (己烷乙酸乙酯=1 1) :0.55。1H-WrgooMHz5CDCI3) δ 4. 78 (br. s,2H), 7. 22 (dd, 1H)，7. 61 (ddd, 1H)，7. 95 (dd, 1H)，8. 35 (s, 1H)，8. 35 (d, 1H)，9. 18 (s, 1H)。實施例7A 2~ Γ5-氯-2- (2~甲氧基嗎啉基-苯基氨基)-嘧啶基氨 基]-N-甲基-苯甲酰胺 向2-(2，5-二氯-嘧啶-4-基-氨基)-N-甲基-苯甲酰胺(5. 05g，17. Ommol)的 90mL 2-甲氧基乙醇懸液中加入2-甲氧基-4-嗎啉代苯胺二鹽酸鹽(4. 56g，16. 2mmol)和 17. OmL IN的氯化氫乙醇溶液(17. Ommol)。將反應混合物在110°C攪拌4小時并冷卻至室 溫后，將混合物用IN NaOH水溶液中和并用EtOAc萃取(IOOmLX3)。有機層用鹽水洗滌、經(jīng) Na2SO4干燥、減壓濃縮。所得黑色固體用Et0H(90mL)洗滌，然后經(jīng)硅膠柱色譜純化(CH2Cl2 至CH2Cl2 AcOEt = 1 2)，得到2-[5-氯-2-(2-甲氧基-4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧 啶-4-基氨基]-N-甲基-苯甲酰胺，為淡黃色固體。1H-NMR (400MHz, DMS0-d6, δ) 2. 80(d,3H, J = 4. 52Hz) ,3. 10-3. 20(m,4H), 3. 78 (s，3H)，3. 70-3. 80 (m, 4H)，6. 49 (dd, 1H, J = 8. 56,2. 52Hz)，6. 66 (d, 1H, J = 2. 52Hz)，
7.08 (dd, 1H, J = 8. 04，8. 04Hz)，7. 44 (d, 1H, J = 8. 56Hz)，7. 71 (dd, 1H, J = 8. 04，1. 48Hz)，
8.10 (s，1H)，8· 13 (s，1Η)，8· 59 (d, 1Η, J = 8. 04Ηζ)，8· 68-8. 75 (m, 1Η)，11. 59 (S, 1Η)。MS m/ ζ 469,471(Μ+1)+0以下2-[5-氯-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_Ν_甲基-苯甲酰胺由 2- (2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-N-甲基-苯甲酰胺和相應的苯胺、按照實施例7Α的方法 制備。
以下2-[5-溴-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_乙基-苯甲酰胺由 2- (5-溴-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-N-乙基-苯甲酰胺和相應的苯胺、按照實施例7A的方
法制備。
以下2-[5-氯-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_乙基-苯甲酰胺由 2- (2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-N-乙基-苯甲酰胺和相應的苯胺、按照實施例7A的方法 制備。
以下2-[5-氯-2-(取代的苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]_6，N- 二甲基-苯甲酰 胺由2-(2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-6，N- 二甲基-苯甲酰胺和相應的苯胺、按照實施例 7A的方法制備。 以下2-[5-氯-2-(取代的苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]_5_氟-N-甲基-苯甲 酰胺由2- (2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-5-氟-N-甲基-苯甲酰胺和相應的苯胺、按照實 施例7A的方法制備。
12-1 7- Γ5-氯(2~甲氧基嗎啉基-苯基氨基)-嘧啶基氨 某1 -2-甲某-2,3- 二氫-異吲哚-1-酮的制各7- (2,5- 二氯,-嘧啶-4-某氨某)_2_甲某_2，3_ 二氫-異吲哚酮的合成方法N-甲基-7-硝基-2，3-二氫異吲哚-1-酮在室溫下，將2-溴甲基-6-硝基苯甲 酸甲酯(1. 26g，4. 63mmol)的THF(13mL)溶液用2M甲胺的THF(HmL)溶液處理，攪拌5小 時，用EtOAc (IOOmL)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(15mL)和鹽水(15mL)洗滌，經(jīng)(MgSO4)干 燥并蒸發(fā)。進行快速色譜(30g硅膠；CH2Cl2/EtOAc 1 1)，得到N-甲基-7-硝基-2，3-二 氫異吲哚-1-酮(0. 561g，2. 92mmol)，產(chǎn)率 63%。黃色固體。Rf(CH2Cl2/EtOAc 1 1)0.46。 1H-WR (400MHz，CDCl3) 3. 21 (s)，4. 44 (s)，7. 63-7. 69 (m, 2H)，7. 70-7. 75 (m, 1H)。7-氨基-N-甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮在室溫下，將N-甲基_7_硝基_2，3_ 二 氫異吲哚-1-酮(561. Omg, 2. 92mmol)的 EtOAc (8. 4mL)溶液用 SnCl2 ·2Η20(2· 68g)處理，在 80°C、回流下攪拌5小時，并用30mL 5N NaOH在OC處理。分離兩層后，水層用EtOAc (2x8mL) 萃取，合并萃取液，用鹽水(5mL)洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，得到7-氨基-N-甲基-2，3-二氫異吲哚-1-酮(455. 9g，2. 81mmol)，產(chǎn)率 96%，黃色固體。Rf (CH2Cl2/EtOAc 1 1)0.53。 1H-NMR (400MHz, CDCl3) 3. 12 (s)，4. 28 (s)，5. 20 (br. s)，6. 56 (d, J = 8.0), 6. 68 (d, J = 8. 0)， 7. 21 (dd, J = 8. 0,8. 0)。7-(4-氨基-2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基_N_甲基_2，3_ 二氫異吲哚酮在 0°c下，將 7-氨基-N-甲基 _2，3-二氫異吲哚-1-酮(232. 6mg, 1. 43mmol)的 DMF(2. OmL) 溶液用60% NaH(89. 8mg)處理，在相同溫度下攪拌1. 5小時，用2，4，5-三氯嘧啶(0. 557g) 的DMF(3.5mL)溶液處理，攪拌1小時，并溫至室溫。進一步攪拌13小時后，將混合物用 飽和NH4Cl水溶液(6mL)處理，過濾收集所得棕色沉淀，然后用H20、己烷和CH3CN洗滌，得 到7-(4-氨基-2，5-二氯嘧啶-4-基)氨基-N-甲基_2，3-二氫異吲哚-1-酮(130. 2g， 0. 416mmol)，產(chǎn)率 26%，棕色固體。Rf (CH2Cl2/EtOAc 1 1)0.50。1H-WrgoomHzJDCI3) 3. 22 (s)，4. 43 (s)，7. 15 (d, J = 8. 0)，7. 59 (dd, J = 8. 0，8. 0)，8. 24 (s)，8. 71 (d，J = 8. 0)， 11. 05 (br. s)。 以下7-[5-氯-2-(取代的苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]_2_甲基_2，3_ 二氫異 吲哚-I-酮由7-(2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-2，3- 二氫異吲哚-1-酮和相應 的苯胺、按照實施例7A的方法制備。7- Γ5-氯-2- (2-甲氧基嗎啉基-苯基氨基)-嘧啶基氨基1 ~2~基_2, 3- 二氫異吲哚-1-酮 1H-NMR (400MHz, DMS0-d6, δ) 3. 07 (s, 3Η) , 3. 13-3. 17 (m, 4H) , 3. 75 (s, 3Η), 3. 34-3. 78(m，4H)，4. 46(s，2H)，6. 54(dd，1Η，J = 8. 6，2. 5Hz)，6. 67 (d，1Η，J = 2. 5Hz)， 7. 15 (d, 1H, J = 7. 6Hz)，7. 25-7. 34 (m, 1H) 7. 36 (d, 1H, J = 8. 6Hz)，8. 13 (s, 1H)，8. 36 (s, 1H)，8. 37-8. 50(m，1H)，10. 57(s，1H)。MS (ESI)m/z 481. 483 (M+l)+。以下7- (5-氯-2-(取代的苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基)_2_甲基_2，3_ 二氫異吲哚-1-酮由7- (2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-2-甲基-2，3- 二氫異吲哚-1-酮和相應
的苯胺、按照實施例2的方法制備。
以下7-(5-氯-2-(取代的苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基)_2_乙基_2，3_ 二氫吲 哚-1-酮由7-(2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-2-乙基-2，3- 二氫-異吲哚-1-酮和相應
的苯胺、按照實施例2的方法制備 實施例7B :2-Γ5~氯_2_(2_甲氧基嗎啉基-苯基氨基)_嘧啶基氨 gl-N-甲基-苯甲酉糾安(^MM 7A的備誅合去)在-5°C下向2-[5-氯-2-(2-甲氧基_4_嗎啉_4_基-苯基氨基)-嘧啶_4_基 氨基]-苯甲酸(5. 5g, 12. Immo 1)的 IOOmL THF 懸液中加入 Et3N(2. 06mL, 14. 8mmol)和氯 甲酸異丁酯(1. 7mL, 12. 8mmol)。在相同溫度下攪拌30分鐘后，將反應混合物在室溫下進 一步攪拌1小時，然后向反應混合物加ΛΗ20。過濾收集所得沉淀，用H2O洗滌，在減壓下干 燥，得到中間體(4. 80g) (10. 96mmol，91% )，為黃色固體。NMR (400MHz，DMS0-d6，δ) :3. 10-3. 20 (m，4Η)，3. 70-3. 80 (m，4Η)，3. 93 (s，3Η)， 6. 53 (dd, 1H, J = 9. 08,2. OHz)，6. 70 (d, 1H, J = 2. OHz)，7. 49-7. 54 (m, 1H)，7. 67 (d, 1H, J = 8. 56Hz)，7. 89 (s, 1H)，7. 85-7. 95 (m, 1H)，8. 23 (d, 1H, J = 9. 08Hz)，8. 26 (d, 1H, J = 8. 56Hz)，12. 60 (s，1H)。向 IM 甲胺的 THF 溶液(560 μ 1,0. 56mmol)中加入 82mg 所得中間體(0. 187mmol), 然后滴加IM NaHMDS的THF溶液(560 μ 1,0. 56mmol)。將反應混合物攪拌10分鐘后，加入 5mL H2O并用AcOEt進行萃取。有機層用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，并經(jīng)硅膠 柱色譜純化(己烷AcOEt=I 1至AcOEt)，得到標題化合物，為淡黃色固體。數(shù)據(jù)示于 實施例7A。重復上述操作、使用適合的原料和條件，得到如下所鑒定的以下化合物。
以下2- (5-氯-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基)-N-甲基_5_吡咯 烷-1-基-苯甲酰胺由2- (5-氯-2-甲基-嘧啶-4-基氨基)-N-甲基-5-吡咯烷-1-基-苯 甲酰胺和相應的苯胺、按照實施例2的方法制備 以下2-[5-氯-2-(4_氟-2-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]_5_取代 的-N-甲基-苯甲酰胺由相應的苯胺、按照實施例2的方法制備
實施例16B 實施例16C
CDCl3 3. 56-3. 65 (m，2H)，3. 88(s，3H)，5· 11-5. 19 (m, 1H) ,6. 50-6. 56 (m, 1H)， 6. 61-6. 66 (m, 1H)，7. 25-7. 29 (m, 1H)，7. 38 (brs, 1H)，7. 58-7. 62 (m, 1H)，7. 97 (dd, 1H)， 8. 02-8. 10 (m, 1H)，8. 15 (s, 1H)，8. 41 (dd, 1H)，8. 81 (s，1H)。以下2- (5-氯-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基)_5_氟_N_甲基-苯甲 酰胺由2- (2，5- 二氯-嘧啶-4-基氨基)-5-氟-N-甲基-苯甲酰胺和相應的苯胺、按照實 施例2的方法制備 以下2-[5-氯-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_異丙基-苯磺酰胺 由2- (5-氯-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-N-異丙基-苯磺酰胺和相應的苯胺、按照實施例7A
的方法制備 以下2-[5-氯-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_甲基-苯磺酰胺由 2-(5-氯-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-N-甲基-苯磺酰胺和相應的苯胺、按照實施例A的方法制備 以下2-[5_氯_2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_仲-丁基-苯磺酰 胺由2-(5_氯-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-N-仲-丁基-苯磺酰胺和相應的苯胺、按照實施 例7A的方法制備 以下2-[5_氯_2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_異-丁基-苯磺酰 胺由2-(5_氯-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-N_仲-丁基-苯磺酰胺和相應的苯胺、按照實施 例7A的方法制備 22-3φ"、 O0.54 (AcOEt)DMSO d6: 0.73(d, 6H), 1.55-1.62(m, 1H), 2.56-2.59(m, 2H), 3.10-3.12(m, 4H), 3.74-3.76 (m, 7H), 6.43-6.46(m, 1H)，6.65(d, 1H), 7.20-7.24(m, 1H), 7.40-7.48(m, 2H), 7.76-7.78 (m, 1H), 7.90-7.95(m, 1H), 8.16(s, 1H), 8.17(s, 1H), 8.43-8.45(m, 1H), 9.32(s, 1H) 以下2- [5-氯-2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_ (1-乙基-丙基)-苯 磺酰胺由2-(5-氯-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-Ν-(1-乙基-丙基)_苯磺酰胺和相應的苯 胺、按照實施例7A的方法制備
以下2-[5_氯_2-(取代的苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]_N_異-丁基-苯磺酰 胺由2-(5-氯-2-氯-嘧啶-4-基氨基)-N-環(huán)丁基-苯磺酰胺和相應的苯胺、按照實施例7A的方法制備
以下5-氯-N2-(取代的苯基)-N4- [2-(丙烷磺?；?_苯基]_嘧啶_2，4_ 二 胺由(2，5- 二氯-嘧啶-4-基)-[2-(丙烷-1-磺酰基)-苯基]-胺和相應的苯胺、按照實 施例7A的方法制備 以下5-氯-N2-(取代的苯基)-N4-[2-乙烷磺酰基-苯基]-嘧啶_2，4_ 二胺由 (2，5- 二氯-嘧啶-4-基)-[2-乙烷磺?；?苯基]_胺和相應的苯胺、按照實施例7A的方
法制備 HPLC 條件柱子YMC CombiScreen ODS-A (5um，12nm)，50x 4. 6mm I. D.流速2. Oml/min洗脫劑:A)TFA/ 水(0. 1/100)，B) TFA/ 乙腈(0. 1/100)梯度5-100%B (0-5 分鐘)檢測UV215nm以下5-氯-N2-(取代的苯基)-N4- [2-(丙烷_2_磺?；?_苯基]_嘧啶_2，4_ 二 胺由(2，5- 二氯-嘧啶-4-基)-[2-(丙烷-2-磺?；?-苯基]-胺和相應的苯胺、按照實 施例7A的方法制備 - 實施例36(左側苯胺的中間體)36-1 2~氨基-N-甲基-苯甲酰胺的制備 在室溫下向16. 3g (IOOmmol)靛紅酸酐的IOOmL H2O懸液中分批加入IOOmL 2N甲 基胺_四氫呋喃溶液(200mmol)。將反應混合物攪拌1小時，然后用AcOEt萃取。有機層用 H2O和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下濃縮，得到13. 79g所需產(chǎn)物2-氨基-N-甲基-苯 甲酰胺(92mmol，92% )，為無色固體。NMR(400MHz, CDCl3, δ ) :2· 97 (d，3H，J = 4. 52Hz)，5· 49 (bs，1H)，6· 07 (bs，1H)， 6. 64 (ddd, 1H, J = 8. 04，7. 56，1. OHz)，6. 68 (dd, 1H, J = 8. 32，1. OHz)，7. 20 (ddd, 1H, J = 8. 32，7. 56，1. 52Hz)，7. 29 (dd, 1H, J = 8. 04，1. 52Hz)。36-2 2~(2,5- 二氯-嘧啶基氨基)~N~甲基-苯甲酰胺
向15. Og (99. 8mmol) 2-氨基-N-甲基-苯甲酰胺的DMF溶液(300mL)中加入2，4， 5_三氯嘧啶(23. 8g,130mmol)和碳酸鉀(17. 9g，130mmol)。將反應混合物在75°C下攪拌5 小時，冷卻至室溫，然后倒AH20(600mL)中。過濾收集所得沉淀，然后用50% CH3CN水溶液 (200mL)洗滌并在減壓下干燥(40°C，10小時)，得到所需的2-(2，5_ 二氯-嘧啶-4-基-氨 基)-N-甲基-苯甲酰胺，為象牙色固體(26. 4g，88. 9mmol,89% )0^R(400MHz，DMS0-d6，δ) :2.81(d，3H，J = 4. 52Hz) ,7. 22 (dd, 1H, J = 8. 56, 8. 04Hz)，7. 60 (ddd, 1H, J = 8. 56，8. 56，1. 0Hz)，7. 81 (dd, 1H, J = 8. 04，1. 0Hz)，8. 48 (s, 1H)，8. 52 (d, 1H, J = 8. 56Hz)，8. 80-8. 90 (m, 1H)，12. 18 (s, 1H)。根據(jù)上述方法，制備以下化合物。36-3 2~ (5~溴_2_氯-嘧啶基氨基)~N~甲基-苯甲酰胺 NMR (400MHz，DMS0-d6，δ) 2. 81 (d, 3Η), 7. 23 (ddd, 1Η, J = 7. 54，7. 54，1. OHz)，
7.59 (ddd, 1H, J = 7. 93,8. 06,1. 52Hz)，7. 79 (dd, 1H，J = 7. 8，1. 52Hz)，8. 47 (dd, IH J =
8.06，1. OHz) ,8. 55 (s，1H) ,8. 81-8. 87 (m, 1H)，12. 0(brs, 1H)。Rf 0. 46 (正己燒AcOEt =7:3)。36-4 2~(2,5- 二氯-嘧啶基氨基)~N~乙基-苯甲酰胺 NMR (400MHz，CDCl3, δ) :1.28(t，d = 7. 04，3H)，3. 48-3. 57 (m，2H)，6. 22 (br. s, 1H)，7· 11-7. 17 (m, 1H)，7· 51 (dd, J=L 0,8. 04，1H)，7· 53-7. 61 (m, 1H)，8· 22(s, 1Η)， 8· 69-8. 74(m，1H)，11. 66(br. s，1H)。Rf:0.60(己燒AcOEt = I 1)。36-5 2~ (5~溴氯-嘧啶基氨基)~N~甲基-苯磺酰胺的制備 將5-溴-2，4- 二氯嘧啶(684mg，3. Ommo 1)和2_氨基-N-甲基-苯磺酰胺(559mg， 3. Ommol)在含有碳酸鉀(830mg，6. Ommol)的N，N-二甲基甲酰胺(IOmL)中的懸液在室溫 下攪拌23小時。加入飽和氯化銨水溶液，將混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取兩次。有機 層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷-乙酸乙酯 梯度)，得到標題化合物，為淺黃色固體。1H-NMR (CDCl3), δ (ppm) :2· 67 (d，3H)，4. 79 (q，1H)，7. 26 (s，1H)，7. 29 (ddd，1H)， 7. 66 (ddd, 1H)，7· 95 (dd, 1H)，8· 37 (s, 1Η)，8· 48 (d, 1Η)，9· 52 (s, 1Η)。Rf (正己燒乙酸乙酯 =10 3) 0. 33。根據(jù)上述方法，制備以下化合物。36-6 2~(2,5- 二氯-嘧啶基氨基)~N~甲基-苯磺酰胺 1H-NMR (400MHz, CDCl3, δ ) ；2. 67 (d, 3H) , 4. 97-5. 04 (m, 1H) , 7. 29 (ddd, 1H, J =7. 54,7. 54，1. 0Hz)，7. 66 (ddd, 1H，J = 7. 93，8. 08，1. 48Hz)，7. 94 (dd，1H，J = 8.04， 1. 52Hz), 8. 24 (s, 1H), 8. 51 (dd, IH J = 8· 06，1· OHz)，9· 64 (brs，1Η)。Rf 0. 45 (正己 烷AcOEt = 4 1)。36-7 2~(2,5- 二氯-嘧啶基氨基)~N~異丙基-苯磺酰胺
在0°C下向2-氨基-N-異丙基-苯磺酰胺(16. Ig, 75. Immol)的DMI溶液(150mL) 中分批加入氫化鈉(6. 6g，165. 3mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時后，在0°C加入2,4, 5_三氯嘧啶(20. Ig, 112. 7mmol)。進一步在室溫下攪拌5小時后，加入水，用AcOEt將混合 物萃取三次。有機層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純 化(己烷至己烷AcOEt = 4 1)，得到標題化合物，為淡棕色固體(10. 2g,38% )。1H-WrgoomHzJDCI3, δ) ； 1. 06(d，6H)，3· 43-3. 53(m，1Η)，4· 38(d，1Η)，7· 29(dd， 1H)，7. 66 (dd, 1H)，7. 98 (d, 1H)，8. 29 (s, 1H)，8. 51 (d, 1H)，9. 51 (brs, 1H)。Rf 0. 45 (正己 烷AcOEt = 4 1)。以與上述相同的方式制備以下化合物。
36-10 2~ (2~氯硝基-嘧啶基氨基)~N~甲基-苯磺酰胺的制備 將2，4_ 二氯-5-硝基-嘧啶(1. 94g，IOmmol)和2_氨基-N-甲基-苯磺酰胺 (1. 86g, IOmmol)溶解于CHCl3(30mL)中。將反應混合物在61°C下加熱2小時。蒸發(fā)溶劑， 殘余物用醚洗滌，得到標題產(chǎn)物。Rf = 0. 5(正己燒乙酸乙酯=1 1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)，δ (ppm) 2. 67 (d, 3H)，4. 6-4. 7 (m, 2H)，7. 41 (t, 1H)，7. 7 (t，1H)，8. 04 (d, 1H)，8. 15 (d, 1H)，9. 21 (s， 1H)，11. 2 (s，1H)。36-11 (2，5- 二氯,-嘧啶某)-「2_ (丙烷磺酰某)-苯某1 -胺的制各 在0°C下向2-(丙烷-1-磺?；?-苯基胺(3. 69g，18. 5mmol)的N，N_ 二甲基甲酰 胺溶液(40mL)中分批加入氫化鈉(1. 48g,37mmol)。攪拌后，加入2，4，5-三氯嘧啶(2. ImL, 18.5mmol)。將混合物在0°C攪拌30分鐘并進一步在室溫下攪拌7小時。加入飽和氯化銨 水溶液后，將混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取兩次。有機層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并 真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷-乙酸乙酯梯度)，得到標題化合物，為無色 固體。1H-NMR(CDCl3), δ (ppm) :0· 99 (t，3H)，1. 77 (d，2H)，3. 07—3. 11 (m，2H)，7. 26 (s， 1H)，7. 32 (ddd, 1H)，7. 73 (ddd, 1H)，7. 95 (dd, 1H)，8. 31 (s，1H)，8. 61 (dd, 1H)，9. 94 (bs, 1H)。 Rf(正己烷乙酸乙酯=3 1) 0. 63。根據(jù)上述方法，制備以下化合物。
實施例36-16 市售不可得的取代胺的合成3-氡某-4’ -甲氧某-4-甲某聯(lián)苯的制各向4-甲氧基苯 基-硼酸(500mg，3. 29mmol)的甲苯(5. 2mL)和乙醇(1. 3mL)溶液 中加入碳酸鉀(9IOmg, 6. 58mmol)、四(三苯基膦)鈀(228. Img, 0. 099mmol)和4-溴-1-甲 基-2-硝基苯(711mg，3. 29mmol)，并在100°C攪拌7小時。將混合物倒入水中并用乙酸乙 酯萃取兩次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，并真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱 色譜純化(正己烷乙酸乙酯=5 1)，得到4’ -甲氧基-4-甲基-3-硝基聯(lián)苯，為黃色 固體。1H-NMlU δ，ppm) 2. 62(s，3H)，3. 86(s，3H)，7· 02-6. 98 (m，2H)，7. 37 (d, 1H)，7. 54 (dd, 2H)，7. 68(dd，1H)，8. 18(d，1H)。Rf (己燒乙酸乙酯=3 1) :0· 40。將4'-甲氧基-4-甲基-3-硝基聯(lián)苯(630mg，2. 95mmol)和10%披鈀碳(63mg，
0.059mmol)在甲醇(6mL)中的懸液在氫氣氛下攪拌12小時。過濾除去鈀催化劑，將所得溶 液在真空下蒸發(fā)，得到標題化合物。1H-NMR ( δ，ppm) 2. 20(s，3H)，3. 84(s，3H)，6· 87 (d, 1H) ,6. 89 (dd, 1H) ,6. 95 (d, 2H)，7. 09 (d，1H)，7. 48 (d，2H)。Rf (正己烷乙酸乙酯=1 1) :0· 50。4-(3- -4-甲某苯甲酰某)_哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制各向4-甲基-3-硝基-苯甲酸(300mg，2. 76mmol)、N- 丁氧基羰基-哌嗪(340mg，
1.83mmol)的 DMF (3. OmL)溶液中加入三乙胺(300 μ L，3. 59mmol)、TBTU (800mg，2. 49mmol) 和HOAt (270. 5mg, 1. 99mmol)，并在室溫下攪拌24小時。將混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃 取兩次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，在真空中蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色 譜純化(正己烷乙酸乙酯=5 1)，得到4-(4-甲基-3-硝基苯甲酰基)-哌嗪-1-甲酸 叔丁酯，為無色固體。1H-NMR( δ，ppm) 1. 47(s,9H) ,2. 64(s,3H) ,3. 28-3. 88(m,8H) ,7. 42 (d, 1H)， 7. 56(dd，1H)，8. 03(d，1H)。Rf (己烷乙酸乙酯=10 1) :0· 13。通過用氫經(jīng)10%披鈀碳在甲醇溶液中還原，得到標題化合物。4~ (3~氨基-4-甲基苯基)~嗎啉的制備向 4-溴-1-甲基-2-硝基苯(225mg，1.04mmol)、嗎啉(125 μ L, 1. 25mmol)和碳酸 銫(474. 4mg, 1. 46mmol)的甲苯溶液中加入二醋酸鈀(31. 2mg，0. 139mmol)和2-( 二叔丁基 膦)聯(lián)苯(125mg，0. 403mmol)，并在100°C攪拌5小時。冷卻后，將混合物過濾，除去不溶物。將濾液倒入水中，用乙酸乙酯萃取兩次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空 蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷乙酸乙酯=5 1)，得到4-(4-甲基-3-硝基 苯基)_嗎啉，為黃色固體。1H-NMR ( δ，ppm) 2. 50(s，3H)，3· 17-3. 19(m，4H)，3· 86-3. 88(m，4H)，7· 04 (dd, lH)，7.21(d，lH)，7.47(d，lH)。Rf (己烷乙酸乙酯=5 1) :0· 20。通過用氫經(jīng)10%披鈀碳在甲醇溶液中還原，得到標題化合物。實施例37 市售不可得的取代胺的合成37-1 1-(3-甲氧基硝基-苯基)-哌啶醇的合成 向哌啶-4-醇(2. 79g,28mmol)和碳酸鉀(3. 88g,28mmol)的N, N- 二甲基甲酰胺 (40mL)懸液中加入4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯(4. 0g，23mmol)，在室溫下攪拌24小時。 將混合物倒入水中，過濾收集沉淀。將所得固體在50°C真空干燥，得到1-(3_甲氧基-4-硝 基-苯基)-哌啶-4-醇(5. 23g)，為黃色固體，產(chǎn)率89%。1H-NMR (400MHz, CDCl3, δ , ppm) 1· 54 (d，1H)，1· 62—1. 71 (m，2H)，1· 98—2. 04 (m， 2Η)，3. 22 (ddd, 4H)，3. 73-3. 80 (m, 2H)，3. 95 (s, 3H)，3. 98-4. 02 (m, 1H)，6. 33 (d, 1H)， 6. 43 (dd, 1H) ,8. 00 (d, 1H)。重復上述操作、使用適合的原料和條件，得到以下化合物。
38 :1-Γ4~(4-甲氧基_3_硝基-苯基)-哌嗪基1 -乙酮的制備 向5-溴-1-甲氧基-2-硝基苯(300mg，1. 29mmol)的二，惡,烷溶液中加入1_乙 酰基哌嗪(400mg，3. 12mmol)、碳酸銫(1. 0g，3. 07mmol)、二醋酸鈀(29. Omg, 0. 129mmol)和 2_( 二叔丁基膦)聯(lián)苯(77mg，0. 258mmol)，在100°C攪拌8小時。冷卻后，將混合物過濾，除 去不溶物。將濾液倒入水中，用乙酸乙酯萃取兩次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸 鎂干燥，真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷乙酸乙酯梯度)，得到1-[4-(4_甲 氧基-3-硝基-苯基)-哌嗪-1-基]-乙酮(319mg，44% )，為黃色固體。1H-WrgoomHzJDCI3, δ , ppm) :2· 14 (s，3H)，3. 63 (ddd，4H)，3. 63 (t，2H)，3. 78 (t， 2H)，3· 92(s，3H)，7· 03(d，1H)，7· 12 (d，1Η)，7· 41 (d，1Η)。Rf (乙酸乙酯):0· 18。39 1-(3-甲氧基_4_硝基-苯基)-哌啶_4_酮的制備
109 向4-哌啶酮鹽酸鹽單水合物(10. Og, 0. 065mol)的DMF (80mL)溶液中加入 4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯(10. Og, 0. 058mol)和碳酸鉀(20. 2g)，將混合物在70°C攪拌 20小時。過濾后，將濾液倒入H2O (約300mL)中，過濾收集所得沉淀，然后用H2O洗滌數(shù)次，得 到標題化合物(8. 98g)，產(chǎn)率61%，為橙色固體。1H-NMRGOOMHziCDCl3, δ ) :2. 65-2. 62 (4Η， m)，3. 81-3. 78 (4H, m)，3. 98 (3H, s)，6. 34 (1H, d)，6. 45 (1H, dd)，8. 05 (1H, d)。40 :1-Γ -(3-甲氧基硝基-苯基)-哌啶基1_4_甲基-哌嗪的制備
在0°C下向I-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)_哌啶-4-酮(4. 96g，0. 020mol)的二 氯乙烷(50ml)溶液中加入N-甲基哌嗪(2. 7ml, 0. 024mol)，將混合物在室溫下攪拌。4小時 后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(5. 04g，0. 024mol)，將混合物進一步在室溫下攪拌24小時。 在0°C加入IN氫氧化鈉后，將混合物倒入水中并用二氯甲烷萃取三次。合并有機層，用IN 鹽酸萃取三次。將水層用2N氫氧化鈉堿化，用二氯甲烷萃取三次。有機層用鹽水洗滌，經(jīng) 硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)，得到標題化合物，為黃色固體(6. 04g)，產(chǎn)率91%。1H-NMR (400MHz, CDCl3, δ ) 1· 70-1. 57 (2Η，m)，2· 03-1. 93 (2Η，m)，2· 29 (3Η，s)， 2. 55-2. 38 (5H, m)，2. 70-2. 56 (4H, m)，2. 97 (2H, ddd)，3. 97-3. 92 (2H, m)，3. 95 (3H, s)， 6. 31 (1H, d，)，6. 42 (1H, dd)，8. 00 (1H, d)。41 4' ~甲氧基-4-甲基-3-硝基-聯(lián)苯的制備 向4-甲氧基苯基-硼酸(500mg，3. 29mmol)在甲苯(5. 2mL)和乙醇(1. 3mL)中 的溶液中加入碳酸鉀(910mg，6. 58mmol)、四(三苯基膦)鈀(228. Img,0. 099mmol)和 4-溴-1-甲基-2-硝基苯(711mg, 3. 29mmol)，并在100°C攪拌7小時。將混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取兩次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng) 硅膠柱色譜純化(正己烷乙酸乙酯=5 1)，得到4’ _甲氧基-4-甲基-3-硝基聯(lián)苯 (630mg，79% )，為黃色固體。1H-NMR (400MHz, CDCl3, δ , ppm) :2. 62 (s，3H)，3. 86 (s，3H)，7. 02—6. 98 (m，2H)， 7. 37(d，1H)，7· 54(dd，2H)，7· 68(dd，1H)，8· 18 (d，1H)。Rf (己烷乙酸乙酯=3 1) :0· 40。42 4-(2~乙氧基二乙氧基)_1_(3_甲氧基土硝基二苯基)_哌啶的制備 向 1-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-哌啶-4-醇(300mg，1. 2mmol)的 N，N- 二甲 基甲酰胺(3. OmL)溶液中加入氫化鈉(1.52g，3.8mm0l)。攪拌后，加入2-溴乙基甲基醚 (150 μ 1，1. 6mmol)，將混合物進一步在70°C下攪拌15小時。加入飽和氯化銨水溶液后，將 混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取兩次。有機層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)。殘 余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷-乙酸乙酯梯度)，得到4- (2-甲氧基-乙氧基)-1-(3-甲 氧基-4-硝基-苯基)-哌啶(lllmg，29% )，為黃色油。1H-NMR (400MHz, CDCl3, δ , ppm) 1· 52 (t，3H)，1· 95-2. 00 (m，2H)，1· 70-1. 79 (m， 2Η)，3. 23 (ddd, 2H)，3. 58-3. 64 (m, 2H)，3. 65-3. 68 (m, 2H)，3. 64-3. 72 (m, 2H)，3. 95 (s, 3H)， 6. 31(d，lH)，6. 42(dd，lH)，8. 00(d，lH)。Rf 0. 53(正己烷AcOEt = I 1)。根據(jù)上述操作、使用適合的烷基鹵，制備以下化合物。 實施例432~甲氧基-4- (1-甲基_哌啶-4-基氧基)~苯基胺4- (3-甲氧基-4-硝基-苯氧基)-1-甲基-哌啶 在室溫下向4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯(10. 3g，60mmol)在甲苯(50mL)和25% KOH水溶液(50mL)中的溶液中加入4-羥基-1-甲基哌啶(13. 8g，120mmol)和四正丁基溴 化銨(3. 87g，12mmol)。將混合物在60°C加熱1天。將反應混合物冷卻至室溫，倒入冰水并 用乙酸乙酯萃取兩次。有機層相繼用稀HCl和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)，以定量 產(chǎn)率得到粗制化合物(13. 4g)。Rf = 0· 22(甲醇二 氯甲燒=1 4)。1H-WrGOOMHz, CDCl3, δ，ppm) 1. 84-1. 92 (m, 2H)，2. 0-2. 1 (m, 2H)，2. 3-2. 4 (m, 2H)，2. 33 (s,3H)，2. 65-2. 75 (m, 2H)， 3. 94 (s，3H)，4. 39-4. 46 (m, 1H)，6. 49 (dd, 1H)，6. 99 (d, 1H)，6. 54 (d, 1H)，7. 99 (d, 1H)。實施例442-甲氧基-4- (2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基胺
3~甲氧基-4-硝基_苯酚 在0°C下，向3-氟-4-硝基-苯酚(15. 7g，IOOmmol)的THF(300mL)溶液中加入含 30% KOMe的甲醇(49mL，2IOmmol)。將混合物加熱至輕微回流達18小時。4-「2-(3-甲氧基-4-硝基-苯氧基)_乙基嗎瞅 在室溫下向3-甲氧基-4-硝基-苯酚(1. 69g，IOmmol)的DMF(25mL)溶液中加入 4-(2_ 氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(2. 05g，1 lmmol)、K2CO3(1.52g，llmmol)、KI (332mg，2mmol)。將 混合物加熱至輕微回流達4小時。將反應混合物冷卻至室溫并用水淬滅。將所得混合物用 乙酸乙酯萃取兩次，然后相繼用水和鹽水洗滌有機層，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，真空蒸發(fā)，得到 粗制化合物，產(chǎn)率90% (2. 55g)。Rf = 0. 11(單獨的 AcOEt)。1H-WrgooMHz5CDCI3)，δ (ppm) 2. 56-2. 61 (m，4H)， 2. 83 (t,將反應混合物冷卻至室溫，緩慢用IN HCl水溶液在0°C淬滅。所得混合物用乙酸 乙酯萃取兩次，然后將有機層相繼用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，真空蒸發(fā)，得到粗制化 合物，產(chǎn)率94% (15. 9g)。Rf = 0. 22(甲醇二氯甲烷=1:4)。1H-WrGOOMHz, CDCl3)，δ (ppm) 3. 95 (s, 3H)，5. 49 (s，1H)，6. 44 (dd, 1H，J = 8. 8，2. 52Hz)，6. 54 (d, 1H, J = 2. 52Hz)，7. 96 (d, IH J = 8. 6Hz)。3. 72-3. 76 (m, 4H)，3. 94 (s,3H)，4. 18 (t, 2H)，6. 51 (dd, 1H, J = 9. 08,2. 52Hz)， 6. 56 (d, 1H, J = 2. 48Hz)，8. 00 (d, IH J = 9. 08Hz) ·2H)，實施例452-甲氧基-4- (2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基胺乙酸4-甲氧基-3-硝基_苯基酯 在室溫下向4-甲氧基苯酚(12. 4g，1 OOmmo 1)的AcOH (50mL)溶液中加入 Ac2O(50mL)。將混合物加熱至輕微回流達1. 5小時。將反應混合物冷卻至室溫，在0°C下緩 慢加入濃HNO3(d = 1. 38，IOmL)。將混合物加熱至55°C達1. 5小時。將反應混合物冷卻至室 溫并用0°C的水淬滅。所得固體用Buchner漏斗過濾，得到粗制化合物，產(chǎn)率76% (16. Og)。Rf = 0. 59 (AcOEt 正己烷=3 7)。1H-Nmr(^omHzjCDCI3) , δ (ppm) 2. 31 (s, 3H)，3. 96 (s，3H)，7. 08 (d, 1H, J = 9. 04Hz)，7. 31 (dd, 1H, J = 9. 04，3. 04Hz)，7. 96 (d, IH J =3. 04Hz)。4~甲氧基-3-硝基-苯酚 在0°C下向乙酸4-甲氧基-3-硝基-苯基酯(1.06g，5mmOl)的Et0H(20mL)溶液 中加入IN NaOH水溶液(5. 5mL)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物用AcOH淬 滅，用乙酸乙酯萃取兩次。有機層相繼用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，真空蒸發(fā)，以 定量產(chǎn)率得到粗制化合物(840mg)。Rf = 0. 59 (AcOEt 正己烷=3 7)。1H-Nmr(^omHzjCDCI3) , δ (ppm) 3. 91 (s, 3H)，6. 99 (d, 1H, J = 9. 04Hz)，7. 17 (dd, 1H, J = 9. 04，3. OOHz)，7. 38 (d, IHJ = 3. 04Hz)。4-「2-(4-甲氧基-3-硝基-苯氧基)_乙基嗎瞅 在室溫下向4-甲氧基-3-硝基-苯酚(1. 01g,6mmol)的DMF(15mL)溶液中加入 4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(1. 34g，7. 2mmol)、K2CO3 (2. 49g, 18mmol)、KI (2. 99g, 18mmol)。 將混合物加熱至80°C達4小時。將反應混合物冷卻至室溫并用飽和氯化銨水溶液淬滅。將 所得混合物用乙酸乙酯萃取兩次，然后有機層相繼用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾， 真空蒸發(fā)，以定量產(chǎn)率得到粗制產(chǎn)物(1. 70g)。Rf = 0. 14(單獨的AcOEt)。1H-NMR(400MHz， DMSO, δ，ppm) 2. 36-2. 51 (m, 4H)，2. 67 (t，J = 5. 5，2H)，3. 52-3. 60 (m, 4H)，3. 86 (s, 3H)， 4. 11 (t, J = 6. 0，2H)，7. 25-7. 29 (m，2H)，7. 46-7. 49 (m，1H)。2-甲氧基-4-(l-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基胺的制備 在氮氣氛下向4-(3-甲氧基-4-硝基-苯氧基)-1_甲基-哌啶(3. 0g,11.3mmol) 的乙醇(50mL)溶液中加入5%披鈀碳(300mg)。反應容器裝備有球形接管并通入氫，抽空 三次，直至反應處于氫氣氛下。將反應攪拌過夜。反應混合物經(jīng)硅藻土墊過濾，用甲醇洗 滌。在真空中濃縮濾液，以定量產(chǎn)率的得2-甲氧基-4-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯基 胺(2. 7g)。Rf = 0·41(甲醇二 氯甲燒=1 1)。1H-NMR (400MHz，CDCl3), δ (ppm) 1. 75-1. 86 (m, 2H)，1. 92-2. 05 (m, 2H)，2. 2-2. 32 (m, 2H)，2. 30 (s,3H)，3. 4-3. 7 (brs，2H)， 3. 82 (s，3H)，4. 1-4. 2 (m, 1H)，6. 37 (dd, 1H)，6. 46 (d, 1H)，6. 61 (d, 1H)。重復上述操作、使用適合的原料的條件，得到以下化合物。
47 4-(3~氨基_4_甲基苯甲?；?_哌嗪甲酸叔丁酯 向 4-甲基-3-硝基-苯甲酸(300mg，2. 76mmol)、N- 丁氧羰基-哌嗪(340mg， 1. 83mmol)的 DMF (3. OmL)溶液中加入三乙胺(300 μ L，3. 59mmol)、TBTU (800mg，2. 49mmol) 和HOAt (270. 5mg, 1. 99mmol)，并在室溫下攪拌24小時。將混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃 取兩次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純 化(正己烷乙酸乙酯=5 1)，得到4-(4-甲基-3-硝基苯甲酰基)-哌嗪-1-甲酸叔丁 酯，為無色固體。1H-NMR( δ，ppm) 1. 47(s,9H) ,2. 64(s,3H) ,3. 88-3. 28(m,8H) ,7. 42 (d, 1H)， 7. 56(dd，1H)，8. 03(d，1H)。Rf (己烷乙酸乙酯=10 1) :0· 13。通過用氫經(jīng)10%披鈀碳于甲醇溶液中還原，得到標題化合物。48 4-(3~氨基_4_甲基苯基)_嗎啉的制備
向 4-溴-1-甲基-2-硝基苯(225mg, 1. 04mmol)、嗎啉(125 μ L, 1. 25mmol)和碳酸 銫(474. 4mg, 1. 46mmol)的甲苯懸液中加入二醋酸鈀(31. 2mg，0. 139mmol)和2-( 二叔丁基 膦)聯(lián)苯(125mg，0. 403mmol)，在100°C攪拌5小時。冷卻后，將混合物過濾，除去不溶物。 將濾液倒入水中，用乙酸乙酯萃取兩次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空 蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化(正己烷乙酸乙酯=5 1)，得到4-(4-甲基-3-硝基 苯基)-嗎啉，為黃色固體。IH-NMR ( δ，ppm) 2. 50(s，3H)，3· 19-3. 17(m，4H)，3· 88-3. 86(m，4H)，7· 04 (dd, lH)，7.21(d，lH)，7.47(d，lH)。Rf (己烷乙酸乙酯=5 1) :0· 20。通過用氫經(jīng)10%披鈀碳于甲醇溶液中還原，得到標題化合物。49 2~ Γ5-氯_2_ (2~甲氧基嗎啉基-苯基氨基)-嘧啶基氨基1 -苯 甲酸的制備 向1.0g(3. 37mmol)2-(2，5-二氯-嘧啶-4-基氨基)-N-甲基-苯甲酰胺的15mL 乙酸懸液中加入2-甲氧基-4-嗎啉代苯胺二鹽酸鹽(1. 9g，6. 73mmol)6. OmL氯化氫的IN乙 醇溶液(6. Ommol)。將反應混合物在120°C下攪拌16小時并冷卻至室溫后，加入NaHCO3水 溶液，調節(jié)酸度為PH 5至pH 6。過濾收集所得沉淀，減壓干燥，得到2-[5_氯-2-(2-甲氧 基-4-嗎啉-4-基-苯基-氨基)-嘧啶-4-基氨基]-苯甲酸(970mg，2. 12mmol,63% ), 為象牙色固體。NMR (400MHz，DMS0-d6，δ ) :3. 10-3. 20 (m，4Η)，3. 78 (s，3Η)，3. 70-3. 80 (m，4Η)，
6.52 (dd, 1H, J = 8. 56,2. 52Hz)，6. 67 (d, 1H, J = 2. 52Hz)，7. 08 (dd, 1H, J = 8. 04，8. 04Hz)，
7.39 (d, 1H, J = 8. 56Hz)，7. 35-7. 45 (m, 1H)，7. 99 (dd, 1H, J = 8. 04，1. 52Hz)，8. 14 (s, 1H)，
8.28 (s，1H) ,8. 70-8. 80 (m, 1H)。實施例50 磺酰胺部分如下制備2-氨某-4-氯,-5-甲某-苯磺酰氯,的制各向2-氨基-5-氯-4-甲基-苯磺酸(3. Og, 1. 35mmol)的二氯乙烷(IOmL)溶液中 加入磺酰氯(4. 4mL, 3. 83mmol)并在60°C攪拌。1小時后，加入亞硫酰氯(1. 3mL)，將混合物 進一步在10(TC攪拌7.0小時。將混合物倒入冰水，用醚萃取三次。有機層用水、然后用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)。1H-WR ( δ，ppm) 2. 35 (s，3H)，6. 68 (s，1H)，7. 75 (s，1H)。使該取代的磺酰氯與適合的胺反應。例如與甲基胺反應后，形成2-氨基-5-氯-4， N-二甲基苯磺酰胺。實施例512-「5-溴-2- (2-甲氧基嗎啉基-苯基氨基)-嘧啶基氨基1 ~N, N- 二 甲基-苯磺酰胺的制備 向2-[5-溴-2-(2-甲氧基_4_嗎啉_4_基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨基]-N-甲 基-苯磺酰胺(實施例3-19) (1. Og, 1. 82mmol)的DMF(IOmL)溶液中加入碳酸鉀(300mg,
2.17mmol)和碘代甲烷(116 μ 1，1. 86mmol)。將所得懸液在50°C攪拌1小時。向反應混合 物中加入水，用乙酸乙酯萃取三次。有機層用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮。殘余 物經(jīng)氧化鋁柱色譜純化(AcOEt)，得到標題化合物(72811^，71%產(chǎn)率)。NMR (400MHz，CDCl3, δ) :2. 74 ((s，6Η)，3. 05-3. 18 (m，4Η)，3. 84-3. 93 (m，4Η)，
3.88 (s，3H)，6. 43 (dd, 1H)，6. 53 (d, 1H)，7. 24 (m, 1H)，7. 31 (s，1H)，7. 56 (m, 1H)，7. 87 (dd, 1H)，8. 05 (d, 1H)，8. 21 (s，1H)，8. 49 (d, 1H)，8. 49 (d, 1H)，9. 27 (s, 1H)。Rf 0. 23 (AcOEt 己 烷=1 1)。實施例522-Γ5-溴-2-(2_甲氧基_4_嗎啉_4_基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨 基1 -5-氟-N-甲基-苯磺酰胺的制備 7-氟-1,1-二氧代-1,4-二氫-2H-1 λ [苯并「1，2，41 噻二嗪 酮的制各在0°C下向氯磺酰異氰酸酯(1. 2mL, 13. 5mmol)的硝基乙烷(IOmL)溶液中滴加 4-氟苯胺(1. Og,8. 97mmol)，將反應混合物攪拌30分鐘。在0°C下向該溶液中加入氯化鋁 (1. 3g，9. 87mmol)，將混合物在100°C攪拌1小時。冷卻至室溫后，加入水，將混合物用乙酸 乙酯萃取兩次。有機層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓濃縮。過濾收集所得固體，用醚洗滌，得到淺灰色固體(803. 9mg,41% )。NMR (400MHz，DMS0_d6，δ ) -J. 22-7. 28 (m，1H)，7. 45-7. 57 (m，1H)，7· 60 (m, 1Η)， 11. 15-11. 30(m，1Η)。Rf :0. 43 (MeOH AcOEt=I 5)。7-氟-2-甲基-1,1-二氧代-1,4-二氫-2Η_1λ6-苯并「1,2,41 噻二嗪 酮的 制備向7-氟-1，1-二氧代-1，4-二氫-2Η-1_λ6-苯并[1,2,4]噻二嗪 _3_ 酮(5. 19g， 24. Ommol)的DMF(50mL)溶液中相繼加入氫化鈉(1.04g,26. Ommol)和碘代甲烷(1. 5mL， 24. Ommol)，將混合物在70°C攪拌1小時。冷卻至室溫后，將混合物倒入水中，過濾收集沉 淀，相繼用水和己烷洗滌，得到淺灰色固體(5. 38g,94% )。NMR (400MHz，DMS0-d6，δ) :3. 32 (s，3Η)，7. 44 (dd，1Η)，7. 75 (ddd，1Η)，7. 94 (dd， 1H)。Rf(Me0H AcOEt = 1:5) :0· 21 ；Rf :0· 39 (己燒AcOEt = 1 1)。2-氨基-5-氟-N-甲基_苯磺酰胺的制備將6.79g 7-氟-2-甲基-1，1_ 二氧代-1，4_ 二氫-2Η_1λ6-苯并[1，2，4]噻二 嗪-3-酮(29. 5mmol)溶解于20%氫氧化鈉水溶液中，將所得溶液在100°C攪拌13. 5小時。 將混合物冷卻至室溫并倒入水。加入78mL 5M HCl水溶液，過濾收集沉淀，用水洗滌，得到 淺紫色固體(3. 96g，65% )。NMR (400MHz, CDCl3, δ ) 2. 60 (d, 3H) , 4. 55-4. 82 (m, 3H) , 6. 74 (dd, 1Η), 7· 05-7. 12(m，1Η)，7· 45(dd，1Η)。Rf :0· 41 (己燒AcOEt = I 1)。2- (5-溴-2-氯-嘧啶-4-基氨基)~5~氟甲基-苯磺酰胺以與實施例B所述相同的方式進行嘧啶和2-氨基-5-氟-N-甲基-苯磺酰胺的 反應。NMR (400MHz, CDCl3, δ ) :2. 67 (d，3Η)，4. 56 (m，1Η)，7. 36-7. 45 (m，1Η)，7. 68 (dd， 1H)，8· 39(s，1H)，8· 42(dd，1H)，9· 26(s，1H)。Rf 0· 59 (己燒AcOEt=I 1)。2-Γ5-溴-2_(2-甲氧基_4_嗎啉_4_基-苯基氨基)-嘧啶_4_基氨 基Ι-5-g-N-甲基-苯！？黃酉糾安根據(jù)實施例A所述方式引入取代的苯胺。NMR (400MHz, CDCl3, δ ) :2. 65 (d，3Η)，3. 09-3. 16 (m，4Η)，3. 87 (s，3Η)，4. 50 (q， 1H)，6. 41 (dd, 1H)，6. 52 (d, 1H)，7. 25-7. 33 (m, 2H)，7. 69 (dd, 1H)，7. 95 (d, 1H)，8. 20 (s, 1H)， 8. 37(dd，1H)，8. 70(s，1H)。Rf 0. 30 (己燒AcOEt = I 1)。實施例53 =FAK試驗所有步驟均在96-孔黑色微量滴定板中進行。將純化的重組六組氨酸標記的人 FAK 激酶域用稀釋緩沖液(含 50mM HEPES, ρΗ7· 5、0· 01 % BSA、0. 05% Tween-20 的水)稀 釋至濃度為94ng/mL(2. 5nM)。通過混合10 μ L 5χ激酶緩沖液(含250mM HEPES, pH7. 5、 50 μ M Na3VO4,5mM DTTUOmMMgCl2,50mM MnCl2^O. 05% BSA、0. 25% Tween-20 的水)、20yL 水、5 μ L4 μ M生物素化的肽底物(Biot-Y397)的水溶液、5 μ L供試化合物的DMSO溶液和 5 μ L重組酶溶液，制備反應混合物，并在室溫下孵育30分鐘。通過加入5 μ L含5 μ M ATP的 水啟動酶反應，并將混合物在37°C孵育3小時。加入200 μ L檢測混合物(含InM Eu_PT66、 2. 5 μ g/mL SA-(SL)APC,6. 25mMEDTA的稀釋緩沖液)終止反應，在室溫下孵育30分鐘后，通 過ARV0sx+L (Perkin Elmer)測量銪至別藻藍素的FRET信號。使用665nm與615nm的熒光強度比例作為用于數(shù)據(jù)分析的FRET信號，以便抵消供試化合物的消色作用。結果表示為酶 活性的抑制百分數(shù)。DMSC^PO. 5M EDTA分別用作0%和100%抑制的對照。使用OriginPro
6.1程序(OriginLab)、通過非線性曲線擬合分析測定IC5tl值。Biot-Y397肽(生物素-SETDDYAEIID銨鹽)被設計為具有與人S392至D402區(qū)域 相同的氨基酸序列(GenBank Accession Number L13616)并按照標準方法制備。純化的重組六組氨酸標記的人FAK激酶域以以下方法得到通過PCR擴增用 5，PCR 弓丨物(ATGGCAGCTGCTTACCTTGAC)和 3，PCR 弓丨物(TCAGTGTGGTCTCGTCTGCCC)從人 胎盤 Marathon-Ready eDNA(Clontech, No. 7411-1)分離全長人 FAK cDNA，并亞克隆至 pGEM-T載體(Promega，No. A3600)。用AccIII消化后，用Klenow片段處理純化的DNA片 段。將該cDNA片段用BamHI消化并克隆至預先用BamHI和Stu I切割的pFastBacHTb質 粒(Invitrogen Japan K. K.，Tokyo)中。對所得質粒 hFAK KD (M384-G706) /pFastBacHTb 測序以確證其結構。所得DNA編碼364氨基酸蛋白，其含有六組氨酸標記、間隔區(qū)和N-末 端的rTEV蛋白酶裂解位點，以及位置29至351的FAK(Met384_Gly706)激酶域。使用MaxEfficacy DHlOBac E. coli細胞將供體質粒移位至桿狀病毒基因組。通過 Bac-to-BaC 桿狀病毒表達系統(tǒng)(Invitrogen)中所述的簡單堿性裂解方案制備Bacmid DNA。基于供應商(CellFECTIN ，Invitrogen)提供的方案轉染Sf9昆蟲細胞。通過 SDS-PAGE和使用抗人FAK單克隆抗體(來自Transduction實驗室的克隆#77)的Western 印跡法分析FAK在各溶解物中的表達。將顯示最高表達的病毒克隆通過感染至Sf9細胞進一步擴增。ExpresSF+ 細胞(Protein Sciences Corp.，Meriden，Connecticut，USA)中的表達獲得幾乎不降解的 高水平蛋白。將細胞溶解產(chǎn)物加載于填充有硫酸鎳并用50mM HEPES pH 7.5,0. 5M NaCl和 IOmM 咪唑平衡的 HiTrap Chelating Sepharose HP (Amersham Biosciences)柱上。所捕 獲的蛋白用含遞增量咪唑的HEPES緩沖液/NaCl洗脫，并進一步通過在50mM HEPESpH 7.5、 10%甘油和ImM DTT中透析而純化。實施例54 無細胞ZAP-70激酶試騎ZAP-70激酶試驗基于時間分辨熒光共振能量轉移(FRET)。將80ηΜΖΑΡ_70與80ηΜ Lck(淋巴樣T-細胞蛋白酪氨酸激酶)和4μ M ATP于ΖΑΡ-70激酶緩沖液(20mM Tris, pH
7.5、10 μ M Na3VO4UmM DTT, ImMMnCl2^O. 01 % BSA.0. 05 % Tween-20)中、在室溫下、于硅 化聚丙烯試管中孵育1小時。然后，加入選擇性Lck抑制劑PP2(1-叔丁基-3-(4-氯苯 基)-IH-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺；Alexis Biochemicals)(終濃度為 1. 2μΜ)并進一 步孵育10分鐘。將10 μ L該溶液與作為底物的IOyL生物素化肽LAT-11 (1 μ Μ)和20 μ L抑 制劑的系列稀釋液混合并在室溫下孵育4小時。用EDTA在檢測緩沖液(20mM Tris,pH 7. 5、 0. 01% BSA、0. 05% Tween-20)中的10 μ L IOmM溶液終止激酶反應。加入50 μ L銪標記的 抗磷酸酪氨酸抗體(EU-PT66 ；終濃度為0. 125ηΜ)和50 μ L含抗生物素蛋白鏈菌素-別藻藍 素(SA-APC ；終濃度為40ηΜ)的檢測緩沖液。在室溫下孵育1小時后，于VictorfMultilabel 計數(shù)儀(wallac)中于665nm處測量熒光。在供試樣品和ATP不存在時獲得背景值(低對 照)并將其從所有數(shù)值中減去。供試樣品不存在時獲得的信號作為100% (高對照)。將 供試化合物存在時獲得的抑制計算為高對照的百分抑制。導致50%抑制的供試化合物濃度 (IC50)從劑量-效應曲線測定。在該試驗中，本發(fā)明活性劑的IC5tl值在IOnM至2μΜ、優(yōu)選IOnM至IOOnM范圍內。重組ZAP-70激酶如下獲得由Jurkat cDNA文庫、通過RT-PCR擴增編碼全 長人 ZAP-70 的核酸(GenBank#L05148)并克隆至 pBluescript KS 載體(Stratagene， California, USA)中。ZAP_70cDNA插入物的真實性通過全序列分析驗證。然后使用 該供體質粒構建重組桿狀病毒轉移載體，基于還具有N-末端六組氨酸標記特征的質粒 pVL1392(Pharmingen, California, USA)。在用 AcNPV 病毒 DNA 共轉染后，經(jīng)由蝕斑-純 化獲得10個獨立的病毒分離物，小規(guī)模擴增，隨后通過Western印跡法、使用市售可得 的抗-ZAP-70 抗體(克隆 2F3. 1，Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY, USA)對重 組ZAP-70表達進行分析。進一步擴增一個陽性重組蝕斑后，制備經(jīng)滴定的病毒原種并 用于感染Sf9細胞，該細胞在所定義的優(yōu)化條件下生長于無血清SF900II培養(yǎng)基(Life Technologies, Basel,瑞士)中。通過親和色譜、用Ni-NTA柱(Qiagen，Basel，瑞士)從感染的Sf9細胞的溶解產(chǎn) 物分離ZAP-70蛋白。重組His-標記的 ZAP-70 也可從 PanVera LLC, Madison, Wisconsin, USA 獲得。LAT-Il (Τ細胞激活連接物)在ZAP-70激酶試驗中用作底物的生物素化肽 LAT-Il (生物素-EEGAPDYENLQELN)以類似于肽合成的已知方法制備。使用含哌啶20%的 DMF將其中Asn含量約0. 5mmol/g的Fmoc-Asn(Trt)-氧甲基-4-苯氧基甲基-(聚苯乙 烯-1 % - 二乙烯基-苯)共聚物的N- α Fmoc基團裂除。使用含DIP⑶I和HOBt的DMF將 四當量側鏈被保護[Asp (OtBu)、Glu (OtBu)、Asn (Trt)、Gln (Trt)和 Tyr (tBu)]的 Fmoc-氨 基酸的每個氨基基團偶聯(lián)。肽鏈裝配完全后，如前所述用含哌啶的DMF除去末端Fmoc-保護 基。然后，使用含DIP⑶I和HOBt的DMF、使用四當量試劑、在室溫下將L⑴-生物素基-氨 基己酸偶聯(lián)到末端氨基達四天。使用由TFA中5%十二烷基甲基硫醚和5%水組成的試劑 在室溫下達2小時，將肽從樹脂支持物上裂除，同時除去所有側鏈上的保護基。濾出樹脂微 粒，用TFA洗滌，通過加入10至20體積的二乙醚從合并的濾液中沉淀出產(chǎn)物，用醚洗滌并 干燥。產(chǎn)物經(jīng)C-18大孔硅膠柱色譜、使用含乙腈的2%磷酸水溶液梯度純化。收集含有純 化合物的級分，經(jīng)陰離子交換樹脂(Biorad，AG4-X4醋酸鹽型)過濾并凍干，得到標題化合 物。MS :1958. (ΚΜ-ΗΓ1。實施例55 =FAK的磷酸化水平通過夾層ELISA對FAK在Tyr397處的磷酸化水平進行定量。將鼠乳癌4T1細 胞(Ix IO5)接種于96-孔培養(yǎng)板的各孔中，并在有或沒有各種濃度的抑制劑存在下于含 0. 5% BSA的Dulbecco修飾eagle培養(yǎng)基中孵育1小時。除去培養(yǎng)基，將細胞溶解于200 μ L 50mM Tris-HCl，pH7. 4，其含有 NP-40、0. 25%脫氧膽酸鈉、150mM NaClUmM EDTAUmM PMSF、ImM Na3VO4, ImM NaF、1 μ g/mL 抑酶肽、1 μ g/mL 亮肽素禾口 1 μ g/mL 抑胃肽。離心后，對 上清液進行夾層ELISA，以定量磷酸化的FAK和總FAK。將細胞溶解產(chǎn)物應用于96-孔平底 ELISA板，該板已預先在4°C下以IOOyL/孔用4 μ g/mL鼠單克隆抗-FAK抗體(克隆77， Becton DickinsonTransduction Laboratories)于含 150mM NaCl 白勺 50mM Tris-HCl, pH 9· 5 中包被 18/]、時，并用 300 μ L BlockAce (Dainippon Pharmaceuticals Co.)的 1 4 水稀釋液在室溫下封閉2小時。用TBSN(20mM Tris-HCl, pH 8. 3，含300mM NaCl,0. 1% SDS 和 0. 05% NP-40)洗滌后，用 IOOyL 1 μ g/ml 抗-FAK 多克隆抗體(#65-6140，UpstateBiology Inc.)檢測總 FAK，用 100 μ L含 0. 25 μ g/μ L抗-磷酸化FAK (Υ397)抗體(Affinity BioReagents, #0PA1-03071)的BlockAce 1 10水稀釋液檢測磷酸化FAK。在室溫下孵育 1小時后，將板用TBSN洗滌，并將用BlockAce的1 10水稀釋液稀釋的100 μ L生物素化 抗-兔 IgG(#65-6140，Zymed Laboratolies Inc.)在室溫下孵育 1 小時。用 TBSN、ABTS 溶 液洗滌后，使用底物試劑盒(#00-2011，Zymed LobolatoriesInc.)進行顯色。在室溫下孵 育20分鐘后，測量405nm處的吸收值。測定引起FAK磷酸化水平減少50%的化合物濃度。實施例56 不依賴帖壁腫瘤細胞牛長試騎將鼠乳癌4T1 細胞(5xl03)接種于 96-孔 Ultra 低附著板(#3474，CorningInc.) 中的IOOyL含10% FBS的Dulbecco，s修飾eagle培養(yǎng)基中。將細胞培養(yǎng)2小時并加入 各種濃度的抑制劑，DMSO終濃度為0. 1%。48小時后，用使用水溶性四唑鹽WST8的細胞計 數(shù)試劑盒-8 (Wako Pure Chemical)測定細胞生長。向每孔加入20 μ L試劑并將細胞進一 步培養(yǎng)2小時。測量450nm處的光密度。確定引起50%生長抑制的化合物濃度。實施例57 體外T細胞遷移試騎FAK抑制劑對免疫細胞運動性的抑制活性通過以下體外研究確證。S卩，將Jurkat T人白血病細胞系以IX IO5細胞置于具有8μπι孔的Fluoroblok(Beckton Dickinson,UK) 的上室中，依賴胎牛血清(10% FBS)濃度梯度，使其在37°C、95%空氣-5% CO2中經(jīng)四小時 培養(yǎng)進行遷移。通過用HBSS中8 μ g/ml的鈣黃綠素-AM(Molecular Probes，荷蘭)標記1 小時，以遷移至下室中的細胞數(shù)評價細胞運動性。就FAK抑制劑的評價而言，上室和下室中 均加入各種濃度的FAK抑制劑(0. 03-1 μ Μ)。通過用Ascent (Ex :485nm，Em :538nm)測量的 熒光強度相比介質處理組的減量計算IC5tl值。實施例58 采用細胞/‘捕獲ELISA”i式去i式駘對IGF-I i秀導的IGF-IR的活件該試驗如下進行對于該試驗而言，使用如Kato等，J. Biol. Chem. 268, 2655-61,1993所述制備的 用人 IGF-IR cDNA(完全人 IGF-IR cDNA =GenBank Acc. No. NM_000875)轉染的 NIH-3T3 鼠 成纖維細胞。將過度表達人IGF-IR的細胞在含有10%胎牛血清(FCS)的Dulbecco，s極 限必需培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)。進行試驗時，將5，000細胞/孔于第1天接種于96-孔板 (Costar#3595)中的正常生長培養(yǎng)基中并在37°C標準CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天。在第3 天細胞的密度不超過70-80%。在第3天，棄去培養(yǎng)基，將細胞在極限培養(yǎng)基(DMEM，含0. 5% FCS)中孵育24小時。加入式I化合物[由IOmM 二甲亞砜(DMSO)儲備液開始]，使終濃度 為0. 01,0. 03,0. 1,0. 3、1、3和10 μ Μ,以測定IC50值。將細胞在式I化合物存在下孵育90 分鐘。之后用50 μ 1 IGF-I (孔中IGF-I的終濃度=10ng/ml ； IGF-I得自Sigma ；產(chǎn)品編號 I 3769)刺激細胞并在37C孵育10分鐘。棄去培養(yǎng)基，將細胞用PBS/0(=不含CaCl2的磷酸鹽緩沖的鹽水)洗滌兩次，用 50 μ 1/孑L RIPA-緩沖液[50mM Tris 'HCl, pH = 7. 2,120mM NaClUmM EDTA、6mM EGTAU % NP-40、20mM NaF、lmM芐脒、15mM焦磷酸鈉、ImM苯基甲基磺酰氟(PMSF)和0. 5mM Na3VO4]在 冰上溶解15分鐘，并使用96-孔平板振蕩器振蕩10分鐘(=細胞提取物)。將Packard HTRF-96黑色板用50 μ 1濃度為5 μ g/ml的IGF-IR單克隆抗體(mAB) (Santa Cruz ；分類號SC_462)在4°C包被過夜。將板用含0. 05% (v/v)Tween-20的磷酸鹽 緩沖的鹽水(PBS)洗滌兩次并用超純(nanopure)水洗滌一次。在室溫(RT)下用含3%牛血清白蛋白(BSA)的 TBS-T 緩沖液(20mM Tris 'HCl,pH = 7. 6,137mM NaCl,0. 05% Tween20) 封閉2小時。封閉后，將板用超純水洗滌一次。將細胞提取物(40 μ 1/孔)吸移至經(jīng)包被的Packard板上，以及40 μ 1與堿性磷 酸酶(AP)綴合的抗磷酸酪氨酸鼠mAB ΡΥ_20(用RIPA緩沖液1 1000稀釋，抗體得自 Transduction Labs ；分類號P11120)。將提取物和二抗在4 °C孵育2小時后，棄去提取物，將板用含0.05% (ν/ν) Tween-20的PBS洗滌兩次，用超純水洗滌一次。然后加入90 μ 1/孔的AP底物(CDP-Star，得自Tropix ；分類號MS100RY)并將板 在室溫暗處下孵育45分鐘，然后于Packard Top Count微量滴定板閃爍計數(shù)儀中測量AP 活性。經(jīng)由線性回歸分析、使用GraphPad Instat程序(GraphPad Software, USA)計算式 I化合物的IC5tl值。發(fā)現(xiàn)IC5tl值處于5nM至1 μ Μ、特別是5ηΜ至300ηΜ范圍內。實施例59 在裸鼠異種移植物模型中的體內活性將雌性或雄性BALB/c 裸鼠(5-8 周齡，Charles River Japan, Inc.，Yokohama,日 本)保存于無菌條件下，水和食物隨意獲取。在Forene 麻醉(Abbott Japan Co.，Ltd.， Tokyo,日本)下向鼠的左右肋腹皮下注射腫瘤細胞(人上皮細胞系MIA PaCa-2 ；European Collection of Cell Cultures (ECACC)，Salisbury，Wiltshire，UK，分類號 85062806 ；細胞 系得自一名65歲老年高加索男性；未分化的人胰腺癌細胞系)，以誘發(fā)腫瘤。當平均腫瘤 體積達到約100mm3時，開始用供試化合物治療。每周兩次以及最后一次治療后1天，通過 測定兩個垂直軸的長度測量腫瘤的生長。根據(jù)公開的方法(參見Evans等，Brit. J. Cancer 45,466-8,1982)計算腫瘤體積。將抗腫瘤功效確定為經(jīng)治療動物腫瘤體積的平均增長除以 未治療動物(對照)腫瘤體積的平均增長，之后乘以100，表示為ΔΤ/C ]。將腫瘤消退 報告為受治療動物腫瘤體積的平均變化除以治療開始時的平均腫瘤體積，再乘以100，表示 為消退率]。無論用藥與否，每日口服施用供試化合物。作為細胞系MIA PaCa-2的替代選擇，也可以以相同方式使用另一種細胞系，例 如-4T1乳腺癌細胞系(ATCC號CRL-2539 ；也可參見Cancer. 88 (12增刊)， 2979-2988，2000)，雌性BALB/c小鼠(注射進入乳房脂墊)?；谶@些研究，根據(jù)本發(fā)明的式I化合物顯示出特別是針對應答酪氨酸激酶抑制 的增殖性疾病的治療功效。實施例60 片劑以常規(guī)方式制備了包含50mg活性成分、例如實施例1-131所述的式I化合物之一 并具有如下組成的片劑。組成
活性成分50mg
小麥淀粉150mg
乳糖125mg
膠態(tài)硅酸12. 5mg
滑石22. 5mg
硬脂酸鎂2. 5mg
總計362. 5mgM^i 將活性成分與一部分小麥淀粉以及乳糖和膠態(tài)硅酸混合，并將該混合物過 篩。將另一部分的小麥淀粉在水浴上用五倍量的水制成糊狀，并將粉末混合物與所述糊狀 物捏制在一起，直至獲得略具塑性的團塊。將塑性團塊壓制通過篩目尺寸約3mm的篩子并干燥，將所得干顆粒再次過篩。然 后將其余的小麥淀粉、滑石和硬脂酸鎂混入并將混合物壓制形成重145mg并具有斷裂刻痕 的片劑。實施例61 軟膠囊以常規(guī)方式制備了 5000粒每粒包含50mg活性成分、例如實施例1_131所述的式 I化合物之一的軟明膠膠囊?？钚猿煞?50gLauroglykol 2 升M^ 將微粉化的活性成分懸浮于Lauroglykol (丙二醇月桂酸酯， GattefosseS. A.，Saint Priest，法國)并在濕粉碎機中研磨至粒徑約1至3 μ m。然后使 用膠囊填充機將各份0. 419g混合物填充至軟明膠膠囊中。生物學結果
權利要求
式I化合物及其鹽，其中每個R0、R1、R2和R3獨立地為氫、C1 C8烷基、C2 C8鏈烯基、C2 C8炔基、C3 C8環(huán)烷基、C3 C8環(huán)烷基C1 C8烷基、C5 C10芳基C1 C8烷基、羥基C1 C8烷基、C1 C8烷氧基C1 C8烷基、氨基C1 C8烷基、鹵代C1 C8烷基、未取代或取代的C5 C10芳基、包含1、2或3個選自N、O和S的雜原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、羥基、C1 C8烷氧基、羥基C1 C8烷氧基、C1 C8烷氧基C1 C8烷氧基、鹵代C1 C8烷氧基、未取代或取代的C5 C10芳基C1 C8烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基或未取代或取代的雜環(huán)基C1 C8烷氧基、未取代或取代的氨基、C1 C8烷硫基、C1 C8烷基亞磺?；1 C8烷基磺?；?、C5 C10芳基磺酰基、鹵素、羧基、C1 C8烷氧基羰基、未取代或取代的氨甲酰基、未取代或取代的氨磺?；?、氰基或硝基；或R0和R1、R1和R2和/或R2和R3和它們所連接的碳原子一起形成包含0、1、2或3個選自N、O和S的雜原子的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)；R4是氫或C1 C8烷基；每個R5和R6獨立地為氫、C1 C8烷基、C1 C8烷氧基C1 C8烷基、鹵代C1 C8烷基、C1 C8烷氧基、鹵素、羧基、C1 C8烷氧基羰基、未取代或取代的氨甲?；?、氰基或硝基；且每個R7、R8、R9和R10獨立地為C1 C8烷基、C2 C8鏈烯基、C2 C8炔基、C3 C8環(huán)烷基、C3 C8環(huán)烷基C1 C8烷基、C5 C10芳基C1 C8烷基、羥基C1 C8烷基、C1 C8烷氧基C1 C8烷基、氨基C1 C8烷基、鹵代C1 C8烷基、未取代或取代的C5 C10芳基、未取代或取代的包含1、2或3個選自N、O和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基、羥基、C1 C8烷氧基、羥基C1 C8烷氧基、C1 C8烷氧基C1 C8烷氧基、鹵代C1 C8烷氧基、未取代或取代的C5 C10芳基C1 C8烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基或未取代或取代的雜環(huán)基C1 C8烷氧基、未取代或取代的氨基、C1 C8烷硫基、C1 C8烷基亞磺?；1 C8烷基磺?；?、C5 C10芳基磺酰基、鹵素、羧基、C1 C8烷氧基羰基、未取代或取代的氨甲?；?、未取代或取代的氨磺酰基、氰基或硝基；其中R7、R8和R9彼此獨立地也可以為氫；或R7和R8、R8和R9和/或R9和R10和它們所連接的碳原子一起形成包含0、1、2或3個選自N、O和S的雜原子的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)；A為C或N。FSA00000202748000011.tif
2.權利要求1的式I化合物，其中每個R°或R2獨立地為氫、Q-Q烷基、羥基Q-Q烷基、鹵代Q-Q烷基、未取代或取代的 C5-C10芳基、包含1或2個選自N、0和S的雜原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、CfC8 烷氧基、鹵代Ci-q烷氧基、c5-c10芳氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜 環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、crc8烷基磺酰基、鹵素、未取代或取代的氨甲酰 基、未取代或取代的氨磺?；?；R1為氫、Q-Q烷基、羥基CfQ烷基、鹵代Q-Q烷基、未取代或取代的C5-C1(1芳基、包 含1或2個選自N、0和S的雜原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、CrC8烷氧基、鹵代 CfC8烷氧基、C5-C1(1芳氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基(^-(8烷氧 基、未取代或取代的氨基、Ci-q烷基磺?；?、鹵素、未取代或取代的氨甲?；⑽慈〈蛉〈?的氨磺?；?；R3為氫、Ci-q烷基、羥基Ci-q烷基、鹵代Ci-q烷基、未取代或取代的包含1或2個選 自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基、CfC8烷氧基、取代的氨基、CfC8烷基磺酰基、C5-C1Q 芳基磺酰基、商素、羧基、取代或未取代的氨甲?；?、未取代或取代的氨磺?；换蛎繉ο噜?的取代基 R° 和 R1 或 R1 和 R2 或 R2 和 R3 為-CH2-NH-C0-、-CH2-CH2-NH-C0-、-CH2-C0-NH-、-CH2-ch2-co-nh-、-ch2-nh-so2-、-ch2-ch2-nh-so2-、-ch2-so2-nh-、-ch2-ch2-so2-nh-、-ch2-ch2-so2-、-CH2-CH2-CH2-S02-、-0-CH2-0-或-0-CF2-0-以及其中NH中的H被Q-Q烷基替代的所述取 代基對；R4為氫或crc8烷基；R5為氫《rQ烷基、鹵素、鹵代Q-Q烷基、氰基或硝基； R6為氫;每個R7和R9獨立地為氫、Q-Q烷基、羥基CfQ烷基、鹵代CfQ烷基、未取代或取代的 C5-C10芳基、包含1或2個選自N、0和S的雜原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、CfC8 烷氧基、鹵代Ci-q烷氧基、c5-c10芳氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜 環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、crc8烷基磺?；?、鹵素、未取代或取代的氨甲酰 基、未取代或取代的氨磺酰基；R8為氫、CfC8烷基、羥基Ci-Q烷基、鹵代Ci-Q烷基、C5-C1Q芳基、包含1或2個選自N、 0和S的雜原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、CrC8烷氧基、鹵代Ci-q烷氧基、C5-C10 芳氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代 的氨基、(:「(；烷基磺酰基、鹵素、未取代或取代的氨甲?；?、未取代或取代的氨磺?；⑶杌?或硝基；且R10為Ci-q烷基、羥基Ci-q烷基、鹵代Ci-q烷基、Ci-q烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基 crc8烷氧基、未取代或取代的氨基、鹵素、羧基、氨甲?；蛭慈〈蛉〈陌被酋；?；或每對相鄰的取代基R7和R8或R8和R9或R9和R1Q為-NH-CH = CH-、-CH = CH-NH-, -NH-N = CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2_CH2-、-CH2-CH2-CH2_CH2-、-CH2_CH2-0-、-CH = CH-0-、-O-CH2-O-或-O-CF2-O-； A為C或N。
3.權利要求1的式I化合物，其中每個R°或R2獨立地為氫、Q-Q烷基、鹵代Q-Q烷基、包含1或2個選自N、0和S的雜 原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、Ci-q烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代 或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基或鹵素；R1為氫、CrC8烷基、鹵代Q-C；烷基、包含1或2個選自N、0和S的雜原子的未取代或 取代的5或6元雜環(huán)基、Ci-q烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基 CrC8烷氧基、未取代或取代的氨基、鹵素；R3為氫、CrC8烷基、鹵代Q-Q烷基、未取代或取代的包含1或2個選自N、0和S的雜原子的5或6元雜環(huán)基、CfC8烷氧基、取代的氨基、CfC8烷基磺?；5-C1(1芳基磺?；Ⅺu 素、羧基、取代或未取代的氨甲酰基或未取代或取代的氨磺?；?；或每對相鄰的取代基 R° 和 R1 或 R1 和 R2 或 R2 和 R3 為-CH2-NH-C0-、-CH2-NH-S02-、-CH2-CH 2-S02-、-0-CH2-0-或-0-CF2-0-以及其中NH中的H被Q-Q烷基替代的所述取代基對； R4為氫;R5為氫、鹵素、鹵代烷基或硝基； R6為氫;每個R7和R9獨立地為氫、CrC8烷基、鹵代Q-Q烷基、未取代或取代的C5-C1(1芳基、包 含1或2個選自N、0和S的雜原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、CrC8烷氧基、未取 代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、鹵素、 未取代或取代的氨甲?；蛭慈〈蛉〈陌被酋；?；R8為氫、CfC8烷基、鹵代Q-Q烷基、C5-C1Q芳基、包含1或2個選自N、0和S的雜原子 的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、CrC8烷氧基、鹵代Ci-q烷氧基、C5-C10芳氧基、未取代 或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、鹵素、未 取代或取代的氨磺?；蛳趸磺襌10為Q-Q烷基、鹵代CfQ烷基、Q-Q烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基CfQ烷氧基、 未取代或取代的氨基或鹵素；或每對相鄰的取代基R7和R8或R8和R9或R9和R1Q為-NH-CH = CH-、-CH = CH-NH-、-NH_N =CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2_CH2-、-0_CH2-0-或-0_CF2-0-； A為C或N。
4.權利要求1的式I化合物，其中每個R°或R2獨立地為氫、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或1-甲基-4-哌啶基氧基； R1為氫、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、1-甲基-4-哌啶基氧基、3-嗎啉代丙氧 基或2-嗎啉代乙氧基；R3為氨磺?；?、甲基氨磺酰基或丙基氨磺?；换蛳噜彽娜〈鶎°和R1或R1和R2為-0-CH2-0-，或相鄰的取代基對R2和R3 為-ch2-nh-co-或-ch2-nh-so2-； R4為氫;R5為氫、氯、溴、三氟甲基或硝基； R6為氫;每個R7和R9獨立地為氫、Q-Q烷基、鹵代Q-Q烷基、包含1或2個選自N、0和S的雜 原子的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、Ci-q烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基氧基、未取代 或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、鹵素、未取代或取代的氨甲酰基或未 取代或取代的氨磺?；?；R8為氫、CfC8烷基、鹵代Q-Q烷基、C5-C1Q芳基、包含1或2個選自N、0和S的雜原子 的未取代或取代的5或6元雜環(huán)基、CrC8烷氧基、鹵代Ci-q烷氧基、C5-C10芳氧基、未取代 或取代的雜環(huán)基氧基、未取代或取代的雜環(huán)基Ci-q烷氧基、未取代或取代的氨基、鹵素、未 取代或取代的氨磺酰基或硝基；且R10為Q-Q烷基、鹵代CfQ烷基、Q-Q烷氧基、未取代或取代的雜環(huán)基CfQ烷氧基、未取代或取代的氨基或鹵素；或每對相鄰的取代基R7和R8或R8和R9或R9和R1Q為-NH-CH = CH-、-CH = CH-NH-、-NH_N =CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2_CH2-、-0_CH2-0-或-0_CF2-0-； A為C或N。
5.權利要求1的式I化合物，其中每個R°或R2獨立地為氫、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或1-甲基-4-哌啶基氧基； R1為氫、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、1-甲基-4-哌啶基氧基、3-嗎啉代丙氧 基或2-嗎啉代乙氧基；R3為氨磺酰基、甲基氨磺酰基或丙基氨磺?；?；或相鄰的取代基對R°和R1或R1和R2為-0-CH2-0-，或相鄰的取代基對R2和R3 為-ch2-nh-co-或-ch2-nh-so2-； R4為氫;R5為氫、氯、溴、三氟甲基或硝基； R6為氫;每個R7和R9獨立地為氫、甲基、異丙基、三氟甲基、苯基、鄰-、間-或對-甲氧基苯基、 哌啶子基、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、苯氧基、3-嗎啉 代丙氧基、2-嗎啉代乙氧基、2-(1_咪唑基)乙氧基、二甲基氨基、氟、嗎啉代羰基、哌啶子基 羰基、哌嗪子基羰基或環(huán)己基氨甲?；?；R8為氫、甲基、哌啶子基、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、甲氧基、乙氧基、三氟甲 氧基、苯氧基、1-甲基-4-哌啶基氧基、3-嗎啉代丙氧基、2-嗎啉代乙氧基、3-(N-甲基哌嗪 子基)_丙氧基、甲基氨基、氟、氯、氨磺?；蛳趸磺襌10為甲基、丁基、甲氧基、乙氧基、2-(1_咪唑基)乙氧基、甲基氨基、二甲基氨基或氟；或相鄰的取代基對R7和R8或R8和R9為-0-CH2-0-，或相鄰的取代基對R9和R1Q為-NH-CH =CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2_CH2-或-0_CF2-0-； A為C或N。
6.權利要求1的式I化合物，其中 每個R0、R1或R2為氫；R3為氨磺?；?、甲基氨磺酰基或丙基氨磺?；?R4為氫; R5為氯或溴； R6為氫;每個R7和R9獨立地為氫、甲基、異丙基、三氟甲基、苯基、鄰-、間-或對-甲氧基苯基、 哌啶子基、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、苯氧基、3-嗎啉 代丙氧基、2-嗎啉代乙氧基、2-(1_咪唑基)乙氧基、二甲基氨基、氟、嗎啉代羰基、哌啶子基 羰基、哌嗪子基羰基或環(huán)己基氨甲酰基；R8為氫、甲基、哌啶子基、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基、嗎啉代、甲氧基、乙氧基、三氟甲 氧基、苯氧基、1-甲基-4-哌啶基氧基、3-嗎啉代丙氧基、2-嗎啉代乙氧基、3-(N-甲基哌嗪 子基)_丙氧基、甲基氨基、氟、氯、氨磺?；蛳趸?；且R10為甲基、丁基、甲氧基、乙氧基、2-(1_咪唑基)乙氧基、甲基氨基、二甲基氨基或氟；或相鄰的取代基對R7和R8或R8和R9為-0-CH2-0-，或相鄰的取代基對R9和為-NH-CH =CH-、-CH = N-NH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2_CH2-或-0_CF2-0-； A為C或N。
7.權利要求1的式I化合物，其中每個R°、R1或R2為氫，R3為甲基氨磺?；琑4為氫， R5為溴，R6為氫，每個R7和R8為甲氧基，R9為氫，R1Q為甲基，且A為C或N。
8.權利要求1的式I化合物，其中每個R°、R1或R2為氫，R3為甲基氨磺?；?，R4為氫， R5為溴，R6為氫，每個R7和R8為氫，且相鄰的取代基對R9和R1Q為-CH2-CH2-CH2-，A為C或
9.式2-{5_氯-2-[4-(3-甲基氨基-吡咯烷-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基氨 基} -N-異丙基-苯磺酰胺的化合物。
10.制備權利要求1的式I化合物的方法，包括使式II化合物其中妒 和R6如權利要求1所定義且Y為離去基團，與式III化合物反應，R7其中R7、R8、R9和R10如權利要求1所定義；且如果需要將其中取代基具有權利要求1所定義含義的式I化合物轉化為另一種權利 要求1所定義的式I化合物；并以游離形式或鹽形式回收所得式I化合物，并且當需要時，將所得游離形式的式I化 合物轉化為所需的鹽或將所得鹽轉化為游離形式。
11.藥物組合物，包含根據(jù)權利要求1至9任一項的化合物作為活性成分以及一種或多 種可藥用稀釋劑或載體。
12.權利要求1至9任一項的化合物在制備用于治療或預防贅生性疾病或免疫系統(tǒng)病 癥的藥物中的用途。
13.組合產(chǎn)品，包含治療有效量的權利要求1至9任一項的化合物和一種或多種其他藥 物物質，所述其他藥物物質可用于治療贅生性疾病或免疫系統(tǒng)病癥。
14.在有需要的個體中治療贅生性疾病和免疫系統(tǒng)病癥的方法，其包括施用有效量的權利要求1至9任一項的化合物或含有該化合物的藥物組合物。
15.權利要求1至9任一項的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預防對抑制粘著 斑激酶或/和IGF-1受體有響應的疾病的藥物中的用途。
16.權利要求15的用途，其中所要治療的疾病選自增殖性疾病。
17.權利要求16的用途，其中所要治療的增殖性疾病選自乳房、腎、前列腺、結直腸、甲 狀腺、卵巢、胰腺、神經(jīng)元、肺、子宮的腫瘤和胃腸道腫瘤以及骨肉瘤和黑素瘤。
18.權利要求15的用途，其中所要治療的疾病是免疫疾病。
19.權利要求1至9任一項的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預防炎性和/或 免疫病癥的藥物中的用途。
20.權利要求19的用途，其中炎性和/或免疫病癥選自由免疫細胞介導的自身免疫疾 病、變態(tài)反應和移植物排斥，所述免疫細胞包括T淋巴細胞、B淋巴細胞、巨嗜細胞、樹狀細 胞、肥大細胞和嗜酸性粒細胞。
21.根據(jù)權利要求14至19任一項的用途，其中所述化合物為2-[5_溴-2-(2-甲氧 基-5-嗎啉-4-基-苯基氨基)_嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-苯磺酰胺或其可藥用鹽。
22.根據(jù)權利要求14至19任一項的用途，其中所述化合物選自2-[5_氯-2-(2-甲氧 基-4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氨基]-N-甲基-苯甲酰胺、N2-(4-[1，4’ ]聯(lián) 哌啶基-1’ -基-2-甲氧基-苯基)-5-氯-N4-[2-(丙烷-1-磺?；?-苯基]-嘧啶-2， 4- 二胺和2- {5-氯-2- [2-甲氧基-4- (4-甲基-哌嗪基)-苯基氨基]-嘧啶_4_基氨 基}-N_異丙基-苯磺酰胺或其可藥用鹽。
全文摘要
本發(fā)明公開了式(I)的新嘧啶衍生物，它們的制備方法、它們作為藥物用于治療贅生性疾病、炎性和免疫系統(tǒng)病癥的用途和包含它們的藥物組合物。
文檔編號A61K35/00GK101921236SQ20101023471
公開日2010年12月22日 申請日期2004年3月12日 優(yōu)先權日2003年3月14日
發(fā)明者C·加西亞-埃切維里亞, 升谷敬一, 大森治, 松浦直子, 梅村一郎, 河原英二, 金輪孝則, 高廣三宅 申請人:諾瓦提斯公司